DPA-6206 BIORREMEDIAÇÃO

3a. Aula

NUTRIÇÃO E CRESCIMENTO MICROBIANO

PARTE I-NUTRIÇÃO

Profa. Galba Takaki

[email protected]
 Nutrição Microbiana
ALIMENTAÇÃO NUTRIENTES

QUÍMICOS

FATORES FÍSICOS CRESCIMENTO ORGÂNICOS E

INORGÂNICOS
TEMPERATURA ?
METABOLISMO
ELEMENTOS
AGITAÇÃO
QUÍMICOS

CONSISTENCIA DO MEIO
– SÓLIDO OU LÍQUIDO
…..
Diversidade metabólica
FONTE DE ENERGIA

FONTE DE CARBONO

AUTOTRÓFICOS: CO2
HETEROTRÓFICOS:
COMPOSTOS ORGÂNICOS

ENERGIA + ELEMENTOS QUÍMICOS

SÍNTETISAR COMPOSTOS
PARA A SUA
SOBREVIVÊNCIA
Nutrição microbiana – Elementos Químicos:
Macro ou Micronutrientes essenciais

• MACRONUTRIENTES – COMPOSTOS QUÍMICOS MUITO USADO

• MICRONUTRIENTES – COMPOSTOS QUÍMICOS POUCO USADO

• PRINCIPAIS ELEMENTOS SÃO C, O, H, N, P, S. NO ENTANTO, + 50

ELEMENTOS SÃO METABOLIZADOS PELAS CÉLULAS

Nutrição microbiana – Elementos Químicos:
Macro ou Micronutrientes essenciais

Ácidos nucleicos e fosfolipídios

Cys e Met, vitaminas (ex. coezimaA)
 Macronutrientes
ELEMENTO PRINCIPAIS FONTES FUNÇÃO NA CÉLULA
base de todas as moléculas orgânicas

compõem proteínas, ácidos nucléicos e

peptideoglicano
O2: Aceptor de elétrons da cadeia de transporte e regulador do metabolismo
componente de proteínas e ácidos nucléicos, além de
vitaminas e outros compostos celulares

importante na composição de ácidos nucléicos e fosfolipídeos

SO4: aceptor final de elétrons da cadeia de transporte anaeróbia.
Reduzido: incorporado a aminoácidos (cisteína e metionina) e a
vitaminas (biotina e tiamina)
ativador de várias enzimas, tais como aquelas envolvidas na tradução

estabilização de ribossomos, membranas e ácidos nucléicos e para o funcionamento de

diferentes enzimas como aquelas envolvidas na transferência de fosfato

tem papel na estabilização da parede celular e de termorresistência nos esporos, atividade

enzimática
microrganismos marinhos e certas archaea halófilas . Organismos marinhos – reflexo do
habitat
presente em proteínas envolvidas na respiração celular
(essencial nos citocromos, cluster Fe-S,..).
 Captação do Ferro por Quelantes
• CONDIÇÕES ANÓXICAS está na forma Fe+2
• CONDIÇÕES ÓXICAS está na forma de Fe+3,
insolúvel e se depositam em minerais
Grupo Hidroxamato

• Captação do Ferro – via Quelantes

(Sideróforos)– internaliza o ferro extracelular
• Compostos derivados do ácido Hidroxamato
• Sideróforos fenólicos, chamados de
enterobactina férrica
• Aquaquelina (grupos peptídicos) – cauda
hidrofóbica que auxília a internalização do
ferro.
• Alta afinidade e consegue captar ferro
na concentração de 10-12g/mL.
• Encontrado em bactérias marinhas,
que tem que pegar ferro do mar
Exemplos de micronutrientes

• CHAMADOS DE ELEMENTOS TRAÇOS

• GERALMENTE SÃO COMPONENTES DE ENZIMAS.
 Fatores de Crescimento e Meio de Cultura

Fatores de crescimento

Compostos orgânicos necessários para alguns organismos. Ex: vitaminas

(comumente requerido – usadas como coenzimas), aa, purinas, pirimidinas.
Necessitam de pequenas quantidades
Meio de Cultura
Condições nutricionais para o crescimento de um microrganismo

Meio Definido Meio Complexo

Adição precisa de compostos Não se sabe a composição exata do meio de cultura.

orgânicos e inorgânicos Exemplos: Caseína – proteína do leite

Composição química exata • Extrato de levedura (células de levedura)

• Extrato de carne, soja
Fontes altamente nutricionais
Real composição é desconhecida
 Prática – Técnica de Isolamento

E. coli Staphylococcus aureus

Ágar MacConkey Ágar Staphylococcus 110

Stone Gelatin Ágar
Lac+ Lac- Ágar Triptona Soja (TSA)

