CURS MICROBIOLOGIE

Conf. Univ. Dr. Maria Balasoiu

ISTORICUL MICROBIOLOGIEI. TAXONOMIE BACTERIAN. CRITERII DE
CLASIFICARE A MICROORGANISMELOR
1. ISTORICUL MICROBIOLOGIEI
Microbiologia studiaz microorganismele i activitile lor.
Microorganismele sunt vieuitoare care nu se pot vedea cu ochiul liber, ci numai la
microscop.
Termenul de microb a fost utilizat pentru prima oar n 188 de ctre Sedillot
!chirurg la "cademia de #tiine din $aris%, n &e linfluence des decouvertes de M.
$asteur sur les progres de la chirurgie. "devrata natur a microbilor a fost descoperit
ns doar n a doua 'umtate a secolului ((.
)bservarea i descrierea primelor microorganisme au fost fcute de ctre olandezul
Antonie van Leeuwenhoeck !1*+,-1,+% ntre 1*+-1*./ cu a'utorul unui microscop de
fabricaie proprie el a observat nite creaturi minuscule n apa de ploaie, apa din vazele
cu flori, urin, fecale pe care le descrie minuios0 forme rotunde !coci%, alungite
!bastona%, de virgul, spiralate.
1ici 2eeu3enhoec4 i nici contemporanii si nu au realizat importana
e5traordinar a descoperirii sale, atenia savanilor ndrept6ndu-se nu spre rolul acestor
vieuitoare, ci spre originea lor. Teoria adoptat de ei era teoria generaiei spontane0
animale ca mute, oareci, etc. se nasc din materie putrezit i din noroi.
7n 1*.8 Francesco Redi, plas6nd carne ntr-un borcan i prezerv6nd-o prin tifon de
contactul cu mutele demonstra indubitabil c viermii !larvele% nu se nasc spontan din
carne, ci din oule depuse aici de ctre mute, ca atare au prini definii.
9ontroversa ns a continuat. :n adept al teoriei generaiei spontane, Needham,
n 1;<, constata c microorganismele prezente n bulionul de carne dispreau dup
nclzire, dar reapreau dac acest bulion era pstrat pentru un timp, chiar ntr-un
recipient acoperit. 9oncluzia lui 1eedham a fost urmtoarea0 dac microorganismele
iniial prezente, virtualii prini, au fost omor6i prin nclzirea bulionului,
microorganismele depistate n final nu puteau s apar dec6t spontan.
Teoria lui 1eedham a fost combtut de Lazzaro Spallanzani !1,<-1<<% care a
demonstrat eroarea fcut de 1eedham0 msuri ineficiente pentru a mpiedica ptrunderea
microorganismelor din aer n bulionul de carne fiert. =l a nchis ermetic flacoanele cu
bulion fiert. &up mai multe zile, n flacoanele nchise microorganismele nu apreau, n
timp ce ele erau prezente n cele lsate deschise.
"u urmat apoi o serie de e5perimente, av6nd ca aspecte comune0 distrugerea prin
cldur a microorganismelor din bulion !sterilizarea% i prevenirea accesului n bulionul
sterilizat a unor elemente particulare, purttoare de microorganisme.
"stfel, din anii 18*8 teoria generaiei spontane era complet discreditat.
=laborarea teoriei microbiene a bolilor infecioase este meritul lui Louis Pasteur
!18,,-18<.%, fondatorul microbiologiei ca tiin.
$rimele observaii ale sale apar n timpul e5perienelor n care sarea de amoniu a
acidului paratartric, se descompune n acid tartric levogir, iar lichidul care l conine se
tulbur. =5amin6nd lichidul la microscop el descoper prezena unei ciuperci, $enicillium
glaucum, care metabolizeaz substratul.
:lterior 2. $asteur a studiat0 procesele de fermentaie la solicitarea productorilor
de vin i a descoperit c fermentaia se datora unor anumii microbi/ a identificat
microorganisme care determinau boala viermilor de mtase i a demonstrat c acestea se
transmit de la un vierme la altul rsp6ndind boala/ prin inactivarea sau atenuarea
microorganismelor cauzale a preparat vaccinuri pentru prevenirea turbrii, antra5ului,
holerei ginilor/ a preparat vaccinul antirabic fr s cunoasc natura viral a agentului
etiologic/ cut6nd s mpiedice fermentaia care producea mari pagube productorilor de
vinuri, el nclzete vinul la *8-89 distrug6nd microorganismele responsabile - astfel a
introdus sterilizarea care-i poart numele, pasteurizarea, folosit i azi pe scar larg n
industria alimentar.
7mpreun cu Joubert i Chaamberland prezint la ,< aprilie 188 celebra lucrare0
2a th>orie des germes et ses applications ? la m>dicine et ? la chirurgie, lucrare care a
prezentat ideile fundamentale ale teoriei microbiene.
7n aceeai perioad, Tndall descoperea cele dou forme de e5isten a unei
bacterii0 vegetativ !sensibil la cldur% i sporulat !rezistent chiar i la fierbere
ndelungat%. =l introduce o metod de sterilizare fracionat, prin nclzirea discontinu
a produselor, cunoscut sub numele de t@ndalizare.
9ontemporan cu $asteur a fost Robert !och !18;+-1<18%. $rima sa descoperire a
fost sporul bacilului crbunos, n timp ce e5amina cultura acestui germene pe un preparat
nativ ntre lam i lamel.
=l introduce n practica bacteriologic e5aminarea morfologic a microbilor pe
frotiuri fi5ate i colorate.
7n cultivarea microbilor folosete gelatina pentru solidificarea mediilor de cultur i
obine primele colonii izolate.
Aobert Boch a izolat0 bacilul antra5ului, bacilul tuberculozei !CB% n 188, i a
demonstrat cauzele acestei boli/ vibrionul holeric i calea de transmitere a bolii.
Teoria germenilor a fost sintetizat i validat sub forma a trei postulate formulate
de Aobert Boch n 188, la edina Docietii de Etiziologie din Cerlin i anume0
- n corpul tuturor bolnavilor de o anumit boal microorganismul care a determinat boala
se gsete rsp6ndit n raport cu simptomele i cu leziunile observate/
- microorganismul se izoleaz din corpul bolnavului i poate fi meninut n culturi pure
pentru studii de laborator/
- acest microorganism inoculat la un animal receptiv reproduce o infecie e5perimental
asemntoare cu cea natural, put6nd fi reizolat din corpul animalului infectat.
=levii i colaboratorii lui $asteur au continuat studiul agresiunii microbiene asupra
organismului animal.
&ezvoltarea microbiologiei a avut un impact deosebit asupra igienei, a
epidemiologiei bolilor transmisibile i chirurgiei prin generalizarea antisepsiei i asepsiei.
"stfel, Semmelweis !1818-18*.%, eful clinicii vieneze de obstetric, reduce mortalitatea
lehuzelor de la 18F la 1,,F oblig6nd personalul sanitar i studenii care lucrau la
disecia cadavrelor s se spele pe m6ini cu clorur de var.
7n acelai timp, Joseph Lister !18,-1<1,%, chirurg din =dinburgh, introduce n
clinica sa asepsia prin pulverizarea acidului carbonic n slile de operaie.
=levul lui $asteur, "lia #ecinikov !18;.-1<1*% a descoperit fagocitoza i rolul
inflamaiei n aprarea antimicrobian.
Charles Richet a descoperit prima reacie antigen-anticorp, adic reacia de
antiglutinare, stabilind astfel bazele imunologiei.
Cazele geneticii au fost puse n 1<;8 prin e5perimentul lui $swald Aver% Colin
#&% Leod i #acln #c Cart.
=poca chimioterapiei antimicrobiene a fost deschis de Paul 'hrlich !18.;-
1<1.% care a utilizat Dalvarsanul !un compus arsenical% pentru terapia sifilisului,
descoperirea sulfamidelor de ctre (oma)k !1<+,% i descoperirea penicilinei de ctre
Ale*ander Flemin) !1881-1<..% n 1<,8, introdus n practica medical n 1<;1, dup
purificarea i stabilizarea ei de ctre doi chimiti de la )5ford0 Flore i Chain.
MICROBIOLOGIA ROM!NEASC
7ntemeietorul microbiologiei rom6neti este "i#$or Ba%& !18.;-1<,*%, profesor de
bacteriologie i anatomo-patolog la Cucureti.
188. lucrri, printre care primul tratat de bacterologie din lume, scris n 188.
mpreun cu Gictor 9ornil, tratat intitulat H2es bacteries et leur role dans lIetiologie,
lIanatomie et lIhistologie pathologiJue des maladies infectieusesK/
descoperiri0 granulele metacromatice ale bacilului difteriei !corpusculul Cabe-=rnst%/
;8 specii microbiene/ , specii protozoare, genul Cabesielle/ studii asupra turbrii, leprei
i pelagrei/
a introdus la noi n ar vaccinul antirabic, seroterapia antirabic i seroterapia
antidifteric/
organizeaz primul institut de cercetare medical din Aom6nia HGictor CabeK i
primul laborator de igien i bacteriologie din ar.
Ion Can$a#u'ino !18*+-1<+;% a fost profesor la catedra de medicin e5perimental
din Cucureti, efectu6nd studii n domeniul holerei, al imunitii umorale i al imunitii
celulare.
1<1+0 aplic n armata rom6n, aflat n plin epidemie de holer, vaccinul antiholeric
cu vaccin omor6t/
1<8*0 introduce n ar vaccinarea antituberculoas cu C9L/
1<180 nfiineaz primele sanatorii de TC9 i primele spitale de boli infecioase/
1<,10 Mnstitutul de Deruri i Gaccinuri HMon 9antacuzinoK.
Cons$an$in L&va(i$i !18;-1<.+% a fost profesor la Mnstitutul $asteur din $aris. "
desfurat o activitate tiinific deosebit n domeniile0 imunologie, virusologie,
bacteriologie, parazitologie i chimioterapie. 7mpreun cu elevul su )$&fan S. Ni#olau
pun bazele nvm6ntului virusologic n ara noastr, astzi Mnstitutul de Girusologie H#t.
D. 1icolauK.
"lte personaliti marcante ale microbiologiei rom6neti0 $rof. &r. 1icolae 9a'al,
$rof. &r. 9. Monescu Mihiei, $rof. &r. M. 9iuc, $rof. &r. &. 9ombiescu, $rof. &r. 2idia
i M. Mesrobeanu, $rof. &r. =ugenia M. &uca i alii.
*. TAXONOMIE
Ta5onomie !ta5inomie%, provenind din grecescul Hta5isK care nseamn ordine,
aran'are, este tiina clasificrii organismelor.
)rganismele vii au fost mprite iniial n , regnuri0 vegetal i animal.
7n secolul al (M(-lea s-a observat c microorganismele prezint nu numai
asemnri, dar i deosebiri fa de cele , regnuri. Desiz6nd aceste diferene +aekel, n
18**, propune unirea microorganismelor cunoscute ntr-un regn aparte numit
PR$T"STA, care s cuprind0 algele, protozoarele, fungii i bacteriile.
7n secolul al ((-lea, prin dezvoltarea mi'loacelor de cercetare, s-a demonstrat c
microorganismele ncadrate iniial n acest regn difer n mod fundamental unele de
celelalte. "stfel, celulele bacteriene au o dezvoltare mult mai simpl, fiind desemnate ca
celule de tip PR$CAR"$T, spre deosebire de alge, protozoare i fungi, care posed o
structur mai comple5 de tip ',CAR"$T.
9a urmare, termenul de PROTISTA s-a restr6ns numai pentru organismele
unicelulare de tip eucariot, iar bacteriile aparin unui regn aparte numit PROCARIOTE,
din care fac parte0 archaebacteriile, eubacteriile i c@anobacteriile !algele albastre%.
',-ACT'R""L' sunt0
- %a#$&riil& #lasi#&, care au forme variate i perete celular/
- #+la,-(iil&, care sunt bacterii cu parazitism intracelular obligatoriu, cu mecanism
unic de multiplicare n lumea bacteriilor/
- ri#.&$siil&, care sunt bacterii cu habitat intracelular, dar cu diviziune direct !ca la
ma'oritatea bacteriilor%/
- ,-#o/las,&l&, care sunt bacterii crora le lipsete peretele celular.
2a acestea se adaug0
."R,S,R"L', care sunt considerate microorganisme, cu toate c se deosebesc
fundamental de acestea. =le sunt formate dintr-un singur acid nucleic !"&1 sau "A1%,
nvelit de o capsul proteic. Dunt incapabile s-i determine propriile sinteze n afara
aparatului de sintez al unei celule eucariote !parazitism intracelular%.
PR"$N"" sunt entiti infecioase de dimensiuni foarte mici !. nm% de natur proteic,
cauza unor boli ale D190 boala B:A:, Nacob-9reutzteld.
PARA/"T"" , organisme unicelulare!protozoare% sau pluricelulare!helminti%
F,N0""% organisme unicelulare O specii de 9andida.
BACTERIOLOGIE
NOMENCLATURA BACTERIAN
&enumirea tiinific a microbilor se face prin nume 2"TM1MP"T=. De pornete de
la un substantiv grec sau latin care denumete cel mai evident caracter al
microorganismelor reunite ntr-o unitate ta5onomic i primete un sufi5 latin.
CLASIFICARE TAXONOMIC
9lasificarea !gr. Bleiss-distribuie/ 9lassis-apel, grup, adunare, diviziune% este
aezarea obiectelor, substanelor, conceptelor, organismelor n grupe ordonate ierarhic n
funcie de asemnri i nrudiri stabilite prin anume criterii.
$rima clasificare a microbilor apare n opera botanistului Charles Linne n 1*,
oper numit HDQDT=M" 1"T:A"=K, n clasa Hchaos influsoriaK. 7n prezent bacteriile
se clasific dup criteriile stabilite de 9omitetul Mnternaional de Distematic a :niunii
Mnternaionale a Docietilor de Microbiologie. "cest comitet editeaz, la intervale
regulate, un manual HC=AL=QID M"1:"2 )E &=T=AMM1"TMG=
C"9T=AM)2)LQK, n care se prezint ultimele modificri ale ta5onanomiei bacteriene.
Microorganismele fac parte din grupul Phyla ce conine0
clase
ordine - primesc sufi5ul HalesK - e50 Dpirochetales/ =ubacteriales/
familii - primesc sufi5ul HaceaeK - e50 =nterobacteriaceae/
triburi - primesc sufi5ul HceaeK - e50 Dtreptocaccocaceae/
genuri - primesc sufi5ul0 HusK !e50 Dtreptococcus, Dtaph@lococcus%/ HumK
!9lostridium%/ HaK !2eptospira, Dhigella, Dalmonella%/ HasK !$seudomonas%/
specii - Len ! cu ma'uscul% R determinativ genitiv !cu liter mic%. =50
Dtaph@lococcus aureus, Cordetella pertussis, Saemophilus influensae, $asteurella pestis
etc.
7n specii se disting tipuri !serotip - difer pe baza proprietilor antigenice/ biotip -
difer pe baza proprietilor metabolice/ lizotip - difer pe baza sensibilitii la
bacteriofagii litici%, variante i tulpini !tabelul 1%.
S$afilo#o#
aur&u
S$r&/$o#o# 01
+&,oli$i#
Ba#il $ifi#
Or(in =ubacteriales =ubacteriales =ubacteriales
Fa,il
i&
Micrococcace
ae
2actobacteriaceae
!Dtreptobacteriaceae%
=nterobacteriac
eae
Tri% - Dtreptococceae -
G&n Dtaph@lococcu
s
Dtreptococcus Dalmonella
S/&#i
&
Dtaph@lococcu
s
aureus
Dtreptococcus
p@ogenes grup "
Dalmonella
t@phi
Tabelul 10 =5emple de ncadrare ta5onomic a unor bacterii
MORFOLOGIA )I STRUCTURA CELULEI BACTERIENE. S2ORUL )I
S2ORULAREA. DI"I3IUNEA CELULEI BACTERIENE
1. MORFOLOGIA BACTERIILOR
Cacteriile sunt or)anisme unicelulare ase*uate !celula somatic fiind i celula
reproductoare%, procariote !cu nucleu alctuit dintr-un unic cromozom, fr membran
nuclear, fr nucleoli%, haploide !cu unic set de gene%, divizibile 1n celule identice.
&imensiunea, forma i aezarea bacteriilor, criteriu important pentru identificarea
lor, este posibil cu a'utorul microscopului optic, utiliz6nd preparatul nativ i preparatul
fi5at i colorat !frotiu%, dar detaliile morfologice i structurale pot fi puse n eviden
numai prin microscopie electronic.
1.1. DIMENSIUNI
&imensiunile bacteriilor se e5prim n micrometri !1 T 18
-+
mm%, variaiile fiind
n funcie de specie, form, mediu i v6rsta culturii. 7n general, dimensiunea bacteriilor
este cuprins ntre 2324.
9ele mai mici bacterii sunt reprezentanii genului M@coplasma !diametrul 8,+-
8,8%, pe c6nd cele mai mari a'ung p6n la o lungime de 18 !bacilul antra5ului%, 1.-,8
!spirochetele%.
Eormele filamentoase, cum sunt actinomicetele, pot atinge o lungime p6n la .88.
1.2. FORM
7n lumea bacteriilor se nt6lnesc di5erite 5orme tipice pentru o anumit specie, cu
unele variaii n funcie de condiiile de mediu i de v6rst. De disting urmtoarele forme
fundamentale de bacterii0 coci, bacili, cocobacili, vibrioni, spirili i spirochete i forme
filamentoase.
- Co#ii sunt bacterii sferice !genul Dtaph@lococcus%, ovalare !genul Dtreptococcus%,
lanceolate !specia Dtreptococcus pneumoniae%, reniforme !genul 1eisseria% cu diametrul
de 8,8-1.
- Ba#ilii sunt bacterii c form! alngit! "e bastona# cu dimensiuni ntre 1,.-18. 2a
bacili este important e5aminarea e5tremitilor, aspectul acestora av6nd rol n
identificarea lor. "stfel, bacilii pot prezenta capetele rotn$ite !familia
=nterobacteriaceae%, t!iate "rept !Cacillus anthracis-bacilul crbunos%, m!cicate
!9or@nebacterium diphteriae-bacilul difteric%, n form! "e sveic! !Euzobacterium%.
- Co#o%a#ilii sunt bacterii #or alngite, fiind forme intermediare ntre coci i bacili
!Qersinia pestis, Cordetella pertussis, Saemophilus influenzae%.
- "i%rionii sunt bacterii %ncrbate %n form! "e virgl!0 vibrionul holeric !Gibrio
cholerae%, vibrionii saprofii !intestin, ape%.
- S/irilii i s/iro#+&$&l& sunt bacterii spiralate& lngi& foarte sbiri. 7n cazul spirililor
corpul bacteriei este rigid !genul Dpirillum%, pe c6nd la spirochete corpul este fle5ibil i
mult mai subire !genurile Correlia, Treponema i 2eptospira%.
- A#$ino,i#&$&l& sunt bacterii foarte asem!n!toare fngilor i formeaz filamente sau
hife lungi i ramificate care se rup, rezult6nd forme bacilare !"ctinom@ces%.
1.3. AEZARE
Cacteriile sunt organisme unicelulare care se multiplic prin diviziune binar. 2a
unele specii, dup diviziune urmeaz separarea complet a celulelor fiice, rezult6nd
bacterii izolate. 2a alte specii, dup diviziune, celulele fiice rm6n legate ntre ele,
determin6nd di5erite tipuri de a6ezare a celulelor. "ezarea bacteriilor !figura 1% permite
uneori recunoaterea genului, sau chiar a speciei, prin e5aminarea la microscopul optic a
preparatelor colorate efectuate din culturi sau direct din produsul patologic recoltat de la
pacient.

Cocii se pot aeza0
%n gr!me'i nereglate0 germenii din genul Dtaph@lococcus/
%n lanri la genul Dtreptococcus/
%n tetra"e !patru indivizi aezai simetric%0 genul Micrococcus/
%n balotri "e c(te ) in"ivi'i a#e'ai simetric la genul Darcina/
%n "iplo, ca "o! fl!c!ri "e lm(nare care se unesc prin bazele lor, la specia
Dtreptococcus pneumoniae/
%n "iplo& ca "o! boabe "e cafea care se privesc fa! %n fa! prin concavitile lor, la
genul 1eisseria0 1. gonorrhoeae !gonococ%/ 1. meningitidis !meningococ%.
-acilii se pot aeza0
cel mai ades i'olai #i %n po'iii %nt(mpl!toare unul fa de cellalt0 ma'oritatea
bacililor Lram negativi/
grpai c(te "oi !diplobacili%0 genul Blebsiella/
"isp#i %n lanri !streptobacili%0 germeni din genul Cacillus !bacilul crbunos%/
dispui n mod caracteristic sub forma unor ma$scle sa litere chine'e#ti0
9or@nebacterium diphteriae, M@cobacterium tuberculosis/
%n palisa"!, ca sc6ndurile unui gard0 M@cobacterium leprae.
Eigura 10 Eorme fundamentale i aezare la bacterii !dup &umitru Cuiuc 1<<,%
*. STRUCTURA CELULEI BACTERIENE
:nitatea morfofuncional a bacteriilor este celula. Cacteriile au, ca tip de celul,
celula procariot7, care se deosebete de celula eucariot prin structura i organizarea ei.
&iferenele eseniale ntre celula eucariot i celula procariot sunt prezentate n tabelul
1.
Cara#$&r C&lula &u#ario$4 C&lula /ro#ario$4
*imensini
- mari !18 - 188% - mici !1 - 18%
Organi'are
- multicelular, de obicei,
cu diferenieri
funcionale O esuturi
- unicelular !populaii%
Mo(ali$45i
(&
r&/ro(u#&r&
- mitoz sau meioz - diviziune direct
!fisiune binar sau
sciziparitate%
+cle
- cromozomi ,n !diploid%
sau n !haploid%
- nucleol prezent
- membran nuclear
prezent !material "&1
concentrat%
- cromozom unic, inelar
- molecul "&1 dublu
heli5
- nucleol absent
- membran nuclear
absent !material "&1
dispus difuz cu
concentrare ma5im la
centru%
,embrana
- conine steroli - nu are n structur
steroli !e5cepie genul
M@coplasma%
Citoplasm!
- este compartimentat
- organite tubulare
prezente0 reticul
endoplasmatic,
mitocondrii, aparat
reticular intern Lolgi,
lizozomi
- ribozomii fi5ai pe
reticulul endoplasmatic
rugos, sunt de 88 D cu
subuniti de ;8 D i *8 D
- este necompartimentat
- organite tubulare
absente
- ribozomi liberi n
citoplasm, sunt de 8 D
cu subuniti de +8 D i
.8 D
- organite particulare
prezente0 mezozomi,
o5izomi, plasmide
S$ra$
/&rif&ri#
#or/ #&lular
- membrana celular - perete celular
El&,&n$&
an&64
- cilii !rar% - cili, fimbrii, capsul
For,& (&
r&'is$&n54
- nu e5ist - spori
Tabel 10 &iferene ntre celula eucariot i procariot !dup G. Clbe i 1. $ozsgi 1<8;%
Cacteriile au o structur7 5oarte comple*7, fiind alctuite din0 componente
obligatorii i componente facultative.
- Componentele obli)atorii sau elementele intrinseci sunt prezente la toate speciile
bacteriene i sunt reprezentate de0 ncle& citoplasm!& membran! citoplasmatic! #i
perete cellar.
- Componentele 5acultative sau elementele ane*7 sau e*trinseci se gsesc doar la
unele specii bacteriene i sunt reprezentate de cili sa flageli& fimbrii #i capsl!.
&ei mult mai mici i mai simple dec6t celulele eucariote, bacteriile sunt
asemntoare cu acestea n ceea ce privete mecanismele funcionale celulare, prezent6nd
o organizare comple5 cu o arhitectur e5tern i intern distinct !figura ,%.
Eigura ,0 Dchema general de organizare a celulei bacteriene !dup G. Clbe i 1. $ozsgi
1<8;%
*.1. ELEMENTE ANEX 7EXTRINSECI8
8&2&2& C"L"" 9FLA0'L"": -ACT'R"'N"
9ilii sau flagelii sunt 5orma;iuni 5ilamentoase ale speciilor microbiene mobile%
5oarte lun)i% sub;iri% 5ra)ile. Dunt structuri helicoidale, prezeni mai ales la bacili !familia
=nterobacteriaceae% dar i la unii coci !enterococ%.
Dunt 5orma;iuni implicate 1n locomo;ie, a cror e5isten este controlat genetic.
"stfel, la =. 9oli s-a stabilit c pentru sinteza cililor coopereaz apro5imativ +8 de gene,
a cror informaie este necesar biosintezei constituenilor structurali ai cilului, n
asamblarea acestora, precum i n chemota5ie i mobilitate.
Dis/o'i5ia i nu,4rul #ililor sunt caracteristice speciei !figura +%. D-au descris
bacterii atriche !fr cili%, monotriche - cu un cil polar !Gibrio cholerae% sau subpolar
!enterococ%, lofotriche - cu un smoc de cili situat la unul din polii bacteriei !$seudomonas
fluorescens%, amfitriche - cu cilii situai la ambii poli ai bacteriei !la genul Dpirillum% i
peritriche - cu cilii dispui pe ntreaga suprafa a bacteriei !Dalmonella, =. coli, $roteus,
etc.%.
Eigura + 0 Tipuri de celule bacteriene n raport cu dispoziia cililor !dup ". Mvanof i M.
9iupe, 1<8,%
&in punct de vedere al #o,/o'i5i&i #+i,i#&, cilii conin o protein contractil
denumit 5la)elina, asemntoare cu miozina din celula muscular animal. 7n
compoziia flagelinei, a fost descris un aminoacid caracteristic 1-metil-lizina, care apare
n cursul sintezei flagelului, prin modificarea structurii chimice a lizinei, dup
ncorporarea acesteia n proteina flagelar.
Mo$ili$a$&a #ililor are la baz eliberarea de le)7turi macroer)ice prin
descompunerea "T$ "&$ R radical fosforic !acceptor de radical fosforic este molecula
de arginin%.
9ilii se evideniaz la microscopul optic numai pe fond ntunecat sau dup coloraii
speciale !precedate de tehnici de tratare pentru precipitarea proteinelor flagelare i
mordansare%. Dtructura intim a cililor bacterieni este furnizat de microscopia
electronic. "stfel a fost descris e5istena a trei componente morfologic distincte0 corpul
bazal, c6rligul i filamentul terminal !figura ;%.
1 Cor/ul %a'al 79ranula5ia %a'al48 reprezint componenta cilului prin care acesta se
ataeaz la corpul celulei bacteriene. =ste o component7 structural7 comple*7% montat7
1n 1ntre)ime 1n peretele celular 6i membrana citoplasmatic7. =ste constituit din patru
discuri paralele, dispuse sub forma a dou perechi pe o ti' care trece prin centrul lor.
2a bacteriile 0ram ne)ative e5ist dou7 perechi de discuri ce delimiteaz corpul
bazal0 o pereche intern7 !inele M i D% locali'at! %n membrana citoplasmatic! i o
pereche e*tern7 sitat! spre c(rlig !inele 2 i $% n care discurile sunt mai distanate.
9ele patru discuri au fost denumite M: S: 2 i L dup presupusa lor ataare la nivelul
membranei citoplasmatice, spaiului periplasmatic, stratului de peptidoglican i respectiv
stratului lipopolizaharidic.
2a bacteriile 0ram pozitive e5ist o sin)ur7 pereche de discuri ancorat! %n
membrana citoplasmatic!.
2a nivelul corpului bazal se afl motorul ciliar, a crui micare este transmis
proteinei flagelare, ceea ce face ca cilul s se nv6rteasc n sens orar !rostogolirea
bacteriei cu schimbarea direciei de micare% sau antiorar !deplasarea bacteriei n linie
dreapt%.
bacterie
atriche
bacterie
monotriche
bacterie
amfitriche
bacterie
lofotriche
bacterie
peritriche
Eigura ;0 Dtructura cililor !dup Leorge ". Uistreich, Ma5 &. 2echtman 1<88%
- #;rli9ul #ilului - un manon ndoit n unghi drept/
- fila,&n$ul #ilului - liber n afara celulei, cu lungime de 1.-,. .
9ilii sunt or)ane de locomo;ie pentru bacterii. Mobilitatea i direcia micrii
cililor este asociat cu proprietatea de #+&,o$a6i&, care este o mi6care diri<at7 1nspre
sau dinspre o substan;7 chimic7. =5ist o #+&,o$a6i& /o'i$iv4 care se refer la
mi#carea spre o concentraie po'itiv! a nei sbstane chimice !zaharuri, aminoacizi% i
aceasta se nt6lnete n mod obinuit c6nd substana chimic reprezint un avanta' pentru
celul !substan nutritiv%. De vorbete i de o #+&,o$a6i& n&9a$iv4, o mi#care prin care
bacteria se "ep!rtea'! "e o sbstan! chimic! !fenolul, acizii, bazele%, de obicei c6nd
aceasta este duntoare, to5ic pentru celul. Dtimulii chimici care induc chemota-ia
po'itiv! sunt numii atractan;i, iar cei care induc chemota-ia negativ! - repelen;i.
9ilii sunt sediul anti)enelor 5la)elare 9+:, importante n identificarea bacteriilor
!e5emplu Dalmonella%, stimul6nd un rspuns imun. 7n plus, pot ndeplini rolul de
receptori pentru virusuri i n unele cazuri determin aderarea de epitelii !la vibrionul
holeric cilul intervine n aderarea de epiteliul intestinal%.
7n practica de rutin nu se evideniaz flagelii, ci mobilitatea bacteriilor, fie prin
e-aminarea lor pe n preparat nativ %ntre lam! #i lamel! n care se urmresc micrile
bacteriilor, fie prin %ns!m(narea tlpinii pe n me"i semisoli" prin %neparea %n
profn'ime a me"ili. &ac bacteria crete numai pe traseul de nsm6nare este
imobil, dac difuzeaz n mediu, ea este mobil.
8&2&8& F"#-R""L' 9P"L"":
Eimbriile sau pilii sunt prelun)iri scurte% ri)ide 6i )roase evideniate mai ales la
speciile bacteriene 0ram ne)ative !speciile familiei =nterobacteriaceae, 1eisseria
gonorrhoeae% i mai puin la bacteriile Lram pozitive !Dtreptococcus, 9or@nebacterium%.
D-a constatat c n cadrul aceleai specii pot e5ista tulpini fimbriate i tulpini nefimbriate.
Dunt elemente mai rezistente dec=t 5la)elii& %n nm!r "e .//01//2cell!& c "ispo'iie
peritrich!, cu evideniere numai prin microscopie electronic.
&in punct de vedere chimic sunt polimeri proteici de pilein7 care rezist la tripsin,
pepsin, acizi, baze. "ceast natur proteic a pililor le confer proprieti antigenice.
Euncional, pilii se mpart n dou categorii0
1 /ili #o,uni sau /ili (& a(&r&n54 7fi,%ri8 a cror sintez este controlat de gene
cromo'omiale. De gsesc n numr de .//03// pe sprafaa cellei i au rol n aderarea
de di5erite supra5e;e, n special epitelii, de unde i denumirea de adezine, care iniiaz
procesul infecios. $ilii comuni constituie un 5actor important de virulen;7 !de e5emplu
la gonococ%. 7n afar de aderen, aceti pili mai au i propriet7;i anti5a)ocitare.
1 /ilii <(& s&6= 7s&6 /ilii8 sunt formaiuni puin mai lungi, fle5ibile, cu structur i form
diferit !sferic, form de cup, de disc%, n numr de .04 pe cell! i ntotdeauna
co"ificai "e formainile genetice e-tracromo'omiale 0 plasmi"e. "ceti pili prezint o
importan deosebit n trans5erul de material )enetic 1ntre bacterii, form6nd puni ntre
celula donatoare i cea receptoare, 1n cursul procesului de con<u)are. Dunt prezeni mai
ales la bacteriile Lram negative !=nterobacteriaceae, $seudomonas%.
"mbele categorii de pili prezint7 anti)ene speci5ice piliare i pot fi receptori
pentru bacterio5a)i.
8&2&>& CAPS,LA
:nele microorganisme secret la suprafa un 1nveli6 e*tracelular ce 1ncon<oar7
peretele celular. 7n funcie de structur i de raporturile pe care le stabilete cu celula
bacterian, se poate vorbi de capsul propriu-zis, microcapsul i strat mucos
!glicocali5%.
*in pnct "e ve"ere chimic, capsula tuturor bacteriilor de interes medical este de
natur7 polizaharidic7 !Dtreptococcus pneumoniae, Blebsiella, Saemophilus, Cordetella%,
form6nd o reea str6ns peste peretele celular !Dtreptococcus pneumoniae% sau av6nd o
structur lamelar !Blebsiella%. Mai rar, capsula poate fi de natur7 proteic7 !bacilul
crbunos%.
Aolul cel mai important al capsulei este legat de pato)enitatea bacteriei 95actor de
virulen;7:0 capsula mpiedic fagocitarea bacteriilor care reuesc, astfel, s scape de sub
aciunea mecanismelor de aprare ale organismului. 2a speciile capsulate, pierderea
capsulei are ca rezultat pierderea virulenei, fie direct, fie indirect prin efectul
chemotactic negativ al substanelor pe care le conine !e5emplu0 Dtreptococcus
pneumoniae, de tip D, capsulat, produce la oarecele alb de laborator o septicemie
mortal, pe c6nd varianta necapsulat nu este patogen%.
9apsula este o structur7 cu propriet7;i anti)enice speci5ice care permit
diferenierea unor serotipuri n cadrul speciei. $e baza antigenului capsular se poate face
tipizarea bacteriilor !la Dtr. pneumoniae polizaharidul capsular determin peste 88 de
tipuri antigenice, iar la Saemophilus * tipuri antigenice%.
Func;iile capsulei0
prote$ea'! bacteriile "e "iferii ageni antibacterieni "in me"i cum sunt0
bacteriofagii, complementul, lizozimul sau alte enzime bacteriolitice/
prote$ea'! bacteriile "e acinea fagocitelor !factor de virulen%/
repre'int! se"il antigenelor capslare, importante n identificarea acestor bacterii.
2.2. ELEMENTE INTRINSECI
8&8&2& N,CL'$"(,L 9N,CL',L: -ACT'R"AN
Materialul nuclear bacterian !nucleoidul% are o organizare primitiv n comparaie
cu nucleul celulelor eucariote, n sensul c nu are membran7 nuclear7 6i nici nucleoli,
aceasta fiind principala caracteristic structural a celulelor procariote.
&in punct de vedere chimic "&1 este constituit din baze azotate purinice
!adenin-" i guanin-L%, baze azotate pirimidinice !citozin-9 i timin-T%, un zahar
!dezo5iriboz% i acid 5os5oric. O ba'! a'otat! prinic! sa pirimi"inic! legat! "e o
molecl! "e "e'o-iribo'! #i "e n ra"ical fosforic reprezint o unitate funcional numit
nu#l&o$i(/ nucleotidele, la r6ndul lor, sunt unite ntre ele prin componentele fosforice
form6nd un lan5 /olinu#l&o$i(i# 7#a$&n48. S$ru#$ura (u%lu +&li#oi(al4 a ADN !model
propus de Uatson i 9ric4 n 1<.+% se realizeaz prin 1n576urarea a dou7 lan;uri
polinucleotidice, orientate cu bazele spre interiorul structurii, astfel nc6t fa n fa s se
gseasc ntotdeauna fie adenina i timina, fie citozina i guanina. Dtructura spaial astfel
format se stabilizeaz prin dou legturi de hidrogen ntre timin i adenin i trei
legturi de hidrogen ntre citozin i guanin.
Euncia nucleului bacterian const n depozitarea in5orma;iei )enetice necesar
autoreplicrii precum i pentru organizarea structural i funcional a celulei bacteriene.
9onstituie sediul ereditii cromozomiale i asigur toate caracterele specifice de specie
ale bacteriei respective.
1 Au$or&/li#ar&a ADN 7(ivi'iun&a nu#l&ului8 precede diviziunea celular i este de tip
semiconservativ, adic fiecare molecl! "e A*+ no format! conine n lan
polincleoti"ic "in molecla "e A*+ parental! #i n lan polincleoti"ic no sinteti'at.
Nucleul are rol esen;ial 1n multiplicarea bacteriilor. &iviziunea nucleului ncepe printr-
un cliva' longitudinal al cromozomului, catalizat de "&1-polimeraz i urmat apoi de
resinteza catenei complementare. 7n celul apar dou lanuri bicatenare !identice ntre ele
i identice cu parentalul% care se separ i migreaz spre polii celulei !mpreun cu
mezozomii care s-au dedublat concomitent cu nucleul%. "pare peretele despritor, iar
cele dou celule se separ. 7n acest fel se transmit toate caracterele de specie la
descendeni.
1 >&$&ror&/li#ar&a 7sin$&'a /ro$&in&lor /ro/rii %a#$&ri&i8. 1ucleul diri'eaz aceast
sintez pe baza informaiei coninut n "&1. Mnformaia genetic este transmis de la
molecula de A(N la ribozomi prin intermediul ARN mesa)er 9ARNm: sau
in5orma;ional 9prima transcrip;ie:. Dinteza de "A1m !lan unic de nucleotide, fiecare
nucleotid av6nd n structur riboz, o baz azotat - guanina, citozina, adenin sau uracil-
i o molecul de acid fosforic% este catalizat de "A1-polimeraz pe modelul constituit
de unul din lanurile "&1. Moleculele de "A1m migreaz apoi n citoplasm la sediile
de sintez7 a proteinelor reprezentate de ribozomi, unde vor servi ca tipar sau matri
pentru asamblarea acizilor aminai n lanuri polipeptidice 9a doua transcrip;ie:.
"minoacizii de structur activai enzimatic sunt transportai din citoplasm la ribozomi
de molecule de ARN de transport sau solubil 9ARNt: specifice fiecrui aminoacid.
7n afar de "&1 cromozomial, la unele bacterii sunt prezente molecule circulare
mici% e*tracromozomiale de A(N care se numesc /las,i(& i care se replic
independent de cromozomul bacterian.
8&8&8& C"T$PLAS#A
Dituat ntre materialul nuclear i faa intern a membranei citoplasmatice,
citoplasma este un sistem coloidal comple* alctuit din apro5imativ )/5 ap!, n care se
gsete o cantitate mare de molecle organice mici !rezultate ale metabolismului
bacterian%, ioni anorganici& en'ime i aci'i riboncleici !"A1 ribozomal, "A1 de
transport, "A1 mesager%. 7n funcie de specie, n citoplasma bacteriilor se mai pot gsi0
plasmi"e& vacole i incl'ii. =ste necompartimentat7 fiin" lipsit! "e unele organite
celulare prezente la celulele eucariote, cum sunt reticll en"oplasmatic& aparatl 6olgi&
mitocon"riile.
a. Ri%o'o,ii
$rincipalele elemente ale citoplasmei, sunt structuri s5erice, mai mici dec6t
ribozomii celulelor eucariote, i reprezint sediul sintezelor proteice din celul.
"u constanta de sedimentare de 8D !complei%, ce se menine stabil n prezena
unei anumite concentraii de Mg
,R
i B
R
din citoplasm. 7n absena ionilor de Mg
,R
are loc
disocierea ribozomilor n subuniti de .8D i +8D !incomplei%, subuniti care reprezint
int pentru aciunea unor antibiotice !streptomicin, eritromicin, cloramfenicol%.
&in punct de vedere chimic sunt alctuii din *8F "A1 i ;8F proteine. ) parte de
ribozomi se asociaz form6nd poli'omi !mai ales n timpul sintezelor proteice%, alii sunt
liberi, iar o a treia categorie se ata#ea'! me'o'omilor sau membranei citoplasmatice.
2a nivelul ribozomilor sunt sintetizate toate enzimele necesare metabolismului
care caracterizeaz fiziologia bacteriei.
%. M&'o'o,ii
Dunt structuri membranare care se formeaz prin inva)inarea membranei
citoplasmatice sub form de buzunar sau n deget de mnu, prezente la bacteriile
0ram pozitive i ocazional la cele Lram negative. =i formeaz n citoplasm caviti
deschise spre spaiul periplasmic !spaiul dintre membrana citoplasmatic i peretele
celular% i sunt n contact direct cu materialul nuclear. "u o organi'are mai comple-! la
bacteriile 6ram po'itive #i snt mai r"imentari la bacteriile 6ram negative.
Func;iile mezozomilor
particip la replicarea cromo'omli bacterian i "ivi'inea cellar!/
se"il nor en'ime hi"rolitice care ndeplinesc rolul enzimelor lizozomale de la
celulele eucariote/
sinte'a #i secreia nor e-oen'ime !penicilinaza sau cefalosporinaza%/
particip! la reaciile "e fosforilare o-i"ativ! #i o-i"ore"cere !minor%.
#. 2las,i(&l&
)rganite specifice celulei procariote, reprezint unit7;i )enetice
e*tracromozomiale prezente numai la unii indivizi bacterieni !se pot transfera de la un
individ bacterian la altul%. Dunt molecule circulare de A(N% mici, capabile s7 se replice
independent de cromozomul bacterian i care sunt responsabile de ereditatea
e*tracromozomial7 !rol n transmiterea unor caractere cum este rezistena la antibiotice%.
(. In#lu'iil& 9ranular& 7(&/o'i$& (& su%s$an5& (& r&'&rv48
&escrise la unele specii bacteriene, sunt 5orma;iuni structurale inerte% temporare,
de diferite dimensiuni, variind n funcie de specia bacterian i condiiile de mediu.
9ompoziia lor chimic este diferit, ele put6nd fi de0
- glicogen !la specii din familia =nterobacteriaceae%/
- asemntoare ami"onli !la unii bacili aerobi sporulai - genul 9lostridium%/
- lipi"e !la genul Cacillus%/
- polimetafosfai !sau incluziile de volutin descrise de Cabe i =rnst la bacilii
difterici%, etc.
Mncluziile sunt structuri legate de activitatea metabolic a celulei bacteriene i
reprezint7 un material de rezerv7 care poate fi folosit ca surs de energie.
&. "a#uol&l&
Gacuolele, alte organite intracitoplasmatice, sunt 5orma;iuni s5erice% care con;in
substan;e lichide sau )azoase, ncon'urate de un nveli lipoproteic unistratificat.
f. O6i'o,ii
Aeprezint sediul enzimelor de o*idoreducere. Dunt organite specifice celulei
procariote. ?n o6i'o,i se gsesc citocromii% citocromo*idaza% 5lavin3enzima etc., iar @n
o6i'o,i i ,a$&rialul solu%il se gsesc i enzimele ciclului !rebs0 S*7 !se gsete n
cantitate crescut n o5izomi i n cantitate sczut n materialul solubil%/ malic0*7 !se
gsete n cantiti egale, at6t n o5izomi, c6t i n materialul solubil%/ aconita'!&
i'ocitric0*7& 08etogltaric0*7 !se gsesc n cantiti sczute n o5izomi i n cantiti
crescute n materialul solubil%.
2.2.3. MEMBRANA CITOPLASMATIC
"pare ca un strat 5oarte sub;ire care 1ncon<oar7 citoplasma i este foarte aderent
de peretele celular. =ste o membran7 5in7 !*,.-nm%, elastic7, lipsit de rezisten
mecanic& reprezent6nd zona unde se produc 5enomenele de permeabilitate osmotic7 6i
selectiv7 !membran VsemipermeabilK%.
$e seciune, membrana apare trilaminat, av6nd drept compoziie chimic dou7
straturi 5os5olipidice dispuse cu p7r;ile hidro5obe 5a;7 1n 5a;7. $rintre moleculele
fosfolipidice se gsesc molecule proteice 9)rup7ri polare% permeaze3translocaze:, situate
fie la nivelul unuia dintre cele dou straturi fosfolipidice, fie le traverseaz fiind e5puse la
ambele fee ale membranei.
Euncional, membrana ndeplinete urmtoarele roluri0
este o membran7 semipermeabil7, care regleaz schimburile ce au loc ntre celula
bacterian i mediul e5tern, at6t prin procese active specifice, c6t i prin procese de
difuziune pasiv/
secret7 numeroase enzime hidrolitice ce se elibereaz n mediul ncon'urtor unde
scindeaz macromoleculele n molecule mai mici, ce pot fi transportate n interiorul
celulei/
participare la sisteme chemotactice0 la nivelul membranei sunt prezeni receptori
asupra crora acioneaz stimulii chimici din mediu cu rol de atracie !atractani% sau de
respingere !repeleni%/
1ndepline6te 5unc;ia bioener)etic7, de eliberare a energiei prin fosforilare o5idativ.
7n membran este structurat lanul respirator i unele enzime din ciclul Brebs
!dehidrogenaze%, membrana procariot prelu6nd funcia mitocondriilor din celula
eucariot/
particip7 activ la cre6terea 6i diviziunea celulei bacteriene, la formarea sporului
bacterian/
reprezint7 structura celular7 ;int7 pentru deter)en;i care, utilizai ca substane
dezinfectante altereaz structura acesteia, sau pentru unele antibiotice care interfereaz
cu funcia biosintetic a membranei !polimi5inele%.
2.2.4. PERETELE CELULAR
$eretele celular este o structur unic pentru bacterii, responsabil de 5orma 6i
ri)iditatea celulei !particip minor la osmoz%, localizat la e5teriorul membranei
citoplasmatice i prezent la toate bacteriile, cu e5cepia reprezentanilor genului
M@coplasma i "rchaebacteriilor. $eretele este format dintr-un strat bazal, asemntor la
toate bacteriile i un strat al structurilor super5iciale, foarte difereniat, n funcie de care
bacteriile manifest caractere tinctoriale diferite0 bacterii Lram pozitive, Lram negative
i acido-alcoolorezistente.
Structura stratului baal
Aeeaua de peptidoglican !mureina% este structura chimic responsabil de
ri)iditatea peretelui celular i care asigur forma i rezistena mecanic a bacteriei.
Aeeaua de peptidoglican, prezent la toate bacteriile, este format din + poriuni !figura
.%0
1 ?Scheletul de baz7@ alctuit din molecule lungi paralele polizaharidice de +0acetil0
glco'amin! 9+0Ac06lc: i aci" +0acetil0mramic 9+0Ac0,r:/
&-"2"

1-"c-Llc 1-"c-Mur 1-"c-Llc 1-"c-Mur

2-"2" !L2Q% .

&-L2:

2-2QD

&-"2"

1-"c-Llc 1-"c-Mur 1-"c-Llc 1-"c-Mur

2-"2" !L2Q% .

&-L2:

2-2QD

&-"2"
!L2Q% .
Eigura .0 Aeeaua de peptidoglican !dup 9. Goiculescu, 1<<*%
1 Componenta peptidic7 format din pun;i tetrapeptidice identice, transversale, ntre
unitile de 1-"c-Mur a dou lanuri vecine. Dtructura acestor puni difer la bacteriile
Lram pozitive de cele Lram negative i chiar de la specie la specie. 7n aceast structur
intr & i 2 aminoacizi0 L3alanina% (3)lutamin7% L3lizin7 !sau diaminopimelic la
bacteriile Lram negative%, (3alanin7. "ceast component se sintetizeaz iniial ca un
pentapeptid, dar ntr-un peptidoglican complet se gsete sub form de tetrapeptid
deoarece ultimul aminoacid, &-alanina, este nlturat c6nd un lan peptidic se leag de un
altul vecin/
3 Pun;i ?1ncruci6ate@ de penta)licin7 !ntre poziia ; i + a dou puni tetrapeptidice
vecine% la bacteriile Lram pozitive. 2a bacteriile Lram negative, tetrapeptidele se leag
ntre ele printr-o simpl legtur peptidic.
Strctra stratli strctrilor speciale
De deosebesc trei tipuri de structuri speciale0 Lram pozitiv, Lram negativ i acido-
alcoolorezistent.
a& -acterii 0ram pozitive 9caracteristici particulare:
$eretele celular al bacteriilor Lram pozitive este relativ mai )ros% dar cu o
compozi;ie mai simpl7. $eptidoglicanul reprezint .8-<8F din greutatea uscat a
peretelui celular, are o grosime de 1.-+8 nm i conine p6n la ,88 de lanuri paralele de
murein, legate tridimensional pentru a forma o reea groas. Dtratul structurilor speciale
este redus i alctuit din polimeri hidrosolubili care sunt acizii theicoici0 acidul
ribitoltheicoic i )liceroltheicoic. "cetia pot ptrunde p6n la membrana citoplasmatic
!acizii theicoici cu glicerol% leg6ndu-se covalent de aceasta - acizii theicoici de membran
sau numai p6n la perete - acizii theicoici de perete !acizi theicoici cu ribitol%. "cizii
theicoici intervin n special 1n cre6terea 6i diviziunea celulei. =i reprezint determinan;i
anti)enici ma<ori care stau la baza identificrii serologice a unor bacterii, fiind substane
care, ptrunse n organism, induc un rspuns specific din partea sistemului imun al
organismului.
&e asemenea, la unele specii, se evideniaz i prezen;a de polizaharide0 polimeri
"e mano'!& arabino'!& galacto'!& glco'amin! #i polimeri "e 'aharri ;aci"e 9aci"
glcronic& aci" manronic:.
$eretele celular al bacteriilor Lram pozitive este sensibil la ac;iunea lizozimului
!enzim hidrolitic prezent n lacrimi, mucus, saliv% care rupe legturile dintre acidul
1-acetil muramic i 1-acetilglucozamin, autolizinelor bacteriene !enzime muralitice%
care intervin n diviziunea celulei bacteriene, penicilinei care inhib sinteza
peptidoglicanului.
b& -acterii 0ram ne)ative 9caracteristici particulare:
$eretele este mai sub;ire dar mult mai comple* structurat: multistrati5icat.
$eptidoglicanul are o grosime de ;-. nm, reprezent6nd numai 18F din greutatea uscat a
bacteriei. Dtratul superficial este ns mult mai comple5 dec6t la bacteriile Lram pozitive,
alctuit din spail periplasmic& membran! e-tern! #i lipopoli'ahari"l "e perete 9<PS:.
$rincipalele diferene structurale ale peretelui celular bacterian la bacteriile Lram
pozitive i Lram negative sunt prezentate n figura *.
Eigura *0 &iferenele structurale ale peretelui celular la bacteriile Lram pozitive i
Lram negative !dup Murra@, &re3, Boba@ashi, Thompson, 1<<8%
S!a"iul !#ri!las$ic
=ste un compartiment cu funcie de stocare ce se ntinde de la membrana citoplasmatic
p6n la membrana e5tern. 2rgimea spaiului periplasmic este variabil, depinz6nd de0
starea fiziologic a celulei/ condiiile de cultivare.
=l conine peptidoglicanul i un gel care favorizeaz nutriia bacteriei prin coninutul n
enzime degradative !fosfataze, nucleaze, proteaze%. Tot aici sunt prezente enzimele de
inactivare ale unor antibiotice !betalactamaze, cefalosporinaze%. =nzimele stocate la
nivelul spaiului periplasmic sunt eliberate prin membrana e5tern n funcie de necesiti
i aceasta este una din e5plicaiile marii capaciti de adaptare la mediu a bacteriilor
Lram negative spre deosebire de cele Lram pozitive care, neav6nd membran e5tern,
elibereaz enzimele imediat ce sunt sintetizate.
M#$bra%a #&t#r%'
=ste asemntoare ca structur cu membrana citoplasmatic fiind format dintr-un
strat dublu de 5os5olipide 1n care sunt inclavate proteine de o diversitate foarte mare0
unele dintre acestea strbat membrana i pot a'unge p6n la peptidoglican, altele sunt
ataate pe faa intern sau e5tern a membranei i proemin n spaiu sau la suprafa, iar
altele sunt libere !figurile i 8%.
7n membrana e5tern e5ist proteine ma<ore 9porine% non porine: i proteine
minore. Porinele sunt cele care penetrea'! ambele fee ale membranei e-terne i
formea'! pori sau canalicule, prin care difuzeaz spre interiorul celulei molecule cu
greutate molecular p6n la *88 &. Dubstanele nutritive a'ung din e5teriorul celulei p6n
la spaiul periplasmic, unde se petrec evenimente metabolice de degradare n substane ce
pot fi transportate prin membrana citoplasmatic n interiorul celulei. " doua categorie de
proteine ma'ore, non porinele, sunt fie receptori pentr pili se-ali, fie en'ime care
reglea'! sinte'a capslei bacteriene. Proteinele minore funcioneaz ca transportori
transmembranari specifici pentr moleclele mici !ionii Ee+R, vitamine%.
Eigura 0 $eretele celular la bacteriile Lram negative !dup Murra@, &re3,
Boba@ashi, Thompson 1<<8%
Li/o/oli'a+ari(ul (& /&r&$& 7L2S8
&easupra membranei e5terne a bacililor Lram negativi se afl lipopolizaharidul de
perete 9LPS: sau endoto*ina bacililor 0ram ne)ativi. 2$D este o to5in termolabil care
se elibereaz7 1n mediul 1ncon<ur7tor numai dup7 liza acestor bacterii, fiind foarte
reactiv n organismul gazd.
7n structura lipopolizaharidului intr0 lipidul ", miezul sau VcoreK i uniti
monozaharidice repetitive.
- lipidul A cu o structur particular, responsabil de to*icitate0 pro"ce febr!&
activea'! mecanismele ap!r!rii antiinfecioase i, n e5ces, produce #ocl en"oto-ic cu
evoluie grav, chiar fatal/
- miezul sau ?core@ !polizaharid%, numit i antigen A, comun tuturor bacteriilor Lram
negative/
- unit7;i monozaharidice repetitive !1.-;8% care sunt specifice de specie i tip i
constituie anti)enul $ al bacteriilor 0ram ne)ative !figura 8%.
Eigura 80 $eretele celular la bacteriile Lram negative !dup Murra@, &re3, Boba@ashi,
Thompson, 1<<8%
c& -acteriile acido3alcoolo rezistente
&intre aceste bacterii, bacilul tuberculos i bacilul leprei, reprezentani ai genului
M@cobacterium, sunt de interes medical. "ceste bacterii au peretele celular asemntor
cu cel al bacteriilor Lram pozitive. Structurile speciale con;in lipide p6n la +8F,
aproape 'umtate din acestea fiind reprezentate de acidul micolic i o cear7 ce confer
acestor bacterii caractere tinctoriale "eosebite #i re'isten! cresct! la factorii "e me"i.
"stfel dac, dup o nclzire de scurt durat ce topete cerurile, un colorant ptrunde n
celula bacterian, decolorarea acesteia sub aciunea acizilor sau alcoolilor nu se mai
produce ca la alte bacterii. "cest caracter se numete acido3alcoolorezisten;7. "ceste
bacterii se coloreaz foarte slab n coloraia Lram, evidenierea lor fc6ndu-se la cald prin
tehnica /iehl3Neelsen.
d& -acterii cu perete alterat sau 5ormele L
Dunt bacterii cu stratul bazal viciat sub aciunea unor factori din mediu ca, de
e5emplu, li'o'iml, care lizeaz peptidoglicanul, i penicilina care mpiedic sinteza
acestuia.
e& -acterii 57r7 perete celular
=5ist bacterii lipsite 1n mod natural de perete celular, care nu pot avea o form
constant, forma lor fiind variabil n funcie de mediul n care se afl. =5emplu0
,ycoplasma !cu form cocoidal, de par, alungit sau filamentoas%.
Func;iile peretelui celular0
asigr! forma& re'istena mecanic! #i osmotic! a bacteriei/
particip! la "ivi'inea cellei #i %n cre#terea acesteia, urm6nd membrana
citoplasmatic n formarea septurilor transversale care separ celula mam n celule
fiice/ protoplatii i sferoplatii, lipsite de perete celular, nu se divid/
stochea'! nele en'ime %n spail periplasmic la bacteriile 6ram negative ce vor fi
eliberate dup necesiti/
pre'int! receptori pentr bacteriofagi !virusuri care paraziteaz bacteriile% prin
proteinele de membran e5tern, iniiind infecia viral a celulei bacteriene/
este se"il antigenelor "e sprafa!, fiind deci implicat n rspunsul imun al
macroorganismului/
este se"il nor factori "e patogenitate/
are rol %n procesl "e sporlare/
reprezint inta de aciune pentru unele antibiotice i "etergeni/
prin structura diferit separ! cele "o! categorii "e bacterii %n coloraia 6ram !Lram
pozitive i Lram negative% sau confer! caracter "e aci"oalcoolore'isten!.
A. S2ORUL )I S2ORULAREA
:nele bacterii se transform n spori care apar en"ocellar i care pot spraviei
ani #i 'eci "e ani %n con"iii nefavorabile "e "e'voltare. =i au o rezisten;7 crescut7 la
5actorii de mediu, la a)en;ii 5izici !cldur, radiaii%, chimici !acizi, dezinfectani%, chiar
i la coloran;i !evidenierea se face folosind coloraii speciale%. =5ist trei genuri de
bacterii Lram pozitive sporulate ce prezint importan pentru bacteriologia medical0
9lostridium i Cacillus !bacili% i Dporosarcina !coci%.
&intr-o bacterie vegetativ! se formea'! n singr spor, care, n con"iii favorabile
"e via!& va "a na#tere nei singre celle bacteriene cu toate proprietile ei iniiale.
Forma sporului poate fi rotn"! sau oval!. (iametrul sporilor este mai mic la
bacilii sporula;i aerobi ne"ep!#in" "iametrl bacteriei !genul Cacillus%, pe c6nd la )enul
anaerob Clostridium, sporl are n "iametr mai mare "ec(t bacteria, produc6nd
deformarea acesteia. "cest caracter al sporului este important n identificarea bacililor
Lram pozitivi anaerobi.
Pozi;ia sporului bacterian constituie un caracter ta5onomic. $oate fi central7, ca la
Clostri"iile gangrenei ga'oase, subterminal7 la bacill c!rbnos !Cacillus anthracis%,
sau terminal7, ca la bacill tetanic !9lostridium tetani%.
7n coloraiile obinuite sporul apare ca o zon incolor n corpul bacterian. =l se
evideniaz ns prin coloraii speciale, la cald, care permeabilizeaz nveliurile sporale
!coloraia Moller%. $e preparatele native ntre lam i lamel efectuate din culturi, sporii
apar ca nite formaiuni rotunde, refringente.
:ltrastructura i compoziia chimic a sporilor asigur acestora o mare rezisten;7
la 5actorii nocivi, ce poate fi e5plicat at6t prin starea "e "eshi"ratare !ap ;8-.8F, fa
de 88-<8F la formele vegatative% care anuleaz schimburile cu mediul e5tern i scade
sensibilitatea la cldur, c6t i de nmeroasele sale %nveli#ri protectoare.
SP$R,LAR'A SA, SP$R$0'N'/A
=ste un proces comple*, guvernat de apro5imativ ,88 de gene din celula
bacterian, gene care sunt activate n condiii nefavorabile de mediu, altfel aceste gene
sunt represate. Dporularea presupune formarea unor structuri noi i dispariia altor
structuri caracteristice formei vegetative ale bacteriei.
&in punct de vedere morfologic, sporularea ncepe prin migrarea cromo'omli
%ntr0o 'on! a cellei !de regul, polar%. :rmeaz invaginarea membranei citoplasmatice
cu %nglobarea cromo'omli 9A*+: %ntr0n %nveli# "bl 9;prespor:. De sinteti'ea'!
apoi pepti"oglicanl !reea subire% pe partea interioar a stratului intern, urmat de
sinteza de peptidoglican !reea groas% ntre cele dou straturi. Stratl e-tern se %ngroa#e
i el !conine o protein V4eratin-li4eK%. 9ontinu cu "eshi"ratare& cre#terea concentraiei
"e Ca
==
#i li'a restli formei vegetative.
STR,CT,RA SP$R,L,"
=ste diferit de la specie la alta dar organizarea general se aseamn. &e la interior
spre e5terior, sporul este format din0
#or& sau /ro$o/las$ul s/oral, format din materialul nuclear ncon'urat de membrana
citoplasmatic. "ici este depozitat A(N !genomul complet%, unele enzime respiratorii
!citocromi, flavoproteine% i o substan care are rol n rezistena sporului la cldur -
dipicolinatul de calciu !singura evideniere n natur%/
/&r&$&l& s/oral 7#or$&6ul in$&rn8, format din peptido)lican i care este peretele
cellar primor"ial/
#or$&6ul s/oral 7,&,%rana &6$&rn48, care este stratul cel mai gros al sporului,
transparent i care conine un peptido)lican cu o structur7 particular7% mai la*% 5oarte
sensibil la lizozim. "utoliza acestui strat este momentul cheie n transformarea sporului
n forma vegetativ/
$uni#a /ro$&i#4 format din proteine chitinoase cu numeroase le)7turi disul5itice.
=a este impermeabil, fiind responsabil de rezistena sporilor la unele dezinfectante/
&6os/oriu,ul este prezent numai la unii spori i conine lipoproteine #i zaharide.
GERMINAREA S2ORULUI
?n #on(i5ii (& ,&(iu favora%il& 7u,i(i$a$&: M9
BB
: $&,/&ra$ura AC1DEC8:
s/orul 9&r,in&a'4 i va (a na$&r& un&i %a#$&rii v&9&$a$iv& i(&n$i#& #u a#&&a @n #ar&
s1a for,a$. G&r,inar&a ar& lo# @n $r&i &$a/&F a#$ivar&a s/orului: ini5i&r&a i
(&'vol$ar&a s/orului.
1 A#$ivar&a s/orului s& /ro(u#& #;n( a#&s$a @n$;ln&$& #on(i5ii favora%il& (&
via54: (ar i un fa#$or ,&#ani# sau #+i,i# #ar& s4 l&'&'& @nv&liul s/oral 7li'o'i,ul8.
1 Ini5i&r&a &s$& (&#lana$4 (& un ,&(iu nu$ri$iv %o9a$. 2&n$ru unii s/ori
$ri99&rul &s$& L1alanina: iar /&n$ru al5ii a(&no'ina: 9lu#o'a. A#&s$a (u#& la a#$ivar&a
un&i &n'i,& au$oli$i#& #ar& (&9ra(&a'4 #or$&6ul s/oral. Ar& lo# a%sor%5ia (& a/4:
&li%&rar&a (i/i#olina$ului (& #al#iu i (&9ra(ar&a unor #o,/ui s/orali.
1 D&'vol$ar&a s/oruluiF /ro$o/las$ul s/oral s& $ransfor,4 @n %a#$&ri&
v&9&$a$iv4: #ar& $r&#& /rin$r1o /&rioa(4 ,&$a%oli# a#$iv4 (& r&fa#&r& a
#ons$i$u&n5ilor #&lulari nor,ali i a &#+i/a,&n$ului &n'i,a$i# #o,/l&$.
D. DI"I3IUNEA CELULEI BACTERIENE
Ec6nd abstracie de formele de transfer Hse5uatK de material genetic !con'ugarea%,
regula general a diviziunii celulei bacteriene este 5isiunea binar7 3 diviziune direct7 3
sciziparitate, av6nd drept rezultat apari;ia a dou7 celule 5iice de dimensiuni e)ale% cu
material )enetic identic.
&iviziunea celulei bacteriene cuprinde , faze0 septarea i separarea/ diviziunea
nuclear.
S#!tar#a (i s#!arar#a
2a microscopul electronic, se poate observa c diviziunea ncepe cu inva)inarea
membranei citoplasmatice, n asociere cu mezozomul !adeseori la nivelul acestuia%.
"stfel se produce un sept transversal complet& mai gros dec6t peretele celular.
- 2a bacteriile 6ram po'itive noul perete se sintetizeaz n zona ecuatorial a celulei
mam. Depararea are loc prin formarea unui perete despritor de la periferie spre interior,
ca un diafragm care se nchide treptat, cliva'ul celor dou celule av6nd loc, cel mai
adesea, dup una-dou generaii, form6nd lanuri, grmezi.
- 2a bacteriile 6ram negative, sinteza noului perete este mai difuz, n diferite zone ale
vechiului perete celular, cu strangulare treptat a citoplasmei i separare imediat.
Divi'iun&a nu#l&ar4
Degregarea cromozomului bacterian implic mai multe secvene0
ata6area inelului cromozomial pe mezozom, totdeauna cu o zon de pe molecula de
"&1 cromozomial denumit HreplicatorK/
separarea celor dou7 lan;uri ale moleculei de A(N cromozomial cu r!scirea lor %n
"bl sens, cu %n"ep!rtarea consectiv! a acestor %n spai, unul fa de cellalt, av6nd
mezozomul ca punct de spri'in VpivotK/
diviziunea mezozomului 1n lun)ul a*ului s7u/
apari;ia celor dou7 celule 5iice, av6nd fiecare cate un lan "&1 parental, ancorat de
mezozomul propriu/
5ormarea 1n 5iecare celul7 5iic7 a c=te un nou lan; A(N: complementar !folosind ca
matrice lanul "&1 parental%.
7n felul acesta, fiecare din cele dou celule fiice rezultate din diviziune va purta de
regul material genetic identic cu cel cuprins n cromozomul celulei parentale - A din
A(N3ul celulei parentale - !model de diviziune Bsemiconservativ@%.
METABOLISM BACTERIAN
&efiniie0 totalitatea reac;iilor biochimice care au loc n celula bacterian, precum
i cele determinate de microorganism n mediul ncon'urtor. Dcop final0 cre6terea 6i
multiplicarea bacteriei.
9uprinde0
1. R&a#5iil& #a$a%oli#&0 prin aceste reacii sbstratl ntritiv se fragmentea'! n uniti
componente, cu eliberare "e energie/
*. R&a#5iil& ,&$a%oli#& in$&r,&(iar&0 prin care energia rezultat din primele reacii este
%nmaga'inat! %n comp#i macroergici/
A. R&a#5ii ana%oli#&0 reacii prin care celula bacterian i sinteti'ea'! sbstanele
proprii& cu consum energetic.
Observaie0 Toate aceste reacii sunt catalizate de enzime a cror activitate este controlat
genetic, astfel nc6t intensitatea lor s fie c6t mai eficient adaptat condiiilor n care
bacteria crete i se nmulete.
1. REACGIILE CATABOLICE 7METABOLISM ENERGETIC8
De desfoar n ; faze0 descompunerea e5tracelular a substanelor organice,
absorbia substanelor, pregtirea subtanelor pentru o5idare i o5idarea substanelor.
1.1. D&s#o,/un&r&a &6$ra#&lular4 a su%s$an5&lor or9ani#& n uniti mai mici sub
aciunea unor e5oenzime. 2a bacteriile care au ca habitat omul substanele din mediul
ambiant pot fi0 proteine, acizi nucleici, colagen, lipide, mucopolizaharide, pentru
descompunerea crora bacteriile secret e*oenzime hidrolitice, care pot fi n acelai timp
i factori de patogenitate.
1.*. A%sor%5ia su%s$an5&lor din mediul e5tern, care se desfoar prin intermediul a +
mecanisme0
pasiv% 1n 5unc;ie de concentra;ia unei substan;e n interiorul i e5teriorul celulei !e50
glicerolul%/
activ% prin procesul de 5os5arilare a substan;ei ce urmeaz a fi absorbit, cu consum
energetic !e50 glucoza, pentru a fi absorbit, trebuie transformat n glucozo-*-fosfat%/
activ% prin le)area substa;ei de proteine transportoare 9permeaze:% cu consum
energetic. "stfel se absorb substane pe care celula bacterian le depoziteaz n
concentraii foarte mari fa de concentraia din mediu. &ac celula bacterian este
lipsit de o permeaz, cum este permeaza pentru lactoz, aceasta nu poate fi absorbit
nici dac bacteria, complet lipsit de lactoz, se afl ntr-o soluie cu coninut foarte mare
de lactoz.
) meniune special trebuie fcut pentru 5ier 9Fe:, necesar bacteriilor n
multiplicare. 7n esuturi Ee nu se gsete n stare liber, ci legat de proteine !transferina,
siderofilina%. Cacteriile au dezvoltat mecanisme ingenioase de absorbie a Ee prin
secre;ia sidero5orilor, substan;e chelatoare de Fe, care scot Ee din combinaiile sale,
fc6ndu-l absorbabil.
1.A. 2r&94$ir&a su%$an5&lor /&n$ru o6i(ar& se face prin reacii "e "ecarbo-ilare&
"e'aminare& fosforilare.
1.D. O6i(ar&a su%s$an5&lor se face cu eliberare de ener)ie/ are loc cu pierdere de
electroni !ioni de S,%. Dubstana care se va o5ida se numete donor, iar substana care se
reduce se numete acceptor de S,. 7n urma o5idrii rezult o substan;7 o*idat7% o
subtan;7 redus7 6i o anumit7 cantitate de ener)ie !substan energogenetic0 glucoza%.
7n funcie de acceptorul final de S, e5ist + tipuri de o6i(a5i&0
r&s/ira5ia %a#$&rian4 este procesul n care acceptorl final "e 73 este O3 atmosferic/
"onorl este o sbstan! organic!/ transferul de electroni este efectuat prin lanul
respirator/
f&r,&n$a5ia %a#$&rian4 const n procese de o5idare parial a substratului, "onorl
#i acceptorl final "e 73 fiind o sbstan! organic!/
r&s/ira5ia ana&ro%4 este procesul n care "onorl este o sbstan! organic!, iar
acceptorl final "e 73 este O3 prezent ntr-o sare anorgranic! !nitrat sau sulfat% care se
va reduce/
Observaie0 termenul de respiraie anaerob folosit de bacteriologi se refer la fermentaia
n absena ),.
1.D.1. RES2IRAGIA BACTERIAN
$entru bacteriile aerobe este legat de sistemul membranar al bacteriilor
!membrana citoplasmic, mezozomi%. 9antitatea de energie eliberat este mai mare dec6t
cea eliberat prin fermentaie, deoarece o*id7rii de substrat i urmeaz o*ida;ia de
trans5er, n care electronii sunt transportai pe lanul respirator p6n la acceptorul final de
hidrogen !o5igenul atmosferic% i 5os5orilarea o*idativ7. "stfel, la degradarea complet a
unei molecule de glucoz bacteriile obin +8 molecule de "T$.
Lan;ul respirator sau lan;ul transportorilor de electroni are n componen
citocromi, flavoproteine, ubichinone.
Ci$o#ro,ii reprezint transportori de electroni, aparin6nd unui grup conin6nd fier
!hem%. "tomul central al citocromilor este fierul ce poate trece din stare o5idat !Ee+R%
n stare redus !Ee,R%. 9oninutul bacteriilor n citocromi difer n funcie de specie i
condiiile de cretere.
Flavo/ro$&in&l& reprezint proteine ce conin o coenzim derivat din riboflavin
!C,%. =5emplu0 E"& !flavinadenindinucleotid%.
Huinon&l& reprezint substane neproteice cu funcie de transport a proteinelor n
sistemul transportor de electroni. =5emplu0 proteine cu fier i sulf !cu ,, ;, 8 atomi de
sulf instabil%.
1.D.*. FERMENTAGIA BACTERIAN folosete compu6i or)anici ca donori i
acceptori de electroni. =a se produce pe urmtoarele ci metabolice0
Gli#oli'a E,%(&n1M&-&r+of, n care dintr-o molecul de glucoz rezult , molecule
de acid piruvic i , molecule de "T$.
F&r,&n$a5ia s&#un(ar4 a a#i(ului /iruvi# !figura *%, care poate fi0
W la#$i#40
=5emple0 bacilii lactici i unii streptococi din intestin.
W al#ooli#40

=5emple0 dro'dii.
"9M& $MA:GM9 XXXXXX.XX "9M& 2"9TM9
1"& Y 1"&S
"9M& $MA:GM9 XXXX..XX.. "9=T"2&=SM&Z
"29))2 =TM2M9
1"&S
1"&
W a#i(4 ,i6$40
=5emple0 =scherichia coli i alte bacterii intestinale.
I %u$il&n19li#oli#40
=5emple0 =nterobacter, Cacillus.
I /ro/ioni#40
=5emple0 $ropionibacterium, Geillonella !anaerobi nesporulai%.
I %u$iri#-%u$anoli#40

9)
,
"9M& )("2"9=TM9 "9=TM2-9o" "9M& E)AMM9
1"&S
1"&
1"&S 1"&
"9M& $MA:GM9 "9M& 2"9TM9
"9M& D:99M1M9
1"&S
1"&
"29))2 =TM2M9
"&$ R $
"T$
"9M& "9=TM9 S
,
R 9)
,
R
"9M& $MA:GM9 "9M& "9=T)2"9TM9
1"&S 1"&
,,+ - C:TM2=1L2M9)2
1"& 1"&S
"9=T)1Z
9)
,
"9M& )("2"9=TM9 , 9)
,
!legai de enzime%
"9M& D:99M1M9
1"&S
1"&
$A)$M)1M2-9o"
"9M& ,-$A)$M)1M9
,-D:99M1M2-9o" ,-M=TM2-M"2)1M2-9o"
9o"
"9M& $MA:GM9 "9M& "9=TM9
9)
,
1"&S
1"&
1"&S
1"&
1"&S
1"&
"9M&:2 $MA:GM9 "9=TM2-9o"
9)
,
"9M& "9=TM9 "9=T)"9=TM2-9o" "9=T)1Z
MD)$A)$"1)2 9A)T)1M2-9o" "29))2 =TM2M9
C:TMAM2-9o"
"9M& C:TMAM9 C:T"1)2
9)
,

