Scribd Logo
Carregar

Bem-vindo(a) ao Scribd!

  • 35 visualizações

    Aula Canais Ionicos

    Enviado por

    Recurso Questão
    O documento descreve os canais iônicos, suas funções e métodos de estudo. Resume que canais iônicos são proteínas que permitem a passagem seletiva de íons através da membrana celular, desempenhando funções importantes como a geração e controle do potencial de ação. O método principal de estudo é o patch-clamp, que permite medir correntes unitárias e caracterizar propriedades biofísicas dos canais.

    Direitos autorais:

    © All Rights Reserved
    Baixe no formato PDF, TXT ou leia online no Scribd

    Aula Canais Ionicos

    Enviado por

    Recurso Questão
    35 visualizações35 páginas
    O documento descreve os canais iônicos, suas funções e métodos de estudo. Resume que canais iônicos são proteínas que permitem a passagem seletiva de íons através da membrana celular, desempenhando funções importantes como a geração e controle do potencial de ação. O método principal de estudo é o patch-clamp, que permite medir correntes unitárias e caracterizar propriedades biofísicas dos canais.

    Descrição original:

    Título original

    aula canais ionicos

    Direitos autorais

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponíveis

    PDF, TXT ou leia online no Scribd

    Você considera este documento útil?

    Este conteúdo é inapropriado?

    O documento descreve os canais iônicos, suas funções e métodos de estudo. Resume que canais iônicos são proteínas que permitem a passagem seletiva de íons através da membrana celular, desempenhando funções importantes como a geração e controle do potencial de ação. O método principal de estudo é o patch-clamp, que permite medir correntes unitárias e caracterizar propriedades biofísicas dos canais.

    Direitos autorais:

    © All Rights Reserved
    Baixe no formato PDF, TXT ou leia online no Scribd
    Fazer download em pdf ou txt
    35 visualizações35 páginas

    Aula Canais Ionicos

    Enviado por

    Recurso Questão
    O documento descreve os canais iônicos, suas funções e métodos de estudo. Resume que canais iônicos são proteínas que permitem a passagem seletiva de íons através da membrana celular, desempenhando funções importantes como a geração e controle do potencial de ação. O método principal de estudo é o patch-clamp, que permite medir correntes unitárias e caracterizar propriedades biofísicas dos canais.

    Direitos autorais:

    © All Rights Reserved
    Baixe no formato PDF, TXT ou leia online no Scribd
    Fazer download em pdf ou txt
    de 35

    Os Canais Iônicos

    Prof. Ricardo M. Leão


    FMRP-USP
    O que é um canal iônico?
    -É um “caminho” hidrofílico para os íons através da membrana
    -Pode ser entendido como um condutor elétrico

    Cm
    Rm

    E
    Canais iônicos
    São proteinas integrais de membrana, que
    permeiam íons através da membrana celular
    lado extracelular citoplasma

    sensor de voltagen

    portão
    poro aquoso
    portão de seletividade

    residuos de carboidatos

    proteína ancoradora

    Modelo clássico de canal iônico sensível a voltagem (Hille, 1992)


    Um modelo moderno de canal de
    sódio voltage-dependente
    Qual é a melhor técnica
    para o estudo dos canais
    iônicos?
    patch-clamp
    patch-clamp

    sucção
    Single-channel recording
    Single-channel recording
    Receptor nicotínico de acetilcolina

    fechado

    aberto
    Correntes unitárias = single channel

    Correntes de sódio unitárias


    Correntes macroscópicas = whole-cell

    -10 mV
    5 ms
    -70 mV

    Corrente de sódio macroscócpica


    Tipos de canais iônicos
    • Sensíveis a voltagem
    • Canais de sódio, potássio e cálcio das células excitáveis
    • Sensíveis a ligantes
    • Receptores de neurotansmissores (glutamato, GABA,
    acetilcolina, etc…)
    • Sensores químicos (pH, oxigênio, etc…)
    • Outros (canais ativados por cGMP dos fotoreceptores)
    – mistos (canais de potássio ativados por cálcio)
    • Sensíveis a estímulos físicos
    • Canais sensíveis a tensão da cóclea
    • Canais sensíveis a calor e frio
    • Canais de vazamento
    • Canais de sódio, cloreto e de potássio presentes nas
    membranas celulares em geral
    Funções fisiológicas dos canais
    iônicos
    • Sensíveis a voltagem
    • Sódio: geração do potencial de ação (PA_, aumento da
    excitabilidade cellular
    • Potássio: repolarização do PA; controle do disparo dos Pas,
    controle da excitabilidade cellular.
    • Cálcio: secreção de neurotransmissores e hormônios; contração
    muscular, sinalização intracellular
    • Catiônicos: controle da excitabilidade cellular (canais tipo
    HCN)
    • Sensíveis a ligantes
    • Catiônicos; neurotransmissão excitatória; sinalizção de dor e
    dano celular; (canais TRPV) transdução de sinal nos
    fotoreceptores; controle da excitabilidade cellular (canais de K
    sensiveis a ATP).
    • Aniônicos: neurotransmissão inibitória.
    Funções fisiológicas dos canais
    iônicos
    • Sensíveis a estímulos físicos
    • Detecção de estiramento celular.
    • Detecção de calor/frio (canais TRPV).
    • Controle do volume cellular (canais de cloreto
    • Transdução do sinal acústico na cóclea.
    • Canais de vazamento
    • Controle do potencial de repouso da membrana.
    • Controle da excitabilidade celular.
    • Transporte de íons em epitélios.
    • Controle do volume cellular (canais de cloreto).
    Diversidade de canais iônicos
    Relação
    filogenética dos
    aminoácidos dos
    146 genes de
    canais iônicos de
    mamíferos
    Diversidade dos canais de sódio
    dependentes de voltagem
    Caracterização dos canais iônicos
    • Biofísica
    • voltage-clamp (patch-clamp)
    – dependência de voltagem
    – condutância
    – cinética (ativação, desativação, inativação)
    – seletividade