Isolar e diferenciar Staphy. Não é um meio Inibitório

Lactose – Diferencia Lac+ (ácido pH cai) Alta concentração sal Cresce mic. Fastidiosos
Seletivo para Gram Negativo Manitose+ Hemolisinas – lise de
(sais biliares inibem G+) Formação de pigmento hemácias
Atividade Gelatinase
 Meio Seletivo ou Diferenciais
• Meio Seletivo
Contém compostos que inibem o crescimento de alguns
microrganismos mas de outros não

• Meio Diferenciado
Adiciona um indicador (corante, por exemplo), diferenciar reações
químicas que ocorrem durante o crescimento .
Distinção de espécies de bactérias
Meio Diferencial para verificar Fermentação de açúcares

Formação de ácido – mudança de cor

Tubos invertidos
Se tem formação de gás fica preso

Ácido Ácido e gás Cont. - Não inoculado

Cultivo de Microrganismos em
Laboratório
• Meio devidamente preparado e estéril (autoclave, fluxo)
• Três tipos de meio de cultura

Líquido Sólido Semisólido

0% Ágar 1.5% Ágar >0 e <1.5% Ágar
 Obtenção de culturas puras por semeadura por
esgotamento
• Obtenção de amostras puras (contém apenas um tipo de microrganismo).
• Verificar a pureza da amostra
• Método de assepsia (impedir contaminações)
• Avaliar a pureza da amostra
• A quantidade de diferentes
microorganismo
• Obtém colônias Isoladas

Várias células
proveniente de uma
única célula (bilhões
de células)
 Micro-organismos

Escherichia coli Aspergillus niger

Fonte: www.hyperscience.com

Bacteriófago
 Finalidade de
cultivo
• Isolar e identificar

• Testes utilizados:

– Tintoriais, morfológicos, bioquímicos

sorológicos e moleculares
 Morfologia dos Micro-organismos

Vírus animal

Bactérias do solo

Micorrizas

Fonte: www.hyperscience.com
 Testes de Identificação

Teste Bioquímico
Teste Tintorial

Teste Sorológico
Teste Molecular

Fonte: www.rehagro.com.br
Importância dos micro-organismos

Doenças de Planta
Álcool e Bebidas
Bactericidas

Antibióticos
Produtos Láctios
Probióticos

Fonte: www.brasilescola.com.br
 Cultivo laboratorial de micro-
organismos
• Cultura com um único micro-organismo
– Ausência de contaminantes

– Meios sólidos crescimento das colônias

– Uniformidade das colônias

Fonte: www.worldespress.com Cultura Pura

Cultivo laboratorial de micro-organismos

• Técnica asséptica

– Meiosesterilizados

– Câmara de fluxo laminar

Esterilização calor úmido

– Uso da chama do bico de Bunsen

Fonte: www.worldespress.com
 Técnicas Assépticas
Fluxo Laminar Bico de Bunsen

Fonte: www.worldespress.com
 Cultivo de micro-organismos
• Meios de Cultura
– Soluções nutrientes que promovem o
crescimento microbiano

• Classes de meios de cultura

– Meios definidos e meios complexos

Agar Sangue

Fonte: www.biomedicinamicro.com
 Meios Definidos
• Quantidades precisas de compostos:
– Orgânicos e inorgânicos

– Fonte de Carbono

– Origem e a concentração da fonte de Carbono

• Depende
– Do micro-organismos cultivado
 Meios Complexos
• Digestão de produtos animais ou vegetais

– Caseína (proteína do leite)

– Carne (extrato de carne)

– Soja (caldo tríptico de soja)

Agar Trípico Soja

– Células de leveduras (extrato de leveduras)

Fonte: www.biomedicinamicro.com
 Meios Complexos
• Possuem substâncias altamente nutritivas
• Porém impuras
• Comercializados na forma de pó
– Pesados e dissolvidos em águadestilada

Agar Seletivo 17
Fonte: www.biomedicinamicro.com
 Meios Complexos

caseína Extrato de carne

Trípico de soja Extrato de Levedura

18
Fonte: www.biomedicinamicro.com
 Meios Seletivos
• Inibem seletivamente o crescimento de
micro-organismos
– Presença de compostos

Agar Baird Parker

Fonte: www.pvl.pt
 Meio Diferencial
• Possui um indicador
Agar TSI
– Permite a diferenciação de reações químicas

– Específicas que ocorrem durante o crescimento

• Alguns microrganismos realizam:

– Reações particulares outros não

– São úteis na distinção e espécies bacterianas

 Meio Sólido
• Adição de um agente gelificante aos meios
líquidos

• Vantagens
– Imobilizam as células
Agar NI
– Crescem em massas isoladas evisíveis

Fonte: www.mkldiagnostic.com
 Agar

Alga da classe Rodophyta Agar

Agar Mitis Salivarius

Fonte: www.mkldiagnostic.com