=5emple0 9lostridium.
Eigura *0 Eermentaia secundar a acidului piruvic !dup G. Clbie, 1<8;,1<8.%
C4i al$&rna$iv& (& ,&$a%oli'ar& a 9lu#o'&i0 #ntl fosfailor #i calea Entner0
*o"oroff 9pentr Pse"omonas:.
Observaie0 9ompar6nd cele dou procese, fermentaia i fosforilarea prin transport de
electroni, se poate spune c 5ermenta;ia este un proces primitiv de eliberare de ener)ie,
nt6lnit la bacteriile anaerobe care au aprut primele, n condiiile n care atmosfera
pm6ntului era lipsit de ),. &up apari;ia $8 s3au dezvoltat procesele 5os5oril7rii
o*idative.
7n glicoliz, dintr-un mol de glucoz se sintetizeaz , moli de "T$, pe c6nd prin
respiraie, prin activitatea coordonat a glicolizei, "T9 i lanului respirator, se
sintetizeaz +8 moli "T$.
1.D.A. RES2IRAGIA BACTERIAN ANAEROB
Eolosete compu6i anor)anici !nitrii, nitrai, sulfai% n transferul de electroni
prin lanul respirator !acetia se reduc%, n absena ), molecular. 7n cazul bacteriilor strict
anaerobe, $8 poate 5i chiar to*ic, datorit formrii unui radical liber reactiv, denumit
supero*id.
:nele bacterii aerobe, ca bacilul piocianic, n absena o5igenului, pot obine
energia necesar prin respiraie anaerob !de e5emplu, respiraia nitriilor%, proces numit
denitrificare.
*. REACGII INTERMEDIARE
Dunt reaciile n care ener)ia rezultat7 1n urma o*id7rii va fi transformat n
energie chimic sub form de ATP 6i tioesteri0 Acetl3CoA. =nergia stocat va fi eliberat
la nevoie pentru amorsarea unor reacii catabolice sau pentru sinteza unor molecule cu rol
structural sau funcional.
A. REACGII ANABOLICE
Dunt reacii prin care celula bacterian i sintetizeaz7 substan;e cu rol structural
9macromolecule: i 5unc;ional 9enzime:, din compui simpli, rezultai n timpul reaciilor
catabolice sau intermediare i cu consum energetic. 2a aceasta se adaug sinteza unor
substane cu rol de rezerv7 ener)etic7 9incluzii de polizaharide 6i lipide:.
$osibilitatea reaciilor de biosintez difer de la o specie la alta. "stfel, unele
bacterii sunt capabile s sintetizeze toi aminoacizii, nucleotidele, monozaharidele i
coenzimele, din substane simple. "lte bacterii sunt lipsite de unele linii metabolice, fiind
dependente de aportul din e5terior al substanelor ce se sintetizez pe aceste ci.
Cacteriile de interes medical se situeaz ntre cele dou e5treme.
Totalitatea proceselor prin care bacteria i procur, din mediul ncon'urtor,
substanele necesare supravieuirii, creterii i nmulirii reprezint nutri;ia bacterian7.
9u c6t o specie bacterian are mai multe necesiti, cu at6t ea este mai dependent de
macroorganismul parazitat.
$entru sinte'a elementelor strctrale propii #i a nor en'ime "e a"aptare la
con"iiile me"ili ambiant bacteriile necesit0 srse "e a'ot& srse "e carbon& O3& fosfor&
ioni anorganici& factori "e cre#tere.
&up sursa (& &n&r9i& folosit n respiraie bacteriile pot fi0
%a#$&rii fo$osin$&$i'an$& care utilizeaz ca surs7 ener)etic7 lumina solar7.
$igmenii fotosintetici din bacterii sunt denumii bacterioclorofil a, b, c, d. Cacteriile
mai conin i diferii pigmeni carotenoizi care determin colorarea coloniilor. "ceti
carotenoizi absorb energia 'oas, care este transferat moleculelor de bacterioclorofil
pentru a fi folosit n fotosintez.
%a#$&rii #+i,iosin$&$i'an$& !ma'oritatea bacteriilor cunoscute% folosesc drept surs7
de ener)ie substan;ele chimice din mediul de cre6tere, i anume substane anorganice0
amoniac, 1),, S,D.
&up sursa (& #ar%on, bacteriile se clasific n0
%a#$&rii (& $i/ au$o$rof0 bacterii capabile s-i sintetizeze toi metaboli;ii esen;iali,
plec6nd de la compu6i anor)anici: sursa de carbon 5iind C$8. =le pot tri independent
de materia organic, n mediul natural sau artificial de nutriie. =le sintetizeaz materie
organic din materie anorganic, contribuind esenial la circuitul substanelor n natur.
"ceste bacterii pot fi0 slfobacterii i nitrobacterii, care la r6ndul lor pot fi nitrifiante
!nitrobacter% i "enitrifiante !anaerobe%.
%a#$&rii (& $i/ +&$&ro$rof0 reprezint ma'oritatea speciilor bacteriene !toate bacteriile
din patologia uman i animal%. "ceste bacterii necesit pentru biosintezele proprii at6t
materie or)anic7, c6t i anor)anic7. Cacteriile heterotrofe pot fi0 fotoheterotrofe
!bacterii ce folosesc lumina ca surs de energie i componente organice ca surs primar
de carbon% i chimioheterotrofe !bacterii care obin necesarul de carbon i energie din
metabolismul unui singur compus organic%.
%a#$&rii ,i6o$rof&0 bacterii care folosesc ca surs de carbon at6t substan;e or)anice,
c6t i C$8.
7n ceea ce privete sursa (& a'o$0 azotul reprezint apro5imativ 18F din greutatea
uscat a bacteriilor. Ma'oritetea bacteriilor obin preferenial azotul din s7ruri de amoniu
!=scherichia coli, Dalmonella%. "lternativ, poate fi utilizat azotul or)anic !aminoacizi sau
polipeptide% sau, de ctre un numr limitat de bacterii, azotul atmos5eric ori cel din
nitri;i. 7n toate aceste cazuri ns azotul este iniial convertit la amoniac. "zotul organic
poate fi utilizat i direct prin reacii de transaminare.
&up sursa (& #ar%on i (& a'o$ pe care bacteriile le pot folosi %a#$&riil&
+&$&ro$rof& pot fi 0
bacterii care folosesc carbon "in srse organice #i a'ot moleclar atmosferic. &in
aceast categorie fac parte specii aerobe !"zotobacterr% i anaerobe !9lostridium%/
bacterii care folosesc carbon organic #i a'ot "in combinaii anorganice. 9arbonul
este furnizat de glucide, alcooli, acizi grai. "zotul rezut din amoniac, srurile de
amoniu. =5emple0 bacteriile saprofite din mediul e5tern, =scherichia coli nepatogen din
intestin.
bacterii care folosesc at(t a'otl c(t #i carbonl organic. 7n aceast categorie intr0
- bacterii saprofite din mediul e5tern, intestin, de pe suprafaa mucoaselor/
- bacterii mai pretenioase !frecvent patogene% care necesit factori de cretere, acid
nicotinic, substane comple5e din lichide organice !ascit, s6nge%. =5emple0 Crucella,
Saemophilus, Dalmonella, Dhigella.
- bacterii foarte pretenioase0 nu cultiv pe medii artificiale !e5emplu0 Treponema
pallidum% sau prezint parazitism intracelular strict !Aic4ettsii, M@coplasme,
9hlam@dii%.
&up n&#&sarul (& o6i9&n bacteriile se clasific n0
%a#$&rii s$ri#$ a&ro%&0 sunt bacterii care se dezvolt numai n prezen;a $8
atmos5eric, folosind e5clusiv respiraia aerob !), atmosferic este folosit ca acceptor
final de S,%. =5emple de astfel de bacterii0 $seudomonas aeruginosa, 9or@nebacterium
diphteriae, M@cobacterium tuberculosis, etc.
%a#$&rii s$ri#$ ana&ro%&0 bacterii care nu se dezvolt dec6t n absen;a $8, prezena
lui fiind foarte to5ic chiar la o presiune de 18
-.
atm. "ceste bacterii folosesc ca reacie
energogenetic e5clusiv fermentaia n condiii anaerobe, deci o5idaia de substrat. =le
sunt lipsite de supero5iddismutaz care transform radicalul supero5id n S,), i
catalaz, catalaz care descompune apa o5igenat. =5emple0 9lostridium, Cacteroides,
Eusobacterium.
%a#$&rii fa#ul$a$iv ana&ro%&0 bacterii care se dezvolt at=t 1n prezen;a $8% c=t 6i 1n
absen;a sa. =le folosesc respiraia aerob, fermentaia, chiar i respiraia anaerob.
=5emple0 ma'oritatea speciilor de interes medical !enterobacteriile%.
%a#$&rii ana&ro%& a&ro$ol&ran$&0 bacterii care folosesc numai 5ermenta;ia 1n
prezen;a aerului atmos5eric, fr participarea ),. =le tolereaz ), n mediu pentru c, fie
au n echipamentul enzimatic supero5iddismutaz i catalaz, fie pentru c enzimele
e5ist n mediu. =5emplu0 germenii din genul Dteptococcus.
%a#$&rii ,i#roa&rofil&0 bacterii care folosesc respiraia i fermentaia, la care se
adaug o concentra;ie mai mare de C$8 dec6t cea din atmosfer. =5emple0 genul
1eisseria, Crucella, 9amp@lobacter !necesit *-18F 9),%.
9A=#T=A=" #M M:2TM$2M9"A=" C"9T=AMM2)A
9:2TMG"A=
1. DEFINIREA TERMENILOR
Cr&$&r&a !n sensul termenului Vgro3thK din limba engleza% reprezint
au)mentarea componentelor microor)anismului !celulei bacteriene%. &e e5emplu,
creterea trectoare a volumului celular, prin e5tinderea incluziilor lipidice, nu reprezint
o VcretereK bacterian n sensul definiiei de mai sus.
Mul$i/li#ar&a este un proces la nivel de populaie bacterian consecutiv creterii,
const6nd din 1nmul;irea prin diviziune direct7, n generaii succesive, a indivizilor dintr-
o populaie de bacterii.
Cul$ivar&a se refer la toate fenomenele legate de cre6terea 6i multiplicarea
bacteriilor 1n a5ara mediului lor natural !e5tern sau intern%, prin asigurarea in vitro a
unor condiii c6t mai aproape de cele naturale, adecvate necesitilor metabolice ale
speciei respective.
9reterea i nmulirea bacteriilor este rezultatul nutri;iei 6i al metabolismului
bacterian.
Giteza de multiplicare a bacteriilor este foarte mare. D-a facut un calcul ipotetic din
care rezult c, dac la fiecare ,8 de secunde are loc o diviziune, dintr-o celul bacterian
cultivat ntr-un mediu nelimitat ar lua natere ntr-o zi 1518
,1
celule, ceea ce ar
corespunde unei mase de ;.888 de tone. 7n realitate, o asemenea rat de nmulire a
bacteriilor nu este posibil, fiind impiedicat de epuizarea substanelor nutritive i a
factorilor de cretere, pe de o parte, i de acumularea metaboliilor to5ici, pe de alt parte.
*. CONDIGII DE CRE)TERE )I MULTI2LICARE LA BACTERII
$rincipalele condiii de care depind creterea i multiplicarea bacteriilor, at6t n
mediu natural, c6t i in vitro !cultur%, sunt0 suportul nutritiv, pS-ul, temperatura,
presiunea de o5igen, presiunea ionic, etc.
*.1. SU2ORTUL NUTRITI"
"cesta este asigurat de0 prezena "onatorilor #i acceptorilor "e hi"rogen& srse "e
carbon& srse "e a'ot& pre'ena sbstanelor minerale !sulf, fosfor, activatori enzimatici -
magneziu, fier, potasiu, calciu%, factori "e cre#tere !aminoacizi, purine i pirimidine,
vitamine din grupul C, ca i vitaminele " i &, acizi grai%.
7n ceea ce privete su%s$an5&l& ,in&ral& necesare creterii i multiplicrii
bacteriilor0
fosforul din structura acizilor nucleici, a fosfolipidelor, a acizilor teichoici, a
nucleotidelor macroergice !"T$, LT$% sau coenzimele !1"&$, flavine% este asimilat ca
ion fosfat/
sulful din structura unor aminoacizi, a coenzimei " poate fi asimilat din surse variate0
comp#i organici& 73S& SO4
30
/
J
B
: Ca
*B
: M9
*B
: F&
*B
sunt activatori enzimatici/ Ee
,R
face parte din structura
citocromilor, a pero5idazelor/ Mg
,R
mpreun cu B
R
asigur funcionalitatea ribozomolor/
9a
,R
intr n structura dipicolinatului de calciu din spori. 7mpreun cu 9l
-
i 1a
R
, aceti
ioni sunt asimilai ca s!rri minerale/
,i#ronu$ri&n5ii 73n: Mn: Co: Cu8 sun$ asi9ura5i @n for,4 ,in&ral4 prin apa "e
robinet sau imprit!i ale altor ingre"iente folosite pentru prepararea mediilor de cultur
sau chiar din sticl!ria "e laborator.
*.*. TEM2ERATURA
Temperatura optim de dezvoltare a bacteriilor este cea a habitatului lor natural. 7n
funcie de aceast temperatur, bacteriile se mpart n psihro5ile, care se nmulesc optim
la ,8
8
9 dar i sub aceast temperatur, mezo5ile, cu temperatura optim cuprins ntre ,8-
;8
8
9 i termo5ile, care se nmulesc optim la peste ;.
8
9. Cacteriile mezofile sunt cele
patogene deoarece se nmulesc la temperatura organismului, fiind denumite i bacterii
VhomeotermeK.
Ba#$&rii T&,/&ra$ura
,ini,4
E
C
T&,/&ra$ura
o/$i,4
E
C
T&,/&ra$ura
,a6i,4
E
C
2)
I>ROFIL
E
8 1.-,8 +8
M&'ofil& ,-,. 18-;. +8-.8
T&r,ofil& ,.-;. $este .. *8-188
2imitele de temperatur n care aceste bacterii pot s creasc sunt ns mai mari i
variaz de la specie la specie. "stfel, gonococul i meningococul nu suport temperaturi
mai mari de 1-,
8
9 fa de temperatura optim, spre deosebire de enterobacterii, care cresc
n limite foarte largi.
#icroor)anismele sunt sensibile la temperaturile ridicate, aplica;ia practic7 a
acestui aspect fiind sterilizarea.
Temperaturile moderat sc7zute, ca, de pild, cea de R ;
8
9 din frigidere, nu distrug
bacteriile, dar opresc 1n )eneral 1nmul;irea lor prelungindu-le viabilitatea. &in acest
motiv, ma'oritatea produselor biologice sau patologice destinate e5amenului bacteriologic
se pstreaz n aceste condiii. Totui, e5ist tulpini microbiene care se nmulesc i la
temperatura frigiderului ca, de e5emplu, tulpinile criogene de $seudomonas aeruginosa,
ce se nmulesc la R .
8
9. "cest aspect trebuie luat n calcul de ctre medicul bacteriolog,
mai ales acolo unde implicaia etiologic a unui germene ntr-o infecie se bazeaz pe
criteriul numeric.
Con9&lar&a. &ac o suspensie bacterian este supus ngheului la temperaturi nu
prea mici fa de 8
8
9, cristalizarea apei determin formarea unor spaii ce conin soluii
concentrate de sruri care nu cristalizeaz dec6t la temperaturi mult mai 'oase !-,8
8
9
pentru 1a9l de e5emplu%, c6nd soluiile devin saturate i pot cristaliza. "ceste
concentraii ridicate de sruri minerale, la care se adaug cristalele de ap, vor leza
structurile bacteriene. $rin ngheare nu vor fi omor6te toate celulele unei suspensii, dar
1n)he;ul 6i dez)he;ul repetat scad 5oarte mult num7rul de bacterii viabile.
Cons&rvar&a /rin #on9&lar&& Temperatura congelatoarelor casnice !-18
8
9% nu este
destul de sczut pentru a permite conservarea bacteriilor. Temperatura optim este cea
realizat de 9), !-8
8
9% sau de azotul lichid !-188
8
9%. 9onservarea bacteriilor, a
virusurilor prin congelare este favorizat de adaosul de glicerol sau dimethilsulfo5id.
"ceti ageni chimici induc o solidificare amorf, vitroas care nlocuiete solidificarea
prin cristalizare.
*.A. 2>1UL
Cacteriile se pot dezvolta n limite lar)i de p+, cele patogene pentru om
dezvolt6ndu-se optim la un pS de ,,-,;. =5ist i e5cepii ca, de pild, bacteriile din
genul Crucella care cresc la un pS de *,8 i vibrionul holeric la pS de <,8. 2actobacilii,
prezeni n flora vaginal normal se dezvolt chiar i la un pS de +,<.
:nele bacterii modi5ic7 ele nsi, prin procesele metabolice, p+3ul mediului.
"ceast modificare poate opri nmulirea sau chiar distruge cultura. &in acest motiv,
multe medii au n compozitia lor soluii tampon care menin pS-ul n limite convenabile.
,o"ificarea "e c!tre o bacterie a p70l ni me"i poate avea valoare deosebit n
i"entificarea ni microb i poate fi sezizat prin adaugarea n mediu a unui indicator de
pS. Eoarte multe bacterii se identific biochimic prin proprietatea lor de a fermenta
diferite zaharuri. "ceast capacitate se evideniaz tocmai prin nsm6narea unei bacterii
pe mai multe medii ce conin fiecare alt zahar i un indicator de pS. 7n cazul fermentrii,
acidifierea va determina schimbarea culorii mediului.
*.D. UMIDITATEA
Apa liber7 este absolut necesar7 cre6terii 6i multiplic7rii microbilor. 1ecesarul de
ap variaz n funcie de specie. "stfel, datorit coninutului srac n ap a unor alimente
cum sunt gemul de fructe, p6inea, unele sorturi de cacaval, arahidele, etc., multiplicarea
bacteriilor este practic imposibil, n timp ce mucegaiurile se pot dezvolta foarte bine
chiar i n aceste condiii.
$entru a aprecia umiditatea, se compar coninutul n ap a vaporilor deasupra apei
curate, care se noteaza cu 1, cu coninutul n vapori deasupra mediului de cultur.
Cacteriile de interes medical au nevoie de o umiditate de 8,<8, pe c6nd ciupercile cresc i
la o umiditate de 8,88.
$rin liofili'ar& !desicare brusc la - 8
8
9%, care este o metod7 de conservare a
microbilor, se e5trage practic ntreaga ap liber din celulele bacteriene, ceea ce are ca
urmare creterea stabilitii biopolimerilor i ncetarea metabolismului. Cacteriile
liofilizate se pstreaz ani de zile.
*.C. CONCENTRAGIA DE BIOXID DE CARBON
9u toate c bacteriile de interes medical nu pot folosi bio*idul de carbon ca surs
de carbon, acesta este absolut necesar reac;iilor de carbo*ilare n biosinteza unor
substane proprii celulei bacteriene !purine, aminoacizi, pirimidine etc.%.
1ecesarul de bio5id de carbon al bacteriilor este diferit. "stfel, unele specii
!1eisseria meningitidis, 1eisseria gonorrhoeae% sunt dependente de prezena lui n
concentraii ridicate p6n la 18F n atmosfera n care se dezvolt, pe c6nd altele ca, de
e5emplu, Dtaphilococcus aureus se dezvolt n concentraia obinuit de bio5id de carbon
din atmosfer !8,88+F%, dar nu i ntr-o atmosfer complet lipsit de bio5id de carbon.
"stzi, incubarea produselor patologice din care se urmrete izolarea bacteriilor se
efectueaz n termostate de 9), !*F%, deoarece dezvoltarea lor este superioar celei din
termostatele obinuite.
*.K. ULTRASUNETELE
,ltrasunetele, cu o anumit frecven, sunt bactericide. Cacteriile i virusurile sunt
distruse de ultrasunete ntr-un interval de o or. :ltrasonarea microorganismelor se
folosete mai puin pentru sterilizare, c6t pentru a obine diferite componente bacteriene
sau virale, cum sunt0 enzime, perete celular, acizi nucleici bacterieni, n scopul cercetrii
acestora.
*.L. 2RESIUNEA >IDROSTATIC
-acteriile obinuite sunt rezistente la presiunea atmos5eric7. Eormele vegetative
sufer alterri la +88 de atm i sunt omor6te la *88 atm, presiune nt6lnit n oceane la o
ad6ncime de *888 m. 9ultivarea bacteriilor la presiuni mari induce creterea lor
filamentoas sc7z=ndu3le capacitatea de diviziune.
*.M. 2RESIUNEA OSMOTIC
-acteriile se 1nmul;esc optim pe medii izotonice, rezisten;a lor la varia;iile
presiunii osmotice fiind incomparabil mai mare dec6t cea a celulelor organismelor
superioare. "ceast rezisten se datoreaz peretelui celular. Cacteriile din genul
Mollicutes, lipsite de aciunea protectoare a peretelui celular, sunt foarte sensibile la
variaii mici ale presiunii osmotice.
7ntr-un mediu puternic hiperton, bacteriile vor pierde apa din citoplasm i vor
muri. "cest fenomen se numete plasmoliz7.
&ac presiunea osmotic a mediului este foarte sczut, apa va ptrunde n celul,
care se va umfla devenind turgescent. Moartea bacteriei se produce prin plasmoptiz7>
9reterea presiunii osmotice a unui mediu prin adaus de 1a9l sau zaharuri st la
baza conservrii unor alimente.
=5ist ns bacterii osmo5ile, dintre care cele halo5ile sunt capabile s! se
%nmleasc! %n solii hipersaline !bacteriile din genul Dtaph@lococcus i =nterococcus%.
$e baza acestei proprieti se prepar unele medii de mbogire i selective aa cum este
mediul hiperclorurat 9hapmann pentru stafilococi. "cesta conine ,.g 1a9l la 188 ml de
mediu, spre deosebire de mediile obinuite care conin doar .g[l. &intre bacteriile
osmofile menionm i pe cele zaharo5ile, care sunt capabile s! se %nmleasc! pe me"ii
c n conint mare "e glci"e !*gF%. "cest aspect este important pentru unele
medicamente, ca de pild, siropurile care, n ciuda coninutului ridicat de zaharoz, se pot
altera n urma contaminrii cu aceste bacterii.
*.N. ELECTRICITATEA
'lectricitatea sub form de cureni galvanici, cureni de 'oas sau nalt frecven,
nu a5ecteaz7 bacteriile.
&ac ns curentul electric este trecut printr-un mediu lichid, bacteriile pot fi
afectate sub aciunea unor ioni sau produi chimici rezultai n urma electrolizei.
*.1E. RADIAGIILE
*.1E.1. Ra(ia5iil& n&ioni'a$& 1 ra'&l& ul$raviol&$& 7U"8
Puterea bactericid7 a razelor luminoase devine perceptibil la o lungime de und
de ++8nm, cresc=nd pe m7sura sc7derii lun)imii de und7 a luminii :G. Timpul necesar
distrugerii microorganismelor depinde de intensitatea luminii, distana de sursa de emisie
i mediul n care se gsesc microorganismele.
#ecanismul bactericid al razelor ,. const n inducerea formrii n celula
bacterian a unor dimeri de timin7 care nterfereaz replicarea "&1. "lterrile altor
elemente structurale bacteriene sunt negli'abile.
*.1E.*. Ra(ia5iil& ioni'a$&
#ecanismul bactericid al acestor raze const n formarea n celul a unor radicali
cu via;7 scurt7 6i protoni. "ceti produi vor altera bazele azotate i legturile dintre ele.
=fectul bactericid al razelor ionizante depinde de cantitatea de energie absorbit,
temperatur, presiunea parial a o5igenului, coninutul n substane organice, prezena
unor substane protectoare !alcoolii alifatici sau substane bogate n grupri sulfhidrilice%,
specia microorganismului i coninutul n ap.
Sporii sunt 1n )eneral mai rezisten;i dec=t 5ormele ve)etative ale bacteriilor,
e5cepie fiind o bacterie nesporulat, Micrococcus radiodurans& care este cel mai rezistent
microorganism la radiaii. =l rezist la doze de ,88 de ori mai mari dec6t restul bacteriilor
datorit faptului c este echipat cu mecanisme deosebit de eficiente de reparare a
alterrilor acizilor nucleici.
A. CULTI"AREA BACTERIILOR
"a cum artam mai sus, cultivarea reprezint o5erirea unor condi;ii optime de
dezvoltare pentru anumite specii bacteriene n afara mediului e5tern sau a organismului,
adic 1n medii arti5iciale de cultur7.
&in punct de vedere al posibilitii cultivrii microorganismelor bacteriene, se
disting0 culturi bacteriene n mediu lichid i culturi bacteriene n mediu solid.
9unoaterea necesitilor nutritive ale bacteriilor este foarte important n
bacteriologia medical, deoarece st la baza preparrii mediilor de cultur destinate
izolrii diverselor specii bacteriene din produsele biologice sau patologice.
Cul$ivar&a %a#$&riilor @n s#o/ (ia9nos$i# pune n esen dou probleme0
alegerea ni me"i "e cltr! optim, care s permit izolarea tuturor bacteriilor care
ar putea fi prezente n produsul de e5aminat/
obinerea bacteriilor %n cltri pre, pentru a putea fi identificate.
3.1. CONDIII GENERALE PENTRU CULTIVAREA BACTERIILOR
:n mediu de cultur trebuie s conin ap, substane organice, minerale,
oligoelemente i factori de cretere. $entru satisfacerea acestor necesiti se utilizeaz
diferite substraturi biolo)ice nutritive comple*e care au n compoziia lor aceste
ngrediente. "stfel0
- Peptonele, care se obin prin hi"roli'! en'imatic! sa aci"! a proteinelor "e origine
animal! !de e5emplu fina de oase%. =le nu au o compoziie chimic foarte bine definit,
iar prin coninutul n peptide i aminoacizi constituie o surs universal de azot, pentru
toate bacteriile cultivabile, fiind folosite practic n prepararea tuturor mediilor de cultur.
- '*tractul de carne, ce se obine prin "eshi"ratarea "ecoctli "e carne "e vit!.
"ceasta conine cantiti importante de creatinin, 5antin, hipo5antin, acid uric, acid
adenilic, glicol, uree, glutamin ca surs de azot, precum i glicogen, he5ozofosfai, acid
lactic etc., ca surs de carbon.
- '*tractul de dro<die, care se obine prin cltivarea controlat! a "ro$"iilor i care
conine numeroase vitamine, mai ales cele din grupul C.
- Clorura de sodiu, care se adaug la mediile uzuale ntr-o concentraie de 8,<F.
$entru cultivarea bacteriilor halofile concentraia poate crete p6n la 18F.
- #ono sau polizaharidele% unii alcooli !glicerina, manitol% pot mbogi mediile,
deoarece constituie surse de carbon uor accesibile unor bacterii.
A.*. CULTI"AREA MICROBILOR 2E MEDII LIC>IDE
unui produs pe medii lichide are dezavanta'ul c nu permite ns obinerea unei
culturi proprii.
9aracterele culturale ale microbilor pe medii lichide difer. "stfel, bacteriile
aparin6nd familiei =nterobacteraceae tulbur7 uni5orm mediul, altele, ca de pild
bacteriile strict aerobe !$seudomonas, 1ocardia%, formeaz pelicule la suprafaa
mediului. "ltele formeaz a)re)ate care se dezvolt sub form de grun'i ce se depun pe
peretele eprubetei sau la fundul mediului !Dtreptococcus%. :nele bacterii secret7 1n
mediu pi)men;i di5uzabili ca de e5emplu bacilul piocianic !$s. aeruginosa%.
>&8&2& Fazele cre6terii 6i multiplic7rii bacteriilor 1n mediu lichid
&ac se cultiv o populaie bacterian n mediu lichid, se disting urmtoarele faze0
fa'a "e ;lag& fa'a "e cre#tere e-ponenial! 9logaritmic!:& fa'a staionar! #i fa'a "e
"eclin.
a. Fa'a (& <la9=
7n aceast faz, care succede imediat nsm6nrii mediului lichid cu bacterii, are
loc o ?adaptare@ a )ermenilor la condi;iile mediului respectiv. De produc, pe baza
metabolismului bacterian normal, enzime i metabolii care ating la un moment dat un
prag limit de concentraie n mediu, c6nd se declaneaz multiplicarea.
7n cazul trecerii unei populaii bacteriene de pe un mediu pe alt mediu, deosebit sub
raportul compoziiei sale, ndivizii bacterieni sunt n marea lor ma'oritate incapabili de a
crete i de a se multiplica n acest mediu. 7n acest caz, faza de VlagK reprezint perioada
necesar unor mutante din populaia bacterian pentru ca, prin multiplicarea lor, s
determine augmentarea numrului de indivizi n ntreaga populaie bacterian.
Densibilitatea bacteriilor fa de chimioterapice este crescut. 2a ma'oritatea bacteriilor
de interes medical, durata ei este n 'ur de 1[, or, iar la formele sporulate +-; ore.
%. Fa'a &6/on&n5ial4 7lo9ari$,i#48
)dat cu terminarea fazei de VlagK, multiplicarea popula;iei bacteriene se produce
la o rat nalt i anume n pro)resie )eometric70 o celul d natere prin diviziune la
dou celule fiice, care, la r6ndul lor, se divid determin6nd apariia a c6te dou noi celule
bacteriene !creterea e5ponenial a numrului de indivizi pe unitatea de volum a
mediului%. "ceast rat de multiplicare poate fi e5primat matematic prin formula0
N O NE
.$
, unde0 1 este numrul de celule n cultur la timpul t, 18 este numrul
iniial de celule n cultur, iar 4 reprezint o constant, semnific6nd rata la care logaritmul
natural al numrului de celule crete cu timpul.
$entru a nelege mai bine procesul mririi numrului de indivizi bacterieni n
cursul fazei e5poneniale, trebuie clarificat i noiunea de ?)enera;ie@. ) generaie se
e5prim prin dublarea num7rului de celule !fiind vorba de o diviziune celular binar%.
1umrul de generaii[or reflect, de fapt, corelativ, mrirea numrului de celule n
general. &eci, numrul de celule n populaie !1% crete n raport direct cu generaiile !g%,
astfel0
9 N
8 1
1 ,
, ;
+ 8
; 1*
. +,
Eaza e5ponenial continu p6n ce se produc trei fenomene0 epuizarea rezervelor
nutritive din mediu% acumularea produ6ilor to*ici rezulta;i din metabolismul activ al
)ermenilor 1n cultur7 6i dezechilibrul de concentra;ie ionic7 !cu scderea valorii pS-
ului%.
$entru bacteriile aerobe, factorul care se epuizeaz primul n cultura n mediu
lichid !vas nchis% este o-igenl. &ac se introduce aer steril continuu !metoda culturilor
continue, agitate%, populaia bacterian poate fi meninut n faza e5ponenial timp
indefinit.
&urata acestei perioade este dependent de aceleai condiii de mediu ca i faza
precedent dar i de specie. "stfel =. coli are un timp de generaie de apro5imativ 18
minute, iar M@cobacterium tuberculosis peste ,. ore. Sensibilitatea la antibiotice a
microbilor r7m=ne crescut7.
#. Fa'a s$a5ionar4
Multiplicarea bacteriilor n progresie logaritmic nu mai este posibil, rata de
1nmul;ire scade treptat p6n c6nd bacteriile trec n faza staionar. Num7rul bacteriilor
r7m=ne constant, de unde s-ar putea deduce c numrul bacteriilor rm6ne constant
deoarece ele nici nu se nmulesc i nici nu mor. 7n aceast faz, celulele nu mai cresc, ci
are loc o activitate metabolic7 endo)en7, prin care celula i sintetizeaz rezerve de
energie i produi intermediari necesari meninerii n via n noile condiii. 7ncetarea
multiplicrii n faza staionar se datoreaz n principal epuiz7rii unui 5actor nutritiv
esen;ial din mediu% numit 5actor limitant i acumul7rii unor produ6i to*ici cum sunt, de
pild, acizii organici care, prin scderea pS-ului mediului, limiteaz multiplicarea
bacteriilor. 7n aceast faz scade sensibilitatea tulpinilor la chimioterapice.
&at fiind schimbarea condiiilor de via ale bacteriilor, acestea vor prezenta
modi5ic7ri ale mor5olo)iei 6i 5iziolo)iei lor, at6t unele fa de altele, c6t i comparativ cu
faza e5ponenial. "cum, bacteriile Lram pozitive nu mai rein cristalul violet i apar
Lram negative pe frotiurile colorate.
7n faza staionar celulele con;in cantit7;i mari de polizaharide 6i lipide, substane
pe care nu le gsim n faza de multiplicare e5ponenial. 2a nceputul fazei staionare,
unele specii produc anumii metaboli;i secundari !antibiotice, colicine, e5oto5ine% cu
distribuie ta5onomic foarte riguraoas.
"ni;ierea sporo)enezei la bacteriile sporulate se petrece la sf6ritul fazei
e5poneniale sau la nceputul fazei staionare.
&urata fazei staionare este n general de c6teva ore.
(. Fa'a (& (&#lin
2a un moment dat, propor;ia de celule care mor dep76e6te rata de multiplicare a
celulelor viabile, p6n c6nd multiplicarea nceteaz complet.
$entru celula bacterian, VmoarteaK nseamn pierderea capacit7;ii de a se
reproduce !divide%. 9auzele instalrii acestei faze sunt0 acumularea de catabolii,
epuizarea rezervelor nutritive, consumul o5igenului !n cazul bacteriilor aerobe%.
1umrul de celule care mor la fiecare interval de timp poate fi apreciat indirect prin
evaluarea scderii numrului celulelor supravieuitoare, dup formula0
S O SE
1.$
, unde0 D reprezint numrul de celule supravieuitoare la timpul t, D8
reprezint numrul de celule supravieuitoare la timpul 8, iar 4 este o constant.
&eci, ca i n cazul fazei de declin, se observ o curb e5ponenial, dar, de aceast
dat, curba arat descreterea numrului de celule vii, proporional cu timpul. Eaza de
declin dureaz mai multe zile.
A.*.*. Cur%a (& #r&$&r& i @n,ul5ir& a %a#$&riilor @n #ul$uri #on$inui
96nd se urmrete obinerea unei mase mari microbiene sau a unor produi
bacterieni pentru cercetare, preparare de vaccinuri, diversele industrii !farmaceutic,
alimentar etc%, cultivarea bacteriilor se 5ace 1n sisteme deschise, n care mediul de
cultur este permanent nlocuit cu un mediu proaspt, ndeprt6ndu-se n acelai timp
masa nou format de bacterii. -acteriile vor 5i mereu 1n 5aza lo)aritmic7, curba de
nmulire av6nd un aspect liniar. 7n acest fel se obin culturile continui, pentru realizarea
crora este necesar un chimiostat sau un turbistat.
A.A. CULTI"AREA BACTERIILOR 2E MEDII SOLIDE
Mntroducerea mediilor de cultur solide a nsemnat un progres uria n tehnicile de
diagnostic, deoarece permite dezvoltarea distinct7 a microbilor% sub 5orma de colonii
izolate. ) colonie bacterian este o micropopulaie ce rezult din nmulirea unui singur
microb pe un mediu, vizibil n general cu ochiul liber.
9el mai simplu mediu solid este )eloza simpl7, ce se obine prin adugarea la
bulion a unei substane gelificabile, care de regul este geloza, un polizaharid obinut din
alga marin agar-agar. 2a acest mediu simplu se pot aduga diferite ingrediente !s6nge de
oaie, ser, ascit, e5tract de dro'die etc% pentru a putea cultiva bacteriile pretenioase.
9aracterele culturale sunt foarte importante n identificarea microbilor. =le se
apreciaz fie cu ochiul liber, fie cu a'utorul unei lupe. =lementele ce se descriu, n
general, sunt dimensiunea% 5orma% pi)mentul% consisten;a% aderen;a la mediu%
activitatea hemolitic7 i unele modi5ic7ri pe care microor)anismele le produc 1n mediul
respectiv.
9oloniile cu aspect neted, cu marginile regulate, care se suspend omogen n ser
fiziologic se numesc colonii de tip S 9smooth:, pe c6nd coloniile aceleiai specii, cu
suprafa rugoas, relief i margini neregulate i care aglutineaz spontan n ser fiziologic
- colonii de tip R 9rou)h:. 7n general, cu unele e5cepii, coloniile D aparin tulpinilor
virulente, pe c6nd cele A sunt nevirulente.
9ultivarea microbilor pe medii solide permite, de asemenea, num7r7toarea de
)ermeni ntr-un anumit produs. "cest aspect este deosebit de important deoarece n multe
infecii criteriul de implicare etiologic este numrul bacteriilor n produsul de e5aminat
!infecii urinare%.
D. ?NMULGIREA BACTERIILOR ?N ORGANISM
:rmrind curba de multiplicare a bacteriilor ntr-un mediu limitat, putem deduce
c dup ptrunderea n organism a unui mic numr de microbi, se poate produce o
infecie. :n astfel de e5emplu este meningita, n care meningococul se nmulete foarte
rapid pun6nd viaa pacientului n pericol dac nu se intervine cu un tratament
antiinfecios.
Microorganism
In
vi$ro
?n
vivo
E. #oli i S$a/+ilo#o##us
,8-+8
minute
;-* ore
Sal,on&lla
$-/+i,uriu,
+8 minute .-1, ore
M-#o%a#$&riu,
$u%&r#ulosis
,; ore c6teva zile
M-#o%a#$&riu, l&/ra& 1u se
cultiv
, sptm6ni
Tr&/on&,a /alli(u, 1u se
cultiv
+8 ore
!modificat dup Aoitt, 1<<;%
$e de alt parte, ns, nu toate bacteriile se divid repede. Cacilul tuberculos, de
pild, al crui timp de generaie este de ,; ore, se va nmuli lent i va produce o infecie
cu evoluie insidioas, cronic.
Cn or)anism% cre6terea 6i multiplicarea bacteriilor este diferit de multiplicarea in
vitro, fiind stressat7 de necesit7;i nutritive !prin competiie cu flora normal% i prin
mecanismele de ap7rare antiin5ec;ioas7. 9ondiiile pe care microorganismele le
nt6lnesc n organism le selecteaz pe acelea care cresc n anumite limite de temperatur,
osmolaritate i pS.
"genii infecioi pe care i gsim numai n organismele infectate vor supravieui in
vitro numai n condiiile de temperatur, osmolaritate i pS apropiate organismului
nostru.
Microorganismele care au i alt habitat dec6t omul cresc n limite mai largi,
necesitile nutritive ale unui microb reflect6nd, n general, habitatul lui. "stfel,
gonococii, care triesc aproape numai n organismul uman, au pretenii nutritive mai mari
necesit6nd pentru cultivarea in vitro medii speciale, pe c6nd =. coli, $seudomonas
aeruginosa i alte specii, care supravieuiesc frecvent n mediul ncon'urtor, numai medii
minimale.
2a aspectele menionate se adaug habitatul 1n or)anism al a)en;ilor in5ec;io6i.
"stfel, bacteriile cu +a%i$a$ &6$ra#&lular sunt e5puse acinii anticorpilor&
complementli& fagocito'ei, spre deosebire de %a#$&riil& #& s& @n,ul5&s# in$ra#&lular i
care sunt prote$ate "e acinea acestor factori #i scap! neori spravegherii
imnologice.
Cacteriile dezvolt mecanisme adaptative care s ocoleasc barierele ce se opun
nmulirii lor. $recizm c i n condiiile n care multiplicarea bacteriilor este oprit,
simpla lor prezen n organism poate constitui un permanent stimul imunologic cu
urmri benefice sau dimpotriv, duntoare.Multe lichide se folosesc cel mai adesea
pentru 1nmul;irea unor microbi care se gsesc n numr mic ntr-un anumit produs. 9el
mai simplu mediu folosit n laboratorul de bacteriologie este bulionul care se prepar din
decoct de carne de vac, pepton i clorur de sodiu. 9ultivarea
L=1=TM9" C"9T=AM"1Z
Er&(i$a$&a reprezint nsuirea general a tuturor vieuitoarelor de a transmite
caracterele speci5ice speciei la urma6i.
"aria%ili$a$&a reprezint modi5icarea zestrei ereditare a bacteriilor, ceea ce d natere
unor tulpini bacteriene noi, care prin virulen i rezistena la chimioterapice, se
adapteaz mai bine condiiilor de mediu i nlocuiesc bacteriile mai puin adaptabile.
EREDITATEA LA BACTERII
Suportul material al eredit7;ii
Caracterele unei bacterii sunt eter!inate "enetic. E#$ri!area
!ani%est& a acest'r caractere c'nstituie fenotipul.
Or)a%iar#a $at#rialului )#%#tic la bact#rii
Lenomul bacterian este alctuit din repliconi, formaini genetice ce se pot replica
in"epen"ent0
0 cromo'oml bacterian/
- elemente genetice e-tracromo'omiale !plasmide/ genomul bacteriofagilor%/
- elemente genetice transpo'abile !fragmente de inserie i transpozonii-Tn%.
2& CR$#$/$#,L -ACT'R"AN
Ma'oritatea genelor bacteriene se afl n cromozomul bacterian haploid, care
codi5ic7 in5orma;iile absolut necesare supravie;uirii speciei n condiii normale.
9romozomol de =scherichia coli este format din0
o molecul circular dublu spiralat de "&1 ce reprezint 88F din greutatea lui/
o component proteic0 "A1-polimeraza !reprezint 18F din greutatea sa%/
"A1m i "A1r n curs de sintetizare !18F din greutatea sa%.
*. ELEMENTE GENETICE EXTRACROMO3OMIALE
"ceste elemente genetice sunt reprezentate de bacteriofagi i plasmide.
*.1. 2LASMIDELE
Dunt 5orma;iuni )enetice autonome% e*tracromozomiale& libere n citoplasm,
reprezentate de molecule circulare de "&1, care se replic7 independent de cromozom.
&enumirea lor a fost dat n 1<., de ctre 2ederberg. Mmportana lor practic a fost
evideniat n 1<*+ de ctre Uatanabe, care a demonstrat posibilitatea transmiterii prin
plasmide a rezistenei la antibiotice a bacteriilor.
$lasmidele pot fi0
O #onPu9a$iv&0 plasmi"ele care se pot transfera singre la alte bacterii !e5. plasmida
de rezisten la antibiotice - plasmidul A%/
O n&#onPu9a$iv&0 plasmi"ele care n pot p!r!si ele singre bacteria de origine, ci
numai prin interme"il ni alt plasmi" con$gativ sa a ni bacteriofag !e5. plasmidul
ce codific secreia de -lactamaz la stafilococul aureu%/
O &/iso,i0 plasmi"ele care se pot integra 9prin recombinare: %n cromo'oml bacterian,
pierz6ndu-i astfel autonomia de replicare !e5. factorul de se5 E - plasmidul E - factor de
fertilitate%.
(eterminan;ii )enetici de la nivelul plasmidelor sunt0 esen;iali !codific
informaiile legate de replicarea autonom% i accesorii !care codific caractere fenotipice
neeseniale supravieuirii celulei bacteriene n condiii naturale%. =5emple de determinani
genetici accesorii0 gene de transfer !tra%/ gene de secreie a unor to5ine/ gene de rezisten
la antibiotice !factor A%/ gene de rezisten la unii ioni i compui organo-metalici/ gene
pentru secreia colicinelor !factor col%/ gene de metabolizare a unor substraturi.
:nele plasmide nu au efect manifest fenotipic. "cestea sunt plasmi"ele criptice.
Plasmide importante pentru practica medical70 plasmidele de virulen, plasmidul
care confer bacteriei rezisten la antibiotice !plasmidul A%, plasmidul E.
2las,i(&l& (& virul&n540 au determinani genetici ce determin sinteza unor factori
de virulen la bacterii. =5emple0 secreia "e enteroto-in! !termolabil i termostabil% la
=scherichia coli/ factori "e coloni'are la =scherichia coli/ hemoli'ina !stafilococul aureu,
streptococul faecalis, =schirichia coli %/ e-foliatina la stafilococul aureu/ inva'ivitatea la
Dhigella.
2las,i(&l& (& r&'is$&n54 la #+i,io$&ra/i#& 1R10 sunt molecule circulare de "&1, ce
conin , regiuni0 genele care co"ific! re'istena la antibiotice - BR@, unice sau multiple,
i genele care confer! plasmi"li capacitatea "e a se transfera -BFTR@. Aezistena de
natur plasmidic este nt6lnit n proporie de peste <8F la tulpinile din spital
!=scherichia coli, Dhigella, Dalmonella, $roteus%.
2las,i(ul F 7/las,i(ul (& s&6: fa#$orul (& f&r$ili$a$&8 conine genele de transfer
tra. $lasmidul E se poate transmite, prin con'ugare, altor celule bacteriene. =l se poate
integra n cromozomul bacterian put6nd media trans5erul de )ene cromozomiale de la o
celul bacterian donor la receptor.
7n funcie de factorul E bacteriile se mpart n0
- %a#$&ria F
1
0 lipsite de factor E !celule femele, receptoare de material genetic%/
- %a#$&ria F
B
0 masculine, au factor E/ sunt celule donatoare/
- %a#$&ria >fr. !high freJuenc@ of recombination%0 au factorul E integrat n cromozom/
sunt celule masculine/
- %a#$&ria F
Q
0 au factorul E
R
ca plasmid autonom, dup ce acesta a fost integrat n
cromozom i l-a prsit rup6nd un fragment "&1 din cromozom/ sunt celule donoare
masculine.
"ARIABILITATEA LA BACTERII
Cacteriile respect aceleai legi ale ereditii, unitare lumii vii, cu unele
particulariti dictate de organizraea materialului genetic. "stfel, n timpul diviziunii
succesive, toi "escen"enii nei bacterii snt i"entici %ntre ei #i i"entici c cella "in
care provin.
Gariabilitatea la bacterii poate fi e5plicat prin0
O varia5ia f&no$i/i#40 reprezint schimbarea nor %ns#iri bacteriene ca adaptare la
condiiile mediului ncon'urtor, f!r! s! intervin! vreo mo"ificare %n genoml bacterian/
O varia5ia 9&no$i/i#40 rezult din mo"ificarea genomli.
7n 1<;+ s-a dovedit faptul c modificrile proprietilor unei populaii bacteriene
sunt rezultatul unor variaii rare la un numr mic de celule care se selecteaz i dau
natere unei populaii noi.
Gariabilitatea la bacterii se realizeaz prin0 mutaii, transfer de material genetic i
transpoziie.
2& #,TAD"A
Mutaia reprezint modi5icarea spontan7 a )enomului bacterian, modificare ce
const n schimbarea secvenei de nucleotide dintr-o gen. =le pot fi0 punctiforme,
inversii, deleii, inserii, mutaii secundare.
1.1. Mu$a5iil& /un#$ifor,& afectea'! n singr ncleoi" n cadrul unei gene i snt
reversibile. 9onsecine0
- %nlocirea ni co"on c altl duce la nlocuirea unui aminoacid cu altul n structura
unui polipeptid. "ceste mutaii sunt numite Bmuta;ii 1n sens )re6it@/
- apariia ni co"on nonsens. ,taia nonsens mpiedic sinteza n continuare a unui
polipeptid, iar dac ea se produce la nceputul genei ce codific un polipeptid se numete
muta;ie polar7 i acesta nu se va mai sintetiza deloc.
1.*. Ins&r5ia i (&l&5ia nseamn a"!garea& respectiv pier"erea a 3 p(n! la ste sa
chiar mii "e ncleoti"e, procesul fiind ireversibil. "cest tip de mutaie duce la
modificarea important a secvenei de aminoacizi, fiind denumit Bmuta;ie cu schimbare
de proiect@.
1.A. Mu$a5ii s&#un(ar& sunt de , feluri0 muta;ii reverse, care restabilesc o secven
nucleotidic ce s-a modificat i muta;ii supresoare, ce permit e5primarea funciei
anterioare a unei gene care a suferit o mutaie, fr restabilirea codonilor iniiali. "ceasta
datorit sintezei unui "A1t care HtieK s citeasc un codon nonsens.
Rata de muta;ie reprezint raportul dintre frecvena i unitatea de timp. =ste rar i
variaz de le gen la gen ntre 18
-*
i 18
-18
.
Consecin;ele muta;iilor duc la apari;ia unor indivizi cu caractere noi, cum ar fi0
- re'istena la chimioterapice/
- strctr! antigenic! mo"ificat!/
- pier"erea nor receptori specifici pentr bacteriofagi/
- pier"erea capacit!ii "e sinte'! a ni metabolit.
&in punct de vedere medical intereseaz n mod deosebit muta;ia spre
chimiorezisten;7, care se poate produce0
- "intr0o "at! 0 one step !bacteria devine rezistent brusc, Hpeste noapteK, la un
antibiotic%/
- %n mai mlte etape 0 mlti step !se produc mutaii multiple, succesive, p6n ia
natere o mutant rezistent la concentraii crescute de antibiotic%.
Mutaiile naturale sunt rare. Mutaiile induse sunt determinate de ageni mutageni0
radiaii (, :G, derivai acridinici, ageni alchilani. "ceti ageni selecteaz mutanta
pentru ca aceasta s se transforme ntr-o populaie bacterian cu proprieti noi, pot duce
la Hpierderea integralK a unui plasmid, printr-o modificare ce produce deficiene ale
mecanismului de replicare, astfel nc6t plasmidele nu vor mai fi HmoteniteK de celulele
fiice.
2. TRANSFERUL DE MATERIAL ENETIC
De realizeaz ntre , celule bacteriene, una denumit donor, cealalt receptor, prin
procese ca0 transformarea& trans"cia& con$garea.
*.1. TRANSFORMAREA
Aeprezint trans5erul de material )enetic de la o celul7 donor la una receptor%
sub 5orm7 de A(N pur, eliberat prin liza celulei donor sau prin e5tracie chimic.
*.*. TRANSDUCGIA
Aeprezint un trans5er de )ene cromozomiale de la o celul bacterian la alta,
mediat de bacterio5a)i !figura ,%.
:nii bacteriofagi sunt capabili s transfere orice gen bacterian !transducie
generalizat% sau pot transfera numai anumite gene !transducie specializat%.
Eigura ,0 Transducia !dup Murra@, &re3, Boba@ashi, 1<<8%
Trans(u#5ia 9&n&rali'a$4 este mediat de 5a)i litici, care, dup ptrunderea n celula
bacterian, se multiplic i determin7 liza celulei )azd7.
7n timpul lizei celulei bacteriene cromozomul acesteia se 5ra)menteaz7. De poate
nt6mpla ca unul dintre aceste fragmente, cu o dimensiune apropiat de cea a genomului
fagic, s se integreze n capsula bacteriofagului, n locul genomului fagic.
"ceti bacteriofagi sunt defectivi i nu se vor mai putea replica, dar pot ptrunde n
alte celule bacteriene, in'ect6ndu-le "&1, ce provine din cel al celulei donoare. A(N se
va inte)ra 1n cromozomul celulei receptoare prin recombinare, rezult6nd caractere noi
ca mo"ific!ri patogenice bacteriene& re'isten! la chimioterapice.
Trans(u#5i& s/&#iali'a$4 este mediat de 5a)ii tempera;i.
&up ptrunderea n celula bacterian a "&1 bacteriofagului temperat, A(N
su5er7 un proces de circularizare dup care se inser7 1n cromozom prin recombinare
sub form de pro5a) !pe baza homologiei ntre 18 perechi de baze ale "&1 fagic i
bacterian%. $rofagul devine parte integrant a cromozomului bacterian, se va replica odat
cu acesta, deoarece este supus unui proces de represie din partea genomului gazd.
*.A. CONRUGAREA
Aeprezint trans5erul de material )enetic de la o bacterie donoare la una
receptoare printr3un proces de 1mperechere, ce se realizeaz prin contactul direct dintre
cele , celule. "stfel se pot transmite plasmide i gene cromozomiale !prin intermediul
factorului E
R
%.
"9\M:1=" "L=1\M2)A EMPM9M, 9SMMM9M #M CM)2)LM9M
ASUPRA BACTERIILOR
('F"N"R'A T'R#'N"L$R
$entru nelegerea mai clar a aciunii unor ageni fizici i chimici asupra
bacteriilor, se impune mai nt6i definirea unor noiuni.
:n a9&n$ %a#$&rios$a$i# este acela care are proprietatea "e a stopa mltiplicarea
bacteriilor. Multiplicarea reapare dup ndeprtarea agentului respectiv.
:n a9&n$ %a#$&ri#i( are proprietatea "e a omor% 9inactiva "efinitiv: celula
bacterian, procesul fiind ireversibil0 chiar dup ndeprtarea agentului, nu se mai
produce multiplicarea bacterian. 7n acest caz, este vorba de liza celulei bacteriene sau,
mai rar, de pstrarea intact a morfologiei celulare, dar cu oprirea funciilor cardinale ale
celulei.
S$&rili'ar&a reprezint acinea prin care se obine sprimarea oric!rei flore
microbacteriene.
D&'inf&#$an$ul este o sbstan! 9agent: folosit! pentr inactivarea
microorganismelor "e pe nele sprafee !mese, podele%, dar care, datorit to5icitii sale
marcate, nu poate fi aplicat n esuturi umane.
D&'inf&#5ia este procesl "e inactivare a microorganismelor "e pe sprafee
!VobiecteK neanimate%.
An$is&/sia const n aplicarea nor sbstane bactericide sau bacteriostatice %n
scopl "e a omor% sa inhiba "e'voltarea florei patogene %n pl!gi.
As&/sia cuprinde toate m!srile care impie"ic! contaminarea c ageni infecio#i a
nei pl!gi.
Cons&rvar&a reprezint prevenirea alter!rii prin ageni microbieni ai nor
pro"se "egra"abile cum sunt alimentele sau medicamentele.
ACGIUNEA AGENGILOR FI3ICI ASU2RA BACTERIILOR
&intre cei mai imoprtani ageni fizici care pot influena viabilitatea i puterea de
multiplicare a bacteriilor, menionm0 cldura, uscciunea, !desicarea%, presiunea
mecanic i osmotic, radiaiile, electricitatea etc.
1. CLDURA
Temperaturile ridicate !cldura% prezint n general !cu e5cepia grupului restr6ns
al bacteriilor termofile% o ac;iune bactericid7. Temperaturile 'oase sunt mai puin nocive,
cele mai multe specii bacteriene rezist6nd un timp n stare latent, fr multiplicare
!Vhibernare bacterianK%. 7n funcie de temperatura optim de dezvoltare, bacteriile se
mpart n0 mezo5ile !+
8
9%/ crio5ile sau psihro5ile !,.-+8
8
9 sau mai puin%/ termo5ile !..-
*.
8
9%.
9ldura acioneaz difereniat asupra formelor vegetative i, respectiv, asupra
sporilor bacterieni. "stfel, asupra formelor vegetative, temperatura de 188
8
9, realizeaz
un efect bactericid complet n ,-+ minute, pe c6nd sporii rezist chiar 1. minute la
temperatura de 1,8
8
9. Trebuie precizat faptul c e5ist o corelaie temperatr!0timp, n
ceea ce privete efectl sterili'ant.
Aezistena la aciunea cldurii a diferitelor specii bacteriene este variabil i
anume0
a. For,& v&9&$a$iv& !e5emplu0 M@cobacterium tuberculosis%.
Ti,/ T&,/&ra$ura
+8 minute .8
8
9
,8 minute .<
8
9
, minute *.
8
9
%. S/ori. 7n ceea ce privete timpul de distrucie prin #4l(ur4, se pot descrie urmtoarele
diferene de specie0
S2ECIE TIM2 DE DISTRUCGIE 7MINUTE8
188
8
9 18.
8
9 118
8
9 11.
8
9 1,8
8
9 1+8
8
9
Cacillus
anthracis
,-1. .-18
9lostridiu
m tetani
.-<8 .-,.
9lostridiu
m
perfringen
s
.-;. .-, 18-1. ; 1
9lostridiu
m
botulinum
+88-
.+8
;8-
1,8
+,-<8 18-;8 ;-,8
9lostridiu
m
sporogene
s
1.8 ;. 1,
Cacterii
din sol
Mai
multe
ore
;,8 1,8 1. *-+8 1,.-18
7n tabelul de mai 'os redm corelaia ntre timpul de distrucie prin c!l"r! scat!
#i temperatr!, pentru diferitele specii bacteriene aflate n forma sporulat0
(PECIE
TIM2 DE DISTRUCTIE 7MINUTE8
1,8
8
9
1+8
8
9
1;8
8
9 1.8
8
9 1*8
8
9 18
8
9 188
8
9
Cacillus
anthracis
>188 *8-
1,8
<-<8 +
9lostridiu
m
botulinum
1,8 *8 1.-*8 ,. ,8-,. 18-1. .-18
9lostridiu .8 1.- .
m
perfringens
+.
9lostridiu
m tetani
,8-
;8
.-1. +8 1, . 1
Cacterii
din sol
188 +8-<8 1.-*8 1.
$entru a aprecia eficiena sterilizrii prin cldur, se folosesc urmtorii parametrii0
- ?timp de moarte termic7@0 reprezint cel mai scurt interval de timp necesar inactivrii
unei suspensii bacteriene la o anumit temperatur i n anumite condiii.
3 ?timp de reducere decimal7@ 9valoarea ?(@:0 reprezint intervalul de timp !n minute%
necesar reducerii numrului de celule vii cu <8F din valoarea iniial !cu < log 18 %.
2&2& ST'R"L"/AR'A PR"N CEL(,RE ,SCATE
9ldura uscat omoar microorganismele prin o*idarea distructiv7 a
componentelor celulare. 9ei mai rezisteni spori sunt distrui de cldura uscat la 1*8
8
9,
timp de *8 minute. 9ldura uscat de 188
8
9 distruge n *8 de minute bacteriile care sunt
omor6te prin cldur umed la *8
8
9 n +8 minute. Dporii fungilor sunt distrui n *8 de
minute la 11.
8
9, iar cei bacterieni la temperaturi cuprinse ntre 1,8-1*8
8
9. 7n laboratorul
de microbiologie se utilizeaz urmtoarele tehnici de sterilizare0 nclzirea la rou,
flambarea, sterilizarea la pupinel i sterilizarea cu raze infraroii.
- ?n#4l'ir&a la rou @n fla#ar4 a obiectelor se aplic anselor bacteriologice n laboratorul
de microbiologie.
1 Fla,%ar&a 7$r&#&r&a /rin fla#ar4 /&n$ru #;$&va s&#un(&8 se aplic g(tli
baloanelor& eprbetelor dup deschidere i nainte de nchiderea lor, pipetelor nainte de
utilizare pentru a preveni contaminarea cu germenii din aer. De mai sterilizeaz prin
flambare instrmente "e mic! chirrgie, dup ce se stropesc cu alcool, dar temperatura
produs nu este suficient de nalt pentru a asigura o sterilizare optim.
1 S$&rili'ar&a la /u/in&l. $upinelul sau cuptorul cu aer cald este o cutie metalic cu
perei dubli ntre care se gsete un strat de azbest care mpiedic pierderile de cldur.
Mai este prevzut cu o surs de cldur care este energia electric i un termoregulator. 7n
interior pupinelul este prevzut cu rafturi pentru obiectele de sterilizat. Temperatura de
sterilizare la pupinel este de 2F4
4
C timp de 2 or7 sau de 2G4
4
C timp de A de or7. 2a
pupinel se sterilizeaz ntreaga sticl!rie "e laborator, instrumentarul de stomatologie,
seringi f!r! arm!tr! metalic!& p"re& leiri etc. $upinelul nu trebuie s fie
suprancrcat, pentru ca aerul s poat circula nestingherit printre obiectele de sterilizat.
1 S$&rili'ar& #u ra'& infraroii este folosit pentru sterili'area seringilor f!r! arm!tr!
metalic! la o temperatr! "e .)/
/
C. Dterilizarea se poate efectua i la ,88
8
9 n vid,
aplic6ndu-se instrumentelor chirurgicale.
2&8& ST'R"L"/AR'A PR"N CEL(,RE ,#'(E
C7ldura umed7 este mai eficient dec6t cldura uscat, distru)=nd bacteriile la o
temperatur7 mai sc7zut7 6i 1n timp mai scurt. Eormele vegetative ale ma'oritii
bacteriilor, fungilor i virusurilor animale sunt omor6te de cldura umed n 18 minute la
temperaturi cuprinse ntre .8
8
9 !1eisseria gonorrhoeae% i *.
8
9 !Dtaphilococcus aureus%.
) susceptibilitate deosebit fa de cldur o prezinta Treponema pallidum, care este
distrus n 18 minute la ;+
8
9. Aezisten ma5im la cldura umed o are, ns, ?acills
stearothermophyls, a crui form vegetativ se poate multiplica la 88
8
9. ) parte din
virsrile animale a o re'isten! cresct! fa! "e c!l"ra me"!, ca, de pild, virsl
poliomielitic care este inactivat la *8
8
9 dup +8 de minute i virsl hepatitei ? care,
dac se afl n ser, rezist 18 ore la *8
8
9. Muli bacteriofagi au o rezisten mai mare la
cldura umed dec6t bacteria gazd, aceasta fiind distrus la *8
8
9 n 1.-+8 de minute, iar
bacteriofagul la temperaturi cuprinse ntre *.-88
8
9.
Formele sporulate ale actinomicetelor, ciupercilor i a fungilor sunt mai rezistente
dec=t 5ormele ve)etative, dar nu at6t de rezistente ca i sporii bacterieni.
Rezisten;a sporilor bacterieni variaz7 la di5erite specii, dar chiar i ntre tulpinile
aceleiai specii. "stfel, ma'oritatea sporilor de 9l. tetani sunt distrui prin fierbere la
188
8
9 n 18 minute, dar s-au semnalat tulpini ai cror spori rezist la fiebere 1-+ ore,
fiind cei mai rezisteni patogeni ce pot infecta o plag. Aezistena lor determin
standardele minime pentru sterilizarea chirur)ical7H 24 minute la 282
4
C sau >4 de
minute la 22I
4
C fr a socoti timpul de nclzire. :nii spori de 9l. botulinum rezist la
fierbere la un pS de p6n la 8 ore, iar la autoclavare 18-;8 minute la 11.
8
9.
$mor=rea microor)anismelor prin c7ldur7 umed7 se produce prin coa)ularea
proteinelor structurale 6i inactivarea enzimelor, cu participarea apei. 9ei mai rezisteni
spori sunt distrui prin e5punere la cldur umed la 1,1
8
9 timp de +8 de minute.
1 Fi&r%&r&a este de fapt o metod de dezinfecie deoarece ea n "istrge toate formele
sporlate. De efectueaz la 188
8
9 timp de ] de or i se aplic siringilor #i
instrmentelor "e mic! chirrgie atunci c6nd nu este posibil alt metod. Eierberea se
mai folosete n epidemii la sterili'area apei.
1 2as$&uri'ar&a a fost introdus de $asteur pentru conservarea vinului, fiind utilizat i
acum pentru sterilizarea unor alimente lichide care nu suport temperaturi prea ridicate
!lapte, bere, sucuri de fructe%. Metoda const n nclzirea lichidului0 la *,
8
9 pentru +8 de
minute !pasteri'are $oas!%, la 1
8
9 timp de 1. minute !pasteri'are me"ie%, la 88-8.
8
9
timp de +-. minute !pasteri'are %nalt! % sau introducerea unor vapori filani la o
temperatur de 1+8-1.8
8
9 sub presiune pentru c6teva secunde !ltrapasteri'are%.
$asteurizarea este o metod eficient deoarece bacteriile patogene care se pot dezvolta n
lapte !M@cobacteium tuberculosis, Dalmonella, Dtreptococcus i Crucella% nu sunt
bacterii sporulate, numrul lor reduc6ndu-se dup pasteurizare cu <-<<F. 9o5iella
burnetii nu este distrus prin pasteurizare 'oas.
1 T-n(ali'ar&a const n 1nc7lzirea produsului de sterilizat > zile la r=nd% 1n baie de ap7
la IF3244
4
C c=te o or7. Temperatura se alege n funcie de produsul de sterilizat. Metoda
se aplic lichidelor care nu suport temperaturi ridicate, ca de e5emplu0 vaccinri& me"ii
"e cltr! ce conin 'aharri %n concentraie mare& proteine& gelatin! etc. Eormele
vegetative sunt distruse n prima zi, iar sporii se transform n forme vegetative ce vor fi
distruse zilele urmtoare. Aeamintim, ns, c sporii bacteriilor termofile n se "istrg
prin aceast! meto"!.
1 Au$o#lavar&a este metoda folosit pentru instrmentarl "e chirrgie iar n
laboratoarele de microbiologie pentru sterilizarea me"iilor "e cltr! i a materialli
infecios. Dterilizarea are loc ntr-o atmosfer saturat de vapori de ap la 284
4
C% la o
presiune de 2 atm% timp de >4 de minute, n aparate speciale numite autoclave.
*. USCCIUNEA 7DESICAREA8
Densibilitatea bacteriilor la uscciune este diferit, n funcie de specie i chiar
tulpin. 7n general, bacteriile sunt rezistente la usc7ciune 1n 5orma sporulat7 i, pentru
unele specii, chiar n form vegetativ !M@cobacterium tuberculosis persist n picturi
de sput uscat i la ntuneric%.
Aezistena relativ a bacteriilor la uscciune, precum i la temperaturile sczute, a
stat la baza punerii la punct a uneia dintre cele mai folosite metode pentru conservarea
microorganismelor.
Liofili'ar&a. =ste vorba de uscarea 9desicarea: treptat7 1n vid% la temperaturi
5oarte <oase !-;8
8
9 p6n la -8
8
9%. 7n stare liofilizat, bacteriile pot fi conservate la
temperatura camerei mult timp !ani%.
A. 2RESIUNEA MECANIC
Ma'oritatea bacteriilor rezist7 la presiuni 5oarte mari !+.888 atm, formele
vegetative/ 1,.888-,8.888 atm, formele sporulate%.
D. 2RESIUNEA OSMOTIC
Cariera osmotic a celulei bacteriene este membrana citoplasmatic. 7n mediu
hiperton !cu concentraie nalt de ioni i macromolecule organice% are loc procesul de
/las,oli'40 apa din celul iese n mediu, citoplasma se retract, odat cu membrana
citoplasmatic, n timp ce peretele celular, rigid, nu-i modific forma. 7n mediu hipoton
!cu concentraie sczut de ioni i molecule organice% se produce fenomenul invers, de
/las,o/$i'40 ptrunderea apei n celula bacterian, care devine turgescent, procesul
evolu6nd p6n la li'a cellar! !mai ales dac, n prealabil, peretele celular, rigid i
rezistent, a fost ndeprtat prin lizozim -protopla6ti- sau prin antibiotice inhibitorii ale
sintezei acesteia -s5eropla6ti%.
C. RADIAGIILE
Aadiaiile se pot clasifica n0 radiaii ionizante !(, , catodice% i n radiaii
ultraviolete.
I&2& RA("AD""L' "$N"/ANT'
9ategoriile de radiaii ionizante sunt urmtoarele0
- Ra(ia5iil& X sunt produse de generatoare speciale/ au lungimea de und T8,1nm-
;8nm.
- Ra(ia5iil& sunt produse de izotopi !cobalt *8%/ au lungimea de und T8,1nm-
18nm.
- Ra(ia5iil& #a$o(i#& sunt produse n dispozitive speciale, numite acceleratori de
electroni/ sunt compuse dintr-un flu5 de electroni cu vitez foarte mare !VacceleraiK%/
puterea lor de penetrare este de peste 1518
*
voli.
Ra"iaiile ioni'ante a ca mecanisme de ac;iune "enatrarea proteinelor& aci'ilor
ncleici cellari #i formarea "e ra"icali liberi #i pero-i'i>
(enaturarea proteinelor 6i acizilor nucleici celulari se realizeaz prin puterea mare
de penetrare a acestor radiaii cu "e'integrarea strctrilor primare& secn"are #i
teriare ale proteinelor !mai ales la nivelul gruprilor polare%, cu ;rperea lanrilor
aci'ilor ncleici !"A1 monocaternar prezint anse de refacere, pe c6nd, "&1 bicatenar
sufer o degradare definitiv%.
'5ectul de ionizare se realizeaz prin formarea "e ra"icali liberi !)S i S,)% n apa
mediului, prin flu5 fotonic cu energie nalt cu efect letal i formarea "e pero-i'i !A-)-
)-A%, ce acioneaz ca ageni o5idani.
C.*. RADIAGIILE ULTRA"IOLETE
Ra"iaiile ltraviolete pre'int! o lngime "e n"a @4/nm0AB/nm& iar activitatea
lor bacterian! ma-im! este "e 3C/nm> Aceste ra"iaii se absorb selectiv la nivell
aci'ilor ncleici& %n"eosebi A*+& "etermin(n" for,ar&a (i,&rilor /iri,i(ini#i $o6i#i>
Modificrile induse n celulele bacteriene prin razele ultraviolete sunt reversibile& prin
procesele "e fotoreactivare #i restarare la %ntneric>
Fo$or&a#$ivar&a0 radiaiile luminoase pot activa o enzim celular care cliveaz
dimerii pirimidinici to5ici.
R&s$aurar&a la @n$un&ri# 7<(ar. r&/air=8 const n faptul c, la ntuneric, are loc
aciunea succesiv a trei enzime !o en"onclea'! - care desprinde dimerul pirimidinic de
pe "&1/ o e-onclea'! - care formeaz VlacuneK de-a lungul moleculei alterate de
"&1, prin clivare secvenial/ o A*+0polimera'! - care umple lacunele, folosind ca
matrice poriunea omolog din lanul geamn de "&1, nealterat. $rin fotoreactivare i
restaurare la ntuneric, se selecteaz indivizi bacterieni rezisteni la efectul radiaiilor.
Aplicaiile ra"iaiilor ltraviolete n laboratorul de microbiologie se refer n
principal la folosirea lor ca ageni sterili'ani. "stfel, radiaiile ultraviolete se utilizeaz
pentru sterilizarea ncperilor, bo5elor, hotelor, slilor de operaii, meselor de laborator,
etc.
K. ULTRASUNETELE
:ltrasunetele reprezint vibraii c frecven! mai mare "ec(t cea a n"elor sonore
!peste 1*.888 hertzi%. =le se obin cu a'utorul cristalelor piezoelectrice. :ltrasunetele au
un puternic e5ect bactericid, produc6nd relativ rapid distrucia celulei bacteriene. &e
altfel, una dintre cele mai eficiente metode de dezintegrare a corpilor microbieni - etapa
preliminar analizei chimice a bacteriilor n laborator - este ultrasonarea suspensiei
bacteriene.
L. ELECTRICITATEA
9urentul electric, ca atare, e5ercit ac;iuni minore asupra bacteriilor. 7n schimb, el
poate influena compoziia fizico-chimic a mediului, cu efecte secundare bactericide0
creterea temperaturii peste valorile optime desfurrii normale a metabolismului
bacterian/ ionizarea clorului din compuii clorurai/ formarea de ozon.
M. FILTRAREA
Sterilizarea anumitor lichide care conin substane alterabile prin cldur, se face
cu a'utorul filtrelor. 2ichidele termolabile sunt trecute prin filtre sterilizante, care rein
microorganismele, permi6nd trecerea lichidului astfel sterilizat.
Eiltrele folosite sunt de mai multe feluri, n funcie de compoziie0
3 5iltre Chamberlan din porelan, numite i bu'ii, n form de lum6nare/
3 5iltre -erke5eld din pm6nt de infuzorii !Bisselgur%, put6nd fi recondiionate
dup folosire/
3 5iltre Seitz din plac de azbest i celuloz/ dup dimensiunea porilor, pot fi0
#larifian$& !cu pori mari% sau s$&rili'an$& !cu pori de dimensiuni foarte reduse% - =BD1,
=BD,/
3 5iltre de metilen celuloza 9#illipore% Sartorius:, ce prezint o porozitate de 8,,
microni.
ACGIUNEA AGENGILOR C>IMICI ASU2RA BACTERIILOR
$entru a putea intra n uzul curent, se impune ntrunirea urmtoarelor condiii
generale pe care trebuie s le ndeplineasc un agent chimic dezinfectant0
- s aib o pternic! acine antimicrobian! !bactericid%, n concentraii relativ
reduse/
- s prezinte un gra" %nalt "e solbilitate %n ap!/
- s! n fie foarte to-ic pentr organisml man, chiar n aplicaii e5terne/
- s! n se combine c materii organice "e pe tegmente, care s-l inactiveze/
- s-i e5ercite efectele bactericide cu intensitate apropiat at6t la temperatura
camerei, c6t i la cea a corpului uman/
- s aib capacitate mare "e penetrare/ pe c6t posibil, s! n "ega$e n miros
neplact/ s aib un cost relativ sc!'t.
1. AGENGI C>IMICI CU ACGIUNE ANTIBACTERIAN
1.1. FENOLUL )I DERI"AGII FENOLICI
F&nolul 7CK>CO>8 sau a#i(ul #ar%oli# este un bn "enatrant al proteinelor
precum i un detergent. "ciunea sa bactericid presupune liza celulelor bacteriene. =l se
poate folosi ca dezinfectant n concentraie de ,,.F la "econtaminarea b!ilor& a
po"elelor "e spital& a plo#tilor etc., fiind ns iritant. =ste activ fa de ma'oritatea
bacteriilor, inclusiv fa de bacilul tuberculozei i spori. 7n concentraie de 1F, se
folosete pentru conservarea vaccinrilor.
!;-alil-,- metho5ifenol%. :ltimul este folosit n stomatologie.
1.*. ALCOOLII
&ei dezinfectani cu putere mai slab dec6t a fenolilor, alcoolii, prin gruparea
Val4@lK !A-9S,)S% ac;ioneaz7 bactericid, dar numai asupra 5ormelor ve)etative. D-a
demonstrat, de pild, ca sporii de bacil crbunos rezist timp de ,8 de ani n alcool
absolut..
1.A. >ALOGENII )I COM2U)II >ALOGENAGI
7alogenii cei mai utilizai ca antiseptice i dezinfectante sunt clorul i iodul,
ambele cu acine pternic bacterici"! #i sporici"!. Mecanismul de aciune al
halogenilor se bazeaz pe propriet!ile lor o-i"ante.
Clorul a fost introdus ca dezinfectant de ).U. Solmes la Coston n anul 18+. i de
Demmel3eis la Giena n 18; pentru a preveni transmiterea febrei puerperale prin
m6inile medicilor.
3 clorul )azos n concentraie de ,-+
8
[88 este folosit pentru potabili'area apei, dar
concentraia trebuie s fie mai mare dac apele au coninut crescut de substane organice,
deoarece acestea fi5eaz i inactiveaz clorul/
3 hipocloritul de sodiu se folosete tot pentru "e'infecia apei& a veselei #i a DC0
rilor& la cr!irea sprafeelor n industria alimentar, n nit!i "e alimentaie pblic!
etc./
3 cloramina este folosit ca dezinfectant pentru vesel, len'erie, n concentraie de
,-+F i ca antiseptic n concentraie de 1F/
Io(ul este un o*idant puternic i se combin ireversibil cu proteinele bacteriene.
De folosete sub form de0
3 solu;ie alcoolic7 1-,F ca antiseptic cutanat/
3 tinctura de iod care conine ;-.F iod i ,-.F iodur de potasiu se utilizeaz tot
ca antiseptic ctanat pentru antiseptizarea pielii %nainte "e intervenii chirrgicale. "t6t
soluia alcoolic c6t i tinctura nu pot fi aplicate direct pe plgi deoarece au efect
distructiv asupra esuturilor/
3 iodo5orii, care conin iod comple5at cu un detergent anionic, au o serie de
avanta'e0 au o penetrabilitate foarte bun a pielii, nu sunt iritani, deoarece iodul este
eliberat treptat din combinaie i nu pteaz len'eria. :n e5emplu este betadina, un
comple5 hidrosolubil al iodului cu polivinilpirolidina. $reparatul poate fi folosit pentru
antisepti'area pl!gilor sperficiale.
&ezavanta'ul antisepticelor cu iod este alergizarea pe care o produc la unele
persoane.
1.D. ACI3II )I BA3ELE
=fectul bactericid al acizilor i bazelor se datoreaz "enatr!rii brtale a
proteinelor bacteriene.
A#i'ii. Ac;iunea dezin5ectant7 a unui acid crete, n general, paralel cu )radul de
disociere electrolitic7. 9ei mai bactericizi acizi n ordine descresctoare a activitii lor
sunt0 aci"l a'otic& clorhi"ric& perslfric #i permenganic. "cizii organici au o aciune
bactericid mai slab. "cizii minerali se folosesc mai rar n dezinfecie. "stfel, n
laboratoare se utilizeaz amestecl slfocromic pentru dezinfecia i degresarea pipetelor.
9a antiseptice se folosesc mai frecvent0
3 acidul boric0 ,-+F n soluii apoase, 18F n unguente i 8,88.-1,*F pentru
colire. 1u se aplic sugarilor !este to5ic% i nu se aplic pe plgi ntinse/
3 acidul acetil )lacial0 diluat ,8-+,F se utilizeaz n dermatologie i stomatologie
ca antiseptic& astringent& cateri'ant #i antifngic.
Ba'&l&, ca si acizii, sunt active 1n 5unc;ie de )radul de disociere. Cazele cu
proprieti puternic bactericide sunt0 8O7& +aO7& <iO7& +74O7. De pare c aciunea
bazelor se datoreaz nu numai radicalilor rezultai prin disociere, ci i bazelor nedisociate
!cu efect bactericid% care ptrund n celula bacterian. &intre baze, 9a!)S%+ este folosit la
vruirea ncperilor, iar soluia cald de 1a)S .F, ca dezinfectant.
Densibilitatea la acizi i baze este diferit de la specie la specie. "stfel,
m@cobacteriile sunt relativ rezistente la acizi i baze, 1a)S i S,D); fiind folosite pentru
lichefierea sputei n scopul izolrii bacilului tuberculos.
1.C. SRURILE
&intre s7ruri% cele ale metalelor )rele au e5ectul bactericid cel mai puternic.
"stfel, ionii de Sg i "g sunt activi ntr-o proporie de 1[1888888. "ciunea lor
bactericid se datoreaz combinrii lor cu grupri active ale enzimelor pe care le
inactiveaz. =ficiena lor depinde, ns, mai degrab de densitatea culturii bacteriene
dec6t de concentraia lor, deoarece ei sunt absorbii repede i preferenial de bacterii,
ating6nd n bacterii concentraii mari n defavoarea concentraiei de mediu.
3 clorura de mercur 9sublimatul: 1
8
[88 se folosete n laboratoare ca dezinfectant
pentru pipete i lame/
3 merthiolatul& care este un compus organic al mercurului, este folosit drept
conservant pentru seruri i vaccinuri n concentraie de 1[18.888 i ca dezinfectant n
concentraie de 1[1.888/
3 nitratul de ar)int n concentraie de 1F se folosea n profila5ia oftalmiei
gonococice la nou-nscut nainte de introducerea penicilinei n terapie/
3 colar)olul% protar)olul 6i ar)irolul sunt compui de argint care se folosesc sub
form de colire i unguente n concentraie de 1-1,.F/
- compu6ii or)anici ai arsenului% bismutului% antimoniului au fost utilizai n
trecut n tratamentul sifilisului i a unor infecii produse de unele protozoare/
3 sul5atul de cupru este folosit cu succes ca fungicid, dar nu n medicin, ci n
agricultur/
3 o*idul de zinc se folosete ca antiseptic, astringent i caustic n dermatologie.
1.K. FORMALDE>IDA )I GLUTARALDE>IDA
For,al(&+i(a nlocuiete atomii labili de S din gruprile 1S, sau O)S, frecvente
n nucleoproteine i din gruprile O9))S i ODS ale proteinelor. =ste la fel de activ fa
de spori ca i fa de formele vegetative, probabil pentru c poate ptrunde uor n celula
bacterian datorit dimensiunilor reduse ale moleculei i pentru c reactioneaz n lipsa
apei.
Eormaldehida este un )az, forma obinuit de prezentare fiind o soluie de +F
numit 5ormalina. 7n concentraie de 8,1F a fost utilizat mult timp n prepararea
vaccinurilor prin deto5ifierea to5inelor.
De poate utiliza sub form gazoas sau lichid pentru sterilizarea diferitelor
suprafee. Eormaldehida gazoas este pus n libertate dintr-un polimer,
para5ormaldehida i este folosit la "e'infecia %nc!perilor& a mobilierli i n general a
obiectelor care nu pot fi sterilizate prin cldur. =a nu deterioreaz obiectele supuse
dezinfeciei !mbrcminte, obiecte de matal, lemn, piele etc.%, dar are o aciune iritant
asupra con'unctivei i cilor respiratorii.
Glu$aral(&+i(a *S n soluie apoas este mai activ dec6t formolul i mai puin
iritant. =ste mai activ n mediu alcalin fiind bactericid7% sporicid7 6i virulicid7. =ste
indicat n sterilizarea unor instrmente me"icale ce nu pot fi supuse sterilizarii prin
cldur, ca, de pild, citoscoape, echipament de anestezie, materiale plastice i
termometre.
1.L. DE3INFECTANGII GA3O)I
Duccesul obinut n prevenirea to5iinfeciilor alimentare nu a putut fi nici pe departe
reeditat n infeciile ce se transmit pe cale aerian. $ulverizarea 5enolului n slile de
operaie introdus de 2ister a fost rapid abandonat. $ulverizarea propilen)licolului sau a
dietilen)licolului n concentraii mici, neto5ice pentru om, reduc mult numrul de
bacterii din aer, dar aceti produi sunt foarte sensibili la umiditate pe de o parte, iar pe de
alt parte nu distrug bacteriile de pe mobilier, suprafee ce constituie de fapt una din
sursele bacteriilor din aer.
3 $*idul de etilen este un gaz foarte solubil n ap, fiind cel mai potrivit dezinfectant
gazos pentru suprafee uscate. =ste ns destul de costisitor i are o to5icitate rezidual.
De utilizeaz la sterilizarea materialelor care nu suport temperaturi ridicate0 obiecte "in
plastic& echipament chirrgical& c!ri& obiecte "in piele care au foat contaminate de
pacieni contagioi. Eiind e5plosiv, se utilizeaz n amestec de <8F cu 9),.
1.M. S2UNURILE )I DETERGENGII 7AGENGI TENSIOAC1TI"I8
S4/unuril& au o ac;iune moderat bactericid7 datorit acizilor grai nesaturai pe
care i conin !acizii oleic, linoleic i linolenic% mai ales asupra florei Lram pozitive.
Elora Lram negativ, mai ales cea din grupa coliformilor, este mai sensibil la spunuri
ce conin acizi grai saturai. 1u se cunoate e5act mecanismul bactericid al spunurilor,
ele fiind folosite mai ales pentru 1ndep7rtarea mecanic7 a microbilor de pe piele% prin
sp7lare. 7n spunuri se pot ncorpora diferite antiseptice care intensific aciunea
antibacterian a acestora.
D&$&r9&n5ii sunt substan;e tensioactive sintetice. &in punct de vedere chimic, ei se
mpart n0 "etergeni anionici !ce includ alcooli sulfatai, al4ilaril sulfonai etc.%,
"etergeni cationici !care sunt compui cuaternari de amoniu, n care cei ; atomi de
hidrogen sunt nlocuii prin radicali organici%, "etergeni neionici !care sunt poliesteri i
eteri formai din condensarea unor acizi grai, alcooli i fenoli% i, n sf6rit, "etergeni
amfoteri !care conin at6t grupri anionice c6t i cationice%. &intre detergeni, importani
ca antiseptice i dezinfectante, sunt cei anionici, cationici i amfoteri.
1.N. ANTOGONI)TII METABOLICI
Aeprezint agenii chimici care interfer cu o reacie normal ntre o enzim
specific i substratul respectiv, n procesul metabolic. "ntagonistul ac;ioneaz7 prin
combinarea cu o parte a enzimei !cu apoenzima-suportul proteic, cu coenzima-partea
activ, sau cu activatorul mineral%, 1mpiedic=nd ata6area enzimei pe substrat.
9ombinarea antagonistului cu enzima se face datorit marii afiniti a acesteia fa de
anumite situsuri !regiuni% din molecula proteinei enzimatice. =5emple0 o5idul de carbon
sau cianurile se combin cu atomul de fier din enzimele porfirinice, bloc6nd rolul
acestora n respiraia celular bacterian.
"ntagonitii metabolici pentru bacterii se mpart n0
3 anta)oni6ti ai proceselor ener)etice0 o-i" "e carbon& cianri& "initrofenol/
3 anta)oni6ti ai biosintezelor0 p0florofenilalanina, care nlocuiete competitiv
fenilalanina din lanul proteic normal, cu apariia unei proteine modificate, nefuncionale.
1.1E. COLORANGII
Coloranii trifenilmetanici, cum sunt cristal-violetul, metil-violetul i verdele
briliant, sunt substane pternic bacteriostatice& slab bacterici"e, active mai ales pe
bacteriile Lram pozitive. .ioletul de )en;ian7 se poate folosi ca antiseptic n concentraie
de 8,,F.
9oloranii tiazinici, cum este albastrul de metilen, se folosesc ca antiseptici e5terni
n concentraii de 8,,-8,.F. "lbastrul de metilen poate fi administrat ca antiseptic intern
n infeciile urinare !urodezinfectante%.
&intre coloranii acridinici, cel mai utilizat este rivanolul 9lactat de metacridina: n
concentraii de 1-,F, la antiseptizarea plgilor chirurgicale i traumatice.
1.11. ALGI DE3INFECTANGI
Pero*idul de hidro)en ntr-o concentraie de +F este folosit ca antiseptic, dar nu
este recomandabil, susceptibilitatea bacteriilor fiind diferit.
Perman)anatul de potasiu !BMn);% este un antiseptic retral sa vaginal n
concentraie de 1[1.888.
Acidul peracetic !9S+-9)-)-)S%, a)ent puternic o*idant, este folosit sub forma de
vapori pentru sterilizarea camerelor unde cresc animale Vgerm-freeK, pentru care este ns
to5ic.
ACGIUNEA AGENGILOR BIOLOGICI ASU2RA BACTERIILOR.
BACTERIOFAGUL )I FENOMENELE DE BACTERIOFAGIE
Mn anul 1<1., TEort a observat caracterul vitros !sticlos% al unor colonii de
stafilococ. &up , ani !1<1%, "F7erelle a izolat un principiu litic din filtratele de fecale
de la bolnavi cu dezinterie bacilar. 9ele dou descoperiri se datorau e5istenei unor
virusuri ale bacteriilor, capabile s lizeze celula bacterian !bacteriofagi%.
&in anul 1<,8, Gles ?or"et #i ,ihail Cic! au descris fenomenul de VlizogenieK
!infecia simbiotic a bacteriei cu bacteriofag, fr liza celular, nsoit de modificri ale
bacteriei purttoare%.
1. MORFOLOGIA )I COM2O3IGIA C>IMIC A BACTE1RIOFAGULUI
2&2& FA0"" A(N
) particul de bacteriofag cu morfologie tipic, cuprinde0 capul i coada !figura 1%.
1 Ca/ul conine un miez de acid nucleic i un nveli proteic. #iezul de acid nucleic este
format din A*+ cuprinz6nd circa .8F din greutatea uscat a bacteriofagului. Cnveli6ul
proteic 9capsida: d forma poligonal a capului i este format din sbnit!i i"entice "e
protein!. &e fapt, nveliul formeaz n spaiu o prism he5agonal.
1 Coa(a este partea cu care bacteriofagul se ata#ea'! "e sprafaa cellei bacteriene.
9oada variaz n ceea ce privete comple5itatea structural, de la un bacteriofag la altul
!bacteriofagul T, de =scherichia coli prezint o coad cu comple5itate foarte mare%.
7n general, coada are trei pri0 miezul lacunar% teaca contractil7 6i placa bazal7
terminal7. $laca bazal terminal are form he5agonal, purt6nd ataate ;fibrele co'ii.
Eigura 10 Morfologia i stadiile funcionale ale unui bacteriofag !dup Murra@, &re3,
Boba@ashi, 1<<8%
9oada bacteriofagului se poate gsi n dou stadii funcionale0 s$a(iul r&la6a$ i
s$a(iul #on$ra#$a$.
- @n s$a(iul r&la6a$, teaca contractil acoper aproape n ntregime miezul lacunar, iar
fibrele cozii nu sunt vizibile/