    • Isolamento das diferentes correntes


    – farmacologia
    • uso de bloqueadores específicos para as diferentes condutâncias
    – biofisica
    • inativação de canais iônicos específicos
    • Retificação
    • Reversão das correntes
    Caracterização biofísica de canais iônicos
    dependentes de voltagem
    dependência de voltagem

    condutância = I/V
    Caracterização biofísica de canais iônicos
    dependentes de voltagem
    ativação/inativação/desativação

    corrente de sódio dependente de voltagem corrente de potássio dependente de voltagem

    -10 mV 40 mV
    5 ms 500 ms
    -70 mV -70 mV

    desativação

    inativação
    desativação
    ativação inativação ativação
    Caracterização biofísica de canais iônicos
    dependentes de voltagem
    registros de canais unitários
    canais unitários de sódio de
    músculo esquelético registrados
    em cell-atached

    Probabilidade de abertura (Po)

    modelo cinético
    C O I
    C = fechado
    O = aberto média das correntes
    I = inativado

    tempo (ms)
    Caracterização biofísica de canais iônicos ativados
    por ligantes
    GABA

    dessensibilização

    whole cell outside-out


    A
    C O D
    A = agonista
    C = fechado
    O = aberto
    D = dessensibilizado
    Seletividade e permeabilidades iônicas

    potencial de reversão

    Diferentes permeabilidades do canal de cálcio a diferentes íons


    Isolamento farmacológico
    tempo (ms) tempo (ms)

    bloqueadores de canais de sódio


    tetrodotoxina, saixitoxina
    bloqueadores de canais de potássio
    tetraetilamonio, césio (interno), 4-aminopiridina
    bloqueadores de canais de cálcio
    cádmio, cobalto, w-conotoxinas, dihidropiridinas
    Caracterização farmacológica
    exemplos
    Agonistas
    NMDA, AMPA, kainato
    atuam em diferentes tipos de receptores glutamatérgicos
    Antagonistas
    Bucuculina, picrotoxina
    antagonistas dos receptores GABA
    CNQX
    antagonista dos receptores glutmatérgicos AMPA/kainato
    MK-801
    antagonista de “canal aberto” do receptor glutamatérgico NMDA
    Modificadores
    bezodiazepinas
    aumentam a afinidade de certos receptores de GABA ao GABA
    barbituratos
    aumentam o tempo de abertura dos receptores de GABA
    veratridina, batracotoxina
    modificam várias propriedades cinéticas e de seletividade dos canais de sodio
    Caracterização bioquímica
    •Purificação e identifiçao das subunidades
    •Reconstrução das subunidades em membranas lipídicas
    artificiais
    •registro eletrofisiológico
    •Imunocitoquímica
    •Sequenciamento do DNA
    •determinação da sequência de aminoácidos
    •determinação do perfil hidropático e das possíveis estruturas
    transmembrana
    •identificação de sítios de fosforilação, sialisação
    •Expressão do DNA em sistemas heterólogos
    •oócitos de Xenopus (injeção de mRNA)
    •células de mamíferos (expressao de plasmídeos)
    •registro eletrofisiológico
    •Mutagênese sítio-dirigida
    Estrutura dos canais iônicos
    Movimentos de carga do sensor
    de voltagem
    Determinação da estrutura da proteína
    •Cristalografia e determinação da estrutura por difração de raios-X
    •KcsA e mThK- canais de potássio bacterianoa
    •MscL - canal mecanossenssitivo bacteriano
    •NaVb- canal de sódio bacteriano
    •Kv1.2 – canal de potássio sensível a voltage de mamíferos
    •GIRK – canal de potássio ativado por proteínas G
    •Microscopia eletrônica
    •receptor nicotínico de acetilcolina
    •Canal de sódio dependente de voltagem
    Reconstrução do receptor nicotínico de acetilcolina
    por microscopia eletrônica
    Estrutura do KcsA
    íons K+

    hélice do poro

    archaebacterial voltage-
    activated K+ (Kv) channel
    TEA

    Visão intracelular
    http://lab.rockefeller.edu/mackinnon/
    Estrutura do canal Kv1.2
    http://lab.rockefeller.edu/mackinnon/

    Estrutura dos canais GIRK


    Filtro de seletividade do Navb
    Movimento do sensor de voltage
    do canal Navb

    Você também pode gostar