Aula 04, 05 e 06 - Citogenética Clínica
Aula 04, 05 e 06 - Citogenética Clínica
Aula 04, 05 e 06 - Citogenética Clínica
Genética Clínica
* Especialidade que trabalha a prevenção,
diagnóstico e tratamento das doenças
hereditárias, metabólicas congênitas, erros inatos
do metabolismo, retardamento mental,
diagnóstico de malformações e outras anomalias
congênitas, orientação de casais consanguíneos e * Von Winiwarter – 1912
Citogenética
* Painter (1923,1925)
* Estudo dos cromossomos, de sua estrutura e
- Começou a estudar os cromossomos na meiose
sua herança aplicado à prática da genética
= 46 cromossomos
médica.
* Cariótipo - análise cromossômica (do conjunto * HSU – 1952
de cromossomo); com uma resolução e precisão - Relatou que a análise cromossômica poderia ser
muitíssimo melhoradas, é um procedimento facilitada pelo uso da técnica de cultura de
diagnóstico cada vez mais células de tecido (Fischer, 1946)
importante em várias áreas da medicina. - Utilizando cultura de células embrionárias,
obteve metáfases e ideograma de todos os 48
* Citogenética é o ramo da genética que estuda a cromossomos humanos!
estrutura, função, o comportamento dos - Relatou ainda, que o bom espalhamento dos
cromossomos e suas anomalias. cromossomos
- Anomalias são responsáveis por alta taxa de obtidos no estudo, foram resultado de um
perdas reprodutivas = Citogenética clínica acidente (erro de
auxilia o diagnóstico, prognóstico e conduta laboratório) - Ao invés de lavar as células com
terapêutica dos pacientes. solução isotônica, as culturas foram lavadas com
solução hipotônica antes da fixação.
História da Citogenética
* Walter Flemming – 1882 ! Solução/Meio isotônico: meio que tem a
- Publicou a primeira ilustração dos mesma quantidade de solvente e soluto.
cromossomos humanos ! Solução/Meio hipotônico: mais soluto do que
solvente.
! No meio hipotônico, a água tende a entrar para
a célula, o que faz com que ela estoure. Quando
ela estoura, ele conseguiu ver os cromossomos
espalhados.
Distúrbios Citogenéticos
* Mais comuns de todos os distúrbios
mendelianos:
- 1% dos nativivos
- 2% das gestações em mulheres com mais de 35
anos * Centrômero: região central; divide o
- 50% dos abortos espontâneos do 1º trimestre cromossomo em braço curto (p; sempre na parte
de cima) e braço longo (q; sempre na parte de
Efeitos
baixo)
* Problemas na blastogênese - Ex.: 22 p = braço curto do cromossomo 22
- implantação transitória ou não implantação do * Telômero: extremidades dos cromossomos
concepto
* Problemas na embriogênese
- com abortamento espontâneo, normalmente no
primeiro
trimestre
* Ruptura completa, moderada ou leve da
morfogênese - efeitos fenotípicos variados
Líquido Amniótico
Tumor Sólido
* Coleta realizada somente
* Coleta realizada somente pelo médico;
pelo médico;
* Material deverá ser entregue em bloco de
parafina; * Coleta invasiva, risco para
* Técnica do bandeamento G;
* Sangue coletado no tubo verde (heparina);
* Passos:
1. Centrifugar o sangue – para pegar leucócitos
(por causa do núcleo);
2. Colocar hemácias em um meio de cultura;
- Colocando em meio rico, com suplementos, o
leucócito vai crescer, replicar.
3. Deixar proliferar por 72h
4. Passado 72h, adicionar colchicina – reagente
que impede a formação da fibra dos fusos ISCN – Nomenclatura de citogenética
mitóticos (metáfase de mitose). * Sistema Internacional para Nomenclatura
5. Adicionar uma solução hipotônica (água tende Citogenética Humana
a entrar na célula, e a célula estoura). * Revisão mais recente é o ISCN 2020.
6. Fixar as células em lâmina com um corante
Classificação e Nomenclatura
específico (mais comum é o giensa); caso
necessário, colocar uma lamínula.
7 Visualizar no microscópio.
Identificação Cromossômica
* Padrão Banda Q (Quinacrina Mostarda)
- As bandas brilhantes correspondem as bandas
escuras na banda G
* Padrão Banda R
- Tratamento especial (aquecimento) antes da
coloração, as bandas são o reverso daquelas
* O mais comum na prática dos laboratórios de
produzidas na banda G.
citogenética humana é a análise em cariótipos
* Padrão Banda C
com resolução na faixa entre 450 a 550 bandas.
- Coloração da região do centrômero de cada
- Aproximadamente 6 milhões de pares de base
cromossomo e de outras regiões que contêm
por banda;
heretocromatina.
- Aproximadamente 50 genes por banda.;
Banda R
Coloração Convencional – Banda G * Desnaturação com solução salina e calor;
* Técnica mais rápida, mais fácil e de menor
- Aquecimento é para desnaturação da proteína.
custo no laboratório.
* Corante: Giemsa
* Permite contagem do nº total de cromossomos.
* Bandamento inverso ao de Banda G e Banda
* Permite avaliar a qualidade dos preparados
Q:
cromossômicos.
- Banda R escura -> Banda G clara, Banda Q
opaca
- Banda R clara -> Banda G escura, Banda Q
brilhante
Banda C
*Solução de hidróxido de bário e HCl + Corante
Giemsa
* Evidenciam regiões que contenham
heterocromatina constitutiva (heterocromatina
bem condensada):
- centromérica
* A progéria (Síndrome Hutchinson – Gilford) –
- pericentromérica
alteração cromossômica que leva ao
- Yq (braço longo do cromossomo y)
envelhecimento precoce.
Aplicações e limitações
* Diagnóstico clínico pré e pós-natal
* Natimortos e óbitos neonatal
* Infertilidades ou abortos recorrentes
Banda Ron (NOR)
* História familiar com cromossomopatias
* Corante: Nitrato de prata
* Câncer (Leucemias e tumores sólidos)
* As bandas NOR evidenciam região
* Permite a elucidação de muitos casos
organizadora de nucléolo.
* Mas, apresenta limitações:
- Resolução de 550 bandas é indicada na análise
de rotina de pacientes com suspeita de alterações
cromossômicas;
- Prata impregna nos ribossomos ativos.
- Mesmo assim, alterações muito pequenas
- Cromossomos 13, 14, 15, 21 e 22.
(menores que 5 Mb) não podem ser visualizadas;
Banda T exemplo: microdeleção (vista na citogenética
* Correspondem a regiões teloméricas. molecular).
* Para que é usado?
- Telômero – telomerase.
- Telomerase, com o passar dos anos, vai
perdendo sua atividade, e com isso, a cada
Ex. de microdeleção
Nomenclatura
Abreviatura ISCN