- @n s$a(iul #on$ra#$a$, teaca terminal contractil apare scurtat, miezul lacunar este
vizibil pe o mai mare ntindere, iar placa terminal prezint fibrele cozii evidente.
$roteinele care formeaz capsida capului, miezul lacunar al cozii, teaca contractil
i fibrele cozii sunt distincte.
7n afar de forma tipic de morfologie a bacteriofagilor, pot e5ista i alte forme,
atipice0 bacterio5a)i 57r7 coad7 !unii bacteriofagi "&1% sau bacterio5a)i 5ilamento6i -
cu morfologie variat !bacteriofagi VfdK n form de baghet, cu "&1 al capului i
proteinele de nveli legate n reea, ns insuficient precizat ca structur a subunitilor
componente%.
1.*. FAGII ARN
&escrii mai cur6nd, fagii "A1 !f,, MD,, A1, )C% prezint morfologie aparte. :nui
asemenea tip de bacteriofag i se descriu0
- un ,i&' (& ARN ,ono#a$&nar !cu greutate molecular de ;518
*
daltoni i av6nd o
structur VautocomplementarK comple5, de tip teriar%/
- #a/si(4 format din circa 188 uniti !capsomere%. $roteinele capsidale sunt de dou
categorii i anume0
de inveli6, cu greutate moleculara de 1;.888 daltoni !;proteina A fagic!%/
de maturare, cu greutate molecular de ;8.888 daltoni !AR+0 polimera'a0 AR+0
"epen"ent!%.
Eagii "A1 intervin n 5enomenele de con<u)are cromozomial7 !fi5are de fimbriile
bacteriei donatoare E
R
%, ca i n lizo)enizarea unor bacterii intestinale.
*. TI2URI DE RELAGIE BACTERIOFAG1BACTERIE
Cacteriofagul este un virus bacterian, a crui gazd este deci o bacterie. "taarea
bacteriofagului de suprafaa celulei bacteriene depinde de e5istena pe aceast suprafa a
unor receptori.
&in punct de vedere al atarii, se disting genetic bacterii lizosensibile !care permit
ataarea i intrarea bacteriofagului% i bacterii lizoresistente !care nu permit ataarea i
intrarea bacteriofagului%.
2izorezistena natural !genetic% trebuie deosebit de rezistena unei bacterii la
VinfeciaK cu bacteriofag, datorit purtrii de ctre bacterie, n intrior, a unui fag temperat
!fenomen de lizogenie%.
De cunosc dou categorii de relaii bacteriofag-bacterie i anume0 relaii de tip litic
i relaii de tip simbiotic.
*.1. RELAGII BACTERIOFAG1BACTERIE DE TI2 LITIC
7n acest tip de relaie, ptrunderea bacteriofagului n celula bacterian lizosensibil
se soldeaz cu moartea celulei !cu unele rare e5cepii%, precum i cu eliberarea din
celul7 a unor particule de bacterio5a) neo5ormate.
VMnfeciaK fagic de tip litic implic mai multe etape i anume0 adsorbia,
penetrarea, replicarea intracelular, maturarea particulelor fagice neoformate, eliberarea
particulelor fagice neoformate.
a. A(sor%5ia
&atorit prezenei receptorilor pe suprafaa celulei bacteriene lizosensibile,
particulele de fag se adsorb pe aceast suprafa i anume prin ata6area cozii 95ibrelor
cozii: pe receptori. $e suprafaa unei celule bacteriene, se pot ataa p6n la 188 particule
fagice.
"taarea pe receptori se bazeaz pe proprietatea de specificitate0 receptorii unei
celule bacteriene sunt 1nalt speci5ici pentru anumi;i bacterio5a)i. Dpecificitatea de
receptori fagici se datorete naturii chimice a peretelui celular bacterian !dispoziia
reelei de mucopeptide%. &e pild, pentru bacteriofagii de =scherichia coli T+, T;, T,
receptorii se gsesc n stratul lipopolizaharidic din peretele celular, n vreme ce pentru
bacteriofagii T, i T*, n stratul de lipoproteine din perete.
=5ist o VcompetiieK pe receptori ntre doi fagi !celula =scherichia coli cu fagC[,
ataat, nu permite ataarea suplimentar a fagului T,%.
%. 2&n&$rar&a
)dat ataat, bacteriofagul ?in<ecteaz7@ acidul nucleic al capului n celula
bacterian, trec6nd din stadiul rela5at n stadiul contractat al cozii. Eaptul c acidul
nucleic al capului intr n celul, iar proteina de nveli rm6ne n e5teriorul celulei, a fost
demonstrat prin marcarea acidului nucleic fagic !"&1 % cu izotopul Td
+
S i, respectiv, a
proteinei de nveli !capsidei% cu izotopul D
+.
.
&e la aceast regul, fac e5cepie bacteriofagii filamento#i f", care p!trn" %n
%ntregime %n cella bacterian! !"&1 R proteina%.
#. R&/li#ar&a in$ra#&lular4
Replicarea bacterio5a)ilor A(N
&up c6teva minute de la ptrunderea acidului nucleic fagic !perioada de
VeclipsK%, "&1-ul fagic ncepe s VcomandeK prin genele sale, n celula bacterian
gazd, sinteza unor proteine ?precoce@ 9?earl proteins@:, din care fac parte enzimele
necesare sintezei crescute de "&1 de tip fagic. &intre aceste enzime, cea mai important
este o nou A(N3polimeraz7 !fag- dependent%, dar i altele, ca0
ncleosi"trifosfatHina'a& timi"il0sinteta'a.
9oncomitent are loc ?paralizarea@ A(N celular !oprirea sintezelor celulare
codificate de "&1 propriu%.
7n continuare, ?copiile@ de A(N 5a)ic !rezultate din aciunea enzimelor VprecoceK%
determin, folosind aparatul de sintez al celulei !ribozomi%, formarea de neoproteine
5a)ice ?tardive@ 9?late proteins@:, care se asambleaz n 'urul moleculelor de "&1 fagic,
d6nd natere capsidei capului i celorlalte componente proteice ale particulelor fagice
neoformate.
Replicarea bacterio5a)ilor ARN
96nd AR+ fagic intr n celula bacterian, acioneaz el nsui ca un mesager la
nivell ribo'omilor, unde se sintetizeaz mai nt6i o ARN3sintetaz7, care asigur apoi
5ormarea de ?copii@ de ARN 5a)ic, care, la r6ndul lor, VcodificK n ribozomi sinteza de
proteine pentru 5ormarea capsidei particulelor neoformate. ) faz intermediar n
replicarea bacteriofagilor "A1 este 5ormarea unui ARN dublu catenar, rezultat din
lanul de "A1 al particulelor fagice ptrunse n celul !lan KplusK%, legat complementar
cu un lan, rezultat din aciunea "A1-sintetazei de tip fagic !lan VminusK%.
(. Ma$urar&a /ar$i#ul&lor fa9i#& n&ofor,a$&
$rin asamblarea dintre moleculele de acid nucleic 5a)ic nou 5ormate n celulele
gazd i proteinele 5a)ice ?tardive@, de asemenea nou sintetizate, dup modelul
VcodificatK de acidul nucleic fagic, rezult noile particule de bacterio5a).
&. Eli%&rar&a /ar$i#ul&lor fa9i#& n&ofor,a$&
2a un moment dat, particulele fagice care VumpluK spaiul celular bacterian, produc
?e*plozia@ peretelui celular 6i membranei citoplasmatice, cu liza celular7 concomitent
i cu eliberarea n mediul e5terior a particulelor fagice neoformate, capabile ca, n
prezena altor celule bacteriene lizosensibile s reia ciclul de tip litic.
#i de aceast dat, e5cepia o fac bacteriofagii filamento#i ;f"K, care trec prin
membrana citoplasmatic! #i perete, fr a determina liza consecutiv a celulei.
*.*. RELAGII BACTERIOFAG1BACTERIE DE TI2 SIMBIOTIC
Eenomenul intrrii unui bacteriofag ntr-o celul bacterian, fr a determina liza
acesteia i inte)rarea materialului )enetic 5a)ic 1n cromozomul bacterian% poart7
numele de ?lizo)enie@.
7n acest tip de relaie bacteriofag-bacterie, dup ataarea i penetrarea
bacteriofagului n celula gazd, nu se produce replicarea independent a acidului nucleic
fagic, ci acesta se integreaz n "&1 celular !cromozomul bacterian%, replic6ndu-se odat
cu replicarea "&1 celular !diviziunea celulei%. -acterio5a)ii capabili de a stabili o
rela;ie de tip simbiotic cu bacteria purtatoare sunt denumii ?pro5a)i@ sau ?bacterio5a)i
tempera;i@.
=tapele VinfecieiK fagice de tip simbiotic sunt0 adsorbia, penetrarea acidului
nucleic fagic, VcircularizareaK "&1 fagic, cuplarea "&1 fagic circular cu "&1
bacterian.
-acteriile care con;in 1n interior 5a)i tempera;i se numesc <%a#$&rii li'o9&n&=.
=le sunt rezistente !VimuneK% la VinfeciaK cu un alt bacteriofag omolog. "cest fenomen
se datorete eliberrii n citoplasma celulei lizogene a unei substan;e ?represor@, care
inhib multiplicarea unui fag litic ptruns n celul.
Dubstana VrepresorK acioneaz i asupra profagului e5istent n celula lizogen,
mpiedic6nd desprinderea acestuia din inelul comun "&1 fagic-"&1 bacterian i,
respectiv, iniierea sintezelor fagice pentru declanarea VinfecieiK de tip litic.
In(u#5ia reprezint procesul prin care un 5a) temperat 9pro5a): aflat ntr-o celul
bacterian lizogen, trece 1n 5orma sa litic7 9?virulent7@:, adic i desprinde acidul
nucleic din cromozomul bacterian i iniiaz sinteze de tip fagic la nivelul aparatului
ribozomul celular, cu determinarea lizei celulei i eliberrii de particule fagice VvirulenteK
n mediu, capabile s reia un ciclu de tip litic n alte celule lizosensibile. Eenomenul de
inducie se datorete inactiv7rii sau distru)erii substan;ei ?represor@ !figura ,%.
"genii capabili s produc fenomenul de inducie !ageni inductori% pot fi variai0
temperatura de ;;
8
9, iradierea cu ultraviolete, agitaia mecanic, etc. "genii inductori ar
aciona, dup unii autori, prin determinarea n celul a sintezei unei substan;e
?inductor@% care inactiveaz7 secundar substan;a ?represor@. 1atura acestei substane
VinductorK nu este nc cunoscut. $e de alt parte, apar o serie "e propriet!i noi ale
cellei. &e e5emplu0 tulpinile de 9or@nebacterium diphteriae, prin lizogenizare !purtarea
unui fag temperat% devin to5igene !productoare de to5in difteric%. &e asemenea, unii
streptococi beta hemolitici sunt capabili de a sintetiza to5ina eritrogen numai n cazul
c6nd poart n interior fagi temperai specifici.
Eigura ,0 2izogenie-Mnducie !dup Murra@, &re3, Boba@ashi, 1<<8%
"cest 5enomen de schimbare a unor propriet7;i ale celulei bacteriene% prin
prezen;a pro5a)ului& poart numele de <#onv&rsi&K. Mntrarea fagului temperat n celul
determin e5primarea unor gene celulare pree5istente, represate p6n atunci. V9onversiaV
lizogen difer de VtransducieK, la care genele care caracterizeaz noile proprieti sunt
cuprinse e5clusiv n genomul fagului infectant.
A. IM2ORTANGA FENOMENULUI DE BACTERIOFAGIE ?N MEDICIN
0enetica bacterio5a)ilor. Cacteriofagii prezint dou nsuiri genetice importante
i anume0 stabilitatea tipli i rata $oas! "e variaie genetic!. Eenomenele genetice
legate de bacteriofag sunt0 mutaia fagic, transducia, recombinarea fagic, restricia i
modificarea.
Mu$a5ia fa9i#4. Toate proprietile unui bacteriofag sunt controlate de genele din
acidul nucleic fagic. Mecanismul de mutaie genetic se aplic i la bacteriofag, ca i la
bacterii, celulele animale sau virusuri animale. &eci, cu prile'ul replicrii fagului n
celula bacterian, pot aprea indivizi prezent6nd o ?)re6eal7@ 1n molecula de A(N, care
confer particulei neoformate proprieti noi.
Trans(u#5ia. =ste fenomenul introducerii 1n )enomul 9cromozomul: bacterian a
unor )ene cu a<utorul materialului )enetic 5a)ic, cu apariia consecutiv de proprieti
noi ale celulei bacteriene, codificate de genele fagice introduse n "&1 celular.
R&#o,%inar&a fa9i#4. 96nd pe suprafaa aceleiai celule bacteriene, se a"sorb
simltan "oi sa mai mli bacteriofagi A*+ %nr"ii, dar uor diferii genetic, ambii pot
;infecta cella #i se pot repro"ce. 7n acest caz, unii din in"ivi'ii fagici neoformai snt
recombinai, adic posed proprieti ale ambelor categorii de particule fagice infectante.
&e e5emplu0 dac o celul de =scherichia coli este supus contactului cu doi fagi T,,
unul care produce pla'e cu dimensiuni mici, precoce, iar altul care produce pla'e cu
dimensiuni mari, tardiv, se obin particule recombinate, care dau pla'e cu dimensiuni
mari, precoce.
R&s$ri#5ia i ,o(ifi#ar&a. D-a observat c o anumit categorie de bacteriofagi se
multiplic la o rat nalt n anumite tulpini de =scherichia coli i la o rat 'oas n alte
tulpini aparin6nd aceleiai specii bacteriene. "ceasta se e5plic prin faptul c, n celula
bacterian ar e5ista dou7 enzime complementare% una modi5icatoare !care acioneaz
asupra "&1 fagic, fc6ndu-l apt de a funciona ca VmatriceK%, alta restrictiv7 !care
degradeaz orice form de "&1 din celul care nu a fost VmodificatK de enzima
modificatoare%. 7n cazul VinfecieiK cu bacteriofag a celulei bacteriene, o parte din "&1
ptruns din e5terior nu este modificat, deci este supus degradrii, iar o alt parte,
modificat fiind, nu mai este degradat i iniiaz sintezele de tip fagic proprii ciclului litic.
Eenomenul de restricie se nt6lnete mai ales la tulpini bacteriene unde activitatea celor
dou enzime este astfel coordonat, nc6t un numr relativ mic de molecule de "&1
fagic funcioneaz ca VmatriceK pentru determinarea apariiei particulelor fagice
neoformate.
BACTERIOCINELE
Aeprezint substan;e de natur7 proteic7, elaborate de anumite specii bacteriene,
care au e5ect bactericid 9litic: asupra unor tulpini de bacterii de aceeai specie sau din
specii nrudite cu a tulpinii secretoare. "ciunea bactericid depinde de e5istena pe
suprafaa bacteriei a unor receptori speci5ici. &in acest punct de vedere, se disting0
bacterii bacteriocino3sensibile !cu receptori% i bacterii bacteriocino3rezistente !fr
receptori%. =fectul bacteriocinelor este letal. &e asemenea, trebuie reinut c elaborarea de
bacteriocine de ctre un individ bacterian echivaleaz cu liza celulei bacteriene secretoare
nsi.
Cacteriocinele prezint o greutate molecular relativ mare !.8.888-88.888 daltoni%
i un spectru antibacterian mult mai lar) dec=t al antibioticelor. "ciunea litic a
bacteriocinelor este puternic, fiind suficient o singur molecul pentru a produce liza
unei celule. 9a i n cazul bacteriofagilor, celulele bacteriene n funcie de specie i
tulpin, au o susceptibilitate diferit fa de bacteriocine, datorit prezenei de receptori
pe suprafaa peretelui celular bacterian.
Mecanismele intime ale activitii intracelulare a bacteriocinelor comport
urmtoarele secvene0 depolimerizarea A(N nuclear% inhibi;ia sintezei de proteine
bacteriene !prin impiedicarea citirii de ctre ribozom a mesa'ului nscris pe "A1
mesager%/ cre6terea permeabilit7;ii membranei citoplasmatice !cu compromiterea
barierei osmotice i selective a celulei%.
&in punct de vedere practic, spectrul de activitate al unei bacteriocine, elaborat de
anumite specii sau tulpini bacteriene, poate fi utilizat ca indicator, el fiind caracteristic.
#etoda de testare a spectrului bacteriocinelor se numete bacteriocinotipie
!caracterizarea unei tulpini bacteriene circulante n populaia uman, pe baza spectrului
litic al bacteriocinelor elaborate%. Cacteriocinotipia are, deci, importan epidemiologic,
alturi de lizotipie, pentru caracterizarea unor tulpini de =scherichia coli, $seudomonas
aeruginosa !implicate n etiologia unor infecii interioare%.
NOIUNI DE CHIMIOTERAPIE ANTIBACTERIAN
1. INTRODUCERE
$rintele chimioterapiei antiinfecioase este Pal Ehrlich, care, dup numeroase
sinteze i cercetri asupra compuilor arsenicali, obine, n anul 1<8<, salvarsanl
!compusul *8*% activ asupra Treponemei pallidum i altor spirochete.
=hrlich a fost primul care a formulat principiile chimioterapiei0
9himioterapicul trebuie s prezinte o ?to*icitate selectiv7@, adic s aib efect
inhibant net aspra bacteriilor infectante, dar s fie relativ nenociv pentr organisml
man bolnav. "ceasta constituie diferena fundamental ntre agenii chimioterapici i
substanele dezinfectante uzuale, care sunt foarte active fa de bacterii, dar greu de
tolerat de ctre organismul uman, n concentraiile lor eficiente !bactericide sau
bacteriostatice%.
=5ist o 1nrudire particular7 de ordin chimic 1ntre )ermen 6i chimioterapic. "ceasta
duce la posibilitatea apariiei dependenei microorganismului fa de chimioterapic.
&in cea de-a doua caracteristic a chimioterapiei, rezult necesitatea 5olosirii
combinate 9asociate: a mai multor chimioterapice.
7n anul 1<,<, Ileming descoper penicilina, secretat de mucegaiul $enicillinum
notatum, dar introducerea ei n terapie s-a produs abia dup un deceniu, fiind meritul a
doi chimiti de la )5ford, Ilorey #i Chain.
Dtudiind aciunea bactericid a unor colorani, *omagH !1<+;% descoper c
prontozilul rou administrat la oareci, i prote'eaz de efectul letal al infeciei
e5perimentale cu streptococi beta hemolitici, n ciuda faptului c in vitro este lipsit de
activitate bactericid.
Trefoel #i +iti !1<+.% arat c, n organismul oarecilor, prontozilul se descompune
ntr-un compus cu aciune bacteriostatic, numit sulfamid.
). DE*INIIE
9himioterapicele sunt substan;e capabile s7 e*ercite% 1n doze mici% un e5ect
inhibitor asupra bacteriilor. "cest efect poate fi0 letal 9bactericid: sau numai de
1mpiedicare a multiplic7rii microor)anismului 9bacteriostatic:.
7n trecut, sub denumirea de chimioterapice, erau desemnate substanele
antimicrobiene obinute prin sintez chimic !sulfamide, sulfone, nitrofurani, etc.%, iar
sub cea de antibiotice, substanele de origine biologic, secretate de bacterii i
mucegaiuri. 9u timpul ns, unele antibiotice s-au obinut mai uor pe cale sintetic dec6t
pe cale biologic !de e5emplu0 cloramfenicolul%, motiv pentru care, termenul de
chimioterapic antiinfecios este utilizat astzi pentru orice substan folosit n
tratamentul infeciilor, indiferent de origine.
Mntroducerea chimioterapiei antiinfecioase a dus la o cretere spectaculoas a ratei
de supravieuire dup infecii. "stfel, n decurs de .8 de ani, a aprut, sub presiune
selectiv, 5enomenul de rezisten;7. 9a urmare, producerea de chimioterapice
antiinfecioase, a devenit o industrie care, fiind n permanen concuren cu apariia
tulpinilor rezistente, caut noi produi fa de care microorganismele s fie sensibile.
Mntroducerea unui nou chimioterapic n practica medical este evaluat la ,88
milioane de dolari i parcurge mai multe etape care dureaz apro5imativ 18 ani.
A. CLASIFICARE
9lasificarea chimioterapicelor poate fi efectuat dup mai multe criterii i anume0
structur chimic, origine, scopul folosirii, spectru de activitate, mecanism de aciune,
dup felul n care si e5ercit efectul antibacterian, etc.
A.1. DU2 STRUCTURA C>IMIC
7n tabelul 1, sunt cuprinse categoriile de chimioterapice antibacteriene, cu
reprezentanii lor mai nsemnai, in6nd seama de criteriul compoziiei chimice.
A.*. DU2 ORIGINE
De disting0
3 Antibiotice produse de microor)anisme !$enicilina, $olimi5ina, Cacitracina%.
3 Produ6i de semisintez7, preparai n laborator !sintez% pe baza unui nucleu sintetizat de
ctre un microorganism !Meticilina, din familia penicilinelor%.
3 Produ6i de sintez7 chimic7 inte)ral7 1 chimioterapice sintetice !sulfamidele, "cidul
nalidi5ic, penicilinele sintetice, etc.%.
A.A. DU2 SCO2UL FOLOSIRII
&in acest punct de vedere, se cunosc chimioterapice0 antibacteriene% anti5un)ice%
antiparazitare% antivirale.
7n cadrul capitolului de fa, ne vom referi n spe la chimioterapicele
antibacteriene.
Categorie
chimio
terapi
ce
Preparate comerciale
Cetalactamine $eniciline0 $enicilina L !in'ectabil%
$enicilina depozit-Moldamin
!in'ectabil%
$enicilina G !administrare oral%
"mpicilina
)5acilina, 9lo5acilina
9arbenicilina
9efalosporine0 9efalotin, 9efazolin,
9efamicina
"minoglicoside Dtreptomicina, Banamicina, Lentamicina,
1eomicina
Dpectinomicina
$olimi5ine $olimi5ina C, $olimi5ina = !9olistin%
"lte antibiotice 9loramfenicol
Tetracicline
Macrolide0 =ritromicina, )leandomicina,
Dpiramicina
2incomicina
9lindamicina
"cid fusidic
1ovobiocin
Gancomicina
Aifampicina !Aifamicina%
9himioterapice
antibacteriene
considerate
VnonantibioticeK
Dulfamide, Trimetropin !Ciseptol%
"cid nalidi5ic !1egram%
1itrofurane !1itrofurandoid%
Tiosemicarbazona
Msoniazida
"cidul paraaminosalicilic !$"D%
Tabel 10 9lasificarea antibioticelor dup structura chimic
A.D. DU2 S2ECTRUL DE ACTI"ITATE
&up acest criteriu chimioterapicele pot fi0 cu spectru larg i cu spectru ngust
!sau relativ ngust%.
a& Chimioterapicele cu spectru lar) !9loramfenicolul, tetraciclinele, "mpicilina,
sulfamidele, cefalosporinele%.
9a efecte adverse, pot determina0
Alergii-anafila5ie, rash cutanat, nefrite, granulocitopenii, anemii hemolitice/
To-icitate0 tromboflebite dup administrarea intravenoas, hipoprotrombinemie/
Sprainfecii0 cefalosporinele din a doua i a treia generaie. "cestea au un spectru de
aciune mai sczut asupra bacteriilor Lram pozitive !stafilococi, enterococi%, fiind astfel
posibile suprainfecii cu aceste microorganisme i cu fungi.
b& Chimioterapicele cu spectru 1n)ust 9sau relativ 1n)ust:0
3 Ac;iune predominant7 asupra bacteriilor 0ram pozitive !ma'oritatea penicilinelor,
=ritromicina, Dtreptomicina, 9lindamicina%.
3 Ac;iune predominant7 asupra unor bacterii 0ram ne)ative !9icloserina, Banamicina,
peniciline, sulfamide, Lentamicina, cefalosporine%
3 Ac;iune predominant7 asupra bacilului tuberculos0 Dtreptomicina, Sidrazida acidului
izonicotinic !SM1%, "cidul paraaminosalicilic !$"D%.
3 Ac;iune predominant7 asupra spirochetelor0 $enicilina, Dalicilatul de bismut.
A.C. DU2 FELUL ?N CARE ?)I EXERCIT EFECTUL ANTI1 BACTERIAN
Chimioterapice bacteriostatice0 mpiedic multiplicarea germenilor bacterieni
!9loramfenicol, sulfamide%/
Chimioterapice bactericide0 au efect letal asupra celulei bacteriene, fie n faza de cretere
logaritmic !$enicilina%, fie n faza de lag !Dtreptomicina%.
>&F& (,PE #'CAN"S#,L (' ACD",N'
- "geni care acioneaz asupra structurilor de supra5a;7 ale celulei bacteriene !perete
celular, membrana citoplasmatic%/
- "geni care interfer cu sinteza proteinelor celulei bacteriene/
- "geni care interfer cu sinteza acizilor nucleici n celula bacterian.
;. M=T)&= &= T=DT"A= " D=1DMCM2MTZ\MM C"9T=AMM2)A E"\Z &=
9SMMM)T=A"$M9=
?n s#o/ul a/r&#i&rii s&nsi%ili$45ii sau r&'is$&n5&i %a#$&riilor la #+i,io$&ra/i#&:
s& folos&s# ,&$o(& in vitro i in vivo.
.1. M=T)&= I+ JITRO !"1TMCM)LA"M"%
E6is$4: @n /rin#i/iu: (ou4 /osi%ili$45i (& $&s$ar& a a#$ivi$45ii an$i%a#$&ri&n& a
#+i,io$&ra/i#&lorF an$i%io9ra,a @n (ilu5ii i an$i%io9ra,a (ifu'i,&$ri#4.
"ntibiograma n diluii. 2rin an$i%io9ra,a @n ,&(iu li#+i(: @n (ilu5ii #r&s#;n(&
(& an$i%io$i#: s& /oa$& s$a%ili /r&#is concentraia minim! inhibitorie 9C,I: i
concentraia minim! bacterici"! 9C,?: a an$i%io$i#ului fa54 (& o anu,i$4 s/&#i&
%a#$&rian4. S& folos&$& @n #&r#&$ar&: (&oar&#& &s$& /r&$&n5ioas4 (in /un#$ (& v&(&r&
$&+ni#: /r&su/un& un #onsu, ,ar& (& ,a$&rial& i (&/4&$& @n 9&n&ral n&#&si$45il&
#lini#&.
"ntibiograma difuzimetric. ?n &6a,&n&l& %a#$&riolo9i#& (& ru$in4 s& u$ili'&a'4
an$i%io9ra,a (ifu'i,&$ri#4: @n ,&(iu soli(: (u/4 $&+ni#a Jir%-1Bau&r. Ea #ons$4 @n
1ns7m=n;area tulpinii de cercetat pe supra5a;a unui mediu solid 6i aplicarea unor
microcomprimate de antibiotice pe supra5a;a mediului. Du/4 o $&r,os$a$ar& (& 1K or&
s& a/r&#ia'4 sensibilitatea germenli %n fncie "e "iametrl 'onei "e inhibiie care
apare %n $rl microcomprimatli "e antibiotic. Fi&#ar& fir,4 /ro(u#4$oar& (&
,i#ro#o,/ri,a$& livr&a'4: @,/r&un4 #u a#&s$&a: o lis$4 (in #ar& r&'ul$4
#or&s/on(&n5a (ia,&$rului 'on&i (& in+i%i5i& ,4sura$ @n ,, i s&nsi%ili$a$&a la
fi&#ar& ,i#ro#o,/ri,a$.
R&#&n$ s1a in$ro(us o al$4 varian$4 (& an$i%io9ra,4 /& ,&(iu soli(: testul =:
#ar& /&r,i$& stabilirea precis! a C,I. ?n lo# (& ,i#ro#o,/ri,a$& s& a/li#4 /& ,&(iul
(& #ul$ur4 @ns4,;n5a$ f;ii (& +;r$i& (& fil$ru @,/r&9na$& #u an$i%io$i# @n
#on#&n$ra5i& #r&s#;n(4. As$f&l: la un #a/4$ al f;i&i #on#&n$ra5ia &s$& ,ini,4: iar la
#&l4lal$ #a/4$: ,a6i,4. Du/4 (ia,&$rul 'on&i (& in+i%i5i& #or&s/un'4$oar& fi&#4r&i
#on#&n$ra5ii: s& va /u$&a #al#ula CMI.
Cunos#;n( CMI /&n$ru an$i%io$i#&l& la #ar& un 9&r,&n& &s$& s&nsi%il: niv&lul
s&ri# ,a6i, #ar& s& /oa$& r&ali'a i #a/a#i$a$&a (& (ifu'iun& a an$i%io$i#ului @n
fo#arul inf&#5ios: s& va /u$&a al&9& varian$a o/$i,4 (& $ra$a,&n$.
.,. M=T)&= I+ JIJO
S& %a'&a'4 /& titrarea activit!ii inhibitorii antimicrobiene a unui #+i,io$&ra/i#
%n morile bolnavli #4ruia i s& a/li#4 $ra$a,&n$ul #u a#&l #+i,io$&ra/i#. T&s$ar&a s&
fa#& fa54 (& $ul/ini s$an(ar( (& %a#$&rii (in s/&#ia #&l&i in#ri,ina$& @n &$iolo9ia
#a'ului: sau fa54 (& $ul/ini s$an(ar( #unos#u$& a fi foar$& s&nsi%il& la a#&l
#+i,io$&ra/i# 7&6&,/luF $ul/ina (& s$afilo#o# i $ul/ina Mar%ur- (& Ba#illus
su%$ilis: &$#8. ?n /aral&l: s& in$ro(u#& o s#ar4 &$alon (& #+i,io$&ra/i# 7(ilu5ii
su##&siv& (& #+i,io$&ra/i#: /ornin( (& la o #on#&n$ra5i& %in& (&$&r,ina$48: @n
v&(&r&a #o,/ar4rii #u s&ria (& (ilu5ii $&s$ 7s&r san9+in sau al$& u,ori: @n (ilu5ii8.
T&s$ar&a s&nsi%ili$45ii la #+i,io$&ra/i#& /rin an$i%io9ra,4 s& va fa#& la $ul/ini
i'ola$&: @nain$& (& in$ro(u#&r&a @n $&ra/ia #a'ului a an$i%io$i#&lor sau al$or
#+i,io$&ra/i#&.
$A)9=D:2 M1E=9\M)D
2ROCESUL INFECGIOS este definit ca un ansamblu de 5enomene
5iziopatolo)ice 6i clinice, ap7rute 1n urma con5lictului dintre microor)anism !dotat cu
multiple i variate mi'loace de agresiune%, #i organism !narmat cu posibiliti comple5e
de aprare%.
INFECGIA se poate defini ca totalitatea modi5ic7rilor biolo)ice care se
declan6eaz7 1n or)anismul uman la p7trunderea a)entului in5ec;ios, modificri care
sunt la baza alterrii homeostaziei organismului.
:n caracter important al infeciei l constituie speci5icitatea etiolo)ic7 !un anumit
agent infecios produce o anumit boal infecioas%.
Dpecificitatea etiologic a fost enunat prin postlatele li Robert 8och. "stfel,
pentru a incrimina un agent microbian drept agent etiologic al unei infecii, trebuie
ndeplinite urmtoarele condiii0
- i'olarea constant! a germenli "in le'inea specific!/
- obinerea li %n cltr! pr! #i %ntreinerea li prin treceri succesive pe medii de
cultur/
- repro"cerea e-perimental! a bolii, prin inocularea culturii de germen la animalul de
laborator/
- i'olarea acelia#i tip "e germen "in le'inile animalli de laborator.
CARACTERELE GENERALE ALE INFECGIEI
1. 2ATOGENIE
7n orice infecie au loc urmtoarele evenimente0
- contaminarea !nt6lnirea macroorganismului cu agentul infecios%/
- p7trunderea microor)anismului/
- multiplicarea )ermenilor 1n or)anismul )azd7 prin eludarea rezistenei
antiinfecioase/
- apari;ia in<uriilor mor5olo)ice 6i 5unc;ionale, datorate at6t aciunii directe a
agentului infecios, c6t i reaciilor de aprare ale organismului/
- deznod7m=ntul in5ec;iei0 vindecarea !cu sau fr sechele%/ e5itusul/ coe5istena pe
timp ndelungat a celor doi parteneri ai infeciei !agentul infecios i organismul%.
1.1. CONTAMINAREA
Aeprezint 1nt=lnirea or)anismului cu microbul pato)en i are loc prin "epnerea
acestia pe %nveli#ri !tegumente i mucoase care cptuesc cavitile natural deschise%,
sau p!trn"erea prin le'ini !soluii de continuitate ntre mediul intern al organismului i
mediul e5tern%.
Prima 1nt=lnire a or)anismului cu microbii se realizeaz la na6tere, c6nd nou-
nscutul vine n contact cu microorganismele pre'ente %n canall vaginal #i pe pielea
mamei. P=n7 la na6tere el a fost prote<at de membranele 5etale 6i placent7, placent ce
permite ptrunderea unui numr foarte redus de microorganisme din circulaia mamei,
cum ar fi, de pild, unele virsri !ru'eolos, rubeolic, SMG, citomegalic%, bacterii
!Treponema pallidum%, unii para'ii !To5oplasma gondii%.
(up7 na6tere nou-nscutul se poate ap7ra de microor)anismele cu care vine n
contact datorit anticorpilor pe care i primete de la mam7, pe cale sanguin, la care se
adaug cei din colostrul 6i laptele matern. "ceti anticorpi i asigur o protecie relativ
fa de infecie, p6n c6nd va ncepe s-i dezvolte propriile mecanisme de aprare
antiinfecioas.
7n timpul vieii e5trauterine o parte din microorganismele cu care organismul vine
n contact va disprea, o parte va coloniza tegumentele i mucoasele i doar o mic parte
vor produce infecii propriu-zise.
9ontaminarea poate fi e5ogen i endogen.
CONTAMINAREA EXOGEN se produce prin contactul or)anismului cu
a)entul in5ec;ios din mediul 1ncon<ur7tor. 9ile de contaminare pot fi0 hi"ric!&
alimentar!& respiratorie& contact se-al& m#c!tri "e animal& %nep!tri "e insecte& prin
plag! mr"!rit! c p!m(nt& contamin!ri iatrogene prin instrmente me"icale !sering,
catetere, endoscoape% etc.
CONTAMINAREA ENDOGENA nseamn contaminarea cu )ermeni de pe
supra5a;a te)umentelor 6i mucoaselor. "ceste microorganisme produc infecii dac
traverseaz barierele anatomice i ptrund n esuturi !e5emplu0 =. 9oli ce face parte din
flora normal a intestinului, ptruns la nivelul cilor urinare, va determina infecie la
acest nivel%.
&e remarcat, este faptul c nu orice contaminare este urmat7 de in5ec;ie. "pariia
sau nu a infeciei este condi;ionat7 de )radul de pato)enitate 6i num7rul bacteriilor
contaminante% de starea de rezisten;7 a or)anismului, la r6ndul ei in5luen;at7 de
5actorii de mediu e*tern !umezeala e5cesiv, e5tremele de temperatur pot favoriza
apariia unor infecii%. $e de alt parte, agenii infecio#i "in flora normal! a
organismli, care nu pro"c infecii la individul sntos, le vor produce la persoanele
c re'istena general! a organismli sc!'t! !subnutriie, carena de vitamine, oboseal,
sarcin%, la pacienii c anmite boli en"ocrine !diabet, hipotiroidie, insuficien
suprarenal etc.%, n crsl tratamentelor imnospresive sau la pacienii c "eficiene
imne genetice sa "ob(n"ite etc.
1.*. 2TRUNDEREA GERMENILOR ?N ORGANISM 72OARTA DE INTRARE8
$oarta de intrare este locul de colonizare 91nmul;ire: primar7 6i p7trundere a
microbului 1n or)anism. "ceast poart poate fi o mucoas sau tegumentul, intacte sau
lezate. :nele specii au poart! "e intrare nic! #i foarte specific!, altele au pori "e
intrare mltiple. "ceste diferene sunt condiionate0 de srsa #i calea "e contaminare& "e
con"iiile "e %nmlire oferite "e fiecare mcoas! sa tegment !pS, temperatur, grad de
umiditate%, ca i de e-istena nor receptori cellari specifici pe care microbii se fi5eaz
n mod selectiv.
=5emple de bacterii cu /oar$4 (& in$rar& uni#40 bacill tific& vibrionl holeric,
produc infecia numai dac a'ung n organism pe cale digestiv/ speciile Shigella
infecteaz numai prin mucoasa colonului/ gonococl #i Treponema palli"m, pentru a
produce bolile venerice, ptrund prin mucoasa genital i n mod e5cepional pe alte ci.
=5emple de bacterii care pot ptrunde n organism pe ,ai ,ul$& #4i, determin6nd infecii
cu diferite localizri0 ?acills anthracis& ,ycobacterim tberclosis& Kersinia pestis.
7n funcie de specie, tulpin i variant genetic a bacteriei infectante,
microorganismele ptrund n organismul gazd pe diferite ci0
- #al&a r&s/ira$ori&0 streptococii 0hemolitici& stafilococi patogeni& pnemococi&
meningococi& Corynebacterim "iphteriae& ?acills anthracis& ?or"etella pertssis&
7aemophils inflen'ae& Pasterella pestis.
- #al&a (i9&s$iv40 Salmonella& Shigella& vibrionl holeric& Escherichia coli& ?acills
anthracis& Clostri"im botlinm& stafilococi& streptococi.
- #al&a 9&ni$al40 gonococi& 7aemophils "creyi& Treponema palli"m.
- #al&a #u$ana$4 !soluii de continuitate de la nivelul pielii%0 streptococi 0hemolitici&
stafilococi patogeni& Corynebacterim "iphteriae& ?acills anthracis.
- #4i urinar&0 Escherichia coli& Protes& 8lebsiella& Pse"omonas aerginosa&
streptococi "e grp * 9enterococi:>
:nele microor)anisme pot trece direct prin pielea intact7% datorit7 unor mi6c7ri
de 1n6urubare, cum este cazul bacteriilor spiralate ale genului <eptospira. "ltele pot
traversa epiteliul mucoasei respiratorii, digestive, a tractului genito-urinar, con'unctiva.
Microorganismele care reuesc s ptrund pe aceste ci dispun de mecanisme speciale
de aderen, ce depesc mecanismele rezistenei naturale !lacrimi, mucus, micrile
cililor vibratili%.
"li ageni infecioi p7trund direct 1n s=n)e sau ;esuturile pro5unde prin le'ini
tramatice, m#c!tra nor animale !virsl rabic%, %nep!tra nor insecte !Kersinia
pestis& Plasmo"im falciparm% sau acte me"icale !in'ecii, transfuzii% efectuate fr
respectarea normelor de asepsie !7IJ& virsl hepatitei ?& C& ricHettsii, etc.%
1.A. MULTI2LICAREA GERMENILOR
1umrul de microorganisme care ptrund n organism !mrimea inoculului% este
prea mic, n mod obinuit, pentru a iniia infecia. "genii infecioi trebuie s nving
mecanismele de aprare antiinfecioas ale gazdei i s se nmuleasc la un nivel
corespunztor pentru a produce simptome. "ndi5erent de )radul ei de pato)enitate, este
necesar7 adaptarea bacteriei la noile condi;ii oferite la poarta de intrare0 c6nd acestea
sunt favorabile, bacteria se %nmle#te #i secret! factori en'imatici "e virlen! #i neori
to-ine care vor determina leziunea iniial. 9u c6t bacteria este mai patogen!& c at(t
este necesar n nm!r mai re"s pentr a "eclan#a infecia !pesta& brcelo'a&
leptospiro'a%/ n schimb, este necesar un numr mare de bacterii pentru a produce, de
e5emplu, febra tifoi"!& lepra.
Multiplicarea microorganismelor se poate face intracellar sau e-tracellar.
#icroor)anismele cu habitat e*tracelular sunt supuse ac;iunii complementului 9C:%
lizozimului% anticorpilor% 5a)ocitozei etc., pe c6nd cele cu habitat intracelular sunt
prote'ate de aceti factori. =liminarea din organism a microorganismelor cu habitat
intracelular se face prin distrugerea celulelor n care se afl, ceea ce duce la producerea
de leziuni tisulare.
1.D. LOCALI3AREA INFECGIEI
:nele bacterii rm6n localizate la poarta de intrare 6i se multiplic7 numai 1ntr3o
zon7 relativ limitat7, fr a invada organismul - %a#$&rii n&inva(an$&. =5emplu0
bacteriile to*i)ene !speciile genli Clostri"im& Corynebacterim "iphteriae&
Salmonalla& Shigella& vibrionl holeric%. &up multiplicarea la poarta de intrare a
microorganismului, este secretat7 to*ina care este vehiculat de s6nge n organism,
to5in care este responsabil de apariia bolii. 7n cazul bacilli botlinic, acesta i
secret to5ina numai n condiii de anaerobioz, la +89 !n conservele alimentare%, fr
s ptrund n organism, boala fiind practic o into5icaie ce se produce prin consumul
alimentelor conservate.
7n cazul altor bacterii, in5ec;ia se poate propa)a de la poarta de intrare prin
conti)uitate !din aproape n aproape% i prin diseminare la distan;7 pe cale san)uin7
sauJ6i lim5atic7, cu 5i*area )ermenilor 1n anumite zone de elec;ie. 7n acest caz rezult
infecia sistemic sau generalizat. Cacteriile se numesc %a#$&rii inva(an$& !Salmonella
typhi& E> coli patogen& stafilococii patogeni%.
Mnfeciile bacteriene cu caracter invadant prezint + faze distincte0
- fa'a (& inva(ar& a 5&su$urilor @nv&#ina$& /or5ii (& in$rar&, nsoit sau nu, de
reacia ganglionilor limfatici loco-regionali/
- fa'a (& 9&n&rali'ar& a inf&#5i&i, pe cale sanguin i[sau limfatic, cu apariia
bacteriemiei !prezena n s6nge a bacteriei infectante%. 96nd prezena bacteriilor n s6nge
se soldeaz cu multiplicri secundare, cu focare de diseminare n esuturi, apare
septicemia/
- fa'a (& #an$onar& @n 'on&l& (& &l&#5i&. =5emplu0 meningococii 9+eisseria
meningiti"is: ptrund pe cale respiratorie, apoi trec n circulaie, pentru ca, n final, s se
fi5eze la nivelul meningelui/ pnemococii 9*iplococcs pnemoniae: ptrund pe cale
respiratorie i se fi5eaz la nivelul arborelui bronho-alveolar sau la nivelul meningelui/
speciile familiei Enterobacteriaceae ptrund pe cale digestiv i rm6n cantonate n
intestin, chiar dac n unele cazuri prezint i descrcri bacteriemice.
2a cele dou categorii de bacterii !neinvadante i invadante% se adaug a treia
categorie, %a#$&riil& s&nsi%ili'an$&, care prin infecie sensibilizeaz organismul. "cesta
va rspunde prin reacii imunopatologice ce i sunt nocive i genereaz leziuni. =5emplu0
bacill tberclos.
7n plus, e5ist posibilitatea ca aceea6i bacterie s7 5ie 1n acela6i timp invaziv7%
to*i)en7 6i sensibilizant7. :n astfel de e5emplu este Streptococcs pyogenes, dotat cu
enzime invazive, cu capacitatea de a secreta eritroto5ina !responsabil de apariia
scarlatinei% i de a produce prin mecanism alergic cardita reumatismal, reumatismul
poliarticular acut, glomerulonefrita acut difuz.
*. AS2ECTELE CLINICE )I ETA2ELE E"OLUTI"E ALE INFECGIEI
#ani5est7rile clinice ale in5ec;iei sunt multiple, fiind influenate de o serie de
variabile, cum sunt0 factorii genetici ai ga'"ei #i ai agenilor infecio#i& "o'a infectant!&
calea "e p!trn"ere& factorii "e patogenitate ai microbilor& re'istena antiinfecioas! a
ga'"ei& factorii "e me"i etc.
&in punct de vedere al manifestrilor clinice, infeciile bacteriene pot fi0 inaparente,
latente i aparente.
1 Inf&#5ii ina/ar&n$&, evolueaz7 asimptomatic !fr semne clinice evidente dei
germenul este prezent n organism%, dar prezen;a ei se con5irm7 prin reac;ii serolo)ice
sau intradermoreac;ii 9"(R: pozitive, ceea ce atest contactul organismului cu acel
antigen !bacterie, virus, fung% i deci instalarea imunitii. "prute n mod spontan,
infeciile inaparente realizeaz ?imuniz7rile oculte@ n masa populaiei. :neori ns,
astfel de persoane reprezint o surs7 de in5ec;ie pentru colectivitate !^purttori
sntoiK%.
1 Inf&#5iil& la$&n$& nu se mani5est7 clinic, de6i a)en;ii in5ec;io6i !bacterii, virusuri sau
protozoare%, pot persista vii 1n or)anism timp 1ndelun)at. Mnfecia se poate ns activa i
deveni clinic evident datorit unor 5actori 5avorizan;i. &e e5emplu0 herpesl este activat
de o iritaie mecanic local, febr, cldur e5cesiv, stress, ultraviolete etc. ?rcelo'a&
sifilisl& tberclo'a pot prezenta perioade de laten cu recidive posibile, manifestate
clinic. :nele infecii latente virale pot produce transformri celulare p6n la tumori
!virsri oncogene& v> 7erpes tip 3& v> Citomegalic%.
1 Inf&#5ii a/ar&n$& #lini# care pot fi, dup sediul unde evolueaz infecia, localizate sau
generalizate.
"n5ec;iile localizate sunt acele infecii n care bacteria se 1nmul;e6te la poarta de
intrare 6i determin7 leziuni minime0 abcese& frncle& flegmoane& angine, etc.
&epiind poarta de intrare, unele bacterii produc in5ec;ia numai dac7 a<un) 1n or)anul
de elec;ie0 bacill tific i vibrionl holeric n intestinul subire, bacill "i'enteric n
colon, unde se nmulesc i determin simptomele de boal.
7n unele cazuri in5ec;ia pro)reseaz7 din aproape 1n aproape !prin contiguitate%
a5ect=nd ;esuturile vecine0 infecia rinofaringelui poate invada cile respiratorii
superioare !bronhiile% i apoi chiar pe cele inferioare, alveolele pulmonare !zon normal
steril% determin6nd pneumonii i bronhopneumonii. &e asemenea, infecia vaginal
netratat, se poate e5tinde p6n la uter i ane5e/ procesele inflamatorii apendiculare
genereaz peritonite.
"n5ec;ii )eneralizate& :neori, n absena tratamentului, in5ec;ia se poate )eneraliza
pe cale san)uin7 sau lim5atic7, determin6nd bacteriemii sau septicemii.
BACTERIEMIA este p7trunderea 1n s=n)e a unui num7r redus de bacterii, 1ntr3
un interval de timp limitat% 57r7 mani5estare clinic7 important, organismul nving6nd
de obicei infecia. Cacteriemia este fie discontinu7, c6nd bacteriile snt mobili'ate "intr0
n focar septic acut !pneumonie%, sau subacut !osteomielit%, fie 5u)ar7, c6nd bacteriile
sunt aspirate printr-o ruptur vascular posttraumatic, chirurgical, poste5tracional
!stomatologie%. :neori ns, bacteriemia e5plic localizarea tardiv a unei infecii, spre
e5emplu tuberculoza osoas consecutiv infeciei pulmonare.
SE2TICEMIA este rev7rsarea permanent7 sau intermitent7 1n s=n)e a unor
bacterii dintr3un 5ocar in5ec;ios e*istent0 endocardita bacterian, abces care comunic cu
un vas sanguin, un cateter venos infectat, etc. Depticemia se nsoete de febr
caracteristic, frison i o stare general alterat care necesit tratament de urgen.
Localizarea secundar7 a in5ec;iei netratate sau incorect tratate 1n diverse or)ane,
constituie s&/$i#o1/io&,ia !dat de bacterii pioemice cu nmulire e5tracelular% sau
9ranulia !dat de bacterii facultativ intracelulare%. Depticemia este nsoit cel mai adesea
de T$o6&,i&=, datorat di5uziei concomitente de e*oenzime3a)resine% to*ine !endoto5ina
bacteriilor Lram negative c6nd se produce o liz masiv a acestora n s6nge%, produi de
catabolism i alterare tisular.
Mnfeciile generalizate evolueaz n mai multe etape0
a. E$a/a 7/&rioa(a8 (& in#u%a5i&0 intervalul parcurs de la p7trunderea )ermenului
in5ectant 1n or)anism p=n7 la apari;ia primelor simptome de boal. &urata ei !ore, zile,
sptm6ni% depinde at6t de microorganism !specie sau tulpin% c6t i de rezistena
organismului. 7n general, cu c6t perioa"a "e incbaie este mai scrt!& bacteria este mai
virlent! #i infecia mai sever!.
7n funcie de durata medie a perioadei de incubaie e5ist0
- boli cu in#u%a5i& s#ur$4, 1- zile0 to-iinfecii alimentare& meningite& "ifteria&
gonoreea/
- boli cu in#u%a5i& ,&(i&, 8-,1 zile0 febra tifoi"!& tetanos etc./
- boli cu in#u%a5i& lun94, zeci de zile0 hepatita ? !*8-188 zile%/
- boli cu in#u%a5i& foar$& lun94: ani (& 'il&0 tberclo'a& lepra& SI*A.
:nele boli au o perioad fi5 de incubaie0 r$eola& rbeola& variola& varicela.
%. D&%u$ul %olii reprezint momentul apari;iei primelor semne de boal7, de regul
necaracteristice0 febr, scderea apetitului, stare general alterat, dureri de cap, dureri
musculare, articulare etc. &ebutul poate fi brusc sau insidios.
#. 2&rioa(a (& s$ar& se caracterizeaz prin apari;ia semnelor clinice 6i paraclinice
speci5ice bolii !digestive, respiratorii, manifestri cutanate, semne de iritaie meningeal
etc.%
(. 2&rioa(a (& (&#lin 7(&f&rv&s#&n5480 n cazul unei evoluii favorabile semnele ma<ore
ale bolii diminu7 p=n7 la dispari;ia total7, brusc, in crisis !ca n pneumonia
pneumococic% sau lent, progresiv, in lisis !ca n febra tifoid%.
&. 2&rioa(a (& #onval&s#&n54 este perioada 1n care se re5ac leziunile 6i se restabilesc
5unc;iile perturbate. =ste o perioad foarte important pentru c acum pot aprea0
recderi, complicaii, cronicizarea infeciei.
7n cazul unei &volu5ii favora%il& se produce vindecarea% cu sau 57r7 sechele. &e
regul, vindecarea poate fi total, ns n anumite cazuri, bolnavul poate rm6ne purttor
de germeni sau poate s prezinte sechele funcionale sau organice. 7n cazul unei &volu5ii
n&favora%il&, boala evolueaz spre e*itus sau cronicizare.
7n cazul vindecrii trebuie fcut distincia 1ntre vindecarea clinic7 i cea bacteriolo)ic7,
care nu se suprapun totdeauna. .indecarea bacteriolo)ic7 reprezint momentl c(n" n
se mai i'olea'! germenl ca'al %n pro"sele bolnavli. &ac are loc vin"ecarea
clinic!& "ar n #i cea bacteriologic! !germenul se izoleaz din produsele fostului bolnav
dup dispariia semnelor clinice%, apare s$ar&a (& </ur$4$or= !e5emplu0 Salmonella&
Shigella& E> coli patogen%.
A. EFECTELE NOCI"E ALE INFECGIEI
>&2& Alter7ri or)anice 6i 5unc;ionale determinate de a)entul in5ec;ios
Al$&r4ril& ,&#ani#& 7o%s$ru#5ii8 se datoreaz reac;iei in5lamatorii a )azdei ca
rspuns la prezena microorganismului !e5emplu0 n "ifterie obstruarea cilor respiratorii
prin falsele membrane%.
Dis$ru#5i& #&lular4. Efectl "istrctiv depinde de celulele implicate, de numrul lor
i de viteza evoluiei infeciei. "ceast distrucie celular are loc prin enzimele eliberate
de microor)anisme !hemolizine, leucocidine%, dar n special prin to*inele acestora.
:nele to5ine acioneaz n apropierea por;ii de intrare !Shigella% sau ac;ioneaz7 la
distan;7 de locul unde sunt produse !Corynebacterim "iphteriae%.
Al$&r4ri al& ,&$a%olis,ului #&lular apar n unele in5ec;ii care evolueaz7 57r7
leziuni celulare. Dunt cauzate de to*inele eliberate de bacterii0 tetanos !to5ina determin
modificri ale metabolismului celulelor motoare produc6nd paralizii spastice%/ botlism
!to5ina botulinic mpiedic eliberarea de acetilcolin la nivelul sinapselor colinergice
produc6nd paralizia flasc%/ holer!& "iareea malign! a no0n!sctli !to5inele
-vibrionului holeric, =. coli enteroto5igen- determin creterea nivelului "M$-ului ciclic
n celulele epiteliului intestinal, cu eliminarea unor cantiti mari de ap n intestin cu
apariia diareei%.
>&8& Alter7ri datorate reac;iilor de ap7rare antiin5ec;ioase
Dimptomele infeciilor sunt produse nu numai de microorganismul infectant, ci i
de reaciile gazdei.
2uroiul este o consecin;7 a in5lama;iei i const dintr-un amestec de leucocite vii
6i distruse% bacterii% e*udat. =l rezult prin migrarea rapid a leucocitelor !n special
granulocite neutrofile% n focarul infecios, sub aciunea unor stimuli chemotactici. $rin
distrugerea leucocitelor se elibereaz hidrolaze din )ranula;iile lizozomale care lezeaz
esuturile nvecinate, cu e5tinderea zonei afectate.
A%#&sul rezult atunci c6nd puroiul se constituie 1ntr3o colec;ie. 7n cazul e5istenei
unor deficiene genetice ale funciilor leucocitelor, pot apare infecii purulente recurente,
chiar n prezena unui tratament corect cu antibiotice.
F&%ra. ) temperatur mai mare de +9 atrage atenia asupra posibilitii
e5istenei unui proces infecios. 7ns, lipsa febrei nu e5clude o infecie, dup cum, nici
prezena febrei nu definete o infecie !febr prin mari distrucii celulare%. "sigur
mobilizarea mi<loacelor de lupt7 ale or)anismului, prin activarea metabolismului 6i a
circula;iei san)uine. Mecanismul producerii febrei recunoate e-citarea centrilor
termoreglatori& c pre"ominena termogene'ei& prin "iferite citoHine0 interleu4in-1!M2-
1%, factorul de necroz tumoral, alfa interferon. &e asemenea, doze mici ale
en"oto-inelor bacteriilor 6ram negative produc febr, n timp ce dozele mari induc ocul
endoto5ic i coagulare intravascular diseminat.
R4s/unsul i,un, at6t umoral c6t i celular, n anumite condiii i c6nd depete
anumite limite fiziologice, poate avea un efect nociv asupra organismului.
3 R7spunsul imun umoral. 7nfeciile induc 5ormarea de anticorpi speci5ici. "nticorpii se
combin cu antigenele infecioase sau unele produse ale acestora !to5ine, enzime%.
9omple5ele antigen-anticorp induc un rspuns inflamator, prin intermediul sistemului
complementului, n scopul eliminrii agentului infecios sau neutralizrii produilor lor
to5ici.
2a persoanele cu predispoziie alergic, r7spunsul imun umoral nu are
1ntotdeauna un e5ect protector. 7n aceste cazuri, se poate produce sensibilizarea
or)anismului fa de antigenele bacteriene cu apariia strii de hipersensibilitate
mediat7 umoral 9de tip "% ""% """:. =5emplu0 complicaiile alergice poststreptococice
!cardita reumatismal n care apare starea de hipersensibilitate de tip MM i
glomerulonefrita acut difuz n care apare starea de hipersensibilitate de tip MMM%.
3 R7spunsul imun celular este mediat de lim5ocitele T citoto*ice% ! 9uci)a6e:% N!
9natural uci)a6e: i macro5a)e. "tunci c6nd acesta depete n intensitate limitele
fiziologice este asociat cu in5lama;ia cronic7. "cest aspect se nt6lnete frecvent n
infeciile cu germeni cu habitat predominent intracelular !tberclo'!& lepr!% i infeciile
virale.
MECANISMELE DE BA3 ALE 2ROCESULUI INFECGIOS
Procesul in5ec;ios se realizeaz prin ac;iunea combinat7% anta)onist7, a dou categorii
de factori0 5actorii de pato)enitate ai bacteriei 6i 5actorii de rezisten;7 ai or)anismului
in5ectat.
.> IACTORII *E PATO6E+ITATE AI ?ACTERIEI
$atogenitatea se definete prin capacitatea unor bacterii de a produce boal7. 7n
cazul bacteriilor, patogenitatea se e5prim prin dou proprieti ale germenului0 virulen
i to5inogenez.
1.1. "IRULENGA
=ste capacitatea unei bacterii de a p7trunde% a se adapta% a se multiplica% a
invada 6i a determina leziuni speci5ice 1n ;esuturile pentru care are tropism !invazie
microbian%. Girulena este un caracter de tulpin7. =5emple0 n cadrul speciei
Corynebacterim "iphteriae e5ist tulpini to5igene virulente i tulpini neto5igene, deci
nepatogene/ patogenitatea tulpinilor de pneumococ variaz n funcie de cantitatea
materialului capsular.
.irulen;a unei tulpini microbiene se apreciaz7 prin compara;ie cu o tulpin7
standard a crei virulen este cunoscut i se e5prim prin (L# !doza letal minim%
sau (LI4 !doza letal medie%. &2M este nm!rl total "e germeni necesari sa
cantitatea "e to-in! necesar! pentr a omor% toate animalele "intr0n lot e-perimental,
iar &2.8 nm!rl "e germeni sa cantitatea "e to-in! necesar! pentr a omor% 1/5
"intr0n lot "e animale e-perimentale.
Girulena se realizeaz prin factori corpusculari i factori enzimatici.
1.1.1. FACTORII DE "IRULENG COR2USCULARI
"ceti factori sunt le)a;i de anumite elemente din structura celulei bacteriene,
elemente care confer bacteriei protecie mpotriva mi'loacelor de aprare ale
organismului i favorizeaz ptrunderea n esuturi.
a. Ca/sula
"re e5ect anti5a)ocitar !inhib nglobarea bacteriilor de ctre fagocite%, 5avoriz=nd
invazia microbului 1n ;esuturi. "cioneaz, de asemenea, i 1mpotriva anticorpilor locali
sau altor substan;e bactericide. =5emple de bacterii capsulate0 pnemococl !materialul
capsular este de natur polizaharidic%, bacill c!rbnos !de natur polipeptidic%, nele
tlpini "e stafilococi i streptococi& 8lebsiella pnemoniae& Clostri"im perfringens.
:nele bacterii !Blebsiella, bacilul crbunos%, dei mai virulente c6nd sunt capsulate,
posed i ali factori de patogenitate.
b> Comp#i ai pereteli bacterian
Anumite componente situate n straturile superficiale ale bacteriei% imprim7
acesteia o virulen;7 deosebit7% av=nd rol antifagocitar& '*empleH proteina , de la
s$r&/$o#o#ul 1+&,oli$i# 9ru/ A% factorl parietal "e virlen! de la s$afilo#o#ul
aur&u% factorl cor" de la %a#ilul Jo#+% factorl "e ata#are la mcoasa intestinal! la E
#oli /a$o9&n 6i S+i9&lla% antigenl Ji 9"e %nveli#: la unele tulpini (& %a#il $ifi#&
#. Mo%ili$a$&a
-acteriile mobile sunt mai virulente dec=t cele imobile. Mobilitatea deosebit a
treponemelor !spirochete% i leptospirelor !spirili%, care ptrund n organism prin pielea i
mucoasele intacte, este realizat prin micrile de tirbuon ale corpului celular.
Mobilitatea poate fi realizat i prin intermediul cililor, fie ca atribut de specie !la
Protes% fie consecutiv activrii aderenei la mucoasa intestinal prin cili !caracter indus
de plasmida Hde colonizareK la E> coli patogen%.
(. Fi,%riil&
)ligomeri proteici ce apar ca apendici filamentoi la suprafaa celulei bacteriene,
fimbriile au rol n ata6area )ermenilor pe receptorii de pe supra5a;a celulelor
susceptibile de la poarta de intrare. Dtructurile principale bacteriene care pot funciona
ca adezine sunt0
1 /ilii #o,uni 7a(&'in& /ilial&8 care permit o aderare crescut7 de celulele epiteliale.
=5emple0 5imbriile P !prezente la tlpinile "e Escherichia coli pielonefritogene%/
5imbriile S !la tlpinile "e E> Coli implicate %n meningite%/ 5imbriile !GG 6i !GK !la
tlpinile "e E> Coli enteroto-igene ce produc diareea malign a nou-nscutului%/ 5imbriile
ce con;in N3metil5enilalanin7 !la unele bacterii 6ram negative& la Pse"omonas&
+eisseria& ?acteroi"es& Jibrio%. 7n plus, e5ist posibilitatea ca aceeai tulpin bacterian
s conin mai multe tipuri de adezine ce sunt codificate de anumite zone cromozomiale
sau plasmidice. "ceast diversitate genetic permite adaptarea tulpinii la condiiile
diferite oferite de organismul gazd.
1 a(&'in& n&/ilial&, ca de e5emplu, )licocali*ul% microcapsula% proteine de membran7
e*tern7 la bacteriile Lram negative, ca i unele substan;e din or)anism. ) astfel de
substan care are proprietatea de a adera la suprafeele mucoase este 5ibronectina, o
glicoprotein plasmatic ce se gsete n spaiul e5tracelular. :nele bacterii care ptrund
n organism ader la r6ndul lor de fibronectin i, prin intermediul ei, de suprafaa
celulelor epiteliale. "stfel de microorganisme sunt Streptococcs pyogenes&
Staphilococcs ares& Treponema palli"m>
1.1.*. FACTORI EN3IMATICI DE "IRULENG 7EXOEN3IME8
Dunt substan;e elaborate de bacteria in5ectant7 6i eliminate 1na5ara ei, care
determin modificarea esuturilor locale, favoriz6nd diseminarea bacteriilor 1n
or)anism, din aproape n aproape, cu invadarea ;esuturilor dincolo de poarta de intrare.
a. Coa9ula'a
=nzim secretat de stafilococii patogeni, care, in vitro, coaguleaz plasma citratat
!test important de patogenitate%. 7n organism ea favorizeaz 5ormarea 1n 5ocarul
in5lamator a unei ?pelicule@ de 5ibrin7 care prote$ea'! germenii %mpotriva fagocit!rii #i
altor factori "e ap!rare nespecific! #i specific!.
%. Fi%rinoli'ina
=nzim activatoare de plasminogen !H4inazK%, care determin di)estia 5ibrinei din
5ocarul in5lamator, astfel nc6t bacteriile pot strbate aceast barier. 9apacitatea de
elaborare a fibrinolizinei reprezint unul din testele de patogenitate pentru unii germeni
!e5emplu0 stafilococi patogeni& streptococi patogeni%.
#. >ialuroni(a'a
(epolimerizeaz7 acidul hialuronic din substana fundamental a esutului
con'unctiv i din cimentul intercelular al epiteliilor, poten;eaz7 invazivitatea )ermenilor.
=5emplu0 stafilococl are& streptococl 0hemolitic grp A& Clostri"im perfringens.
(. En'i,& +i(roli$i#&
&in grupul acestor enzime fac parte0 colagena'ele& lecitina'ele& neramini"a'ele&
lipa'ele& protea'ele& nclea'ele.
- Cola9&na'a: enzim proteolitic de depolimerizare a cola)enului "in estl
con$nctiv. =5emplu0 Clostri"im perfringens.
- L&#i$ina'a 7<alfa1$o6ina=8 care determin hidroliza lecitinei "in membranele
cellare. =5emplu0 Clostri"im perfringens.
- N&ura,ini(a'a: prezent la multe bacterii i virusuri, hidrolizeaz7 mucoproteinele
"e pe sprafaa cellelor, e5pun6ndu-le atacului.
&. En'i,& #i$oli$i#&
&in categoria enzimelor citolitice fac parte hemolizinele i leucocidinele, enzime
cu efect hemolitic sau de distrugere a leucocitelor. "u e5ect anti5a)ocitar% 5avoriz=nd
indirect invazia. =5emplu0 streptoli'inele streptococli 0hemolitic grp A !streptolizina
V)K i streptolizina VDK%/ hemoli'inele intrinseci0 0hemoli'ine responsabile de hemoliza
complet/ 0hemoli'ine responsabile de hemoliza incomplet.
$e l6ng bacteriile cu habitat e*tracelular, bacterii care sunt supuse, cu succes,
mecanismelor de aprare antiinfecioas a organismului, e5ist i bacterii cu habitat
intracelular0 5acultativ intracelular !bacill 8och& ?rcella% i obli)atoriu intracelular
!Chlamy"ia trachomatis%. $rezena lor intracelular le asigur protec;ie 1mpotriva
mi<loacelor de ap7rare ale or)anismului% inclusiv cele imune. Cacteriile cu habitat
intracelular sunt cele mai invazive bacterii deoarece, supravie;uirea lor 1n diverse celule
i mai ales n fagocite, 5avorizeaz7 diseminarea lor 1n or)anism. $trunse n celulele
fagocitare, bacteriile a'ung la ganglionii limfatici i apoi n circulaia general, unele
dintre ele trec6nd, la adpostul fagocitelor, chiar bariera hematoencefalic.
.>3> TOLI+O6E+EMA
=ste definit drept capacitatea unor )ermeni de a elabora to*ine, substan;e
solubile cu e5ect to*ic pentru esuturile organismului infectat. =le se mpart n e5oto5ine
i endoto5ine.
1.*.1. EXOTOXINELE
Dunt substan;e to*ice !proteine solubile i filtrabile%, eliberate de bacteria vie 1n
mediul ambiant al )ermenului0 fie n mediul de cultur fie n organismul infectat.
Dunt elaborate n special de bacterii 0ram pozitive i prezint o ac;iune strict
speci5ic7, determin6nd manifestri clinice caracteristice.
a. 2ro/ri&$45i fi'i#o1#+i,i#&
- sunt holoproteine termolabile !e5cepii0 to5ina botulinic ce este nalt termostabil,
enteroto5ina stafilococic%/
- se transform prin nvechire i sub aciunea formolului !;F8% n vaccinuri eficiente,
to-oi'ii0anato-ine, produi neto5ici, cu imunogenitate pstrat/
- sunt sensibile la ra"iaii #i variaii "e p7.
%. 2ro/ri&$45i %iolo9i#&
To-icitate
"precierea gradului de to5icitate se face prin stabilirea valorii &2M !doza letal
minim%. =fectele to5ice apar dup o perioad de laten, puterea to*ic7 este mare% doza
letal7 minim7 este mic7. De distinge net tropismul selectiv pentru anumite teritorii0
- n&uro$ro/is,0 to-ina botlinic!& to-ina tetanic!& to-ina "ifteric!/
- ,io$ro/is,0 to-ina "ifteric!/
- &n$&ro$ro/is,0 enteroto-ina stafilococli& enteroto-ina vibrionli holeric& E> coli
patogen& Shigella "ysenteriae/
- (&r,o$ro/is,0 e-oto-ina bacilli c!rbnos& eritroto-ina/
- $ro/is, /&n$ru ,u#oasa #4ilor r&s/ira$orii0 to-ina "ifteric!& to-ina secretat! "e
?or"etella pertssis>
$entru unele specii bacteriene, e*oto*inele pot reprezenta unicul 5actor de
pato)enitate responsabil de toat simptomatologia bolii !Corynebacterim "iphteriae,
Clostri"im tetani& Clostri"im botlinm:. $entru alte bacterii !bacill c!rbnos&
stafilococ% e*oto*ina completeaz7 doar ceilal;i 5actori de pato)enitate !numai unii dintre
stafilococii patogeni sunt enteroto5ici, produc6nd to5iinfecii alimentare%.
Antigenitate
Au speci5icitate anti)enic7 1nalt7% sunt puternic imunogene, sunt neutralizabile
prin anticorpi specifici&
1.*.*. ENDOTOXINELE
Dunt produ6i to*ici prezen;i la bacilii 0ram ne)ativi& f!c(n" parte integrant! "in
strctra lor #i care se pn %n libertate nmai "p! moartea 9li'a: acestor bacterii.
'ndoto*ina este lipopolizaharidul 9LPS: din membrana e*tern7 a peretelui
celular al acestor bacterii i 'oac un rol important n patogenia infeciilor produse de
aceste microorganisme. =5emplu la enterobacterii comple5ul glucido-lipido-polipeptidic0
Salmonella typhi& E> Coli& Shigella& K> pestis>
a. 2ro/ri&$45i fi'i#o1#+i,i#&
3 sunt heteroproteine !proteine comple5e% formate dintr-un suport de proteine simple
plus o grupare prostetic !de obicei de natur lipido-glucidic%. Ma'oritatea
endoto5inelor sunt comple5e glucido-lipido-polipeptidice/
3 sunt solbile, dar nu difuzeaz n mediul ambiant al germenului !ele se elibereaz
numai odat cu liza celulei bacteriene%/
3 sunt termostabile/
3 re'istente la tratamentl c alcool/
3 n se transform! %n to-oi'i sub aciunea formolului.
%. 2ro/ri&$45i %iolo9i#&
To-icitate
To5icitatea endoto5inelor este mai redus comparativ cu cea a e5oto5inelor. (oza
letal7 minim7 este mare& '5ectele to*ice au loc 57r7 perioad7 de laten;7. "u un tropism
mai di5uz, manifestrile to5ice sunt variate0
3 $ul%ur4ri +&,o(ina,i#& la nivelul capilarelor i arteriolelor, p6n la colaps
periferic/
3 ,o(ifi#4ri al& for,ul&i l&u#o#i$ar& !leucopenie%/
3 &f&#$ +i/&r9li#&,ian$/
3 f&%ra, "eterminat! "e eliberarea "in macrofage !sub aciunea endoto5inelor% a
pirogenilor en"ogeni !M2-1, T1E% care acioneaz pe centrii termoreglrii din
hipotalamus/
3 a#$ivar&a #o,/l&,&n$ului /& #al& al$&rna$iv4, ceea ce favori'ea'! chemota-ia
fagocitelor %n focarl infecios c li'a bacteriilor/
3 a#$ivar&a ,a#rofa9&lor care vor secreta en'ime li'o'omale n cantiti crescute, cu
creterea capacitii lor fagocitare /
3 a#$ivar&a li,fo#i$&lor B cu accentarea pro"cerii "e anticorpi/
3 #oa9ular& (is&,ina$4 in$ravas#ular4, datorit activ!rii sistemli coagl!rii prin
factorul (MM Sageman.
7n #an$i$45i ,i#i determin reac;ii de alarm7 bene5ice or)anismului !febr,
activarea 9 pe cale alternativ, activarea macrofagelor, stimularea limfocitelor C%, n
timp ce n #an$i$45i ,ari, determin 6ocul endoto*ic 5atal, fie prin aciunea direct a
endoto5inei, fie prin substanele eliberate de neutrofile n urma lizei lor datorat
endoto5inei bacteriene. #ocul endoto5ic !clinic0 hipotensiune, coagulare intravascular
diseminat% poate aprea i n cazul administrrii unor perfuzii n care endoto5ina provine
de la bacili Lram negativi omor6i prin sterilizare !figura 1%.
CA%*B%, rezultat n urma clivrii fiziologice, se lea)7 de supra5a;a bacteriilor% 5iind
prote<at ast5el de inactivare. 2a stabilizarea 9+b,Cb particip i o protein plasmatic,
/ro/&r(ina 728/
deci activarea complementului pe calea alternativ este rezultatul stabilizrii 9+b,Cb
!a 9+ convertazei% ce poate fi determinat, printre altele, de prezena bacteriilor.
3> IACTORII *E REMISTE+NO A OR6A+IS,P<PI I+IECTAT
)rganismul este e5pus n toate etapele vieii la diferite infecii, cea mai mare
receptivitate nt6lnindu-se la copii sub 1 an i btr6ni. 2a aceste v6rste e5treme infeciile
evolueaz de obicei mai sever, datorit posibilitilor mai reduse de aprare ale
organismului. :nele boli endocrine !diabet, hipotiroidie, insuficien suprarenal%,
subnutriia, carena de vitamine, oboseala, sarcina, etc., scad rezistena general a
organismului, favoriz6nd apariia diferitelor infecii.
)rganismul gazd poate contribui la desfurarea procesului infecios prin
mecanisme de rezisten nespecific i specific !tabel ,%.
- R&'is$&n5a n&s/&#ifi#4, na$ural4: @nn4s#u$4 fa de agenii infecioi este comun
tuturor indivizilor unei specii/
- R&'is$&n5a s/&#ifi#4: (o%@n(i$4 7i,uni$a$&a an$iinf&#5ioas48 se dezvolt pe
parcursul vieii, ca urmare a contaminrii continue cu diveri ageni infecioi.
Ti/uri (&
r&'is$&n54
E6&,/l&
1atural,
nscut,
nespecific
&obndit natural
&obndit
- Carierele e5terne !mecanic, chimic,
biologic%/
- Eactori interni umorali !sistemul
complementului% i celulari !inflamaia,
fagocitoza%.
- Transfer placentar de anticorpi de la
mam la ft !pasiv%/
- &up contactul cu un agent infecios.
artificial - "dministrare de antito5ine !pasiv%/
- Gaccinare !activ%.
Tabel ,0 Tipuri de rezisten !dup Moldovan Ao5ana, 1<<%
Mecanismele rezistenei naturale sunt distincte de cele ale rezistenei dobndite, dar,
ele nu pot fi separate, deoarece se intric i acioneaz sinergic.
*.1. RE3ISTENGA NES2ECIFIC 7NATURAL: ?NNSCUT: DE S2ECIE8
Aeprezint starea "e re'isten! c care snt "otai toi in"ivi'ii nei specii fa! "e
anmii ageni infecio#i. R7spunsul de ap7rare nespeci5ic7 este de o intensitate relativ
e)al7% indi5erent de natura a)entului a)resiv bacterian% i indiferent de num7rul de
contacte anterioare pe care or)anismul le3a avut cu a)entul respectiv.
Fiecare specie este )enetic rezistent7 la anumite in5ec;ii, dar i susceptibil7 la
altele. "stfel, omul este singura specie care face n mod natural sifilis& scarlatina&
gonoreea, animalele fiind rezistente n mod natural. "ceast rezisten antiinfecioas se
e5plic prin con"iiile impropri pe care n organism le ofer! microorganismli fa! "e
care este re'istent #i prin lipsa receptorilor cellari specifici pentr agentl infecios
respectiv.
&ar, rezisten;a antiin5ec;ioas7 prezint7 varia;ii de ras7 6i varia;ii individuale,
chiar n cadrul aceleiai specii. =ste cunoscut faptul c n timpul unor epidemii, unii
indivizi fac forme grave de boal infecioas, alii forme fruste, iar unii chiar infecii
clinic inaparente. "ceast variaie individual a rezistenei la infecii este determinat de
strctra general! a mecanismelor "e ap!rare #i %n special "e pre'ena "iferitelor
antigene "e histocompatibilitate.
Eactorii de aprare nespecific pot fi mprii n0 barierele cutanate i mucoase,
reacia febril, factorii interni umorali i celulari.
*.1.1. BARIERELE CUTANATE )I MUCOASE
Te)umentele 6i mucoasele constituie bariere mecanice% chimice 6i biolo)ice,
eficiente n prevenirea ptrunderii microbilor n organism !tabelul +%.
S&(iu #ecanisme de protec;ie
$iele - Carier mecanic
- Decreia de acizi grai
- "cidul lactic, rezultat al metabolismului
local
- :scciunea relativ a pielii
9avitatea
bucal
- =nzimele !lactopero5idaza, lizozimul i
anticorpii din saliv
- "ctiunea de splare a salivei
"parat - Tusea i strnutul
respirator - Micarea firelor de pr din vestibulul nazal
care capteaz microbii
- =nzimele i capacitatea surfactant a
mucusului
- Micrile cililor vibratili
- Macrofagele alveolare
Tract digestiv - $S-ul gastric !1-,%
- =nzimele i anticorpii din mucus
- Micrile peristaltice
- Elora intestinului gros
)chi - 2izozimul din lacrimi
- "ciunea de splare a lacrimilor
:reche - "ciunea antimicrobian a cerumenului
"paratul
genitourinar
- $h-ul vaginal, flora local
- $S-ul urinii
- "ciunea de splare a urinii
Tabel +0 Cariere cutaneo-mucoase !dup Moldovan Ao5ana, 9oni Monica, 1<<%
a. Bari&r& ,&#ani#&
Dunt reprezentate de inte)ritatea pielii 6i mucoaselor, integritate care este cel mai
important obstacol n calea ptrunderii bacteriilor dincolo de poarta de intrare. "ceast
integritate este asigurat de0 stratrile cornoase ale epi"ermli, ;capcanele anatomice
la nivelul mucoaselor !meatele nazale%, %nglobarea bacteriilor %n masa "e mcs cu
reinerea lor, mi#carea cililor epitelili c!ilor respiratorii sperioare, %n"ep!rtarea
mecanic! a bacteriilor prin secreiile naturale de la nivelul mucoaselor !saliv, sput,
secreii nazo-faringiene%, peristaltisml intestinal>
%. Bari&r& #+i,i#&
3 /> s#4'u$ (& la su/rafa5a $&9u,&n$&lor !pST.-*%, asigurat de acizii )ra6i cu
molecul7 lun)7 din secre;ia )landelor sebacee, are un puternic efect nociv pentru
germenii patogeni !streptococii "e grp A& bacilii "ifterici%/
3 li'o'i,ul, e5istent n saliv, secreia lacrimal, secreia nazo-faringian, mucusul
cervical, lichidul prostatic, este o protein cu greutate molecular mic, cu e5ect de liz7 a
bacteriilor prin des5acerea componentelor )lucidice din peretele bacterian/
3 a#i(ul #lor+i(ri# (in su#ul 9as$ri# !pST,% are puternic e5ect bactericid asupra
tuturor )ermenilor ce p7trund odat7 cu alimentele, asigur6nd sterilitatea stomacului i
duodenului/
3 s&#r&5ia %iliar4 cu efect pternic bacterici", ceea ce e5plic lipsa bacteriilor n
duoden i prima poriune a 'e'unului/ bila inter5ereaz7 5unc;iile vitale ale membranei
celulare av6nd i o ac;iune neutralizant7 asupra unor to*ine bacteriene/
3 /> a#i( al va9inului& rezultat n urma metaboliz7rii )lico)enului de c7tre bacilii
lactici, reprezint de asemenea un mi'loc eficient de aprare contra microbilor.
#. Bari&r& %iolo9i#&
Dunt reprezentate de 5lora comensal7 de pe te)umente 6i mucoase. 9oe5istena n
acelai ecosistem a diferitelor specii, tulpini i variante bacteriene, ca i asocierea altor
ageni !fungi, parazii, virusuri% este marcat puternic de relaia de an$a9onis,
%a#$&rian, care asigur o /ro$&#5i& %iolo9i#4 &fi#i&n$4, cu precdere n cazul cilor
respiratorii superioare, intestinului, tegumentului, vaginului !=5emplu0 speciile de
<actobacills din vagin, menin n mod normal un pS acid, nefavorabil dezvoltrii altor
bacterii%.
#ecanismele prin care 5lora normal7 se opune multiplic7rii 5lorei pato)ene suntH
3 competiia pentr acela#i receptor cellar/
3 competiia pentr n sbstrat ntritiv/
3 secreia nor pro"#i secn"ari to-ici,
3 stimlarea sistemli imn& c pro"cerea anticorpilor natrali, care vor reaciona
ncruciat cu antigenele florei patogene.
Administrarea abuziv7 de antibiotice cu spectru lar) poate distru)e echilibrul dintre
speciile 5lorei normale 6i unele specii condi;ionat pato)ene sau pato)ene, cu apari;ia
diareei prin dezvoltarea necontrolat a unei singure specii. =5emplu0 S> ares& Can"i"a
albicans& Clostri"im "ifficile, care fac parte din flora normal i care se menin la
individul sntos n anumite limite tocmai datorit antagonismului bacterian.
3>.>3> REACNIA IE?RI<O
=a nsoete, de regul, o infecie bacterian. Mmplic o dere)lare a mecanismelor
sistemului termore)lator !central i periferic%, cu predominana termogenezei. 9entrii
termoreglatori din hipotalamus vor fi e5citai de ctre diferii factori pirogeni ca0
&n(o$o6in&l& %a#$&riilor Gra, n&9a$iv& !lipopolizaharidul din peretele celular al
acestor germeni acioneaz asupra macrofagelor ce vor secreta pirogeni endogeni0
interleu4in-1 !M2-1%, factorul de necroz tumoral !T1E-alfa%/
al5i </iro9&ni &n(o9&ni= secretai de macrofage, monocite, granulocite, ca urmare a
aciunii altor bacterii, virusuri, hormoni steroizi, limfocite T, comple5e imune circulante
!figura +%.
Aeacia febril, din punct de vedere al aprrii antiinfecioase nespecifice,
asi)ur7 mobilizarea mi<loacelor de lupt7 ale or)anismului% prin activarea
metabolismului 6i a circula;iei san)uine. ) temperatur de +8,.-+<9 accentueaz
distrugerea agenilor infecioi, prin creterea produciei de imunoglobuline i a activrii
fagocitozei. 7ns, 5ebra prelun)it7 poate 5i asociat7 cu e5ecte neva5orabile !creterea
activitii cardiace, la un pacient cu funcie cardiovascular compromis, poate determina
apariia convulsiilor/ modificrile metabolice pot duce la deshidratare i pierdere de
electrolii/ creterea susceptibilitii la efectele unor to5ine microbiene%.
Eigura +0 Aeacia febril !dup 9. Goiculescu, 1<<*%
*.1.A. FACTORII INTERNI AI A2RRII NES2ECIFICE
7n cazul n care bacteriile pato)ene au 1nvins barierele mucoase sau cutanate,
di5uzarea lor este 1mpiedicat7 n mod normal, de ;esutul con<unctiv intercelular. :neori
ns, acesta poate fi distrus de unele enzime bacteriene proteolitice0 proteinaze,
fibrinolizine, colagenaze, streptochinaze. Eactorii interni ai aprrii nespecifice sunt
ncadrai n dou categorii0 factori umorali i factori celulari.
a. FACTORI UMORALI
a.1. 2oli/&/$i(&l& %a'i#& din unele esuturi au efect bactericid !ptrund prin peretele
bacterian i altereaz7 5unc;iile osmotice a membranei citoplasmatice, duc6nd n final la
moarte celular%. =5emple0 polipepti"ele ba'ice cu efect asupra bacilli c!rbnos,
spermina #i spermi"ina cu efecte aspra bacilli 8och #i stafilococli are.
a.*. Li'o'i,ul este o mucopeptidaz care hidrolizeaz7 le)7turile peptido)licanului din
peretele celular al bacteriilor, acestea devenind sensibile la liza osmotic. "cioneaz
puternic asupra bacteriilor 0ram pozitive. Cacteriile Lram negative nu sunt sensibile la
ENDOTOXIN
E
BACTERIENE
BACTERII
"IRUSURI
STEROI3I
CIC
L- T IMUNE
LA"1:2)9MT=
M)1)9MT=
M"9A)E"L=
9=2:2= T:M)A"2=
F'-RE
M2-1
!$MA)L=1
=1&)L=1%
aciunea lizozimului, deoarece peptidoglicanul este acoperit de membrana e5tern. &ac
aceste bacterii sunt supuse iniial aciunii complementului, acesta va leza membrana
e5tern dezvelind peptidoglicanul, sensibil acum la aciunea lizozimului.
a.A. S/l&no#i$ina din splin care ac;ioneaz7 pe bacilii 0ram ne)ativi0 Salmonella& E>
coli patogen>
a.D. B&$ali'ina% protein bazic de origine trombocitar, cu e5ect inhibitor asupra
multiplicrii 5lorei 0ram pozitive, cu efect distructiv la nivelul membranei celulare.
a.C. La#$of&rina este o protein care leag fierul i care este n competiie cu bacteriile
crora le este esenial n multiplicare.
a.K. O/sonin&l& sunt substan;e care ader7 de supra5a;a unui microor)anism 57c=ndu3l
accesibil 5a)ocitozei. =5ist o/sonin& s/&#ifi#& !anticorpi "e tip Ig6 implicai n
aprarea antiinfecioas dob6ndit% i n&s/&#ifi#& !CAb& fibronectina%. =5emplu0 9+b,
produs n timpul activrii complementului, se leag de glicoprotein-receptorul pentru
9+b prezent pe membrana fagocitelor. Eiind legat de fagocit microbul va fi fagocitat
eficient.
a.L. S$r&ss1ul inf&#5ios an$i%a#$&rian ce const din punerea 1n activitate a a*ului
hipotalamus L hipo5iz7 anterioar7 L corticosuprarenal7 cu eliberare de )lucocorticoizi.
7ns, n cantitate mare, glucocorticoizii scad mi'loacele de aprare ale organismului
!figura ;%.
Eigura ;0 Dtress-ul antiinfecios !dup 9. Goiculescu, 1<<*%
a.M. 2ro$&ina C r&a#$iv4 i trage numele de la faptul c reacioneaz, printre altele, cu
proteina 9 a pneumococului. "ceast protein se ata6eaz7 pe unele bacterii sau 5un)i 6i
promoveaz7 1nvelirea acestora cu molecule de complement !9%. 7nvelirea celulelor cu
fraciuni de 9 produce facilitarea fagocitrii celulelor respective.

a.N. Fi%ron&#$ina, glicoprotein care favorizeaz adeziunea celulelor de supra5e;e,
acioneaz ca opsonin fa de bacteriile 0ram pozitive. =a se gsete la suprafaa
SALUTAR
>I2OTALAMUS
>I2OFI3
ACT>
SU2RARENAL
NOCI"
mucoaselor, impiedic6nd, prin proprietatea de a se lega de flora Lram pozitiv,
colonizarea mucoaselor cu flor Lram negativ !de e5emplu mucoasa faringian%.
a.1E. Sis$&,ul #o,/l&,&n$ului 7C: al&6ina8
9omplementul este o component comple5 a serului normal. =ste format din
apro5imativ 8I de proteine plasmatice !HcomponenteK% care se activeaz7 succesiv una
pe cealalt7 1ntr3o ordine dat7 !Hactivare n cascad%. "ceste componente sunt produse n
marea lor ma'oritate de ctre 5icat. #acro5a)ele reprezint al doilea sediu important de
sintez a componentelor complementului. " mai fost demonstrat sinteza limitat a unora
din factorii acestuia n 5ibroblaste 6i celulele intestinale. De comport ca proteine de faz
acut0 rata sintezei lor se accelereaz n cursul infeciilor sau altor in'urii.
Cantitatea "e complement prezent n plasm este relativ constant!.
1 Cre6terea activit7;ii )lobale a complementului se poate produce n in5ec;ii sau procese
neoplazice.
1 Sc7derea nivelurilor plasmatice ale complementului se datoreaz fie unui consum
e*a)erat al acestuia !n bolile de comple5e imune%, fie unei sinteze reduse !cum este
cazul insuficienei hepatice%.
ACNIP+E ?IO<O6ICO
=5ist , ci de activare a complementului, cu punct de plecare diferit, dar, care
converg spre aceiai produi finali0
1 #al&a #lasi#4 7#o,un48% a crei activare presupune prezen;a anticorpilor speci5ici, deci
un contact prealabil cu agentul etiologic respectiv. "ctivarea pe aceast cale se produce,
de regul, n prezena #o,/l&6&lor an$i9&n1an$i#or/. "stfel, bacteriile cu care
organismul a mai venit n contact, ptrund n organism i nt6lnesc anticorpii
corespunztori cu care vor forma comple5e antigen-anticorp.
c6te o molecul de C1U i de C1s i dou molecule de C1r formeaz uni$a$&a (&
r&#unoa$&r& 7C1Urs8 ce se va lega de comple5ul antigen-anticorp/
unitatea de recunoatere va cliva CD i C* n 9;a, 9;b i 9,a, 9,b/ o molecul 91Jrs
poate seciona un numr mare de molecule 9; i 9, nainte de a fi inactivat prin
intervenia unei molecule de reglare, numit inhibitorul lui 91 !91 M1S%, care disociaz
91Jrs/
componentele 9;b i 9,a vor forma CD%*a ce reprezint CA #onv&r$a'a #4ii #lasi#&,
care va cliva C> 1n C>a i C>b. 9+b este piesa esenial n reaciile urmtoare !figura .%.
3 calea alternativ7, mai veche din punct de vedere filogenetic, se activeaz7 1n absen;a
anticorpilor speci5ici, deci 5ace parte din rezisten;a antiin5ec;ioas7 natural7. "ctivarea
pe aceast cale este declanat de mai muli factori0 /oli'a+ari(&: a#i'i $+&i#oi#i:
%a#$&rii Gra, /o'i$iv& sau Gra, n&9a$iv&: &n(o$o6in& %a#$&ri&n&: /ara'i5i
7$ri/ano'o,a8: l&vuri 7Can(i(a al%i#ans8: a9r&9a$&l& (& i,uno9lo%ulin& !agregate
termic, nu prin comple5are cu antigene%.
Eigura .0 Distemul complementului
7n plasma normal 9+ este supus permanent unei activri spontane discrete prin
clivarea n 9+a i 9+b.
CA% se combin cu fa#$orul B !enzim proteolitic%, rezult6nd CA%B/
dup legarea sa de substrat, factorul C este clivat proteolitic n fragmentele Ba i B%
de o enzim prezent n plasm n stare activ, fa#$orul D/ n urma aciunii factorului &
se va obine Ca iar 9+bC va deveni CA%*B%/
CA%*B% &s$& CA #onv&r$a'a #4ii al$&rna$iv&. "ceast convertaz, rezultat n mod
fiziologic, ar putea cliva cantiti mari de 9+, dac nu
IOR,AREA CO,P<ELP<PI *E ATAC A< ,E,?RA+EI
&eci, ambele c7i produc enzime speci5ice 9BC> convertaze@: care vor ac;iona
asupra componentei C> a sistemului !elementul crucial al cascadei%, cu scindarea sa n
dou fragmente0 C>a i C>b.
3 CAa, agent inductor de inflamaie, are propriet7;i chemotactice 6i Bana5ilato*ice@
!degranularea mastocitelor cu eliberarea histaminei i creterea permeabilitii
vasculare%.
3 CA%, care se depune pe bacterii sau pe alte celule ;int7, poate produce eliminarea
acestora prin dou mecanisme0 imunoaderen;a i liza. ) serie de fagocite !granulocitele
neutrofile, macrofage% e5prim pe suprafa receptori specifici pentru 9+b. C>b
mi<loce6te pe aceast7 cale ata6area celulelor ;int7 pe 5a)ocite !HimunoaderenK% i
ingurcitarea lor ulterioar. "ceast 1nvelire cu C a ;intelor, care pregtete i faciliteaz
fagocitoza, a fost denumit To/soni'ar&=.
7n acelai timp, CA%, poate media continuarea activ7rii 1n cascad7 a sistemului,
care se va finaliza prin asamblarea unui comple* enzimatic 9CI% F% M% G% K: pe supra5a;a
celulei ;int7. "cest comple5 a fost denumit T#o,/l&6 (& a$a# a ,&,%ran&i= deoarece
provoac solu;ii de continuitate care duc la liza celulei at7cate !bacterie, celul infestat
de virus sau alte organisme invadatoare%.
=tapele principale ale formrii comple5ului de atac al membranei sunt0
ambele CA #onv&r$a'& se combin cu CA% form6nd CC #onv&r$a'a !9+b,Cb$ pentru
calea alternativ i 9+b;b,a pentru calea clasic%/
9. convertaza secioneaz CC cu generare de CCa !anafilato5in% i fragmente active
CC%/
CC% se fi5eaz pe su/rafa5a #&lul&i !bacteriei%. &e remarcat este faptul c moleculele
9.b sunt foarte instabile i sunt inactivate rapid dac rm6n libere n plasm/ n schimb,
ele devin stabile dac reuesc s se ataeze unui substrat sau membran celular, pe care
ncepe procesul de asamblare a comple5ului de atac/
de CC% se vor lega n continuare CK: CL: CM care se gsesc libere n ser i se
asambleaz pe molecula 9. numai n momentul activrii ei, fr intervenia vreunei
enzime proteolitice. De formeaz comple*ul CIbFMG% care are capacitate litic7 redus7.
Celulele ;int7 pot 5i lizate doar atunci c6nd densitatea unor asemenea comple*e este
5oarte mare/
n continuare, mai multe molecule de CK% care polimerizeaz7% se ata6eaz7 de
comple*ul CIbFMG, duc6nd la creterea considerabil a puterii litice. Dtructura proteinei
9< este asemntoare cu a perforinelor prezente n granulaiile celulelor citoto5ice/
se formeaz, astfel, un comple* de atac al membranei celulare 9CIbFMGK: cu liza
consecutiv7 a celulei bacteriene.
%. FACTORII CELULARI
Dunt reprezentai de fagocitoz i inflamaie.
%.1. FAGOCITO3A
9onstituie un proces esenial, prezent pe toat durata infeciei. Aeprezint reacia de
aprare celular a organismului i const dintr-un mecanism de 1ndep7rtare a
microor)anismelor 6i a celulelor lezate, prin 1n)lobarea lor de c7tre anumite celule ale
or)anismului !fagocite% specializate pentru aceast funcie.
"ceste celule migreaz la locul de ptrundere al bacteriilor n organism, le
nglobeaz i le distrug n interiorul lor, prin fagolizozomi !enzimatic%. De realizeaz n
acest fel localizarea infeciei, care clinic se manifest prin inflamaie cu simptomele
caracteristice0 rubor% tumor% calor% dolor% 6i 5unctio laesa. 7n acest fel o infecie minor
poate fi nvins, printr-o bun aprare local, iar puroiul rezultat din resturile celulelor
distruse, conine bacterii moarte !puroi steril%. &e cele mai multe ori ns, infecia
progreseaz, determin6nd diferite manifestri clinice.
CATEGORII DE CELULE CU 2RO2RIETGI FAGOCITARE 7FAGOCITE8
7n fagocitoz intervin dou categorii principale de celule0 ,i#rofa9&l& i
,a#rofa9&l&. "ceste celule au capacitatea de a mi)ra diri'at spre locul unde sunt
particule str7ine. Migrarea lor n esuturi este favorizat de su%s$an5&l& #+&,o$a#$i#&0
C1a& C1b i ali factori produi n cursul inflamaiei. =le au pe suprafaa lor receptori
pentru 5ra)mentul Fc al imuno)lobulinei 0 7I9G8 i receptori pentru 5rac;iunea C>b a
complementului i pot dezvolta mecanisme puternic microbicide. De mai numesc i
fa9o#i$& /rof&sionis$&, pentru a putea fi deosebite de cellele fibroblaste& en"oteliale #i
reticlare care alctuiesc fa9o#i$&l& n&/rof&sionis$&/ acestea ndeplinesc o activitate
fagocitar mai redus, deoarece snt lipsite "e receptorii pre'eni pe fagocitele
profesioniste i mai ales n "e'volt! mecanisme bacterici"e.
MICROFAGE
1 Granulo#i$&l& n&u$rofil& realizeaz fa9o#i$ar&a #or/ilor %a#$&ri&ni in$&9ri sau
fra9,&n$&lor (& 9&r,&ni. 9apacitatea de fagocitoz este mrit de procesul de
opsonizare, opsoninele fiind anticorpi de tip MgL. &up nglobare, anti)enele str7ine
sunt distruse datorit0 en'imelor li'o'omale i lactoferinei !din granulaiile specifice
neutrofile%/ mielopero-i"a'ei, elasta'ei, catepsinei& beta0glcroni"a'ei !din granulaiile
azurofile%. =le sunt celule ?kamikaze@ ale ap7r7rii antiin5ec;ioase, deoarece sosesc
primele la locul in'uriei. &up digestia materialului fagocitat, foarte frecvent, leucocitele
sunt distruse.
1 2oli,orfonu#l&ar&l& &o'inofil& iau parte la ap7rarea antiparazitar7. 9onin enzime ce
metabolizeaz histamina i leucotrienele fiind astfel capabile s 'oace rol important n
limitarea reac;iilor aler)ice. =le conin i proteine to*ice !proteina ma'or bazic% ce
duce la distrugerea celulelor epiteliale din tractul respirator duc6nd la inflamaie cronic
n astmul bronic. =le 5a)ociteaz7 comple*e anti)en3anticorp precum 6i unele resturi
anti)enice ce rezult din rspunsul imun i care n alte condiii ar duce la boli autoimune.
1 2oli,orfonu#l&ar&l& %a'ofil& !echivalentul mastocitelor tisulare% au granulaii mari ce
con;in numero6i mediatori chimici 6i precursorii acestora, ca, de e5emplu0 histamina&
prostaglan"ine& lecotriene& factori activatori ai trombocitelor. "ceti mediatori sunt
eliberai, la nevoie, n cantiti reduse. =laborarea lor masiv poate fi duntoare cu
apariia reaciilor alergice de tip M0 astm bronic, urticarie, febr de f6n etc.
MACROFAGELE
$ot fi ,o%il&: /r&'&n$& @n s;n9& 7,ono#i$&l&8 i fi6&, dar uor mobilizabile, ce fac
parte (in sis$&,ul r&$i#ulo1&n(o$&lial 7sis$&, fa9o#i$ar ,ononu#l&ar8. =5emple0
macrofagele "in splin! i ganglionii limfatici/ cellele 8ppffer "in ficat/ histiocitele "in
estl con$nctiv/ nele celle ale nevrogliei.
7n tabelul . sunt prezentate comparativ principalele proprieti i funcii ale
polimorfonuclearelor i celulelor sistemului reticulo-endotelial.
2oli,orfonu#l&ar& Sis$&, fa9o#i$ar ,ononu#l&ar
2ro/ri&$45i Fun#5ii 2ro/ri&$45i Fun#5ii
- "u origine
medular
- Dunt celule cu
via scurt
- "u pe
suprafa
receptori pentru
9+ i Ec a MgL
- "u un numr
mare de
lizozomi
-
Mielopero5idaz
a prezent n
lizozomi
- Dunt active
neutrofilele,
apoi eozinofilile
- Dunt foarte
mobile
- Dunt primele
care se
deplaseaz la
locul infeciei
- Aeprezint
prima linie de
celule care
fagociteaz
- &iger total
bacteriile
fagocitate
- =ozinofilele
nglobeaz
comple5e
antigen-anticorp
- )rigine medular
- Dunt celule cu
via lung
- "u pe suprafa
receptori pentru 9+
i Ec a MgL
- "u un numr mic
de lizozomi
!numrul crete n
macrofagul
VactivatK%
- 1u au
mielopero5idaz
- 9uprinde
monocitul sanguin
i macrofagele
tisulare.
Macrofagele difer
morfologic ntre
-
Eagocitoz
a
- Euncie
secretorie
- 9elule
asociate
rspunsul
ui imun
ele, dar
funcioneaz
identic
Tabel .0 9aractere ale fagocitelor polimorfonucleare i celulelor sistemului fagocitar
mononuclear !dup ". Mvanof i M. 9iupe, 1<8,%
Macrofagele fagociteaz ,a#ro,ol&#ul& in&r$&, microorganis-mele opsonizate, pe
care le distrug n mare parte !tabel *%.
,nele microor)anisme !micobacterii, listerii, brucele, to5oplasme% supravie;uiesc
6i se 1nmul;esc 1n macro5a)e. 7n acest caz, macrofagele prote'eaz microorganismele
respective, servind ca factor de diseminare a infeciei.
Fun#5i& E6/ri,ar&
1. Fa9o#i$o'4
*. Fun#5i&
s&#r&$ori&
A. Coo/&rar&
#u sis$&,ul
i,un
- Aeprezint a doua linie de celule care
fagociteaz /
- 1u diger complet microorganismele/
- 7nglobeaz resturi celulare i tisulare,
VcurindK teritoriul lezat.
- =nzime cu aciune asupra proteinelor prezente
n mediul e5tracelular0 colagenaze, elastaze,
proteaze lizozomale, activatori ai
plasminogenului/
- Decreie de factori antiinfecioi0 lizozim,
fraciuni ale complementului !9,, 9;, probabil
9+, 9.%, interferon/
- Eactori ce modeleaz funcia altor celule0
proteina mitogen asupra limfocitului T i a
timocitului/
- 9itoto5ine asupra celulelor strine i tumorale/
- Aeglatori ai activitii celulare0 prostaglandine/
- Eactori de difereniere0 factorul de Vstimulare
al coloniilorK, care stimuleaz diferenierea
celulei su medulare n linia granulocitar.
- Mntervine n declanarea i reglarea rspunsului
imun.
Tabel *0 Eunciile celulelor sistemului fagocitar mononuclear !dup ". Mvanof i M.
9iupe, 1<8,%
ETAPE<E IA6OCITOMEI
Dunt reprezentate de0 chemota5ie, adsorbia particulelor pe fagocit, ingestia
particulelor n fagocit i digestia intracelular.
9S=M)T"(M"
Aeprezint mobilizarea unidirec;ional7% diri<at7 a polimor5onuclearelor spre
locul unde se elibereaz7 5actori chemotactici. "ceti factori pot fi at6t de ori)ine
bacterian7 !formilmetionil-leucil-fenilalanina%, c6t i 5actori ai or)anismului )azd7, ce
apar n cursul inflamaiei0 C1a& Halicreina produs de esuturile lezate, prostaglan"ine
9E3& *3:& trombo-an& lecotriene 9?4:& amine vasoactive& fragmente "e colagen& "e
fibrin! !tabel %. Dub influena factorilor chemotactici 5a)ocitele p7r7sesc capilarele prin
diapedez7.
$entru fiecare dintre factorii chemotactici, fagocitele au receptori specifici. 7n urma
interaciunii dintre aceti factori i receptorii celulari prezeni pe suprafaa $M1, se
produc modificri ale fagocitului.
Co,/on&n$& %a#$&ri&n& Co,/on&n$& al& or9anis,ului
- $roteine bacteriene,
ndeosebi 1-formil-
metionil-peptide/
- :nele lipide bacteriene.
- 9omponente din sistemul complement0
9.a, 9.,*,, obinute prin activare/
- $roteine serice0 Balli4reina, fragmente
de fibrin/
- Sistamina/
- &erivai arahidonici/
- $roduse ale limfocitelor !limfo4ine%/
- :nii factori eliberai de neutrofile.
Tabel 0 Eactori chemotactici !dup ". Mvanof i M. 9iupe, 1<8,%
A(S$R-D"A 9ATANAR'A: PART"C,L'L$R P' S,PRAFADA FA0$C"T'L$R
"taarea pe suprafaa fagocitului poate fi nt6mpltoare sau diri'at. 9ontactul
nt6mpltor depinde de ansa de coliziune ntre fagocite i particule. 7n cel de-al doilea
caz, 5a)ocitele mi)reaz7 c7tre bacterii sau alte particule datorit #+&,o$a6i&i. D-a
demonstrat c unele e5tracte bacteriene sau corpi bacterieni integri atrag leucocitele
!chemota5ie pozitiv%.
&ar, n mod normal, pentru ca s permit ataarea fagocitului, suprafaa celulei
bacteriene trebuie modificat, i aceast pregtire n vederea fagocitrii se numete
o/soni'ar&. )psonizarea se poate realiza prin ,&#anis,& s/&#ifi#&, deoarece presupun
participarea anticorpilor rezultai n urma unui rspuns imunitar. =ste vorba de
intervenia I9G, care se leag de fagocite prin fragmentul Ec, realiz6nd o punte ntre
antigenele de suprafa i receptorul de pe fagocit, sau prin ac;iunea combinat7 a
complementului 6i a anticorpilor, aa cum se nt6mpl n cazul I9M. MgM nu se pot fi5a
pe suprafaa fagocitului, dar intervin form6nd comple5e imune care activeaz
complementul, activare din care rezult fraciunea 9+b pentru care e5ist receptori pe
fagocit !figura *%.
)psonizarea se poate realiza i prin ,&#anis,& n&s/&#ifi#&, prin intervenia
proteinei C reactive& a fibronectinei& CAb& alfa 30glicoproteinei serice.
Eigura *0 =tapele fagocitozei
:n factor potenator al atarii particulelor este i aa numita fa9o#i$o'4 (&
su/rafa54, prin care microorganismele sunt captate mai uor dac sunt prinse pe
suprafee rugoase. "ceasta se poate realiza prin plasarea microorganismelor pe
suprafeele dintre leucocite, ntre leucocite i suprafeele tisulare, sau n interstiiile
cheagurilor de fibrin.
"dsorbia particulelor pe suprafaa fagocitului este in+i%a$4 de anumii factori0
hiperosmolaritatea mediului% concentra;ii crescute de )lucoz7 6i% respectiv% sc7zute de
5os5a;i 1n mediu etc.

"N0'ST"A 9CN0L$-AR'A: PART"C,L'L$R CN FA0$C"T
&up ataare, particulele sunt nglobate ntr-o vacuol format de membrana
citoplasmic prin emitere de /s&u(o/o(&. $rocesul necesit energie, care provine de
obicei din glicoliz. &up nglobarea particulei, vezicula fagocitar se deplaseaz spre
interiorul celulei.
=tapa de ingestie !nglobare% se desfoar cu ritmuri i intensiti diferite, n
funcie de intervenia unor fa#$ori /o$&n5a$ori sau inhibitori. &in prima categorie,
amintim e5istena n membrana fagocitului a unor proteine Bcontractile@ din 5amilia
actino3miozinei, care asigur emiterea de pseudopode i formarea HpungilorK. Fa#$orii
in+i%i$ori sunt mai puin bine studiai, un rol probabil n acest sens av6ndu-l
prosta)landinele din seria ' i leucotrienele din )rupul -.
&ML=DTM"
Gacuola format !fagozom% va fuziona cu li'o'o,ii !grupai n 'urul vacuolei%
rezult6nd fa9oli'o'o,ii. Eormarea fagolizozomilor este un proces nsoit de dispariia
granulaiilor intracitoplasmatice !degranulare%. 2iza granulelor ar avea loc la contactul cu
peretele pungii fagocitare i const n eliberarea enzimelor lizozomale, care sunt diverse
substane cu aciune microbicid, care vor declana digestia. 7n acelai timp, are loc o
activare puternic7 a metabolismului o*idativ al P#N.
&istrugerea microbilor se petrece prin , mecanisme0 ),-dependente i ),-
independente.
M&#anis,&l& O*1(&/&n(&n$&
Dunt consecina <&6/lo'i&i r&s/ira$orii=, o cale metabolic de respiraie n stare
dormant ntr-o celul inactiv. Mntensificarea brusc a metabolismului !He5plozia
respiratorieK% duce la formarea unor compui de tipul0 ionilor de supero*id 9$>
3
:% o*i)en
atomic 9$
3
:% radicali hidro*ili% pero*id de hidro)en 9+8$8: 6i hipoclorit 9+$Cl:. Toi
aceti produi au efect puternic bactericid.
Eenomenul digestiei intracelulare a particulelor are o comple5itate deosebit. 7n
esen, au loc urmtoarele secvene0
- eliberarea &n'i,&lor li'o'o,al& din fagolizozomi n interiorul vacuolei/
- eliberarea n vacuol i a altor enzime celulare0 ,i&lo/&ro6i(a'a, o enzim foarte
activ stocat n $M1, care n mediu acid e5istent n fagolizozom duce la formarea unor
halogeni cu efect puternic microbicid/
- a#$ivar&a /ro#&s&lor o6i(a$iv& i anume0 utilizarea intens de ctre celul a
o-igenli moleclar, care, sub aciunea catalitic a +A*P7
!nicotinadenindinucleotidfosfat redus%, se transform n spero-i"/ supero5idul este
clivat, datorit spero-i"0"ismta'ei, n o-igen moleclar i pero-i" "e hi"rogen/
- /&ro6i(ul (& +i(ro9&n, n cooperare cu ,i&lo/&ro6i(a'a, determin "e'agregarea
particlelor fagocitate/ pero5idul de hidrogen eliberat n fagocit este un agent bactericid
puternic, dar combinarea cu mielopero5idaz i crete de .8 de ori activitatea.
M&#anis,&l& %a#$&ri#i(& in(&/&n(&n$& (& O*
"ceste mecanisme care intervin n omor6rea microorganismelor, se datoreaz unor
&n'i,&0
- enzime hidrolitice !catepsina, glicozidaza, arilsulfataz% care diger peretele celular
bacterian/
- de5ensine0 proteine cationice care se leag de peretele celular i determin formarea
unor canale ce strpung peretele, at6t la bacteriile Lram pozitive, c6t i la cele Lram
negative/
- lizozimul, prezent n granulaiile lizozomale, ce atac peptidoglicanul/
- histone nucleare sau p+3ul acid din fagolizozom, care mpiedic viaa
microorganismului fagocitat/
- lacto5erina care spoliaz mediul de fier necesar bacteriilor pentru multiplicare.
7n digestia intracelular a particulelor mai pot interveni i mecanisme adiionale, ca0
apariia n citoplasm a ionului (& #lor o6i(a$, cu puternic aciune bactericid/ folosirea
de ctre celul a #4ii s#ur$a$& +&6o'o1,onofosfa$, n vederea sintezei ulterioare de
supero5id !),_%, pero5id de hidrogen !S,),%, acidul hipocloros !S)9l%.
)morarea microorganismelor fagocitate este urmat de digerarea complet a
acestora prin activitatea unor hidrolaze. 7n 2MN se produce de)radarea complet7 a
microor)anismului, spre deosebire de ,a#rofa9&, n care particula 5a)ocitat7 este
de)radat7 par;ial% incomplet% anti)enele 5iind apoi prezentate sistemului imun.
Cal&a +&6o'o,onofosfa5ilor
NAD2> Su/&ro6i( Mi&lo
O* O*_ >*O* >OCl
o6i(a'a (is,u$a'a /&ro6i(a'4

%.*. INFLAMAGIA
=ste un /ro#&s na$ural (& a/4rar& an$iinf&#5ioas4, un mecanism important de
rezisten natural, dar care este reglat n evoluie de procese imune i de foarte multe ori
procesul inflamator este dependent de factori imunitari.
9onst dintr-un ansamblu de procese clinice 6i 5iziopatolo)ice de aprare celular
nespecific, declanat de diferii ageni, cu deosebire inf&#5ioi, dar i de iri$an5i cum ar
fi substanele chimice, cldura puternic i leziuni mecanice. Aezultatul acestui proces
este acumularea unui mare num7r de celule 5a)ocitare la locul in5lama;iei.
Mnflamaia este un mecanism de ap7rare antiin5ec;ios rapid, care tinde s
localizeze in5ec;ia 6i s7 previn7 diseminarea ei. Manifestrile clinice sunt eritemul
!rbor%, cldura !calor%, edemul !tmor%, durerea !"olor% i impotena funcional a
regiunii respective !fnctio laesa%.
"n5lama;ia poate evolua spre0 vin(&#ar& #u restitu;io ad inte)rum a esutului sau
vin(&#ar& #u s&#+&l&. &eznodm6ntul unei reacii inflamatorii depinde de e-tin"erea
procesli inflamator& "e microorganismele implicate& precm #i "e reactivitatea ga'"ei.
ETAPE<E I+I<A,ANIEI 9ASPECTE IIMIOPATO<O6ICE:
G"D)&M2"T"\M= 9"$M2"AZ 2)9"2Z
7nroirea zonei inflamate este rezultatul creterii cantitii de s6nge la acest nivel.
Dila$a5ia vas&lor san9uin& lo#al& determin o sc7dere a circula;iei s=n)elui,care este
nsoit de o cre6tere a permeabilit7;ii capilarelor locale ceea ce cauzeaz apariia
edemului.
ATRACD"A L',C$C"T'L$R 9C+'#$TACT"S#:
C+&,o$a#$is,ul este reprezentat, n acest caz, de atrac;ia 1ntre leucocite 6i spa;iul
intersti;ial. $rimele celule care a'ung n esutul agresat sunt 2MN, datorit capacitii
mari de migrare, apoi #&lul&l& sis$&,ului r&$i#ulo&n(o$&lial i li,fo#i$&l& care au rol
principal n iniierea reaciilor imunitare.
Toate aceste celule sunt nzestrate cu o mare capacitate de recepie a s$i,ulilor
#+&,o$a#$i#i, care sunt reprezentai n mare, de factorii chemotactici "e natr!
bacterian!, de factorii pro"#i %n rma activ!rii C, i nu n ultmul r6nd, "e cei re'ltai
"in "egranlarea mastocitelor. 9ei mai importani factori care asigur producerea
inflamaiei sunt0 aminele vasoactive !de tip histaminic%, serotonina, unele en'ime
proteolitice !enzime lizozomale, 4alicrein%, unele sbfracini "e complement !9+a,
9.a% denumite Hanafilato5ineK !ce determin degranularea mastocitelor cu eliberarea
unor mediatori chimici%, interleHina0. !M2-1% i interleHina0) !M2-8% ce sunt mono4ine
secretate de macrofag. ) parte din acetia sunt preformai, aa cum este histamina, cu
efect vasodilatator asupra capilarelor i cu creterea permeabilitii acestora.
Dub aciunea acestor factori, 2MN vor /4r4si #a/ilarul /rin (ia/&(&'4 i se vor
ndrepta ctre focarul inflamator.
7n consecin se produce o &6u(ar& a /las,&i cu mediatorii pe care aceasta i
conine, din capilare spre zona infectat !creterea flu5ului sanguin spre zona inflamat,
cu creterea temperaturii locale%.
Dub aciunea unor mediatori chimici rezulta;i 1n timpul activ7rii C i secreta;i de
macro5a)ele stimulate de to*inele bacteriene, se ,o(ifi#4 &n(o$&liul #a/ilar #ar&
/&r,i$& a(&'iun&a 2MN de acesta.
DIA2EDE3A LEUCOCITAR
=ste procesul prin care un fa9o#i$ s& s$r&#oar4 /rin$r& #&lul&l& &n(o$&liului
vas#ular, $r&#;n( @n s/a5iul in$&rs$i5ial. "ceast trecere a celulelor n spaiul interstiial
se face printr-un mecanism cu mai multe etape0 ros$o9olir&, ,ar9ina5i&1a(&'iun&,
$rav&rsar& prin emiterea de pseudopode !figura 8%.
Eigura 80 =tapele inflamaiei
7n procesul de trecere a fagocitelor prin celulele endoteliului vascular intervin
,ol&#ul&l& (& a(&'iun&, ce fac parte din trei familii0 selectine& integrine i sperfamilia
imnogloblinelor. Moleculele de adeziune sunt structuri e*primate pe supra5a;a
leucocitelor 6i a celulelor endoteliale care permit, prin interaciuni reciproce, ata6area
leucocitelor de endoteliul capilar, cu o for cresc6nd, facilit6nd, n final, diapedeza.
=5ist dou categorii de molecule de adeziune !M"%0 L1s&l&#$in& !9& *,2, 2"M-1% sunt
M" e5primate pe granulocite/ E1s&l&#$in& !9& *,=, =2"M-1%, 21s&l&#$in& !9& *,$%,
ICAM11 !9& .;% ce sunt M" e5primate pe endoteliile vaselor mici.
Mniial, prin L1s&l&#$in& )ranulocitele se lea)7 de membrana celulelor endoteliale,
legare slab, sub aciunea curentului sanguin granulocitele HruleazK !se rostogolesc% pe
suprafaa endoteliului vascular. Dub aciunea unor a$ra#$an5i 7IL1M8 se modi5ic7 5orma
celulelor ata6ate, ceea ce determin oprirea rul7rii 6i adeziunea 5erm7 la endoteliu.
"ceeai M2-8 de pe suprafaa endoteliului distru)e L3selectinele, cu modificarea formei
celulelor fc6ndu-le apte s traverseze peretele vascular.
2MN vor /4r4si #a/ilarul /rin (ia/&(&'4 i se vor 1ndrepta c7tre 5ocarul
in5lamator unde vor distru)e microbii prin 5a)ocit7z7. Eormarea puroiului poate fi
asociat inflamaiei. &up ce fagocitele au distrus celulele bacteriene, sunt degradate i
mor. 7n aria afectat se formeaz o mas de celule distruse, fagocite moarte, ceea ce
reprezint proil.
CONCLU3II
7n esen, or9anis,ul &s$& a/4ra$ fa de unele infecii prin '&s$r&a sa &r&(i$ar4,
care nu permite dezvoltarea anumitor germeni. Lermenilor la care este sensibil,
organismul se opune ptrunderii lor prin bariere e*terne anatomice 6i chimice la care se
adaug 5lora normal7 a or)anismului 9anta)onism bacterian:. &ac totui germenii au
reuit s strbat aceste bariere i a'ung n zonele interne sterile ale organismului, intervin
o serie de 5actori umorali, dintre care unul este de o importa ma'or0 #o,/l&,&n$ul.
"ctivarea complementului are ca urmare liza celulelor microbiene: dar i declan6area
r7spunsului in5lamator in5ec;ios. 9ascada de activare a complementului va antrena
&li%&rar&a unor ,&(ia$ori #+i,i#i care particip direct n procesul inflamator i vor
C D 1 1 b
C D 1 1 a
C D 1 5
C D ! " L
# $ % C A M
C D ! " E
C D 5 &
C D ! " P
C D ' 1
I L (
M A T R I C E E X T R A C E L U L A R
F i b r o n e c t i n a
C o l a g e n
L a m i n i n a
R O S T O G O L I R E
A D E Z I U N E
D I A E D E Z A
atrage n focarul infecios un aflu6 ,ar& (& #&lul& fa9o#i$ar& !$M1, macrofage%.
"cestea vor distruge microorganismele prin fagocitoz.
7ns, n acelai timp, e5ist germeni care dezvolt s$ra$&9ii #& o#ol&s#
,&#anis,&l& r&'is$&n5&i na$ural& i care pot da infecii la indivizii neimunizai. "stfel
de strategii se refer la in+i%i5ia fa9o#i$o'&i !secreia de to5ine fa de fagocite/
rezistena fa de lizozim/ inhibiia e5ploziei respiratorii a fagocitelor% sau la r&'is$&n5a
la a#5iun&a #o,/l&,&n$ului !inactivarea 9.a la $seudomonas aeruginosa/ prezena la
suprafaa bacteriilor a unor substane - acidul sialic - care determin degradarea 9+b la =.
coli/ mpiedicarea inseriei comple5ului de atac al membranei la Dalmonella, =. coli%.
Dintetiz6nd datele privind factorii, respectiv ,&#anis,&l& (& a/4rar& n&s/&#ifi#4
al& or9anis,ului, putem constata c prezena factorilor nespecifici umorali sau celulari
n diferite umori, s6nge, esuturi i organe, constituie un sistem de aprare dinamic i
interdependent, prin care organismul uman rspunde la atacul microorganismelor. "cest
sistem cuprinde sistemul 5a)ocitar !polinucleare i mononucleare%, sistemul kininelor
declanator al proceselor de inflamaie, sistemul complementului i sistemul de
coa)ulare 6i 5ibrinoliz7.
*.*. RE3ISTENGA S2ECIFIC 7IMUN8.
"$ZA"A=" D$=9MEM9Z-MM:1Z.
MM:1)$A)EM2"(M=
S& /oa$& s/un& #4: @n#4 (in $i,/ul vi&5ii f&$al& i ,ai /ronun5a$ (u/4 na$&r& i
ul$&rior @n $o$ $i,/ul vi&5ii: or9anis,ul u,an s& 94s&$& @n /&r,an&n$ #onfli#$ #u
fo#arul inf&#5ios. Fa54 (& a#&s$a or9anis,ul r&a#5ion&a'4 /rin fncia "e ap!rare
antiinfecioas! 9nespecific! #i specific! 0 imn!:: #ar& ar& #;$&va in$&rv&n5ii
i,/or$an$&F vindecarea dintr3o in5ec;ie mani5est7% 1mpiedicarea rein5ec;iei cu acela6i
a)ent etiolo)ic 6i prevenirea primoin5ec;iei. A#&s$& ,o(ali$45i (& a/4rar& s& @n$;ln&s#
@n $oa$& inf&#5iil& %a#$&ri&n&: ,i#o$i#&: /ara'i$ar& i viral&: @n #ar& s& 94s&s# $r4s4$uri
#o,un&. Gin;n( @ns4 s&a,a (& ,&#anis,&l& s/&#ifi#& /rin #ar& a#&s$& #a$&9orii (&
a9&n5i inf&#5ioi (&#lan&a'4 /ro#&sul inf&#5ios: a/ar @n #ons&#in54 /ar$i#ulari$45i
(is$in#$& i (iv&rsifi#a$& (& a/4rar&.
Ap7rarea antiin5ec;ioas7 se realizeaz7 di5eren;iat n raport de0
propriet!ile speciei patogene&
poarta "e intrare&
locali'area %n organisml man&
"iversitatea factorilor "e patogenitate #i a mecanismelor prin care ace#tia
acionea'!.
Trec6nd peste aceste diferene, se poate ns generaliza, c n ma'oritatea
infeciilor, a/4rar&a este rezultatul unei ac;iuni siner)ice 6i ordonate a proceselor de
imunitate 9umoral7 6i celular7: 6i a 5actorilor de rezisten;7 natural7.
Mai mult, e5ist i posibilitatea ca n aceeai infecie s survin o contribuie
difereniat0 fa de o categorie de factori intervin preponderent efectorii imunitii
umorale, pe c6nd fa de ali determinani de patogenitate efectul imunitar de aprare se
instaleaz prin componenii imunitii mediate celular.
Mntervenia 5a)ocitelor% prima Barmat7@ care intr7 1n <oc 1n ap7rare, are un
caracter )eneral, viz6nd aproape toate bacteriile, ca i alte microorganisme. Trebuie
subliniat c fagocitoza acioneaz n tot timpul infeciei0 %mpie"icarea instal!rii agenilor
infecio#i la poarta "e intrare !evitarea primoinfeciei i reinfeciei%, limitarea
mltiplic!rii #i generali'!rii bacteriilor, constituind n acelai timp mo"alitatea
principal! "e eliminare a microorganismelor "in estrile ga'"ei, ceea ce are ca rezultat
vindecarea. 9hiar dac acioneaz diferii factori imunitari sau chimioterapice, fa9o#i$o'a
este cea care, n final, asi9ur4 s$&rili'ar&a or9anis,ului (& a9&n5ii /a$o9&ni. 7n
ma'oritatea cazurilor fun#5ia fa9o#i$ar4 este dependent7 de e5ectori ai imunit7;ii
umorale% ai imunit7;ii celulare 6i a altor sisteme biolo)ice.
) contribu;ie ma<or7 1n ap7rarea antiin5ec;ioas7 o au procesele imunitare. De
poate aprecia c, n toate infeciile se dezvolt paralel o imunitate umoral i o imunitate
celular, cu variaii de intensitate de la o infecie la alta.
"stfel, dac n infeciile cu e5oto5ine ca factor principal de patogenitate
contribuia ma'or de aprare este asigurat de imunitatea umoral prin procesul de
neutralizare, n alte infecii, n care microorganismele se multiplic facultativ intracelular,
ca i n infeciile virale, n micozele viscerale i n parazitoze, rolul principal l au
procesele de imunitate celular !e5emplu0 procesul infecios al tuberculozei%. 7n
ma'oritatea infeciilor ns, 5unc;ia de ap7rare este asi)urat7 prin participarea 1n
propor;ii di5erite 6i cu intensitate variat7% a sistemelor e5ectoare a celor dou7 tipuri de
r7spuns imun. Euncia de aprare se realizeaz n primul r6nd, prin eliminarea c6t mai
rapid a antigenului strin ptruns n esuturile organismului, sau neutralizarea efectelor
nocive ale acestuia.
"$ZA"A=" D$=9MEM9Z MM:1Z
Mmunitatea 7a/4rar&a i,un48 r&/r&'in$4 capacitatea "e ap!rare a organismliF
3 5a;7 de a)resori e*terni 7virusuri: %a#$&rii: fun9i: /ara'i5i8V
3 5a;7 de propriile molecule 6i celule de)radate sau modi5icate.
Aspunsul de aprare specific: #& #ara#$&ri'&a'4 a/4rar&a 7r&'is$&n5a8 i,un41
(o%;n(i$4: &s$& rapi"& precoce& intens i eficient. Mntensitatea rspunsului de aprare
specific (&/in(& (& natura a)entului in5ec;ios i de num7rul de contacte anterioare
pe care or)anismul le3a avut cu a)entul respectiv.
1. DINAMICA RS2UNSULUI IMUN
Modul n care organismul rspunde unui stimul antigenic este variat, dinamica 6i
amplitudinea r7spunsului difer n funcie de factorii genetici& starea fi'iologic! #i
v(rsta& fell& cantitatea #i mo"l "e a"ministrare a antigenli. &incolo de aceti factori
e5ist o condiie care influeneaz constant dinamica rspunsului imun i anume "ac!
organisml respectiv a mai venit sa n %n contact c acela#i antigen. &in acest punct de
vedere putem distinge un rspuns imun primar i un rspuns imun secundar.
1.1. RS2UNSUL IMUN 2RIMAR
9onstituie r!spnsl organismli la n prim contact c n antigen& in"iferent "e
natra agentli. "cest rspuns are amplitudine sc7zut7 6i este redus ca durat7 6i
intensitate.
1.*. RS2UNSUL IMUN SECUNDAR
:n al "oilea contact c acela#i antigen determin un rspuns imun secundar, mai
prompt% mai intens 6i cu o durat7 mai mare dec6t rspunsul primar. )rganismul care a
venit n contact cu un antigen Hine minteK aceasta i tie s rspund mai prompt i mai
bine la un nou contact cu acelai antigen. Aezult deci, c antigenele pot induce un
fenomen "e memorie imnologic!, care ntregete caracteristicile fundamentale ale
sistemului imun, alturi de capacitatea acestia "e a face "iscriminarea %ntre self
!propriu organismului% #i non0selfK !strin de economia organismului%, ca i capacitatea
"e "iscriminare %ntre antigene "iferite.
,. TM$:AM &= AZD$:1D MM:1
E6is$4 (ou4 $i/uri (& r4s/uns i,unF u,oral i #&lular.
,.1. AZD$:1D:2 MM:1 :M)A"2
I,uni$a$&a u,oral4 intervine prioritar fa54 (& anti)enele unor a)en;i in5ec;io6i
9bacterieni% virali% parazitari: r&s/onsa%ili (& inf&#5ii a#u$&: fa54 (& proteine serice de
alt7 specie sau alt allotip: fa54 (& anti)enele eritrocitare de hetero)rup 7r&a#5iil& (&
in#o,/a$i%ili$a$& @n sis$&,ul 9ru/&lor san9uin& ABO sau R+8. S&#un(ar: i,uni$a$&a
u,oral4 in$&rvin& @n reac;ia de respin)ere a )re5ei: #a i @n boala canceroas7.
Geriga efectorie &s$& r&/r&'&n$a$4 (& proteine specifice: /las,a$i#& sau (in
s&#r&5ii &6$&rn& 7,u#oas&: /i&l&8: (&nu,i$& imnoglobline 9Ig: 0 anticorpi 9(& #las4F
Ig,& Ig6& IgA& Ig*& IgE: #ar& au #a/a#i$a$&a (& a n&u$rali'a an$i9&nul #ar& l&1a in(us
for,ar&a.
2ocul contactului ntre antigen i anticorp &s$& la distan;7 at=t de zona de
p7trundere a a)entului 7/oar$a (& in$rar&8 c=t 6i de locul de sintez7 al
imuno)lobulinelor 9"):.
Testarea rspunsului imun s& fa#& /rin reacii antigen0anticorp clasice 7(&
a9lu$inar&: (& /r&#i/i$ar&: (& s&ron&u$rali'ar&: (& fi6ar& a #o,/l&,&n$ului: &$#.8 i
moderne 7i,unofluor&s#&n54: ELISA: RIA8.
,.,. AZD$:1D:2 MM:1 9=2:2"A
Mntervenie prioritar fa54 (& anti)ene in5ec;ioase care produc o evolu;ie cronic7 a
bolii: #u $&n(in5a (& #ui%4rir& a 9&r,&nului @n 5&su$: ,ar#a$4 (& (&s#4r#4ri /&rio(i#&
@n $or&n$ul san9uin 7$u%&r#ulo'4: %ru#&lo'4: sifilis: l&/r48: fa54 (& ;esuturi str7ine
speciei receptorului 7r&s/in9&r&a 9r&f&lor8: #a i fa54 (& celulele tumorale 7%oli
,ali9n&8.
Geriga efectorie &s$& r&/r&'&n$a$4 (& celle specifice 0 limfocite sensibili'ate 0
sbsetri "e limfocite T 7li,fo#i$&l& CDDBT+1 (& +i/&rs&nsi%ili$a$& $ar(iv4: li,fo#i$&
CDMB T1#i$oli$i#&8. A#&s$& #&lul& @n #on$a#$ #u an$i9&nul s&#r&$4 limfoHine 7su%s$an5&
solu%il& s&#r&$a$& (& un&l& #&lul& al& sis$&,ului i,un8.
2ocul contactului ntre antigen i anticorp &s$& aproape de poarta de intrare sau @n
anu,i$& zone de cantonare pre5eren;ial7 a anti)enului% unde se produce
?)ranulomul@ #u as/&#$ l&'ional1r&a#$iv 7a9lo,&rar& (& li,fo#i$& T i ,a#rofa9&8.
Testarea rspunsului imun s& fa#& /rin teste in vivo 7in$ra(&r,or&a#5ii 1 IDR 1 (&
$i/ @n$;r'ia$8 i teste in vitro 7$ransfor,ar&a %las$i#4 a li,fo#i$&lor T: in+i%i5ia
,i9r4rii ,a#rofa9&lor: $&s$ul (& #i$o$o6i#i$a$& i,un4: #i$o,&$ri& @n flu68.
MM:1)$A)EM2"(M" M1E=9\MM2)A
U$ili'ar&a s&rurilor i va##inurilor: al4$uri (& #+i,io$&ra/i#&: r&/r&'in$4 o
ar,4 &s&n5ial4 @n /rofila6ia i $ra$a,&n$ul unor %oli inf&#5ioas&.
2rofila6ia s/&#ifi#4 7i,uno/rofila6ia8 inf&#5iilor %a#$&ri&n& /oa$& fi (& (ou4
#a$&9oriiF pasiv7 7$ransf&r (& an$i#or/i s/&#ifi#i8 i activ7 7a(,inis$rar& (&
va##inuri8.
1. MM:1)$A)EM2"(M" $"DMGZ !D=A:AM T=A"$=:TM9=%
S&ruril& sun$ pro"se biologice c n conint bogat %n anticorpi specifici fa54 (&
unul sau ,ai ,ul5i a9&n5i /a$o9&ni i s& folos&s# /&n$ru %lo#ar&a /ro#&sului inf&#5ios
la su%i&#5ii inf&#$a5i #u a9&n$ul /a$o9&n r&s/&#$iv.
A#&s$& s&ruri confer! imnitate pasiv! 7f4r4 /ar$i#i/ar&a sis$&,ului #&lular
i,uno#o,/&$&n$8. I,uni$a$&a /rin $ransf&r (& an$i#or/i &s$& ra/i(4 7#on5in&
an$i#or/i 9a$a for,a5i8: (ar (& s#ur$4 (ura$4 71E11C 'il& /&n$ru s&ruril& +&$&rolo9& i
*E1AE (& 'il& /&n$ru s&ruril& +o,olo9&8: $i,/ n&#&sar /ro$&in&i s$r4in& s4 s& &li,in&
(in or9anis,.
Du/4 /rov&ni&n54: s&ruril& sun$ (& (ou4 #a$&9oriiF s&ruri +&$&rolo9& i s&ruri
o,olo9&.
1.1. "&MM1MDTA"A=" &= "1TM9)A$M D$=9MEM9M S=T=A)2)LM
!D=A)$A)EM2"(M=, D=A)T=A"$M=%
Serrile heterologe se obin pe animale 9cal& iepre& oaie: hiperimni'ate activ c
"iferite vaccinri #i antito-ine.
S& u$ili'&a'4 @n prevenirea unor boli bacteriene #ar& r&#unos# @n mecanismul
pato)enic interven;ia prioritar7 sau e*clusiv7 a e*oto*inelor bacteriilor in5ectanteF
$&$anos: (if$&ri&: 9an9r&n4 9a'oas4: %o$ulis,.
Du/4 compoziie: s&ruril& s& #lasifi#4 @nF
3 seruri antibacteriene 7s&r an$i,&nin9o#o#i#8V
3 seruri antito*ice 7s&r an$i(if$&ri#: an$i$&$ani#: an$i9an9r&nos: an$i%o$ulini#8V
3 seruri mi*teF an$i%a#$&rian B an$i$o6i# 7s&r an$i#4r%unos8.
Du/4 scop: s&ruril& s& #lasifi#4 @n seruri administrate pro5ilactic 7s&ro/rofila6i&8
i seruri administrate curativ. D& &6&,/lu: la #o/ii #on$a#5i #u un %olnav (& (if$&ri&
s& a(,inis$r&a'4 /r&v&n$iv s&r i,un an$i(if$&ri#. Dar /&n$ru a o%5in& o i,uni'ar&
,ai /u$&rni#4 i (ura%il4: s&ro/rofila6ia s& #on$inu4 #u va##inar&a 7ana$o6in4
(if$&ri#48.
Mmunizarea pasiv are caracter de urgen @n ur,4$oar&l& #a'uriF
3 protec;ia pacien;ilor cu a3)ama)lobulinemie fa54 (& inf&#5iil& #u %a#$&rii /io9&n&
@n #on(i5ii (& ris# #r&s#u$ /&n$ru inf&#5iil& r&s/ira$oriiV
3 protec;ia persoanelor nevaccinate 1n condi;ii de risc ctrescut pentru tetanos sau
/a#i&n5i #u /l49i $rau,a$i#&: arsuri: avor$ s&/$i#V
3 )an)ren7 )azoas7 la /a#i&n5ii #u /l49i $rau,a$i#&V
3 terapia unor to*iin5ec;ii 6i into*ica;iiF (if$&ri&: $&$anos: %o$ulis,: ,u#4$ur4 (&
&r/i v&ninoi.
1.,. "&MM1MDTA"A=" &= L"M"L2)C:2M1= D$=9MEM9= S)M)2)L=
S& o%5in (& la o,: 5ie de la convalescen;i de boli in5ec;ioase 7s&ruri (&
#onval&s#&n$8: 5ie de la persoane imunizate activ: @n ,o( s/&#ial: i s& nu,&s# s&ruri
+i/&ri,un&. S&ruril& o,olo9& s& folos&s# as$4'i su% for,4 (& i,uno9lo%ulin&
79a,a9lo%ulin&8 s/&#ifi#&: &6$ras& (in a#&s$& s&ruri.
3 Imnogloblinele e-trase "in amestecri "iferite "e plasm! 7(& la ,ai ,ul5i
(ona$ori a(ul5i nor,ali8 s& nu,&s# imunoglobuline normale sau gamaglobuline
normale standard 7#on5in I9G fa54 (& ,i#roor9anis,&l& #ar& inf&#$&a'4 ,aPori$a$&a
/o/ula5i&i8V
3 6amagloblinele obinte "in serri "e convalescent sa "in serl nor volntari
mani hiperimni'ai c n anme antigen 7/rin va##inar& sau a(,inis$rar& (&
ana$o6in48 s& nu,&s# imunoglobuline umane specifice anti-7&6.F $&$anos8 sau
gamaglobuline umane hiperimune.
"vanta'ul administrrii gamaglobulinelor specificeF num7r redus de in<ec;iiO aport
mare de anticorpi care se men;in 1n or)anism un timp mai 1ndelun)at 71E11D
s4/$4,;ni8V 57r7 riscul sensibiliz7rii la o eventual7 repetare.
A(,inis$rar&a 9a,a9lo%ulin&lor s& fa#& /rin inP&#5ii in$ra,us#ular& i nu
in$rav&noas&. In$ro(u#&r&a (ir&#$4 @n s;n9& /oa$& (&$&r,ina for,& 9rav& (&
+i/&rs&nsi%ili$a$& i,&(ia$4 7a9r&9ar&a $ro,%o#i$&lor: a#$ivar&a #o,/l&,&n$ului8.
,. MM:1)$A)EM2"(M" "9TMGZ !G"99M1:AM2=%
"a##inuril& sun$ e#antioane "e germeni microbieni sa to-ine bacteriene&
preparate astfel %nc(t #i0a pier"t capacitatea "e a pro"ce boal! 9patogenitatea:& "ar
#i0a p!strat capacitatea "e a in"ce r!spns imn 9imnogenitatea:: (&#i (& a /ro$&Pa
a#$iv: s/&#ifi# or9anis,ul @,/o$riva un&i r&inf&#5ii +o,olo9& #u 9&r,&ni /a$o9&ni.
Un in(ivi( va##ina$: v&nin( @n #on$a#$ #u 9&r,&nul /a$o9&n sau #u $o6in&l&
a#&s$uia: va (&'vol$a nu un r4s/uns /ri,ar 7(& ,i#4 in$&nsi$a$&: (& (ura$4 s#ur$48:
#i un r4s/uns s&#un(ar 7in$&ns i /&rsis$&n$8.
,.1. 9"T=L)AMM
?n fun#5i& (& starea a)en;ilor pato)eni 9modul de preparare: i natura
componentelor anti)enice: va##inuril& s& /o$ #lasifi#a @nF
` vaccinuri corpusculare preparate din a)en;i pato)eni vii atenua;i 7,i#ro%i&ni:
virali8V
` vaccinuri corpusculare preparate din a)en;i pato)eni omor=;i sau inactiva;i
7,i#ro%i&ni: virali8V
` va##inuri /r&/ara$& (inF
- componente microbiene puri5icate 7/ro(us& al& ,&$a%olis,ului %a#$&rian8V
- 5rac;iuni sau subunit7;i structurale ale microor)anismelor 7/oli'a+ari(&
#a/sular&: #o,/on&n$& al& /&r&$&lui %a#$&rian: su%uni$45i an$i9&ni#& viral&8V
` vaccinuri sinteticeV
` vaccinuri clonate sau biosintetice ob;inute cu A(N3recombinant.
,.1.1. Gaccinuri corpusculare preparate din ageni patogeni vii atenuai
MaPori$a$&a va##inurilor vii a$&nua$& sun$ va##inuri viral&: #&l& %a#$&ri&n&
fiin( ,ai /u5in&. A#&s$& vaccinri complete conin tlpini bacteriene 9sa virale:
selectate pentr nivell re"s #i stabil al virlenei.
E6&,/l& (& va##inuri vii a$&nua$& sun$ /r&'&n$a$& @n $a%&lul 1.
Girusuri Cacterii
Gaccinuri standard Gaccinuri standard
2olio,i&li$i# M-#o%a#$&riu,
$u%&r#ulosis
RuP&oli# Sal,on&lla $-/+i
Ru%&oli#
or&ionului
f&%r&i 9al%&n&
+&/a$i$&i A
Gaccinuri
e5perimentale
Gaccinuri e5perimentale
Gri/al S+i9&lla
r&s/ira$or sin#i5ial "i%rio #+ol&ra&
Ro$avirus
Ci$o,&9alovirus
>&r/&svirus
"ari#&lla
Tabelul 10 Gaccinuri vii atenuate !dup Moldovan Ao5ana, 9oni Monica, 1<<%
A$&nuar&a %a#$&riilor s& fa#& /rin c7ldur7% muta)anez7 chimic7 7%a#il $ifi#8:
pasa<e timp 1ndelun)at pe medii de cultur7 7&6.F $ul/ini (& %a#il $u%&r#ulos %ovin
@n$r&5inu$ $i,/ (& 1A ani /rin /asaP& su##&siv& /& ,&(iu #u #ar$of 9li#&rina$ i %il48.
A(,inis$rar&a la /&rsoan&l& s4n4$oas& /ro(u#& o inf&#5i& ina/ar&n$4: ur,a$4:
(u/4 o sin9ur4 ino#ular&: (& instalarea unei imunit7;i mediate umoral 9prin
anticorpi: 6iJsau celular 9lim5ocite T reactive speci5ice:.
?n $a%&lul * sun$ /r&'&n$a$& /rin#i/al&l& avan$aP&l& i (&'avan$aP&l&
va##inurilor /r&/ara$& (in a9&n5i vii a$&nua5i.
Avan$aP& D&'avan$aP&
1 asi9ur4 s$i,ular&a
#on#o,i$&n$4 a i,uni$45ii
,&(ia$& #&lular i u,oral
7in#lusiv I9A s&#r&$or8V
1 @n a(,inis$rar&a oral4
i,uni$a$&a u,oral4 lo#al4
%lo#+&a'4 a##&sul virusului
<s4l%a$i#= la #&lul&l& s&nsi%il&V
1 asi9ur4 /ro$&#5i& (& lun94
(ura$4 7ani (& 'il&8 (&oar&#&
1 r&v&rsi%ili$a$&a virul&n5&i
ini5ial& (u/4 r&/li#ar&a
@n(&lun9a$4 @n or9anis,&l&
va##ina$&V
1 s$a%ili$a$&a s#4'u$4 a
va##inurilor la $&,/&ra$uri
a,%ian$&V
- numrul relativ mare de
contraindicaii.
va##inar&a &#+ival&a'4 #u o
inf&#5i& uoar4 sau
asi,/$o,a$i#4 @n #ursul #4r&ia
r&/li#ar&a asi9ur4 &li%&rar&a @n
or9anis, a un&i #an$i$45i (&
(&$&r,inan5i an$i9&ni#i #u
s$ru#$ur4 i(&n$i#4 #u #&a a
a9&n$ului /a$o9&nV
1 r4s/unsul i,un &s$& (ivi'a$
fa54 (& $oa$& an$i9&n&l&
,i#roor9anis,ului
1 sun$ uor (& a(,inis$ra$V
1 previn boala natural.
Tabelul ,0 "vanta'ele i dezavanta'ele vaccinurilor preparate din ageni vii atenuai
!dup Moldovan Ao5ana, 9oni Monica, 1<<%
,.1.,. Gaccinuri corpusculare preparate din ageni patogeni omor6i sau inactivai
Sun$ sspensii sa pro"se obinte "in particle bacteriene 7sau viral&8 totale& la
care& prin "iverse proce"ee fi'ice 7#4l(ur4: ra(ia5ii U"8 sa chimice& s0a netrali'at
infecio'itatea c meninerea propriet!ilor imnogene. In(u# un r4s/uns i,un ,&(ia$
u,oral 7an$i#or/i8.
E6&,/l&F
va##inul an$i$ifoi(i# 7TAB8V
va##inul an$i+ol&ri#V
va##inul an$i/&r$ussisV
va##inul an$i1E. #oli 7&6/&ri,&n$al8V
va##inul an$i1W&rsinia /&s$is.
2rin#i/al&l& avan$aP& i (&'avan$aP& al& va##inurilor /r&/ara$& (in a9&n5i
inf&#5ioi o,or;5i sun$ /r&'&n$a$& @n $a%&lul A.
"vanta'e &ezavanta'e
1 s$a%ili$a$&a ,ar& #ar&
nu /&r,i$& r&v&rsia
virul&n5&iV
1 s$a%ili$a$& an$i9&ni#4V
1 s$a%ili$a$& la
$&,/&ra$ura u'ual4.
1 in(u# i,uni$a$& (& (ura$4 ,ai
s#ur$4 ra/&luri nu,&roas&V
1 a%s&n5a s$i,ul4rii /ro#&s&lor
i,uni$ar& lo#al& la niv&lul
,u#oas&lor 7I9A s&#r&$or8
ris#ul #a la va##ina5i s4 s& /ro(u#4
o #oloni'ar& a ,u#oas&lor #u
,ul$i/li#ar& lo#al4 a a9&n5ilor
i,uni'an5i ur,a$4 (& (is&,inar&a
i $rans,i$&r&a lor.
Ta%&lul AF Avan$aP&l& i (&'avan$aP&l& va##inurilor /r&/ara$& (in a9&n5i
inf&#5ioi o,or;5i 7(u/4 Mol(ovan Ro6ana: Coni54 Moni#a: 1NNL8
,.1.+. Gaccinuri preparate din componente microbiene
a> Anato-ine
Ana$o6in&l& sun$ produse microbiene purificate. S& o%5in (in to-ine bacteriene
7$&$ani#4: (if$&ri#4: #los$ri(iilor 9an9r&n&i 9a'oas&: s$afilo#o#i#48 "eto-ifiate prin
%nvechirea la c!l"r! c formol 45.
A(,inis$rar&a ana$o6in&lor &s$& @nso5i$4 (& a/ari5ia @n or9anis,ul o,ului
va##ina$ a an$i#or/ilor an$i$o6i#i: /ro$&#$ori @,/o$riva inf&#5i&i #u 9&r,&ni s&#r&$ori
(& &6o$o6in& #u s/&#ifi#i$a$& si,ilar4 ana$o6in&i va##inan$&.
C&l& ,ai &fi#i&n$& ana$o6in& u$ili'a$& @n va##inar& sun$ anato*ina di5teric7 6i
tetanic7. For,&a'4: @,/r&un4 #u Bor(&$&lla /&r$ussis ina#$iva$: un $riva##in Di1T&1
2&r. O al$4 anato*in7 este cea preparat7 din neuroto*ina secretat7 de Clostridium
botulinum.
b> Jaccinri preparate "in fracini sa sbnit!i strctrale ale microorganismelor
Sun$ preparate vaccinale constituite din componeni structurali #ar& sun$
r&s/onsa%ili (& r4s/unsul i,unF /oli'a+ari(& #a/sular&: #o,/on&n$& al& /&r&$&lui
%a#$&rian: su%uni$45i an$i9&ni#& viral&.
"vanta'ele #ons$au @n eliminarea reaciilor postvaccinale iar dezavanta'ele @n
obinerea nei imnit!i cellare slabe& c necesitatea asocierii "e a"$vani.
,.1.;. Gaccinuri sintetice
S& o%5in /rin sinte'a in vitro a fracinilor polipepti"ice care repre'int! antigenele
vaccinante ale nor microorganisme. 2&n$ru a (&v&ni an$i9&n& #o,/l&$&: fra#5iunil&
sin$&$i#& $r&%ui& #u/la$& #u un #arri&r. A#&s$& va##inuri sun$ @n#4 o%i&#$ (& s$u(iu
&6/&ri,&n$al.
,.1... Gaccinuri obinute cu "1&-recombinant !vaccinuri clonate sau biosintetice%
Sun$ preparate %n scopl obinerii "e fracini antigenice imnogene prificate a
c!ror a"ministrare s! e-cl"! reaciile a"verse #i complicaiile postvaccinale.
2rin $&+ni#a ADN1r&#o,%inan$: 9&n&l& #ar& #o(ifi#4 /ro$&in&l& 7an$i9&n&l&8
#o,/on&n$& al& va##inului sun$ s&l&#5iona$&: i'ola$& i in$ro(us& @n 9&no,ul un&i
#&lul& v&#$orF %a#$&ri& 7E. #oli8: l&vur4 7Sa##+aro,i#&s #&r&visia&8 sau #&lul& (&
,a,if&r& #a/a%il& a/oi s4 l& sin$&$i'&'& @n #an$i$45i in(us$rial&.
?n ra/or$ #u numrul antigenelor nrudite sau diferite n acelai preparat:
va##inuril& /o$ fiF
3 vaccinuri monovalente #ar& /rovin (& la o sin9ur4 s/&#i& %a#$&rian4 sau viral4
7$oa$& va##inuril&8V
3 vaccinuri asociate #ar& r&/r&'in$4 o aso#i&r& a va##inurilor @,/o$riva ,ai ,ul$or
%oli: aso#i&r& #ar& $r&%ui& s4 asi9ur& &fi#a#i$a$&a fi&#4ruia (in$r& va##inuri: iar
r&a#5iil& a(v&rs& s4 nu fi& ,ai fr&#v&n$& i ,ai 9rav& (&#;$ #&l& #unos#u$& /&n$ru
fi&#ar& va##in @n /ar$&. E6&,/l&F va##inul an$i(if$&ro1$&$ani# 7va##in %ival&n$8:
(if$&ro1$&$ano1/&r$ussis 7va##in $rival&n$8: an$i,&nin9o#o#i# 7$&$raval&n$8.
,.,. M1&M9"\MM &= G"99M1"A=
A#&s$& in(i#a5ii /o$ fiF 9&n&ral&: s&l&#$iv& i &l&#$iv&.
Gaccinrile generale vizeaz7 toat7 popula;ia in5antil7 sau adult7 @n ra/or$ #u un
/ro9ra, (& va##inar& s$a%ili$ @n fun#5i& (& 9ravi$a$&a i /r&val&n5a @n$r1o anu,i$4
5ar4 a unor inf&#5ii. As$f&l: @n Ro,;nia: va##in4ril& an$i1$&$ani#4: an$i1(if$&ri#4: an$i1
$u%&r#uloas4: an$i1/&r$ussis i an$i1/olio,i&li$i#4 sun$ o%li9a$orii.
Gaccinrile selective vizeaz7 )rupe de popula;ii cu risc crescut la o in5ec;ie 7an$i1
/n&u,o#o#i#4: an$i1,&nin9o#o#i#4: an$i19ri/al4 @n #ol&#$ivi$45i8.
Gaccinrile elective vizeaz7 pacien;ii la care anumite in5ec;ii sunt mai 5recvente 6i mai
)rave dec=t 1n popula;ia )eneral7 7va##inul an$i1/s&u(o,onas la /a#i&n5ii ari:
va##inul an$i19ri/al la /a#i&n5i #u af&#5iuni r&s/ira$orii #roni#&: la #&i #u (ia%&$
'a+ara$8.
,.+. 9"2=" &= "&MM1MDTA"A= " G"99M1:AM2)A
Cal&a (& a(,inis$rar& &s$& @n 9&n&ral parenteral!: (&#i f4r4 /ro(u#&r&a (&
an$i#or/i I9A s&#r&$ori. S& i,/un&: a$un#i #;n( %ari&ra i,un4 a ,u#oas&lor &s$&
&s&n5ial4 /&n$ru o /ro$&#5i& %un4: a(,inis$rar&a va##inurilor a$&nua$& /& #al& oral4:
/&n$ru a s$i,ula /ro(u#&r&a (& I9A s&#r&$or.
,.;. 9)M$2M9"\MM2= G"99M1:AM2)A
A#&s$& #o,/li#a5ii #ons$au (inF in(u#&r&a %olii inf&#5ioas& i (iv&rs& a##i(&n$&
al&r9i#&.
1 ?oala infecioas! /oa$& fi in(us4 /rin va##inuri vii 7$ul/ini %a#$&ri&n& sau virusuri
a$&nua$&8 la /&rsoan&l& #u (&fi#i&n5& al& a/4r4rii i,un&.
1 Acci"entele alergice 7r&a#5ii anafila#$i#&8 s& /o$ (a$ora i,/uri$45ilor an$i9&ni#&
/rov&ni$& (in su%s$ra$ul /& #ar& s& #ul$iv4 $ul/ina va##inan$4.
,... 9)1TA"M1&M9"\MM2= G"99M1:AM2)A
2o$ fi $&,/orar& i (&fini$iv&. Din #a$&9oria #&lor temporare fa# /ar$&F
sarcina% boli 5ebrile acute. C&l& "efinitive s& r&f&r4 la pacien;ii cu imunode5icien;e 6i
pacien;ii hipersensibiliza;i la anti)enele vaccinante.
MM9A)CM)2)LM= =9)2)LM9Z
1. DEFINIREA TERMENILOR
Mi#ro%io#&no'a reprezint ansambll speciilor "e microorganisme& "intr0n
anmit ecosistem !ni ecologic%.
E#osis$&,ul 7nia &#olo9i#48 este 'ona "in macroorganism !cavitate natural, piele
etc.% care asigr! "e'voltarea nei microbioceno'e.
Mi#ro%io$a definete totalitatea microbioceno'elor "in organism, cu interrelaiile
dintre ele.
Elora bacterian dintr-o ni bacterian poate fi clasificat dup dou criterii0
adaptabilitatea la condiiile niei ecologice i potenialul de a determina boala.
Du/4 a(a/$a%ili$a$&a la #on(i5iil& ni&i &#olo9i#&
Flora r&'i(&n$40 microorganisme bine adaptate la condiiile ecosistemului, constant
i caracteristic sistemului/
Flora flo$an$40 specii de microorganisme neadaptate, sau puin adaptate, cu timp de
persisten variabil n cadrul unui ecosistem.
Du/4 /o$&n5ialul (& a (&$&r,ina %oala
&in punct de vedere al patogenitii, microorganismele nu se pot clasifica rigid,
deoarece n anumite condiii acelai microorganism stabilete relaii diferite cu gazda
uman.
Flora sa/rafi$4 7<nor,al4= sau <in(i9&n4=80 speciile nepato)ene care populeaz n
mod normal diferitele ecosisteme ale organismului.
Flora /a$o9&n40 este alctuit din microor)anisme pato)ene, care nu se gsesc n
mod normal n ecosistemele organismului. =le pot determina tulburarea echilibrului
ecologic al niei, cu apariia unei boli cu manifestri clinice caracteristice, uneori cu
penetraie mare n populaie !Dalmonella T@phi, Qersinia pestis etc.%, sau pot determina
mbolnviri cu consecine grave !Dtreptococcus p@ogenes, Treponema pallidum%.
Flora #on(i5iona$ /a$o9&n40 specii 6i tulpini sapro5ite, din flora indigen a
ecosistemului, care, n anumite condiii favorizante !scderea rezistenei antiinfecioase a
organismului, stress, viroze, tratament imunosupresiv, DM&", etc.%, ca i n cazul n care
colonizeaz zone anatomice sterile !apariia de septicemii i meningite%, pot determina
boala. &atorit e5istenei patogenitii condiionate, termenul de flor VnormalK tinde s
fie nlocuit, cu cel de flor VindigenK, termen care implic posibilitatea ca din aceast
flor s se selecteze indivizi bacterieni condiionat patogeni.
Flora a##i(&n$al /a$o9&n4 provine din 5lora comensal7 a or)anismului, dar
necesit7 condi;ii deosebite de 1nmul;ire, chiar dac ptrunde n zone anatomice sterile.
"stfel, streptococii viri"ans se gsesc n mod normal n faringe i a'ung n circulaie
dup e5tracii dentare. 2a omul sntos, mecanismele rezistenei naturale antiinfecioase
nltur streptococii n c6teva ore de la ptrunderea lor n s6nge, pe c6nd la cei cu vicii
valvulare, la care e5ist depozite de fibrin pe endocard, streptococii se vor nmuli
produc6nd endocardita lent malign. :n alt e5emplu, este cel al tulpinilor de
Staphilococcs epi"ermi"is, principalul comensal al pielii, care e5plic eecurile din
chirurgia ortopedic i cardiac datorit ptrunderii n circulaie, n timpul actului
operator.
Elora condiionat patogen i cea accidental patogen alctuiesc flora o/or$unis$4,
care profit n orice mpre'urare de vulnerabilitatea gazdei umane.
$onderea germenilor n etiologia infeciilor s-a modificat de-a lungul timpului.
$6n la descoperirea rolului microbilor n producerea acestora, patologia infecioas a
fost dominat de bacteriile nalt patogene. Mntroducerea metodelor de antisepsie i
asepsie, a profila5iei specifice prin vaccinare i seroterapie a bolilor infecioase, a sczut
mult incidena infeciilor. &up descoperirea antibioticelor problema infeciilor prea
rezolvat, ns la scurt timp dup introducerea lor n tratamentul infeciilor, s-a remarcat
apariia tulpinilor bacteriene rezistente. 7n consecin, etiologia infeciilor a nceput s fie,
i mai este i astzi, dominat de flora condiionat patogen.
9u timpul, microbiologia clinic a fost pus fa n fa cu o nou problem, legat de
diagnosticul microbiologic al infeciilor care apar la bolnavii cu DM&". 7nfeciile, la aceti
bolnavi cu imunitatea compromis, sunt produse de microorganisme condiionat
patogene, accidental patogene i uneori chiar i de microorganisme care p6n n prezent
nu au fost deloc izolate !sau foarte rar% n infecii.
*. INTERRELAGII ?NTRE MICROORGANISMELE DINTR1O NI)
ECOLOGIC
7ntre microorganismele dintr-o ni ecologic se stabilesc relaii care pot influena
gazda uman. Aelaiile ce se stabilesc ntre microorganisme sunt0 neutralism,
comensalism, simbioz, sinergism, parazitism, antagonism.
RELAGII DE INDIFERENG 7NEUTRALISM8, n care speciile se tolereaz7
reciproc. 7n acest tip de relaie, speciile trebuie s fie ndea'uns de deprtate din punct de
vedere ta5onomic i s aibe necesiti nutritive diferite !s nu intre n competiie pentru
acelai substrat nutritiv sau energetic%. "cest tip de relaie influeneaz mai puin gazda
uman.
RELAGII DE COMENSALISM, n care un microor)anism are nevoie de un altul%
57r7 ca 5enomenul s7 5ie valabil 6i invers. &e pild, +aemophilus in5luenzae are nevoie
pentru cretere i multiplicare de factor J, factor pe care l secret Staphlococcus
aureus. "plicaia practic a acestui raport dintre cele dou specii se folosea n trecut
pentru izolarea Saemophilus influenzae dintr-un produs patologic n care se bnuia
prezena lui, prin nsm6narea n striu transversal a unei tulpini de Dtaph@lococcus
aureus. 9oloniile de Saemophilus se dezvolt doar n 'urul culturii de stafilococ. "cest
fenomen se numete satelitism. "lt e5emplu este constituit din cultivarea mpreun a
bacteriilor aerobe 6i anaerobe. Cacteriile aerobe consum o5igenul molecular cu
scderea potenialului de o5idoreducere din mediu, ceea ce permite dezvoltarea
populaiei anaerobe asociate.
SIMBIO3A const n asocierea a dou7 specii care se 5avorizeaz7 reciproc. "stfel,
aciditatea produs de bacilii lactici favorizeaz dezvoltarea levurilor, care consum la
r6ndul lor acidul lactic. Dcderea aciditii permite dezvoltarea bacililor lactici.
SINERGISMUL este o rela;ie 1ntre microor)anisme% 5recvent d7un7toare
or)anismului. "stfel, unele bacterii 5uzi5orme 9Isobacterim: i spiralate 9Treponema
vincenti: nu sunt pato)ene separat, dar atunci c6nd se regsesc mpreun n faringe, sunt
cauza unei faringite lceronecrotice denumit i angina f'ospiralar! a li Plat0Jincent.
"lt e5emplu este prezena concomitent, ntr-o plag, a 5lorei aerobe 6i anaerobe. Elora
aerob consum o5igenul cre6nd astfel condiii optime dezvoltrii florei anaerobe.
2ARA3ITISMUL const n 5olosirea unei specii de c7tre o alt7 specie ca habitat.
=5ist multe forme de parazitism ntre microorganisme, dar din punct de vedere medical
importante sunt virusurile care paraziteaz7 bacteriile - bacterio5a)ii. $rin relaiile care
se stabilesc ntre bacteriofagi i celulele parazitate se pot r7sp=ndi diverse caractere,
dintre care de interes medical, sunt cele legate de pato)enitatea i rezisten;a la
antibiotice ale bacteriilor. =5emplu0 n relaiile fag0bacterie "e tip simbiotic, c6nd
HinfeciaK cu un bacteriofag temperat a unei bacterii din aceeai ni ecologic, confer
acesteia proprieti noi !tulpinele de Corynebacterim "iphteriae devin to5igene prin
lizogenizare cu fagi specifici/ streptococii betahemolitici li'ogeni secret to5ina
eritrogen etc%.
ANTAGONISMUL se definete prin e5ectul inhibitor pe care un microor)anism 1l are
asupra dezvolt7rii 6i multiplic7rii altui microor)anism. =ste cea frecvent relaie
nt6lnit ntre microorganismele aceleiai nie ecologice. 7ntr-o asemenea interrelaie,
specia care %nvinge se numete an$a9onis$4, iar specia sa speciile st(n$enite %n
"e'voltare se numesc #on#ur&n$&. De deosebesc trei tipuri de antagonism0
an$a9onis, /rin (if&r&n54 (& vi$ali$a$& care se datoreaz vite'ei "e mltiplicare mai
mare a nei specii "ec(t a speciei concrate, diferene de echipament enzimatic etc.
an$a9onis, n&s/&#ifi# care este determinat de eliberarea %n me"i a nor sbstane
to-ice& neselective ca, de pild, acizi, alcooli etc.
an$a9onis, s/&#ifi# ce se datoreaz elabor!rii nor sbstane mai pin to-ice
aspra organismli& "ar nocive pentr alte specii microbiene. "ceste substane sunt
an$i%io$i#&l&, care constituie baza terapiei antiinfecioase i %a#$&rio#in&l& !substane
specifice proteice, cu activitate antibacterian cu spectru ngust, secretate de unele
bacterii - =. coli, $seudomonas aeruginosa, care acioneaz asupra indivizilor aceleiai
specii sau a speciilor nrudite%.
=5ist numeroase e5emple de antagonism bacterian0 ntre bacteriile aerobe
sporulate !Cacillus anthracis, Cacillus m@coides%/ ntre Pseudomonas aeru)inosa 6i
-acillus anthracis/ ntre speciile nepato)ene 6i cele pato)ene !speciile nepatogene, mai
adaptabile, inhib de obicei pe cele patogene%. =5emple0 streptococii alfa0hemolitici
!viridans% inhib n faringe "e'voltarea Corynebacterim "iphteriae/ Escherichia coli
nepatogen inhib n intestin speciile patogene de =nterobacteriaceae !E> Coli patogen&
Shigella& Salmonella etc.%.
Rela;iile de anta)onism pot ns s se manifeste uneori n dauna 5lorei sapro5ite 6i
1n 5avoarea celei pato)ene. "stfel, Staphilococcs ares patogen este antagoist
pternic fa! "e E> Coli nepatogen. "a se e5plic de ce tratamentul abuziv cu antibiotice
cu spectru larg !tetracicline%, pe cale oral, neasociat cu administrarea de comple5
vitaminic C, prin inhibiia parial a florei de =. 9oli din intestin, favorizeaz apariia
unei enterite stafilococice foarte grave - disbacterie - !tulburarea echilibrului florei
intestinale indigene, cu diminuarea rolului fiziologic antagonist al acestei flore fa de
flora patogen sau condiionat patogen%.
Anta)onismul bacterian normal poate 5i tulburat i n alte cazuri de tratamentul
nera;ional cu chimioterapice. &e pild, tratamentul ndelungat cu penicilin duce la
dispariia streptococilor alfa0hemolitici 9viri"ans: din nazofaringe, cu nlocuirea lor de
flora 6ram negativ!.
=5ist i 5orme de anta)onism 1ntre bacterii 6i virusuri, cum este, pe de o parte,
ntre bacterii i bacteriofagi, iar pe de alt parte, ntre bacteriile dintr-o ni ecologic i
virusurile care o populeaz ocazional sau datorit vaccinrii orale !e5emplu0 relaiile care
se stabilesc n intestin, ntre enterobacterii0 nepatogene, patogene i enterovirsri%.
A. INTERRELAGII MICROORGANISM 1 MACROORGANISM
7ntre organismul uman i microorganisme se stabilesc relaii foarte variate, dintre
care unele i sunt duntoare iar altele benefice. "stfel, ntre macroorganism i
microorganisme !bacterii, virusuri, fungi, protozoare%, se stabilesc relaii care pot fi de
comensalism, mutualism i parazitism.
COMENSALISMUL este o asocia;ie 1n care un microor)anism 5olose6te ca mediu de
via;7 un alt or)anism 57r7 s73l pre<udicieze. )mul este gazda unei flore comensale
foarte bogate - flora normal, prezent pe piele, mucoase, tract digestiv, etc.
Microorganismele triesc i se nutresc n str6ns relaie cu gazda, dar nu pe seama
esuturilor acesteia, ceea ce nu antreneaz urmri vizibile pentru macroorganism.
=5emplu0 bacteriile florei in"igene a pielii care se hrnesc cu detritusuri organice de pe
suprafaa tegumentelor.
MUTUALISMUL 7TOLERANG MUTUAL8 este o rela;ie care se stabile6te 1n
bene5iciul ambilor parteneri ai asocia;iei. &e e5emplu, ntre bacilii lactici 6i )azda
uman7 e5ist un beneficiu reciproc0 vaginul ofer condiii de via bacililor lactici, iar
acetia, la r6ndul lor, acidific mediul mpiedic6nd dezvoltarea altor microorganisme. "lt
e5emplu, este constituit din bacteriile 5lorei indi)ene intestinale, care produc fenomenele
fiziologice de fermentaie i putrefacie, ca i sinteza unor vitamine.
2ARA3ITISMUL este o rela;ie care se stabile6te 1n mod cert 1n bene5iciul
microor)anismului 6i 1n detrimentul )azdei umane. &in aceast categorie fac parte
microor)anismele pato)ene.
7ns acestor tipuri de relaii nu le corespund grupe ta5onomice fi5e de
microorganisme, deoarece relaiile care se stabilesc depind n egal msur de gazda
uman. "stfel, n anumite condiii, relaia de comensalism sau mutualism poate s se
transforme ntr-o relaie de parazitism cu efecte nefavorabile asupra gazdei.
<O2ORTUNISMUL=. :nele microor)anisme nu sunt capabile s7 produc7 boala la
)azd7% 1n condi;ii normale dar, odat cu apari;ia unor schimb7ri 1n circumstan;ele
ecolo)ice ale mediului intern sau e*tern !surmena', subnutriie, tumori comsumptive,
infecii intercurente etc.% determin7 in5ec;ii )rave 6i chiar mortale. &e e5emplu, la nou-
nscui, pot apare infecii grave cu '& coli !tulpini condiionat patogene%. &e asemenea,
5lora indi)en7 5usospirilar7 a cavitii bucale !Correlia vincenti, Eusobacterium
fusiformis%, n anumite condiii de scdere a rezistenei organismului, poate provoca
stomatite, angine sau faringite ulceromembranoase. :n alt e5emplu din aceast categorie
l ofer 5un)ii !n special levurile, de tipul 9andida albicans%, care n cazuri de diabet
zaharat, tumori ale esutului limfoid, leucemii, provoac infecii grave, locale sau
viscerale, mortale.
Aelativ la tipul de relaie VoportunismK, trebuie avut n vedere posibilitatea
e*acerb7rii 5lorei bacteriene indi)ene, 1n condi;iile tratamentului intensiv !i uneori
abuziv% cu corticosteroizi, tratament care diminu rezistena nespecific i specific a
macroorganismului.
9el mai pregnant e5emplu de infecie oportunistic l ofer in5ec;ia cu virus +"..
D. FLORA NORMAL 7INDIGEN8 A ORGANISMULUI
7n timpul vie;ii intrauterine, or9anis,ul &s$& s$&ril, fiind ferit de microorganisme
at6t prin membranele fetale, c6t i prin placent, care este impermeabil pentru
ma'oritatea lor, cu e5cepia unor virusuri !virusul rubeolic, citomegalic, etc.%, bacterii
!Treponema pallidum% i parazii !To5oplasma gondi%. $rima nt6lnire a organismului
uman cu microorganismele mediului ncon'urtor se produce n momentul naterii, c6nd
ftul vine n contact cu flora vaginal i cutanat a mamei.
(up7 na6tere, or9anis,ul &s$& su/us un&i #on$a,in4ri #on$inu&. Elora normal
a organismului este prezent imediat dup natere i este constituit din specii comensale.
=a colonizeaz mucoasele i tegumentele copilului, fiind supus anumitor variaii p6n
c6nd se stabilete un raport numeric echilibrat ntre bcterii i fungi. De constituie, astfel, o
%%barier7 biolo)ic7@ care, prin concuren microbian se opune la ptrunderea altor specii
patogene n organism. Eiecare mucoas !cavitatea bucal, mucoasa rinofaringian,
intestinal, vaginal% prezint o flor variat, cu anumite particulariti.
7n general, or)anismul uman este populat de 5oarte multe specii bacteriene 6i de
un num7r mai mic de virusuri% 5un)i 6i protozoare.
Flora normal7 a or)anismului depinde de o serie de factori, cum sunt0 v(rsta&
regiml alimentar& statsl hormonal& starea "e s!n!tate& con"iiile "e igien! colectiv! #i
personal!> =ste foarte dificil definirea e5act a speciilor care alctuiesc flora normal,
deoarece o serie de specii patogene pot fi i ele prezente temporar pe tegumente i
mucoase, fr s produc mbolnviri. &e e5emplu, pneumococul i meningococul sunt
bacterii patogene, fiind cauza unor infecii foarte grave. Totui ele se gsesc la
apro5imativ 18F din populaia sntoas.
/onele or)anismului populate 1n mod normal cu microor)anisme sunt0 pielea&
tractl respirator sperior !vestibul nazal, faringe%, tbl "igestiv !cavitatea bucal i
intestinul gros%, tractl rinar !partea anterioar a uretrei% i vaginl>
7n afar de aceste zone, microorganisme mai pot aprea n numr mic i n mod
pasager n restul tractului respirator, digestiv i n uter, fiind rapid ndeprtate de
mi'loacele de aprare ale organismului. S=n)ele% lichidul ce5alorahidian% lichidele
sinoviale% din seroase% ;esuturile pro5unde sunt sterile. $rezena microbilor n aceste
zone are ntotdeauna o semnificaie patologic.
P&2& FL$RA N$R#ALE A P"'L""
$e tegumente e5ist o flor rezident, situat n straturile profunde, de obicei
constant i una superficial, flotant.
$ielea este populat de multe specii bacteriene, densitatea acestora fiind mai mare
n zonele umede !a5ila, zona perineal, zonele interdigitale%. Dpecia cel mai des nt6lnit,
care reprezint <8F din flora cutanat aerob este Staphilococcus epidermidis. 7n
regiunile umede se poate nt6lni i S& aureus. 7n afar de speciile menionate, pe piele se
mai gsesc bacili di5teromor5i anaerobi, ca, de pild, $ropionibacterium acnes !n
foliculii piloi, transpiraie, glandele sebacee% care se nmulesc mai ales la pubertate,
produc6nd acneea 'uvenil. 2a ,8F din populaie se izoleaz de pe piele Clostridium
per5rin)ens. 7n mod pasager se evideniaz n patul periunghial i pe scalp specii de
Candida.
) meniune special trebuie s facem pentru prezena bacteriilor patogene i
condiionat patogene pe tegumentele i mucoasele farmacistului. =le pot constitui o
importan surs de contaminare a medicamentelor pe care acesta le prepar sau le
m6nuiete.
P&8& FL$RA N$R#ALE A CA."TED"" -,CAL' N" A .'ST"-,L," NA/AL
Dpeciile ce colonizeaz aceste zone sunt, n general, streptococi% sta5ilococi% bacili
di5teromor5i% coci 0ram ne)ativi i mai rar ciuperci. :nele din aceste specii sunt
condiionat patogene !Dtr. pneumoniae, 1eisseria meningitidis, 9andida%.
&ensitatea florei microbiene n #avi$a$&a %u#al4 este foarte mare, mai ales la
nivelul suprafeei dinilor i anurilor gingivale, care sunt sediul unei bogate flore
anaerobe. &ac igiena cavitii bucale este deficitar, sub aciunea unor specii ca
Streptococcus mutans, se produc cariile dentare. D-a constatat c numrul de Dtr. mutans
crete n timpul producerii cariilor i scade dup tratarea acestora.
Flora farin9ian4 este reprezentat de streptococi viridans i ocazional de
streptococi beta3hemolitici !specie patogen%, la care se adaug di5teromor5i% neisserii
hemolitice% sta5ilococi, etc.
Tra#$ul r&s/ira$or inf&rior este steril, dar s-a izolat din plm6nul persoanelor
sntoase Pneumocistis carinii. "cest parazit nu are semnificaie patologic la aceste
persoane, dar poate da pneumonii grave la persoanele imunocompromise, cum sunt
bolnavii de DM&".
P&>& FL$RA N$R#ALE A T,-,L," ("0'ST".
S$o,a#ul conine doar ocazional flor bacterian acidotolerant !unii lactobacili 6i
streptococi% dat fiind aciditatea gastric pronunat. Erecvent se izoleaz de pe mucoasa
gastric +elicobacter plori, care ar putea constitui cauza unor gastrite i a ulcerului
duodenal. 2a persoanele la care se administreaz o medicaie ce schimb pS-ul gastric,
flora normal sufer modificri.
2ar$&a in#i/i&n$4 a in$&s$inului su%5ir& conine un numr redus de microbi, care
crete vertiginos spre ileon unde se vor gsi streptococi% lactobacili% enterobacterii%
specii de -acteroides, etc.
In$&s$inul 9ros este cea mai populat zon cu microbi a organismului. "ici, peste
<8F din flor este anaerob, reprezentat mai ales de bacili aparin6nd genului
-acteroides, nsoit de enterobacterii care sunt facultativ anaerobe, la care se adaug
protozoare nepato)ene, ca, de pild =ntamoeba coli. Tratamentul cu antibiotice altereaz
rapid echilibrul care se stabilete ntre aceste specii cu nmulirea consecutiv a unor
specii mai rezistente la antibiotice cum sunt Clostridium di55icile, specii din genul
'nterococcus i Pseudomonas care pot produce diaree cu posibiliti de evoluie spre
colit pseudomembranoas.
P&P& FL$RA N$R#ALE A TRACT,L," ,R$0'N"TAL
Ur&$ra an$&rioar4 este populat la ambele se5e cu flor asemntoare celei de pe
piele0 S& epidermidis% 'nterococcus 5aecalis% di5teromor5i etc.
Flora va9inal4 variaz n funcie de v6rst. "stfel, p6n la pubertate flora vaginal
conine specii prezente pe piele, iar dup pubertate p6n la menopauz, vaginul este
populat cu o varietate foarte mare de bacterii, predominante fiind speciile de
Lactobacillus 9bacili (oderlein:.
Cacilii &oderlein, indicatori ai ciclurilor endocrine normale, sunt bacili Lram
pozitivi care se dezvolt numai la pS acid !pS-ul normal al vaginului%. La f&$i5&l& nou1
n4s#u$&, bacilul apare repede n vagin, datorit fermentrii glicogenului din mucoasa
vaginal !rmas din circulaia matern%, cu scderea concomitent a pS-ului local. &up
consumarea rezervei de glicogen de provenien matern, pS-ul vaginal crete i bacilul
&oderlein, nemaigsind condiii prielnice, dispare, fiind nlocuit de o flor mi5t
!streptococi de )rup ( 3 enterococi% di5teromor5i% sta5ilococi coa)ulazo3ne)ativi%
Neisserii banale%. La /u%&r$a$&, odat cu apariia ciclului menstrual, glicogenul reapare
n celulele epiteliului mucoasei vaginale. De creaz din nou condiii de fermentare a
glicogenului, cu scderea pS-ului, ceea ce duce la repopularea vaginului cu bacilul
(oderlein, reprezent6nd, deci, o reflectare fidel a pS-ului normal vaginal al femei, n tot
cursul vieii se5uale normale. 7n /&rioa(a #li,a6ului, pS-ul vaginal crete din nou, ceea
ce provoac dispari;ia bacilului (oderlein.
I& R$L,L FL$R'" N$R#AL' A $R0AN"S#,L,"
Elora normal 'oac un rol important n meninerea strii de sntate, c6t i n
producerea unor infecii. "stfel0
este un 5actor important 1n ap7rarea antiin5ec;ioas7 natural7, stimul6nd at6t
fagocitoza, c6t i unii factori umorali !complement, betalizine%/
este, de asemenea, un important 5actor 1n ap7rarea speci5ic7 9imun7:. Elora indigen
acioneaz at6t la nivelul aprrii sistemice !induce sinteza de anticorpi naturali, la un
nivel cobor6t, dar eficient, datorit stimulrii antigenice continue%, c6t i la nivelul
aprrii locale !anticorpi ")A secretori la suprafaa mucoaselor, cu rol de VecranK
mpotriva infeciilor cu germeni patogeni%/
flora normal deprim7 1nmul;irea 5lorei pato)ene prin mecanisme competitive pentru
un anumit substrat nutritiv, pentru aceiai receptori celulari i producerea de
bacteriocine.
contribuie la nutri;ia 6i metabolismul or)anismului/
- sintetizeaz !specii de ?acteroi"es i E> coli% i secret7 1n intestin unele vitamine,
cum sunt vitamina B i vitamine din grupul C/
- intervine n circuitul hepato3entero3hepatic al unor substan;e cum sunt
hormonii steroizi 6i s7rurile biliare. "ceste substane sunt e5cretate n intestin
prin bil sub forma con'ugat de glucuronide sau sulfai. =le nu pot fi reabsorbite
dec6t dup decon'ugare care se petrece sub aciunea glucuronidazelor i
sulfatazelor secretate de flora bacterian.
constituie sursa ma<orit7;ii in5ec;iilor oportuniste.
Medicul practician nt6lnete mai frecvent infecii produse de microorganisme ce
fac parte din Vflora normalK dec6t infecii produse de flora patogen provenit din
mediul e5tern al organismului. "stfel, speciile de -acteroides, de pild, rezidente ale
intestinului gros, produc abcese dac ptrund n zone sterile ale organismului.
Staphilococcus epidermidis, cea mai important specie a florei normale a pielii, are
proprietatea de a se ataa n mod nespecific de catetere de plastic, produc6nd septicemii.
&e asemenea, '& coli, prezent n flora intestinal este cel mai frecvent agent etiologic al
in5ec;iilor urinare. "ceste infecii cu germeni comensali i condiionat patogeni sunt
favorizate, dup cum am vzut mai sus, de administrarea necontrolat a antibioticelor.
A=9)2T"A=" #M $A=2:9A"A=" $A)&:D=2)A $"T)2)LM9=
RECOLTAREA PROBELOR PENTRU E)AMENUL MICROBIOLO#IC
&iagnosticul bolilor infecioase, controlul sterilitii diverselor produse biologice
i farmaceutice, controlul microbiologic al aerului, apei, alimentelor, obiective de baz
ale laboratoarelor de microbiologie, necesit recoltarea de produse adecvate.
Materialele respective sunt eantioane n care se bnuiete prezena unor
microorganisme. =le pot fi produse normale, cu unele modi5ic7ri 1n caz de boal7
!s(nge& fecale& lichi" cefalorahi"ian0<CR%, sau produse care apar numai 1n urma
1mboln7virii !proi& spt!& lichi" peritoneal& lichi" articlar%.
$robele provin de la bolnav& convalesceni& prt!tori !personal medical, anga'ai
din sectorul alimentar, din farmacii i industria farmaceutic%, ca"avre. De pot analiza, de
asemenea, me"icamente& probe "e aer& ap!& sol& alimente #i alte materiale.
1. REGULI GENERALE DE RECOLTARE
$entru fiecare boal infecioas se recolteaz7 produsele patolo)ice cele mai
reprezentative !cunosc6nd poarta de intrare, cile de rsp6ndire i eliminare, etc.%. De
utilizeaz tehnica corect7 de prelevare, in6ndu-se cont de momentul cel mai potrivit
!peroiada bolii, de preferin nainte de tratamentul cu antibiotice sau[i antiseptice% i
se recolteaz7 cantitatea necesar7, pentru fiecare produs n parte.
)peraiunea de recoltare trebuie e5ectuat7 steril !instrumentar, recipiente curate i
sterilizate fr urme de antiseptice%, aplic=nd cu ri)urozitate metodele de asepsie 6i
antisepsie. Trebuie asigurat meninerea sterilitii din momentul recoltrii p6n la
identificarea agentului patogen.
Produsul se eticheteaz7 corespunz7tor i este nsoit de un bilet care cuprinde
urmtoarele date0 numele i prenumele, v6rsta, domiciliul, data i locul recoltrii, natura
produsului, e5aminrile cerute, diagnosticul prezumtiv, specificarea dac a fost tratat cu
chimioterapice, numele persoanei care a recoltat.
#aterialele trebuie 5erite de contaminare sau denaturare 1n timpul transportului 6i
manipul7rii% printr3o ambalare corespunz7toare, n sticle bine nchise, cu dop de
cauciuc sau plut, prote'ate de cutii de lemn sau metal. &ac se e5pediaz la distan se
menioneaz Vmaterial infeciosK, uneori prin curier special.
Transportul trebuie realizat c=t mai rapid, pentru c orice %nt(r'iere sca"e
posibilitatea evi"enierii microorganismelor iniial prezente i permite %nmlirea celor
contaminante& Trebuie respectate 6i condi;iile de temperatur70 uneori este indicat
temperatura corpului uman !meningococ, gonococ%, alteori temperaturi sczute, realizate
n recipiente de ghea !mai ales virusuri%. $entru transportul la distan se utilizeaz
medii lichide conservante sau medii speciale de transport.
Cns7m=n;area se 5ace pe medii adecvate% c=t mai repede dup7 recoltare, dac este
posibil chiar la patul bolnavului.
*. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICEF BOLNA"I SAU 2URTTORI
*.1. R&#ol$ar&a /ro(us&lor nor,al #on$a,ina$&
a. S&#r&5ia farin9ian4
De recolteaz cu tamponul de e*udat 5arin)ian steril.
"ndica;ii0 pentru "iagnosticl faringitelor #i anginelor streptococice, pentru
confirmarea "iagnosticli "e "ifterie, pentru "iagnosticl bacteriologic al altor angine
bacteriene& fngice& virale& pentr "epistarea st!rii "e prt!tor "e Steptococcs pyogenes
#i "e Corynebacterim "iphteriae>
#ateriale necesareQ tampoane "e ' general !figura 1%, apstor de limb, surs
de lumin, masc !pentru protecia celui ce recolteaz%.
Tehnica de recoltare0 De aeaz pacientul pe scaun cu faa spre lumin, g6tul n
uoar e5tensie i ceafa spri'init de perete. 7n condiii de iluminare adecvat, dup
deschiderea larg a gurii, se deprim baza limbii cu apstorul steril i, n timp ce
pacientul pronun litera ", se #terg c tamponl ferm& "ar n brtal& amig"alele #i
perele posterior al faringeli& viz6nd n special orice zon inflamat, ulcerat, cu depozite
purulente sau cu false membrane. 96nd e5ist false mambrane, acestea se detaeaz de la
periferie, iar mucoasa sub'acent trebuie tamponat.
"t6t la introducerea, c6t i la scoaterea tamponului din faringe n trebie s! se
ating! ba'a limbii sa palatl moale.
&up recoltare, taponul se rintroduce n tubul protector etichetat cu
numele i prenumele pacientului, denumirea produsului recoltat, secia de unde provine,
data i ora recoltrii.
Recoltarea se face "imineaa, fiind interzise gargarismele cu antiseptice, splarea
dinilor sau alimentaia sau la +-; ore interval de la toaleta gurii ori ingestia de alimente.
Prelucrarea probei trebuie s se fac n interval de ma-imm A ore "e la
recoltare. &ac acest interval nu poate fi respectat, se impune fie imersia i transportul
tamponului n bulion de conservare-mbogire, fie transportul probei uscate pe
dreptunghi de h6rtie de filtru.
Eigura 10 Tampon de uz general
%. S&#r&5ia na'al4 sau na'o1farin9ian4
De prelev cu tamponul, cel mai uor per-nazal. "naliza de laborator se numete0
e*udat nazal, respectiv, e*udat nazo35arin)ian&
E6u(a$ul na'o1farin9ian
"ndica;ii. =fectuarea e-"atli na'o0faringian se recomand pentru0
"iagnosticl tsei convlsive& "iagnosticl infeciilor c ,ycoplasma pnemoniae #i
Chlamy"ia& "iagnosticl viro'elor respiratorii& "epistarea st!rii "e prt!tor pentr
Streptococcs pyogenes& bacili "ifterici& meningococi& ?or"etella pertssis.
#ateriale necesare0 tampoane confecionate pe aplicator de s6rm crom-nichel de
,8 cm lungime i 1 mm diametru, cu una din e5tremiti ndoit, surs de lumin, masc
!pentru protecia celui ce recolteaz%.
Tehnica de recoltare0 De aeaz pacientul pe scaun, cu faa spre sursa de lumin i
ceafa spri'init de perete pentru imobilizarea capului. De introduce bl6nd tamponul printr-
o nar, n lungul planeului nazal, p6n atinge peretele poterior al na'o0faringeli. De
las tamponul pe loc c6teva secunde , apoi se rotete pentru a se ncrca cu e5udat i se
retrage. 9antitatea de prelevat crete dac tamponul se retrage puin i se reinser n
aceeai poziie !prima tamponare stimuleaz secreia de mucus nazo-faringian%.
2a sugari este indicat aspiratl na'o0faringian pe cale per0na'al!> "cesta se
recolteaz cu o sond 1>laton introdus printr-o nar i adaptat la o sering etan de ,8
ml.
E6u(a$ul na'al
"ndica;ii0 se recomand pentru "iagnosticl nor viro'e respiratorii sau pentru
"epistarea st!rii "e prt!tor "e Staphylococcs ares sa Streptococcs pyogenes.
Recoltarea se face cu tamponl na'al.
Tehnic70 se terge, pe r6nd, vestibulul foselor nazale cu tamponul de uz general,
umectat cu soluie salin izoton.
#. S&#r&5ia o$i#4
De recomand recoltarea acestui produs patologic n cazul unor otite medii sau
e*tene&
7n cazul o$i$&lor ,&(ii se recomand e5aminarea acestui produs pentru diagnosticarea,
ca agent etiologic al acestor boli, aQ Streptococcs pnemoniae& Streptococcs pyogenes&
7aemophils inflen'ae, mai rar enterobacteriacee, Mora5ella catarrhalis,
Dtaph@lococcus aureus i[sau bacterii anaerobe.
$relevatul de elecie este e*udatul aspirat prin timpanocentez7 sau se poate
recurge la nsn6narea e5tenporanee cu laneta de puncie.
7n caz de perforare spontan a timpanului e5udatul se prelev pe un tampon fin
steril, ghidat prin speculum auricularum ctre fistul.
7n cazul o$i$&lor &6$&rn&, pacienilor cu scurgere otic sero-sanguinolent sau
purulent din conductul auditiv e5tern !nu din urechea medie% li se reconteaz e-"at "in
con"ctl a"itiv e-tern, pe tampon cu mediu de transport.
(. S/u$a
Aecoltarea corect este dificil, pentru c trebuie avut gri' s se obin un produs
strict reprezentativ !microorganismele din sput, nu din saliv sau din cile respiratorii
superioare%. Dputa se recolteaz "e preferin! "imineaa, c6nd bolnavul i face toaleta
broniilor, n plci $etri, borcane sau pahare sterile !preferabil din plastic% de cca 188 ml,
cu gura larg i capac ermetic, "p! o prealabil! cl!tire a grii c solie salin!
fi'iologic! steril! sa gargar! c ap!, peria'ul simplu al dinilor naintea prlevrii.
Eolosirea antisepticelor este interzis.
- 7n in5ec;ii acute este suficient o cantitate "e .03 ml "e spt! mcoprlent!.
- 2a tu6itorii cronici, pentru "iagnosticl tberclo'ei sa al infeciilor fngice
bronho0plmonare, cantitatea de sput trebuie s fie mai mare0 toat! spta "e la
e-pectoraia matinal! sa cea e-pectorat! %n interval "e .03 ore. 1u se e5amineaz
niciodat probele sumate din ,; ore pentru c multiplicarea microorganismelorde
contaminare falsific rezultatele.
- 2a pacien;i cu tuse slab productiv7, stimularea e5pectoraiei se face prin inhalare
"e aerosoli cal'i c solie salin!./5 #i glicerinat! .15.
- 2a copii mici, care nghit sputa, se efectueaz recoltarea prin son"a$ gastric.
Dputa se recolteaz n a5ec;iuni pulmonare 9pneumonii% bronhopneumonii%
tuberculoz7, etc.%.
&. Li#+i(ul 9as$ri#
2ichidul gastric normal, recoltat diminea;a pe nem=ncate% este puternic acid !pS
8,<-1% i fr germeni viabili, dar deseori cu germeni din nazofaringe i saliv. $ot
supravieui doar unii bacili acidorezisteni, fungi i bacterii sporulate.
2a unii bolnavi cu anaciditate% cu staz7 )astric7 sau neoplasm )astric, cavitatea
gastric poate fi populat de un nm!r mare #i variat "e germeni ingerai, provenii din
alimente sau nghiii o dat cu saliva.
7n )astritele microbiene 9)astrite 5le)monoas7: se evi"enia'! bacterii& fngi&
celle epiteliale #i lecocite.
2a copii 6i la 5emei cu suspiciunea de tuberculoz7 pulmonar7 care nu
e5pectoreaz, ci nghit sputa, se recomand e-amenl scli gastric pentr evi"enierea
bacilli 8och.
Tehnic7 de recoltare. Colnavul, nem6ncat de 1, ore, face o toalet a cavitii
bucale cu o soluie steril, apoi se introduce n stomac o sond steril - sonda =inhorn. De
aspir lichidul de staz7, dac e5ist, sau se spal cavitatea gastric cu 188-,88 ml de ap
distilat steril, care se aspir imediat. "cest lichid este supus determinrii pS i prelucrat
specific pentru evidenierea agentului etiologic !efectuare de frotiuri din sedimentul
obinut prin centrifugarea lichidului i nsm6nare pe mediile adecvate, inclusiv pentru
bacilul Boch-CB%.
f. Li#+i(ul (& v4rs4$ur4
De preleveaz obligatoriu n cazul gastroenteritelor acte& to-iinfeciilor
alimentare, n borcane sau plci $etri sterile.
9. Ma$&riil& f&#al&
7n cazul coproculturii, se urmrete evidenierea agentului patogen din fecale.
Prelevarea se face direct din rect i din scaunul emis spontan.
Dir&#$ (in r&#$ cu son(a N&la$on sau #u $a,/onul r&#$al, n dizenteria cronic7 !n
care leziunea este localizat n partea terminal a sigmoidului% i la purt7torii de
Shi)ella 6i Salmonella, cu e5cepia celor de Dalmonella t@phi.
+ se recoman"! acest mo" "e recoltare %n infeciile acte n care agresiunea
bacterian este ileo-'e'unal sau colic inalt.
$relevarea corect prin acest modalitate de recoltare se realizeaz astfel0
tamponul sau sonda 1elaton se umecteaz n prealabil cu soluie salin izoton/ se
penetreaz prin sfincterul anal prin rotare lent i se introduce intrarectal 1. cm. 7n cazul
sondei 1elaton se va ataa la aceasta o sering de 18 ml cu care se fac1-, aspiraii.
&up recoltare, at6t sondele c6t i tampoanele se introduc n tuburi sterile cu dop
sau eprubete cu mediu de conservare, preferabil lichid, care s permit o bun eluare a
prelevatului.
S#aunul &,is s/on$an este o a doua modalitate de recoltare a materiilor fecale. De
recomand n toate 5ormele de diaree acut7 c6nd emisia de materii fecale este
frecvent.
$relevarea din masa fecaloid se face cu tamponl sa c lingria;
coprorecoltorli viz6nd porinile repre'entative ale scanli 0 mcs& proi& s(nge&
porini lichi"e !figura ,%. Golumul recoltei0 +-. cm
+
.
$entru depistarea /ur$4$orilor se administreaz n prealabil pur)ativ salin !sulfat
de sodiu i magneziu n pri egale% .
$robele trebuie nsm6nate imediat, n unele cazuri, cum este dizenteria, chiar la
patul bolnavului sau n cel mult , ore de la recoltare. &ac nu este posibil acest lucru, se
impune folosirea unui mediu special de conservare 3 mediul Car3-lair sau mediul
Stuart care asigur o bun conservare la temperatura mediului ambiant p6n la zile a
enterobacteriaceelor, dar i a germenilor din genul Jibrio>
9oprocultura se recomand n infeciile intestinale0 salmonelo'e& "i'enterie&
holer!& enteroviro'e& para'ito'e etc.
Eigura , 0 9oprocultor
+. S&#r&5iil& ur&$ral&
De recomand a se recolta n cazul pacien;ilor cu uretrit7, care acuz "isrie #i
scrgeri retrale. Dcurgerea uretral pote fi abundent sau discret. Macroscopic, ea
poate fi 0 alb, glbuie, verzuie, brun sau muco-purulent sau clar, filant.
=tilogic, uretritele pot fi 0
- gonococice !peste 8F%/
- negonococice !detrminate de 9hlam@dia trachomatis, :reaplasma ureal@ticum,
M@coplasma genitalim, Trichomonas vaginalis, virusul Serpes simple5%/
- post0gonococice !determinate de 9hlam@dia trachomatis, :reaplasma urealiticum,
9r@ptococcus neoformans%.
Aecoltarea se face cu tamponul steril.
Momentul recomandat pentru recoltare0 la cel puin 8 ore dup7 mic;iune, dar n
cazul suspiciunii infeciei cu Trichomonas vaginalis, prelevarea trebie f!ct! %naintea
micinii matinale, iar tamponul trebuie imersionat n cca 1 ml de soluie salin izoton
nclzit la +
8
9.
&ac secre;ia este abundent7, se terge mai nt6i meatul uretral cu o compres
steril, apoi se recolteaz secreia uretral cu tamponul, dup e5presia postero-anterioar
a uretrei i comprimarea glandului.
&ac secre;ia este redus7 cantitativ, se folosesc procedee de activare a acesteia 0
instilaii c nitrat "e argint intraretrale& masa$ "e prostat! sa ingestie "e alcool seara,
recoltarea fc6ndu-se a doua zi dimineaa. 7n acest caz, recoltarea se va face cu tampoane
speciale, alctuite din alginat de calciu cu un capt acoperit de vat hidrofil, sau cu o ti'
de lemn foarte fin !ca o scobitoare% cu vat hidrofil la un capt. "cest tampon se
introduce 1 cm n uretr, se rotete i se retrage tamponul.
"lternativ, se poate folosi o ans! "in platin!, perfect nchis circular, sterilizat i
complet rcit, introdus n uretr 1-, cm, dup care produsul recoltat se nsm6neaz
direct pe mediile de cultur destinate izolrii germenilor.
i. S&#r&5ia va9inal4
De recomand recoltarea acesteia n caz de leucoree !scurgere patologic la
nivelul organelor genitale feminine sau c6nd nu e5ist simptomatologie, dar e5ist un
anume conte*t epidemiolo)ic !infecii manifeste clinic la partenerul se5ual sau la nou-
nscut%.
&in punct de vedere etiologic, sunt descrise 0
- vlvo0vaginite specifice, determinate de Trichomonas vaginalis, gonococ sau fungi-
9andida albicans/
- vlvo0vaginite nespecifice sa vagino'e, determinate de0 stafilococul auriu,
Dteptococcus p@ogenes, Lardnerella vaginalis, diverse specii de anaerobi.
De recolteaz secre;ia acumulat7 1n 5undul de sac va)inal posterior, secreie
detaat cu a'utorul unei valve i recoltat pe trei tampoane.
a Ta,/onul 1 este descrcat n soluie izoton steril, nclzit la +
8
9, din acest
omogenizat efectundu-se un preparat umed 1ntre lam7 6i lamel7 care se e5amineaz la
microscop.
a Ta,/onul * este folosit la efectuarea unui 5rotiu colorat 0ram, care se e5amineaz
la microscop.
a Ta,/onul A servete pentru dia)nosticul bacteriolo)ic !pentru germenii specifici-
gonococ, i nespecifici-mai sus menionai% i 5un)ic& prin nsm6narea lui pe medii
pentru bacterii i mediu pentru fungi !mediu Dabouraud cu cloramfenicol%.
P. S&#r&5ia #onPun#$ival4
De recomand a se recolta n caz de0 con$nctivite #i Heratite& infecii ale
pleoapelor& infecii ale aparatli lacrimal& en"olftalmite !infecia tunicilor i umorilor
globului ocular%, panoftalmite !infecia se e5tinde i la scler i capsula lui Tenon%,
cellite orbitare& abcese& flegmoane orbitare.
2ro(usul /a$olo9i# poate fi0
- &6u(a$ul a#u,ula$ @n sa#ul #onPun#$ival i pe suprafaa ambelor con'unctive
palpebrale, prelevat pe tampone umectate cu bulion nutritiv. =5udatul poate fi0 seros&
sero0prlent& prlent& mco0prlent& fibrinos& pse"omembranos. =5udatul seros
sau sero-purulent poate fi recoltat prin capilaritate c micropipeta, din sacul
con'unctival.
- ra#la$ul realizat cu spatula de platin steril, separat de pe con'unctiva tarsal
superioar i inferioar.
2r&l&var&a /ro%&lor trebuie s se fac 0
a %nainte "e toaleta feei, care ndeprteaz din secreii i e5udatul con'unctival/
a %nainte "e machia$, care face dificil e5amenul citobacteriologic/
a %nainte "e aplicarea nei terapii antimicrobiene, topic sau sistemic, pentru c
reduce ansa izolrii agentului infecios/ nainte de aplicarea oricrei corticoterapii,
care modific citologia.
.. 2uroiul
=ste un e*udat 5ibrinos% uneori san)huinolent, care conine lecocite
!predominant polimorfonucleare neutrofile-n inflamaiile acute, sau mononcleare-n
inflamaiile cronice specifice%, restri cellare i microorganisml sau microorganismele
determinante ale supuraiei.
Su/ura5ia nseamn 5ormarea sau scur)erea de puroi. Dupuraiile pot afecta
orice esut i organ, cu acumulare de puroi n0
- interstiiile ctanate0 pustule, furuncule, hidrosadenit, abcese, gome/
- estrile msclo0scheletice0 abcese, flegmoane, osteomielit/
- ganglionii limfatici/
- viscere0 abcese/
- cavit!i preformate0 sinusuri paranazale, ureche medie, seroase- meninge, pleur,
pericard, peritoneu, sinovialele articulare/
- pe sprafee tislare "en"ate0 plgi, arsuri.
9oleciile purulente se pot deschide spontan sau cu mai multe fistule.
2r&l&var&a /ro%&lor (in su/ura5ii este frecvent uni#4: de aceea trebuie o e5iste
o legtur ireproabil ntre clinician i medicul de laborator, puroiul reprezent6nd un
produs patologic care trebuie recoltat corect, trebuie trimis n timp util la laborator !n
ma5im 1-, ore de la recoltare%, iar laboratorul trebuie s realizeze o prelucrare imediat i
adecvat a probei.
Tampoanele sunt contraindicate pentru prelevarea puroiului ori de c6te ori putem
obine probe prin /un#5i&1as/ira5i&: #+iur&$aP sau %io/si&. Mzolarea bacteriilor anaerobe
de pe tampoanele uzuale este imposibil. 9u precauii speciale !utilizarea unui mediu de
transport% tampoanele pot 5i utilizate numai pentru prelevarea puroiului din colec;ii
5oarte mici.
96nd este necesar !n cazul coleciilor deschise% se realizeaz irigarea leziunilor
cu soluii saline non-inhibitorii, de tipul soluiei Ainger lactozat.
Leziunile cronice sunt srace n bacterii, de aceea se impune prelevarea unei
cantit7;i mai mari de produs dec6t n leziunile acute.
:nele bacterii anaerobe sunt omor6te dup c6teva secunde de contact cu o5igenul
atmosferic/ altele supravieiuesc +8-<8 minute. &e aceea se recomand7 recoltarea
puroiului 1n 8 recipiente sterile0 unul pentru aerobi% altul pentru anaerobi. 7n lipsa
containerelor speciale pentru anaerobi puroiul se recolteaz cu seringa prin aspiraie, se
elimin bulele de aer din sering i se obtureaz cu un dop de cauciuc, procedeu numit
Hsering anaerobV i care asigur supravieiurea anaerobilor cel puin +8 de minute.
2ro#&(&& (& r&#ol$ar&0
- din colec;ii 1nchise !flegmoane, abcese superficiale, colecii din cavitile seroase% se
recolteaz prin pncie c o sering! steril! #i ac gros cu bizoul scurt dup aseptizarea
loului de puncie cu alcool sau tinctur de iod. $uroiul se introduce ntr-un recipient
steril/
- din colec;ii deschise se recolteaz dup curirea plgii cu soluie Ainger lactozat
sau ser fiziologic steril, ndeprt6ndu-se prima cantitate de puroi eliminat. Aecoltarea
se face cu un tampon sa ans! sa compres! steril! sa c pipeta Paster bine efilat! i
se introduce n recipiente sterile !pentru aerobi i pentru anaerobi% !figura +%.
Eigura + 0 Tipuri de pipete
B* Rco$+ara ,ro-.s$or norma$ s+ri$
a. S;n9&l&
De recolteaz pentru0
- e5aminri bacteriologice0 hemocultur/
- e5aminri serologice0 determinarea anticorpilor/
- e5aminri parazitologice/
- e5aminri hematologice/
- e5aminri biochimice.
a.1. >&,o#ul$ura
7nseamn evidenierea bacteriilor din s6nge.
In(i#a5ii0
a sin"roame febrile f!r! ca'! preci'at!/
a infecii bacteriene plrietiologice !meningite, peritonite, pielonefrite, infecii
puerperale, infecii ale plgilor i arsurilor, alveolite pulmonare%/
a sin"rom septicemic/
a en"ocar"it! sbact!/
a no0n!sci& sgari& ga'"e imnocompromise la orice v(rst!/
a infecii sistemice c patogeni specific !febre enterice, bruceloz, leptospiroz%/
a st!ri febrile postintervenie chirrgical!.
Ma+ria$ ncsar rco$+/rii
- sering! "e nic! tili'are c volm a"ecvat !,8 ml sau mai mic pentru copii% sau un
set de transfer !tub cu ace la ambele capete pentru a permite nsm6narea direct n
mediul de cultur, ceea ce minimalizeaz riscul contaminrii%/
- garo-pentru staz,
- alcool sa tinctr! "e io"0 pentru dezinfecia tegmentelor/
- m!n#i0 pentru protecia m6inilor celui care recolteaz/
- flacoane pentr hemocltr! cu mediu adecvat pentru dezvoltarea germenilor,
prenclzite la +
8
9 !figura ; i .%.
Eigura ;0 Aecoltarea s6ngelui pentru hemocultur
Dunt indicate 5lacoane speciale cu membran7 de cauciuc sau plastic fi5ate cu
capac nurubat, care permit nsm6narea fr ndeprtarea capacului. Golumul de mediu
per flacon este de 1/0.// ml pentr a"li i de 3/01/ ml pentr prelevarea "e la copii.
7n lipsa unor flacoane speciale se pot HconfecionaV astfel de flacoane, folosind
flacoane pentru plasm de 1.8 ml sterile n care se toarn mediul adecvat, iar pentru
anaerobi tuburi de ,.[,.8 mm cu mediu repartizat n coloan de 1. cm nlime.
=5ist 5lacoane pentru hemocultur7 care conin un sin)ur mediu pe care se
dezvolt7 at=t )ermenii aerobi% c=t 6i anaerobi !me"i I al Instittli Cantac'ino 0 I
I>C%. =5ist i flacoane separate pentru germeni aerobi i germeni anaerobi, conin6nd
mediile adecvate, i care sunt inoculate cu s6nge imediat dup recoltare.
$entru depistarea unor microor)anisme cu cre6tere lent7 !brucele, leptospire,
fungi% se recomand utilizarea unor medii difazice0 pant! "e agar0s(nge #ocolat c
blion triptica'! soia pentru brcele sau pant! "e agar ntritiv #i blion inf'ie cor"0
creier pentru fngi.
Mo,&n$ul r&#ol$4rii
Semocultura se recolteaz 1naintea tratamentului antimicrobian. 7n caz contrar
se indic pe buletinul care nsoete proba antibioticele care s-au administrat, pentru a se
utiliza inhibitori speci5ici. "dugarea inhibitorilor se face prin nglobarea de la nceput n
mediul de cultur, sau n momentul nsm6nrii !e5emplu0 aci" paraaminoben'oic
pentr slfami"e& penicilina'! pentr penicilin!& cistein! pentr streptomicin!%. De
recomand cre6terea raportului de inocul 5olositJmediu nutritiv de la 1[18 la 1[+8, 1[.8
c6nd sunt ntrebuinate chimioterapice pentru care nu e5ist inhibitori specifici.
7n bolile care evolueaz7 sistematic cu 5az7 bacteriemic7 !alveolite pulmonare,
febre enterice, leptospiroz, bruceloz%, hemocltra trebie recoltat! c(t mai aproape
"e "ebtl bolii.
7n bolile cu bacteriemii continue !endocardite subacute% prelevarea se poate
realiza n orice moment al 'ilei.
7n bolile cu bacteriemii intermitente !supuraii, pielonefrite% fiecare descrcare
bacteriemic se nsoete de frisoane i este urmat de un croet febril. 9a urmare,
hemocultura trebuie recoltat n momentl apariiei cro#etli febril sau[i n momentul
c6nd bolnavul semnaleaz apariia frisoanelor.
Nu,4rul r&#ol$4rilor
Ma'oritatea bacteriemiilor sunt intermitente> 7n aceste cazuri se recomand >
prelev7riJ8P ore. 7n urgene, ritmul prelevrilor poate fi la intervale de +8-*8 de minute.
7n bolile cu desc7rcare bacteriemic7 continu7 !endocardite subanute% sunt
su5iciente 8 prelev7riJ8P ore.
.$L,#,L R'C$LTER"L$R
$entru a"lt0 843>4 mlJ recoltare/ la no0n!sci& sgari& copii mici0 23>
mlJprelevare. $roporia s6nge[mediu trebuie s fie de 1[18.
3on& (& /r&l&var&
a electiv0 venele de la plica cotului sau venele 'ugulare sau temporal la nou-nscui i
sugari/
a alternativ0 venele antebraului sau venele dorsale ale m6inii/
a punc;ie arterial7 la nivelul pliului in)hinal !n endocarditele cu focar septic pe
valvulele mitrale sau aortice%.
2ro#&(ura (& r&#ol$ar&
7n cazul n care se abordeaz venele de la plica cotului, se aplic garoul pro5imal
de zona punciei. De dezinfecteaz tegumentul supra'acent venei cu alcool iodat ,F.
&up 1 minut se badi'oneaz zona cu eter pentru a ndeprta iodul i a lsa tegumentul
c6t mai uscat. De antiseptizeaz membrana de cauciuc a flacoanelor cu mediu de cultur.
De puncioneaz vena, recolt6ndu-se 18-+8 ml s6nge care se repartizeaz imediat n
1-, flacoane cu mediu de cultur !pentru incubare aerob i anaerob%. Elaconul se agit
pentru omogenizarea s6ngelui n masa mediului. De transport la laborator, unde unul din
flacoane trebuie aerisit prin perforarea membranei cu un ac prote'at cu filtru de vat,
pentru germenii aerobi, cellat flacon fiind folosit pentru urmrirea dezvoltrii
anaerobilor.
Elacoanele se incubeaz la +
8
9 i se e*amineaz7 zilnic macroscopic%
radiometric sau microscopic timp de M zile. &ac la aceste e5aminri se semnaleaz
prezena germenilor se fac subcultiv7ri pe medii speciale i se trece la identi5icarea
acestora i e5ectuarea antibio)ramei. ) incubare mai prelun)it7 se impune la pacieni
cu en"ocar"it! sbact!, la cei la care recoltarea hemocltrii s0a efectat sb
antibioticoterapie !p6n la 1; zile% sau n cazul unor microorganisme particlare !CB,
brucele, leprospire%.
Eigura .0 Aecoltarea s6ngelui pentru hemocultur
a.*. D&$&r,in4ri s&rolo9i#&
7n acest caz se recolteaz 24 ml de s=n)e din vena plicii cotului, se las s se
coaguleze, iar serul separat prin centrifugare este supus e5aminrilor.
%. Li#+i(ul #&falora+i(ian 7LCR8
29A normal este un 5luid steril% incolor 6i clar. 9onine 0
a ntre +-18 celule nucleate[mm
+
, de regul limfocite/
a 1.-;8 mg[dl proteine !reacia $and@ negativ%/
a .8-8 mg[dl glucoz/
a *,8-,+ g[l cloruri.
Carierele hematomeningee i hematoencefalic reduc accesul agenilor infecioi,
al metaboliilor to5ici, dar i al chimioterapicelor ctre 29A i esutul nervos.
Inf&#$ar&a SNC se poate face0
- pe cale hematogen!, n cursul unor bacteriemii sau viremii cu variate pori de intrare/
- pe tecile limfatice olfactive din nazofaringe/
- prin contigitate, din focare infecioase 'u5tameningiene !otomastoidit, sinusite%/
- "in e-terior0 conduct auditiv e5tern, tegumente, nazofaringe, puncii rahidiene,
intervenii chirurgicale pe nevra5/
- "e la nivell tegmentelor infectate c Staphylococcs epi"ermi"is, ce reprezint
surs de infecie pentru unturile efectuate pentru controlul hidrocefaliei/
- rar, pe cale intraneral!, prin rdcinile nervului trigemen ori ale nervilor sacrai.
In-ica0ii ,n+r. rco$+ara LCR
- meningite Q bacteriene, virale, parazitare, fungice /
- meningoencefalite R
- sin"roame meningeale aprute n cadrul altor afeciuni, precum cele ce constituie
punct de plecare pentru infectarea D19 /
- spraii cerebrale9abcese cerebrale& sb"rale& epi"rale:>
Pr$1ara ,rob$or
$relevarea 29A este de competena specialitilor infecioniti, neurologi,
neurochirurgi. De face prin ra+i#&n$&'4& obinuit lombar7 LD1LC, sau ventricular7
!suboccipital% n condiii de strict asepsie.
2un#5ia lo,%ar4
Colnavul este aezat n decubit lateral, n poziia de Hcoco de pucV !cu
genunchii apropiai de brbie%. $ielea bolnavului se dezinfecteaz cu alcool i apoi cu
tinctur de iod pe o suprafa ptrat cu latura de ,8 cm. Medicul se spal pe m6ini, i
apoi i pune mnui sterile. &up apro5imativ , minute, timp necesar aciunii de
dezinfecie, se face puncia prin ptrunderea n spaiul intervertebral 2;-2. fie cu seringa
cu acul lung !de 8-18 cm pentru adult i *- cm pentru copil%, fie numai cu acul lung
steril. De prefer ace speciale pentru punc;ii rahidiene sau, n lipsa lor, ace sterile de oel
ino5idabil, cu bizoul scurt i bine ascuit, prevzute cu un mandren, care la un capt s nu
depeasc v6rful acului, iar la cellalt capt s fie ndoit n dreptul pavilionului. De
introduce mandrenul n ac n mod steril, se apuc acul de pavilion, prin intermediul unei
comprese sterile i se ptrunde n spaiul 2;-2.. $trunderea n spaiul subarahnoidian
este nsoit de senzaia de a fi a'uns intr-un spaiu gol i de scurgerea 29A.
7n meningite 29A este de obicei hipertensiv i poate 6ni prin ac. &ac primele
picturi sunt sanguinolente, acestea nu se vor recolta, ci se ateapt puin, pentru a se
observa dac i restul lichidului pstreaz acelai aspect. De colecteaz I324 ml de LCR
1n 83> tuburi, dintre care unul este obligatoriu steril pentru e5amen microbiologic.
2un#5ia su%o##i/i$al4
&up raderea prului i dezinfecia minuioas a pielii din regiunea cefei, se
menine capul bolnavului mult flectat nainte, fr s fie nclinat sau rotat ntr-o parte sau
alta. De ptrunde cu acul e5act pe linia median, pe linia care unete v6rful celor dou
mastoide, la mi'locul distanei dintre protuberana occipital e5tern i apofiza spinoas
proeminent !a - vertebr cervical%. De ptrunde cu acul perpendicular pe tegumente,
apoi ndreptat ctre baza nasului. &up ,-+ cm se simte o rezisten dat de ligamentul
atlantooccipital, dup care v6rful acului ptrunde ntr-un spaiu liber !n cisterna mare%.
=ste recomandabil ca acul s fie ataat la o sering cu care se aspir 29A, deoarece
presiunea lui la acest nivel poate fi aproape de zero.
7n laborator se face e*aminarea macoscopic7 a LCR, care poate ridica o anume
suspiciune etiologic/ unul din tuburi se centrifughez, iar din sedimentul obinut se fac
5rotiuri care se coloreaz diferit pentru orientare etiologic, iar cea de-a treia eprubet
steril se folosete pentru izolarea )ermenilor prin 1ns7m=n;are pe medii adecvate.
#. Urina
Metoda uzual recomandat pentru recoltarea acestui produs patologic este cea a
P&$ului @n$r&ru/$ 7,iPlo#iu80 dup toaleta e5terioar a organelor genitale, efectuat prin
splare cu ap cald i spun, se recolteaz poriunea din mi'loc a miciunii - prima
poriune a 'etului este aruncat, i fr a se ntrerupe 'etul de urin, se recolteaz cca ,8ml
de urin n recipient steril, nchis ermetic cu capac !figura *%.
2r&l&v4ri s/&#ial&0
As/ira5ia su/ra/u%ian4
De recomand la nou1n4s#u5i i su9ari: /a#i&n$& a(ul$&, la care e5aminarea
repetat a probelor din 'etul mi'lociu a dat rezultate echivoce. =ste singura metod care
poate atesta semnificaia clinic a bacteriilor anaerobe din urin.
Tehnic7 de recoltare> $acientul, bine hidratat, se abine de la miciune p6n c6nd
percuia suprapubian evideniaz matitate vezical, iar palparea regiunii evideniaz
fundul vezicii urinare i declaneaz necesitatea miciunii urgente. De pregtete
tegumentul supra'acent !depilare, decontaminare cu alcool iodat%. De puncioneaz vezica
urinar deasupra simfizei pubiene cu o sering de 18 ml, aspir6ndu-se urin. $roba se
pune ntr-un recipient steril cu capac, nchis ermetic, care se eticheteaz cu numele
pacientului, ora recoltrii, diagnostic, secia de unde provine, i se e5pediaz
laboratorului.
Eigura *0 :rocultor
2r&l&v4ri /rin #a$a$&r
"re indicaii limitate0 pacieni necooperani& pacieni care n micionea'! "in
ca'e nerologice sa rologice& pacieni catateri'ai pentr e-plorare rologic!&
pacieni c catater S "Tmere;.
Aecoltarea se face numai de specialistul urolog, cu instilarea, la sf6ritul
procedurii, de soluie salin cu neomicin i polimi5in sau colimicin, pentru a preveni
infecia.
=videnierea microorganismelor din urin este denumit uro#ul$ur4. =a se
nsoete de calcularea %a#$&ruiri&i: i de aceea se numete uro#ul$ur4 #an$i$a$iv4.
De practic n infeciile aparatli renal& salmonelo'e& leptospiro'e& tberclo'!
etc.
(. Bila
De recolteaz pentru e*amin7ri bacteriolo)ice 9bilicultur7:% parazitolo)ice%
biochimice, cu sonda =inhorn sterilizat, metoda recoltrii purt6nd numele de tuba<
duodenal. Aecoltarea se face dimineaa, dup cltirea cavitii bucale cu ap sau soluie
salin fiziologic steril. De introduce sonda =inhorn p6n la diviziunea ;.. De culc
pacientul pe dreapta i se introduce sonda p6n la diviziunea *.. De adapteaz seringa i
se introduc pe sond +8-.8 ml de soluie de sulfat de magneziu steril !;8F%, nclzit la
+8-+
8
9. De pensez sonda i, dup .-18 minute, se ncepe recoltarea lichidului, care este
colectat n recipiente sterile.
$rimul lichid care se scurge, n cantitate de 18-+8 ml, este de culoare galben!&
limpe"e sa #or opalescent! i constituie %ila A !li#+i( (uo(&nal sau %il4
#ol&(o#ian4%.
&up 1.-,. de minute ce scurge o cantitate de 188-,88 ml de lichi" v(scos& brn0
castani, care reprezint %ila B Tv&'i#ular4<.
2ichidul care se scurge n continuare, uneori ndelungat, este galben "eschis i
reprezint %ila C T+&/a$i#4<.
"ceste + feluri de bil n mod normal sunt per5ect limpezi/ n st7ri patolo)ice pot
5i opalescente% cu mucus sau chiar net tulburi sau purulente. De considr o %ili#ul$ur4
/o'i$iv4 dac se evideniaz un nu,4r ,ai ,ar& (& 1E
C
%a#$&riiX,l.
"genii etiologici implicai n producerea unei infecii a bilei i cilor biliare pot
fi0 bacterii 6ram negative "e origine intestinal! !=scherichia coli, Dalmonella,
Blebsiella, $roteus%, coci 6ram po'itivi !enterococi%, para'ii !Liardia, amibe, Easciola
hepatic%, levri !9andida%.
&. E6u(a$&l& s&roas&lor 7li#+i( /l&ural: /&ri$on&al: sinovial8
De recolteaz dup asepsie local prin puncie n partea decliv a regiunii.
a 2un#5ia /l&ural4 se e5ecut %n plin! 'on! "e matitate& %n spail intercostal respectiv,
folosindu-se acul montat la o sering steril. De e5trag ,8-;8 ml lichid pleural care este
repartizat n , tuburi sterile, unul conin6nd un anticoagulant !soluie steril de citrat
trisodic +,8 g[188 ml sau soluie steril de =&T"%. 1u se ndeprteaz cheagul de fibrin
sau nu se tritureaz, deoarece n reeaua de fibrin rm6n o serie de elemente, eventual i
germeni, i proced6nd ca mai sus acetia vor fi distrui.
&ac lichidul e5tras este tulbure sau purulent, se pstreaz o cantitate de ,-+ ml n
sering, din care se fac nsm6nri pentru anaerobi.
a 2un#5ia /&ri#ar(i#4, trebuie fcut cu precauii, iar lichidul e5tras este e5aminat
citologic, bacteriologic, virusologic, ca i lichidul pleural.
a 2un#5ia /&ri$on&al4 se face %n plin! 'on! "e matitate, bolnavul afl6ndu-se n decubit
lateral, respect6nd aceleai reguli ca i pentru lichidul pleural.
$relucrarea produsului recoltat se face in6nd cont de faptul c peritonitele
bacteriene sunt rareori unietiologice/ de obicei sunt plurietiolo)ice, germenii implicai
fiind aerobi !coliformi, enterococi - mai ales la copii, streptococi b-hemolitici grup ",
eventual C%, anaerobi !mai ales bacili Lram negativi nesporulai0 Cacteroides i
Eusobacterium%, sau sporulai !clostridii%.
a Punc;ia articular7 se e5ecut folosind ac steril ataat la o sering steril, dup
dezinfecia tegumentelor articulare cu soluii antiseptice. &up ptrunderea n cavitatea
articular, se e5trage prin aspiraie lichidul articular care se repartizeaz n , recipiente
sterile cu capac, unul fiind cu anticoagulant.
2aboratorul va prelucra produsul de puncie articular n funcie de etiologia
suspicionat, dar n general se are n vedere etiologia banal cu germeni aerobi0
streptococi& stafilococi& germeni enterali& etiologia gonococic!& dar i tbercloas!.
f. 2ro(us (& /un#5i& 9an9lionar4
De obine prin punc;ie aspiratorie )an)lionar7, dup prealabil dezinfecie a
tegumentelor supra'acente. "gentul etiologic bacterian principal suspicionat a fi prezent
este bacilul Boch !tuberculoz ganglionar%. 9a atare, se va recolta produsul n "o!
recipiente sterile, nchise ermetic/ unul va fi folosit pentru e-amen "irect pe froti colorat
Miehl0+ielsen, iar cellalt pentru nsm6nare pe me"il <UEenstein0Gensen.
I2OLAREA BACTERIILOR IN VITRO 3I IN VIVO
Cacteriile se pot dezvolta, n afara organismului, in vitro, prin nsm6nare pe
medii nutritive, i[sau in vivo, prin inoculare la animale de laborator sensibile.
"/$LAR'A -ACT'R""L$R "N ."TR$
MEDII DE CULTUR
Mediul de cultur reprezint substratul nutritiv 5olosit pentru cre6terea 6i
multiplicarea microor)anismelor 1n condi;ii arti5iciale, iar cultura microbian,
totalitatea microorganismelor dezvoltate.
$rin utilizarea mediilor de cultur se pot izola microorganismele n cultur pur,
ceea ce permite identificarea lor, studiul unor proprieti caracteristice, prepararea de
antigene, vaccinuri i alte produse biologice.
CONDIGIILE 2E CARE TREBUIE S LE ?NDE2LINEASC MEDIILE DE
CULTUR
9orectitudinea cercetrilor microbiologice depinde i de calitatea mediilor de
cultur, acestea trebuind s ndeplineasc c6teva condiii eseniale0
- s! ofere sbstanele plastice #i energetice necesare fiecrui microorganism !s conin
o surs de 1 i 9, factori de cretere, sruri minerale/
- s! aibe n p7 optim pentru specia respectiv, de obicei uor alcalin ,,-,;/
- s asigure, dup caz, cerinele "e aerobio'! sa anaerobio'!/
- s aibe un anumit gra" "e mi"itate/
- s! fie stabil !trebuie s-i pstreze toate calitile iniiale pe toat durata incubrii%/
- s! fie sterile, pentru a nu se dezvolta i alte microorganisme, n afara celor
nsm6nate/
- s! se p!stre'e ferite "e contaminare, at6t nainte, c6t i dup folosire.
PREPARAREA MEDIILOR DE CULTUR
7n prepararea mediilor de cultur trebuie respectate urmtoarele etape0
- stabilirea reetei& respectarea cantit!ii "e ingre"iente cu amestecul acestora n
proporia i ordinea indicat/
- verificarea p70li, eventual cu a'ustarea acestuia/
- filtrarea me"ili pentr "egrosisare !ndeprtarea srurilor alcalino-pm6ntoase%/
- reparti'area %n recipiente a"ecvate !eprubete, baloane% i sterili'area n condiii care
nu diminueaz proprietile lor nutritive !autoclavare%.
9ontrolul sterilizrii se face prin meninerea la termostat ,; ore, timp dup care
mediile trebuie s rm6n n continuare sterile.
CLASIFICAREA MEDIILOR DE CULTUR
a. (u/4 #onsis$&n540
mediile lichide !ap peptonat, bulion%0 folosite n special pentru studiul unor
proprieti ale microorganismelor i obinerea to5inelor/
medii solide !geloz%0 utilizate mai ales pentru obinerea microorganismelor n
cultur pur.
%. (u/4 /rov&ni&n540
medii naturale0 nu necesit o prelucrare special !lapte, bil, ser, cartof%/
medii arti5iciale0 medii la care este obligatorie o prelucrare prealabil, pornind de
la proteine animale !carne i organe de vit, fin de pete%, sau vegetale !mazre,
soia, dro'die%/
medii sintetice0 sunt acele medii compuse e5clusiv din substane chimice
!aminoacizi, factori de cretere, sruri%. 9ompoziia mediilor sintetice variaz dup
dorina e5perimentatorului, cu a'utorul lor put6ndu-se studia necesitile nutritive ale
diverselor specii microbiene/
medii semisintetice0 sunt acele medii care pe l6ng substane chimice mai conin i
proteine animale sau vegetale.
#. (u/4 #o,/o'i5i& i ,o( (& u$ili'ar&0
#edii uzuale sau simple
$e aceste medii se dezvolt ma'oritatea microorganismelor, av6nd n compoziie
e5tract de carne, pepton, clorur de sodiu. $ot fi0
- li#+i(&0 blion !utilizat ca mediu de nmulire i meninere a bacteriilor, serviind ca
element de baz pentru obinerea mediilor lichide comple5e%, ap! peptonat! !utilizat ca
mediu de mbogire pentru vibrioni%/
- soli(&0 gelo'! simpl! !provine din bulion n care se introduce, la cald, fibrele unei
alge marine din familia Elorideea, cunoscute n comer sub numele de agar-agar, care-i
confer acestuia suportul solid%. =ste utilizat pentru obinerea fie de colonii izolate, fie
de culturi masive, n funcie de scopul urmrit !figura 1%.
Eigura 10 Leloz simpl
#edii comple*e
Dunt mediile cu adaus de lichide organice !s6nge, ser% sau zaharuri !glucoz,
lactoz etc.% la mediile simple, pentr cltivarea speciilor mai pretenioase !gonococi,
meningococi, hemofili%, sau evi"enierea nor propriet!i. $rin adugarea acestor
ingrediente se obin medii cu bulion-s6nge, bulion-ser, bulion-ascit, bulion glucozat sau
geloz ser !s6nge, ascit%
- ,&(iul 9&lo'4 s;n9& !evideniaz fenomenul de hemoliz caracteristic unor specii
bacteriene !stafilococi, streptococi, pneumococi%. $entru izolarea gonococilor,
meningococilor se folosete un mediu derivat al amestecului geloz-s6nge, i anume,
geloz chocolat."cest mediu const din s6nge defibrinat de berbec .F peste care se
toarn geloz nclzit la 89. Dub influena cldurii se produce denaturarea mediului
i punerea n libertate de aminoacizi necesari dezvoltrii unor specii bacteriene !figura
,%/
- ,&(ii &l&#$iv&0 asigur cu precdere dezvoltarea unui germen n raport cu ali
germeni
Q ,&(iul Lo&ffl&r cu ser coagulat de bou pentru izolarea bacilului difteric/
- ,&(ii s&l&#$iv&0 selecteaz un anumit germen, conin6nd substane bacteriostatice
pentru flora de asociaie0
Q ,&(iul LoY&ns$&in R&ns&n, cu verde malahit pentru inhibarea florei de
asociaie, pentru izolarea bacilului Boch. Mediul mai conine sruri minerale,
amidon, ou, glicerin.
Q ,&(iul +i/&r#lorura$ soli( C+a/,an !clorur de sodiu, manit, rou fenol%
pentru izolarea stafilococilor manito-pozitivi patogeni/
Eigura , 0 Leloz s6nge
Q ,&(iul Tins(al&: ,&(iul Gun(&l1Ti&$' cu telurit de potasiu pentru izolarea
bacilului difteric/
Q ,&(iul Ro9os& este un mediu selectiv pentru lactobacili care necesit pentru
izolare un pS foarte sczut !amestec de geloz nutritiv topit i rcit apoi la
.89, amestecat e5temporaneu cu pri egale de suc de roii centrifugat n
prealabil%
Q ,&(ii /&n$ru i'olar&a &n$&ro%a#$&riilor !geloz, bil sau sruri biliare,
lactoz, indicator - albastru de bromtimol, rou fenol, tinctur de turnesol%0
- generale0 Is$ra$&1M&i$&r$, L&ifson: Ma#1Con.&- !figura +%/
- speciale0 L&vin& !=. coli%/ Zilson1Blair !Dalmonella t@phi%/
Eigura +0 "gar Mac 9on4e@
Q ,&(iul Tins(al&: ,&(iul Gun(&l1Ti&$' cu telurit de potasiu pentru izolarea bacilului difteric/
Q ,&(iul 22LO pentru izolarea m@coplasmelor este un mediu solid n care s-a
introdus cristal-violet i telurit de potasiu pentru inhibarea florei de asociaie. 2a
geloz se adaug ser !cal, bou sau iepure% sau colesterin i glucoz la un pS ,*-
8.
Q ,&(iul Diu(onn& este un mediu pentru izolarea veillonellelor i a vibrionilor
!ap peptonat hiperalcalin - pS <-<,, cu adaus de compui intermediari de
metabolism de tip piruvat, lactat sau o5alacetat%/
- ,&(ii (& @,%o945ir&0 medii lichide care favorizeaz nmulirea anumitor bacterii
patogene inhib6nd selectiv dezvoltarea florei de asociaie !pentru produsele care conin
o cantitate mic de bacterii patogene n raport cu flora saprofit%0
Q ,&(iul OCST !ou, cistin, ser, telurit de potasiu% pentru bacil difteric/
Q ,&(iul +i/&r#lorura$ li#+i( C+a/,an pentru stafilococi/
Q ,&(iul 2i#.& !bulion glucozat 8,,F, cristal-violet i azid de sodiu% pentru
streptococ -hemolitic grup "/
Q ,&(iul Mull&r1Jauff,ann: ,&(iul #u s&l&ni$ a#i( (& so(iu pentru izolarea
genului Dalmonella/
- ,&(ii (if&r&n5ial&0 difereniaz diferite tipuri de bacterii0
Q ,&(iul Dri9als.i care difereniaz bacteriile care fermenteaz lactoza de cele
care nu fermenteaz lactoza/
- ,&(ii /&n$ru /un&r&a @n &vi(&n54 a anu,i$or /ro/ri&$45i %io#+i,i#& !de
identificare%
Q me"ii politrope 9TSI& ,IP& ,I<I:/
Q me"il 7iss/
Q me"il ClarH0<bs/
Q me"il Simons 9me"il c citrat:/
Q me"il c fenilalanin!R
Q me"il c li'in!/
Q me"il c esclin!.
- ,&(ii /&n$ru #ul$ivar&a %a#$&riilor ana&ro%&0 me"il Jeillon& me"il Taro''i&
me"il Dillis07obbs/
- ,&(ii /&n$ru #ul$ivar&a fun9ilor0 me"il Sabora" !geloz cu zaharuri de tip
glucoz ;F sau maltoz ;F%.
+N(,-.NAREA PRODU(ELOR PATOLOGICE /I I0OLAREA +N CULTUR,
PUR,
?NSM!NGAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
7nsm6narea produselor patologice reprezint introducerea acestora pe medii de
cultur7 potrivite% pe supra5a;7 sau 1n pro5unzime% cu scopul ob;inerii de culturi
microbiene pure. 7nsm6narea se face n mod steril, cu ansa& tamponl "e e-"at sa
pipeta, folosind medii de cultur sterile i de compoziie adecvat.
De recomand nsm6narea imediat a probelor/ dac nu e5ist posibiliti
imediate acestea se vor pstra la ;9.
$entru obinerea unor rezultate corecte trebuie s se in seama de anumite reguli0
- 5olosirea de instrumentar steril0 ansa bacteriologic, pipeta $asteur sau gradat/
- 5lambarea ori5iciilor recipientelor !baloane, eprubete% ce conin mediile de cultur,
dopurile flacoanelor se vor ine ntre degetul mic i podul palmei drepte%/
- nu se vorbe6te% nu se tu6e6te% u6ile 6i 5erestrele trebuie 1nchise !se prefer bo5e sau
camere separate% pentru a mpiedica contaminarea cu flor din aer sau cavitatea bucal a
manipulatorului.
7nsm6narea se face pe medii lichide 6i solide, primele favoriz6nd o prim
nmulire numeric a bacteriilor. &ezavanta'ul lor este posibilitatea nsm6nrii la
nceput !nsm6nare primar% din materialul patologic al unui amestec bacterian nedorit.
&e aceea este obligatoriu n toate cazurile ca %ns!m(n!rile pe me"iile lichi"e s! fie
rmate lterior "e %ns!m(n!ri pe me"ii soli"e pentr a obine colonii i'olate.
?NSM!NGAREA ?N MEDII LIC>IDE
a. Cu ansa
"nsa se ine n m6na dreapt. De sterilizeaz prin nclzire la incandescen,
utiliz6nd becul Cunsen. &ac produsul patologic se afl ntr-o ebrubet, se scoate dopul
de vat ntre degetul mic i palma minii drepte, in6nd recipientul n m6na st6ng. De
flambeaz gura eprubetei, se ia din produsul patologic cu v6rful ansei, se flambeaz din
nou gura recipientului, se pune dopul la loc. =prubeta cu mediu se ine n mna st6ng,
uor nclinat pentru a evita riscurile contaminrii cu microorganisme din aer, se scoate
dopul, se flambeaz, se depune coninutul ansei pe peretele eprubetei deasupra mediului
lichid i se omogenizeaz apoi cu acesta. :rmeaz repunerea dopului dup flambarea i
sterilizarea ansei.
%. Cu /i/&$a 2as$&ur
De rupe v6rful pipetei i se flambeaz trec6nd-o prin flacar. &up rcirea pipetei,
se scoate dopul eprubetei cu produsul patologic, se flambeaz i se aspir 8,.-1 ml din
produs. 9oninutul pipetei se introduce n eprubeta cu mediu, dup ce s-au respectat
regulile de asepsie. :rmeaz incubarea la termostat. $ipeta folosit este pus n vasul cu
amestec sulfocromic.
&ac se nsm6neaz n anaerobioz, mediul se fierbe n baia de ap ,8-+8
minute, se rcete la ;8-;.
8
9 i se introduce coninutul pipetei n mediu, av6nd gri' s
nu se introduc bule de aer.
?NSM!NGAREA 2E MEDII SOLIDE
7n operaia de nsm6nare pe medii solide avem dou situaii0
- %ns!m(narea %n sprafa!0 pe medii solide n poziie nclinat i pe medii solide
turnate n plci $etri/
- %ns!m(narea %n profn'ime0 pe medii solide turnate n coloan dreapt i pe medii
solide n plci $etri0 metoda plcii turnate i metoda ntre dou straturi.
a. ?ns4,;n5ar&a @n su/rafa54
Cu ansa
3 Pe )eloz7 1nclinat7. De sterilizeaz ansa i dup rcire se ncarc cu produsul respectiv.
De introduce ansa aproape de fundul eprubetei cu mediu, dar deasupra lichidului de
condens i se trece uor pe suprafaa mediului n zig-zag sau n linie dreapt, fr a zg6ria
suprafaa mediului !figura ;%.
3 Pe )eloz7 1n pl7ci Petri. De nclin placa cu mediu i se depune produsul aproape de
margine. De trag striuri paralele cu ansa, prin micri scurte i dese pe o suprafa mic la
polul superior al mediului, fr a zg6ria suprafaa mediului. "poi ansa se trece pe
suprafaa mediului tras6ndu-se linii paralele i perpendiculare, n form de pentagon
!regula pentagonului pentru obinerea de colonii izolate% !figurile ., * i %.
C. ,i,+a Pas+.r
3 Pe )eloz7 1nclinat7. De nsm6neaz lichidul de condens al mediului cu c6teva picturi
din produsul patologic aflat n pipet. $rin uoar agitare i nclinare a eprubetei, lichidul
se rsp6ndete pe toat suprafaa mediului.
3 Pe )eloz7 1n pl7ci Petri. De depune pe suprafaa mediului apro5imativ 1 ml din
produsul lichid i se rsp6ndete uniform pe toat suprafaa prin nclinarea plcii sau cu
pipeta $asteur ndoit. De ine nclinat i se aspir e5cesul de lichid cu pipeta.
3 Cn mediul .eillon pentru anaerobioz7. Leloza Geillon se topete pe baia de ap, se
rcete la ;.
8
9 i se introduce coninutul pipetei fr bule de aer. "poi se aeaz
eprubetele n ap rece pentru solidificare rapid.
%. ?ns4,;n5ar&a @n /rofun'i,&
?NSM!NGAREA 2E MEDII SOLIDE TURNATE ?N COLOAN
DREA2T
De deschide eprubeta cu mediu de cultur, se rstoarn cu gura n 'os, iar
nsm6narea se face prin prin neparea n profunzime a mediului, utiliz6nd ansa fir
pentru a strpunge mediul, fr a-l deplasa !e5emplu nsm6narea mediului MM:%.
Eigura ;0 Tehnica nsm6nrii n suprafa pe mediul solid nclinat
Cns7m=n;area pe medii solide 1n pro5unzime0
- metoda 1ntre dou7 straturi0 produsul se nsm6neaz pe suprafaa plcii cu geloz,
dup care se toarn un alt strat subire de geloz deasupra zonei de descrcare a
produsului/
- metoda pl7cii turnate0 n placa $etri se pune o cantitate de produs, se toarn geloza,
se amestec i se las s se solidifice. $rin aceast metod se creaz condiii de
semianaerobioz necesare izolrii unor bacterii patogene !e5emplu0 nsm6narea urinii%.
I0OLAREA -ICROORGANI(-ELOR +N CULTUR, PUR,
$entru a obine un rezultat corect, microorganismele trebuie studiate totdeauna n
cultur pur, pornind de la colonii izolate. 9olonia este o populaie microbian format
din indivizi provenii dintr-o singur celul !clon%. Cltra pr! se obine prel(n" c
ansa o singr! colonie #i %ns!m(n(n"0o pe n me"i "e cltr! a"ecvat.
Mzolarea este opera;ia prin care se separ7 microor)anismele dintr3un produs 1n
care se )7sesc mai multe specii% 1n vederea identi5ic7rii 5iec7reia. $entru obinerea
coloniilor izolate se folosesc diverse tehnici.
TE>NICI OBI)NUITE DE I3OLARE
a& (ispersia pe plac7 Petri
) cantitate mic din produsul patologic se depune ntr-o zon periferic a
mediului, de unde se ntinde cu ansa n striuri paralele. De sterilizeaz ansa i pornind de
la ultimile striuri, perpendicular pe acestea, se mai efectueaz c6teva striuri paralele.
)peraia se repet p6n la epuizarea suprafeei mediului.
Eigura .0 Tehnica nsm6nrii prin epuizarea ncrcturii ansei bacteriologice
b& #etoda dilu;iilor
De folosesc mai multe tuburi cu geloz nclinat. De nsm6neaz cu pipeta
$asteur lichidul de condens al primului tub. $rin nclinare se rsp6ndete lichidul pe toat
suprafaa mediului. De trece o pictur n lichidul de condens al celui de al doilea tub,
proced6ndu-se la fel, p6n la ultimul tub. 7n ultimele tuburi vor apare colonii izolate.
&iluia poate fi realizat i n tuburi cu mediul lichid, de unde se paseaz c6te o pictur
n lichidul de condens al tuburilor cu geloz nclinat.
Eigura *0 Tehnica nsm6nrii prin epuizarea ncrcturii ansei bacteriologice
Eigura 0 Tehnica nsm6nrii prin epuizarea ncrcturii ansei bacteriologice
TE>NICI S2ECIALE DE I3OLARE
a& -acteriile sporulate. De izoleaz de cele nesporulate prin nclzirea produsului
patologic la 88
8
9 timp de +8 de minute, sau la 188
8
9 timp de , minute, pentru distrugerea
formelor vegetative. &up rcire, se nsm6neaz n vederea izolrii fiecrei specii
sporulate prin metode obinuite.
b& "zolarea bacteriilor anaerobe dintr-un produs care conine i specii aerobe, se face pe
medii lipsite de o5igen, prin metoda diluiilor. "poi se nsm6neaz n mediul Tarozzi,
pentru a obine o cultur pur abundent. &ac bacteriile anaerobe din produsul patologic
sunt i sporulate, acestea se izoleaz prin nclzirea prealabil a culturii la 88
8
9 timp de
+8 de minute.
Mediile de cultur utilizate pentru speciile aanaerobe trebuie s fie lipsite de aer i
cu un potenial redo5 c6t mai cobor6t. 9ultivarea n condiii de anaerobioz se face prin
mai multe metode 0
- intro"cerea pl!cilor %ns!m(nate %n aparate metalice "in care se scoate aerl c o
pomp! "e vi"/
- %nlocirea aerli atmosferic c ga'e inerte, cu un amestec de <8F hidrogen i .F
bio5id de carbon/
- %ns!m(narea pe me"ii sterile conin(n" organe proaspete !fragmente de ficat,
rinichi% care s scad potenialul redo5 al mediului !mediul Tarozzi%/
- cltivarea %n tbri lngi #i sbiri c gelo'! semisoli"! "e tip Jeillon/
- %ns!m(narea %n me"ii lichi"e se face "p! ce acestea se fierb .1 minte #i se r!cesc
brsc la n $et "e ap! 9se regenerea'!:. $rin aceast manevr se elimin aerul din
coninutul lor.
c& "zolarea pe medii speciale. "numite microorganisme pot fi izolate din produsul
patologic pe medii speciale0 mediul 2offler pentru bacilul difteric, mediul 2o3enstein
pentru bacilul tuberculozei, etc.
INCUBAREA
9onst n meninerea mediilor de cultur nsm6nate n condiii necesare
dezvoltrii germenilor0 la ma'oritatea speciilor bacteriene cultura apare dup 18-,; de ore
de incubare la temperatura de +9. 2a unele specii perioada de incubare este mai lung,
de la c6teva zile la c6teva sptm6ni !e5emplu0 bacilul Boch%. :nele bacterii necesit
pentru dezvoltare o atmosfer de .-18F 9), !e5emplu0 pneumococul, meningococul%.
I2OLAREA BACTERIILOR IN VIVO
Mzolarea bacteriilor in vivo se realizeaz prin inocularea la animale sensibile a
produselor patolo)ice !e5emple0 pneumococul sau Blebsiella pe oarece, bacilul
tuberculozei pe cobai, etc.%.
$rodusul patologic se inoculeaz ca atare sau suspensionat n soluie cloruro-
sodic izoton, utiliz6nd seringi i ace sterile.
9alea de inoculare este diferit n funcie de afinitile pentru esut ale
germenului0 calea subcutanat pentru produsele cu flor de asociaie care rm6ne
cantonat la poarta de intrare/ calea intraperitoneal utilizat pentru produsele patologice
monomicrobiene/ calea intravenoas/ instilare pe mucoasa nazal, calea con'unctival,
per os, intramuscular, intracerebral etc.
&ac operaiunea de inoculare a animalului nu este urmat de leziuni, animalul
rm6n6nd sntos, se pot efectua o suit de pasa'e oarbe pe animale n scopul e5acerbrii
virulenei germenului.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR ?N INFECGIILE CU STAFILOCOC
Dtafilococii sunt 9&r,&ni u%i#vi$ari, r!sp(n"ii %n natr! !n ap, aer, sol%,
pre'eni pe pielea #i mcoasele organismli man. Dtafilococii, n special S> ares i S>
epi"ermi"is, fac parte din flora normal a unor indivizi 9;prt!tori asimptomatici:, ca
germeni saprofii, localizarea predilect fiind fosele nazale. =i se pot afla la originea unor
procese infecioase, fie prin auto-infecie, fie prin transmitere la ali indivizi.
"pro5imativ ,8-.F dintre indivizi sunt purttori de S> ares, fapt deosebit de
important n urmrirea i apariia infeciilor nosocomiale. De apreciaz c peste 88F din
personalul medico-sanitar este purttor de S> ares> Transmiterea este n special
interuman direct !contact direct, m6ini murdare% sau indirect, prin alimente sau din
mediul e5terior.
Inf&#5iil& u,an& s$afilo#o#i#& sunt foarte variate. 2a nivelul pielii 6i mucoaselor
pot genera impetigo& frncle& foliclite& sin"roml ;pielii oparite sa boala Ritter von
Rittershain prin secreie de e5foliatine/ la nivel visceral pot fi implicai n producerea de
osteomielite& en"ocar"ite& septicemii& infecii rinare& to-iinfecii alimentare& enterocolite
acte #i temtl sin"rom al #ocli to-ic TSST0. !To-ic ShocH Syn"rome To-in .%,
consecina unei vaginite cu S> ares secretor de e5oto5ina 1 la femeile folosind
tampoane intravaginale.
&iagnosticul de laborator n infeciile stafilococice este bacteriologic0 se
urmrete nsm6narea i identificarea germenilor, precum i testarea sensibilitii la
antibiotice n vederea instituirii unei conduite terapeutice adecvate.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
Re!olt"#e" t#e$uie f"!ut% 1naintea a!inistr&rii e antibi'tice &i !u
res$ectarea ri"ur'as& a re"ulil'r e antise$sie' "t(t )n !ee" !e p#i*e&te
*#$+cultura, LCR, lic*i-ul articular, uri%a' +"# &i )n !",ul s#cr#"iil+r
!urul#%t#, as!iratul br+%(ic, #&u-at#l# .ari%)i#%# (i %aal#. Cel -"i -"#e #i.!
e.te #ep#e,ent"t +e !ont"-in"#e" "!!i+ent"l% " p#ele*"telo# !u tulpini +e S.
aur#us &i S. #!i-#r$i-is p#e,en/i l" ni*elul pielii.
7n cazul to5iinfeciilor alimentare se vor recolta materii fecale, lichid de vrstur,
resturi din alimentul ingerat. 7n situaiile c6nd sunt incriminate epidemiile hidrice se
recolteaz probe de ap din reaua de aduciune sau din piscine.
7n mediul spitalicesc se recolteaz probe de pe suprafee i din aer conform
normelor antiepidemice n vigoare i n colaborare cu medicul epidemiolog.
$entru depistarea purttorilor nazofaringieni de stafilococ patogen se recolteaz
e5udatul faringian i nazal.
Transportul probelor recoltate se face c6t mai repede la laborator folosind mediile
de transport gelozate sau recipiente sterile corespunztoare !urocultoare, coprocultoare,
tampoane pentru e5udat faringian sau nazal etc.%.
*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
8&2& '*amenul direct0
De efectueaz direct din produsele patologice, prin dou tipuri de preparate0
1 @n$r& la,4 i la,&l40 pentru aprecierea mobilitaii germenului, a prezenei sau absenei
capsulei bacteriene/
1 /& fro$iuri fi6a$& i #olora$&0 Lram, albastru de metilen i Ma@-Lrun3ald Liemsa.
Erotiurile efectuate direct din produsele patologice, colorate Lram, evideniaz
coci Lram pozitivi sferici, aezai n grmezi !n ciorchine de strugure%, nesporulai,
uneori ncapsulai, care, n cazul produselor normal contaminate, pot fi nsoii de ali coci
sau bacili !flor de asociaie%, polimorfonucleare !$M1% i celule epiteliale, ntregi sau
detritusuri !figurile 1 i ,%.
=5amenul direct ntre lam i lamel evideniaza germeni imobili.
9oloraiile cu albastru de metilen i Ma@-Lrun3ald Liemsa evideniaz aspectul
citologic i relaia dintre fagocite i germeni.
8&8& "zolare in vitro
De nsm6neaz produsele pe medii de cultur7 simple !bulion )lucozat% )eloz7
simpl7%, stafilococii fiind germeni puin e5igeni din punct de vedere metabolic, ca i pe
geloz cu .F s6nge defibrinat de berbec !)eloz7 s=n)e%. &e asemenea, se pot folosi
mediile de cultur7 hiperclorurate, lichide i solide, care conin 1a9l n concentraie de
,. gF, deoarece permit dezvoltarea preferenial a stafilococului inhib6nd flora de
asociaie !pentru produsele patologice polimicrobiene sau alimente%. Mediul hiperclorurat
lichid 9hapman este un mediu de 1mbo)7;ire pentru stafilococ. &up nsm6narea
produsului pe acest mediu i incubare ;8 de ore la +9 se fac treceri pe mediul
Eigura ,0 Erotiu colorat Lram din sputa unui pacient cu pneumonie stafilococic.
&up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura 10 Erotiu colorat Lram dintr-un abces0 Dtafilococi. &up0 " 9olour "tlas of
Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
hiperclorurat solid 9hapman, care evideniaz fermentarea manitei, caracter de
patogenitate al stafilococului.
Dtafilococii sunt aerobi, facultativ anaerobi, iar incubarea mediilor se face la +9
fr precauii deosebite.
8&>& "denti5icare
&e departe, cea mai important specie incriminat n patologia uman este cea a
S> ares, dar, n cazul izolatelor repetate ce provin din hemoculturi, 29A, lichid
intraarticular, seroase, n cazul purttorilor de valve cardiace, imunodeprimai, sunt de
aceeai gravitate i identificarea altor specii de stafilococi, de e5. S> epi"ermi"is& S>
schleiferi& S> lg"nensis& S> Earneri sau S> haemolytics>
7n acest conte5t, tili'area termenli "e ;stafilococ patogen& ;stafilococ ari
hemolitic %n e"itarea bletinelor "e anali'! trebie proscris: in6nd cont de semnificaia
clinico-epidemiologic, dar i datorit faptului, unanim acceptat astzi, c specificitatea
unor caractere precum hemoliza, pigmentogeneza sau fermentarea manitei este
inconstant i nu numai apana'ul definitoriu al tulpinilor de S> ares.
&e aceea stabilirea diagnosticului bacteriologic de certitudine n infeciile
stafilococice trebuie s reprezinte, n final, rezultatul colaborrii dintre medicul clinician
i medicul microbiolog.
*.A.1. Cara#$&r& (& #ul$ur4
Pe mediile lichide
Dtafilococii tlbr! niform me"il c "epo'it mo"erat la fn"l tbli "e
cltr!.
Pe mediile solide
$e mediile cu )eloz7 determin apariia de colonii de $i/ S !;smooth - neted%,
opace, conve5e, de aspect cremos, cu diametrul de ,-+ mm, dar put6nd atinge i
dimensiuni de mm n cazul unei incubri prelungite, de la ;8 la , de ore. Marginile
coloniilor sunt regulate, suprafaa lucioas. Tulpinile de stafilococi cu alterri ale
peretelui celular provenind din probe ce conin substane antimicrobiene pot da colonii de
$i/ G !;glossyK- lucios%, pitice, sau de $i/ G1R !;rogh0 rugos%, mici, cu margini
imperfecte, granulate. $e mediu lichid acest tip de germeni nu tulbur mediul,
depun6ndu-se doar la baza tubului sub forma unui mic depozit granular.
7n cazul stafilococilor cu capsula polizaharidic 9;slime: acetia dezvolt colonii
de $i/ M, mucoase, n special n cazul culturilor efectuate direct din prelevate.
9oloniile sunt pi)mentate di5erit 9alb% aureu% citrin:. 9lasic, coloniile de S>
ares sunt descrise ca produc6nd un pigment de culoare galben0ari 9oran$:, ca o
caracteristic relativ constant, dar acest producie este descris i la alte specii cum ar fi
S> saprophytics& S> hominis& S> haemolytics i de aceea are o valoare mai mult
orientativ. $igmentogeneza se intensific dupa 1-, zile la temperatura camerei. Mediile
cu suplimente nutritive !ou, ser, lapte etc.%, cum ar fi, de e5emplu, geloza $ cu lapte,
favorizeaza pigmentogeneza. Mai sunt descrise i colonii de S> ares de culoare galben
citrin, portocalii sau albe !figurile +, ; i .%.
$e mediul cu telurit -aird3Parker coloniile de S> ares au diametrul de 1-1,.
mm, sunt conve5e, negre strlucitoare cu bordur ngust, alb i halou clar cu diametrul
de ,-. mm.
$e )eloza cu IR s=n)e de5ibrinat de berbec 9)eloz7 s=n)e: tulpinile de S> ares,
dar i S> haemolytics, produc o 'ona "e hemoli'! complet!& clar!& net!& "e tip alfa !se
datoreaz eliberrii hemolizinei alfa%. Mai pot determina i o hemoliz incomplet,
nebuloas dup ,; de ore de termostatare, dar dup depunerea la frigider a plcii cu
mediu se accentueaz !hemoli'a "e tip ;cal"0rece:, datorat hemolizinei beta.
*.A.*. Cara#$&r& ,orfolo9i#&
=5amenul microscopic al frotiurilor efectuate din culturile crescute n medii
lichide sau pe mediile solide i colorate Lram evideniaz coci 0ram pozitivi s5erici%
a6eza;i 1n )r7mezi nere)ulate% necapsula;i% nesporula;i !figurile * i %.
$e preparatul nativ ntre lam i lamel se observ lipsa mobilit7;ii.
Eigura +0 Dtafilococi albi - geloz s6nge !sursa0 http0[[333. microbesdmed.sc.edu 8.%
Eigura ;0 Dtafilococi aurei - geloz s6nge !sursa0 http0[[333. microbesdmed.sc.edu 8.%

Eigura .0 Dtafilococi aurei - geloz s6nge !sursa0 http0[[333. microbesdmed.sc.edu 8.%

Eigura *0 Erotiu colorat Lram din cultur - Dtafilococi. &up0 " 9olour "tlas of
Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
*.A.A. Cara#$&r& ,&$a%oli#&
e F&r,&n$ar&a +i(ra5ilor (& #ar%on
Dtafilococii au un metabolism o5idativ fermentativ, spre deosebire de micrococi.
=i f&r,&n$&a'4 +i(ra5ii (& #ar%on, precum0 glucoza, lactoza, maltoza, zaharoza,
acidific6nd mediul.
Dtafilococii $ol&r&a'4 ,&(ii #u #on#&n$ra5i& #r&s#u$4 (& NaCl !,. gF%, iar
<;F dintre tulpinile de S> ares, spre deosebire de ma'oritatea celorlalte specii de
stafilococi f&r,&n$&a'4 ,ani$a cu producie de acid. "ceste proprieti sunt e5ploatate
de mediul 9hapman, care conine ,. gF 1a9l !ceea ce face mediul selectiv pentru genul
Staphylococcs% i manit care este fermentat de ctre S> ares> "cidifierea mediului se
traduce prin vira'ul culorii indicatorului de pS !rou metil% n galben.!figura 8%.
e T&s$ul #a$ala'&i
Sta5ilococii ca i micrococii, spre deosebire de streptococci, posed7 o catalaz7
capabil s transforme pero-i"l "e hi"rogen %n o-igen #i ap!. Testul se efectueaz pe o
lam de sticl port-obiect !prin descarcarea unei colonii dintr-o cultur de stafilococi ntr-
o pictur de pero5id de hidrogen% sau n tub. &ega'area unor ble "e ga' traduce
/r&'&n5a #a$ala'&i. De prefer recoltarea coloniilor de pe mediul nutritiv gelozat, evit6nd
geloza s6nge, deoarece pot apare reacii fals positive, n cazul e5istenei streptococilor,
prin antrenarea de hematii din mediu !figura <%.
Eigura 0 Erotiu colorat Lram din cultur - Dtafilococi. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@
Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<.
Eigura 80 Testul fermentrii manitei pe mediul 9hapman0 negativ !rou% la st6nga i
pozitiv !vira' n galben% la dreapta !sursa0 http0[[333. microbesdmed.sc.edu 8.%
e T&s$ul o6i(a'&i
Sta5ilococii sunt o6i(a'o1n&9a$ivi: spre deosebire de micrococi care sunt
o5idazo-pozitivi. 7n practic se folosesc fie benzi de h6rtie, fie discuri de o5idaz.
Eigura <0 Testul catalazei n tub. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*

Aeacie pozitiv0
Dtaphilococcus aureus
Martor
Aeacie negativ0
Dtreptococcus faecalis
&escarcarea unei colonii bacteriene poate duce la apariia nei reacii colorate %n violet
n primele +8 de secunde pentru germenii o-i"a'o0po'itivi 9micrococii:& sau lipsa unei
reac;ii de culoare n cazul $ul/inilor o6i(a'o1n&9a$iv& 7s$afilo#o#ii: s$r&/$o#o#ii8. O
reacie "e cloare ce apare %ntr0n interval "e timp mai mare "e A/ secn"e se va
interpreta ca reacie fals po'itiv!V
e D&$&r,inar&a s&nsi%ili$45ii la novo%io#in4
Sta5ilococii ?coa)ulazo3ne)ativi@, iniial considerai germeni comensali, sunt
astzi recunoscui ca bacterii potenial patogene, responsabili de in5ec;ii nozocomiale, n
special n serviciile de reanimare, la purttorii de catetere sau de proteze. 9ei mai des
nt6lnii sunt S> epi"ermi"is& S> haemolytics& S> lg"nensis !considerat ca fiind cel mai
patogen%, S> schleiferi& S> saprophytics& S> hominis.
&eterminarea sensibilitii la novobiocin a diferitelor specii de stafilococi izolai
la om, a permis s se individualizeze , categorii0 s$afilo#o#ii s&nsi%ili la novo%io#in4,
aici fiind cuprins i S> ares, dar i B specii "e stafilococi ;coagla'o0negativi i
s$afilo#o#ii r&'is$&n5i la novo%io#in4: cuprinz6nd numai A specii "e stafilococi
;coagla'o0negativi !tabelul M%.
S&nsi%ili la Novo%io#ina S&aureus
S& auricularis
S& capitis subsp& capitis
S& capitis susp& ureolticus
S& caprae 9Q:
S& epidermidis
S& haemolticus
S& hominis
S& intermedius
S& lu)dunensis
S& schlei5eri subsp& coa)ulans
9Q:
S& schlei5eri subsp& schlei5eri
S& simulans
S& warneri
R&'is$&n$i la Novo%io#ina S& cohnii
S& saprophticus
S& *losus
!f% T caz unic de tulpin izolat la om
Tabelul M0 9lasificarea stafilococilor de origine uman dup sensibilitatea la 1ovobiocin
!dupa E. Gandenesch ., M. Ces, N.=tienne - Dtaph@lococcus. 7n0 Manuel de Cacteriologie
cliniJue, =d. =lsevier, 1<<.%
Testul se realizeaz studiind creterea bacterian n 'urul unui disc de novobiocina
!. g[disc%. Tulpinile sunt considerate r&'is$&n$& dac (ia,&$rul 'on&i (& in+i%i5i& &s$&
,ai ,i# (& 1* ,, n cazul tulpinilor nsm6nate pe me"i gelo'at a"iionat c 15
s(nge "e berbec, sau ,ai ,i# (& 1K ,, n cazul tulpinilor nsm6nate pe me"i gelo'at
tip ,eller 7inton !figura 18%.
e S$a%ilir&a /rofilului %io#+i,i# 7%io#+&,o$i/ia8
Ciochemotipia conta n stabilirea pro5ilului biochimic !reaciile specifice n
prezena anumitor substraturi% al fiecarei tulpini izolate, prin utilizarea )aleriilor
biochimice standardizate 6i miniaturizate.
"u la baz utilizarea unui num7r variabil de teste biochimice !acidifierea
diferiilor hidrai de carbon i producerea de reacii specifice n prezena unor substraturi
ca0 ureaza, nitraza, fosfataza, ornitildecarbo5ilaza etc.%. Aezultatele se bazeaz pe citirea
vizual sau automat a reaciilor de culoare aprute dup inocularea galeriilor cu o
suspensie din tulpina de testat i termostatate timp de 18-,; ore la +
o
9.
Eigura 180 "spectul testului la 1ovobiocin pentru o tulpin pozitiv !st6nga% i o
tulpina negativ !dreapta% !sursa0 http0[[333. microbesdmed.sc.edu 8.%
=5trem de folosite la nivel mondial n cadrul laboratoarelor de analize medicale,
dar i al laboratoarelor de cercetare, aceste galerii biochimice standardizate i
miniaturizate ncep s-i fac loc i n practica obinuit a laboratoarelor de bacteriologie
din Aom6nia.
Eiabilitatea rezultatelor, scurtarea timpului de investigaie, gradul mult mai redus
de eroare fa de tehnicile clasice !cu condiia respectrii acurateei tehnicii preconizat
de productor%, acceptarea internaional a datelor astfel obinute sunt tot at6tea
argumente care pledeaz pentru utilizare lor pe scar larg n cadrul identificrilor
bacteriologice de rutin n vederea stabilirii unui diagnostic microbiologic corect.
Dtudiile multicentrice internaionale realizate n ultimii ani au demonstrat buna
reproductibilitate a acestor sisteme, ele permi6nd identificarea corect n mai mult de
<.,.F din cazuri pentru ma'oritatea speciilor bacteriene cunoscute.
&intre galeriile de identificarea speciilor de stafilococi amintim 0
o galeriile API STAP7 9bio,erie-:0 folosesc 1< teste de identificare - 1< specii de
stafilococi identificate/ citire vizual i automat.
o I* A3 STAP7 9bio,erie-:0 folosesc ,* de teste de identificare - ,; specii
identificate/ citire vizual i automat.
o galeriile AT? A3 STAP7 9Irance Api System:0 folosesc ,* de teste de identificare -
identificarea inclusiv i a speciilor nou descrise n ultimul deceniu/ citire vizual i
automat.
o ,icro Scan Pos Combo 9?a-ter *iagnostic: #i Rapi" Pos Combo 9?a-ter *iagnostic:
- au i avanta'ul deteminrii sensibilitii la antibiotice/ citire automat.
*.A.D. Cara#$&r& (& /a$o9&ni$a$&
De evideniaz prin teste de patogenitate in vitro i in vivo.
T&s$& (& /a$o9&ni$a$& in vitro
e Testul pi)mento)enezei0 stafilococii citrini sunt nepatogeni, cei albi sunt ,8F
patogeni i 88F nepatogeni, cei aurei sunt 88-<8F patogeni i 18-,8F nepatogeni.
e Testul hemolizei0 stafilococii hemolitici sunt patogeni !hemoli'! "e tip ;cal"0rece
datorat hemolizinei beta%.
e Testul 5erment7rii manitei0 pe mediul hiperclorurat solid 9hapman !1a9l, manit,
rou fenol ca indicator% !figura 8%.
e Testul coa)ulazei !coagulaza0 enzim legat de virulena-patogenitatea germenului,
cu rol antifagocitar%.
I(&n$ifi#ar&a #oa9ula'&i li%&r&
$rezena coagulazei libere este un element ma'or pe baza cruia se poate afirma
caracterul patogen al unei tulpini de stafilococ.
=ste considerat, nc, testul principal de identi5icare a S& aureus, dar i o serie de
alte specii de stafilococi, precum S> "elphini& S> interme"is& S> schleiferi sbsp>
coaglans, S> hyics produc coagulaza. "ceste tulpini sunt, ns, n mod cu totul
e5cepional izolate la om.
&ei testul permite identificarea a <<F dintre tulpinile de S> ares, s-au descris
tulpini de S> ares care nu produc coagulaza liber ca urmare a unui deficit
transcripional sau post-transcripional al genei coagulazei0 identificarea speciei, n acest
caz, se realizeaz prin coroborarea rezultatelor altor teste.
T&+ni#a
- De efectueaz n tuburi de hemoliz, pun6nd n contact 4%I ml plasm7 lio5ilizat7 de
iepure i resuspendat e5temporaneu n apa distilat cu 4%I ml din cultura 1n bulion
!e5. ap peptonat, bulion cord-creier, bulion Tripcase-soia% a tulpinii de testat,
incubat n prealabil timp de 18-,; de ore la +
o
9.
- De agit amestecul astfel realizat pun6ndu-se la etuv sau la bain-marie la +
o
9.
- De citete reacia prin nclinarea uoar a tubului, la0 +8 minute, 1 or, + ore, ; ore.
"pariia unui #+&a9 (& fi%rin4 #o,/l&$ semnific o reacie /o'i$iv4. &up citirea
cheagului la ; ore, cultura se las n continuare la termostat la +
o
9 timp de 18 ore.
"pariia unui cheag incomplet n acest interval de timp definete tot o reacie pozitiv.
Aeacia negativ se traduce prin lipsa apariiei fenomenului de coagulare al plasmei n
condiiile de mai sus !figura 11%.
Mdentificarea coagulazei legate, sau evidenierea factorului de afinitate pentru fibrinogen
sau clumping factorul !9lumping factor test%
Eactorul de afinitate pentru fibrinogen, un receptor proteic pentru un fragment al
fibrinogenului prezent la nivelul peretelui bacterian al S> ares, permite constituirea unui
agregat bacterian n prezena fibrinogenului n soluie. In vivo el determina aderarea
germenilor de micro-cheagurile prezente la nivelul breelor vasculare i de materialele
strine !e5. valve cardiace%.
7n interpretarea rezultatelor se va ine cont de faptul c, un procent cuprins ntre 1
i 18F dintre tulpinile de S> ares, n special cele rezistente la meticilin, nu produc
factorul de afinitate pentru fibrinogen/ pe de alt parte, i alte specii de stafilococi, cum ar
fi0 S> schleiferi sbsp> Schleiferi& S> lg"nensis i S> interme"is pot da rezultate positive.
T4nica
#etoda clasic7, dar care la ora actual este n mare parte abandonat, const n
determinarea aglutinarii pe lam a stafilococilor, provenii dintr-o cultur de ,; de ore la
+
o
9 pe geloza nclinat, n prezena unei picturi de plasm uman diluat 1[..
#etode moderne
2ipsa standardizrii, riscul bio-contaminrii personalului de laborator i
posibilitatea reaciilor neconcludente sub influena diferiilor factori individuali n cazul
metodei clasice sus-amintite a fcut ca, la ora actual, s fie comercializate i puse la
dispoziia laboratoarelor suspensii standardizate de hematii "e berbec sensibili'ate c
fibrinogen man prificat !e5. Dtaph@slide Test, Cio Merieu5, Eranta/ Dtaph@loslide -
CC2, :D" etc%.
9a tehnic, n paralel cu un martor negativ de control, se pune n contact o
pictur de reactiv anti-stafilococic i o colonie de talie mi'locie din tulpina de testat
recoltat cu ansa de pe suprafaa mediului de cultur gelozat.
Timp de 18-1. secunde se imprim lamei o uoar micare de rotaie.
Eigura 110 Testul coagulrii plasmei n tuburi !sursa0 http0[[333.
microbesdmed.sc.edu 8.%
) reacie pozitiv se traduce prin apariia unei aglutinri sub form de grun'i.
Aeacia este neinterpretabil dac reactivul de control prezint aglutinare. ) reacie
negativ, deci lipsa factorului de afinitate pentru fibrinogen, este evideniat prin absena
aglutinrii !figura 1,%.
Eigura 1,0 Mdentificarea coagulazei legate !evidenierea factorului de afinitate pentru
fibrinogen% !sursa0 http0 [[333., ac-
[email protected][enseigne[biotech[microbio[testsdmicrobiologie ,.htm%
e Testul 5ibrinolizinei. De efectueaz pe un mediu alctuit din pri geloz i o parte
plasm o5alatat care se adaug la geloza topit i rcit la .89. &up nsm6narea
tulpinii izolate i incubarea la +9 se observ o zon clar n 'urul coloniilor prin
topirea de ctre fibrinolizin.
Ts+ - ,a+ogni+a+ in 1i1o
E6is$4 $&+ni#i /rin #ar& s& $&s$&a'4 /a$o9&ni$a$&a s$afilo#o#ilor /& ani,al& (&
la%ora$or 7i&/ur&: /isoi8 #ar&: @ns4: as$4'i: nu ,ai sun$ (& a#$uali$a$&F
0 testl "ermonecrotic !inoculare intradermic% i testl letal !inoculare intravenoas% la
iepure/
0 testl *olman0 inoculare intraperitoneal la pisoi de +-* sptm6ni, a filtratului de
cultur fiert +8 de minute la 188g9 !evideniaz enteroto5ina ce este produs de anumite
tipuri de stafilococi capabile s produc to5iinfecii alimentare%.
Clu!$in" %act'r test
T&s$ /o'i$iv0
S$a/+ilo#o##us
aur&us
T&s$ n&9a$iv0
S$a/+ilo#o##us
&/i(&r,i(is
M"i nou +ete!t"#e" to0ino1ene,ei .t"filo!o!ilo# e.te "p"n"2ul
l"$o#"to"#elo# +e .pe!i"lit"te 3In.titutul Ion C"nt"!u,ino 4 Bu!u#e.ti' l"$o#"to"#e
+e i1ien" .i .up#"*e15e#e "ntiepi+e-i!" et!.6. Se utili,e"," t#u.e .t"n+"#+i,"te
!o-e#!i"li,"te +e +ife#ite fi#-e pent#u e*i+entie#e" p#o+u!tiei +e ente#oto0ine
.t"filo!o!i!e 3O0oi+' Ri+".!#een e#-"n7 et!.6. Me+o+ele utili,"te "u l" $"," fie
t#*%ica ELISA' fie r#actii cr+$+)#%ic#' fie r#actii -# a)luti%ar# !asi/a i%/#rsata
3r#/#rs#- !assi/# lat#& a))luti%ati+% 0 R1LA6.
*.A.C. S&nsi%ili$a$&a la %a#$&riofa9ii li$i#i 7li'o$i/ia8
Li'o$i/ia const n determinarea sensibilit7;ii unei tulpini bacteriene la
ac;iunea litic7 a unor bacterio5a)i. =ste metoda cea mai utilizat n epidemiile cu S>
ares. Detul de baz de bacteriofagi folosii i metodologia de lucru sunt standardizate i
revizuite periodic sub controlul Comitetli Internaional pentr <i'otipia Stafilococilor
cu sediul la 9olindale !"nglia% nc din 1<.8. 7n 1<<8 acest comitet a stabilit s&$ul (&
%a'4 in$&rna5ional al %a#$&riofa9ilor utilizai pentru tiparea S> ares de provenien
uman, la recomandarea Sbcomitetli O,S pentr <i'otipia Stafilococli. :tilizarea
acestor seturi standardizate de bacteriofagi permite e5primarea unitar la scar
internaional a diferitelor li'o$i/uri. care definesc urmatoarele 9ru/& li$i#& 0
0rupul " 98KJI8JJI8AJMKJG4:O 0rupul "" 9>AJ>CJIIJM2:O
0rupul """ 9FJP8'JPMJI>JMIJMMJG>AJGPJGI:O 0rupul . 9KPJKF:O
0rupul #iscellaneous 9G2JKI:O 0rupul e*perimental 9GG%GK%K4%+!8%
(22:O
0rupul aditional 9FK%M>%MG%P8-% PMC%I8-:&
2ri,a #i$ir& a a#5iunii fi&#4rui fa9: $ra(us4 /rin /r&'&n5a sau a%s&n5a
/laP&lor (& li'4: s& fa#& (u/a *D (& or& (& in#u%ar& la AE
o
C: iar a (oua #i$ir& (u/4
,&n5in&r&a /la#ilor $i,/ (& *D (& or& la $&,/&ra$ura #a,&r&i 7la%ora$orului8.
R&'ul$a$ul a#5iunii fi&#arui fa9 s& $ra(u#& /rin /r&'&n5a sau a%s&n5a /laP&lor
(& li'4.
2& /lan &/i(&,iolo9i# s& #onsi(&r4 #4 dou7 tulpini sunt di5erite dac7 ele
variaz7 prin cel pu;in dou7 atacuri 5a)ice puternice 9lize con5luente:&
Tul/inil& (& s$afilo#o# (& ori9in& u,an4 fa# /ar$& @n ,aPori$a$&a lor (in
9ru/uril& fa9i#& I i III. E6is$4 (& as&,&n&a i ,ul$& a$a#uri ,i6$&.
Tul/inil& (& 9ru/ fa9i# II au $ro/is, a##&n$ua$ /&n$ru 5&su$ul (&r,i#: iar
#&l& &n$&ro$o6i9&n& (in 9ru/uril& III i I".
Tul/inil& (& SARM sun$ #&l ,ai fr&#v&n$ (& 9ru/ fa9i# III sau n&li'o$i/a%il&.
8&P& Antibio)rama
An$i%io9ra,a 7an$i%io$i/ia8 r&/r&'in$4 stabilirea caracterelor "e sensibilitate
ale tlpinii bacteriene la acinea "iferitelor antibiotice #i sbstane "e'infectante 'ale.
S/&#$rul (& s&nsi%ili$a$& la an$i%io$i#& of&r4 infor,a5ii /r&5ioas& asu/ra
#ir#ula5i&i un&i $ul/ini /& arii r&s$r;ns&: (ar i &6/ri,ar&a unor #ara#$&r& #u
s/&#ifi#i$a$& r&9ional4 sau #+iar (& $ar4.
Es$& o%li9a$ori& (u/4 i(&n$ifi#ar&a un&i $ul/ini r&#unos#u$& #a av;n( un /o$&n5ial
/a$o9&n (&#lara$ sau #ar& /oa$& (&v&ni /a$o9&n4 @n anu,i$& si$ua5ii #lini#o1
&/i(&,iolo9i#&: @n v&(&r&a ins$i$uirii un&i $&ra/ii a(&#va$&. Coro%orar&a #u (a$&l&
#lini#& &
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECGIILOR 2RODUSE
DE STRE2TOCOCI
Manifestrile clinice determinate de streptococi includ0
- in5ec;ii acute supurative !angina eritematoas!& sin'ite& otite& mastoi"ite& en"ocar"ite&
pnemonii& bronhopnemonii etc.% i nesupurative !scarlatina%/
- complica;ii0 glomerlonefrita act! "if'!& rematisml articlar act& car"ita
rematismal!& eriteml no"os& coreea 7ngtington.
&iagnosticul de laborator este %a#$&riolo9i# !i'olarea #i i"entificarea germenli%
i i,uno%iolo9i# !confirm! "iagnosticl etiologic& "iagnostichea'! complicaiile
poststreptococice& rm!re#te eficiena tratamentli%.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
$rodusele patologice recoltate pot fi0 e-"at faringian& e-"at na'al& spt!& <CR&
proi& e-"at pleral& secreie otic!& secreie vaginal!& secrceie "e col terin& s(nge&
rin!& material necroptic.
Aecoltarea produselor patologice trebuie s se fac nainte de nceperea oricrui
tratament cu antibiotice, nainte de toaleta de diminea i nainte de mas.
7nsm6narea produselor patologice trebuie s se fac n cel mult 1-, ore de la
recoltare.
*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
*.1. E6a,&n (ir&#$0
Erotiul efectuat din produsul patologic, n scop orientativ, are importan;7 pentru
produsele normal sterile/ se efectueaz , frotiuri0 unul colorat Lram i cellalt albastru
de metilen, ultimul important pentru studiul elementelor celulare.
Colora5ia Gra, evideniaz0 coci 0ram pozitivi s5erici% a6eza;i 1n lan;uri%
nesporula;i% 5lor7 de asocia;ie !ali coci sau bacili%, polimor5onucleare !$M1%, celule
epiteliale ntregi sau detritusuri !figurile 1, , i +%.
7n cazul e5udatului faringian, frotiul servete numai pentru "iagnosticl "iferenial
!pentru eliminarea altei etiologii microbiene%.
&e remarcat faptul c pe un astfel de frotiu nu se poate face diferenierea ntre
streptococii hemolitici i streptococul viridans, un comensal obligatoriu al cilor
respiratorii superioare.
Eigura 10 Dtreptococi. &up "tlas de Cacteriologie0 =5amens directs par colorations
usuelles. N.2. Lestin, E.U. Loldstein, N.E. "car. 1<<+
Eigura ,0 Dtreptococi. &up "tlas de Cacteriologie0 =5amens directs par colorations
usuelles. N.2. Lestin, E.U. Loldstein, N.E. "car. 1<<+
*.*. I'olar& in vitro
De utilizeaz urmtoarele medii de cultur0 medii de imbo)7;ire - mediul Picke
!cristal violet i azid de sodiu%, medii de izolare comple*e !bulion )lucozat% )eloz7
s=n)e%.
7nsm6narea produsului patologic se face0 fie 1n supra5a;a mediilor, fie 1n
condi;ii de semianaerobioz7 pentru produsele patologice lichide din caviti nchise
!puroi otic, mastoidian, sinusal, 29A%. $rodusul patologic se depune la fundul unei plci
goale, peste care se toarn s6nge sau se incubeaz n atmosfer de 9), .F.
:rmeaz incubarea la +
8
9 18-,8 de ore i etapa de identificare.
Tampoanele introduse n mediul de mbogire se incubeaz +-. ore la +
8
9, dup
care se fac treceri pe geloz-s6nge, care se incubeaz 18-,8 de ore la +
8
9.
*.A. I(&n$ifi#ar&
*.A.1. Cara#$&r& (& #ul$ur4
M&(ii li#+i(&0 tulbur7 u6or mediul cu 5ormarea unui depozit/
2& ,&(ii soli(&0 pe 9&lo'4 s;n9& streptococul de grup " poate s determine0
e colonii mucoide0 colonii rotn"e& c sprafaa conve-!& lcioase& "e consisten!
mcoas!& filant!R snt caracteristice streptococilor %ncapslai& virleni #i c protein!
,/
e colonii Bmtt?0 colonii trtite& apoase& c sprafaa nereglat!& mamelonat!& c
ten"in! "e conflare 9aspect "e hart! geografic!:/
e colonii B)loss?0 colonii rotn"e& bine "elimitate& mici& lcioase& c sprafa!
conic!R corespn" streptococilor ne%ncapslai& c conint variabil "e protein! ,/
e colonii Brou)h<0 colonii trtite& scate& c margini "inate #i c sprafa! rgoas!&
care se "eta#ea'! %n totalitate "e pe sprafaa me"ili& l!s(n" pe locl respectiv o
amprent!/
Eigura +0 Dtreptococi. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
$e acelai mediu !geloz snge% streptococii pot s determine sau nu hemoliz,
care poate fi !figurile ;, ., *, , 8 i <%0
- 0 +&,oli'40 coloniile snt %ncon$rate "e o 'on! complet!& clar!& "e hemoli'!& c
"iametrl variabil %n raport c grpl antigenic/
- [ +&,oli'40 coloniile snt %ncon$rate "e o 'on! "e hemoli'! incomplet! c
%nver'irea me"ili #i a coloniei. &up meninerea peste noapte la R;
8
9 poate s mai
apar la e5terior un alt inel de hemoliz complet.
Eigura ;0 Ceta hemoliz. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ -
Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura .0 Ceta hemoliz. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
Eigura *0 Dtreptococi beta hemolitici !http [[333. 2ab Mnde5, $hoto
"tlas Aeference0 p. 2ab Te5t Aef0 =5. ,-.%
- [
\
+&,oli'40 colonii %ncon$rate "e o 'on! "e hemoli'! incomplet! c aspect voalat&
%nceo#at. 7i spune hemoliz incomplet pentru c n zona de hemoliz din 'urul coloniei
se observ hematii intacte, nelizate.
- Q +&,oli'40 "at! "e streptococi nehemolitici.
Dtreptococii de grup " sunt streptococi b-hemolitici>
*.A.*. Cara#$&r& ,orfolo9i#&
Eigura 0 Dtreptococi beta hemolitici !http [[333. 2ab Mnde5, $hoto
"tlas Aeference0 p. 2ab Te5t Aef0 =5. ,-.%
Eigura 80 Dtreptococi alfa-hemolitici !http [[333. 2ab Mnde5,
$hoto "tlas Aeference0 p. 2ab Te5t Aef0 =5. ,-.%
Erotiul din cultur evideniaz coci 0ram pozitivi s5erici% a6eza;i 1n lan;uri%
capsula;i% nesporula;i !figurile 18 i 11%.
*.A.A. Cara#$&r& %io#+i,i#&
e T&s$ul s&nsi%ili$45ii la %a#i$ra#in4
*iferenia'! streptococii W0hemolitici "e grp A "e cei W0hemolitici non0grp A.
De prelev +-; colonii b-hemolitice sau o ans din cultura n bulion. De etaleaz
inoculul pe placa cu agar-s6nge. De plasez apoi n centrul ariei nsm6nate un disc cu
bacitracin. De incubeaz 18-,8 de ore la +
8
9 !figurile 1, i 1+%.
Eigura <0 Tipuri de hemoliz !http [[333. 2ab Mnde5, $hoto "tlas Aeference0 p. 2ab Te5t Aef0 =5. ,-.%
Eigura 180 Erotiu din cultur - streptococi. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<.,
1<8*
Test pozitiv0 'on! "e inhibiie c "iametrl "e minim .. mm %n $rl "iscli.
Test negativ0 zon de inhibiie cu diametrul mai mic de 11 mm sau lipsa zonei de
inhibiie n 'urul microcomprimatului cu bacitracin.
Dtreptococii de grup " sunt sensibili la bacitracin.
Eigura 1,0 Testul la bacitracin. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<.,1<8*

Test pozitiv la bacitracin
- streptococ beta-
hemolitic grup "
Test negativ la bacitracin - streptococ, dar nu beta-
hemolitic grup "
Eigura 110 Erotiu din cultur - streptococi. &up "tlas de Cacteriologie0 =5amens directs par
colorations usuelles. N.2. Lestin, E.U. Loldstein, N.E. "car. 1<<+
e T&s$ul CAM2
De folosete pentru identi5icarea streptococilor de )rup -. Dtreptococii de grup C
produc un factor difuzibil, fa#$orul CAM2, care acionea'! sinergic c W0li'ina
stafilococic!& "etermin(n" li'a complet! a hematiilor "e berbec sa "e bo.
De nsm6neaz un striu din tulpina indicatoare de stafilococ auriu pe un
diametru al plcii. Tulpinile de testat i tulpinile martor se nsm6neaz n striuri fine,
liniare, de cca , cm lungime, perpendicular pe striul tulpinii indicator, dar fr a o atinge.
De incubeaz plcile la +
8
9 peste noapte.
Test pozitiv0 l!rgirea cneiform! %n v(rf "e s!geat! sa %n flac!r! a ariei "e
hemoli'! pro"s! "e cltra stafilococli !figura 1;%.
Test negativ0 nici o modificare a hemolizei.
Testul poate fi pozitiv i pentru alte grupuri0 =, $, :, G.
e T&s$ul 2WR 7L1/-rroli(on-l101na/+$-la,i(48
Eigura 1+0 Testul la bacitracin. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition,
=d3ard N. Cottone 1<<

Eigura 1;0 Testul 9"M$ !http[[333. 2ab Mnde5, $hoto "tlas Aeference0 p. ;.%
Test pozitiv
Test negativ
(i5eren;iaz7 streptococii de )rup A % de cei S3hemolitici non3)rup A. =ste mai
specific dec6t testul la Cacitracin.
Dtreptococii b-hemolitici de grup " hidrolizeaz substratul $QA n 2-pirolidon i
b-napht@lamid, care prin reacie cu reactivul $QA !p-dimetilamino-cinamaldehid% d
culoare roie.
De suspensioneaz o ans ncrcat cu cultur ntr-un tub cu bulion $QA. De
incubeaz ; ore la +
8
9, apoi se adaug o pictur de reactiv $QA.
Test pozitiv0 cloare ro#ie 0 prprie dup , minute de la adugarea reactivului
$QA.
Test negativ0 apariia oricrei culori.
e T&s$ul SXT 7sulfa,&$o6a'ol1$ri,&$o/ri,8
=ste folosit pentru di5eren;ierea streptococilor de )rup A 6i -% de ceilal;i
streptococi S3hemolitici/ ma'oritatea streptococilor de grup " i C sunt rezisteni la D(T
atunci c6nd sunt incubai n atmosfer normal.
De prelev ,-+ colonii sau o ans din cultura pur i se nsm6neaz o plac cu
agar-s6nge. De depune n mi'locul ariei nsm6nate un disc cu D(T. De incubeaz peste
noapte n atmosfer normal la +
8
9.
Test pozitiv !germeni sensibli la D(T%0 orice 'on! "e inhibiie %n $rl "iscli c
SLT. =50 streptococii de grup 9 ori L.
Test negativ !rezistent la D(T%0 cretere p6n la disc. =5emplu0 streptococii de
grup " ori C.
e T&s$ul %il41&s#ulin4
De folosete pentru identi5icarea streptococilor de )rup ( 6i a enterococilor,
fiind probabil testul cel mai fidel.
=nterococii i streptococii de grup & cresc pe mediul cu ;8F bil i hidrolizeaz
esculina cu eliberare de glucoz i un compus neglucidic !esculetina-dihidro5icumarina%,
care reacioneaz cu srurile de fier d6nd natere unui produs de culoare neagr.
De nsm6neaz cu 1-+ colonii panta mediului agar-esculin sau 'umtatea unei
plci cu agar bil-esculin. De incubeaz la +
8
9 peste noapte i nc ,; de ore n cazul
unui rezultat negativ.
Test pozitiv0 cre#terea #i %negrirea me"ili "in plac! sa a cel pin X "in pant!.
Test negativ0 lipsa de negrire a mediului din plac sau a pantei.
e T&s$ul +i/ura$ului (& so(iu,
(i5eren;iaz7 streptococii de )rup - de al;i streptococi S3hemolitici.
Sipuricaza hidrolizeaz hipuratul de sodiu n benzoat de sodiu i glicin.
1inhidrina dezamineaz o5idativ glicina, rezult6nd aldehida corespunztoare, 9),, 1S+,
hidrindantina !forma redus a ninhidrinei%. 1S+ d cu ninhidrina i hidrindantina un
comple5 colorat purpuriu.
De suspensioneaz cultura de testat n 8,; ml soluie 1F hipurat de sodiu, p6n se
obine o soluie lptoas. De incubeaz suspensia , ore la +
8
9. "poi se adaug 8,, ml din
soluia de ninhidrin i se reincubeaz 18-1.8 minute la +
8
9. De urmrete vira'ul
culorii.
Test pozitiv0 cloare intens prprie0hi"roli'a hipratli.
Test negativ0 culoare nemodificat.
e T&s$ul s&nsi%ili$45ii la van#o,i#in4
(i5eren;iaz7 )enurile Streptococcus 6i 'nterococcus care sunt sensibile la
vancomicin7, de )enurile Leuconostoc 6i Pediococus care sunt rezistente.
De prelev cu ansa .-18 colonii bine izolate sau un tampon bine scurs din cultura
de bulion. De nsm6neaz ] din placa de testare !plci cu agar Mueller-Sinton%. De
plaseaz prin presare uoar, n centrul ariei nsm6nate, un disc cu vancomicin. De
incubeaz peste noapte la +
8
9 n atmosfer cu .F 9),.
Test pozitiv 9sensibilitate:0 apariia oric!rei 'one "e inhibiie %n $rl
microcomprimatli.
Test negativ !rezisten%0 cretere p6n la discul cu vancomicin.
e T&s$ul $ol&ran5&i la sar&
=ste pozitiv pentru ma<oritatea speciilor de 'nterococcus, care se dezvolt n
bulion cu *,.F 1a9l n ,;-, ore la +
8
9, n timp ce tulpinile de Dtreptococcus nu se
dezvolt.
Tehnic0 $e un mediu cu *,.F 1a9l se nsm6neaz ,-+ colonii de
microorganism. De incubeaz + zile la +
8
9, cu urmrire zilnic pentru turbiditate i
vira'ul indicatorului !bromcrezol purpur%.
Test pozitivQ trbi"itate c sa f!r! vira$l in"icatorli "e la prpri la
galben. =5. =nterococcus faecalis.
Test negativ0 absena turbiditii i modificrii de culoare. =50 Dtreptococcus
viridans.
e Cr&$&r&a la 1E
E
C i DC
E
C
'nterococul se dezvolt la 24
4
C 6i PI
4
C: ceea ce-l difereniaz de speciile de
Pediococcus care se dezvolt numai la PI
4
C sau de Leuconostoc care se dezvolt numai
la 24
4
C.
*.A.D. Cara#$&r& an$i9&ni#&
O I(&n$ifi#ar&a 9ru/ului s$r&/$o#o#i#
De face pe baza anti)enului polizaharidic C, care mparte steptococii n
streptococi grpabili0 notai cu literele "-U !cu e5cepia literelor M i N% i streptococi
negrpabili, lipsii de antigenul de grup.
"ntigenul specific de grup !polizaharidul 9 sau acidul teichoic% poate fi identificat
prin diferite reacii antigen-anticorp.
M&$o(& folosi$&0
e Reac;ia de precipitare 1n tuburi de precipitare
7n mediu lichid serri imne "e referin! sunt puse s reacioneze cu antigenl "e
testat, aflat tot n faza lichid. =5tractul antigenic se poate obine prin ,&$o(a
Lan#&fi&l( !e5tracie acid la 188
8
9%, sau ,&$o(a Full&r !e5tracie cu formaldehid la
1*8
8
9% sau prin au$o#lavar& !1. min. 2a 1,1
8
9%.
7n tuburi de precipitare se pipeteaz e5tractul antigenic 8,1-8,, ml ntr-un numr
de tuburi egal cu numrul antiserurilor de referin. De pipeteaz apoi o cantitate egal
din fiecare antiser n tubul corespunztor, ci gri', astfel nc6t cei "oi reactivi s! n se
amestece !se ine tubul nclinat i se las serul s se preling pe peretele acestuia%. Derul,
cu o densitate mai mare dec6t a e5tractului antigenic, se va depune la fundul tubului fr
ca cei doi reactivi s se amestece.
&up 1. min de incubare la temperatura camerei, se urmrete apari;ia inelului
de precipitare la inter5a;a dintre cei doi reactivi. 7n caz de dubiu, se agit tuburile, se
incubeaz , ore la +
8
9 i se las apoi peste noapte la ;
8
9. " doua zi se urmrete
depunerea de precipitat la fundul tubului, i, n funcie de cantitatea acestuia, se noteaz
rezultatele pozitive semicantitativ !de la RRRR la R%.
De recomand pentru i"entificarea streptococilor W0hemolitici "e grp A& ?& C& I&
6, dar i a celor non0 W0hemolitici& "e grp ? #i *.
e Teste de a)lutinare pe lam7
Dunt reacii antigen-anticorp, care folosesc drept suport pentru anticorpii
speci5ici de )rup 5ie sta5ilococi cu protein7 A !reacie de coaglutinare%, 5ie particule de
late* !reacie de late5-aglutinare%. "stfel0
0 ,eto"a coagltin!rii0 reacia se efectueaz pe lam folosindu-se tulpina de identificat
!antigenul% sub forma unei suspensii obinut prin cultivarea tulpinii de identificat n
bulion glucozat i o trus de antiseruri0 ", C, 9, E, L.
$rincipiul metodei0 cuplarea stafilococului 9o3an cu protein " cu anticorpii
specifici antistreptococici de grup. Eragmentul Ec al anticorpilor se fi5eaz de proteina
stafilococic, iar fragmentul Eab rmas liber reacioneaz cu polizaharidul specific de
grup, d6nd o reacie vizibil macroscopic, sub forma unor grun'i, cu clarificarea fazei
lichide.
- ,eto"a late-0agltin!rii0 particularitatea reaciei este dat de faptul c anticorpii
specifici antigrup sunt fi5ai pe un suport reprezentat de particule de late5. Aeacia se
desfoar pe lam, rezultatul pozitiv !coresponden imun% nsemn6nd apariia grun'ilor
n faza lichid clarificat.
9omparativ cu testul clasic al reaciei de precipitare, testele de aglutinare pe lam
sunt mai rapide, mai economice, cu o sensibilitate i specificitate cel puin egale.
O I(&n$ifi#ar&a $i/ului M s$r&/$o#o#i#
Dtreptococcus p@ogenes se clasific& dup proteina M, n )/ "e serovarri ,& care
pot fi identificate prin0
e Reac;ia de precipitare 1n tuburi capilare
$rincipiul reaciei este ca cel de mai sus, dar n locul tuburilor de precipitare se
folosesc tuburi capilare cu diametrul de 8,-1 mm i lungimea de .-<8 mm. De nmoaie
e5tremitatea capilarului n antiserul de referin i se aspir o coloan de ,.-+8 mm de
ser. De aspir n mod similar, peste antiserul de referin, o coloan de e5tract antigenic cu
nlime egal cu a celei de ser, fr a interpune vreo bul de aer la interfaa dintre cei doi
reactivi. De obtureaz orificiul inferior prin inplantarea vertical a tubului n blocul de
plastilin.
Aeacia se citete dup . min., urmrindu-se apariia unui precipitat alburiu la
limita de separare a celor doi reactivi, pe fond ntunecat.
O I(&n$ifi#ar&a $i/ului T s$r&/$o#o#i#
$e baza proteinei T, Dtreptococcus p@ogenes este mprit n 3) serovarri T, care
se identific prin 0
e Reac;ia de a)lutinare pe lam7
De efectueaz ntre serurile anti-T adsorbite i suspensia tulpinii de identificat
cultivat n bulion !vezi tehnicile de aglutinare de mai sus%.
)bservaie0 :ltimele date de literatur fac difereniere ntre streptococii de grup & i
enterococi, consider6ndu-se c enterococii fac parte dintr-un gen separat de genul
Dtreptococcus, i anume genl Enterococcs.
A$+ m+o- - -+c+ar ra,i-/ a an+ign.$.i s+r,+ococic8
- "etectarea "irect! "in e-"atl faringian a streptococilor "e grp A0 e5ist truse
comerciale cu reactivi care pot realiza e5tracia enzimatic sau chimic a polizaharidului
specific de grup " i detectarea antigenului e5tras prin reacii de aglutinare sau reacii
=2MD"/
- "etectarea streptococli "e grp ? direct din prelevate placentare, uterine, cervicale/
- "etectarea antigenelor streptococice "e grp A& ?& C& *& I "in hemocltri/
- "etectarea "irect! a streptococilor "e grp A "in e-"atl faringian sa a
streptococilor "e grp ? "in hemocltri prin utilizarea de son"e ncleoti"ice 9sonde
"&1 comercializate pentru aceti germeni%.
*.D. An$i%io9ra,a
Nu s& &f&#$u&a'4 pentru c, dei infeciile streptococice s-au tratat cu penicilin,
p6n acum nu s3au semnalat cazuri de rezesten;7 ale acestuia la penicilin7.
"ntibiograma se efectueaz doar la persoanele alergice la penicilin.
A. DIAGNOSTICUL IMUNOBIOLOGIC
"re la baz investigarea r!spnsli imn moral #i cellar.
R4s/unsul i,un u,oral
In vi$ro
e (eterminarea anticorpilor antistreptolizin7 $ 9ASL$: prin reac;ia ASL$
Rac0ia ASLO
Ele!entele reac2iei
- ser de cercetat !anticorpi antistreptolizin ) h%/
- antigen standard - streptolizina D- !D2)%/
- suspensie de hematii de iepure.
Principiul reac;iei0 prezena anticorpilor antistreptolizin ) n serul de testat
neutralizeaz antigenul standard !D2)%, care nu-i mai manifest efectul hemolitic asupra
hematiilor !reacie de seroneutralizare%.
Titrul reac;iei0 cea mai mare diluie de ser cu hemoliz absent.
Titrul ASL$ normal0 ,.8 uniti "D2)[ml. Titrul peste ,.8 uniti "D2)[ml
semnific infecie cu streptococ beta-hemolitic grup ", fie o infecie recent !n urm cu
,-+ sptm6ni%, fie repetate infecii streptococice n antecedente, netratate sau incorect
tratate.
e (eterminarea anticorpilor anti3#AP
De realizeaz prin r&a#5ia (& la$&61a9lu$inar&.
De fac diluii binare ale serului de bolnav care se pun n contact cu antigenul
late5-M"$. De agit, se incubeaz acoperit la +
8
9 , ore, apoi se las la temperatura
camerei p6n a doua zi. Aeacie pozitiv nseamn aglutinare vizibil cu ochiul liber. De
consider titrul pozitiv peste ;8 :. "nticorpii anti-M"$ au o importan deosebit, fiind
sin9urii an$i#or/i #a/a%ili s4 /ro$&P&'& or9anis,ul (& o nou4 inf&#5i& s$r&/$o#o#i#4,
dar numai fa de acelai tip, imunitatea anti-M fiind specific de tip. "nticorpii anti-
M"$ apar la +-; sptm6ni de la debutul infeciei acute i se menin luni i chiar ani de
zile.
"nticorpii anti-M"$ se gsesc la titruri 5oarte ridicate la cei cu RAA 6i cardit7
reumatismal7, c6t i n perioadele de acalmie, servind la diagnosticul acestor complicaii,
n special n aceste perioade dintre pusee.
e (eterminarea anticorpilor anticarbohidrat 9anti3C+$:
De efectueaz prin r&a#5ia (& +&,a9lu$inar& /asiv4 7>A28. 7n aceast reacie se
pun n contact serul de bolnav diluat binar, cu antigenul standard reprezentat de antigen
streptococic grup " e5tras prin metoda Euller, antigen cu care se sensibilizeaz hematii
de berbec. Aeacia se icubeaz 1 or la +
8
9.
Aeacie pozitiv nseamn apariia unei hemaglutinri pe fundul godeului,
hamaglutinare care apare sub form de stea, fa de martor unde hematiile sunt dispuse
omogen pe fundul godeului. Titrul pozitiv se consuder peste valoarea de ,8 :.
Anticorpii anticarbohi"rat a aceeai semnificaie #i evolie ca a anticorpilor
anti0,AP.
In vivo
"(R (ick prin care se testeaz sus#&/$i%ili$a$&a la s#arla$in4 !prezena sau
absena anticorpilor antito5in eritrogen%. De in'ecteaz 8,1 ml de to5in eritrogen pe
faa anterioar a antebraului. 2a ,;-;8 de ore se citete reacia.
Reac;ie pozitiv7 !prezena unui eritem cu diametru mai mare de 18 mm% semnific
lipsa "e anticorpi protectori anti0to-in! eritrogen!& "eci ssceptibilitatea "e a face
scarlatin!.
Reac;ie ne)ativ7 !absena eritemului la locul administrrii to5inei eritrogene%
semnific! pre'ena anticorpilor protectori anti0to-in! eritrogen!& "eci n organism
prote$at fa#! "e o astfel "e infecie.
Fenomenul de stin)ere Schultz3Charlton0 di5eren;iaz7 erup;ia scarlatinoas7 de
alte erup;ii, pe baza neutralizrii in vivo a to5inei eritrogene de ctre serul de
convalescent in'ectat intradermic n zona eruptiv a bolnavului suspect de scarlatin.
(ispari;ia erup;iei de la locul administrrii serului semni5ic7 erup;ie scarlatini5orm7/
meninerea erupiei semnific o alt etiologie a erupiei dec6t cea scarlatiniform.
R4s/unsul i,un #&lular
De evideniaz prin teste in vivo i in vitro& dar care vor constitui obiectul de
studiu al imunologiei.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECGIILOR 2RODUSE
DE 2NEUMOCOC
Dtreptococcus pneumonie este un )ermen condi;ionat pato)en care determin0
pneumonii sau bronhopneumonii !mai frecvent la copii i btr6ni%, menin)it7% otit7%
sinuzit7% pleurit7% pericardit7% in5ec;ii oculare% cutanate% abcese etc.
$neumococii sunt germeni frecvent nt6lnii n flora orofaringian normal,
purt7torii s7n7to6i reprezent=nd >43M4R.
&iagnosticul de laborator este bacteriologic i const din izolarea i identificarea
germenului, ca i efectuarea antibiogramei.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
De recolteaz sputa mucopurulent, crmizie, cu striuri sanguinolente, aspirat
traheal% e*udat 5arin)ian sau nazal% s1n)e% LCR% lichid pleural% sucul pulmonar e5tras
prin puncie alb, 5ra)mente tisulare prelevate prin puncii-biopsii.
Spta& recoltat n recipiente sterile, se spal! "e 30A ori c ser fi'iologic #i se
omogeni'ea'! prin agitare !dup adugarea a c6torva perle de sticl sterile% n scopul
ndeprtrii florei bacteriene ce provine din cile respiratorii superioare, dup care este
utilizat pentru efectuarea de frotiuri, nsm6nri i inoculri n oarece.
*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
8&2& '*amen direct
Erotiul efectuat direct din produsul patologic evideniaz0 coci Bin diplo@%
lanceola;i sau B1n 5lac7r7 de lum=nare@& 0ram pozitivi% capsula;i% nesporula;i% imobili.
7n funcie de produs patologic !normal steril sau normal contaminat% se poate evidenia0
flor de asociaie, polimorfonucleare !$M1%, celule epiteliale ntregi sau ratatinate
!figurile 1, ,, +, ; i .%.
Erotiul efectuat direct din sput evideniaz pe l6ng coci in "iplo& 6ram
po'itivi& capslai& nesporlai& imobili i macrofage alveolare abn"ente& eritrocite care
a transva'at la nivell alveolelor.
8&8& "zolare
In vitro pneumococii nu se dezvolt7 pe medii simple. =i necesit medii
suplimentate cu ser% ascit7% s=n)e% incubate la >MC 1n atmos5er7 de C$8 IR !bulion cu
infuzie proaspt de carne de bou, bulion glucozat cu thioglicolat ca agent reductor,
geloz-s6nge, -ser, -ascit, iar pentru antibiogram Muller Sinton cu s6nge%.
Eigura 10 $neumococi evideniai pe frotiu colorat Lram din lichid cefalorahidian. &up0 Dchneiersoncs "tlas of
&iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura ,0 Erotiu colorat Lram din produs patologic - pneumococi. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura +0 Erotiu colorat Lram din produs - pneumococi. &up "tlas de
Cacteriologie0 =5amens directs par colorations usuelles. N.2. Lestin, E.U. Loldstein, N.E.
"car. 1<<+
Eigura ;0 $neumococi capsulai evideniai pe frotiu colorat Lram din sput. &up0 Dchneiersoncs "tlas of
&iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura .0 $neumococi capsulai n produs patologic. &up "tlas de Cacteriologie0
=5amens directs par colorations usuelles. N.2. Lestin, E.U. Loldstein, N.E. "car. 1<<+
In vivo pentru izolarea pneumococilor se utilizeaz 6oarecele alb. &up ,;-;8 de
ore de la inocularea intraperitoneal, oarecele moare de septicemie, izol6ndu-se
pneumococi n cultur pur din cord, e5udatul peritoneal i splin.
8&>& "denti5icare
a. Cara#$&r& #ul$ur4
$neumococii tulbur7 uni5orm mediile lichide/ dup mai mult de +-; ore are loc
5enomenul de Bautoliz7@!sinuciderea corpilor bacterieni%.
$e medii solide, de tip geloz s6nge, pneumococii determin colonii asemntoare
streptococului viridans0 colonii de tip BS@% mici% puncti5orme% cu zon7 de hemoliz7
!diametrul mai mare dec6t diametrul coloniei% de tip al5a !incomplet cu tent verzuie%
!figura * i %. 2a pneumococi, dac iniial coloniile sunt 1n Bcupol7 de catedral7, pe
parcurs iau aspect de Bstrachin7@ sau Bblid@!figura 8%.
9aracterele culturale mai sus menionate sunt asemntoare streptococului alfa-
viridans, fa de care pneumococul trebuie difereniat.
Eigura *0 9ultur de pneumococ pe geloz s6nge. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura 0 9ultur de pneumococ pe geloz s6nge.
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
%. Cara#$&r& ,orfolo9i#&
Erotiul din cultur !figura <% evideniaz coci Bin diplo@% lanceola;i sau B1n
5lac7r7 de lum=nare@% 0ram pozitivi% capsula;i% nesporula;i% uneori 1n lan;uri scurte.
"pariia lanurilor i lungimea lor este corelat cu vechimea culturii, cu condiii
nefavorabile de mediu%, cu absena ionilor de magneziu din mediu sau cu prezena
anticorpilor specifici de tip.
#. Cara#$&r& %io#+i,i#&
=5ist trei teste biochimice care difereniaz pneumococii de streptococii viridans0
fermentarea inulinei, biloliza, sensibilitatea la optochin. Toate aceste teste sunt pozitive la
pneumococ i negative la streptococul viridans.
Fermentarea inulinei este testat pe mediul Siss cu inulin 1F, n prezena unui
indicator !rou fenol%. De nsm6neaz cultura din bulion glucozat cu thioglicolat.
Aeacia pozitiv, fermentarea inulinei, este evideniat de virarea n galben a
indicatorului, demonstr6nd prezena pneumococului !figura <%.
Eigura 80 Leloz s6nge0 colonii de pneumococ Hn strachinK.
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
Eigura 180 Eermentarea inulinei.
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
- -iloliza sau 5enomenul Neu5eld const n li'a pnemococilor %n pre'ena bilei,
s!rrilor biliare sa aci'ilor biliari, substane care activeaz enzimele lipolitice ale
pneumococului. 7ntr-o eprubet se pune 1 ml de cultur !n bulion glucozat cu
thioglicolat% cu 1 ml bil de bou !eprubeta din mi'loc%, n prezena unui martor
reprezentat de o alt eprubet care conine 1 ml cultur cu 1 ml ser fiziologic !DE%
!prima eprubet din figura 11%. &up +8 de minute, n eprubeta din mi'loc cultura se
clarific, identific6nd pneumococul !enzimele lipolitice ale pneumococului lizeaz
cultura, n timp ce n prima eprubet coninutul rm6ne tulbure.
- Sensibilitatea la optochin. Testul este asem!n!tor c cel la bacitracin!. Tulpina de
identificat se nsm6neaz, n striuri foarte dese - Hn p6nzK - pe geloz s6nge. 7n
Eigura <0 Erotiu efectuat din cultur de pneumococ.
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
Aeacie pozitiv
Aeacie
negativ
centrul zonei nsm6nate se aplic o rondea mpregnat n soluie de optochin. &up
termostatare, dac n 'urul comprimatului apare o zon de inhibiie a creterii
germenului mai mare de ,8 mm, testul este considerat pozitiv, fiind identificat
pneumococul. Aezistena sau zon de inhibiie mai mic, denot un test negativ, fiind
cazul streptococului viridans !figurile 1, i 1+%.
Eigura 110 Ciloliza. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ -
Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura 1,0 Densibilitatea la optochin - test pozitiv !pneumococ%. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<

Martor0
9ultur R DE
tulbure
9ultur R bil
clarificarea
coninutului
9ultur R bil
coninut
tulbure
streptococ
Eigura 1+0 Densibilitatea la optochin - test negativ !streptococ viridans%. &up0
Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone
1<<
(. Cara#$&r& s&rolo9i#& 7an$i9&ni#&8
$entru identificarea serotipului se pot practica0 reacia "e mflare a capslei #i
reacia "e agltinare pe lam! cu seruri polivalente i monovalente, ultima fiind o metod
mai accesibil, n condiiile creterii incidenei infeciilor pneumococice.
Reac;ia de um5lare a capsulei este folosit pentru identi5icarea polizaharidului
capsular 9substan;7 solubil7 speci5ic7 3 SSS: care mparte pneumococii n peste 8+
tipuri, cel mai agresiv fiind tipul +, posesor al celei mai mari capsule.
Tehnic!0 se amestec pe o lam curat de sticl o pictur din cultura de
pneumococ n bulion glucozat cu tioglicolat, sau din e5udatul peritoneal de la oareci
inoculai intraperitoneal, cu o pictur din serurile specifice de tip !preparate pe iepuri
imunizai cu suspensii microbiene de pneumococ% i cu o pictur de colorant. De acoper
cu o lamel i se e5amineaz cu imersia. 7n cazul coresponden;ei imune 1ntre cei doi
reactan;i, capsula 16i m7re6te volumul de c=teva ori 983> ori: comparativ cu martorul
!cultur de pneumococ R o pictur de ser fiziologic R o pictur de colorant% !figurile 1;
i 1.%.
Reac;ia de a)lutinare pe lam7 se face cu serl polivalent 9A=?=C: i serrile
monovalente A 9.& 3 #i A:& ? 94& 1 #i C: #i C 9)& .3& .4 #i .B:.
Tehnic!0 o cultur de ,; de ore n bulion glucozat se centrifugheaz, sedimentul
obinut fiind suspensionat n 1 ml bulion. $e o lam de sticl se pipeteaz patru picturi
din cultura de pneumococ, n care se adaug c6te o pictur din serul polivalent !"RCR9%
i serurile monovalente ", C i 9. Lrun'ii de aglutinare vor aprea la serul polivalent i
de e5emplu la serul monovalent C. 9a urmare, pe o a doua lam se adaug, separat,
serurile componente ale monovalentului C, grun'ii de aglutinare identific6nd tipul de
pneumococ.
Coa)lutinarea% 'L"SA% R"A sunt alte tehnici de identificare serologic, care
urmresc evidenierea polizaharizilor capsulari ai pneumococilor direct din produsele
patologice0 29A, sput, s6nge.
(. Cara#$&r& (& /a$o9&ni$a$&
De poate efectua testul in vivo prin inoculare intraperitoneal sau subcutanat la
#oarecele alb care moare prin septicemie n ,;-;8 de ore.
Eigura 1;0 Aeacia de umflare a capsulei. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ -
Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
8&P& Antibio)rama
$rin apariia tulpinilor rezistente la antibiotice !e5emplu penicilin% este
obligatorie efectuarea antibiogramei.
Eigura 1.0 Aeacia de umflare a capsulei. &up " 9olour "tlas of Microbiolog@,
A.N. )lds 1<., 1<8*
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECGIILOR 2RODUSE
DE RE2RE3ENTANGII GENULUI NEISSERIA
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECGIEI 2RODUSE DE
MENINGOCOC
Lenul 1eisseria !1% cuprinde specii care populeaz mucoasele. 9uprinde pe l6ng
specii pato)ene pentru om !+> meningiti"is #i +> gonorrhoeae% i specii nepato)ene ce
fac parte din flora normal !+> flavescens& +> sbflava& +> sicca& +> mcosa%.
Meningococii sunt parazi;i strict la om, cu localizare pe mucoasa c7ilor
respiratorii superioare& &etermin ,&nin9i$a ,&nin9o#o#i#4 sau ,&nin9i$4
#&r&%ros/inal4 &/i(&,i#4.
&iagnosticul de laborator este bacteriologic !izolarea i identificarea germenului,
urmat de efectuarea antibiogramei%.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
$rodusele patologice recoltate sunt0 LCR 9tulbure sau net purulent:% s=n)e%
e*udat 5arin)ian% e*udate ale seroaselor% lichid pete6ial. Toate aceste produse se
transport la +9 i se %ns!m(nea'! rapi"& meningococii fiin" germeni foarte sensibili
la variaii "e temperatr! #i sc!cine #i pre'ent(n" ten"in! "e atoli'!.
D6ngele pentru hemocultur se nsm6neaz direct pe medii de cultur lichide
!bulion glucozat ,F, respect6nd proporia de .F s6nge%.
*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
8&2& '*amen direct
&in sedimentul obinut la centrifugarea 29A, se fac frotiuri, care, n cazul
prezenei meningococului, spre deosebire de pneumococ !tabel 1%, evideniaz0
- coci 0ram ne)ativi% ?in diplo@% reni5ormi% cu concavit7;ile 5a;7 1n 5a;7% uneori
capsula;i !capsul vizibil pe preparatele proaspete sau la germenii recent izolai%,
dispui frecvent intracelular, imobili, la unele specii se evideniaz prezena pililor/
- polimor5onucleare 9P#N: 1n num7r 5oarte mare !figura 1%.
LCR 2n&u,o#o# M&nin9o#o#
As/&#$ ,a#ros#o/i#
- uor opalescent - intens tulbure, sub
presiune
As/&#$ ,i#ros#o/i#
- coci Lram pozitivi, Vin
diploK, lanceolai, dispui
frecvent e5tracelular
- polimorfonucleare
- coci Lram negativi, Vin
diploK, reniformi, dispui
frecvent intracelular
- numr e5trem de mare de
polimorfonucleare
Tabel 10 &iagnostic diferenial ntre meningita meningococic i meningita pneumococic
8&8& "zolare
De folosesc medii de cultur7 1mbo)7;ite 3 medii comple*e !geloz-s6nge, -ser,
-ascit, -ocolat%, mediul SQ2 !cu adaus de antibiotice0 colimicin, lincomicin%, mediul
Muller-Sinton, cu incubare n atmosfer de 9), .-18F.
=5aminarea culturilor pe medii solide se face la ,; i ;8 ore, iar hemoculturile se
e5amineaz zilnic timp de .- zile prin subculturi pe medii adecvate.
8&>& "denti5icare
- #ara#$&r& #ul$ur40 pe me"iile lichi"e tlbr! niform me"il/ gelo'! s(nge0 colonii
de tip BS@% transparente% u6or )ri% 57r7 hemoliz7 !figura ,%/
- #ara#$&r& ,orfolo9i#&0 frotiu din cultur care evideniaz coci 6ram negativi& ;in
"iplo& reniformi& neori capslai& nesporlai/
- #ara#$&r& %io#+i,i#&0 fermentea'! glco'a #i malto'a !pe medii cu geloz i 1F
zahr, 18F ser de cal i indicator albastru de brom timol%/ nefermentarea levulozei,
lactozei i zaharozei/ pro"ce citocrom0o-i"a'! !pe h6rtie de filtru mpregnat cu
tetrametilen parafenilendiamin, apariia unei culori albastre n +-18 secunde indic
o5idarea enzimatic a reactivului%/
Eigura 10 Meningococi. Erotiu colorat Lram din lichid cefalorahidian. &up0 Dchneiersoncs "tlas of
&iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
- #ara#$&r& s&rolo9i#&0 reacia "e agltinare pe lam! c serri polivalente #i apoi c
serri monovalente. Aeacia pozitiv, apariia grun'ilor de aglutinare, indic grupul !",
C, 9, &, (, Q, P, P i U1+.%.
8&P& Antibio)rama
Terapia cu Aifampicin, =ritromicin, $enicilin, Dulfamide sau 9efalosporine
este n general suficient.
Tulpinile de meningococ secretoare de penicilinaz sunt rare, de aceea rezistena
la $enicilin a meningococilor reprezint un mar4er epidemiologic cu capacitate
discriminatorie bun.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECGIEI 2RODUSE DE
GONOCOC
Lonococul, bacterie e*clusiv uman7 6i 1ntotdeauna pato)en7, este a)entul
etiolo)ic al )onoreei !boal cu transmitere se5ual%. $oate interesa orice fel de mucoas a
organismului uman, cum este con'unctiva !oftalmia la nou-nscui%.
&iagnosticul de laborator este bacteriologic !izolarea i identificarea germenului/
efectuarea antibiogramei%.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
$rodusele patologice sunt reprezentate de secre;ia uretral7 i secre;ia va)inal7.
=le au un aspect purulent% sunt opace% cremoase% cu tent7 )7lbuie% desprinz=ndu3se
u6or.
Aecoltarea se face cu ansa sau cu tamponul. 2a brbai, prin uoara e5primare a
uretrei, se obine o pictur de material ce se recolteaz cu ansa sau cu tamponul. 2a
femeie recoltarea se face din colul uterin, la cabinetul de ginecologie, av6nd gri' s nu se
Eigura ,0 9ultur de meningococ pe geloz s6nge. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
contamineze proba cu flor vaginal. Transportul se face utiliz6nd me"il "e transport
Start.

*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
8&2& '*amen direct
Irotirile efectuate din probele recoltate se fi-ea'! chimic !alcool metilic% ,-18
minute i se colorea'! albastr "e metilen #i 6ram. 7n coloraia Lram se prelungete cu
un minut aciunea soluiei 2ugol i se prelungete decolorarea cu alcool-aceton. De
evideniaz !figurile 1 i , %0
- coci 0ram ne)ativi% ?in diplo@% reni5ormi% cu concavit7;ile 5a;7 1n 5a;7/
- 5lor7 de asocia;ie bo)at7 9al;i coci sau bacili:/
- polimor5onucleare 9P#N: 1n num7r 5oarte mare/
- celule epiteliale% 1ntre)i sau detritusuri.
7n formele cronice apare polimorfismul dimensional i tinctorial.
8&8& "zolare
Lonococul este un )ermen 5oarte preten;ios, necesit=nd medii comple*e !geloz-
s6nge, -ser, -ascit, -ocolat/ mediul SQ2/ mediul Muller-Sinton%, cu incubare n
atmosfer de 9), .-18F
8&>& "denti5icare
3 #ara#$&r& #ul$ur40 e5aminarea culturii dup ,;-;8 de ore pe geloz s6nge evideniaz
dou tipuri de colonii0 unele sunt "e tip S& mici& transparente& #or gri %n pic!tr! "e
ro! 9virlente:& iar altele snt mari& plate& scate& granlate 9nevirlente: !figurile + i
;%/
Eigura 10 Erotiu colorat Lram din secreie uretral0 gonococi. &up " 9olour "tlas of
Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
- #ara#$&r& ,orfolo9i#&0 frotiu din cultur care evideniaz coci 6ram negativi& ;in
"iplo& reniformi& nesporlai/
- #ara#$&r& %io#+i,i#&0 fermentea'! glco'a !figura .%& pro"ce citocrom0o-i"a'!
!testul o5idazei pozitiv% !figura *%/
- #ara#$&r& s&rolo9i#&0 PCR 9polymerase chain reaction: este o metod de determinare
a prezenei gonococilor n urin sau 29A.
8&P& Antibio)rama
Eigura ,0 Erotiu colorat Lram din secreie uretral0 gonococi. &up0 Dchneiersoncs "tlas of
&iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura +0 9ultur din col uterin. Dt6nga0 mediul geloz-ocolat0 mai multe tipuri de colonii. &reapta0 mediul
Tha@er-Martin0 cultur pur de gonococi. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh
=dition, =d3ard N. Cottone 1<<
$entru testarea sensibilitii se folosete metoda difuzimetric. De folosete
mediul SQ2 i suspensie microbian. 7n terapie sunt indicate $enicilina, Tetraciclina,
Banamicina. De pot utiliza de asemenea aminociclitolii !Dpectinomicin% n doz unic.
Eigura ;0 Lonococ - geloz s6nge. &up " 9olour "tlas of Microbiolog@,
A.N. )lds 1<., 1<8*
Eigura .0 Eermentarea glucozei gonococ. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
e ma5im DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECGIILOR CU
ENTEROBACTERII
=nterobacteriile reprezint o vast7 5amilie din )rupul bacteriilor 0ram ne)ative%
cu o mare variabilitate )enetic7 !morfologic, biochimic, antigenic, de patogenitate%.
"ceste microorganisme, dezvoltate n intestinul omului i animalelor n condiii ecologice
comple5e, cu un metabolism foarte activ, sunt supuse frecvent fenomenelor de transfer
genetic !transformare, transducie, con'ugare% cu posibilitatea apariiei at6t de populaii
bacteriene rezistente sau multiplu rezistente la antibiotice, c6t i de populaii bacteriene
cu patogenitate crescut. $rin aceste mecanisme de recombinare in vivo, plasticitatea
enterobacteriilor este nesf6rit, cu implicaii pe plan terapeutic, epidemiologic i
profilactic.
=nterobacteriile sunt bacterii de 5orm7 bacilar7% ma<oritatea mobile !imobile0
Dhigella, Blebsiella%, ma<oritatea necapsulate !e5cepie Blebsiella%, aerob sau 5acultativ
anaerobe% nesporulate.
:nele dintre ele sunt ntotdeauna patogene !Dhigella i Dalmonella%, altele sunt
comensale, intr6nd n componena florei intestinale normale, dar la care se evideniaz un
potenial de patogenitate !=. coli, $roteus, Blebsiella, 9itrobacter, =nterobacter etc.%.
"cestea din urm sunt incriminate mai ales n etiolo)ia in5ec;iilor tractului di)estiv%
urinar% respirator 6i 1n in5ec;iile intraspitalice6ti. $atogenitatea intrinsec a
enterobacteriilor condiionat-patogene !determinat de un bogat echipament enzimatic, de
prezena antigenelor de nveli, a endoto5inei, enteroto5inei, prezena plasmidelor etc.% se
e5acerbeaz atunci c6nd statusul biologic al macroorganismului agresionat este modificat
n sensul receptivitii, prin deficite imune, boli medico-chirurgicale de fond, tratamente
imunosupresive etc.
Ma'oritatea enterobacteriozelor predominent digestive precum i a celor
e5tradigestive se pot complica cu bacteriemii% septicemii% 6oc endoto*inic, complicaii
severe greu de stp6nit terapeutic.
Eigura *0 Testul o5idazei - gonococ. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh
=dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Test negativ
Test pozitiv
Cl".ifi!"#e" ente#o$"!te#iilo#' !"#e " .ufe#it o .e#ie +e -o+ifi!%#i )n +e!u#.ul
"nilo#' " "*ut l" $",% -"i "le. p#op#iet%/ile $io!5i-i!e &i "nti1eni!e. 9n "!e.t
.en.' .e "+-ite )n -o-entul +e f"/% e0i.ten/" u#-%to"#elo# t#i$u#i &i 1enu#i
3t"$elul :68
Trib.$ #n.$
Esc4ric4i
a
E.!5e#i!5i"
Dhigella
E-5arsi$$
a
E+;"#.iell"
Sa$mon$$a

S"l-onell"
"rizona
9itrobacter
6$bsi$$a <le$.iell"
=nterobacter
Pro+.s P#oteu.
$rovidencia
7rsinia =e#.ini"
Er5inin E#;ini"
$ectobacterium
T"$elul :8 9n!"+#"#e" ente#o$"!te#iilo#
L" -"2o#it"te" ente#o$"!te#io,elo#' !"#e e*olue",% !" $oli infe!/io".e
"!ute' in*e.ti1"/iile +e l"$o#"to# .e "0e",% pe +i"1no.ti!ul $"!te#iolo1i!' )n ti-p
!e )n fe$#ele tifoi+e &i fe$#ele p"#"tifoi+e' $oli .i.te-i!e !u e*olu/ie p#elun1it%' .e
p#"!ti!% )n plu. &i +i"1no.ti!ul i-unolo1i! ."u .e#o+i"1no.ti!ul.
1* RECOLTAREA 3I PRELUCRAREA PRODUSELOR PATOLO#ICE
$rodusele patologice se vor preleva c6t mai aproape de debutul bolii i n funcie
de diagnosticul clinic, nainte ca pacientului s i se fi administrat antibiotice. Aecoltarea
se face corect din punct de vedere al tehnicilor utilizate, respect6nd toate normele de
asepsie i antisepsie.
De recolteaz0
- materii 5ecale !=. coli, Dhigella, Dalmonella% din scaunul emis spontan sau direct din
rect !sonda 1elaton%/ n cazul purttorilor de Dalmonella i Dhigella !elimin intermitent
germenii% se recolteaz + coproculturi, + zile succesiv, dup administrarea unui purgativ
salin. $relevatele se introduc n mediul de conservare i transport 9arr@-Clair/
- s=n)e !Dalmonella% recoltat prin puncie venoas0 pentru hemocultur i pentru
diagnostic serologic/
- urina !$roteus, =. coli, Blebsiella% recoltat prin metoda 'etului mi'lociu, dup toaleta
riguroas a organelor genitale e5terne/
- sputa !Blebsiella pneumoniae%/
- bila !Dalmonella, Blebsiella% prin tuba' duodenal cu sonda =inhorn/
- puroi !$roteus, Blebsiella% recoltat n funcie de tipul coleciei purulente0 cu ansa,
tamponul, pipeta $asteur sau puncionare i aspirare cu seringa.
*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC 7MICROBIOLOGIC8
8&2& '*amenul direct
De efectueaz 5rotiuri direct din produsele patolo)ice% colorate 0ram, cu mare
importan pentru produsele patologice normal sterile. De evideniaz bacili 0ram
ne)ativi% necapsula;i !e5cepie Blebsiella - figura 1%, mobili pe preparatele native prin
prezena cililor - figura ,%!e5cepie Blebsiella, Dhigella%, monomor5i, rareori polimorfi
!forme cocoide, filamentoase n cazul genului $roteus%.
Eigura 10 Cacili Lram negativi, capsulai, in diplo - Blebsiella. &up "tlas de
Cacteriologie0 =5amens directs par colorations usuelles. N.2. Lestin, E.U. Loldstein, N.E.
"car. 1<<+
8&8& "zolarea
De realizeaz prin nsm6narea pe medii de cultur i inocularea produselor
patologice la animalele sensibile de laborator !e5emplu. izolarea Blebsiellei pe oarecii
albi%.
9ategorii de medii de cultur utilizate0
Eigura ,0 Cacterii intestinale ciliate !http [[333. 2ab Mnde5, $hoto "tlas%
- mediu de conservare 6i transport0 me"il semisoli" Carry0?lair !thioglicolat de
sodiu, clorur de calciu, fosfat disodic% ce permite viabilitatea germenilor patogeni
apro5imativ ;-* zile/
- medii de 1mbo)7;ire !medii lichide care favorizeaz nmulirea anumitor bacterii
patogene inhib6nd selectiv dezvoltarea florei de asociaie%0 blion tetrationat ,ller0
8affmann #i blion selenit aci" "e so"i pentr Salmonella/
- medii simple0 blion& gelo'! simpl!/
- medii comple*e0 gelo'! s(nge/
- medii selective !gelo'!& bil! sa s!rri biliare& lacto'!& in"icator% )enerale !Istrate0
,eitert& <eifson& ,ac0ConHey% i speciale !<evine pentr E> coli/ Dilson0?lair pentr
Salmonella typhi%/
- medii di5eren;iale !difereniaz diferite tipuri de bacterii%0 me"il *rigalsHi, gelo'!
lacto'at! c albastr "e brom timol, care difereniaz bacteriile lactozo-pozitive de cele
lactozo-negative.
).3. Ienti%icarea
a* Carac+r - c.$+.r/
$e medii simple solide, dup incubare ,; de ore la +9, enterobacteriile
formeaz, de regul, colonii mari% rotunde% conve*e 9de tip BS@:, opace,
semitransparente sau transparente/ cele capsulate determin colonii mucoase, filante, n
pictur de miere !Blebsiella% !figura +%/ la genul $roteus apare fenomenul de invazie i
crare !figura ;%.
$e medii simple lichide0 tulbur7 intens mediile% cu 5ormarea unei pelicule fine la
suprafa !genul $roteus% sau a unei membrane groase !Blebsiella%.
$e medii simple lichide0 tulbur7 intens mediile% cu 5ormarea unei pelicule fine la
suprafa !genul $roteus% sau a unei membrane groase !Blebsiella%.
$e mediile selective coloniile au urmtoarele aspecte0
- pe mediul Lei5son0 prin fermentarea lactozei de ctre bacteriile lactozo-pozitive !=.
coli, Blebsiella, unele tulpini de 9itrobacter% se realizeaz un mediu acid care determin
vira'ul indicatorului, coloniile apar6nd de culoare roie/ bacteriile lactozo-negative
!$roteus, Dalmonella, Dhigella% sunt necolorate, cu centru negru pentru Dalmonella i
$roteus/
Eigura +0 9olonii mucoase, filante, n pictur de miere - Blebsiella pneumoniae. &up0 Dchneiersoncs
"tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura ;0 $roteus - fenomenul de invazie. &up0 " 9olour "tlas of
Microbiolog@, A.N. )lds 1<.,1<8*
- pe mediul "strate3#eitert0 colonii de tip HDK, galbene la germenii lactozo-pozitivi !=.
coli, Blebsiella% sau, la germenii lactozo-negativi, n culoarea mediului !$roteus,
Dalmonella, Dhigella%, opace !=. coli, Blebsiella, $roteus%, semitransparente i albstrui
!Dalmonalla%, transparente i verzui !Dhigella%/
- pe mediul #ac Conke coloniile lactozo-pozitive sunt roii, iar cele lactozo-negative
necolorate/
- pe mediul Levine0 coloniile lactozo-pozitive sunt negre cu luciu metalic, cele lactozo-
negative sunt necolorate/
- pe mediul Tilson3-lair coloniile de Dalmonalla sunt negre cu luciu metalic/
Dalmonella t@phi produce i colonii verzi, mici, fr halou. 9elelalte bacterii din aceast
familie se dezvolt greu pe acest mediu, d6nd colonii brune/
- pe mediile di5eren;iale !geloz lactozat cu albastru de brom timol%, coloniile lactozo-
pozitive sunt galbene, cele lactozo-negative sunt verzui.
b* Carac+r mor8o$ogic
$entru testarea mobilitii se efectueaz fie un preparat proasp!t %ntre lam! #i
lamel!, fie se urmrete mobilitatea %n rma %ns!m(n!rii pe gelo'! semisoli"! 9meto"a
tbli %n P: sau se utilizeaz me"il politrop ,IP !figurile ., *, 18 i 11%.
Erotiul colorat Lram evideniaz bacili 0ram ne)ativi, nesporula;i% necapsula;i
!e5cepie Blebsiella% !figura %.
Eigura .0 Mediul MM: - testarea mobilitii.
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<.,1<8*
Eigura *0 Mediul MM: - testarea mobilitii. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Mobilitate prezent
:reaz pozitiv
Mobilitate absent
:reaz negativ
$roducere de
S
,
D
Eigura 0 Cacili Lram negativi - frotiu cultur. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
#. Cara#$&r& ,&$a%oli#& 7%io#+i,i#&8
&intre testele biochimice care permit ncadrarea n familie, trebuie menionate0
- "egra"area o-i"ativ! #i fermentativ! a glco'ei !figura 8%/
- re"cerea nitrailor %n nitrii/
- lipsa citocromo-i"a'ei.
7n continuare, diferenierea triburilor i a unor genuri i specii se realizeaz prin
alte reacii biochimice cum ar fi0
- testl in"ol !figura <%/
- reacia la ro# "e metil/
- reacia Joges0ProsHaer/
- tili'area citratli ca nic! srs! "e carbon #i energie !figura 1,%/
- pro"cerea "e hi"rogen slfrat !figurile 18 i 11%/
- pro"cerea rea'ei/
- pro"cerea li'in"ecarbo-ila'ei& fenilalanin"e'amina'ei etc.
Pr'ucerea e in'l
Triptofanul din mediul de cultur este transformat !prin dezaminare% n acid indol-
carbonic i apoi n indol !figura <%.
Tehnic!0 cultura de cercetat este trecut n ap peptonat cu incubare ,; de ore la
+9/ apariia indolului se evideniaz cu a'utorul reactivului =hrlich, care se adaug
peste cultur. "pariia unui inel ro6u3rubiniu la supra5a;a mediului indic prezena
indolului.
De mai poate utiliza pentru demonstrarea prezenei indolului i mediul MM:.
Aeacia pozitiv este apreciat pe baza colorrii n rou a h6rtiei indicatoare ataate la dop
!mbibat n prealabil n reactiv =hrlich%.
=5emple de bacterii indol pozitive0 =. coli, biotipuri de $roteus, biotipuri de
Dhigella.
7n tabelul , sunt prezentate principalele caractere de difereniere ale genurilor mai
importante.
T&s$ul Es#+&ri#+i
a
Si9&lla Sal,on&ll
a
Jl&%si&ll
a
2ro$&us
In(ol R variabil - variabil R
Rou1,&$il R R R - R
"o9&s 2ros.au&r - - - R -
U$ili'ar&a #i$ra$ului - - R R variabil
>i(ro9&n sulfura$ - - R - variabil
Li'in (&#ar%o6ila'4 variabil - R R -
F&nil
alanin(&'a,ina'4
- - - - R
Eermentarea glucozei, cu
producere de gaz colectat n
tubuor &urham
2ipsa fermentrii
glucozei
Eigura 80 &egradarea o5idativ i fermentativ a glucozei
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<.,1<8*
Ur&a'4 - - - R R
Tabelul ,0 Teste biochimice difereniale ale principalelor genuri
) categorie important de medii sunt cele politrope !testeaz mai multe caractere
biochimice pe acelai tub%0
- TDM !trei zaharuri cu fier% !figurile 18 i 11%/
- MM: !mobilitate, producerea de indol, ureaz%.
Aeacie negativ
Aeacie pozitiv
Eigura <0 $roducerea de indol. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds
1<.,1<8*
Mediu
control
:rmrind identificarea bacteriilor pe baza proprietilor metabolice i ncadrarea
lor n gen, specie i biotip, se mai folosesc i alte medii de diagnostic biochimic0
- pentru urm7rirea spectrului 5ermentativ al zaharurilor se folosete apa peptonat!
c a"as "e "iverse 'aharri #i n in"icator "e cloare !rou fenol sau albastru de brom
timol% !figura 1,%/
Eigura 180 Gariante ale mediului TDM. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition,
=d3ard N. Cottone 1<<
Mediu
nensm6nat
Blebsiella
=. coli
9itrobacter
Eigura 110 Gariante ale mediului TDM. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition,
=d3ard N. Cottone 1<<
$roteus-specii
Dalmonalla t@phi
Dhigella-specii
Dhigella
fle5neri
Dalmonalla
t@phi
Dpecii $roteus,
Dalmonella
- mediul Clark3Lubs pentru evi"enierea reaciei la ro#0metil #i pentr rm!rirea
reaciei Joges0ProsHaer/
- mediul cu citrat 3 Simmons i mediul malonat pentru evidenierea surselor de carbon
i azot folosite de enterobacterii !figura 1+%/
Eigura 1,0 Dpectrul fermentativ al zaharurilor !http [[333. 2ab Mnde5, $hoto "tlas%
Eigura 1+0 Dpectrul fermentativ al zaharurilor !http [[333. 2ab Mnde5, $hoto "tlas%
- pentru demonstrarea prezen;ei unor enzime cu ac;iune asupra unor aminoacizi, cum
ar fi fenilalanin"e'amina'a !figura 1;%& sa li'in"ecarbo-ila'a, se folosete mediul
gelozat care include pe r6nd aminoacidul respectiv
(. Cara#$&r& an$i9&ni#& 7i(&n$ifi#ar&a s&rolo9i#48
$roprietile antigenice servesc pentru caracterizarea genurilor i, n special, a
speciilor din cadrul acestora i serotipurilor circulante ntr-o anumit perioad de timp
ntr-o colectivitate, in6nd cont de e5istana antigenelor somatice !)%, de nveli !B i Gi%
i flagelare !S%.
Mdentificarea serologic a reprezentanilor familiei =nterobacteriaceae se
realizeaz prin reac;ii anti)en3anticorp, n care elementl necnosct este antigenl
!antigenele bacteriei izolate% i elementl cnosct este repre'entat "e anticorpii specifici
"intr0n ser imn stan"ar" !obinut prin inocularea unui animal de laborator%.
7n acest scop se folosesc dou reacii0 reacia de aglutinare pe lam i n tuburi
!pentru Dalmonella, Dhigella, =. coli enteropatogen% i reacia de umflare a capsulei
!pentru Blebsiella%.
Reac2ia e a"lutinare $e la!& .e f"!e "-e.te!(n+ + !ic'tur' -i% s#rul
sta%-ar- !u + sus!#%si# -# )#r$#%i p#o*enin+ +in !ultu#" pu#% " 1e#-enului +e
pe -e+iu ne.ele!ti*. Se u#-%#e&te "p"#i/i" 1#un2ilo# +e "1lutin"#e !"#e "p"#
nu-"i )n !",ul !o#e.pon+en/ei i-une +int#e "nti1en &i "nti!o#p' i+entifi!(n+ !u
!e#titu+ine $"!te#i" i,ol"t%. 9n !",ul )n !"#e nu e0i.t% !o#e.pon+en/% i-un% +int#e
!ei +oi #e"!t"n/i i-uni li!5i+ul #%-(ne l"!te.!ent 3fi1u#" :>6.
Eigura 1;0 &ecarbo5ilarea fenilalaninei. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@,
A.N. )lds 1<.,1<8*
$oate e5ista i o corelaie ntre diferitele serotipuri de enterobacterii i
patogenitate. :n e5emplu este nt6lnit la =. coli. "stfel, n infeciile urinare s-au izolat
serotipurile );, ), )., n diareea malign a noului-nscut serotipurile )..C., )1,*C*.
&intre tulpinile enteropatogene !=$=9% s-a evideniat )1.S iar dintre tulpinile
enterohemoragice !=S=9% s-a identificat ),*S11, )11<S,.
$entru identificarea tulpinilor patogene infantile de =. coli se practic i tehnica
imuno5luorescen;ei directe. De efectueaz frotiuri din materiile fecale, care se acoper cu
seruri fluorescente anti =. coli polivalent i monovalente. &up incubarea necasar se
citesc n lumin ultraviolet. 7n cazul corespondenei imune vor apare aglutinate
fluorescente.
&. Cara#$&r& (& /a$o9&ni$a$&
"ceast identificare se practic n cazul reprezentanilor )enului !lebsiella 6i
Shi)ella prin studiul patogenitii in vivo, n urma inoculrii cu prelevat din cultura
suspect la oarecele alb n primul caz i prin inoculare intracon'unctival la iepure sau
cobai, n al doilea caz !testul Derenn@%.
#oarecele alb inoculat subcutanat cu un filtrat de cultur de Blebsiella moare cu
septicemie n 18-,; ore. De izoleaz Blebsiella din s6ngele din cordul animalului prin
tehnica hemoculturii.
Testul Derenn@ se recomand pentru diagnosticul complementar al tulpinilor de
Dhigella izolate recent. Tehnica const n introducerea unei anse de cultur !obinut pe
mediu simplu% sub pleoapa unui iepure sau cobai. &up 1, ore n cazul n care germenii
sunt din genul Dhigella apare o congestie con'unctival, o secreie mucopurulent
abundent urmat de opacifierea corneei i se instaleaz 4eratocon'unctivita.
f. S&nsi%ili$a$&a la %a#$&riofa9ii li$i#i 7li'o$i/ia8
2izotiparea tulpinilor aparin6nd aceleiai specii se efectueaz pentru a elucida
problemele legate de stabilirea sursei de in5ec;ie% a c7ilor de transmitere 6i 5ilia;iei
cazurilor 1n enterobacteriozele epidemice !Dalmonella%.
Eigura 1.0 Aeacia de aglutinare pe lam. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh
=dition, =d3ard N. Cottone 1<<
8&P& Antibio)rama
&atorit comportamentului variat fa de chimioterapice a enterobacteriilor, se
impune efectuarea obligatorie a antibiogramei.
A. DIAGNOSTIC SEROLOGIC
7n aceast etap se evideniaz anticorpii aprui n serul bolnavilor, ca urmare a
infeciei sau eventual a vaccinrii.
"re la baz reac;ii anti)en3anticorp de a)lutinare n care elementl necnosct
este repre'entat "e anticorpii "in serl "e bolbav, iar elementl cnosct "e antigenele
stan"ar" !reacia Uidal n salmonelozele ma'ore%.
=videnierea anticorpilor i mai ales creterea titrului la dublu ntre dou recoltri
de ser are valoare de diagnostic de boal, dar poate depista i purttorii de germeni, ca i
trecerea prin infecii inaparente.
4 i,/or$an54.
DIAGNO(TICUL DE LABORATOR AL IN*ECIILOR PRODU(E
DE BACILUL 3OC4
Cacilul Boch !M@cobacterium tuberculosis% este a)entul etiolo)ic al
tuberculozei, boal7 cu evolu;ie cronic7. "gentul patogen face parte din 9&nul
M-#o%a#$&riu,, alturi de bacilul leprei !M@cobacterium leprae%. Cacilul tuberculos se
prezint sub trei variante0 varianta hominis #i bovis !agenii tuberculozei mamiferelor% i
varianta avim !agentul tuberculozei psrilor%. Eorme clinice de tuberculoz sunt0
Eigura 1*0 2izotipia. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds
1<., 1<8*
pulmonar i e5trapulmonar !renal, intestinal, osteo-articular, genital, a seroaselor,
meningeal%.
&iagnosticul de laborator este bacteriologic !izolarea i identificarea germenului/
efectuarea antibiogramei%.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
De face n funcie de localizarea tuberculozei0 spt!& rin!& pro"s "e pncie
articlar!& proi& pro"s "e racla$ terin& secreie "e col& pro"s "e pncie ganglionar!&
lichi" pleral #i peritoneal& <CR.
e Sputa se recolteaz prin emisie spontan, dac bolnavul e tuitor sau prin spltur
bronic.
e $entru tuberculoza renal, urina se recolteaz dimineaa, n recipiente sterile. 9u o zi
nainte de recoltare, bolnavul va reduce pe c6t posibil cantitatea de lichide ingerate,
pentru a reduce volumul de urin acumulat n cursul nopii.
e 2a femei, n caz de tuberculoz genital, se recolteaz s=n)e menstrual% secre;ii ale
colului uterin% sau produs de chiureta< uterin. 2a toate aceste produse e obligatoriu
adugarea de ap distilat pentru distugerea hematiilor i obinerea unui sediment fr
hematii prin centrifugare.
e Lichidul ce5alorahidian% lichidul pleural% lichidul peritoneal% lichidul sinovial se
recolteaz prin punciile acestor caviti, respect6nd regulile generale de asepsie.
*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
8&2& '*amenul direct
$rezint o etap esenial n diagnosticul de laborator al tuberculozei i const n
efectuarea de 5rotiuri direct din produsul patolo)ic. $rodusele patologice !n special
sputa% sunt supuse n prealabil omogeni'!rii prin tratare cu hidro5id de sodiu i agitare
!fluidificarea produsului i repartizarea uniform a bacililor% i concentr!rii bacililor n
stratul superior cu 5ilol i ap distilat.
De efectueaz0
3 Bscreenin)ul@ prin 5luorescen;7 cu auramin i rodamin i e5aminare n ultraviolet
!puncte strlucitoare pe fondul pal-verzui al c6mpului, n caz de prezen a bacililor
Boch%. $robele pozitive trebuie controlate prin coloraia Piehl-1eelsen/
3 baciloscopie direct7 prin colora;ia /iehl3Neelsen permite diagnosticul de certitudine0
bacili ro#ii& "isp#i %n cor"oane& celelalte elemente !flor de asociaie, polimorfonucleare,
celule epiteliale ntregi sau detritusuri% albastre !figurile 1 i ,%.
8&8& "zolare0
De face0
e in vitro pe ,&(iul LoY&ns$&in1R&ns&n !bogat n substane nutritive i conin6nd
verde-malahit ca inhibitor al florei de asociaie% !figura +% cu incubare la +9 timp de ,
luni/
e in vivo0 se utilizeaz #o%ai ,as#uli de ;88 g, se inoculeaz subcutanat, pe faa
intern a coapsei 1-, ml produs patologic.
Eigura 10 Erotiu colorat Piehl-1eelsen din produs patologic !sursa0 http [[333. 2ab
Mnde5, $hoto "tlas Aeference0 p. 2ab Te5t Aef0 =5. ,-.%
Eigura ,0 Erotiu colorat Piehl-1eelsen din produs patologic !sursa0 http [[333. 2ab
Mnde5, $hoto "tlas Aeference0 p. 2ab Te5t Aef0 =5. ,-.%
8&>& "denti5icare
e Cara#$&r& #ul$ur40
$e mediul 2o3enstein0 colonii BR@ !margini neregulate, suprafaa mamelonat%,
Bconopidi5orme@% uscate% alb3)7lbui/ cele de tip uman cresc dup 1; zile, cele de tip
bovin dup +8 de zile, cele atipice cresc n primele zile i sunt colorate !figurile ;, ., * i
%.
e Cara#$&r& ,orfolo9i#&0
Erotiul din cultur !colorat Piehl-1eelsen% evideniaz bacili acido3alcoolo3
rezisten;i% ro6ii% uneori dispu6i 1n cordoane prin bo)7;ia de 5actor Bcord@ !factor de
patogenitate%, alturi de celule epiteliale, leucocite, flor de asociaie, colorate n albastru
!figura 8%.
e Cara#$&r& %io#+i,i#&0
3 Testul catalazei difereniaz m@cobacteriile atipice la care reacia este pozitiv de
bacill 8och, unde reacia este negativ!. De acoper coloniile obinute pe suprafaa
mediilor solide cu soluie de pirocathelor, perhidrol i ap distilat. &up ,-. minute se
face citirea reaciei. Aeacia este pozitiv dac se observ apariia bulelor de gaz.
Eigura +0 Mediul 2o3enstein Nensen !sursa0 http [[333. 2ab Mnde5, $hoto "tlas
Aeference0 p. 2ab Te5t%
Eigura ;0 9olonii de bacil Boch pe mediul 2o3enstein Nensen. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@,
A.N. )lds 1<., 1<8*
3 Testul la niacin 9!onno: este utilizat pentru punerea n eviden a niacinei. =ste o
metod colorimetric i const n punerea n contact a unei culturi de bacili vii cu o
soluie compus din0 anilin ;F !1ml%, alcool <*F !1 ml%, bromur de cianogen 18F
!1ml%. 7n cazul n care tulpina produce niacin apare o coloraie galben. =ste pozitiv la M.
tuberculosis !figura <%.
Eigura *0 9olonii de bacil Boch pe mediul 2o3enstein Nensen
!http0[[ 3anadoo.com[images.htm%
Eigura ;0 9olonii de bacil Boch pe mediul 2o3enstein Nensen. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura 0 9olonii de bacil Boch pe mediul 2o3enstein Nensen
!http0[[ 3anadoo.com[images.htm%
Eigura 80 &ispunerea bacililor Boch n cordoane. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura <0 Testul la niacin. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ -
Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Test negativ0
M. atipice
Test pozitiv0
M. tuberculosis
&iferenierea ntre M. tuberculosis i M. bovis se mai poate face i dup una din
condiiile de cultivare0 necesarul de o5igen !figura 18%.
e Cara#$&r& (& /a$o9&ni$a$&
"nimalul de elecie pentru reproducerea e5perimental a infeciei tuberculoase e
cobaiul, care se inoclea'! sbctanat pe faa intern! a coapsei, iar evoluia bolii se face
timp de ,-* luni, dup care cobaiul slbete i moare. &up 18-1. zile, de sntate
aparent deplin, cobaiul devine apatic, pofta de m6ncare scade, iar la locul inoculrii apar
modificri, n sensul c reginea se %mp!stea'!& apoi "evine flctent!, iar la nivelul
plicii inghinale se palpeaz un ganglion, care crete i se ramolete, abced6nd. 2a scurt
timp sunt prini ganglionii regionali. 2a autopsie se poate observa inva"area %ntregli
sistem limfatic #i a viscerelor.
8&P& Antibio)rama
De efectueaz prin includerea antibioticului, n diferite concentraii, n mediul
2o3enstein-Nensen. Se %ns!m(nea'! %n paralel pro"sl patologic pe me"i c& #i&
respectiv& f!r! antibiotic #i se compar! re'ltatele& "p! 304 s!pt!m(ni "e incbare.
9himioterapicele la care bacilul tuberculos este sensibil sunt0 rifampicina&
sterptomicina& 7I+& PAS& etambtol.
A. DIAGNOSTICUL IMUNOBIOLOGIC
$rezena imunitii celulare, principala modalitate de aprare specific
antituberculoas, se testeaz prin "(R la tuberculin7. )rganismele infectate cu bacili
tuberculoi reacioneaz diferit fa de tuberculin, comparativ cu cele indemne.
Mntradermoreacia la tuberculin testeaz7 r7spunsul imun celular 9hipersensibilitate
1nt=rziat7:, 5a;7 de tuberculin7. De in'ecteaz pe faa anterioar a antebraului 8,, ml
tuberculin, dintr-o diluie de 1[18.888. Aeacia se citete dup , de ore de la in'ectare,
Eigura 180 &iferenierea ntre M. tuberculosis i M. bovis dup una din condiiile de cultivare0 necesarul de o5igen.
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
M. tuberculosis - strict
aerob0 creterea numai la
M. bovis - microaerofil0
creterea p6n la 1,. cm de la
c6nd la locul inoculrii apare un eritem i un edem cu diametru diferit, n funcie de
gradul de rspuns imun fa de tuberculin.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECGIILOR 2RODUSE
DE
GERMENI AEROBI S2ORULAGI )I ANAEROBI
A. GERMENI AEROBI S2ORULAGIF GENUL BACILLUS
"cest gen cuprinde bacili mari, p6n la 18 , drepi cu capete retezate, Lram
pozitivi, capsulai, imobili, cu spor central, care nu deformeaz corpul bacterian, aerobi,
facultativ anaerobi, cu apro5imativ ;8 de specii, patogene pentru om fiind urmtoarele0
a B. an$+ra#is care determin boala numit antra* sau in5ec;ie c7rbunoas7/
a B. #&r&us: B. su%$ilis care pot cauza uneori infecii umane.
Aestul speciilor sunt saprofite, gsindu-se n mediul e5tern, pe tegumente i la
nivelul colonului.
BACILUL ANTRAXULUI 7BACILLUS ANT>RACIS8
Lermenii sunt rsp6ndii n sol, fiind )ermeni 5oarte rezisten;i 1n mediul e*terior/
pe sol se gsesc sub form de spori care pot fi ingerai n timpul punatului de ctre
animale ierbivore !boala este astfel o zoonoz%/ n organismul animalului sporul se
transform n 5orm7 ve)etativ7 care traversez mucoasa lezat a tubului digestiv i trece
n torentul circulator d6nd o boal7 septicemic7, cu mortalitate foarte ridicat, cu
consecine economice grave. )mul poate interveni n lanul epidemiologic al germenului
prin consum de carne de animal infectat sau prin contact direct cu animalele bolnave sau
pe cale respiratorie.
La o, Cacillus anthracis determin inf&#5ia #4r%unoas4 ce poate fi, n funcie de
calea de ptrundere, #u$ana$4: r&s/ira$ori&: (i9&s$iv4.
C4r%un&l& #u$ana$, manifestarea cea mai frecvent, este reprezentat de pustula
mali)n7, localizat mai ales pe fa!& g(t sa membre. 2a locul de inoculare apare o
vezicul cu lichid sero-sanguinolent, care se ulcereaz i se usuc, dnd natere unei
cruste ne)re 9c7rbune:.
Aegiunea sub'acent leziunii prezint un edemul alb, nedureros, gelatinos.
&ac tabloul clinic este dominat de un edem e5tins, febr, stare general to5ic se
vorbete despre edem mali)n: care reprezint o form! grav! a c!rbneli ctanat>
C4r%un&l& /ul,onar se manifest printr-o pneumonie sau bronhopneumonie
hemora)ic7 sever, cu spt! hemoptoic!& %nsoit! "e stare septicemic!, ce poate duce la
deces. $rognosticul este foarte grav.
C4r%un&l& (i9&s$iv se manifest sub form de enterocolit7 acut7, cu scaune cu
s6nge, febr, stare to5ic, colaps, deces.
M&nin9o&n#&fali$a #4r%unoas4 este o form rar, fiind aproape totdeauna mortal.
&iagnosticul de laborator vizeaz izolarea germenului i reproducerea bolii la
animal i implic urmtoarele etape0
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
De face n funcie de afeciunea clinic/ pentru ma'oritatea produselor patologice
se face 1nl7turarea 5lorei sapro5ite prin inactivare F4 de min la >4C, etap ce permite
numai supravie;uirea 5ormelor sporulate care, n condiii optime de mediu, vor duce la
dezvoltarea formelor vegetative. "ceste produse patologice pot fi0
- sero'itatea "in ve'icl! sa pstl!& lichi"l "e e"emR
- s(ngeR
- <CR0 nsm6nare direct pe medii de cultur/
- spt!R
- materii fecale& pro"s "e v!rs!tr!& alimenteR
- material necroptic pentru diagnostic retrospectiv !fragmente de splin, ficat,
piele%.
*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
8&2 '*amenul direct
De fac frotiuri care se coloreaz cu albastru de metilen sau dup metoda 0ram.
$e frotiul colorat Lram se evideniaz bacili 6ram po'itivi& c capetele t!iate
"rept& i'olai sa %n lanri scrte de ,-+ indivizi, cu aspect de Btrestie de bambus@ sau
Bva)oane de tren@, imobili& capslai, alturi de "etritsri cellare& lecocite #i flor! "e
asociaie re"s!.
Erotiul efectuat din leziunile vechi evideniaz bacili necapslai c spor central
sa sbterminal, cu diametrul sporului mai mic dec6t diametrul formei vegetative.
De acoper cu ser imun 5luorescent anticapsular 9reac;ie de imuo5luorescen;7:
pentru detectarea rapid a bacteriei crbunoase.
$entru punerea n eviden;7 a capsulei se pot folosi #olora5ii s/&#ial&0
- coloraia c t# "e China/
- coloraia 7iss !bacilul crbunos apare cu corpul rou i capsula roz%/
- coloraia c albastr "e metilen %nvechit sa albastr "e toli"in! !n care
corpul bacilului este albastru, iar capsula roz%/
7n #olora5iil& o%inui$&, deoarece capsula are o afinitate slab fa de colorani, ea
apare ca un halo incolor n 'urul celulei bacteriene.
$entru eviden;ierea sporului se pot folosi #olora5ii s/&#ial&: e5. coloraia ,Uller, n
care sporul se coloreaz n rou.
7n #olora5iil& u'ual& sporii nu se coloreaz, ci apar sub forma unei vacole
ovalare n corpul colorat al formei vegetative.
8&8& "zolarea )ermenului
$entru izolarea germenului se pot folosi medii simple !blion simpl& gelo'!0
simpl!& gelo'!0s(nge% sau mediu cu carto5 sau medii sintetice cu tiamin7>
Cacilul anthracis nu este e5igent, cresc6nd bine pe medii simple, n condiii de
aerobioz, la temperatura de +.
8
9 i pS ntre ,,-,;.
$rodusele care conin flor de asociaie se nsm6neaz n bulion, se incubeaz
,; de ore la +
8
9, apoi se nclzete cultura la 8
8
9 timp de ,8-+8 de minute, pentru a
distruge germenii nesporulai , dup care se fac treceri pe geloz simpl sau geloz-
s6nge.
8&>& "denti5icarea
a. Cara#$&r&lor (& #ul$ur4
a 7n bulion simplu0 Cacillus anthracis determin un "epo'it floconos, me"il r!m(n(n"
limpe"e/ tulpinile de tip D tulbur uniform mediul.
a $e )eloz7 simpl70 determin #olonii (& $i/ TR=F #olonii ,ari: (& *1D ,,: al%&1
#&nuii: #u su/rafa54 ru9oas4: #u ,ar9ini n&r&9ula$& datorit prelungirilor laterale
similare uvielor de pr, care confer coloniilor un aspect caracteristic de T#a/ (&
,&(u'4< !figura1%.
a $e )eloz7 s=n)e0 aspectul coloniilor este identic cu cel de pe geloz simpl/ bacilul
antra5ului n pro"ce hemoli'! sau la unele tulpini, dup ,; de ore poate s apar o
zon discret de hemoliz b !figurile , i +%.
a $e )eloz7 dreapt7, nsm6nat prin nepare, se dezvolt sub forma unui T%ra(
inv&rsa$<.
a $e mediu cu carto5 se dezvolt repede i abundent, form6nd un strat alb0cen#i&
mat.
a $e medii sintetice cu tiamin7, formeaz colonii mici, dup ,; de ore.
%. Cara#$&r&lor ,orfolo9i#&
$e frotiul din cultur colorat Lram se evideniaz bacili 6ram po'itivi& c
capetele t!iate "rept& i'olai sa %n lanri scrte sub form de trestie "e bambs;, cu
un halo incolor %n $rl cellei bacteriene !capsula% i cu o vacol! ovalar! central!& %n
corpl colorat al formei vegetative !sporul% !figurile ; i .%.
Eigura 10 9olonii de C. anthracis la microscop, 5 ,8.
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
Eigura ,0 9olonii de tip A - Cacillus anthracis.
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
Eigura +0 9olonii de Cacillus anthracis nehemolitice pe geloz s6nge.
&up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition,
=d3ard N. Cottone 1<<
Eigura ;0 Erotiu din cultur colorat Lram - Cacillus anthracis
!http0[[333. microbesdedu.org.[diagn.antra5%
#. Cara#$&r& %io#+i,i#&
Cacillus anthracis pro"ce catala'!& fermentea'! f!r! ga' glco'a& malto'a&
frctoza/ este ree negativeR n pro"ce in"ol& re"ce nitraii %n nitrii, reacia Joges0
ProsHaer este po'itiv!& citrat po'itiv& lichefia'! gelatina& hi"roli'ea'! ca'eina& pro"ce
lecitina'!& re"ce albastrl "e metilen "in lapte.
(. Cara#$&r& (& /a$o9&ni$a$&
Inoclarea sbctanat! la cobai sa #oarecii de laborator genereaz, dup ,;-,
ore, o septicemie mortal7. 2a e5amenul necroptic se evideniaz la locul inoculrii un
edem gelatinos, saiguinolent, viscerele sunt congestionate, s6ngele este de culoare nchis
i se coaguleaz tardiv, splina este mrit, foarte friabil i de un rou nchis. 7n lichidul
de edem, dar mai ales n s6nge, n organele toracice i abdominale, se gsesc numeroi
bacili ncapsulai.
&. Cara#$&r& an$i9&ni#&
De studiaz prin reac;ia de precipitare 1n inel 9termoreac;ia Ascoli: cu importan
n (ia9nos$i#ul r&$ros/&#$iv al an$ra6ului. "ntigenul este reprezentat de substana $
capsular de natur polipeptidic i fraciunea somatic polizaharidic, preparat din
fragmente de organ ale animalului suspect !splin, ficat% sub forma unui filtrat. Derul
imun standard anticrbunos se prepar pe cal.
Principi0 serl antic!rbnos formea'! n precipitat specific %n contact c
e-tractele "e organe provenite "e la ca"avre c infecie c!rbnoas!.
Tehnic!0 7ntr-un tub de precipitare se pun 8,.-8,* ml filtrat, iar cu o pipet $asteur
se ntroduce ncet n fundul tubului aceeai cantitate de ser anticrbunos, av6nd gri' s
nu se amestece. &ac n decurs de .-18 min, la linia de contact a celor dou lichide se
formeaz un inel albicios "e precipitare& reacia este po'itiv!.
Eigura .0 Erotiu din cultur colorat Lram 0 Cacillus anthracis
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
8&P& Antibio)rama
Cacillus anthracis este sensibil la antibiotice i sulfamide, de tipul0 penicilin!&
tetraciclin!& eritromicin!& cloramfenicol> "ceste antibiotice se asociaz terapiei cu ser
antic!rbnos.
B. GERMENI ANAEROBI
G&r,&nii ana&ro%i sunt microorganisme al cror metabolism este incompatibil
cu prezen;a o*i)enului atmos5eric.
Lermenii anaerobi patogeni pentru om se mpart n dou categorii0 5lor7 teluric7
!anaerobi sporula;i% i 5lor7 endo)en7 !anaerobi nesporula;i%.
Mncidena real a implicrii germenilor anaerobi n patologia uman nu este pe
deplin cunoscut, deoarece, n condiiile unei recoltri i prelucrri incorecte a produsului
patologic n care sunt prezeni anaerobii, acetia nu vor fi izolai i identificai, iar
produsul poate fi etichetat HsterilV.
7n patologia uman mai frecvent ncriminai sunt ana&ro%ii n&s/orula5i, care
reprezint flora fundamental a cavitilor naturale i a nveliurilor cutanate sau
mucoase.
"ceti germeni pot determina0 abces cerebral& sin'it! cronic!& infecii ale
reginii g(tli& infecii %n sfera bco0ma-ilo0facial!& pnemonie "e aspiraie& abces
plmonar& bron#iecta'ie& empiem nechirrgical& abces hepatic& infecii post0chirrgicale
ab"ominale& "iverse infecii %n obstetric!0ginecologie& abces pelvian& abces vlvo0
vaginal& abcese ale estrilor moi& abcese ctanate.
G&r,&nii ana&ro%i s/orula5i sunt reunii n genul Clos$ri(iu,/ sunt larg
r!sp(n"ii %n sol, dar pot fi prezeni i n colonl omli #i animalelor. "ceti germeni
determin boli foarte bine individualizate clinic, i anume0
a Clostri"im tetani0 tetanosul/
a Clostri"im perfringens, n asociere cu Clostri"im novy sau Clostri"im
septicm0 )an)rena )azoas7/
a Clostri"im botlinm0 botulismul/
a Clostri"im "ifficile0 enterocolita postantibiotic7.
9el mai frecvent nt6lnit n patologia uman dintre aceti anaerobi sporulai este
9lostridium perfringens.
Eactori favorizani ai unei infecii anaerobe0 infecii aerobe, diabet zaharat,
alcoolism, boal neoplazic, operaii, angiopatie, terapie corticosteroid, terapie
imunosupresiv, terapie aminoglicozidic !la care anaerobii sunt rezisteni%.
$articularitatea diagnosticului de laborator n infeciile determinate de anaerobi
este dat de faptul c, obligatoriu, produsele patologice n care se suspicioneaz prezena
acestor germeni trebuie nsm6nate n #on(i5ii (& ana&ro%io'4.
MiPloa#& (& r&ali'ar& al& ana&ro%io'&i sunt0 fi'ice& chimice #i biologice.
M&$o(& fi'i#&0
e regenerarea me"iilor "e cltr! lichi"e prin fierbere +8 min i rcire brusc/
e reali'area ni vi" c a$torl pompei "e vi" ataat la un e5icator ce conine
recipientele cu mediile nsm6nate/
e evacarea aerli "in me"i, urmat de insuflarea unui amestec de gaz dezo5igenat
!1, sau S, n proporie de <8-<.F i 9), .-18.%.
M&$o(& #+i,i#&
"u la baz absorbia o5igenului din mediu cu substane reductoare0
e tili'area ni re"c!tor chimic care se intro"ce %n me"il "e cltr!. =50 acid
tioglicolic sau tioglicolat de sodiu, iar mediile n care sunt introduce sunt mediul M sau
mediul GE/
e tili'area re"c!torli %n afara me"ili "e cltr!& %ntr0n spai %nchis.
=5.0 pirogalolul, livrat de Mnstitul 9antacuzino, care se pune ntr-un plicule din
h6rtie de filtru i se fi5eaz pe e5teriorul capacului cutiei $etri, capac care se fi5eaz cu
pliculeul spre interior, spre mediu.
$entru mediile lichide se pot introduce substane reductoare0 glucoza, cisteina,
acidul thioglicolic.
M&$o(& %iolo9i#&
e se nsm6neaz pe aceeai plac microorganismul anaerob n vecintatea unuia
puternic aerob !C. prodigiosus, C. subtilis%/
e introducerea n mediul de cultur lichid a fragmentelor de esuturi de la animale de
laborator !ficat, rinichi, creier, carne tocat i pr'it%
"naerobioza poate fi realizat i prin procedee combinate din cele de mai sus.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
a materii fecale, eantion din aliment conservat, produs de vrstur0 9. botulinum/
a produs de la nivelul plgii nepate, tiate care a venit n contact cu solul n care ar
putea e5ista sporii de bacil tetanic/
a fragmente de organe de cadavru0 9. tetani, 9. perfringens/
a materii fecale, secreii din sfera puerperal, produse de puncie a diverselor colecii ce
evolueaz cu mionecroz, secreii din plagi accidentale sau postoperatorii0 9.
perfringens/
a materii fecale0 9. difficile/
a s6nge pentru hemocultur0 infecii septicemice/
a sput sau alte secreii ale tractului respirator/
a secreii din sfera genital/
a produs de puncie aspiratoare !abces cutanat sau ale prilor moi, abces vulvo-
vaginal% sau recoltat ntraoperator n caz de abcese !cerebral, rectal, scrotal, pelvian%/
a lichid peritoneal/
a produs de puncie sinusal/
a produse patologice din sfera stomatologic.
Aecoltarea produselor patologice trebuie s se fac cu respectarea normelor "e
asepsie i antisepsie, cu evitarea contaminrii accidentale n cursul recoltrii.
$entru produsele patologice lichide se recomand aspirarea ntr-o sering din care
se evacueaz aerul i apoi acul se nfige ntr-un dop de cauciuc.
7nsm6narea produselor patologice trebuie s se fac n 1-, ore de la recoltare. 7n
caz contrar germenii pot muri n contact cu o5igenul atmosferic.
$entru produsele recoltate pe tampoane se recomand utilizarea me"ili "e
transport Carry0?lair, n care se cufund tamponul dup recoltare.
*.DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
8&2& '*amenul direct
=5aminarea direct, macroscopic i microscopic, a prelevatului patologic ofer
informaii imediate, orientative, asupra prezenei bacteriilor anaerobe. "ceste informaii
sunt utile pentru decizia terapeutic iniial, n ateptarea rezultatelor de laborator.
Ma#ros#o/i#, suspiciunea infeciei cu bacterii anaerobe este sugerat de0
- miros fetid !datorat produilor finali de metabolism%/
- fragmente de esut necrotic ori scurgeri de culoare neagr !determinate de bacili Lram
negativi pigmentogeni anaerobi%/
- prezena de puroi i s6nge n plag.
Mi#ros#o/ia (ir&#$4 a produsului patologic se realizeaz pe 5rotiu colorat 0ram
care evideniaz microorganismul sau microorganismele implicare, numrul lor, prezena
sau absena celulelor inflamatorii.
Ana&ro%ii s/orula5i
"par ca bacili 6ram po'itivi gro#i& "e lngimi variate& c capete rotn$ite sa
t!iate "rept c spori ovalari sa sferici& sbterminali& centrali sa terminali& c
"iametrl mai mare& mai mic sa egal c corpl bacterian.
-acilul tetanic0 bacil alungit, cu capete nerotun'ite, cu spor terminal cu un diametru
ce depete diametrul corpului bacterian de ,-; ori/ sporul are un contur net refringent,
o form rotund, mai rar ovalar. "spectul germenului este de Hrachet de tenisV !figura
*%/
Clostridium per5rin)ers0 bacil gros, cu capete rotun'ite, Lram pozitiv. 7n condiii
obinuite de cultur sau n organismul animal. Dporuleaz foarte rar, sporii fiind
subterminali, clostridieni. Lermenul este ncun'urat de o capsul, vizibil n coloraia
Lram ca un halou subire, necolorat n 'urul corpului bacterian !figurile i 8%/
Eigura *0 Erotiu din produs colorat Lram - 9lostridium tetani
&up "tlas de Cacteriologie0 =5amens directs par colorations usuelles. N.2. Lestin, E.U. Loldstein, N.E. "car. 1<<+
Eigura 0 Erotiu din produs colorat Lram - 9lostridium perfringens
!http0[[333. microbesdedu.org%
Clostridium nov !9l. oedematiens%0 bacil Lram pozitiv cu spor sobterminal
clostridian, alungit i voluminos/
Clostridium septicum0 bacil Lram pozitiv polimorf, incluz6nd forme de bacil,
virgul, filamente, cu spori mari, subterminali, d6nd aspect navicular germenilor/
Clostridium botulinum0 bacil lung i gros, Lram pozitiv, cu spor subterminal !figura
<%.
Eigura 80 Erotiu din produs colorat Lram - 9lostridium perfringens
!http0[[333. microbesdedu.org%
Eigura <0 Erotiu din produs colorat Lram - 9lostridium botulinum
!http0[[333. microbesdedu.org%
Ana&ro%ii n&s/orula5i
Microscopia direct a acestora nu este at6t de important ca n cazul infeciilor
clostridiale, deoarece aceste bacterii nu au aspect morfologic deosebit, put6ndu-se
prezenta sub form de0 coci& bacili& spirili& vibrioni& 6ram po'itivi sa 6ram negativi&
asemntori morfologic cu cei aerobi, dar mai pleomorfi.
I. ?n inf&#5iil& (&$&r,ina$& (& %a#ili ana&ro%i Gra, n&9a$ivi n&s/orula5i, apar
frecvent aspecte morfologice particulare formelor H2V0 elemente sferice de diferite
mrimi sau forme filamentoase/
a &iagnosticul )enului Fusobacterium se poate face direct c6nd se ntrunesc dou
condiii eseniale0 lipsa creterii n aerobioz i prezena simultan pe frotiu a + aspecte
morfologice determinate de deficienele peretelui bacterian0 forme bacilare, forme
filamentoase !filamentele put6nd prezenta umflturi terminale sau mediane care se
desprind i se transform n sferule libere%, forme sferice !figura 18%.
Dferulele libere i filamentele pot avea corpusculi metacromatici, iar sferulele
numeroase granulaii.
a &iagnosticul speciilor de -acteroides0 bacili Lram negativi cu coloraie bipolar.
Toate aceste forme particulare nu sunt obligatorii a se vizualiza n produsul
patologic/ frotiurile din produsul patologic pot evidenia doar bacili Lram negativi fr
aspecte caracteristice.
Eigura 180 Erotiu colorat Lram - Eusobacterium
!http0[[333. microbesdedu.org%
II. Ba#ilii Gra, /o'i$ivi ana&ro%i n&s/orula5i sunt bacili ramificai sau neramificai,
izolai, n lanuri sau palisade ori ncruciai.
a Propionibacterim0 bacili corineformi, rar ramificai/
a Ebacterim& ?ifi"obacterim& Actinomyces0 bacili Lram pozitivi ramificai.
8&8& "zolarea )ermenilor anaerobi
$entru izolarea germenilor anaerobi produsele patologice se nsm6neaz pe
urmtoarele medii0
*.*.1. 2&n$ru r&/r&'&n$an5ii 9&nului Clos$ri(iu,0
me"il JI 9vian"e0foie: sau me"il I IC cu carne tocat regenerat/
n agar0s(nge& care poate fi0
- geloz Martin +F, glucozat 1F, cu 18F s6nge de berbec/
- agar Crucella, agar 9olumbia, agar infuzie cord-creier suplimentat cu e5tract de
levur, vitamina B1 i .F s6nge de berbec/
- agar cu alcool feniletilic i .F s6nge pentru inhibiia creterii invazive a unor
specii/
me"il +agler cu glbenu de ou !se testeaz producerea de lecitinaz, lipaz,
proteaz%/ se folosete n cazul probelor din abcese i plgi !n gangrena gazoas%.
$e aceste medii clostridiile cultiv dup 1, zile de incubare la +
8
9.
$entru izolarea clostridiilor din produse contaminate nsm6narea acestor
produse patologice trebuie s se fac pe mediile agarizate menionate mai sus,
suplimentate cu 1eomicin ca agent selectiv. "ceste produse patologice contaminate
trebuie prelucrate n mod special pentru izolarea clostridiilor prin tratare cu alcool sau
inactivare termic, pentru distrugerea formelor vegetative i meninerea n via numai a
sporilor.
*.*.*. 2&n$ru i'olar&a %a#$&riilor ana&ro%& n&s/orula$&
De folosesc aceleai medii ca mai sus, la care se mai adaug me"ii selective, i
anume0
pentru bacili 0ram ne)ativi 6i cocii 0ram ne)ativi0
- agar c s(nge lacat "e berbec& selectiv prin Banamicin i Gancomicin. 7n lipsa
Gancomicinei se poate folosi amestecul selectiv realizat din0 Banamicin,
Dtreptomicin, 1eomicin, $olimi5in C/
- agar0s(nge0bil!& splimentat c antibiotice, pentru Cacteroides fragilis/
- agar0s(nge0esclin! pentru C. fragilis i Cilophila/
pentru bacili 0ram pozitivi 6i pentru coci 0ram pozitivi0 nu se folosete
Gancomicina ca agent selectiv, ci Banamicina, 1eomicina, $olimi5ina sau asocierea
9olistin cu "cid nalidi5ic sau Ciseptol-$olimi5in C pentru Mobiluncus.
9ulturile nsm6nate cu produse n care se suspicioneaz prezena anerobilor se
incubeaz la +
8
9 i dup ;8 de ore se urmresc zilnic p6n la zile. :n rezultat negativ
nu poate fi comunicat dec6t dup acest interval.
8&>& "denti5icarea bacteriilor anaerobe
*.A.1. Cara#$&r& (& #ul$ur4
8&>&2&2& 0ermenii din )enul Clostridium
a. ?n %ulion ana&ro%0
a Cl> tetani se dezvolt dup ,;-;8 de ore i determin o tulburare uniform a mediului,
cu dega'area a c6torva bule de gaz cu miros caracteristic de corn ars sau de materie
animal ars i acid butiric/
a Cl> perfringens se dezvot cu e5trem de mare rapiditate n mediile de cultur, mai ales
la temperaturi crescute!;.
8
9-;*
8
9%, la care germenul se dezvolt n n c6teva ore. 7n
bulion anaerob determin tulburare i producere intens de gaz/
a Cl> oe"ematiens0 tulbur uniform mediul, cu depunere ulterioar i cu producere
moderat de gaz/
a Cl> septicm se dezvolt rapid i bogat, d6nd o producie intens de gaz/
a Cl> botlinm tulbur uniform mediul, dnd un miros uor r6nced al culturii/
%. 2& 9&lo'4 @n su/rafa540
a Cl> tetani0 cretere delicat, subire, cu margini transparente i, dac mediul nu are o
concentraie sporit de geloz, n c6teva zile se ntinde ca un vl uniform pe toat
suprafaa mediului/
a Cl> perfringens0 determin colonii n varianta D, DA, A/
a Cl> oe"ematiens0 determin colonii de tip A, turtite, cu margini neregulate/
a Cl> septicm0 d o cretere cu aspect particular, de dantelrie fin, n e5tensie
continu/
a Cl> botlinm0 colonii cu limite neregulate, translucide, cu suprafa granular i cu o
margine n e5tensie continu.
#. 2& 9&lo'4 s;n9&0
a Cl> tetani0 nu determin hemoliz/
a Cl> perfringens0 produce hemoliz de tip Hcald-receV !prima zon de hemoliz aprut
la termostat, se ncon'oar de o a doua zon, mai larg, aprut dup meninerea n
continuare la rece-R;
8
9% !figura 11%/
a Cl> oe"ematiens0 determin hemoliz/
a Cl> septicm0 intens hemolitic/
a Cl> botlinm0 determin colonii hemolitice.
(. 2& ,&(iul Na9l&r0
a Cl> perfringens0 colonii asemntoare unui precipitat, ncon'urate de o zon opac/
a Cl> oe"ematiens0 acelai aspect al coloniilor, ncon'urate de un inel strlucitor n
lumin oblic, numit strat perlat, datorat aciunii unei lipaze/
a Cl> septicm0 nu produce lecitinaz/
a Cl> botlinm0 produce opalescen i strat perlat.
8&>&2&8& 0ermenii anaerobi nesporula;iF
a. ?n %ulion ana&ro%0
a Cocii 6ram po'itivi0 se dezvot srac i lent, obinuit sub form de agregate, mai rar
cu tulburarea mediului/
a Cocii 6ram negativi0 se dezvolt redus n mediul lichid, dar produc o foarte mare
cantitate de gaz !Geillonella%/
a ?acilii 6ram po'itivi0
- $ropionibacterium0 se dezvolt abundent n bulion.
a ?acilii 6ram negativi0
- Cacteroides0 C. fragilis se dezvolt relativ abundent n 1-, zile/
- Eusobacterium0 se dezvot pe mediile lichide, dup ,-+ zile de cultivare
depun6ndu-se la fundul eprubetei.
%. 2& 9&lo'41s;n9&0
a Cocii 6ram po'itivi0 produc colonii minuscule, transparente ca picturile de rou/
ulterior, dup ,-+ zile, coloniile se opacific i se e5tind/ obinuit sunt nehemolitice sau
ocazional b-hemolitice !$eptostreptococcus magnus% sau pigmentate n galben-citrin,
nehemolitice !$. asaccharol@ticus%/
a Cocii 6ram negativi0 colonii nehemolitice/
a ?acilii 6ram po'itivi0
Eigura 110 Semoliz pe geloz s6nge - 9l. perfringens.
&up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition,
=d3ard N. Cottone 1<<
- $ropionibacterium0 colonii ncon'urate de o zon de hemoliz, uneori pigmentate
n roz/
- =ubacterium0 colonii nehemolitice/
a ?acilii 6ram negativi0
- Cacteroides0 C. fragilis determin colonii de tip D, rotunde, uor conve5e,
transparente, regulate, ncon'urate frecvent de o zon de hemoliz, dup mai multe
zile/
- Eusobacterium determin , tipuri de colonii0
cu diametrul ,-; mm, contur neregulat, cu aspectul unei piramide, de culoare
roii-verzui, intens b-hemolitice/
cu diametrul ,-+ mm, form rotund, contur regulat, suprafa bombat, uneori
aproape semisferice, de culoare alb-glbuie, tardiv b-hemolitice .
#. 2& ,&(ii soli(& @n su/rafa540
a Cocii 6ram0po'itivi0
- Peptosteptococii0 cresc relativ lent, dup ;8 de ore de incubare la +
8
9,
determin6nd colonii mici, rotunde, conve5e, alb-cenuii, opace/
- Peptostreptococcs magns0 colonii cu diametrul ntre 8,.-, mm dup . zile de
incubare, obinuit transparente, dar pot varia ntre alb, cenuiu i glbui, rotunde,
uor conve5e, cu suprafaa lucioas sau lipsite de strlucire/
- Peptostreptococcs anaerobis0 crete cel mai repede dintre toate speciile !dup ,;
de ore%0 colonii ntre 1-; mm dup . zile de incubaie, rotunde, plate, gri, cu centrul
uor acuminat, alburiu, cu un miros dulceag, ptrunztor/
- Peptostreptococcs asaccharolytics0 colonii minuscule, care a'ung la ,-+ mm
diametru, rotunde, uor conve5e, strlucitoare/
- Peptococcs niger0 colonii mici, rotunde, conve5e, netede, lucioase, negre sau
mslinii, dar devin gri dup e5punere la aer/ n culturi mai vechi de o sptm6n pot
fi pigmentate n galben-mutar/
a Cocii 6ram negativi0
- Jeillonella0 dup ;8 de ore de incubare la +
8
9 determin colonii de 1-1,. mm,
transparente p6n la opac-albe la e5aminarea n lumin transmis, i transparente
p6n la albastre-verzui n lumin reflectat/
- Aci"aminococcs0 dup ;8 de ore de incubare0 colonii minuscule !8,1-8,, mm%,
rotunde, uor bombate, alb-cenuii sau aproape transparente/
- ,egasphaera0 8,,-, mm, rotunde, uor bombate, cu margini regulate, lucioase,
p6n la uor rugoase, untoase/
a ?acilii 6ram po'itivi0
- Propionibacterim0 colonii de aspect alb-sidefiu/
- Ebacterim0 colonii mici, semitransparente/
(. 2& a9ar1s;n9&: s&l&#$iv /rin %il40
a germenii din genul ?acteroi"es& n spe ?> fragilis& se dezvolt chiar mai bine pe
acest mediu dec6t pe suprafaa mediului solid/ dau colonii ncon'urate de un precipitat
maroniu, datorit descompunerii srurilor biliare din mediu/
&. 2& ,&(iul s&l&#$iv a9ar1s;n9&1%il41an$i%io$i#& !Banamicin, Dtreptomicin,
1eomicin, $olimi5in C% pe acest mediu nu crete nici un alt germen anaerob, dec6t C.
fragilis, iar dintre cele aerobe dec6t unele tulpini de $roteus i coci Lram pozitivi, care
vor fi regsii n cultura aerob.
f. 2& 9&lo'4 #u s;n9& la#a$0 ?acteroi"es melaninogenics se dezvot lent n 1-,
sptm6ni i produce un pigment negru caracteristic, care poate s coloreze colonia sau s
o ncon'oare sau s apar sub colonie/ uneori pigmentul este brun-rocat.
9. 2& ,&(iul Na9l&r0
a ?acilii 6ram negativi0
- Isobacterim0 produce lecitinaz.
*.A.*. Cara#$&r& ,orfolo9i#&
8&>&8&2& 0ermeni anaerobi nesporula;i0
a. Co#ii Gra, /o'i$ivi0
- Peptostreptococii0 coci Lram pozitivi aezai n perechi, tetrade, mase neregulate
sau lanuri/
- Peptococii0 coci Lram pozitivi aezai n grmezi.
%. Co#ii Gra, n&9a$ivi0
- 9oci Lram negativi cu dimensiuni reduse, aezai izolai sau n grmezi/
#. Ba#ilii Gra, /o'i$ivi0 morfologia rm6ne numai un criteriu orientativ de difereniere
a acestor bacterii pentru c multe specii sunt microscopic asemntoare.
- Actinomyces0 filamente Lram pozitive, ramificate, cu aspect micelial i e5tremiti
mciucate/ se pot fragmenta uor n bacili corineformi dispui n Q, G, T.
- ?ifi"obacterim0 bacili Lram pozitivi scuri, cu capete frecvent bifurcate i
e5tremiti mciucate ori spatulate, dispui izolat, n lanuri scurte, n agregate stelate,
n G sau palisade.
- Ebacterim0 bacili Lram pozitivi pleomorfi0
=. alactol@ticum0 bacili mai lungi, uor ncurbai, dispui frecvent n G,
asemntori psrilor n zbor, sau aglomerai, sub forma Hliterelor chinezetiV/
=. lentum0 forme cocobacilare dispuse izolat, n perechi sau lanuri scurte/
=. imosum0 bacili cu lungime intermediar, groi, cu e5tremiti frecvent
bifurcate i umflate, singuri, n perechi sau mici aglomerri/
- ,obilncs0 bacili Lram variabil, uor ncurbai, cu aspect difterimorf, sau cu
aspect semilunar sau chiar de semicerc.
(. Ba#ili Gra, n&9a$ivi0
1 ?acteroi"es& Prophyromonas& Prevotella0 bacili i cocobacili Lram negativi
polimorfi/ rareori genereaz forme 2 i sferoplati/ de aceea filamentele i formele bizare
sunt numai ocazional observate/ la ultimele dou genuri sunt frecvente formele
cocobacilare.
- Isobacterim0 bacili Lram negativi cu un polimorfism remarcabil0 bacili cu
capetele rotun'ite sau ascuite, frecvent ncurbai i cu umflturi sferice, posibile forme
cocobacilare i filamentoase cu incluzii granulare.
8&>&8&8& 0ermeni anaerobi sporula;i0 identic cu aspectul morfologic descris la e5amenul
direct.
Eigura 1,0 Erotiu din cultur - 9l. tetani
!http0[[333. microbesdedu.org%
*.A.A. Cara#$&r& %io#+i,i#&
8&>&>&2& 0ermeni anaerobii nesporula;i0
a Cocii 6ram po'itivi0
- testul sensibilitii la Gancomicin0 cocii Lram pozitivi sunt sensibili/ cocii Lram
negativi sunt rezisteni/
- testul catalazei0 difereniaz Peptococcs constant, dei slab catalaz pozitiv, de genul
Peptostreptococcs catalaz negativ/
- testul coagulazei0 singurul pozitiv este Peptostreptococcs in"olics/
- producerea de indol0 pozitiv Peptostreptococcs asaccharolytics>
- reducerea nitratului0 pozitiv Peptostreptococcs in"olicsR
- testul ureazei0 pozitiv pentru unele specii de Peptostreptococcs/
- fermentarea carbohidrailor0 Peptostreptococcs fermenteaz zaharurile, dar unele
specii sunt azaharolitice/ germenii din genul Peptococcs sunt azaharolitici.
a Cocii 6ram negativi0
- e5aminare sub radiaie ultraviolet, la +*8 nm0 coloniile de Geillonella au fluorescen
roz p6n la rou, care plete dup , ore/ ceilali coci Lram negativi nu dau colonii
fluorescente/
- reducerea nitrailor0 pozitiv pentru Jeillonella/
- producere de catalaz0 variabil Jeillonella/
- fermentarea glucozei0 pozitiv doar pentru ,egasphaera/
a ?acili 6ram po'itivi0
- testul catalazei0 pozitiv pentru Propionibacterim/
- fermentarea zaharurilor0 zaharolitici/
- producere de S,D0 pozitiv Propionibacterim/
- producere de indol0 pozitiv Propionibacterim/
- reducerea nitrailor la nitrii0 negativ pentru bacilii Lram pozitivi/
- aciunea asupra laptelui turnesolat0 Propionibacterim coaguleaz, reduce i acidific
laptele turnesolat/
- hidroliza gelatinei0 Propionibacterim acnes lichefiaz gelatina.
a ?acili 6ram0 negativi0
- cretere pe medii cu ,8F bil0 toate speciile de ?acteroi"es i unele specii de
Isobacterim/
- producere de indol0 variabil pentru genul ?acteroi"es! pentru C. fragilis negativ%/
variabil pentru Isobacterm !pozitiv pentre I> necrophorm, negativ pentru I>
mortiferm%/
- hidroliza esculinei0 toi bacilii Lram negativi hidrolizeaz esculina/
- fermentarea zaharurilor0 ?acteroi"es fermenteaz constant glucoza, lactoza,
zaharoza, iar pe celelalte zaharuri variabil, Isobacterim este slab zaharolitic, de
regul ferment6nd glucoza u fructoza/
- fermentarea treoninei0 se evideniaz prin producerea gazului din substratul cu
treonin, prin metoda albastrului 1il sau prin cromatografie. Testul este pozitiv pentru
Isobacterim, i negativ pentru ?acteroi"es.
- hidroliza gelatinei0 ?acteroi"es este negativ/
- aciunea asupra laptelui turnesolat0 ?acteroi"es coaguleaz, reduce i acidific laptele
turnesolat/
- e5aminare sub radiaie ultraviolet, la +*8 nm0 coloniile de ?acteroi"es dau
fluorescen roie n lumin ultraviolet.
8&>&>&8& 0ermeni anaerobi sporula;i0
- sensibilitatea la Jancomicin! verss Colistin0 toate clostridiile sunt rezistente la
9olistin i sensibile la Gancomicin/
- pro"cerea "e lecitina'! #i lipa'!0 pe o plac cu mediu 1agler sau Uillis-Sobbs se
repic un striu longitudinal. De incubeaz anaerob la +
8
9. &up ;8 de ore se urmrete
producerea de lecitinaz0 precitat opac n mediul din 'urul creterii, iar pentru
producerea de lipaz se zrmrete cultura o sptm6n0 film perlat, iridiscentpe creterea
bacterian i mediul imediat ad'acent. Lermeni lecitinaz pozitivi0 Cl> perfringens& Cl>
oe"ematiens& Cl> botlinm/ germeni lecitinaz negativi0 Cl> septicm/
- cre#terea %n lapte trnesolat sau cu broncre'ol prpr0 Cl> perfringens formeaz
cheag alveolar0 laptele este iniial redus, apoi fermentat vir6nd spre rou, apoi coagulat,
cheagul fiind lipit de un perete i sf6iat de gaze/ apare un zer care se limpezete
complet i totul este surmontat de un alt cheag, cu aspect buretos i virat spre rou
!figura 1+%/
- fermentarea 'aharrilor0 9l. perfringens fermenteaz ma'oritatea zaharurilor/ 9l.
septicum fermenteaz a'oritatea zaharurilor cu e5cepia zaharozei/ 9l. botulinum
fermenteaz variat zaharurile/
- Cl> perfringens este un puternic slfito0re"c!tor, negrind rapid mediile care conin
sulfit de sodiu i un compus feric.
*.A.D. Cara#$&r& an$i9&ni#&
- Cl> perfringens0 reac;ia de seoneutralizare Na)ler. $e o ] de plac cu mediu 1agler
se acoper cu ser antiperfringens/ germenul suspicionat a fi 9l. perfringens se
nsm6neaz n striuri perpendiculare pe linia de demarcaie. 7n caz de reacie pozitiv
germenul se dezvolt pe ] fr ser i nu apare n cealalt 'umtate. "ceeai reacie poate
fi evideniat i n cazul Cl> tetani !figura 1;%.
9l. perfringens0 cheag
de cazein fragmentat
de bule de gaz - aspect
de Vnor de furtunK
9l. tetani0
cazeificare
omogen a
mediului
9l. sporogenes0
precipitarea
cazeinei
Eigura 1+0 "ciunea clostridiilor pe mediul cu lapte
turnesolat. &up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N.
Eigura 1;0 Aeacia de seroneutralizare - 9l.
tetani.
- Cl> botlinm0 prezint tipuri antigenic distincte de to5in, notate ", C, 9, & , =, E,
L, dei toate provoac aceeai mbolnvire clinic, botulismul. To5inele sunt strict
specifice de tip, fiind neutralizate numai de antito5inele corespunztoare.
Evi"enierea to-inei botlinice i determinarea tipului acesteia poart numele de
to-inotipie>
$entru acesta se iau ; loturi de animale de laborator !oareci sau cobai%.
2a primul lot se administreaz pe cale intraperitoneal !i.p% produsul patologic
filtrat ca atare !lichid de spltur gastric, de vrstur, coninut intestinal, lichid din
conserva alimentar incriminat, serul sanguin%.
2a al doilea lot se administreaz prudusul tot i.p., dar dup ce acesta a fost inut
1. min la 188
8
9.
2a al treilea lot se administreaz produsul patologic dup ce acesta a fost pus n
contact, nainte de administrare, cu ser anti-botulinic anti-" i lsat +8 min la +
8
9.
2a al patrulea lot se administreaz produsul patologic dup ce acesta a fost pus n
contact, nainte de administrare, cu ser anti-botulinic anti-C i lsat +8 min la +
8
9.
Re'ltatl0 dac supravieuiesc animalele lotului MM i MG, nseamn c este
into5icaie botulinic, iar to5ina este de tip C, pentru c a fost inactivat de temperatur i
serul specific anti-C.
2a noi n ar toate cazurile diagnosticate cu botulism s-au datorat to5inei
botulinice de tip C, cu o e5cepie - un caz dat de to5ina botulinic de tip ".
*.A.C. Cara#$&r& (& /a$o9&ni$a$&
De bazeaz pe reproducerea bolii e5perimental la animale de laborator, mai ales n
cazul germenilor anaerobi sporulai, mai greu sau imposibil de realizat n cazul
anaerobilor nesporulai. "stfel0
- Cl> tetani. $atogenitatea bacilului tetanic este dominat de to*ina tetanic7& o
e5oto5in capabil s determone tetanosul e5perimental, dup o incubaie de numai 8
ore, indiferent de doza inoculat. "ciunea biologic a sa se e5sercit prin fi5area
e5clusiv i ireversibil pe sistemul nervos, mai ales D19, leg6ndu-se de gangliozizii
legai de cerebrozizi. Mn'ectat la animalul de laborator !oarece, cobai, iepure%, to5ina
reproduce boala, determin6nd o parali'ie spastic!, care ncepe de partea i cu membrul
n care s-a in'ectat/ membrul este fi5at n e5tensie forat, corpul se curbeaz de aceeai
parte/ urmeaz generalizarea contracturilor, acesta este tetanosul ascendent. 2a om
tetanosul ncepe cu contractura muchilor masticatori !trismus% indiferent de locul de
ptrundere al to5inei sau infeciei tetanice, realiz6nd tetanosl "escen"ent& care
afecteaz iniial nervul cel mai scurt i apoi continu cu formele generalizate.
- Cl> perfringens. Eactorul principal de patogenitate l reprezint Y0to-ina, care este o
enzim pur, lecitinaza. =a are efect0 hemolitic& "ermonecrotic& letal, prin aciunea sa
asupra lecitinei din D19. 7n cazul gangrenei e5perimentale s-a constatat c apariia
leziunilor hemoragice n organe reprezint momentul c6nd animalele nu mai sunt
recuperabile prin tratament/ pe c6nd leziunile degenerative sunt compatibile cu
vindecarea.
- Cl> oe"ematiens este puternic to5igen. 9ultura in'ectat i.m. la cobai, produce un
edem palid, gelatinos la locul in'ectrii, care prinde toate esuturile, de la piele p6n la
os. =demul accentuat este vizibil cu ochiul liber at6t la animalul de laborator, c6t i la
om.
- Cl> septicm se caracterizeaz printr-o e5trem de mare virlen!> Mn'ectarea a c6iva
spori i.m. n condiii de anaerobioz la cobai, duce la moartea animalului n mai puin
de ,; de ore, germenul produc6nd o hemoliz intens n toate esuturile i organele.
8&P& Antibio)rama
7n general germenii anaerobi sunt r&'is$&n5i la aciunea a,ino9li#o'i(&lorV sunt
s&nsi%ili la penicilin!& eritromicin!& tetraciclin!& metroni"a'ol& clin"amicin!& cefo-itin!.
"socierea penicilin-metronidazol este deosebit de eficient.
&M"L1)DTM9:2 &= 2"C)A"T)A "2 M1E=9\MM2)A 9: $"AG)C"9T=AMM
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECGIILOR CU GERMENI DIN
GENUL BRUCELLA
Cruceloza, antropozoonoza cea mai r7sp=ndit7 de pe )lob, este determinat de
germeni din genul Crucella.
Crucelele infecteaz numeroase specii animale !caprine, ovine, bovine, porcine,
ecvine%, omul contamin6ndu-se cu produse de la animalul bolnav !s6nge, l6n, piei,
produse de avort, etc%. Cruceloza este o boal7 pro5esional7 a cresctorilor de vite,
medicilor veterinari, etc.
&in punct de vedere clinic, bruceloza uman se caracterizeaz prin marea
varietate a simptomelor !accese febrile neregulate cu caracter recidivant, transpiraii,
artralgii, mialgii, dureri osoase%, a complica;iilor de natur7 in5lamatoare i prin durata
sa nedeterminat7, variind de la ;-. luni la ,-+ ani n medie.
&iagnosticul de laborator se bazeaz pe izolarea i identificarea germenului
!diagnostic bacteriologic%, dar i pe diagnosticul imunobiologic.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
&e la om sau animalul bolnav se recolteaz0 s(nge !pentru izolare i diagnostic
serologic%, pro"s "e pncie sternal! !pentru medocultur% i ganglionar!, n caz de
adenopatie, rin! !pentru urocultur%, lichi" articlar !n caz de artrite%, bil! !pentru
bilicultur%, materii fecale !pentru coprocultur%, de la bovidee0 produs de avort spontan,
lochii, lapte.
*. DIAGNOSTIC MICROBIOLOGIC
De bazeaz pe izolarea i identificarea germenului.
8&2& "zolarea
De realizeaz prin nsm6narea pe medii de cultur i inocularea la animalul de
laborator.
e ?ns4,;n5ar&a /& ,&(ii (& i'olar&
+emocultura
D6ngele recoltat prin puncie venoas !,-; ml% se nsm6neaz fie pe mediu
lichid% )lucozat 6i citratat, fie de preferin, pe mediu )elozat )lucozat 2R% la care se
adau)7 mediu lichid )lucozat 2R 6i citratat 8R 7$&+ni#a Cas$an&(a8. De procedeaz
astfel0 mediul gelozat glucozat 1F, moale !nclzit% se toarn n baloane =rlenma@er de
188 ml, n volum de 1. ml[balon, apoi balonul se nclin ls6ndu-se ca mediul s se
solidifice. &up solidificare, se adaug mediu lichid glucozat 1F !18-1. ml[balon%.
De nsm6neaz s6ngele, apoi balonul se nclin, pentru a HscldaK suprafaa
gelozei cu mediul lichid conin6nd s6nge. De incubeaz la +
8
9, repet6ndu-se la interval
de , zile micarea de cltiare a balonului, pentru umezirea cu lichid a suprafeei gelozei.
&up ;-. zile, n cazul prezenei brucelelor, apar coloniile caracteristice. "lteori,
dezvoltarea brucelelor necesit un timp mai ndelungat !p6n la ;. zile%. Mncubarea se
face n paralel i n atmosfer de 9), .F !pentru izolarea Crucellei abortus%.
UROCULTURA
Dedimentul obinut dup centrifugarea urinei !+88 ml% se nsm6neaz dup
tehnica 9astaneda.
Celelalte produse patolo)ice
De nsm6neaz ca atare, n condiiile e5puse pentru hemocultur.
e Ino#ular&a la ani,al
De inoculeaz la un cobai pe cale intraperitoneal sau subcutanat 8,. ml
produs[inoculare i se observ clinic timp de ;. de zile. De urmresc urmtorii parametrii0
- izolarea i identificarea brucelelor din ganglionii limfatici, splin, ficat, mduv
osoas/
- diagnosticul serologic !titrara aglutinelor n ser%/
- intradermoreacia la brucelin/
- e5amenul histopatologic.
8&>& "denti5icarea
De face pe baza urmtoarelor caractere0
a. Cara#$&r& (& #ul$ur4
&up +-1.-;. de zile pe mediul gelozat !n tehnica 9ataneda%, apar colonii mici
iniial cu diametrul de 8,,. mm i care cresc p6n la +-; mm, rotunde% bombate% cu
mar)ini netede% cu supra5a;7 re)ulat7% nepi)mentat7. 7n cazul Crucellei abortus,
coloniile apar numai dac incubarea s-a fcut n atmosfer de 9), .F.
%. Cara#$&r& ,orfolo9i#&
=fectuarea unui frotiu bacteriologic dintr-o colonie i colorarea cu metoda Lram,
evideniaz prezena cocobacililor )ram ne)ativi% nesporula;i cu dimesiunea de 8,.-1,.
microni[8,.-8, microni !figura 1%.
#. Cara#$&r& ,&$a%oli#&
9aracterele biochimice permit diferenierea tipurilor de Crucella dup0
- Influ&n5a CO* asu/ra (&'vol$4rii ,i#ro%ilor0 dezvoltarea Br. ,&li$&nsis i a Br. suis
se face pe mediile de cultur meninute la termostat ntr-o atmos5er7 obi6nuit7 de aer, n
timp ce obinerea culturilor de Br. a%or$us %ovis este necesar o atmos5er7 de C$8 n
proporie de .-18F.
1 Mo(ul (& /ro(u#&r& a >*S0 se studiaz cultiv6nd brucelele pe medii de geloz
nclinat cu pS-*,*, tuburile av6nd ataat l6ng dop o band de h6rtie de filtru nmuiat
n soluie de 18F acetat de $b. 2a fiecare ,; de ore h6rtia este nlocuit cu alta. &up
producerea de S,D se pot diferenia biotipurile de Crucella0 Br. ,&li$&nsis produce +8S
numai 1n primele 8P ore !sau deloc%, apoi nu mai produce. Br. a%or$us produce +8S
timp de PG ore, apoi nceteaz de a mai produce. Br. suis produce +8S continuu,
abundent, timp de <* ore.
- A#5iun&a %a#$&rios$a$i#4 a #oloran5ilor0 testul bacteriostatic prin colorani
!fu5in1[,..888 i tiamin 1[+8.888%. $e mediile la care s-au adugat aceti colorani,
brucelele cresc diferit0 Br. ,&li$&nsis se dezvolt pe mediile suplimentate 5ie cu tionin7%
5ie cu 5u*in7/ Br. a%or$us crete numai pe mediu cu 5u*in7/ Br. suis cre6te pe mediu de
tionin7 !figura ,%.
Erotiu 10 Crucella suis0 frotiu din cultur. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ -
Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
(. Cara#$&r& an$i9&ni#&
9ele trei biotipuri de Crucella aparin aceluiai serotip. Mdentificarea serologic se
face prin reac;ia de a)lutinare pe lam7, pun6nd n contact o pictur dintr-o suspensie de
cultur suspect cu o pictur de ser standard anti-Crucella diluat conform instruciunilor
!uzual 1[18%. Aezultatul este pozitiv, dac apar grun'i de aglutinare vizibili.
A. DIAGNOSTICUL IMUNOBIOLOGIC
A.1. T&s$& (& i,uni$a$& u,oral4
De folosesc0 reacii de aglutinare, reacia de fi5are a complementului, reacia
opsono-citofagic.
a. R&a#5ia (& a9lu$inar&
=ste larg utilizat n diagnosticul serologic, av6nd dou variante0
e A)lutinarea lent7 9Tri)ht:
=ste o reacie "e agltinare %n tbri n care se pun n contact "ilii binare "in
serl "e cercetat c o concentraie "eterminat! "intr0n antigen stan"ar" 9antigen
Dright: reprezentat de suspensia de brucelle !18 miliarde germeni[ml% n soluie
clorurosodic izoton, fenolat .F. Tuburile se agit i se las la +
8
9 timp de ,; de ore.
Aezultatul se apreciaz astfel0
- reacie negativ0 suspensie tulbure, omogen/
- reacie pozitiv0 prezena unui sediment n form de umbrel, cu lichidul de
deasupra perfect limpede/ prin agitare sedimentul se desface sub form de granule.
e A)lutinarea rapid7 9+uddleson8
=ste o reacie "e agltinare pe lam!. De folosete un antigen stan"ar"
97""elson:, livrat de Mnstitutul 9antacuzino, conin6nd o suspensie dens de brucelle n
Eigura ,0 Mdentificarea speciilor de Crucella dup sensibilitatea la colorani. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Tionin
$ironin
Metil-violet
Eu5in
ap srat 1,F, fenolat .F i colorat cu verde brilliant i cristal violet !coloraia
suspensiei este albastru-violet%.
Aeacia se efectueaz astfel0 pe o lam de sticl se depun cu o micropipet,
cantiti descresc6nde de ser de testat. "lturi de fiecare pictur se depune c6te o
cantitate determinat de antigen Suddelson. De adaug un martor de ser !ser R soluie
clorurosodic izoton% i un martor de antigen !antigen R soluie clorurosodic izoton%.
9u colul unei lame, se amestec pictura de ser cu pictura de antigen. De incubeaz la
+
8
9 timp de 1-, minute. Aezultatul se citete repede, n ma5imum 8 minute de la
e5pirarea timpului de incubare.
Mnterpretarea0
- reacie negativ0 pictur omogen colorat, fr grun'i/
- reacie pozitiv0 grun'i, colorati albastru-violet.
%. R&a#5ia (& fi6ar& a #o,/l&,&n$ului
De efectueaz dup tehnica ?or"et0Dassermann, folosind ser de cercetat ntr-o
singur diluie, antigen standard pentru AE9 !suspensie de brucelle% livrat de Mnstitutul
9antacuzino, diluat conform instruciunilor, ale5in i sistem hemolitic. AE9 se
pozitiveaz n toate formele bolii !acut, cronic, latent%. "ceast reacie d rezultate
pozitive n <F din cazuri.
#. R&a#5ia o/sono1#i$ofa9i#4
De realizeaz pun6nd n contact0 s=n)e proasp7t recoltat pe citrat de sodiu cu
anti)en brucelos !suspensie de Crucella n soluie clorurosodic izoton 8,. gF8
inactivat prin cldur ;. de minute la 8
8
9, care conine ; miliarde germeni[ml%. &up
incubare ,8 de minute la +
8
9 se fac frotiuri, se coloreaz cu Liemsa i se apreciaz7
)radul de 5a)ocitoz7 care a avut loc, numr6ndu-se germenii fagocitai n citoplasma
celulei.
&up Suddelson, rezultatul determinrii indicelui opsonocitofagic !M.).9.% se
e5prim astfel n raport cu intensitatea fagocitozei0
8-18 = indice negativ !-%/
11-,; = indice slab pozitiv !R%0 susceptibil la infecia bruceloas/
,.-;< T indice pozitiv !RR%0 infecie probabil, dac mai e5ist i alte reacii
specifice pozitive !aglutinare, AE9%/
.8-, =indice intens pozitiv !RRR%0 infecie net/ aprarea organismului
eficient.
A.*. T&s$& (& i,uni$a$& #&lular4
De efectueaz printr-o reacie cutanat !intradermoreacie%, care testeaz7
hipersensibilitatea de tip 1nt=rziat !imunitatea celular n bruceloz%. De folosete ca
antigen %ru#&lina !filtrat de cultur de Crucella abortus i suis%, livrat de Mnstitutul
9antacuzino. De inoculeaz intradermic 8,1 ml brucelin pe faa anterioar a antebraului.
7n paralel se inoculeaz la cellalt antebra 8,1 ml bulion !martor%. 9itirea se efectueaz la
,; i *8 de ore.
Mnterpretare0
T reacie dubioas0 eritem uor !roea%, fr edem/
R T reacie slab pozitiv0 eritem i edem net cu diametru de 1-,,. cm/
RR T reacie pozitiv0 eritem i edem cu diametru de +-* cm/
RRR T reacie intens pozitiv0 edem cu eritem, cu diametru mai mare de * cm, la
care se adaug fenomene generale !febr, cefalee, etc%.
2a cazurile tratate0 aglutinarea i AE9 se pot negativa, dar M)9 i M&A la
brucelin rm6n pozitive.
("A0N$ST"C,L (' LA-$RAT$R AL "NF'CD""L$R C, +'#$F"L"
Mnfeciile umane produse de reprezentanii genului Saemophilus sunt variate ca
manifestare i gravitate0 meningita& epiglotita& pnemonia& bron#ita act!& acti'area
bron#itelor cronice i bron#iecta'iilor& pleropnemonia& sin'ita& otita me"ie act! #i
cronic!& mastoi"ita& con$nctivita& en"ocar"ita& pericar"ita& osteomielita& artrita&
peritonita& hepatita& colecistita& retrita& prostatita& orhiepi"i"imita& vaginita& salpingita&
en"ometrita etc.
Dpeciile de hemofili izolate de la om la om sunt0
- S.influenzae/
- S.aeg@ptus !con'unctivitidis%/
- S.haemol@ticus/
- S.parahaemol@ticus/
- S.d@cre@/
- S.vaginalis.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
De recolteaz0 spta& e-"at faringian& e-"at na'al& sp!l!tr! bron#ic!& <CR&
secreie con$nctival!& otic!& retral!& vaginal!& s(nge& lichi" pleral& pericar"ic&
articlar& racla$e ctanate sa mcoase& materii fecale& fragmente "e estri sa organe
- n caz de intervenii chirurgicale sau deces.
Tampoanele de recoltare trebuie s fie 1mbibate 1n bulion nainte ca proba s fie
recoltat i transportate rapid la laborator. $robele vor fi pstrate p6n la nsm6nare la
temperatura laboratorului, nu n frigider, iar durata s nu depeasc , ore, ntruc6t
viabilitatea hemofililor este mult mai redus prin uscare i rcire.
*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
8&2& '*amenul direct
De folosete pentru0 sput7% e*udate% aspirate% secre;ii i sedimentul ob;inut prin
centri5u)area LCR 6i a e*udatelor lichide, numai pentru a determina prezena bacililor
Lram negativ.
7n e5ectuarea colora;iei 0ram, trebuie avut mare gri' n efectuarea decolorrii,
deoarece formele cocobacilare de S.influenzae pot fi confundate n morfologie cu
pneumococii. &ac ei se coloreaz bipolar, iar restul organismului s fie colorat pal, se
pot confunda cu Lram pozitivii.
De poate efectua un test direct de um5lare a capsulei cu ser de tip S.influenzae.
"muno5luorescen;a cu ser capsular con'ugat cu fluorescein este un alt mi'loc
e5celent de identificare a tulpinilor capsulate.
*.*. I'olar&a
De folosesc medii 1n care celulele san)uine au 5ost lizate printr-o 1nc7lzire
u6oar7 !a9ar1#+o#ola$ i L&Yin$+al% sau prin di)estie peptic7 !a9ar Fil(&s%. 7n astfel de
medii hemina i 1"& sunt prezente n apro5. .88 micrograme i respectiv 1.8
micrograme[ml. Mncubarea se face la +
8
9 n .-18 F 9),, timp de 18-, de ore.
8&>& "denti5icarea
a. Cara#$&r& (& #ul$ur4
S.influenzae d colonii mici% )ri sau semiopace% netede 6i plat conve*e% cu
mar)ini re)ulate. Tlpinile capslate tin" s! se "e'volte conflent& %n contrast c
coloniile tlpinilor necapslate& care r!m(n separate. 9oloniile de S.parainfluenzae pot
avea un diametru p6n la + mm dup incubare de ,; de ore i apar netede sau rugoase i
crenelate, gri-lucioase i semiopace. "ctivitatea hemolitic a hemofililior hemolitici poate
fi evideniat pe agar Eildas sau 2e3inthal, cu .F s6nge bovin sau de cal i agar-s6nge de
la aceleai specii !figura 1%.
7n 'urul coloniilor de Dtaphilococcus aureus dezvolt colonii mai mari !fenomen
de satelitism%, datorit suplimentului de factor G furnizat de stafilococi !figurile , i +%.
b& Caractere mor5olo)ice
Erotiul colorat Lram evideniaz cocobacili 0ram ne)ativi polimor5i. Tulpinile
virulente prezint uneori capsul !figura ;%.
c& Caractere metabolice
Reaciile fermentative sunt foarte valoroase pentru diferenierea speciilor de
hemofili. 9arbohidraii cu valoare de identificare sunt0 glco'a& 'aharo'a& lacto'a& -ilo'a&
manitoll #i ribo'a.
"lte teste folosite0 testl in"olli& testl rea'ei& activitatea "ecarbo-ila'elor #i a
betagalacto'i"a'ei. Splimentarea me"ili c factorii L& J sa L=J "iferenia'!
speciile "e 7aemophils0 S.influenzae i S.aeg@ptus necesit factor (RG/ S.ducre@
necesit numai factor (.
Eigura 10 S. influenzae - cultur pe agar-cholat din lichid cefalorahidian. &up0 Dchneiersoncs "tlas of
&iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
(. Cara#$&r& an$i9&ni#&
De folosete identificarea serologic pentru tulpinile capsulate de S.influenzae
care pot fi difereniate n * serotipuri bazate pe * polizaharizi capsulai distinci0 a, b, c, d,
e, f. De folosesc0 reacia "e mflare a capslei& "bla "if'ie %n gel "e agar&
imnoflorescena& contraimnoelectrofore'a& late-agltinarea& agltnarea pe lam! #i
coagltinarea.
Eigura ,0 S. influenzae - satelitism n prezena stafilococilor pe geloz s6nge. &up0 Dchneiersoncs "tlas of
&iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
Eigura +0 S. influenzae - satelitism n prezena stafilococilor pe geloz s6nge.
&up0 " 9olour "tlas of Microbiolog@, A.N. )lds 1<., 1<8*
&M"L1)DTM9:2 &= 2"C)A"T)A "2 M1E=9\MM2)A 9: C)A&=T=22"
$=AT:DMD
Cordetella pertusis este agentul etiologic al tusei convulsive, alturi de alte dou
specii ale aceluiai gen0 C. parapertissis i C. bronchiseptica..
=tapele diagnosticului de laborator sunt0
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
- e-"atl faringian cu tamponul/
- spta prin metoda plcii tuite/
- s(ngele pentru diagnosticul serologic.
*. DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
9onst n izolare i identificare.
8&2& "zolarea
De face pe mediul de elecie Cordet- Lengou !macerat de cartof glicerinat i
gelozat cu adaus de s6nge%.
8&8& "denti5icarea
a. Cara#$&r& (& #ul$ur4
C. pertussis crete sub form de colonii de tip ?S@% mici% lucioase 9Bpic7tur7 de
mercur@:% conve*e% 1ncon<urate de al5a hemoliz7 !figurile 1 i ,%.
Eigura ;0 S. influenzae - frotiu colorat Lram din cultur. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
%. Cara#$&r& ,orfolo9i#&
$e frotiul colorat Lram apar sub form de cocobacili Lram negativ, nesporulai,
capsulai, cu tendin de colorare bipolar, dispui izolat, n perechi sau scurte lanuri.
#. Cara#$&r& %io#+i,i#&
&ifereniaz cele trei specii ale genului Cordetella0 alcalinizarea laptelui
turnesolat !n 1,-1; zile la C.pertussis, 1-; zile la celelalte dou%, producerea de ureaz,
utilizarea citratului !reacii negative la C.pertussis i pozitive la celelalte dou%,
transformarea nitrailor n nitrii !reacie pozitiv doar la C.bronchiseptica%.
(. Cara#$&r& (& /a$o9&ni$a$&
2a cobai !testul intradermic%.
&. Cara#$&r& an$i9&ni#&
Mdentificarea serologic se efectueaz prin reacia de aglutinare pe lam cu seruri
imune standard i reacia de ME direct.
A. DIAGNOSTICUL IMUNOBIOLOGIC
9onst n efectuarea reaciilor de aglutinare n tuburi i reacia de fi5are a
complementului.
Eigura 10 C.pertussis pe mediul Cordet-Lengou. &up0 Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic
Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR ?N INFECGIA CU
TREPONEMA PALLIDUM
Lenul Treponema aparine familiei Spirochaetaceae i cuprinde0
a. Tr&/on&,& /a$o9&n& /&n$ru o,
a Treponema pallidum, cu trei subspecii difereniate numai prin caracterele clinico-
epidemiologice ale bolilor determinate0 subspecia pallidum !agentul etiologic al
sifilisului v&n&rian%, subspecia endemicum !agentul etiologic al %&P&lului, care
determin sifilisul endemic non-venerian ce afecteaz copiii i adulii din regiunile
deertice africane%, subspecia pertenue !agentul etiologic al /ianului: responsabil de
leziuni cutaneo-mucoase la copii n zonele tropicale umede%.
a Treponema carateum, agentul etiologic al bolii numit /in$a, boal cutanat ce
afecteaz populaia t6nr !copii i adolesceni% din regiunile tropicale ale "mericii
9entrale i de Dud.
%.Tr&/on&,& sa/rofi$&
a Treponema )enitalis i Treponema cali)rrum, nt6lnite pe mucoasa genital.
a Treponema microdentium i Treponema mucosum, nt6lnite pe mucoasa bucal sau
n unele infecii locale.
#. Tr&/on&,& (& in$&r&s ,&(i#al
a Treponema Reiter0 tlpin! "e laborator, izolat de la om, cultivat pe medii
artificiale, n condiii de anaerobioz. =ste nepatogen! #i se %nr"e#te antigenic c
Treponema palli"m, de aceea este folosit pentru prepararea nor antigene "e
"iagnostic serologic al sifilisli.
a Treponema pallidum3tulpina Nichols, tlpin! patogen! "e laborator a Treponemei
pallidum. De obine prin inocularea prelevatelor de la bolnavii de sifilis, intratesticular la
iepuri, unde genereaz orhita e5perimental. Difilisul e5perimental la iepuri reprezint
singura posibilitate de pstrare n laborator a tulpinilor de treponeme patogene folosite
Eigura ,0 C. pertussis pe geloz s6nge dup prim izolare pe mediul Cordet-Lengou. &up0
Dchneiersoncs "tlas of &iagnostic Microbiolog@ - Deventh =dition, =d3ard N. Cottone 1<<
n testele serologice "e "iagnostic al sifilisli.
a Treponema cuniculi0 patogen! %n mo" natral pentr iepre, la care produce o
infecie genital, care o deosebete de tulpina 1ichols.
Tr&/on&,a /alli(u, este a)entul etiolo)ic al si5ilisului, boal7 dermato3
veneric7. Transmiterea se face totdeauna prin contact se5ual direct !vitalitatea
treponemelor n afara organismului uman este slab%.
&up o perioa"! "e incbaie silenioas! de apro5imativ + sptm6ni !cu limite
ntre , i 18 sptm6ni%, treponemele se mltiplic! la nivell porii "e intrare !genital,
anal, ocazional bucal%, unele "isemin(n" #i la nivell ganglionilor limfatici de unde
trec apoi n marea circlaie.
Fa'a /ri,ar4 a infeciei se caracterizeaz prin apariia 6ancrului si5ilitic, o
papl! care se lcerea'! rapi"& "(n" o le'ine sperficial!& ne"reroas!& c ba'a
in"rat! #i acompaniat! "e a"enopatie satelit!. #ancrul i ganglionii satelii sunt bogai
n treponeme. 1etratat, leziunea se vindec spontan n +-* sptm6ni, iar adenopatia se
remite puin mai t6rziu.
Fa'a s&#un(ar4 corespunde etapei de diseminare a treponemelor. =a debuteaz
apro5imativ n dou luni de la contactul infectant i se caracterizeaz printr-un tablou
lezional cu localizare cutaneo3mucoas7 variat7 !ro'eole& sifili"ele& pl!ci mcoase&
con"iloame& alopecie& atingeri nghiale etc.% i care poate fi acompaniat de micro3
poliadenopatii i de un sindrom in5ec;ios. Toate leziunile secundare sunt bogate n
treponeme de unde rezult i marea lor contagiozitate. "ceste manifestri se remit
spontan, dar recderile se pot produce n urmtorii +-. ani.
:rmeaz fa'a (& la$&n54, etap n care sifilisul este clinic asimptomatic i
necontagios.
&up o perioad de timp variabil, de , p6n la 18 ani, boala intr n fa'a $&r5iar4
caracterizat prin atin)eri viscerale% cardio3vasculare 9aortitit! letic!& anevrism "e
aort!& insficien! aortic!% sau neurolo)ice !tabes& parali'ie general!%, asociate cu
leziuni osoase sau cutaneo3mucoase )ranulomatoase !goma sifilitic!%. 7n toate leziunile
teriare treponemele sunt rare.
=tapele primar, secundar i de laten reprezint fazele precoce sau
bacteriologice ale maladiei.
Sifilisul #on9&ni$al. Coala se poate transmite la f!t "e la o mam! c sifilis
evoltiv. $asa'ul transplacentar al Treponemei pallidum va determina o atingere sistemic
a produsului de concepie duc6nd fie la moarte 5etal7, fie, n cazul n care copilul triete,
la mani5est7ri clinice caracteristice si5ilisului con)enital !leziuni cutanate buloase,
ragade, sau leziuni sistemice, precum 4eratita, malformaii dentare i nazale, periostit,
anomalii ale D19, retard intelectual%.
Treponema pallidum este un germen fragil care nu supravieuiete n mediul
e5terior fiind a"aptat strict patologiei mane.
Mn'ecia intratesticular a Treponemei pallidum la iepure provoac n c6teva zile o
orhit, esutul inflamat fiind bogat n treponeme. Tulpina 1ichols este ntreinut n acest
mod n vederea testului de diagnostic 1elson.
&iagnosticul de laborator const n "iagnostic bacteriologic minor !urmrete
punerea n eviden a Treponemei pallidum prin e5amen direct, posibil numai n sifilisul
primar% #i "iagnostic serologic ma$or.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE
Difilisul va fi luat n discuie n faa unei eroziuni sau ulceraii cu localizare ano-
genital i bucal, la un subiect n perioad de activitate se5ual. &iagnosticul
bacteriologic al prelevatelor se va efectua naintea tratamentului cu antibiotice,
treponemele dispr6nd n c6teva ore dup administrarea de penicilin.
$relevatele vor consta din serozit7;i nes=n)er=nde de la nivelul 6ancrului
si5ilitic, pl7cilor mucoase, mai rar produs de punc;ie )a)lionar7.
*. DIAGNOSTIC MICROBIOLOGIC
8&2& '*amenul direct
De realizeaz pe preparat proaspt i preparat colorat.
Preparatul proaspat se e5amineaz ntre lam i lamel, pe 5ond 1ntunecat.
Treponemele apar sub form de filamente foarte subiri cu -1+ spire str6nse, regulate,
cu capetele efilate, mobile. Micarea lor este de rotaie a5ial, pendulare, translaie i
fle5iune !figura 1%.
Preparatul colorat. De folosesc coloraii precum Lram prelungit, Gago, impregnaia
argentic !figurile , i +%.
&ac n #olora5ia Gra, treponemele se coloreaz n roz palid !de aici denumirea
de Treponema pallidum - este vorba despre o coloraie a peretelui de tip Lram -
negativ%, n i,/r&9na5ia ar9&n$i#4 !metoda Eontana-Tribondeau%, treponemele apar de
culoare neagr.
Colora5ia "a9o este utilizat pentru evidenierea Treponemelor, <eptospirelor i
?orreliilor. Aeactivii pentru colorat au avanta'ul de a fi mai ieftini i mai stabili dec6t cei
pentru impregnaia argentic.
Tehnica0
- De etaleaz un frotiu pe o lam port-obiect de sticl. 1u se fi5eaz la cald.
- De acoper preparatul cu o soluie filtrat de mercurocrom ,F timp de +-. minute.
- De spal cu ap distilat.
- De coloreaz timp de . minute cu o soluie filtrat de Gerde de metil ,F.
- De spal cu ap distilat i se las s se usuce.
- De e5amineaz cu obiectivul cu imersie.
Cacteriile apar colorate n violet clar pe un fond aproape incolor.
Prepararea reactivilor0
0 Solia "e mercrocrom 35. 1 g mercurocrom pulbere fin dizolvat n .8 ml ap
distilat caldu. De agit i se las n repaus c6teva minute dup6 care se filtreaz. De
conserv n flacoane de sticl nchis la culoare, filtr6nd din c6nd n c6nd.
0 Solia "e ver"e "e metil 35 > 7ntr-un mo'ar se fr6mieaz foarte fin 1 g verde de metil,
peste care se adaug .8 ml ap distilat fierbinte. De agit bine, dup care se las n
repaus/ se filtreaz i se pstreaz n flacon de sticl de culoare nchis, filtr6nd din c6nd
n c6nd. "ceti reactivi se conserv timp de o lun.
Metodele de coloraie au dezavanta'ul de a deforma treponemele, de unde i
preferinele microbiologilor pentru e5amenul n imunofluorescen.
Eigura 10 "spectul treponemelor la e5amenul direct, la microscopul cu fond ntunecat.
!sursa0 http0[[333.atlas.dermato.org.[images%
Eigura ,0 Tr. pallidum - 9oloraie Lram
!sursa0 http0[[333.pelin.mf.unidl'.si[pedag[microbi.html%
8&8& "denti5icarea
De bazeaz pe caracterele de patogenitate prin inocularea treponemelor la iepure
intratesticular, care n -1; zile face o orhit.
Mdentificarea se poate face i prin e5amen n imunofluorescen at6t prin tehnica
direct c6t i indirect.
1 T&+ni#a i,unofluor&s#&n5&i (ir&#$&. Erotiul este acoperit cu anticorpi anti-Treponema
palli"m marcai cu o substan fluorescent !izotiocianat de fluorescein% i diluai ntr-
un contracolorant !albastru de =vans%. &up splare frotiul se e5amineaz n lumina
ultraviolet.
1 T&+ni#a i,unofluor&s#&n5&i in(ir&#$&. Erotiul este acoperit cu anticorpi anti-
Treponema palli"m nemarcai !umani sau animali% care se fi5eaz pe treponeme/ ca
revelator se folosesc antiglobuline fluorescente de specie !antiglobulin uman sau
animal%, diluate ntr-un contra-colorant !figura ;%.
$rezena treponemelor nu semnific totdeauna o infecie treponemic, e5ist6nd la
nivelul mucoaselor i treponeme saprofite, dup cum nici un e5amen negativ nu e5clude
o infecie real.
Eigura +0 Treponeme - frotiu din serozitate
!sursa0 http0[[333.pelin.mf.unidl'.si[pedag[microbi.html%
Eigura ;0 Treponeme - aspect n imunofluorescen
!http0[[333.primer.ru[std[ galler@dstd[treponema.htm%
A. DIAGNOSTICUL SEROLOGIC
Treponemele patogene nefiind cultivabile, dianosticul de certitudine al sifilisului
este realizat n urma e5amenelor serologice.
$rezena anticorpilor aprui n urma contactului organismului cu Treponema
pallidum se evideniaz prin dou mari grupe de teste0
- teste cu antigene cardiolipinice/
- teste cu antigene treponemice.
&intre numeroasele tehnici i variante tehnice preconizate, cele mai utilizate sunt
urmtoarele0
Pentru bilan;ul ini;ial de depistare0
a R2R0 Aapid $lasma Aeading test/
a "DRL0 General &isease Aeaserch 2aborator@/
a T2>A0 Treponema $allidum Saemagglutination "ssa@ ! mai specific%.
Ca bilan; complementar0
a TIT0 $&s$ul (& i,o%ili'ar& a $r&/on&,&lor !Testul 1elson, specific%.
a FTA1ABS0 Eluorescent Treponema "ssa@.
>&2& Teste cu anti)ene cardiolipinice
$ermit identificarea anticorpilor de tip rea)inic. Aeaciile nu sunt specifice,
antigenul cardiolipinic fiind prezent i n celulele animale i vegetale, nu numai n
membrana citoplasmatic a treponemelor.
" fost utilizat n prima metod de determinare a sifilisului de catre Uasermann,
care a folosit reacia de fi5are a complementului a lui Cordet, de unde i denumirea
comun dat tehnicii0 reactia -ordet3Tasermann& prescurtat R?D.
Aeacia are astzi valoare istoric0 dei nc indicat de unii medici, reacia de
fi5area a complementului Cordet-Uasermann n diagnosticul serologic al sifilisului nu
mai figureaz n 1omenclatorul Mnternaional al actelor biologice din octombrie 1<88 i
A.1.1. R&a#5ia (& flo#ular& 1 $&s$ul ".D.R.L. 7"&n&ral Dis&as& R&s&ar#+ La%ora$or-8
Aeacie clasic, singura ce se mai practic nc. =ste o reac;ie de precipitare 1n
mediul lichid cu un antigen cardiolipinic de origine animal i comun cu Tr. pallidum>
Reac;ia calitativ7
7n godeul unei plci se pun n contact 8,8. ml ser de bolnav inactivat i o pictur
de antigen cardiolopidic diluat 1[*8 ml. &up agitare timp de ; minute cu a'utorul unui
agitator mecanic cu 188 rotaii[minut prezena anticorpilor se traduce prin apariia de
aglutinate !flocoane% mai mult sau mai puin voluminoase e5primate astfel0
a 8 T r&'ul$a$ n&9a$iv, f!r! agltinate 9flocoane:.
a B O r&'ul$a$ in#&r$: n&si9ur.
a B B O r&'ul$a$ sla% /o'i$iv !apariia "e flocoane vi'ibile la agltinoscop& lichi"
tlbre%.
a B B B sau B B B B T r&'ul$a$ /o'i$iv !apariia "e flococoane volminoase& vi'ibile&
iar lichi"l "evine limpe"e%.
9itirea se face cu a'utorul unei lupe puternice sau cu ochiul liber !figura .%.
Reac;ii calitative 5als pozitive se nt6lnesc n sarcin!& "ar #i %n st!ri patologice&
caQ "isproteinemii& ciro'!& hepatit! viral!& lps eritematos "iseminat& nele para'ito'e&
lepr!& to-ico"epen"ent! etc.
Eigura . 0 Aeacia G&A2 carbon !st6nga - reacie pozitiv/ dreapta - reacie negativ%
!http0[[[email protected][vdrl-carbon.htm%
Reacia cantitativ!
7n tuburi de hemoliz se realizeaz diluii de ser de bolnav, n progresie
geometric n baza , !nediluat, diluat 1[,, 1[;, 1[8, 1[1*, 1[+,X%, fiecare tratat cu antigen
cardiolipinic.
Titrl este dat de ltima "ilie pre'ent(n" o reacie slab po'itiv! BB. Testul
cantitativ constituie o bn! meto"! "e "epistare #i rm!rire a evoliei bolii #i a
tratamentli, precum i eventualele recontminri.
A.1.*. T&s$ul R2R #ar%on 7ra/i( /las,a r&(in9 $&s$8
=ste o reacie de aglutinare care utilizeaz particule de carbon nvelite cu antigen
cardiolipinic.
Dunt teste rapide, de a)lutinare pe lam7. Aeacia pozitiv se traduce prin apariia
"e grn$i "e cloare gri #i limpe'irea sspensiei!figura *%.
Eigura *0 A$A carbon test.
!http0[[333.tdh.sate.t5.us.[[email protected]:
A.1.A. R&a#5ia (& fi6ar& a #o,/l&,&n$ului 7Bor(&$1Zass&r,ann8
& mai pu;ine rezultate biolo)ice 5als pozitive, dar poate da rezultate ne)ative la
bolnavii cu si5ilis ter;iar. &ei se mai folosete n practica medical, nu mai figureaz n
1omenclatorul Mnternaional al actelor biologice din octombrie 1<88.
Cinetica anticorpilor anticar"iolipinici0 acetia apar ntre a 8-a i a ,8-a zi de la
debutul ancrului. 1ivelul lor crete rapid n timpul sifilisului secundar. De negativeaz
printre ultimele reacii serologice n sifilis. 7n lipsa unui tratament, nivelul lor se menine
n platou, la valori variabile de la un individ la altul. 7n anumite forme viscerale de sifilis,
se pot negativa n mod e5cepional.
>&8& Reactii cu anti)ene treponemice 9TP+A% FTA3A-S% N'LS$N% 'L"SA
Dunt realizate cu germeni vii sau omor6i, sau cu fraciuni antigenice specifice Tr.
pallidum.
A.*.1. T2>A 7Tr&/on&,a 2alli(u, >a&,a99lu$ina$ion Assa-8
=ste o reac;ie de hema)lutinare pasiv7 a hematiilor, sensibilizate cu un antigen
e5tras din Tr. pallidum, la contactul cu serul uman de cercetat.
Aeacia se efectueaz n microplci cu fund rotund/ n paralel cu proba de testat se
face i un test martor cu hematii nesensibilizate !figura %.
a Reacia calitativ! este un test de depistare. De folosete ser de bolnav diluat 1[88.
a Reacia cantitativ! permite stabilirea titrului de anticorpi la un bolnav depistat pozitiv
prin reacia precedent. De realizeaz diluii din serul de testat, n progresie geometric
n baza , !1[88/ 1[1*8/ 1[+,8X%. Titrul anticorpilor este dat de ultima diluie care d o
reacie pozitiv.
Cinetica anticorpilor0 testul T$S" se pozitiveaz ctre a +-a sau a ;-a sptm6n
de la debutul infeciei !apro5imativ o sptm6n de la apariia ancrului. 7n timpul
negativrii testelor serologice, T$S" este cel care persist cel mai mult.
Eigura 0 Testul T$S"
! http0[[333.bmb.eeds.ac.u4[tpha.htlm%
A.*.*. R&a#5ia (& i,unofluor&s#&n54 FTA *EE 7Fluor&s#&n$ Tr&/on&,al An$i%o(-
T&s$8
=ste o reacie de imunofluorescen indirect care se realizeaz pun6nd n contact
treponeme omor6te integral cu serul de bolnav diluat 1[,88. &up splare, anticorpii
fi5ai pe treponeme erau evideniai cu ser fluorescent antiglobuline umane totale.
&eoarece testul a dat destul de multe reacii fals pozitive, el a fost nlocuit cu
testul ET"-"bs !Eluorescent Treponemal "ntibod@-"bsorbtion test%.
A.*.A. FTA1A%s 7FTA1A%sor%i$8
&eriv din precedentul0 serul de bolnav este n prealabil absorbit cu treponeme
saprofite nepatogene !tlpina Reiter% n scopul de a suprima antigenele diri'ate ctre
antigenele de grup ale treponemelor. =tapele ulterioare sunt similare testului ET" ,88.
a Re'ltatele calitative se e5prim n trepte de pozitivitate !R T limita pozitivitii/ R R
p6n la R R R R test pozitiv%.
a Re'ltatele cantitative se realizeaz din testarea diluiilor geometrice n baza , a
serului de bolnav !1[.8/ 1[188/ 1[,88/ 1[;88X%. Titrul este dat de ultima diluie care
prezint o fluorescen RR !slab pozitiv%.
Testul este sensibil 6i speci5ic% pozitiv 1n toate stadiile bolii, confirm6nd un
diagnostic de sifilis i permiind, totodat, urm7rirea e5icacit7;ii tratamentului.
Aeacii fals positive apar n boli auto-imune, boala de 2@ma, herpesul genital.
Testul necesit personal calificat, e5perimentat i aparatur i reactivi de calitate.
Cinetica anticorpilor floresceni arat ca sunt decelabili nc de la apariia
ancrului. =5ist n toate etapele bolii, dispariia lor spontan fiind cu totul e5cepional.
De negativeaz lent.
A.*.D. D&$&r,inar&a I9M s/&#ifi#& an$i1$r&/on&,i#& 7FTA1A%s I9M8
Mmunoglobulinele MgM apar nc din a doua sptm6n de la contactul infectant.
=le sunt evideniate printr-o reacie de imunofluorescen indirect av6nd drept revelator
un con'ugat fluorescent monospecific anti-lanuri !anti MgM%.
2a bolnavii netratai ele se regsesc nc din faza secundar/ la pacienii tratai
corespunzator, imunoglobulinele scad rapid i dispar n general din prima lun care
urmeaz tratamentului.
Testul are ca indicaie ma'or sifilisul congenital, dar este util i n depistarea
infeciei recente, a reinfeciilor i n sifilisul neurologic.
&in pcate poate da at6t reacii fals po'itive, determinate de prezena factorului
reumatoid, a anticorpilor nucleari, c6t i reacii fals negative legate de competiia cu MgL
pentru receptori.
A.*.C. T&s$ul (& i,o%ili'ar& a $r&/on&,&lor 7TIT sau T2I8 sau $&s$ul N&lson
Tehnic de referin, dar care nu mai este utilizat dec6t n laboratoare de
cercetare specializate, deoarece implic ntreinerea de animale vii infectate i preuri de
cost ridicate.
Principi0 tulpini de Tr. pallidum vii, virulente, deci mobile, sunt imobilizate ca
urmare a aciunii anticorpilor bolnavului !numii VimobilizineK% i a complementului
cobaiului.
Tehnica0 dup 18 ore de incubare la +.
o
9 n atmosfer de azot mbogit cu .F
9), treponemele din tubul de testat !T% se numr i se compar cu cele dintr-un tub
martor !M% fr complement.
$rocentul de imobilizare, n care se e5prim rezultatele calitative, este dat de
raportul0 M O T[ M astfel 0
a 8 O ,8F T test negativ/
a ,1 O .8F T test suspect/
a .1 O 188F T test pozitiv.
a Testul este considerat Vto5icK, adic neinterpretabil, atunci c6nd n tubul martor
treponemele sunt moarte. 9auzele acestei to5iciti nu sunt cunoscute.
Aecoltarea probei de la bolnav se face a $en i dup ntreruperea oricrui
tratament cu antibiotice.
Cinetica anticorpilor. ,,MmobilizineleK sunt decelabile ntre a ,.-a i a ;8-a zi de
la apariia ancrului, adic la finele fazei primare i debutul fazei secundare. 7n lipsa
tratamentului, aceti anticorpi persist n toate stadiile, dispariia lor spontan fiind cu
totul e5cepional. Tratamentul precoce determin negativarea testului 1elson/ n schimb,
testul rm6ne pozitiv cu at6t mai frecvent cu c6t tratamentul a fost instituit mai tardiv.
>&> Alte teste
A.A.1 T&+ni#il& i,uno1&n'i,a$i#& (& $i/ ELISA !En'yme <inHe" ImmnoSorbent
Assay% cu diferite tipuri de antigene purificate de T> palli"m, pentru MgL i MgM.
A.A.* T&s$ul (& inunoa(&r&n541(is/ari5i& 7T2IA8.
A.A.A T&s$ul (& i,uno(is/ari5i& in$ra/&ri$on&al4 7T2ID8.
Al&9&r&a r&a#5iilor s&rolo9i#&
Multitudinea de reacii de diagnostic serologic al sifilisului se e5plic prin faptul
c nici una nu este perfect pentru a confirma sau infirma cu certitudine infecia sifilitic
pe toat durata bolii.
9a o regul general, nu este recomandabil niciodat s se foloseasc o singur
reacie serologic atunci c6nd se urmrete depistarea i diagnosticarea acesti boli. 7n
campaniile de depistare se vor e5ecuta pentru fiecare ser dou reacii dintre care
obligatoriu una cu antigen treponemic. $entru confirmarea diagnosticului i urmrirea
eficienei tratamentului se va folosi un set de teste de rutin cu antigene cardiolipinice i
treponemice. =ste indicat i efectuarea reaciilor serologice cantitative care ofer
indicaii privind scderea titrului anticorpilor n cursul tratamentului specific.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR ?N INFECGIILE CU LE2TOS2IRE
Eoarte rsp6ndite n natur, leptospirele sunt bacterii care, emise prin urina
animalelor infectate, determin la om, n mod accidental, infecii !zoonoze% cu un grad
variat de gravitate, dintre care cea mai sever form este l&/$os/iro'a i#$&ro1
+&,ora9i#4. $arte component a familiei Spirochetae, )enul Leptospira cuprinde at6t
specii saprofite !<eptospira bifle-a%, c6t i specii patogene pentr om #i animal
!<eptospira icterohaemorrhagicae& <eptospira grippotyphosa& <eptospira pomona&
<eptospira canicola%. 7n patologia umana sunt descrise peste ,+8 de serotipuri, grupate n
,+ de serogrupe, i specii patogene asociate bolilor umane i animale.
2eptospirele sunt bacterii 5in spiralate% 5le*ibile% mobile cu e*tremit7;ile de
5orma unui c=rli) !figura 8%. "u diametrul de apro5imativ 8,1 mm i o lungime cuprins
ntre *-1, mm.
Eigura 10 Mmaginea unei leptospire la microscopul electronic
!http0[[[email protected][bacteries.html%
9a urmare a polimorfismului clinic, diagnosticul este greu de stabilit n etapa de
debut a bolii. 9onte5tul epidemiologic i testele de laborator nespecifice !neutrofilie,
aspect de tip inflamator% sunt importante n vederea e5cluderii etiologiei virale.
1. RECOLTAREA 2RODUSELOR 2ATOLOGICE.
2r&l&va$&l& vor respecta o anume secvenialitate0 hemocltrile se vor recolta n
primele 18 zile de la apariia sindromului febril !s6ngele fiind recoltat pe un anticoagulant
de tipul heparinei sau o5alatului/ citratul determin o acidifiere nefast dezvoltrii
leptospirelor%, <CR, recoltat prin puncie rahidian, n a ,-a sptm6n de boal, iar
rocltrile, ncep6nd cu a +-a sptm6na de boal c6nd se recolteaz i s6nge pentru
diagnosticul serologic. $relevatele se vor recolta naintea instituirii oricrui tratament cu
antibiotice i nu vor fi congelate.
$relevatele necroptice de la cadavru vor include probe de s6nge, de esut hepatic
i de esut renal, 29A i urin.
Tin6nd cont de faptul c leptospirele se lizeaz n c6teva ore de la recoltare,
transportul i prelucrarea produselor patologice va fi c6t mai rapid.
*.DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC
8&2 '*amenul direct
=5amenul direct al /r&/ara$ului /roas/4$ la ,i#ros#o/ul #u fon( @n$un&#a$
este de interpretat cu pruden, din cauza aspectelor fals pozitive determinate de resturi
celulare, fibrin etc. =5aminarea preparatului proaspt se face ntre lam i lamel cu
obiectivul cu imersie.
$entru e5aminarea direct se folosete0 s(nge !. ml% recoltat pe un anticoagulant
fiind lsat un timp n repaus pentru sedimentarea hematiilor/ rin! !.8-188 ml% ca atare,
dup o prealabil alcalinizare prin administrarea bolnavului de bicarbonat de sodiu sau
se"imentl rinar& dup centrifugare timp de o or la +888 t[minut. De mai pot e5amina
prin acest metod i supernatantele trituratelor de fragmente de esut din ficat, rinichi
recoltate de la cadavru !, g.esut [ +-. ml diluant lsat s se sedimenteze timp de +8-*8
minute%.
2r&/ara$&l& fi6a$& i #olora$& se fac din s(nge& se"imentl rinar& <CR #i
amprente "e organe post0mortem. 9a tehnici de coloraie se folosesc metoda 0iemsa%
colora;ia Fontana3Tribondeau% cu acridin7 oran< 6i .a)o !figura <%.
#etoda 0iemsa0 frotiul se usuc sau este fi5at cu acid osmic, dup care se
coloreaz timp de +8 minute cu soluie Liemsa proaspt !, picaturi de colorant[1 ml ap
tamponat cu pS %. De spal i se recoloreaz cu Liemsa, dup care preparatul se spal
i se usuc. =5aminarea la microscopul optic se face cu obiectivul cu imersie.
Colora;ia Fontana3Tribondeau0 frotiul etalat pe o lam port-obiect se acoper cu
soluie Augge pe baz de formol, acid acetic glacial, ap distilat/ procedura se repet de
+ ori n rstimp de 1 minut, dup care se acoper lama cu acid tanic, se nclzete p6n la
emisia de vapori i se las apoi s se rceasc + minute. De spal lama i se acoper cu
filtrat de soluie amoniacal de nitrat de argint/ se nclzete din nou lama, de ,-+ ori,
p6na la emisia de vapori. &up 18 minute se spal cu ap distilat, se usuc i se
e5amineaz la microscopul optic cu obiectivul cu imersie.
Colora;ia cu acridin7 oran< este preferat de un numr important de
microbiologi. 9oloraia se practic pe preparatul etalat pe lama port-obiect i fi5at n
prealabil cu etanol. De acoper frotiul timp de , minute cu amestecul colorant !acridina
oran' 18 ml[tampon acetat pS +,. 188 ml/ se filtreaz i se pstreaz la ntuneric%. De
e5amineaz la microscopul cu fluorescen i cu obiectivul cu imersie.
Eigura <0 Mmaginea unei leptospire prin coloratia Gago
!sursa 0 http0[[333.bioltrop.org[1.-techbacterio[leptospira.'pg%
8&8& "zolarea
7nsm6narea n vederea izolrii leptospirelor se efectueaz in vivo i in vitro>
3 "n vitro, /& ,&(ii s/&#ial& s&,isoli(& i li#+i(&, pe baz de pepton, mbogite cu ser
de iepure i adaos de factori care stimuleaz creterea i multiplicarea germenilor, precum
vitamina C1, vitamina C1,, fier, hemoglobin, acid oleic. Mediile au pS ,,-,;. 2a noi
este folosit indeosebi mediul !orto5. Mai sunt comercializate i utilizate mediile specifice
Tween3albumin7 sau mediul '#J+ !Ellinghasen0,cCllogh mo"ificat "e Gohnson #i
7arris%.
S;n9&l& total se nsm6nteaz n + tuburi, fiecare tub conin6nd c6te . ml de
mediu de cultur, n cantitate cresctoare de la o pictur la + picturi/ urina i LCR se
nsmneaz ca atare sau sedimentul lor !8,. ml inocul[tub cu . ml mediu de cultur%.
9ulturile sunt incubate la +8
o
9, la ntuneric, timp de , luni. "gitarea periodic a
culturilor lichide stimuleaz creterea !metabolism aerob%.
Dptm6nal se va efectua un e5amen direct la microscopul cu fond ntunecat, cu
respectarea strict a normelor de protecie n vederea evitrii contaminrii umane
accidentale !risc biologic de clasa a ,-a i a +-a%. 96nd se observ leptospire se fac
subculturi pe medii proaspete.
-"n vivo se face prin ino#ular& la #o%ai sau, de preferat, la +a,s$&r care este sensibil la
mai multe serovaruri. Tehnica prezint c6teva inconveniente deoarece leptospirele i
pierd repede virulena in vitro, nu toate serovarurile produc semne clinice evidente, iar
sensibilitatea animalelor de laborator variaz n funcie de indivizi !sensibilitatea poate fi
crescut printr-un tratament prealabil cu ciclofosfamid%.
8&>& "denti5icarea
9aracterele morfologice, mobilitatea i creterea pe mediile speciale susin
apartenena la genul <eptospira.
a. Cara#$&r& (& #ul$ur4
$e ,&(iil& s/&#ifi#& s&,isoli(& leptospirele se "e'volt! lent& %n grosimea
me"ili& la 30A mm "e la sprafa!, determin6nd apariia a .-* tipuri de colonii
identificate prin reacia o5idazelor. Dpeciile patogene au nevoie de un interval de timp
mai mare, de peste ,8 de zile, pentru a se dezvolta, n timp ce leptospirele nepatogene
apar dup zile de la nsm6nare. 9reterea leptospirelor se apreciaz prin studiul
culturilor la microscopul cu fond ntunecat.
$e ,&(iil& li#+i(& creterea leptospirelor nepatogene determin o uoar
opalescen, n timp ce tlpinile patogene n pro"c mo"ificarea clarit!ii me"ili.
%. Cara#$&r& ,orfolo9i#&.
La microscopul cu 5ond 1ntunecat leptospitele apar ca microorganisme "e form!
spiralar!& e-trem "e mobile& c mi#c!ri "e rotaie %n $rl a-li longit"inal& "e flectaie
#i translaie& sbiri #i str!lcitoare pe fon"l %ntnecat al c(mpli.
Frotiurile colorate 0iemsa i e5aminate cu microscopul optic evideniaz
leptospirele care au un aspect spiralat reglat& capetele %n"oite ca n c(rlig i o lungime
dubl fa de dimensiunile unei hematii.
2a colora;ia special7 Fontana3Tribondeau leptospirele apar colorate maron spre
negr pe fon" galben0be$ !figura 18%.
Nu se coloreaz7 0ram.
Eigura 180 "spectul leptospirelor la coloratia Eontana-Tribondeau
!http0[[333.microbisome.com%
#. Cara#$&r& ,&$a%oli#&
7n cazul leptospirelor patogene acestea sunt caracterizate printr-o activitatea
rea'ic! slab!& folosesc acetatl "e calci ca srs! "e carbon #i fermentea'! inconstant
'aharrile.
Dunt bacterii strict aerobe& catala'! po'itive& o-i"a'! negative.
(. Cara#$&r& (& /a$o9&ni$a$&
"nimalele de laborator inoculate cu leptospire virulente dezvolt un sindrom
febril, icter intens, hemoragii subcutanate i viscerale, urmate de deces n ;-. zile.
$robele necroptice din ficat, rinichi, s6nge, plam6ni evideniaz prezena leptospirelor.
9obaii inoculai cu tulpini cu virulen redus, se vindec spontan dup un
sindrom febril ce apare la -1, zile de la inoculare. "nimalele sunt sacrificate n a ,1-a zi
de la inoculare, la e5amenul post mortem constat6ndu-se n special leziuni hemoragice
pulmonare, leziunile hepatice i renale fiind mai rare.
Eragmentele de esut recoltate sunt nsam6nate pe mediile de cultur specifice
pentru izolarea leptospirelor.
&. Cara#$&r& an$i9&ni#&
$entru "eterminarea tipli serologic al leptospirei izolate se utilizeaz r&a#5ia (&
,i#roa9lu$inar&1li'4 /& la,4. $e o lam de sticl port-obiect se pune o pictur din
cultura pozitiv cu leptospire i o pictur ser standard. 2ama se las n repaus timp de 1.
minute dup care se e5amineaz la microscopul cu fond ntunecat. 7n prezena serului
specific se produce aglutinarea leptospirelor.
Aezultatul se e5prim n grade de intensitate a pozitivrii reaciei de la O la RRRR0
- la o reacie negativ, leptospirele apar izolate pe c6mpul miscroscopic, predomin6nd
formele libere/
- la o reacie slab pozitiv !R% apar c6teva leptospire aglutinate sub form de gheme,
predomin6nd ns leptospirele libere/
- ntr-o reacie pozitiv !RR% predomin ghemele de leptospire/
- n reacia intens pozitiv !RRR% ghemele sunt rare, iar leptospirele libere lipsesc/
- n reacia intens pozitiv !RRRR% lipsesc ghemele i leptospirele.
A. DIAGNOSTIC IMUNOBIOLOGIC
&iagnosticul serologic este rezervat anumitor laboratoare de specialitate din
cadrul 9entrelor 1ationale de Aeferin. Testele se pozitiveaz din a 8-a sau a 18-a zi de
boal c6nd apar anticorpii specifici. Titrul de anticorpi scade n urmtoarele +-* luni, un
oarecare titru rezidual put6nd persista mai muli ani. Dtudiul cineticii anticorpilor este
indispensabil pentru diagnosticul biologic, testele urm6nd a fi efectuate n dinamic, la
interval de , sptm6ni.
Testul 'L"SA
Eolosete un antigen nepurificat e5tras dintr-o tulpin de <eptospira patoc anti-
MgM umane cuplat cu pero5idaz. Titrul de grani este de 1[;88. "nticorpii serici
detectabili apar din ziua a 8-a de boal ce urmeaz instalrii sindromului febril.
$rincipalul inconvenient este legat de faptul c este destul de des negativ atunci c6nd
infecia este determinat de anumite serotipuri precum <> grippotyphosa sau astralis. 7n
forma sa actual testul =2MD" este considerat un test de depistare.
RFC cantitativ7
Eolosete ca antigen <eptospira bifle-a Patoc I !, uniti antigenice%, un sistem
hemolitic !eritrocite de oaie i ser hemolitic%, seruri pereche de la bolnav, inactivate,
recoltate unul n prima sptm6n de boal, al doilea dup -1, zile i ale5ina titrat !vezi
tehnica AE9%. "nticorpii fi5atori de complement ating valoarea ma5im n sptm6na a
+-a i a ;-a de boal, scz6nd ctre finele lunii a doua de boal. "u valoare n
diagnosticul precoce al bolii.
Reac;ia de micro3a)lutinare
9unoscut i sub numele de reac;ia de a)lutinare3liz7 #artinLLepetit% reacia
const n evaluarea la microscopul cu fond ntunecat a gradului de aglutinare a
leptospirelor cu serul de bolnav. Aeacia rm6ne tehnica de referin pentru determinarea
serotipului de leptospire i are la baz un set "e antigene format "in tlpini vii,
reprezentative, ale principalelor serogrupe !,8-,+ de antigene%.
9a tehnic, pe o lam port-obiect de sticl se pun at6tea picturi din serul de
bolnav, diluat 1[.8, c6te tulpini de testat sunt n setul de reacie. De las n contact 1.-,8
de minute dup care se e5amineaz la microscop.
Microaglutinatele din reacia pozitiv dau o imagine caracteristica de ,,cer
%nstelatFF sau ca nite gheme mici. 2iza !2% se caracterizeaz prin umflarea i imobilizarea
leptospirelor care capt un aspect granular. "glutinarea se noteaz0 R dac sunt ;-.
gheme, RR dac sunt peste * gheme i leptospire libere, RRR c6nd are loc aglutinarea
tuturor leptospirelor de pe lama e5aminat. ,n ser este considerat pozitiv& la o "ilie
"at! #i pentr tlpina testat!& dac7 cel pu;in I4R dintre leptospire sunt a)lutinate 5a;7
de o tulpin7 martor.
2a om titrul prag de referin corespunde valorii de 1[188, fiind semnificativ
pentru diagnostic i creterea n dinamic a titrului cu cel puin ; trepte binare la serul de
convalescen fa de serul de debut.
)mul este sensibil la toate serotipurile de <eptospira interrogans sens lato,
gravitatea bolii depinz6nd mai mult de inocul, de virulena tulpinii precum i de gradul de
sensibilitate individual, dec6t de serovarul propriu-zis. Toate serotipurilor pot antrena o
form grav, letal, cu toate acestea serovarurile grippotyphosa sau pomona, i mai ales,
icterohaemorrhagiae au reputaia de a fi cele mai patogene.
"IRUSOLOGIE
1. DEFINIGIE. CARACTERE GENERALE. CLASIFICARE
Girusurile, form de via situat la limita inferioar de organizare biologic, sunt
microor)anisme de dimensiuni 5oarte reduse !sub limita de decelare prin microscopie
optic%, a cror multiplicare necesit realizarea obligatorie a parazitismului intracelular.
"ceast necesitate se impune datorit faptului c virusul, fiind lipsit de aparat propriu de
sintez, folosete ribozomii celulei parazitate !vegetal, animal, bacterian% n vederea
programrii propriilor sinteze.
$rintre caracterele generale ale unui virus pot fi enumerate0
- "imensini re"se "e or"inl nanometrilor/
- orice virus este compus dintr-un mie' "e aci" ncleic 9fie A*+& fie AR+& nicio"at!
ambele:, ncon'urat de proteine de suprafa ce alctuiesc capsida viral/
- sunt lipsite "e echipament en'imatic, pentru programarea propriilor sinteze utilizeaz
VmaterialeK !aminoacizi i energie% mprumutate de la celula gazd/
- infecia viral a celulelor organismului poate determina o viroz care evolea'! fie
inaparent& fie prin manifest!ri clinice #i fi'iopatologice caracteristice.
CLASIFICAREA "IRUSURILOR
(up7 natura celulei parazitate virusurile se mpart n0
- %a#$&ri&n&/
- ani,al& 7#a$&9orii i,/or$an$& /&n$ru /ra#$i#a ,&(i#al48/
- v&9a$al&.
Girusurile bacteriene !bacteriofagi-fagi%, pot fi clasificate, dup acidul nucleic
coninut, n fagi "&1 i fagi "A1, iar dup tipul de relaie bacteriofag-celul bacterian
gazd, n fagi litici i fagi simbiotici sau temperai.
Girusurile animale se mpart, la r6ndul lor, dup mai multe criterii0 dimensiuni,
tropism, acidul nucleic coninut etc.
(up7 dimensiuni0
- virusuri ,i#i, cu diametrul de 1.-+8 nm0 picornavirsrile 9enterovirsri:/
- virusuri ,iPlo#ii, cu diametrul de 8-188 nm0 mi-ovirsrile& virsrile grpli
7erpes& rhab"ovirsrile& arbovirsrile& virsrile 7IJ/
- virusuri ,ari, cu diametrul de ,88-+88 nm0 po-virsrile.
(up7 tropism0
- virusuri &n$&ro$ro/&0 enterovirsrile& rotavirsrile/
- virusuri n&uro$ro/&0 arbovirsrile& tlpinile neropatogene "e enterovirsri #i
"e virs r$eolos& virsl rabic/
- virusuri (&r,o$ro/&0 virsrile grpli 7erpes& po-virsrile& virsl r$eolos&
virsl rbeolic/
- virusuri #u $ro/is, /&n$ru #4il& r&s/ira$orii0 mi-ovirsrile& a"enovirsrile&
coronavirsrile& rinovirsrile/
- virusuril& +&/a$o$ro/&0 virsrile hepatitelor virale& nele virsri Co-sacHie "e
grp ?& nele arbovirsri/
- virusuri li,fo#i$o$ro/&0 virsl $$eolos& virsrile 7IJ.
:nii ageni virali prezint afiniti multiple. "stfel, unele variante de virus
ru'eolos, pe l6ng tropismul pentru cile respiratorii i pentru piele, au i neurotropism,
unele enterovirusuri manifest pe l6ng enterotropism i neurotropism, n timp ce
virusurile 9o5sac4ie de grup C pot fi concomitent hepatotrope, pancreatotrope,
miocardotrope i neurotrope.
(up7 simetrie virusurile se mpart0
- virusuri #u si,&$ri& i#osa&(ri#40 parvovirsri& a"enovirsri& 7erpesvirsri #i
picornavirsri/
- virusuri #u si,&$ri& +&li#oi(al40 orthomy-ovirsri& paramy-ovirsri.
(up7 acidul nucleic con;inut virusurile animale se mpart n virusuri "&1 i virusuri
"A1 !tabel 1%.
A#i( nu#l&i# Gru/ virus E6&,/l&
ARN
$icornavirus =nterovirusuri0 polio, =9S), 9o5sac4ie
Girusul hepatitei "
Ahinovirusuri
)rthom@5ovirus
uri
Girusurile gripale
$aram@5ovirusu
ri
Girusurile paragripale
Girusul ru'eolos
Girusul urlian
Girusul respirator sinciial
Ahabdovirus Girusul rabic
"rbovirus Girusurile encefalitice transmise prin
artropode
Togavirus Girusul rubeolic
Aetrovirus Girusurile oncogene !tip 9%
Girusurile SMG
A#i( nu#l&i# Gru/ virus E6&,/l&
ADN
"denovirus "denovirusuri umane
"denovirusuri simiene
"denovirusuri murine
Serpesvirus Girus Serpes simple5
Girus varicella-zoster
Girusul citomegalic
Girusul =pstein-Carr
$o5virus Girusul vaccinia
Girusul variolic
)ncodnavirus Girusuri "&1 oncogene grup $apova
!virus papiloma, virus pol@oma%
Sepadnavirus Girusul hepatitei C
$arvovirus Girusuri asociate adenovirusurilor
Tabel 10 9lasificarea virusurilor dup acidul nucleic coninut
). -OR*OLOGIE VIRAL,
Girusurile posed o varietate de forme i o structur diferit, uneori foarte
comple5 !figura 1%.
*.1. For,a virusurilor
=5ist virusuri cu 5orm7 cilindric7 !variante morfologice de virus gripal/ unele
virusuri vegetale0 virusul mozaicului tutunului%, s5eric7 !virusurile gripale,
param@5ovirusurile%, cristali5orm7 sau poliedric !enterovirusurile0 polio%, form de
prism7 sau c7r7mid7 !virusurile po5%.
*.*. S$ru#$ura virusurilor
)rice particul viral !virion% conine un mie' "e aci" ncleic 9ncleoi": i un
strat proteic ncon'urtor, denumit capsi"!. 2a unele virusuri e5ist la e5terior i un
%nveli# nmit anvelop! !peplos%.
Acidul nucleic 9nucleoidul:
Miezul de acid nucleic, constituit 5ie din A(N% 5ie din ARN 9niciodat7 din
ambele tipuri:, are structur polinucleotidic0 polimer de radicali fosforici, pentoz i
baze purinice sau pirimidinice !adenin, guanin, timin i citozin n cazul "&1 viral i
adenin, guanin, uracil i citozin n cazul "A1 viral%.
Ma'oritatea virusurilor animale conin o molecul7 de acid nucleic monocatenar,
dar e5ist i virusuri cu acid nucleic bicatenar !reovirusurile conin dou lanuri de "A1
legate complementar%.
"cidul nucleic poate fi dispus liniar% circular sau 1ncol7cit n interiorul virionului
i este constituit din mai multe se)mente sau dintr3o sin)ur7 molecul7.
Acidul nucleic este )enomul virusului con;in=nd )enele% capabile s7 codi5ice
sintezele de tip viral 1n celula parazitat7&
Capsida 6i 1nveli6ul
Ca/si(a este dispus n 'urul nucleotidului viral, form6nd, mpreun cu acesta, un
comple5 denumit nucleocapsid.
9apsida conine proteine virale, grupate n uniti denumite #a/so,&r&. Aelaiile
spaiale acid nucleic-capsid sunt foarte stricte, e5ist6nd un raport ntre subunitile
!nucleotidele% moleculei de acid nucleic i capsomerele capsidei.
"naliza chimic a compoziiei capsidei relev0
1
*
A
D
C
K
L
M N
1E
11
1*
1A
1D
1C
10 Cacteriofag T;/ ,0 Cacteriofag M1+/ +0 Girusul rabic/ ;0 Sematie/ .0 "denovirus/ *0 Ainovirus/ 0
9orpuscul elementar 9hlam@dia/ 80 Cacteriofag MD,/ <0 Girusul mozaicului tutunului/ 180 Giroid/ 110
Girusul polio/ 1,0 $rion/ 1+0 Girusul vaccinia/ 1;0 Girusul =bola/ 1.0 =.coli
Eigura 10 Morfologie viral !comparaie bacterii - virusuri%!sursa0
http0[[333.futuradsciences.com%
- proteine simple% omo)ene !poliovirusuri i alte enterovirusuri%/
- proteine comple*e0
protein! sport legat! "e lipi"e0 fosfolipide, colesterol, lecitin !m@5ovirusuri,
param@5ovirusuri, po5virusuri%/
protein! sport legat! "e fracini glci"ice glicoproteine !arenavirusuri,
virusurile oncogene de tip 9%.
2a virusurile mici e5ist un singur tip de monomer capsidal, constituit din lanuri
polipeptidice omogene sub raportul greutii moleculare.
7n general virusurile animale mai comple5e, virusurile mari i cele cu nveli, au o
compoziie capsidic mai comple5 dec6t virusurile mici i mi'locii fr nveli,
monomerii fiind alctuii din lanuri polipeptidice heterogene.
?nv&liul 7/&/los sau anv&lo/48 este constituit at6t din proteine virale 9simple
sau comple*e:, c6t i din material lipoproteic ?1mprumutat@ de la celula )azd7, n
cursul multiplicrii intracelulare a virusului.
=5emple de virusuri cu nveli0 virusurile gripale, param@5virusurile !virusurile
paragripale, virusul ru'eolos, virusul urlian%, virusurile SMG, arbovirusurile, virusul rabic.
=lementele nveliului pot fi asamblate sub forma unei VmantiiK, de la care
pornesc prelun)iri !virusul gripal, virusul SMG%.
2a nivelul nveliului se pot e*prima anti)ene de mare nsemntate prin
imunogenitatea lor, care servesc uneori i la ataarea virionului de receptorii celulei-
gazd !antigenele hemagltininice #i neramini"a'a la virsl gripal& antigenele
glicoproteice gp .3/ #i gp 4.& la virsrile 7IJ%.
*.A. TI2URI DE SIMETRIE "IRAL
7n cazul structurii unui virus, aezarea spaial a capsomerelor capsidei, ca i
poziia acestora fa de unitile de baz ale acidului nucleic viral !nucleotide% prezint
caracteristici, ceea ce a dus la ncadrarea virusurilor n categoria formelor anizotrope de
organizare a materiei, asigur6nd componentelor structurii un ma5imum de energie legat
!respectiv, un minimum de energie liber%.
=5ist dou7 tipuri de simetrie0 helicoidal7 6i icosaedric7.
Simetria helicoidal7
9omple5ul nucleocapsidei este dispus sub forma unei spirale !elice%, constituit din
nucleoid !e5. virusul mozaicului tutunului% sau ntreaga nucleocapsid !e5. virusurile
gripale%.
=licea !heli5ul% prezint un singur a5 rotaional care coincide cu a5ul cilindrului
nucleocapsidei sau a nucleoidului. Monomerii capsidei formeaz capsomere identice i
sunt ei nii identici, stabilind cu monomerii vecini acelai tip de legturi.
Monomerii capsidei formeaz o figur n form de panglic !figurile , i +%.
Simetria icosaedric7
=5ist la virusuri cu dimensiuni mici !enterovirusuri% i mi'locii !virusurile
grupului Serpes%.
"cidul nucleic, de regul monocatenar, este dispus central, ca un ghem la5. 7n
'urul lui sunt aezate capsomerele, dup planuri de simetrie riguroase, astfel nc6t
conturul nucleocapsidei, privit n plan, apare ca un he5agon i privit n spaiu apare ca o
figur poliedric, cu fee i muchii egale ntre ele VicosaedruK !,8 de fee, +8 de muchii,
1, v6rfuri%.
Girusul =bola Dimetrie helicoidal cu nveli
Eigura +0 Girusuri cu simetrie helicoidal cu nveli %!sursa0
http0[[333.futuradsciences.com%
Dimetrie helicoidal cu nveli $articule virale gripale
Eigura ,0 Girusuri cu simetrie helicoidal cu nveli %!sursa0
http0[[333.futuradsciences.com%
Dpiculi
Dpiculi
Monomerii proteici ai capsomerului * sau . pentru fiecare capsomer !* -
capsomer he5agonal i . - capsomer pentagonal%.
1umrul de capsomere n icosaedru este de ;,, din care 1, pentagonale i +8
he5agonale.
"ezarea capsomerelor se face dup anumite a5e0 a5ele ideale trec prin centrul
edificiului i prin colurile capsidei. "5ele ce trec prin coluri mpart icosaedrul n .
sectoare. &ac icosaedrul se nv6rtete n 'urul a5ului central cu 1[. la fiecare rotaie, se
obine aceeai figur. &eci prin rotaie complet figura se reproduce pe ea nsi de . ori.
=5ist i a5e de simetrie care mpart icosaedrul n + sectoare egale !a5e ce trec
prin centrul feelor triunghiulare%. &ac icosaedrul se rotete cu 1[+, la fiecare rotaie se
va reproduce aceeai figur.
&ac se rotete cu ] a5ul ce unete centrele a , capsomere he5agonale opuse,
icosaedrul poate fi reprodus.
&eci, icosaedrul viral are o simetrie rotaional de tip .0 +0 ,, cu unele e5cepii
!adenovirusuri, reovirusuri%.

A. RELAGII "IRUS1CELUL GA3D
7ntre virusul animal i celula gazd pe care o paraziteaz se pot stabili dou feluri
de relaii0 de tip litic !citocid% i de tip simbiotic.
A.1. R&la5ii virus1#&lul4 9a'(4 (& $i/ li$i# 7#i$o#i(8
7n acest tip de relaie !figurile ; i .%, infecia cu virus a unei celule animale se
soldeaz cu moartea celulei 6i cu eliberarea de particule de virus neo5ormate 9pro)eni:
n mediul e5tracelular.
=tapele acestei relaii sunt0 adsorbia, penetrarea, decapsidarea, sinteza
particulelor virale neoformate, eliberarea particulelor virale neoformate.
A(sor%5ia
$rocesul implic doi timpi0 colizinea i ataarea.
Coliziunea reprezint ali/ir&a /ar$i#ul&i 7/rin si$usuril& viral& (& a$aar&8 (&
su/rafa5a #&lul&i s&nsi%il& !tabel ,%. =a depinde, pe de o parte, de proporia ntre
numrul de virioni i numrul de celule !raportul de infectivitate%, iar pe de alt parte, de
unele condiii ale mediului de reacie !temperatur, pS, concentraie ionic%.
Ata6area semnific unir&a s$r;ns4 @n$r& virion i un&l& 'on& (& /& su/rafa5a
#&lul&i, numite receptori.
R&#&/$orii #&lulari pot fi speci5ici anumitor a)en;i virali, e5plic6nd tropismul
unor virusuri fa de anumite substrate celulare !m@5ovirusuri, picornavirusuri% sau pot fi
nespeci5ici !neselectivi n raport cu mai multe categorii de virusuri - arbovirusuri,
po5virusuri%.
- Ata#area specific! a my-ovirsrilor 9v> gripale: #i paramy-ovirsrilor 9v> rlian& v>
bolii +eEcastle: se datorete in$&rv&n5i&i un&i &n'i,& viral& 7n&ura,ini(a'a8 care
prezint proprietatea de a ataca substana receptor constituit din situsuri de
mucoprotein !bogate n acid neuraminic sau sialic%.
A9&n$ viral Si$us viral (& a$aar& R&#&/$ori #&lulari
Girus gripal hemaglutinin,
neuraminidaz
!nveli%
mucoproteine !acid sialic%
Girus SMG gp 1,8 !nveli% receptor limfocitar 9&;
Girus poliomielitic situs capsidal receptor specific !cu e5primare
diferit in vivo sau in vitro pe
celula renal de maimu%
Girus rabic hemaglutinin
!nveli%
Aeceptor acetilcolinic !muchi
striat%
Girus Serpes
simple5
g !nveli% Aeceptor pe celula fibroblastic de
hamster, oarece, om
Tabel ,0 =5emple de situsuri virale de ataare i receptori celulari
- Ata#area specific! a picornavirsrilor a fost cercetat ndeosebi la poliovirusuri.
"stfel, e5trg6ndu-se un material proteic din membranele celulelor susceptibile la
infecia cu poliovirusuri, s-a demonstrat capacitatea acestui material de a inactiva
virusul. 7n prima etap a atarii, receptorii specifici poliovirusurilor realizeaz un
comple5 reversibil, pentru ca, n timp, legtura receptor-virus s devin stabil
!capacitatea infectiv a virusului nu mai poate fi recuperat prin diverse tentative de
desfacere a comple5ului%. Tot referitor la receptorii pentru poliovirusuri este de remarcat
c, uneori, celulele aparin6nd unei anumite specii sau unui anumit allotip, rezistente in
vivo la infecia poliovirotic, devin deosebit de sensibile la acelai virus, odat cu
scoaterea lor din organism i cultivarea in vitro !e5emplu0 celulele renale de maimu%.
"cest fenomen poate fi e5plicat prin derepresarea in vitro a unei gene celulare care
codific e5primarea activitii receptorului de membran pentru poliovirus. $e de alt
parte, sunt i situaii n care poliovirusul se ataeaz pe receptorii celulari, fr a se
declana etapele consecutive ale infeciei de tip litic, ceea ce relev comple5itatea
fenomenului de ataare, n funcie de tipul de celul i de virusul infectant.
2&n&$rar&a
7n aceast etap are loc trecerea virusului din e5teriorul celulei n interiorul
acesteia. Cn)lobarea virusului 1n citoplasm7 9?virope*ie@: a fost confirmat numai n
unele cazuri de relaie de tip litic !poliovirusuri, m@5ovirusuri, reovirusuri%, prin prezena
n citoplasma celulelor virus infectate, n primele ore de la iniierea infeciei virale, a unor
vacuole de fagocitare care conin particule virale intacte.
D&sfa#&r&a #a/si(&i
Dpre deosebire de bacteriofagi, la care numai acidul nucleic este Vin'ectatK n
celula parazitar, la virusurile animale se impune pierderea unei pri a capsidei virale,
prin enzimele lizozomale ale celulei. 2izozomii se aliniaz de-a lungul pereilor
vacuolelor de fagocitare, eliber6nd enzime litice care desfac at6t peretele vacuolei, c6t i
o parte a capsidei virionilor coninui n vacuol.
$entru virusurile A(N mari 9po*virusuri: decapsidarea este catalizat i de
enzime virus3induse n celula gazd.
Sin$&'a /ar$i#ul&lor viral& n&ofor,a$&
=ste cea mai important etap a relaiei virus celul gazd de tip litic i const n
esen, din codi5icarea unui nou pro)ram% 5olosind aparatul ribozomal al celulei
parazitate. "ceast etap cuprinde dou categorii de fenomene0 precoce !Vearl@K% i
tardive !VlateK%.
FENOMENE 2RECOCE
7n primele *-8 ore de la ptrunderea virusului n celul, acidul nucleic viral induce
dou procese0
- Oprirea sinte'elor proteice "e tip cellar& prin ;parali'area fncional! a A*+
cellar/
- Co"ificarea nor en'ime nmite polimera'e virs0specifice !"A1 polimeraza virus-
indus, n cazul virusurilor "A1/ "&1 polimeraza virus-indus n cazul virusurilor
"&1%. "ceste polimeraze catali'ea'! formarea "e copii ale aci"li ncleic viral,
folosind ca matrice nucleoidul viral decapsidat dup intrarea n celul. De iniiaz, n
acest fel, replicarea acidului nucleic viral, cu apariia nor mltiple ;copii conin(n"
genele "e tip viral.
Eigura ;0 =tape ale infeciei virale0 "taare, penetrare, decapsidare !sursa0
http0[[333.futuradsciences.com%
"taare =ndocitoz $enetrare &ecapsidare
FENOMENE TARDI"E
- V9opiileK de acid nucleic viral programeaz la nivelul ribozomilor celulari sinteze
proteice noi, folosind ca Vmaterie primK aminoacizii celulari, prin legarea acestora ntr-
o ordine !secven% diferit, conform modelului nscris n genomul viral.
7n cazul virusurilor "A1, moleculele de acid nucleic viral rezultate din replicarea
intracelular reprezint ele nsele un "A1 mesager nou, VcititK direct de ribozom.
7n cadrul virusurilor "&1, pe matricea acidului nucleic viral se sintetizeaz mai
nt6i un "A1 mesager virus specific, care funcioneaz apoi ca un nou
VprogramatorK la nivelul ribozomilor.
- $roteinele virale sintetizate de ctre ribozomi, potrivit unui nou program, se aeaz n
'urul moleculelor de acid nucleic viral i astfel se produce asamblarea 6i maturarea
particulelor virale neo5ormate. 7n cadrul acestui proces, are loc i aezarea subunitilor
capsidale !monomerilor% dup simetria caracteristic tipului de virus infectant, fenomen
codificat i el de ctre unele gene virale.
Eli%&rar&a /ar$i#ul&lor viral& n&ofor,a$&
Jirionii no formai, care, cu rare e5cepii !mutante% sunt identici morfologic i
genetic cu particula care a iniiat infecia viral a celulei, snt eliberai %n me"il
e-tracellar. &e regul, acest fenomen se nsoete de dezinte)rarea 9moartea: celulei
)azd7.
Eigura .0 =tapele ciclului viral de tip litic !sursa0 http0[[333.futuradsciences.com%
"taare
$trundere
Aeplicare
=liberare
"samblare
A.*. RELAGII "IRUS1CELUL GA3D DE TI2 SIMBIOTIC
7n urma acestui tip de relaie virus-celul gazd, celula nu moare% ci c=6ti)7
propriet7;i noi.
=tapele infeciei virale de tip simbiotic sunt asemntoare cu cele din infecia de
tip litic n ce privete adsorbia, penetrarea i desfacerea capsidei. &eosebirile apar n
etapele urmtoare0 programarea sintezelor de tip viral, apariia unor proprieti de tip nou.
Pro)ramarea sintezelor de tip viral
Mnducerea unui nou program de ctre acidul nucleic viral n celula animal virus
infectat nu se soldeaz cu oprirea activitii "&1 celular, astfel nc6t ribozomii vor
sintetiza concomitent proteine celulare 6i virale. Modul programrii sintezelor virale
difer la virusurile "&1 i "A1 capabile s stabileasc relaie simbiotic.
"irusuril& ADN
"&1 viral ptruns n celul poate urma dou modele de codificare a sintezelor
proprii !figurile * i %.
Mo(&lul 10 "&1 viral se integreaz !inser% ntr-o zon a "&1 celular. :lterior, se va
sintetiza un "A1 mesager complementar mi5t, conin6nd anticodoni de tip celular i
anticodoni de tip viral. "A1 mesager va a'unge la ribozomi, care vor VcitiK mesa'ul.
Mo(&l *0 "&1 viral nu se integreaz n genomul celular, ci induce sinteza unei enzime
precoce !"A1-polimeraza virus indus% care catalizeaz sinteza de "A1 mesager nou, pe
matricea de "&1 viral. $e de alt parte, "&1 celular comand sinteza de tip celular prin
intermediul "A1 mesager normal. 7n acest fel, nii ribo'omi vor citi mesa$l "e pe
molecla "e AR+ mesager cellar& alii "e pe AR+ mesager "e tip viral& %n aceea#i cell!
ap!r(n" proteine cellare #i virale.
$roteine capsidale
"A1m
Eenomene precoce
ale transcripiei
Eenomene tardive
ale transcripiei
"taarea virusului pe celula gazd
$trunderea
virusului n
celul
Translaie
Girion
complet
Girion eliberat
$apovavirus
"stfel, un acela#i ribo'om va sinteti'a proteine c secvene "e aminoaci'i "ictate
"e A*+ cellar& precm #i proteine c secvene "e aminoaci'i "ictate "e A*+ viral.
"irusuril& ARN
7n cazul virusurilor "A1, mecanismul integrrii acidului viral n "&1 celular a
fost propus de Temin 1<,, modelul fiind confirmat apoi e5perimental la virusurile
integrate de tip 9 !retrovirusuri%. $rocesul este cunoscut sub numele de ?revers3
transcrip;ie@. "A1 viral ptruns n celul reprezint o nou matrice, care induce
formarea unei enzime, numit revers-transcriptaz. "ceast enzim catalizeaz sinteza
unui A(N complementar 5olosind ca matrice ARN viral !invers dec6t la celula eucariot
normal, unde pe matricea de "&1 se formeaz "A1 complementar%.
"&1 complementar viral !VprovirusK% se integreaz n "&1 celular i apoi
urmeaz aceeai cale ca la modelul 1 de programare de la virusurile simbiotice "&1,
rezult6nd proteine mi5te celular-virale.
VAevers-transcripiaK, caracteristic pentru virusurile oncogene tip 9 i pentru
virusul SMG, implic intervenia mai multor enzime, dup cum urmeaz !tabel +%0
S&#v&n54 a r&v&rs1$rans#ri/5i&i En'i,& viral& r&s/onsa%il&
Eormarea primei catene de "&1
proviral
Aevers-transcriptaza
&epolimerizarea nucleotidelor din "A1
viral care nu funcioneaz ca VmatriceK
Aibonucleaza S
Eormarea "&1 proviral dublu catenar
!ataarea celei de a doua catene%
Aevers-transcriptaza
Mntegrarea provirusului n "&1 celular Mntegraza
"ctivarea genomului viral activat 9omple5 genic de activare
!e5emplu0 tat[nef la virusul SMG%,
plus un comple5 enzimatic
Tabel +0 =tape ale revers-transcripiei i enzimele responsabile
Eigura *0 9iclul replicativ viral !sursa0 http0[[333.futuradsciences.com%
A/ari5ia unor /ro/ri&$45i noi
9onsecina stabilirii unei relaii de tip simbiotic virus-celul gazd, const n
apariia unor proprieti modificate ale celulei infectate fa de celula normal-
neinfectat.
$rintre proprietile modificate menionm0
- Trans5ormarea celular70 implic modificri profunde morfologice, genetice,
biochimice, de suprafa, de potenial oncogen, proces comple5, echivalent p6n la un
punct malignizrii/
- '*primarea de anti)ene noi pe supra5a;a celulei/
- "nstalarea unor modele metabolice particulare, care asigur un echilibru ntre
sinteza concomitent de proteine de tip celular i de tip viral n aceeai celul.
Mecanismele care stau la baza apariiei acestor noi proprieti sunt, pe de o parte,
introducerea% concomitent cu acidul nucleic viral% a unor )ene noi, capabile s codifice
proprietile modificate !e5emplu0 genele VpolK, VgagK, VenvK, VoncK, ale virusurilor
oncogene "A1-retrovirusuri, codific sinteza revers-transcriptazei, proteinelor p18, p1,,
p1., p+8, glicoproteinei ma'ore gp8, malignizarea celulei%, iar pe de alt parte,
derepresia unor )ene celulare datorit7 p7trunderii 6i inte)r7rii acidului nucleic viral 1n
9elula
gazd
9atene
"A1
identice
"1& celul gazd
"A1 viral
dublu catenar
Maturarea
retrovirusului
Dinteza "&1
proviral prin
reverstranscripie
Mntegrarea "&1 proviral
n "&1 celulei gazd
Transcripia
provirusului n dou
catene "A1 identice
care codific sinteza de
proteine virale
$enetrarea retrovirusului n
celula gazd
$roteine
virale
Eigura 0 9iclul replicativ al retrovirusurilor !sursa0 http0[[333.futuradsciences.com%
)enomul celulei cu codificarea consecutiv a e5primrii de noi proprieti !e5emplu0
antigenul carcino-embrionar, prezent numai n celulele embrionate i fetale i, respectiv,
n celula cancerizat, dar absent n celula normal adult%.
A.A. AS2ECTE 2ARTICULARE DE RELAGII "IRUS1CELUL GA3D
- 7ntre virus i celula-gazd, e5ist posibilitatea coe*isten;ei celor dou7 tipuri de
rela;iiH litic7 6i simbiotic7 !virusurile de tip 9 la multe specii de mamifere%. 7n acest caz,
ntr-o populaie celular sau ntr-un esut cancerizat, nii virioni in"c transformare !prin
integrarea acidului nucleic viral n genomul celular%, alii in"c relaie litic! !producerea
de progeni virali, eliberarea de particule neoformate i moartea celulei gazd%.
- ) alt caz deosebit este oferit de virusurile lente. "ceti ageni virali stabilesc o relaie
de tip litic, cu o rat foarte 'oas de infectivitate, astfel nc6t, n acelai esut, unele celule
prezint leziuni, altele sunt normale. 9onsecina este evolia lng! 9ani& "ecenii: a nei
afecini "egenerative, la care se poate aduga apoi i un mecanism atoimn "e
%ntreinere.
- :n alt aspect particular al relaiilor virus-celul gazd este reprezentat de virusurile
?mascate@ !virusuri din grupul Serpes, v. rubeolic, v. rabic, v. SMG%. "ceste virusuri, n
anumite circumstane, pot produce o in5ec;ie latent7 a celulei% )enomul viral 5iind
inte)rat 1n )enomul celular 57r7 s736i tr7deze prezen;a. 2a un moment dat, la
intervenia unui factor VdemascatorK, genomul viral intr n activitate, se desprinde din
inseria cu genomul celular i declaneaz ciclul de multiplicare viral de tip litic, cu
dezintegrarea celulei gazd.
D. I3OLAREA "IRUSURILOR )I EFECTELE "IRUS S2ECIFICE
Girusurile se multiplic7 numai pe celulele vii, care le furnizeaz materia prim,
energia i chiar mecanismele de sintez, replicarea av6nd loc conform informaiei
genetice induse de acidul nucleic viral. =le cultiv, n laborator, pe ou de gin
embrionate, culturi celulare sau animale de laborator.
Modificrile aprute la gazdele inoculate dau indicaii asupra grupului de virusuri
cruia i aparine virusul inoculat, identificarea speciei sau a tipului fc6ndu-se prin
reacii antigen-anticorp.
D.1. Ou4 (& 94in4 &,%riona$&
9ultivarea virusurilor n oul embrionat de gin a constituit un progres remarcabil
n virusologie, prin utilizarea unui sistem de celule constituit din esuturi n dezvoltare, cu
multiplicare activ, practic steril, lipsit de mi'loacele de aprare antiinfecioas e5istente
la animalele adulte. 9ultivarea se face prin inoculare n ane5ele embrionare0 cavitatea
amniotic7 6i alantoidian7% sacul vitelin% pe membrana corioalantoidian7.
)u de gin embrionate, de apro5imativ *-18 zile, sunt utilizate pentru izolarea
i identificarea unor virusuri din produsele patologice sau pentru prepararea de antigene
i vaccinuri virale. Mnocularea n cavitatea alantoidian i amniotic se folosete pentru
cultivarea virusurilor gripale, paragripale, v. urlian, ru'eolic/ pe membrana
corioalantoidian se cultiv v. herpetic i po5virusuri.
=fecte virus-specifice pe ou embrionat0 e5ectul hema)lutinant prin
hemaglutininele virale !depozit cu marginile crenelate, fran'urate n prezena hematiilor
de diverse specii8V leziuni pe membrana corioalantoidian7/ incluzii virale/ hemora)ii i
moartea embrionului.
D.*. Cul$uri #&lular&
Dunt substrate de celule eucariote 1ntre;inute in vitro& sub forma monostratului
celular. \esuturile fragmentate n piese mici sunt disociate cu tripsin n celule
individuale, diluate ntr-un mediu nutritiv i introduse n recipiente de sticl sau plastic,
unde se ataeaz i se multiplic pe suprafa.
9ulturile de celule reprezint astzi metoda cea mai adecvat7 pentru izolarea
unor virusuri0 enterovirsrilor& a"enovirsrilor& v> paragripale& v> respirator sinciial
etc. De cunosc trei tipuri de culturi celulare !tabel ;%0 culturi primare !rinichi de
maimu%/ culturi diploide !din esuturile embrionare%, linii celulare continue !din
esuturile tumorale%.
Propriet7;i
Cul$uri
/ri
,a
r&
C&lul&
7$ul/ini8
(i/loi(&
Linii #&lular& 7s$a%ili'a$&8
9ariotip
1r. de pasa'e
&ependen de ancorare
!pe suprafa solid%
1ecesitate de ser n
mediu
Dusceptibilitate la
infecia viral
)rigine tisular
Tipuri morfologice
diploid
c6teva
da
.-18F
larg
esut normal
adult sau
embrionar
amestec al
celor dou
tipuri
diploid
apro5imativ
.8
da
.-18F
larg
esut normal
embrionar
fibroblastic
heterodiploid
nelimitat
nu !pot fi cultivate n
suspensie%
,-.F
restr6ns
esut canceros sau esut
normal embrionar
epitelial sau fibroblastic
Tabel ;0 Tipuri de culturi celulare
Multiplicarea virusurilor n culturile de celule se evideniaz prin e5amen
microscopic direct, care demonstreaz (&9&n&rar&a #&lul&lor (& #ul$ur4 !apariia unor
modificri morfologice ale celulelor sub aciunea virusurilor%0 e5ect citopatic 7distructiv%
sinci;ial% 1n 5ocar8. "stfel enterovirusurile !virusurile poliomielitice% determin apariia
unor celule mari, refringente cu desprinderea n ntregime a monostratului celular n ,-+
zile/ alte virusuri determin apariia unor celule mari, multinucleate-sinciii !v. respirator
sinciial, v. ru'eolos, v. herpes%/ adenovirusurile determin o alterare localizat, cu aspect
de mur - n focar.
"lte efecte virus specifice pe culturile celulare sunt0 e5ectul hema)lutinant i
e5ectul hemadsorbant> :nele virusuri hemaglutinante !gripal, paragripal%, multiplicate n
culturi de celule, i manifest proprietatea de a aglutina hematiile anumitor specii de
animal. &e asemenea, celulele n care s-a multiplicat un virus hemaglutinant sunt
capabile s adsoarb hematiile provenite de la diferite specii animale !hemadsorbie%.
$e culturi celulare au mai fost evideniate i alte efecte virus specifice0 incluzii
virale/ interferen !competitivitate%/ e5ectul trans5ormant - modificri morfologice,
genetice, metabolice.
"ncluziile virale sunt formaiuni intracelulare cu o colorabilitate modificat,
dezvoltate progresiv n timpul multiplicrii, reprezent6nd, n general, locul n care se
sintetizeaz componente virale sau se asambleaz virioni. Dunt unice sau multiple, mari
sau mici, rotunde sau de form neregulat, acidofile sau bazofile, intranucleare sau
intracitoplasmatice !tabel .%.
"nter5eren;7. :nele virusuri !v. rubeolic% fr a produce efect citopatic determin
un fenomen de interferen. 9ultura inoculat pentru izolarea v. rebeolic este testat c6tva
timp mai t6rziu prin infectare cu un v. citopatogen. 2ipsa multiplicrii acestuia pledeaz,
cu mare probabilitate, pentru prezena n cultur a v. rubeolic.
D.A. Ani,al& (& la%ora$or
Mnocularea animalelor de laborator a fost prima metod folosit pentru izolarea
virusurilor i precizarea tropismului lor pentru diferite esuturi, tropism nsoit de leziuni
caracteristice. =fecte virus specifice la animalele de laborator sunt0 e5ecte clinice !v.
rabic%/ paralizii !flasc - v. 9o5sac4ie grup "/ spastic - v. 9o5sac4ie grup C%/ incluzii
virale !Cabe 1egri - v. rabic%/ modi5ic7ri histopatolo)ice !v. polio - leziuni ale corpului
neuronului motor periferic din coarnele anterioare ale mduvei%.
Lo#ali'ar& Colora%ili$
a$&
"irus
1uclear
9itoplasmatic
1uclear i
citoplasmatic
Cazofil
"cidofil
"cidofil
"cidofil
"denovirusuri
Serpetoviridae
$apovaviridae
$aram@5oviridae
Aeoviridae
Ahabdoviridae !corpi Cabe-
1egri%
$o5viridae !corpi Luarnieri%
G. ru'eolei
9itomegalovirus
Tabel .0 =5emple de virusuri ce determin incluzii virale
5. ACIUNEA AGENILOR *I0ICI /I C4I-ICI A(UPRA VIRU(URILOR
Eactorii fizici i chimici pot aciona asupra virusurilor !acid nucleic, capsid,
nveli% prin modi5icarea unor propriet7;i 5izice ale virionilor !constant de sedimentare,
ncrctur electrostatic% sau prin modi5icarea compozi;iei constituen;ilor virali.
Aezultatul cel mai important al aciunii convergente a factorilor fizici i chimici
este /i&r(&r&a inf&#$ivi$45ii 7#a/a#i$45ii (& ,ul$i/li#ar& @n #&lula virus1s&nsi%il48.
C.1. ACGIUNEA AGENGILOR FI3ICI ASU2RA "IRUSURILOR
C7ldura
Girusurile, n preparatele proaspete !produs patologic%, sunt relativ stabile la
temperatra camerei& c pier"erea %n timp a infectivit!ii.
) temperatr! "e 1/0C/C inactivea'! virsrile, prin denaturarea proteinelor
capsidale, uneori inactivarea fiind nsoit i de pierderea proprietilor antigenice
!denaturarea specificitii antigenice%.
Temperatrile $oase repre'int! n mi$loc eficient "e conservare a virsrilor, n
condiii speciale !n azot lichid i n mediu cu substane protectoare% put6nd fi pstrate
timp indefinit.
Tratamentul mecanic
$rin agitare se asigur dezintegrarea suspensiei virale.
2a valori nalte de presiune mecanic virusurile sunt rezistente.
$resiunea osmotic acioneaz nociv numai c6nd se produc ocuri osmotice.
Modificri mai discrete ale presiunii osmotice pot duce la schimbri n compoziia
chimic a proteinelor capsidale.
,ltrasunetele
Acionea'! aspra virsrilor c strctr! simpl! !simetrie helicoidal, fr
nveli% n form de baghet, fiind ineficient asupra virionilor sferici sau crmidiformi.
(esicarea
2a uscciune i la temperatura camerei unele virusuri sunt inactivate
!mi5ovirusuri i parami5ovirusuri%, n timp ce alte virusuri rezist destul de mult timp n
aceleai condiii !enterovirusuri%.
Radia;iile
Mndiferent de natura radiaiilor, ionizante !(, radiaii ale izotopilor radioactivi% sau
neionizante, !ultraviolete%, efectul de iradiere depinde de doi factori0 energia Juantic i
natura materialului absorbant. 7n plus e5ist substane care prote'eaz virionul mpotriva
efectelor radiaiilor, cum sunt proteinele sau agenii reductori.
Radia;iile ionizante acioneaz prin dou mecanismeQ "enatrarea proteinelor #i
aci'ilor ncleici !lacun n lanul polinucleotidic, modificarea biochimic a structurii
bazelor pirimidinice% i efectl "e ioni'are !formarea de radicali liberi -)S, formarea de
pero5izi%. 2a doze mai mici de radiaii ionizante, nu se produce inactivarea virusului, ci
apar mutaii genice induse.
Ra(ia5iil& ul$raviol&$& se absorb selectiv la nivell aci'ilor ncleici&
%n"eosebi A*+& "etermin(n" formarea dimerilor pirimidinici to5ici> ,o"ific!rile in"se
snt reversibile& select(n"0se in"ivi'i re'isteni la efectl ra"iaiilor& prin procesele "e
fotoreactivare #i restaurare la ntuneric>
3 Fotoreactivarea0 radiaiile luminoase pot activa o enzim care cliveaz dimerii
pirimidinici to5ici/
3 Restaurarea la 1ntuneric 9?dark repair@: const n faptul c, la ntuneric, are loc
aciunea succesiv a trei enzime0 o en"onclea'! care desprinde dimerul pirimidinic de
pe "&1/ o e-onclea'! care formeaz VlacuneK de-a lungul moleculei alterate de "&1,
prin clivare secvenial/ o A*+0polimera'! care umple lacunele, folosind ca matrice
poriunea omolog din lanul geamn de "&1, nealterat.
C.*. ACGIUNEA AGENGILOR C>IMICI ASU2RA "IRUSURILOR
'nzime
Ma'oritatea virusurilor manifest rezisten marcat la aciunea A1-azei, &1-azei
i a unor proteaze. $apaina activat inactiveaz unele virusuri, pronaza atac efectiv
capsida.
A)en;i care denatureaz7 proteinele
&intre aceti ageni cei mai cunoscui prin efectul lor asupra virusurilor sunt0
"etergeni sintetici, solvenii lipi"elor de tip eter, cloroform !ambele categorii inactiveaz
virusurile cu nveli lipidic%, reea #i ganina !desprinderea capsidei fr a altera acidul
nucleuic%, valorile %nalte sa $oase "e p7 ale me"ili !mpiedic ataarea pe receptorii
celulari%.
A)en;i o*idan;i
Dunt cunoscute aciunile pero-i'ilor !procese o5idative la nivelul proteinelor
capsidale%, aci"l nitros !mutagen n doze mici, inactivant n doze mari%, agenii
alchilani !desfacerea lanului polinucleotidic%, beta0propiolactona !agent puternic
al4ilant i ac@lant, inactiv6nd virusurile rapid, uneori cu conservarea imunogenitii%.
Formaldehida
Mnactiveaz virusurile rapid dar le conserv imunogenitatea.
K. GENETIC "IRAL
K.1. Mu$a5ia viral4
=ste o )re6eal7 1n autoreplicarea acidului nucleic viral, n cursul formrii de noi
progeni !indivizi rezultai din multiplicarea virusului n celula gazd%. $rogenii deosebii
genetic de particulele virale parentale se numesc mtante virale. "ceste mutaii pot fi0
spontane !mutaii nt6mpltoare, fr intervenie uman, prin alterarea spontan a unei
baze% i in"se !apar e5perimental sub aciunea unor factori mutageni fizici - radiaiile
ionizante, sau chimici - acidul nitros, coloranii acridinici, analogii halogenai ai bazelor
pirimidinice0 .-bromdeo5iuridina, .-fluorouracil%.
M&#anis,& care stau la baza mutaiilor sunt0 substituirea unor bazeV adi;ia unor
perechi de baze necomplementareV inser;ia muta)enului ntre dou baze vecine de pe
acelai lan de acid nucleic viral, urmat de citirea greit a perechilor de baze/ dele;ia
9desprinderea% unei pri din genomul viral n cursul ciclului biologic viral, avnd drept
consecin oprirea procesului de multiplicare i apariia de particule virale defective.
K.*. In$&ra#5iuni 9&n&$i#& @n$r& virusuri
De produc n urma in5ec;iei mi*te a unei celule )azd7 cu dou7 sau mai multe
virusuri di5erite, astfel nc6t progenii produi n urma ciclului de multiplicare viral
e5prim caractere mi5te, primite de la virusurile parentale.
1oiunea de interaciune genetic !interschimburi de segmente de acid nucleic
ntre genomuri aparin6nd unor virusuri diferite% cuprinde fenomenele de recombinare,
reasortare etc. 7n cazul recombin7rii virale schimbul de material genetic se produce
intramolecular. Reasortarea poate avea loc la virusuri cu genomuri plurimoleculare
!fragmentate-segmentate% n care moleculele separate de acid nucleic se reasociaz pentru
a forma genomuri noi.
$entru realizarea interschimbului de material genetic ntre virusuri diferite e5ist
cel puin dou #on(i5ii #ar& $r&%ui& @n(&/lini$&0
- )enomurile virusurilor implicate trebuie s7 se a5le 1n aceea6i celul7, condiie
ndeplinit de infecia simultan !coinfecie%/
- 1ntre )enomuri s7 e*iste omolo)ii structurale ale acizilor nucleici !nu se pot produce
interaciuni genetice ntre virusuri "A1 i virusuri "&1.
$rocesul de interaciune genetic ntre virusuri are foarte mare importan pentru
SMG i virusurile gripale, la care, prin circulaie interuman, datorit recombinrilor
genice, apar noi tulpini, variante genetice.
L. A2RAREA ORGANISMULUI ?M2OTRI"A "IRUSURILOR
Mnfecia viral este supus n general legilor procesului infecios, care reprezint
rezultanta ntre capacitatea patogen a agentului infectant i mi'loacele de aprare ale
organismului. "ceste mi'loace de aprare, nespecifice i specifice !imune%, acioneaz de
regul concertat.
L.1. A/4rar&a n&s/&#ifi#4 an$iviral4
a& -ariere naturale cutanate 6i mucoase
Bari&r& ,&#ani#&0 integritatea epitelili !obstacol mpotriva virusurilor mari0
po5virusuri, herpesvirusuri%/ mcsl de la suprafaa mucoasei respiratorii/ aci"l
hialronic din cimentul intercelular al epidermului i substana fundamental a dermului
constituie o barier eficient fa de agenii virali cu tropism cutanat !mai ales c, spre
deosebire de bacterii, virusurile sunt lipsite de echipament propriu de enzime
depolimerizante%/
Bari&r& fi'i#& i #+i,i#&0 p7 sc!'t al pielii !defavorizeaz persistena
virusurilor pe piele%, mcopoli'ahari"e n saliv i n secreiile cilor respiratorii
superioare, 7Cl din stomac/
Bari&r& %iolo9i#&0 relaia "e antagonism %ntre "iverse virsri ce coe5ist
!ocuparea prin competiie de ctre enterovirus a celulelor cu platou striat din epiteliul
mucoasei intestinului subire mpiedic intrarea unui agent viral omolog sau heterolog%/
relaia "e antagonism %ntre flora bacterian! normal! "in microbioceno'ele organismli
#i virsri.
b& Reac;ia 5ebril7
De produce prin eliberarea secundar a unui 5actor piro)en, n cursul circulaiei
virusului n umori.
=ficiena febrei n aprarea antiviral este tradus at6t prin accelerarea elimin!rii
rinare a virusului c6t i prin activarea circlaiei centrale #i periferice& cre#terea
catabolismli cellar datorit eliberrii de hormoni tiroidieni i steroizi n cursul febrei.
=liberarea acestor hormoni limitea'! mltiplicarea virsli %n cellele sensibile
!modific6nd susceptibilitatea receptorilor de suprafa ai acestora% i potenea'! nele
posibilit!i "e ap!rare nespecific! !elaborarea de interferon, strss-ul antiviral%.
7n acelai timp, ns, nu trebuie negli'at posibilitatea ca n stri febrile
determinate de diferite cauze !virale sau nevirale% s se produc actali'area clinic! a
nei infecii virale latente !v. herpes simple5%. "stfel, putem afirma c nu ntotdeauna
creterea temperaturii reprezint un factor propri-zis de aprare, ci, din contr, chiar
favorizeaz multiplicarea agentului viral n organism.
c& Stress3ul antiviral
"gentul viral poate aciona ca declan6ator al activit7;ii a*ului hipotalamus 3
hipo5iz7 anterioar7 9ACT+: 3 suprarenal7 cu eliberarea de hormoni steroi'i, n cantiti
inferioare dozelor imunosupresive i interferon-inhibitorii, dar suficiente n limitarea
dispersiei virusurilor. Llucocorticoizii determin0 fi-area hormonli prin competiie pe
receptorii celulari pentru virus, mpiedic6nd adsorbia/ soli"i'area membranelor
li'o'omale fiind mpiedicat eliberarea enzimelor lizozomale !proces necesar
multiplicrii unor virusuri%/ potenarea activit!ii "e protecie e-ercitat! "e interferon
asupra unor celule nvecinate celulelor virus-infectate.
d& Factori interni umorali 9serici:
7n cadrul factorilor serici de aprare nespecific antiviral intervine i sistemul
complementului care determin li'a cellelor ;int! . Mmportana acestuia n viroze este
ns mult mai puin important dec6t n bacterioze. D-a stabilit cu certitudine rolul
inactivant al complementului, n perioada de viremie, fa de unele virusuri !gripale,
urlian, Serpesvirusuri, po5virusuri%, ca i rezistena marcat a unor virusuri la aciunea
acestuia !polio, adenovirusuri%.
e& Factori interni celulari 0 5a)ocitoza viral7
$rocesul activ de includere i inactivare intraleucocitar !fagocitoza propriu-zis%
trebuie difereniat de prezena virusului n leucocite, care reflect tropismul leucocitar al
acestuia.
Eagocitoza viral eficient, n care macrofagele a rol mai activ "ec(t
granlocitele netrofile, a fost atestat n infeciile cu virusuri gripale, virusuri 9o5ac4ie
i virusuri din grupul Serpes. A9&n$ul viral inclus n fagocit poate fi inactivat !aciune
real de aprare antiviral%, dar poate i supravie;ui #u multiplicare ulterioar7 !infecie
persistent%, devenind astfel inabordabil mi'loacelor de aprare imun pe linie umoral i
celular.
7nglobarea i distrugerea germenilor microbieni este inhibat profund de unele
virusuri prin efectl imnospresiv al acestora, cum este cazul v. gripale, v. ru'eolos,
virusurilor 9o5ac4ie i virusurilor din grupul Serpes. &up viroze, ce au ca ageni
etiologici virusurile enumerate mai sus, se constat scderea rezistenei organismului cu
posibilitatea instalrii unor complicaii bacteriene.
5& 'laborarea de inter5eron
Mnterferonul reprezint un comple* proteic% secretat de celulele in5ectate cu virus,
care prote<eaz7 alte celule s7n7toase 1mpotriva in5ec;iei cu un a)ent viral omolo) sau
heterolo). =5ist trei categorii de interferon0 interferon !leucocite%, interferon
!fibroblaste%, interferon !limfocite T imune%.
Dinteza de interferon are loc sub influena unor in"ctori virali !v. gripale, v.
paragripale, v. urlian, arbovirusurile, v. vaccinia, herpesvirusurile, v. polio, v. ru'eolos, v.
9o5ac4ie% i in"ctori nevirali !bacterii sau endoto5ine bacteriene - Dalmonella, =. coli,
Cordetella pertussis, ric4ettsii, micoplasme, unele antibiotice etc.%.
Mecanismele de aciune ale interferonului au fost evideniate at6t la nivel local c6t
i la distan.
M&#anis,& (& a#5iun& lo#al4 al& in$&rf&ronului0
- ata#area moleclelor "e interferon pe sprafaa cellei !la nivelul unor receptori
celulari% semnal care prin intermediul moleculelor de "M$c !aminofosfat ciclic% este
transmis ctre genom derepresarea unei gene structurale codific producerea unui
"A1 mesager nou sinteza la ribozomi a unei proteine <2IT 1 /ro$&in4 in+i%i$oar& a
$ransla5i&i= mascheaz ribozomii celulari astfel nc6t acidul nucleic viral intrat n
celul nu-i mai poate codifica sintezele de proteine proprii la nivelul aparatului
ribozomal al celulei parazitate/
- stoparea procesli "e "ecapsi"are a virusului/
- inhibiia sinte'ei nor en'ime precoce !"A1 polimeraza% i implicit inhibiia sintezei
copiilor de acid nucleic/
- intervenia unei endonucleaze celulare !indus de interferon la nivelul receptorilor
celulei prote'ate% care poteneaz inhibiia translaiei mesa'ului genetic la nivelul
ribozomilor !alturi de $MT% i blochea'! sinte'ele "e proteine virale, n fazele tardive.
M&#anis,& (& a#5iun& al& in$&rf&ronului la (is$an540
0 stimlarea pro"ciei "e I<03 limfocitar/
0 potenarea nor fncii macrofagice0 prelucrarea antigenului, secreia de mono4ine
activatoare, intensificarea citoto5icitii macrofagice !natural, prin armare,
anticorpodependent%/
- activarea cellelor natral0ciga#e !1B%.
L.*. A/4rar&a s/&#ifi#4 7i,un48 an$iviral4
"prarea specific n viroze se realizeaz prin modi5ic7ri pe linie umoral7 6i
celular7& celulele efectoare fiind anticorpii 91n imunitatea umoral7: i lim5ocitele T
citoto*ice 91n imunitatea celular7:.
M&8&2& Propriet7;i 5undamentale
Mmunitatea specific posed trei proprieti fundamentale0
speci5icitateaQ recunoaterea strict, specific, a moleculelor strine organismului/
di5eren;ierea 1ntre B sel5? 6iB non3sel5?Q capacitatea rspunsului imun de a face
diferenierea ntre structuri strine organismului, dar asemntoare cu structuri proprii
ale organismului uman.
memoria imunolo)ic70 capacitatea unora din celulele implicate n realizarea
rspunsului imun primar !celule de memorie% de a reine specificitatea antigenului cu
care oganismul a venit pentru prima oar n contact, iar la al doilea sau urmtoarele
contacte ale organismului cu acelai antigen, aceste celule s l recunoasc i s se
diferenieze specific, induc6nd un rspuns imun specific secundar, mult mai prompt.
M&8&8& Caracteristicile anti)enelor virale
"ntigenele virale prezint dou caracteristici0
- imnogenitateaQ este capacitatea antigenelor virale de a produce rspuns imun
specific, umoral i celular/
- antigenitateaQ este capacitatea antigenelor de a reaciona cu anticorpii specifici, in
vivo i in vitro>
M&8&>& Localizarea anti)enelor proprii virionului
"ntigenele proprii virionului pot fi0
a& anti)ene de supra5a;70
- anti)ene de 1nveli6 !n cazul virusurilor anvelopate%, de natur glicoproteic0
hemagltinine0 v. gripale, v. paragripale, v. ru'eolos/
neramini"a'e0 v. gripale, v. paragripale/
glicoproteine0 gp1,8, gp;1 !SMG%, gpL !v. rabic%/
proteine0 "g SCs !v. hepatitic C%/
factori "e f'ine0 v. paragripale, "g 2@dma !v. =pstein-Carr%/
- anti)ene capsidale !n cazul virusurilor nenvelite%0
v> polio0 proteinele G$1, G$,, G$+/
v> polyoma0 "g G$1/
a"enovirsrile0 proteinele structurale ale he5onilor i proieciilor fibroase/
Roll antigenelor "e sprafa!Q
- de ataare la receptorul celular/
- de inducere de anticorpi neutralizani !S" - v. gripale, ntreaga capsid - v. polio%/
- activitate hemaglutinant/
- de fuziune cu membranele celulare.
%. an$i9&n& in$&rn&0
anti)ene asociate nucleocapsideiQ "g SCc !v. hepatitic C%/ "g 1$, 19, 1
!param@5ovirusuri%/ "g 1$ !v. gripal%/ "g p,;, p1, p,; !SMG%/
asociate cu proteina #Q v. paragripale, v. ru'eolos.
Caracteristici ale antigenelor interneQ
- sunt mai puin e5puse dec6t antigenele nveliului/
- induc apariia de anticorpi fi5atori de complement.
M&8&P& Superanti)ene
Aeprezint o categorie de anti)ene virale care se comport7 di5erit 1n rela;ia cu
lim5ocitul, comparativ cu modalitatea clasic7 de interac;iune, i anume0 dac clasic,
prezentarea antigenului de ctre celula prezentatoare de antigen !"$9% are loc la nivelul
Hsitusului de legareV al 9MS MM, constituit din lanurile j i b, iar dup prezentare
antigenul este recunoscut de ctre regiunea variabil a T9A !Gj i Gb% de pe limfocitul T
9&;, av6nd drept consecin stimularea unei clone de limfocite T, n cazul
superantigenelor le)area anti)enului se 5ace numai la poriunea variabil a lanului b
!Gb% a T9A, deci la e*teriorul situsului combinativ, ceea ce va determina o activare
e*cesiv7 de celule T, deci o hiperstimulare, ceea ce poate duce la dele;ii 6i aner)ie
lim5ocitar7.
=5emplu0 retrovirsrile 0 7IJ0 datorit comportamentului su ca superantigen
determin imnospresia0 subseturi de limfocite T 9&;, Gb ar fi activate specific,
subseturi n care are loc multiplicarea preferenial a SMG, ceea ce duce la infectarea i
distrugerea lor.
L.*.C. R4s/unsul i,un @n viro'&
Mmunitatea specific reprezint rspunsul speci5ic% diri<at strict 5a;7 de un anumit
anti)en, al organismului infectat cu un virus. "cest rspuns poate fi0 umoral% realizat
prin imuno)lobuline 9anticorpi: i celular% realizat prin intermediul lim5ocitelot T. 9ele
dou verigi acioneaz complementar i sinergic. "t6t rspunsul imun umoral, c6t i
rspunsul imun celular, pot evolua ca0 rspuns imun primar i rspuns imun secundar.
a. R4s/unsul i,un /ri,ar
"pare la primul contact al or)anismului cu un anti)en 9virus:, ponderea celor
dou categorii de efectori variind n funcie de tipul antigenului i modul n care acesta
este prezentat celulelor imunocompetente. 7n general, rspunsul imun primar este
timpuriu% pu;in speci5ic% pasa)er.
Aspunsul imun primar evolueaz n ; faze0
- de laten;7 9de la):Q durat ,-. zile/ antigenl este prelcrat #i pre'entat "e c!tre APC
limfocitelor C i T, care sunt activate pentru nceperea sintezei de anticorpi sau pentru
activarea altor subseturi de limfocite T/
- de cre6tere e*ponen;ial7 sau lo)aritmic70 durat ,-+ zile i const! %n cre#terea
#oar!& constant! a r!spnsli specific/
- de platou 9sta;ionar780 durat +-. zile, intensitatea r!spnsli n prea %nalt!& "ar el
se menine la n nivel constant/
- de declin0 r!spnsl "imin! progresiv %n intensitate& p(n! la epi'area sa total!&
sa p(n! la n nivel minim& "e regl! neprotector.

%. R4s/unsul i,un s&#un(ar
De mai numete i reac;ie anamnestic7, deoarece se manifest dup ree5punere la
acelai tip de antigen, cu care organismul a mai venit n contact. Aspunsul imun
secundar reflect o reacie mai precoce% mai prompt7% mai rapid7% mai iniens7% mai
persistent7% mai e5icace. =tape0
- 5aza de laten;7Q apare scrtat! sa absent!/
- n 5aza e*pone;ial70 cre#terea intensit!ii r!spnsli imn este rapi"!/
- n 5aza sta;ionar70 instalat dup ;- zile de la contactul cu antigenul, apare n nivel
ri"icat al reaciei imne 0 "e 40Z ori mai mare "ec(t nivell ma-im al reaciei imne
primare& #i pentr o perioa"! mai mare "e timp/
- n 5aza de declin0 r!spnsl sca"e #or& c meninerea "e obicei a ni fon" re'i"al
protector>
9apacitatea organismului de a dezvolta un rspuns imun secundar se bazeaz pe
T,&,oria i,unolo9i#4<.
Caza celular a ,&,ori&i i,unolo9i#& este e5pansiunea unei populaii de
limfocite sensibilizate n raport cu antigenul. =5ist lim5ocite T 6i - de memorie care
difer de limfocitele nesensibilizate. "sfel, limfocitele ? "e memorie produc anticorpi de
tip MgL, timpuriu, cu afinitate mare i timp ndelungat. <imfocitele T "e memorie rspund
la doze minime de antigen, ceea ce semnific e5istena unor receptori mai eficieni, cu
afinitate mai mare.
Mntervenia imunitii specifice, umorale sau celulare, se realizeaz numai dup
p7trunderea anti)enului viral 1n or)anism 6i recunoa6terea acestuia de c7tre celulele
imunocompetente.
$entru recunoaterea lui de ctre limfocitele C sau limfocitele T antigen reactive,
se impune prelucrarea acestui anti)en de c7tre celule specializate !microfage sau
macrofage% care dup prelucrare, 1l prezint7 spre recunoa6tere lim5ocitelor T sau -
anti)en reactive.
=tapa de recunoatere, prelucrare i prezentare a antigenului viral se realizeaz
prin intervenia #&lul&lor /r&'&n$a$oar& (& an$i9&n !A2C8, care pot fi0
macrofage i monocite/
celule dendririce0
celule 2angerhans din epiderm/
astrocitele de la nivelul sistemului nervos, cu rol n imunitatea local, funcion6nd
ca fagocite sau ca "$9 sub restricie 9MS, sintetiz6nd totodat enzime,
prostaglandine, M2-*/ rol de mediere ntre neuroni i limfocitele T/
limfocitele C - uneori, antigenul fi56ndu-se pe receptorul de natur
imnogloblinic!>
$rezentarea antigenului este fcut sub restricie 9MS MM.
M&8&F& R7spunsul imun umoral 9R",:
Cara#$&ris$i#il& RIU0
f intervenie prioritar!0 n cazul in5ec;iilor virale cu evolu;ie acut7 sau subacut7R
f locl impactli antigen viral2verig! efectorie0 la distan;7 variabil7 de la locul de
p7trundere al acestuia 1n or)anism/
f veriga efectorie0 anticorpi sau imuno)lobuline/
f mo"ali!i "e testare a r!spnsli imn0 reacii antigen-anticorp. =5emple0 reacii de
aglutinare, reacii de precipitare, reacii de neutralizare, reacii de fi5are a
complementului, reacii de aglutinare-liz, dar i reacii cu reageni marcai
!imunofluorescen, =2MD", AM"%.
Clas&l& (& i,uno9lo%ulin&F I9G: I9M: I9A: I9E: I9D
I9G constituie peste .F din totalul Mg serice. Aol0
- principalii anticorpi c rol %n netrali'area virsrilorR
- %n limitarea "isemin!rii viraleR
- %n sc!"erea %nc!rc!trii virale #i eliminarea virsli "in compartimentele
e-tracellare/ mecanism0 activeaz complementul i, prin citoto5icitate celular
anticorpo-dependent, elimin celulele infectate cu virus/
- rol prepon"erent %n r!spnsl imn secn"arR
- rol %n fagocito'a opsonic!.
I9M sunt anticorpi liberi prezeni n ser sau fi5ai pe membrana celulelor C/
reprezint 18F din totalul Mg. $rezena MgM n ser este indicator de infecie viral acut.
Euncii0
- snt primii anticorpi care apar "p! contactl c antigenl& pre'ena lor fiin"
caracteristic! RI primarR
- activea'! complementl, aciune e5trem de eficace, o singur molecul de Mg M
fiind capabil s iniieze reaciile n lan.
I9A este principala ") de la nivelul mucoaselor. =ste prezent i n diverse
secre;ii ale or)anismului !saliv, lacrimi, colostru, lapte, secreii vaginale, intestinale%,
iar 1n ser 1.F. Dunt , tipuri de Mg"0
I9 A s&ri#40 monomer alc!tit "in lanl < 9H sa [: #i 7Y/
I9A s&#r&$ori&0 "imer sa tetramer !rezultat prin legarea monomerilor ntre ei prin
segmentul N%. 2a acestea se adaug piesa secretorie, secretat de celulele epiteliale ale
mucoaselor, cu rolul de a transporta molecula de Mg" la suprafaa celulelor epiteliale i
de a conferi rezisten la enzimele proteolitice.
=5ist , subclase. Mg"1 i Mg",. Euncii0
- prote$ea'! mcoasele "e agresivitatea vital!& prin legarea acestora la mcoase.
"stfel, se controleaz prin Mg" intrarea virusurilor n organism la nivelul cilor de
intrare orofaringian, respiratorie !v. gripale, v. paragripale%, gastrointestinal
!enterovirusuri%, urogenital/
- limiteaz i mpiedic viremia n infeciile sistemice !poliomielitei%. &up
imunizare antipolio se dezvolt imunitatea local mediat de Mg".
I9E se gsete 1n ser 1n cantit7;i 5oarte mici !8,8;F%, 1n colostru% 1n secre;iile
nazale% oculare% bronhice, iar n intestin sunt legate citofil de receptorii Ec ai
mastocitelor. Euncii0
- "eclan#ea'! reacii "e tip anafilactic, ca urmare a legrii cu anumite alergene.
I9D sunt prezente n ser n cantiti mici !8,,F% sau fi5ate pe suprafaa
limfocitelor C. $rincipala funcie0
- n "iferenierea limfocitelor ?.
Demnalul primar n sinteza anticorpilor este r&#unoa$&r&a an$i9&nului (& #4$r&
I9M sau I9D (& /& su/rafa5a li,fo#i$ului B !receptorul pentru antigen de pe linfocitul
C-C9A- HC- cell receptorV%.
#ecanismele e5ectoare ale imunit7;ii umorale
a& Neutralizarea viral7
1eutralizarea are loc n dou faze0
r&v&rsi%il40 leg!tra anticorp0antigen se "esface dac intervin anumii factori0 pS -
trecerea de la pS de neutralitate la pS alcalin sau acid, mai mic de ;/ factor de diluie -
amestecuri de v. gripal i ser i recapt infectivitatea dup diluare/
ir&v&rsi%il4Q leg!tra anticorp0antigen "evine stabil!, fiecare anticorp leg6ndu-se de
dou situsuri antigenice situate pe monomeri diferii. 9omple5ele stabile pot fi disociate
enzimatic.
1eutralizarea se realizeaz prin0
alter7ri ale capsidei virale la virusurile neanvelopate, ceea ce mpiedic
decapsidarea, eliberarea acidului nucleic viral i iniierea ciclului infectant/
modi5ic7ri con5orma;ionale ale proteinelor 1nveli6ului viral la virusurile cu
1nveli6 !v. paragripale%, sub aciunea concertat a MgM i complementului/
alter7ri ale ciclului de multiplicare viral70
- aderarea anticorpilor la antigenele suprafeei virale previne adsorbia i ptrunderea
virusului n celula gazd !rotavirusuri%/
- blocarea secvenelor peptidice terminale ale fibrelor adenovirusului tip + de ctre
anticorpi duce la blocarea adsorbiei i ptrunderii intracelulare a virusului/
- la virusurile nvelite ptrunderea virusului n celul se face prin f'ine ntre nveliul
viral i membrana endozomului n condiii de pS acid. "nticorpii pot produce
modificri conformaionale ale factorului de fuziune !e5.. factorul de fuziune -
proteina = a virusului Uest-1ile% i inhib iniierea ciclului infectant vital prin
inhibiia fuziunii din interiorul endozomului.
$. Neut#"li,"#e" )n p#e,en/" !o-ple-entului
Neut#"li,"#e" *i#u.ului se reali6ea6& ine$enent e c'!$le!ent7 ar
e.te poten/"t% +e p#e,en/" !o-ple-entului7 !ai ales la 8irusurile 1n8elite.
Le"area antic'r$il'r la anti"enele 1n8eli9ului 8iral acti8ea6& c'!$le!entul7
inuc:n 8ir'li6a ;c'r'na8irusuri<.
Eenomenul predomin n rspunsul imun primar, c6nd anticorpii din clasa MgM,
sunt intens activatori de complement.
O/soni'ar&a
Mmunoglobulinele MgL1 i MgL, pot favoriza distrugerea virusurilor prin fi5area
lor prin captul Ec la receptorul celular pentru Ec al macrofagului i cu cellalt fragment
-Eab- de suprafaa virusului. Girusul acoperit de anticorpi va fi recunoscut de macrofag i
va fi fagocitat !enterovirusuri%.
Ci$o$o6i#i$a$&a #&lular4 (&/&n(&n$4 (& an$i#or/i 1 an$i%o(- (&/&n(&n$ #&llular
#i$o$o6i#i$-
9itoto5icitatea celular dependent de anticorpi !"&99% este indus de legarea
MgL, mai puin a MgM i Mg=, de determinanii antigenici prezeni pe suprafaa celulei
infectate !prin fragmentul Eab%. :rmeaz ataarea nespecific a celulelor 4iller !B% i a
monocitelor la fragmentul Ec al MgL i declanarea lizei celulare.
"&99 are rol important n vindecarea unor boli, precum ru'eola, unde activitatea
"&99 apare t6rziu i la titruri mai nalte dec6t cele neutralizante, corel6ndu-se cu
scderea viremiei.
Co,/l&,&n$ul
"cioneaz solidar cu anticorpii n reaciile de neutralizare, intervenind activ n0
- li'a cellelor infectate c virs care e-pn la sprafaa membranei comple-e
antigen0anticorp. 9ele mai susceptibile la aciunea complementului sunt celulele
infectate cu virusuri nvelite !orthom@5ovirusuri, alphavirusuri, retrovirusuri%.
9omple5ul 9.b-9< se ncorporeaz n dublul strat lipidic, rezult6nd distorsiuni
structurale ale acestuia, orificii tubulare n membran, care permit comunicarea
coninutului celular cu e5teriorul. De produce creterea de volum a celulei, apoi
dezintegrarea acesteia/
- li'a virionilor #i netrali'area viral!, fiind implicate componentele0 91J, 91r, 91s,
9;. De produce activarea pe cale alternativ, rezult6nd unitatea de atac membranar, care
acioneaz asupra nveliului viral i produce viroliza. 2a unele virusuri !v. 1e3castle,
oncovirusurile% calea alternativ acioneaz n absena anticorpilor.
"lteori, interaciunea virus-complement nu conduce la liz/ inactivarea virusului
se realizeaz datorit unei reele ce apare ca urmare a legrii complementului !9+b% la
receptorii virusului.
L.*.L. R4s/unsul i,un #&lular 7RIC8
=ste rspunsul imun de interes ma<or 1n viroze, av=nd rolul de a elimina celulele
in5ectate cu virus i a promova vindecarea.
&eficienele congenitale sau c6tigate ale imunitii celulare sunt cauza evoluiei
grave, cu generalizare i sf6rit letal n unele viroze !herpes, ru'eol%.
9aracteristicile AM90
- intervenie prioritar!0 n in5ec;ii virale Blente?% subacute sau chiar acute/
- locl impactli antigen viral2verig! efectorie0 aproape de poarta de intrare a
anti)enului/
- veriga efectorie0 celule speci5ice 3 lim5ocitele Tc 9citolitice:% celule N! 9natural
killer:/
- mo"ali!i "e testare a r!spnsli imn0 teste in vitro 6i teste in vivo 9"(R de tip
1nt=rziat:.
Aspunsul mediat celular presupune urmtoarele etape succesive0 recunoaterea
antigenului ca non-self/ inducerea rspunsului prin activare specific a celulelor imune/
distrugerea celulei-int/
a. R&#unoa$&r&a an$i9&nului
De efectueaz de ctre lim5ocitele T anti)en3reactive prin intermediul TCR,
antigenul fiind prelucrat de ctre aceleai celule prezentatoare de antigen ca i n cazul
AM: i prezentat spre recunoatere sub form de peptide 6i 1n corela;ie cu moleculele
C#+ !comple5 ma'or de histocompatibilitate%. <imfocitele T C*)
=
recnosc antigenele
pre'entate c moleclele C,7 clasa I& iar limfocitele T C*4
=
recnosc antigenele
pre'entate %n leg!tr! c c moleclele C,7 clasa II.
%. In(u#&r&a r4s/unsului /rin a#$ivar& s/&#ifi#4 a #&lul&lor i,un&
Celulele implicate 1n realizarea r7spunsului imun, din punct de vedere
5unc;ional& pot fi mprite n0
f limfocite T c rol %n reglarea r!spnsli imn0 Th !helper%/ Ta !amplificatoare%/
Ts !supresoare%/ Tcs !contrasupresoare%/
f limfocite T efectoare& c acine "istrctiv! aspra cellei0int!, cu caracter
specific !Tc-citoto5ice% i caracter nespecific !1B,B,2"B%.
#. Dis$ru9&r&a #&lul&i15in$4
De realizeaz sub aciunea lim5ocitelor Tc, sau a celulelor N!.
M&#anis,&l& #i$o$o6i#i$45ii li,fo#i$&lor T#
2infocitele Tc induc citoliza prin dou tipuri de mecanisme0
f citoliz7 1n absen;a anticorpilor 6i a complementului& cu urmtoarele etape0
- contact st=ns 1ntre lim5ocitul Tc 6i celula3;int7, contact favorizat de prezena
moleculelor de adeziune/
- sinteza 1n endozomii lim5ocitului Tc de granule citolitice care conin0 per5orine
9proteine formatoare de pori%, serinesteraze& nrudite cu componenta 9</
- perforinele, n prezena ionilor de 9a
,R
, produc leziuni transmembranare% 5orm=nd
1n dublul strat lipidic% pori, prin care este eliminat coninutul celulei-int n e5terior,
ionii i proteinele cu greutate molecular mic. 9onsecutiv, n celul intr apa, crete
presiunea osmotic, se produce deformarea nucleului, umflarea i dezintegrarea celulei/
- dup nceperea lizei celulei-int, imediat se produce desprinderea lim5ocitului Tc.
f distru)erea celulei3;int7 prin apoptoz7&
Eenomenul are loc n absena secreiei perforinelor membranare i este precedat
de fragmentarea nucleului celulei-int. Eactorul responsabil de acest fenomen este
interaciunea dintre ligantul Ias& sintetizat n cursul activrii limfocitului Tc, i molecula
Ias, de pe celulele-int, inductoare de apoptoz.
M&#anis,&l& #i$o$o6i#i$45ii NJ
Dunt similare citoto5icitii prin limfocite Tc, fiind admise ambele mecanisme.
Z>3>)> CitoHine
Dunt mediatori chimici solubili secreta;i de diverse popula;ii celulare% cu 5unc;ii
multiple 6i comple*e0 semnale intercelulare, modulatori ai unor rspunsuri imune
nespecifice i specifice, sau reglatori ai unor activiti celulare !proliferare, difereniere%.
&up activitile dominante, cito4inele pot fi clasificate astfel0
- citoHine c rol %n imnitatea specific!Q in$&rl&u.in& 7IL8/
- citoHine c rol %n procesele inflamatoare #i antitmoraleQ fa#$orul (& n&#ro'4
$u,oral4 7TNF8/
- citoHine c rol %n activitatea nespecific! antiviral!0 in$&rf&ronii 7IFN8.
Z>3>B> Atoimnitatea %n viro'e
Mnfecia viral poate declana procese autoimune prin mai multe mecanisme0
modi5icarea anti)enelor sel5 spre non3sel5 de c7tre virusuri !e5emple0 artrita
reumatoid - v. urlian, v. rubeolic/ hepatite cronice - v. hepatitice C, 9, &/ $=D - v.
ru'eolos%/
alterarea capacit7;ii normale de recunoa6tere a anti)enelor de c7tre lim5ocitele T
sau -, prin alterarea receptorilor C9A sau T9A de ctre virus !v. coriomeningitei
limfocitare%/
dezechilibru al lim5ocitelor imunomodulatoare cu hipertonus Th8, ceea ce
stimuleaz producie de autoanticorpi fa de diverse autoantigene modificate de infecia
viral/
r7spuns 1n anticorpi antiidiotip generai de infecia viral care reac;ioneaz7 cu
sel5ul.
L.*.1E. I,uosu/r&si& viral4
Girusurile pot determina imunosupresie. Mecanismele imunosupresiei pot fi0
e5ect citocid direct al virusurilor asupra lim5ocitelor !7IJ& v> hepatitice ?& C& *%/
alterarea procesului de recunoa6tere a anti)enului de c7tre -CR sau TCR, prin
fi5area virusului, prin competiie cu epitopii antigenici, la nivelul receptorului pentru
antigen !v> r$eolos& v> Co-sacHie& 7IJ& v> citomegalic%/
inter5erarea virusului cu unele c7i metabolice de activare a lim5ocitelor implicate
1n recunoa6tere, prin situarea lui pe cile de iniiere a senmalului fosfotirozin-4inazei,
oprind procesul de transformare blastic specific a acestora n prezena antigenului/
alterarea cascadei citokinice prin cre6terea tonusului treptelor supresoare, inclusiv
prin deprimarea limfocitelor 9&8
R
11b
R
!7IJ& v> citomegalic& v> gripal& 7IJ=7?J%.
M&8&22& "munotoleran;a 1n viroze
Mmunotolerana este starea de echilibru stabilit7 1ntre or)anism 6i virusul
in5ectant. Girusul circul liber n umori, se multiplic n esuturi, fr a declana un
rspuns imun adecvat i nici fenomene patologice evidente !v. rubeolic, v.
coriomeningitei limfocitare%.
=5ist i o imunotoleran;7 constitu;ional7 5a;7 de unele virusuri, ceea ce e5plic
insuccesul unor vaccinri.
M&8&28& "munopoten;are viral7
A)ravarea evolu;iei unei viroze se poate "atora interveniei nor factori imni&
m ar fi I9 G: #ar& /o$ ,o(ifi#a su/rafa5a virionului& facilit(n" p!trn"erea acestia
%n cella pentr care pre'int! tropism& pro"c(n" implicit accelerarea infeciei virale "e
tip litic>
Compe*ele anti)en viral3")0 intr mai uor n celula gazd, deci se accelereaz
relaia litic.
7n cazul v. cu tropism leucocitar !v. ru'eolos%, prezen;a receptorilor pentru
5ra)mentul Fc al anticorpilor antivirali pe supra5a;a leucocitelor, faciliteaz intrarea
virionului n leucocit, deci relaia de tip litic.
M. 2ATOGENITATE "IRAL )I TI2URI DE INFECGIE "IRAL
=5ist mai multe tipuri de infecie viral la om i la animal, i anume0 infecii
localizate, infecii diseminate !generalizate%, infecii inaparente, infecii lente.
M.1. Inf&#5iil& viral& lo#ali'a$&
Dunt mai rare, multiplicarea viral i leziunea virus-specific sunt limitate la
poarta de intrare. "u loc mici diseminri ale virusului, dar acestea se mrginesc la
interesarea esutului con'unctiv din apropierea porii de intrare.
M.*. Inf&#5ii viral& (is&,ina$&
Ma'oritatea virusurilor determin astfel de infecii. $ot fi enumerate mai multe
faze0
Mul$i/li#ar&a viral4 /ri,ar4 la /oar$a (& in$rar&
Girusurile pot ptrunde pe diferite pori de intrare0 calea respiratorie !mi5o-,
parami5o-, adenovirusuri%/ calea "igestiv! !enterovirusuri%/ calea con$nctival!
!adenovirusuri%/ calea sangin! "irect! !multiplicarea lipsete% prin in'ecii !SMG,
hepatitei C%/ mucturi de animale !v. rabic%/ neptura unor vectori !arbovirusuri%.
Aezistena la poarta de intrare fa de virus se datorete at6t barierelor mecanice
cutanate sau mucoase, c6t i elaborrii locale de interferon sau de Mg" secretorii. :n rol
important n limitarea trecerii virusului dincolo de poarta de intrare l are i imunitatea
celular local, realizat de limfocitele timodependente din formaiunile limfoide
limitrofe.
"ir&,ia /ri,ar4, prezena virusului n torentul circulator, este o faz neobligatorie/
semnele clinice manifeste lipsesc.
Mul$i/li#ar&a viral4 s&#un(ar4: faz ce se caracterizeaz prin localizarea i
multiplicarea virusurilor n anumite organe/ este neobligatorie, fiind specific numai
anumitor virusuri.
"ir&,ia s&#un(ar4 const n rsp6ndirea virusurilor fie pe cale circulatorie !s6nge,
limf%, fie de-a lungul nervilor !v. rabic, arbovirusuri%. =ste o faz obligatorie n
infeciile virale diseminate, semnele clinice de debut sunt prezente i este posibil
izolarea virusurilor din s6nge.
Fi6ar&a virusului @n #&lul& 75&su$uri8 5in$4, cu localizarea i multiplicarea virusului
n esuturile pentru care are tropism, este nsoit de apariia leziunilor sau semnelor de
boal manifest.
7n cursul unei viroze diseminate se produce i e5creia de virus, fie prin poarta de
intrare !secreie nazofaringian, fecale, leziune cutanat%, fie la nivelul sistemelor
fiziologice de eliminare !fecale, urin%.
M.A. Inf&#5ia viral4 ina/ar&n$4
Prezen;a virusului 57r7 semne clinice poate fi determinat de adenovirusuri,
enterovirusuri, virusuri din grupul Serpes !herpes simple5, varicella-zoster%. Eactorii care
determin infeciile virale inaparente sunt multipli0 natra virsli infectant !circulaia
n populaia uman a tulpinilor virale moderat virulente sau atenuate%, gra"l "e
re'isten! nespecific! #i specific! 9imn!: a organismli ga'"!, incapacitatea nor
virsri "e a a$nge la estrile int! sau fenomenl imnotoleranei organismului gazd
fa de unele virusuri.
M.D. Inf&#5ia viral4 la$&n$4
7n acest tip de viroze !prezen;a virusului cu reactivare periodic7% se creaz un
echilibru ntre virusul infectant i organismul parazitat, care are drept consecin apariia
unor boli cu evoluie lung, uneori cu pusee i perioade de VliniteK clinic, alteori cu
alur subacut sau cronic progresiv. =5emple0 infeciile latente cu virusuri din grpl
7erpes !factori declanatori0 emoionali, nutriionali, infecii intercurente, ciclu
menstrual, intoleran digestiv%/ infeciile cu a"enovirsri, virsri "e tip C& infecii c
virsri ;lente !varianta neurotrop a virusului ru'eolos care poate determina
panencefalita sclerozant subacut demielinizant%. 7n cazul acestei categorii de viroze
lente intervin fenomenele de autoimunitate i imunotoleran.
N. "ACCINURI "IRALE
$rima imunizare activ !vaccinare% antiviral a fost vaccinarea antivariolic cu
virus vaccinia, efectuat n 1<8 de ctre Nenner. &up criteriile componentelor virale din
vaccin, vaccinurile virale sunt de dou categorii0 inactivate i vii.
N.1. "a##inuri ina#$iva$&
.irusuri multiplicate pe o )azd7 sensibil7% apoi inactivate !temperatur ridicat,
formol, betapropriolacton%, cu p7strarea capacit7;ii imuno)ene dar cu pierderea
capacit7;ii pato)ene. =5emple0 vaccinl antirabic& antigripal& antir$eolos&
antipoliomielitic. + snt nocive !incapabile de a produce boal%, dar prezint anumite
dezavanta'e0 in"c imnitate antiviral! moral! "e scrt! "rat! !nu celular, nu local%,
iar agentul inactivant poate determina reacii "e intoleran! locale sa generale.
N.*. "a##inuri vii
9onin tulpini de virus vaccinal capabile ca, administrate receptorului uman, s se
multiplice la poarta de intrare, 57r7 a produce boala% dar determin=nd un r7spuns imun
e5icient. Dunt de dou feluri.
3 va##inuri vii #u virusuri n&/a$o9&n& /&n$ru o,: @nru(i$& an$i9&ni# #u a9&n$ul viral
#au'a$or al %olii /&n$ru #ar& s& fa#& i,uni'ar&a a#$iv4. =5emplu0 vaccinl
antivariolic, care const n aplicarea pe cale transcutan sau percutan a virusului
vaccinia !nepatogen pentru om dar identic antigenic virusului variolic%. Aspunsul imun
umoral i celular indus de ctre vaccinarea cu virus vaccinia asigur protecia solid i
ndelungat mpotriva variolei.
3 va##inuri vii a$&nua$& 1 <a(a/$ar&= a unor /o/ula5ii viral& /& anu,i$& su%s$ra$uri
(& ,ul$i/li#ar&: #u /i&r(&r&a /a$o9&ni$45ii& =5emple0 antipolio c a"ministrare oral!&
antir$eolos c a"ministrare parenteral!.
"vanta'ul vaccinurilor virale vii const n reali'area ni r!spns imn moral #i
cellar soli"& "e lng! "rat! !antipolio creaz i un ecran de protecie local - Mg"
secretor%.
&ezavanta'ele acestor vaccinuri, dei puin numeroase, sunt demne de toat
atenia. 7n cazul vaccinurilor vii neatenuate !virus vaccinal%, unii indivizi receptori, pe
teren de imunodeficien, pot prezenta o boal! generali'at! !vaccin% sau reacii "e
hipersensibilitate ime"iat! !alergie%, uneori cu semne neurologice grave. 7n cazul
vaccinurilor vii atenuate nu poate fi nlturat riscl seleciei nor particle virale
patogene c apariia nor ca'ri "e boal!.
1E. C>IMIO2ROFILAXIE )I C>IMIOTERA2IE ANTI"IRAL
=5it dou cate)orii de di5icult7;i care limiteaz introducerea chimioprofila5iei
antivirale0
- deoarece agentul viral utilizeaz aparatul ribozomal al celulei parazitate n vederea
programrii propriilor sinteze, este dificil de delimitat, n funcie de natura i doza
chimioterapicului, aciunea inhibitorie asupra multiplicrii virale de deprimarea funciilor
de biosintez celular normal !di5icultatea preciz7rii concentra;iilor virulicide 6i to*ice
de dro)%/
- ac;iunea e5icient7 a chimioterapicelor antivirale are loc numai 1n 5azele precoce ale
in5ec;iei virale, nainte de apariia manifestrilor clinice ale bolii.
&up aciunea lor nt6lnim dou categorii de chimioterapice0 ageni care
mpiedic adsorbia, penetrarea i decapsidarea virusului i ageni care inhib sintezele de
tip viral n celula virus-parazitat. 2a aceste dou categorii de chimioterapice se poate
aduga i interferonul, care are aciuni terapeutice particulare.
1E.1. A9&n5i #ar& @,/i&(i#4 a(sor%5ia: /&n&$rar&a i (&#a/si(ar&a
A,an$a(ina - blocheaz ataarea virusului pe celula gazd prin inhibarea
neramini"a'ei !enzim prezent n nveliul virusului%. "cioneaz selectiv asupra unor
virusuri "A10 v. gripale, paragripale, v. respirator sinciial, v. rubeolic.
1E.*. A9&n5i #ar& in+i%4 sin$&'&l& (& $i/ viral @n #&lula virus1/ara'i$a$4
Chimioterapice cu ac;iune asupra virusurilor ARN0 +i(ro6i%&n'il1
%&n'i,i(a'ol 7>BB8: 9uani(ina care blocheaz activitatea "A1-polimerazei virus-
dependente !enterovirusuri%/ Ri%avirinul care inhib multiplicarea virusului ru'eolos prin
substituirea unor nucleozide din molecula de "A1 viral.
Chimioterapice cu ac;iune asupra virusurilor A(N0 Rifa,/i#ina, eficient n
fazele timpurii ale ciclului viral, premergtoare apariiei primelor manifestri clinice/
T+ios&,i#ar%a'on&l& 7,&$isa'on48 care inhib sinteza proteinelor virale !apariia de
proteine virale tardive nefuncionale% la unele virusuri "&1 !adenovirusuri, po5virusuri%/
#o,/uii #i$o'in1ara%inosi( 9ara0C: #i a"enin0arabinosi" 9ara0A: care inhib sinteza de
"&1 viral !herpes simple5, varicella-zoster, v. citomegalic%.
$AM)1MM #M $AM)1)P=2=
GENERALITGI
7n ultimii . ani, preocuparea pentru bolile prionice a depit domeniul medical,
intr6nd n atenia opiniei publice mondiale datorit problemelor ma'ore de sntate
public ridicate, cu implicaii at6t n relaiile economice, c6t i politice, statale i
interstatale.
Demnalul de alarm a fost dat n anul 1<<;, n "nglia, de apariia noilor variante
de boal 9reutzfeldt-Na4ob !9N% anume, ,8 de cazuri la tineri. Gariantele de 9N s-au
dovedit a fi produse de tulpini prionice cu proprieti pe de o parte distincte de cele
incriminate n alte tipuri de boal 9N !sporadic, genetic% cunoscute p6n atunci, iar pe
de alt parte cu proprieti foarte apropiate de cele ale tulpinilor din =DC !encefalopatia
spongiform bovin%. "ceste aspecte au condus la conluzia c prin consumul de carne de
vit !probabil infectat cu agentul prionic =DC%, aceste tulpini s-au transmis, odat cu
carnea infectat, pe cale enteral, la om, gener6nd boala prionic, demonstr6ndu-se n
acest fel, absena oricrei bariere interspecie !bovine-om% pentru agentul prionic infecios.
2RIONII sunt ageni infecioi de natur7 proteic7, cu proprietate unic, aceea de
a se multiplica, dei sunt lipsi;i de acid nucleic% responsabili de inducerea unor afeciuni
ale sistemului nervos central, la om i la animale, denumite &n#&falo/a$ii s/on9ifor,&
$rans,isi%il& 7EST8>
"ceste encefalopatii spongiforme transmisibile !=DT%, sunt boli
nero"egenerative cauzate de un agent patogen a crui natur, proprieti, multiplicare i
transmisie rm6n nc i astzi incomplet cunoscute/ ele se caracterizeaz printr-o
perioad foarte lung de incubaie !perioad de infecie ce dureaz luni p6n la +8 de ani%,
perioada de boal propriu-zis !odat cu apariia primelor semne clinice i cu evoluia
unor tulburri grave anabolice%, totdeauna cu sf6rit letal.
$6n astzi au fost descrise urmtoarele boli prionice0
- la animale0 boala scrapie, =DC !bovin%, encefalopatia transmisibil a nurcilor, a
antilopei africane i elanilor, a felinelor i a struilor/
- la om0 boala 4uru, boala 9reutzfeldt-Na4ob, sindromul Lerstman-Dtraussler !DLD%,
insomnia fatal familial !MEE%, boala "lper.
Termenul de prion% semnific6nd Hproteine infecioaseK - Hprotinaceous in5ectious
particle? !2r2r&s, 2r28, a fost introdus n biologia molecular de ctre S$anl&- 2rusin&r
de la :niversitatea Dan Erancisco n 1NM* anterior acest agent infecios fiind cunoscut sub
numele protovirinae, virinos, virus latent, virus conveional. &up teoria lui $rusiner,
aceti prioni ar reprezenta a)en;i in5ec;io6i lipsi;i de a)en;i nucleici% 5orma;i e*clusiv
din proteine% ceea ce aprea n total contradicie cu dogma central a biologiei
moleculare, prin acceptarea unei codificari i multiplicri ale acestei proteine prionice
infecioase, nu prin intermediul propriului agent nucleic al agentului prionic, ci prin
intermediul acidului nucleic al celului gazd !figura ,%.
Eigura ,0 Dtructura prionilor.
!sursa0 http0[[[email protected]%
9onform unei ipoteze recente !anul ,888% prionii ar fi nite epigene care ar fi
transferate de la un organism la altul prin intermediul unui "&1 cu rol de vector, dar nu
i de gen.
"lt teorie susine c responsbil !vector% de transmisia bolii prionice naturale
scrapie le oi i capre ar fi un agent microbian. $roteina acestui agent microbian s-ar
asemna cu 2r2
#
7proteina cellar! normal! "e la sprafaa membranei plasmatice%,
fiind capabil a se replica n celula gazd prin folosirea "&1 gazdei mamifer. Dimultan
cu aceast multiplicare, proteina microbian ar putea declana n celula gazd o reacie
autoimun i[sau degenerativ, un fenoment asemntor fiind descris fa de antigenul
proteic al amibei 1aegleria gruberii.
) alt ipotez susine c0 e5punerea bianual n anii k88, n "nglia, a animalelor la
avicidul phosmet !folosit la tratarea punilor pentru ndeprtarea psrilor% i ingerarea
acestor substane to5ice odat cu fura'ele !absorbia enteral% - o prim concentrare n
esuturile animale, urmat de a ,-a concentrare cu ocazia prelucrrii industriale a prafului
de oase i organe animale pentru hrana vitelor, a dus la aciunea nociv, remanent a
concentratului de avicid din praful fura'er asupra $r$
c
din D19 al bovinelor fura'ate
artificial, av6nd drept rezultat apariia isoformei patologice $r$res responsabil de
apariia =DC epidemic. 9omform acestei ipoteze =DC determinat de aciunea omului ar
fi o clas nou de manifestri cronice neuroe5citoto5ice nt6rziate induse de phosmet la
bovinele sensibile.
2r2 este produsul de cliva< al unei proteine normale de ++-+. 4&a !2r2#%.
$roteina precursoare este o glicoprotein cu o structur tridimensional unic,
prezent la suprafaa membranei plasmatice a tuturor celulelor din organism, dar cu cea
mai mare concentraie pe suprafaa celulelor neuronale !figura +%. =a are rol n0
- ,&,ori& !prin codificarea i conservarea stabil a informaiei%. =ste foarte abundent
n special n hipocamp !sediul memoriei%, primul simptom al bolii prionice !prin
distrugerea $r$c i acumularea $r$res% fiind pierderea memoriei/
- @n $rans,isia sina/$i#4 !interaciuni cu receptorii de acetilcolin - n reglarea
numrului de chemoreceptori pentru acetilcolin%/
- rol $rofi# pentru celulele cerebeloase $ur4in'e crora le asigur longevitatea/
- rol @n s$a%ilir&a #on&6iunilor #&lul41#&lul4 @n ariil& sina/$i#&: i @n$r& #&lul&l&
n&uronal& 1 #&lul& 9lial&/
- rol @n ,&n5in&r&a so,nului i r&9lar&a in$&nsi$45ii a#&s$uia/
- rol @n reglarea unor aspecte legate de ,&$a%olis,ul Cu
BB
: determin6nd creterea la
stressul o5idativ prin e5ercitatea unei aciuni de echilibrare a nivelurilor 9u[Pn D)&
!cantitatea e5agerat de $r$ duc6nd la scderea rezistenei la acest tip de stres%.
2r2 este i'ofor,a /a$olo9i#4 de tip PrP
SC
& PrP
ES?
#i PrP
CG*
a proteinei normale
2r2
#
V structura primar a ambelor proteine este asemntoare !de ,.8 de aminoacizi%,
Eigura +0 $atogenia infeciei prionice !sursa0 http0[[[email protected]%
2izozom
=ndozom
dar structura secundar este diferit0 $r$c are structura secundar de tip j-heli5, pe c6nd
cea a $r$
s
!scrapie% este de tip b-plisat, nsoit de modificri ale structurii teriare.
"ceast $r$ aparine grupului de proteine denumite au$ofol(a'&: capabile de
autoreplicare, denumite i H#+a/&ron&<: av6nd rolul de supraveghere posttranslaional
n sinteza proteinelor, pentru realizarea corect a conformaiei structurale a acestora.
"stfel, $r$
c
nou sintetizat, pentru a deveni activ, are nevoie de o structur secundar de
tip j-heli5. $lierea corect se realizeaz n prezena unei proteine H#+a/&ron&<.
2r2 apare ntr-un proces de alterare !conversie% postranslaional a structurii
secundare !conversie din forma de mpturire alfa-heli5 n conformaie beta de foi pliate%
i teriar !sub influena ionilor de 9u% a proteinei $r$
c
normale a gazdei, proces de
conversie prin care izoforma c6tig capacitate de a-i codifica infeciozitatea. "stfel,
aceast protein 2r2 H#+a/&ron&< anor,al4 aprut va servi posttranslaional ca
,a$ri54 pentru realizarea de structuri de $i/ 01/lisa$, n loc de j-heli5. "ceste proteine
2r2
#
anor,al& se comport ca un agent infecios, utiliz6nd proteinele celulare pentru
propagarea e5ponenial a informaiei structurale, anormale, proprii.
$r$ se izoleaz din plcile amiloide cerebrale, fiind componentul principal al
acestora.
Morfologic, apar ca structuri filamentoase HD"EV!scrapie associate" filaments:>
$r$ are greutate molecular de ,1-+84&a.
$r$ purificat polimerizeaz sub form de bastona#e& cu dimensiuni de 18-,8nm,
care se aseamn cu amiloidul, ultrastructural i biochimic.
Dusceptibilitatea la =DT este (&$&r,ina$4 9&n&$i#.
=5presia $r$
c
uman este codificat de gena $A1$, de pe braul scurt al
cromozomului ,8. "ceast gen are un cadru deschis de citire de ,.+ de codoni !)AE%.
:nele =DT la om sunt familiale, ereditare0 boala 9reuzfeld-Nacob !C9N%, boala
Lerstman-Dtrlussler-Dcheinc4er !CLDD%, insomnia fatal familial !MEE%, suger6nd o
transmitere de tip atosomal "ominant>
"spectele diferite clinice, histopatologice sunt determinate de numeroase mutaii
punctiforme care intereseaz codonii din regiunea )AE ai genei $A1$. "stfel, mutaiile
n codonii ,88, ,18, ,+, determin tabloul clinic al C9N, mutaiile codonilor 11, 1<8,
,1 se coreleaz cu CLDD, iar mutaiile situate la codonii 1,<, 18 cu MEE sau C9N
!secundar mutaiilor sinteza de valin va duce la apariia C9N, sinteza de metionin la
MEE%.
$olimorfismul codonilor poate fi factor asociat al diversitii clinice.
CULTI"AREA 2RIONILOR
$entru cercetarea relaiei prioni-celul gazd s-au folosit animale !cimpanzei% i
substraturi celulare de creier, la care s-au administrat suspensii de creier de la bolnavi cu
boal Buru sau C9N.
- Ani,al&
9impanzeii inoculai intracerebral cu suspensii de creier de la bolnavi de Buru sau
filtrate acelulare de la pacieni cu C9N, au reprodus boala dup o laten de 1 an.
D-a demonstrat de asemenea c numeroase alte specii animale pot fi infectate cu
astfel de produse0 maimue, oareci, hamsteri, nurci, pisici, oi, bovidee. 9oncluzia0
prionii pot 5i transmisibili interspecii&
- Cul$uri #&lular&
9ulturi de e5planturi de creier inoculate cu ageni Buru sau ai C9N i pstreaz
infectivitatea pe o perioad de ,.-8 zile de meninere a acestora in vitro>
ACGIUNEA AGENGILOR FI3ICI: C>IMICI ASU2RA 2RIONILOR
2r2 sunt re'istente la agenii care inactiveaz acizii nucleici0 radiaii ionizante,
radiaii u.v., nucleaze !&1-aze, A1-aze%, proteze.
$r$ sunt re'istente la ageni chimici ca0 aldehidele !formaldehide, glutaraldehide%,
propiolactona, hidro5ilamina, psoralen.
$r$ sunt parial inactivate de0 cldur !188
8
9%, fenol, hidro5id de 1a.
"genii prionici sunt foarte re'isteni la meto"ele obi#nite "e sterili'are, iar
fi5area n formol a esuturilor animale determin creterea rezistenei agenilor prionici
chiar i la autoclavare ulterioar la 1+;
8
9 timp de o or. 7n prezent se consider drept
sterili'are eficient! meninerea probelor infectate 1 or4 @n solu5ii NaO> 1M ur,a$4 (&
au$o#lavar& la 1AD
E
C $i,/ (& AE,in, doar n cazul netratrii anterioare n etanol sau
formol. 7n 1NNN literatura de specialitate modern consider drept cel mai bun procedeu
pentru distrugerea agenilor, tratamentul cu acid picric saturat 1. minute, urmat de
au$o#lavar& su% /r&siun& la 1*1
E
C, 18 minute, tratament cu acid 5ormic la . minute, i
apoi cu )uanidintiocianat ;M, , ore la R; grade 9elsius.
Aezistena particular a $r$ ar fi e5presia mo"ific!rilor sale conformaionale, care
determin "eficiene "e transportare la sprafaa cellei #i "e cataboli'are, consecina
fiind tendina de a forma agregate fibrilare, cu acmlare anormal! n sbstana
cerebral! #i "e'ogarni'area acesteia>
PATO#ENIE
In$rar&a @n or9anis, a a9&n5ilor /rioni#i se face pe0
- cale oral70 este cazul %olii Juru care a aprut datorit canibalismli practicat ca
ritual de ctre componenii unor triburi din $apua !1oua Luinee% prin ingestie "e
creier "e la "ece"ai, sau a &n#&falo/a$i&i s/on9ifor,& %ovin& 7ESB8, care a aprut
consecutiv hr!nirii bovinelor c f!in! "e carne& insficient prelcrat! termic&
provenit! "e la oi #i capre/
- parenteral0 prin in$ecii c preparate contaminate& transf'ii& intervenii
chirrgicale& transplantri "e organe/
- c7i poten;iale de contaminare iatro)en70 creierl #i alte estri 9"ramater&
cornee:>
Dis&,inar&a @n or9anis,0
- pe cale lim5atic70 dup o prim replicare %n ganglionii regionali, inva"ea'! c!ile
limfatice, apoi calea sangin! i, prin intermediul trombocitelor infectate, se
locali'ea'! %n estl reticlo0en"otelial/
- pe cale nervoas7% centripet, pe traseele nervoase prin m!"v! la S+C.
Dtudii recente au demonstrat c dup infectarea cu agent prionic infecios a
esutului cerebral al animalului respectiv se declaneaz o suprastimulare a sistemelor
cerebrale L"C" i glutamat-ergice pe termen lung, ceea ce corespunde perioadei de
laten !de infecie% p6n la declanarea bolii -emergena primelor semne clinice- care
duce la distrugerea sistemului inhibitor L"C"ergic al creierului i la un proces
neuroto5ic generalizat.
1u se cunosc modalitile de eliminare din organism ale prionilor, dei prionii au
fost evideniai n s6nge i urin.
AS2ECTE ANATOMO12ATOLOGICE
&in punct de vedere anatomo-patologic, toate encefalitele spongiforme se
caracterizeaz prin "egenerarea cellelor neronale c vacoli'are progresiv! a corpilor
neronali& "en"ritelor #i a-onilor& cu proliferare reactiv! glial! astrocitar! e-cesiv! n
zona cortical i subcortical, cu "epnerea nor fibre formate dintr-o isoform
patologic !$r$
s
% a proteinei prionice celulare $r$
c
cu aspect tubulovezicular n
prelungirile postsinaptice. 7n final, aspect de Hs$a$us s/on9ious< al materiei cenuii.
AS2ECTE CLINICE
EST la om sunt0 boala Cte'fel"0Gacob 9?CG:& boala 6erstman0Str\ssler0
ScheincHer 9?6SS:& insomnia fatal! familial! 9III:& boala 8PRP.
Boala Cr&u'f&l(1Ra#o%7BCR8
&ebuteaz n 'urul v6rstei de *. de ani, cu oboseal, an5ietate, confuzie. 7n
perioada de stare apar miocloniile, ata5ia cerebeloas, simptome piramidale i
e5trapiramidale, mutism a4inetic, demen progresiv. =voluia este fatal n decurs de *
luni-1 an.
=5ist + forme de C9N0
s/ora(i#40 corelat cu rata mutaiilor ce pot surveni n gena $A1$/
fa,ilial41&r&(i$ar40 datorat mutaiilor punctiforme sau de inserie n regiunea
genei $r$c/
ia$ro9&n40 urmarea unor tratamente sau manevre chirurgicale
7n 1<< literatura cita mai mult de 188 de cazuri de C9N iatrogen. "ceast form
poate aprea la orice v6rst, se datoreaz transmiterii agentului prionic infecios prin
instrmente infectate !electrozi pentru ==L, instrumente chirurgicale, stomatologice, de
e5plorri paraclinice, )A2%, implantarea la om "e biomaterie "e origine man! !grefa de
cornee, de duramater, de timpan, grefoane cutanate de la cadavru cu boal 9N, ipotetic
grefoane de orice esut infectat cu agent 9N% sau "e origine animal! !valve cardiace de
origine bovin%, pro"se "e s(nge #i plasm! provenind de la persoane infectate cu agent
9N, a"ministrare "e hormoni pititari "e cre#tere "in e-trase "e hipofi'! "e la ca"avre c
boal! CG, vaccinare c vaccin antirabic preparat din esut cerebral de la animal infectat
cu agent prionic, preparate cosmetice sa farmacetice "in est bovin, infectarea
personalli me"ico0sanitar !chirurgi, neurochirurgi, ortopezi, )A2-iti, stomatologi,
anatomo-patologi% prin microtramatisme n cursul unor intervenii pe bolnavi sau
manipulri de esuturi infectate cu agent 9N.
"arian$a nou4 a BCR !9Nnv% reprezint o entitate distinct clinico-patologic,
semnalat ntre 1<<; i 1<<8 n "nglia !;8 de cazuri% i Erana !+ cazuri% care afecteaz
adolesceni i persoane tinere !,*-,< de ani%, homozigoi pentru metionin la codonul
1,<. 9linic se caracterizeaz prin apariia precoce a tulburrilor psihice, urmate de ata5ie,
micri involuntare, tulburri cognitive- pierdere de memorie, durata medie a bolii fiind
18 luni.
Boala G&rs$,an1S$r]ussl&r1S#+&in#.&r 7BGSS8
9u caracter familial: apare la v6rsta de ;.-.8 ani, cu o simptomatologie
asemntoare C9N, dominat de ata-ie spinocerebelos! #i "emen!.
Inso,nia fa$al4 fa,ilial4 7IFF8
&escris de ,e"ori %n .BB3, este o boal cu caracter familial !ntr-o singur
familie au fost afectai ,< membri pe parcursul a . generaii%. 9linic se manifest prin0
insomnie netratabil!& mioclonii& ata-ie& hipertermie& tahicar"ie& hipertensine& conf'ie&
halcinaii. Sistologic0 atrofie selectiv a nucleilor anterior ventral i mediodorsal.
&urata bolii0 1+ luni.
Boala JURU
De caracterizeaz clinic prin0 ata5ie cerebeloas !4uru-tremurturi%, rigiditate,
cae5ie progresiv , cu sf6rit letal.
EST la ani,al&0
1. S#ra/i& 7la $r&,%lan$& sau $ro$$in9 (&s&as&8
=ste prezent sub form de infecie endemic la oi i capre. 7n ultimii ; ani au fost
semnalate epidemii de scrapie n Mrlanda, Mslanda, 9ipru !fac6nd referire special la Erana
- ,1 de epidemii n 1<<8%. D-a dovedit c susceptibilitatea animalelor la infecie e legat
de cea a codonilor 1+*, 1.; i 11. 7n studii efectuate s-a dovedit c la 88F din oile
infectate cu scrapie, isoforma patologic $r$ rezistent la nucleaz, a fost detectat n
probe de esut de splin, ganglioni limfatici, placent. 9ea mai frecvent cale de
transmitere ram6ne ns calea oral.
*. ESB 7T%oala va#ii n&%un&=8
= considerat o boal creat de m6na omului. " fost semnalat pentru prima oar
n "nglia. " aprut drept consecin a unei practici greite industriale de tratare termic a
prafului de carne, de creier, ce provin de la oi i capre, probabil infectate cu $r$ folosite
ca adaos alimentar pentru bovidee. 9arcasele acestor animale nu au mai fost pretratate
prin e5tracie cu solveni organici timp de 8 ore, proces urmat de e5punerea la vapori
supranclzii pentru ndeprtarea solvenilor. Er aceast procedur infectivitatea
prionilor se conserv, iar adaosul n hran a determinat epidemia de encefalopatie
spongiform bovin !=DC% prin inocularea agentului scrapiei la bovine.
$erioada de incubaie a durat +-8 ani, primele cazuri de boal clinic
!e5citabilitate, micri nervoase ale urechilor i ochilor, hipersensibilitate la atingere,
zgomot, lumin, ata5ie% apr6nd la 8.888 de bovine/ dei n 1<8< s-a renunat la aceast
practic de hrnire a animalelor, ntre 1<8< i 1<<; epidemia de =DC a cuprins ,..;8; de
cirezi. 7n 1<<* o nou epidemie n "nglia a dus la sacrificarea !incinerarea% a 1; milioane
de bovine, culmin6nd cu apariia primelor noi cazuri de boal 9Nnv la om. Aealitatea
ultimilor ani a prezentat proba cea mai convingtoare a dipariiei barierei dintre specii n
cursul transmiterii =DC de la bovine la om. 7n ultimii ; ani au fost depistate epidemii de
=DC n "nglia, Mrlanda, Erana.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
7n ultimii ani a fost studiat un numr mare de teste de laborator pentru
diagnosticul ante-mortem al infeciei prionice, dar dificultile nt6mpinate s-au dovedit
deosebit de mari0 metodele utilizate nu au dus totdeauna la detecia $r$ n eantioanele
nalt infecioase. D-a constatat c prezen;a PrP nu poate 5i detectat7 9sub valoarea de 2
milion de particule in5ec;ioaseJ) ;esut cerebral: n stadiile timpurii ale infeciei
!perioada asimptomatic%. $r$ nu a putut fi niciodat evideniat n elementele figurate
albe ale s6ngelui i nici n mi5turile de hormoni de cretere cu agent prionic prezent care
au provocat bloala 9N.
2ro(us&l& /a$olo9i#& anali'a$&0 biopsii de esut cerebral, ganglioni spinali, nervi
periferici, s6nge, 29A.
M&$o(& (& s$u(iu0
E6a,&nul +is$o/a$olo9i# (ir&#$ al 5&su$ului #&r&%ral %io/$i# prezint un risc
ma'or !n caz de 9N% de morbiditate i frecvent poate fi fcut fr a prinde zonele cu
leziuni caracteristice, obin6ndu-se astfel rezultate fals-negative.
E6a,&nul i,uno1+is$o1#+i,i# este folosit pentru evidenierea (&/o'i$&lor (&
2r2 n ganglionii splinali, enterici i nervi periferici n C9N, LDD, MEE, =DC i scrapie
prin tratarea amprentelor de esuturi cu anticorpi monoclonali marcai fluoresceni.
Z&s$&rn %lo$$in91ul !immunoassa@% permite e5ectuare unui dia)nostic preclinic,
precoce al C9N, prin detectarea mar4erului $r$ n material bioptic de esut tonsilar i
apendicular uman, n 29A, s6nge i derivate de plasm !albumin, Mg% p6n la doza
infectant de .-18 mg $r$ i respectiv 18 :M[ml. Mar4erul $r$ este evideniat prin cuplare
cu anticorpi monoclonali.
2ET1%lo$$in91ul este o metod mlt mai sensibil! dec6t Uestern blotting-ul
convenional. 9u aceast metod devine posibil7 detectarea PrPres 6i 1n perioada de
incuba;ie% cu mult 1nainte de aapari;ia semnelor clinice% 6i 1n cazul bolilor prionice cu
niveluri 5oarte sc7zute de PrP& Tehnica este sensibil la detectarea $r$ n esuturi fi5ate
n formol i incluse, n parafin. 9u aceast metod poate fi investigat esut cerebral de
arhiv provenind din cazuri C9N sporadice i c6tigate, =DC i scrapie. Metoda a dat
rezultate concludente i n cazurile n care imunchimia a fost echivoc sau chiar negativ.
Dunt n curs de standardizare metoda ELISA #an$i$a$iv4: &l&#r$ofor&'a #a/ilar4:
s/r&#$rios#o/i& @n infrarou.
2CR i #ro,a$o9rafia au fost introduse n ultimii ani n practica medical pentru
controlul produselor biofarmaceutice !derivate din plasm%, utilizate n tratamentul
coagulopatiilor.
2CR i +i%ri(i'ar&a (o$ %lo$ 7#u ,ar#ar&
A*
28 se folosesc pentru determinarea
variantelor alelice $r$
c
i selectarea variantelor codonului 11 arginin care s-a dovedit
!la oi% corespunztor animalelor rezistente natural la scrapie, n vederea selecionrii, din
turmele de oi, a e5emplarelor rezistente la infecie, pentru crearea unor noi generaii de
animale rezistente n focarele endemice.
(ia)nosticul bolii prionice de certitudine rm6ne &vi(&n5i&r&a l&'iunilor
+is$o/a$olo9i#& #&r&%ral&: /os$1,or$&,.
E2IDEMIOLOGIE
Aezervorul de boal0 omul , dar i animalele. C7ile de transmitere a bolilor
prionice0 oral!& iatrogen!& c caracter profesional.
1. Cal&a (& $ran,isi& oral4 a a9&n$ului ESB
Mndic rezistena la sucul gastric i la proteazele intestinale, acesta a'ung6nd la
ganglionii limfatici i ileonul distal. 9ercertri efectuate n Celgia n anul ,888 au
raportat < de cazuri confirmate anatomo-chimic i imunohistichimic a fi boala 9N& i au
fost puse n legtur cu epidemia de =DC.
1oile variante 9N semnalate n "nglia i Erana care au afectat persoane tinere
!media v6rstei ,*-,< ani% n comparaie cu cazurile clasice de 9N ce apar dup . de ani,
au fost relaionate cu consml "e carne "e vit! infectat! c agent ES?. "ceste cazuri
dovedesc c bariera de specie pentru a)en;i prionici este dep76it7. &ispariia barierei de
specie s-ar datora capacit!ii "e a"aptare prin anmite mo"ific!ri genetice a
respectivli agent infecios la noa ga'"!& consecina acestor modificri genetice fiind
cre#terea virlenei>
Tot literatura de specialitate menioneaz c fiind foar$& 9rav faptul c
oficialitile sanitare consider (r&/$ a%s&n$4 inf&#5ia /rioni#4 a#olo un(& nu &s$&
(&$&#$a$4 /r&'&n5a 2r2: dei poate e5ista agent infecios foarte virulent !dar n cantitate
mic, nc nedetectabil cu a'utorul tehnicilor de diagnostic actuale% i care poate fi
transmis foarte uor de la indivizi cu infecii asimptomatice la indivizi sntoi. "stfel, n
cazul seviciilor veterinare carnea unor vite infectate !asimptomatice% considerate indemne
de infecie !din cauza unor metode de laborator cu sensibilitate sczut% poate fi dat n
consum, afect6nd populaia.
\in6nd cont de aceste aspecte, cea mai urgent datorie a specialitilor este
analizarea cu mare atenie a tuturor situaiilor suspecte nainte de a se lua decizia
admiterii n consum a anumitor produse alimentare provenite din zone endemice, c6t i
aceea de implementare a metodelor celor mai eficace de diagnostic pentru depistarea
eficient, c6t mai precoce a agentului prionic infecios.
7n cazul epidemiilor de =DC carnea de la animalele !bolnave i suspecte% se
distruge prin incinerare. 7n prezent nu se cunoate nc amplitudinea real a contaminrii
umane n "nglia unde au evoluat epidemiile din 1<8*-1<<* de =DC, contaminarea bovin
real actual n c6teva ri de'a menionate n care a fost semnalat boala. :nele lucrri
de specialitate ridic ipoteza unei posibile infectri a apelor prin descrcarea agenilor
prionici n apele deversate din zona abatoarelor i punilor, in6ndu-se cont de rezistena
foarte mare a infectivitii lor n mediul e5tern.
*1 Cal&a (& $rans,i$&r& ia$ro9&n4
Transmiterea agentului prionic infecios se pote realiza prin0
instrmente infectate !electrozi pentru ==L, instrumente chirurgicale, stomatologice,
de e5plorri paraclinice, )A2%/
implantarea la om "e biomaterie "e origineQ
0 man! !gref de cornee, de duramater, de timpan, grefoane cutanate de la
cadavru cu boal 9N, ipotetic grefoane de orice esut infectat cu agent 9N%/
0 animal! !valve cardiace de origine bovin%/
a"ministrarea de pro"se "e s(nge #i plasm! provenind de la persoane infectate cu
agent 9N/
a"ministrare "e hormoni pititari "e cre#tere "in e-trase "e hipofi'! de la cadavre cu
boal 9N/
vaccinare c vaccin antirabic preparat "in est cerebral "e la animal infectat cu
agent prionic/
preparate cosmetice sa farmacetice din esut bovin/
infectarea personalli me"ico0sanitar !chirurgi, neurochirurgi, ortopezi, )A2-iti,
stomatologi, anatomo-patologi% prin microtramatisme n cursul unor intervenii pe
bolnavi sau manipulri de esuturi infectate cu agent 9N.
&in 1<<+ pe plan internaional au fost luate msuri de prevenire a rsp6ndirii
agenilor infecioi prionici prin e-cl"erea "onatorilor "e s(nge c potenial infectant
!donatori transfuzai%. 7n prezent se discut e5cluderea donatorilor cu se'ururi petrecute n
Marea Critanie i n ri cu =DC !Mrlanda, Erana, Celgia, &anemarca, Dpania, $ortugalia,
Mtalia, Lermania, 2u5emburg%.
"v6nd n vedere numrul mare de cazuri CR ia$ro9&n, c6t i rezistena foarte
nalt a agenilor prionici infecioi la procesele obinuite de sterilizare, apare
recomandarea e5pres pentru serviciile de chirurgie, anestezie i reanimare etc. de
recunoatere a pacienilor cu risc i de respectare, n legtur cu acetia, a anumitor
msuri de precauie. "cestea se refer la faptul c instumentarul folosit pentru investigaii
paraclinice !bronhoscop, endoscop%, instrumente pentru intervenii chirurgicale, canule
pentru intubaie indotraheal la bolnavii cu 9N trebuie (is$rus !i nu refolosit dup o
sterilizare obinuit%, n ciuda tuturor pierderilor economice foarte mari pe care aceste
msuri le provoac serviciilor respective. Aecomandrile sunt valabile i pentru serviciile
stomatologice, oftalmologice.
$erioada de incubaie0 , luni-, ani.
A. Trans,i$&r&a #u #ara#$&r /rof&sional
" fost semnalat la pesoane ce vin n contact cu esuturi infectate i s6nge0
mcelari, personal medical !neurochirurgi, oftalmologi, anatomopatologi, n ambulatorii
de asisten medical, cabinete dentare, servicii chirurgicale neurologice, )A2,
prosecturi, bnci de esuturi i organe%.
"cest lucru este posibil datorit faptului c un agent infecios prionic foarte
virulent !dar n cantitate mic, nc nedetectabil cu a'utorul tehnicilor de diagnostic
actuale% poate fi transmis foarte uor de la indivizi cu infecii asimptomatice la indivizi
sntoi, de la produse de carne infectate la cei ce le manipuleaz.
2ROFILAXIE
a e5cluderea de la donarea de organ a indivizilor cu antecedente familiale de boli
prionice i a persoanelor la care li s-a administrat hormon hipofizar/
a manipularea cu precauie a esuturilor i organelor provenite de la pacieni cu =DT/
a sterilizarea corect a instrumentarului/
a incinerarea produselor biologice contaminate/
a incinerarea carcaselor animalelor bolnave de =DT.
TRATAMENT
$6n n prezent a fost testat eficena unui numr mare de preparate pentru
tratamentul bolilor prionice. Aezultatele nu sunt satisfctoare. "stfel se pot administra0
- am5otericina - !a determinat doar prelungirea perioadei de incubaie n scrapie
e5perimental%/
- blocante ale sistemului polianionic !polio5ometalai i polianioni organici%/
2ARA3ITOLOGIE
$arazitii sunt organisme vii animale sau vegetale, care traiesc o perioada mai lunga sau
mai scurta a e5istentei lor in dependenta cu un alt organism viu, numit gazda.
$arazitismul nu reprezint o form degenerat de via, ci din contr, o etap mai mult
sau mai puin perfect de adaptare ntr-un mediu favorabil. $entru a-i asigura
perpetuarea propriei specii n natur, parazitul este supus unor transformri pentru
adaptarea la condiiile organismului gazd, derul6ndu-se astfel ciclul biologic al
parazitului.
$arazitismul este o noiune ecologic, motiv pentru care este necesar cunoaterea
paraziilor, a gazdelor lor, precum i a corelaiilor care rezult ca urmare a supravieuirii
unui organism pe seama altui organism viu.
$rezena paraziilor n organismul uman determina form nosologic, parazitoza.
CLASIFICARE

$araziii se pot clasifica dup mai multe criterii0
1. Du/4 na$ura 9a'(&i /ara'i$a$&
a8 /ara'i5i u,aniV
%8 /ara'i5i ai ani,al&lor7#ar& s& $rans,i$ si la o, 1 an$ro/o'oo/ara'i5i8
#8 /ara'i5i s$ri#$ ai ani,al&lor
(8 /ara'i5i ai /lan$&lor
&e stiudiul paraziilor umani i al antropozooparaziilor se ocup /ara'i$olo9ia
,&(i#al4: de studiul paraziilor animalelor se ocup medicina veterinar, iar de
studiul paraziilor plantelor se ocup parazitologia agricol.
*. Du/4 na$ura /ara'i$ului
a8 /ara'i5i ani,aliF /ro$o'oar&: +&l,in5i: ar$ro/o(&
%8 /ara'i5i v&9&$aliF fun9i
^ 2ROTO3OARELE sunt organisme unicelulare ncadrate dup anuminte
proprieti commune n urmtoarele grupe0
1 R+i'o/o(&l&. Aeprezentanii patogeni ai acestui grup sunt Entamoeba hystolitica
i amibele libere0 +aegleria foEleri& Acantamoeba polyphaga>
1 Fla9&la$&l&. "u ca reprezentani0 6iar"ia intestinalis i Trichomonas vaginalis !ca
flagelate cavitare% i <eihmania& Trypanosoma !ca flagellate sanguine%.
1 S/oro'oar&l& sunt protozoare comple5e care au ca principali reprezentani genul
Plasmo"im!agentul etiologic al malariei%, To-oplasma gon"ii& Criptospori"im&
Isospora belli& Sarcocystis>
1 2ro$o'oar&l& #ilia$& au un singur reprezentant semificativ0 ?alanti"im coli>
f>ELMINGII sunt viermi parazii care triesc in organismul uman, la nivel
intestinal. &upa morfologia lor, helminii pot fi cilindrici!nemathelmini% sau
plai!plathelmini%.
- N&,a$+&l,in5ii de importan medical pentru ara noastr sunt0 Ascaris
lmbricoi"es
Enterobis vermiclaris
Trichris trichira
Anchylostoma "o"enalis
Anchylostoma caninm
Srongyloi"es stercoralis
Trichinella spiralis
To-ocara canis
- 2la$+&l,in5ii frecvent nt6lnii n zona noastr geografic sunt0
Iasciola hepatica
*iphylobotrim latm
7ymenolepis nana
Tenia saginata
Tenia solim
*iphili"im caninm
Echinococcs granlosm
Echinococcs mltinoclaris>
Selminii au ca trstur comun faptul c n urma reproducerii se5uale produc ou,
care fie direct, fie prin procese adaptative comple5e, care conduc la formele larvare,
pot infecta alte persoane.
^FUNGII constituie obiectul de studiu al micologiei, fac parte din regnul M@ceta i
au ca reprezentani0
Can"i"a
Aspergills
Criptococcs neoformans
*ermatofii
A8 (u/4 lo#ali'ar&a /ara'i5ilorF
1 =ctoparazii!care triesc pe suprafaa tegumentului uman%0
Pe"icls
Acarieni
7eteroptere
- =ndoparazii localizai n0 #avi$45i0 intestin0 Liardia, helmini
vagin0 Trichomonas, 9andida
5&su$uri0 muchi0 Trichinela spiralis
ficat0 =chinococcus granulosum
plm6ni0 $neumoc@stis carini
#&lul&0 To5oplasma gondi
$lasmodium!hematii%
D8 (u/4 &f&#$ul /ara'i5ilor asu/ra 9a'(&iF
- $arazii incolini0 folosesc organismul uman doar ca mediu de via!Entamoeba
coli& Trichomonas intestinalis:
- $arazii comensali0 triesc n organismul uman far a-i produce
perturbri!Can"i"a& Entamoeba hystolitica& 6iar"ia intestinalis& Trichomonas vaginalis%
- $arazii condiionat patogeni0 parazii comensali pot deveni patogeni n prezena
unor factori favorizani. $ersoanele asimptomatice parazitate cu parazii condiionat
patogeni sunt considerate purttori de parazii i 'oac un rol important n diseminarea
parazitozei.
- $arazii oportuniti determin parazitoze simptomatice sau cu evoluie clinic
uoar la persoanele imunocompetente i boli grave, adesea letale, la persoanele
imunocompromise, n special la pacienii cu "M&D0 Pnenocystis carinii& To-oplasma
gon"ii& Criptospori"im & Criptococcs& Can"i"a>
- $arazii patogeni0 parazii a cror prezen n organismul uman declaneaz
perturbri mai mult sau mau puin grave.
C8 (u/4 s/&#ifi#i$a$&a /ara'i$ar4 se disting0
- $arazii strici0 parazii adaptai doar la o singura gazd definitiv, care nu pot tri
la o alt gazd definitiv!Tenia& P<asmo"im%
- $arazii cu specificitate relativ0 care pot trece de la o gazd la alta mai mult sau
mai puin uor!insecte hematofage vectoare ale bolilor commune omului i animalelor%

K8 Du/4 &volu5ia #i#lului %iolo9i# e5ist0
- $arazii permaneni0 ntrega lor e5isten se produce n una sau mai multe
gazed!Tenia, Trichinella%
- $arazii temporar@0 o parte din viaa lor se desfoar n stare parazitar,
prezent6nd ns i stadii de via liber!Dtrongzloides stercoralis%
- $arazii facultative0 n mod normal au o via saprofit, dar uneori pot invada
organismul uman!"spergillus%
L8 Du/4 r&/ar$i'ar&a 9&o9rafi#4
- $araziii int6llnii n zonele temperate determin parazitoze moderate ca
manifestare clinic, dar cu inciden crescut i tendin spre evoluie cronic!helmintoze
umane, micoze, unele protozooze%
- $araziii nt6lnii n zonele tropicale produc parazitoze endemice sau epidemice n
aceste zone, dar ocazional pot fi nt6lnii i n zonele temperate, ca urmare a intensificrii
migraiei umane i a mi'loacelor rapide de transport actuale. =ste important s fie
cunoscute, datorit gravitii lor poteniale i necesitii instituirii terapiei
corespunztoare!amibiaza, tripanosomiaza%, unele prezent6nd un character de e5trema
urgen!accesul pernicios din malarie%.
CLASIFICAREA 2ARA3IGILOR )I BOLILE 2RODUSE
>ELMINGI
NEMAT>ELIMGI
FAMILIA ASCARIDIDAE
Lenul "scaris
"scaris lumbricoides "scaridoza
Lenul To5ocara
To5ocara cannis 2arva migrans visceral
FAMILIA OXIURIDAE
Lenul =nterobius
=nterobius vermicularis )5iuraza
FAMILIA TRIC>URIDAE
Lenul Trichiuris
Trichuris trichiura Tricocefaloza
FAMILIA ANCWLOSTOMIDAE
Lenul "nc@lostoma
"nc@lostoma duodenalis "nc@lostomiaz
"nc@lostoma cannis 2arva migrans cutanat
"nc@lostoma brasiliensis 2arva migrans cutanat
Lenul 1ecator
1ecator "mericanus
FAMILIA R>ABDITIDAE7STRONGWLOIDIDAE8
Lenul Dtrong@loides
Dtrong@loides stercoralis Dtrong@loidoz
FAMILIA TRIC>INELLIDAE
Lenul trichinella
Trichinella spiralis Trichineloz
FAMILIA ONC>OCERCIDAE
Lenul Eilaria
Uuchereria bancrofiti Eilarioza Cancroft
Uuchereria pacifica Eilarioza aperiodic a $acificului
)nchocerca volvulus )ncocercoza
FAMILIA DRACUNCULIDAE
&racunculus medinensis &racunculoza
&racunculus loa 2oaz
2LATELMINGI
CLASA TREMATODE
FAMILIA FASCIOLIDAE
Lenul Easciola
Easciola hepatica Eascioloz
Lenul Easciolepsis
Easciolopsis bus4i &istomatoza intestinal
Lenul Eascioloides
FAMILIA DICROCELLIIDAE
&icrocoelium dendriticum &istomatoza hepatic
FAMILIA O2ISTORC>IIDAE
)pisthorchis felinaeus &istomato@a hepatic
)pisthorchis sinensis
FAMILIA TROGLOTREMATIDAE
$aragonimus 3estermani &istomatoza pulmonar
FAMILIA SC>ISTOSOMIDAE
Lenul Dchistosoma
Dchistosoma haematobium Dchistosomoza urogenita
Dchistosoma mansoni Dchistosomoza intestinal
Dchistosoma 'aponicum Dchistosomoza oriental
CLASA CESTODE
FAMILIA TENIIDAE
Lenul Tenia
Tenia saginata Teniaza de carne de vit
Tenia solium Teniaza de carne de porc
Lenul =chinococcus
=chinococcus granulosus 9hist hidatic
=chinococcus multilocularis =chinococoza alveolar
Lenul multiceps
Multiceps multiceps 9enuroza
Multiceps serialis 9enuroza
Multiceps crassiceps
FAMILIA >3MENOLE2IDAE
S@menolepis nana S@menolepiaza
S@menolepis diminuta S@menolepiaza murin
FAMILIA DILE2INIDAE
Lenul &iphillidium
&uphillidium caninum
FAMILIA DI2>WLOBOT>RIIDAE
Lenul diph@lobotrium
&iph@lobotrium latum Cotriocefaloza
2ROTO3OARE
CLASA R>I3O2ODE
FAMILIA ENTAMOEBIDAE
Lenul =ntamoeba
=ntamoeba histol@tica "mibiaza intestinal, hepatic
=ntamoeba hartmanni
=ntamoeba coli
Lenul =ndolima5
=ndolima5 nana
Lenul $seudolima5
$seudolima5 butschlii
FAMILIA >ARTMANNELIDAE
Lenul "canthopodina
"canthamoeba polzphaga Meningoencefalite amibiene
FAMILIA "A>LJAM2FIIDAE
1aegleria fo3leri Meningoencefalite amibiene
CLASA FLAGELATE
FAMILIA >EXAMITIDAE
Lenul Liardia
Liardia Mntestinalis Liardioza
FAMILIA TRIC>OMONADIDAE
Lenul Trichomonas
Trichomonas vaginalis Trichomoniaza urogenital
Trichomonas tena5 Elageloza bucala
Trichomonas intestinalis Elageloza intestinal
Aetortamonas intestinaslia Elageloza intestinal
Lenul &ientamoeba
&ientamoeba fragilis
FAMILIA C>ILOMASTIGIDAE
Lenul 9hilomasti5
9hilomasti5 mesnili Elageloza intestinal
FAMILIA TRW2ANOSOMIDAE
Lenul 2eishmania 2ieshmanioza!visceral, cutanat%
Lenul tr@panosoma
CLASA S2ORO3OARE
)rdin Semosporidia
FAMILIA 2LASMOIDIDAE
Lenul plasmodium Malaria
)rdin $iroplasmida
Lrupul Cabesia Cabesioz
Dubclasa 9occidia
)rdin =ucoccidiida
Dubordin =imeriina
To5oplasma gonadii To5oplasmoz
Msospora belli Mzosporidiaz
9r@ptosporidium 9riptosporidiaz
)rdin Darcosporidia
Lenul Darcoc@stis
Darcoc@stis hominis Darcocistoz
)rdiunul Microsporidia
FAMILIA MICROS2ORIDIA
Lenul Microspora Microsporidiaz
CLASA CILIATE
)rdinul Dpirotricha
FAMILIA TRIC>OSTOMATINA
Lenul Calantidium
Calantidium coli Calantidioz
2ARA3IGI CU TAXONOMIE INCERT
$neumoc@stis carinii $neumocistoz
Clastoc@stis homminis Clastocistoz
ACGIUNEA 2ARA3IGILOR ASU2RA GA3DEI
$arazitismul nu este ntotdeauna sinomin cu efectul pathogen. $rezena paraziilor n
organismul uman induce diverse aciuni, mai mult sau mai puin pronunate.
- S/oli&r&a or9anisu,ului (& su%s$an5& nu$ri$iv&
"ciunea de spoliere este practic constant la toi paraziii, care se dezvolt deinz6nd
de gazda lor. &ar, n ma'oritatea cazurilor, este nesemnificativ. 1u antreneaz
manifestri detectabile dec6t n cazul unui numr mare de parazii sau dac paraziii
folosesc substane importante!prin spolierea vitaminei C1, rezult anemia de tip
pernicious.
- A#5iun&a $rau,a$i#4 i %a#$&rif&r4
2eziunile cauzate de parazii constituie pori de intrare pentru bacterii i suprainfecie
bacterian0 tricocefaloz, amibiaz, chist hidatic.
- A#5iun&a $o6o1al&r9i#4
Manifestrile alergice din helmintioze sunt cauzate de aciunea produilor lor
metabolici. De pot produce fenomene to5o-alergice cutanate!urticarie%,
pulmonare!sindrom 2offler%, nervoase!cefalee, iritabilitate, insomnii, crize epileptiforme%
i chiar oc anafilactic!chist hidatic, trichineloz%.
- A#5iun& ,&#ani#4
"ciunile mecanice sunt cele mai numeroase i antreneaz0 efecte
microscopice!spargerea hematiilor parazitate de $lsmodium% sau fenomene
macroscopice0 ocluzie!ocluzie intestinal prin ghem de ascarizi% i fenomene de
compresie tisular!chist hidatic, echinococoza alveolar%.
- A#5iun& iri$a$iv r&fl&64
"ciunea iritativ refle5 este mai evident la nivel intestinal. 9rete peristaltismul
intestinal sau apar fenomene de subocluzie n helmintioze.
- A#5iun& iri$a$iv $isular4
"ciunea iritativ tisular determin formarea de granuloame inflamatorii i de focare
de fibroscleroz!colopatia postamibian, amoebom, cisticercoz, trichineloz perichiste
n chist hidatic etc%.
REACGIA GA3DEI LA ACGIUNEA 2ARA3ITULUI
7n faa aciunii parazitare organismul uman rspunde prin reacii celulare, tisulare,
immune. :nele dintre ele sunt doar consecina sau dovada parazitismului, n timp ce
altele constituie adevrate mi'loace de aprare ale organismului.
REACGII CELULARE
7n diverse protozooze i unele micoze, macrofagele fagociteaz paraziii i constituie
primul sistem de aprare al organismului.
=ozinofilele i mastocitele 'oac un rol probabil considerabil n imunitatea fa de
diverse helmintioze.
1. An&,ia /ara'i$ar4 se observ ntr-un numr restr6ns de parazitoze0
1 paludism!malarie%0 anemie normocrom cu anizocitoz, poi4ilocitoz,
policromatofilie/
- leishmanioz visceral0 anemie normocrom/
- anc@lostomiaz0 anemie hipocrom, microcitar/
- botriocefalo@0 anemie macrocitar cu megaloblastoz medular/
"nemia apare n perioada de stare a parazitozei sau n faza sa cronic,
disting6ndu-se0
- anemii hemolitice prin liza hematiilor prin parazii sau liza hematiilor prin
autoanticorpi!malarie%/
- anemii prin sechestrare splenic!malaria visceral%/
- anemii posthemoragice!n tricocefaloz%/
- anemii de tip megaloblastic!n botriocefaloz%.
*. >i/&r&o'inofilia /ara'i$ar4
Sipereozinifilia poate fi local sau general.
Sipereozinofilia are cause diverse. )riginea parazitar a unei hipereozinofilii se
poate preciza in6ndu-se cont de urmtoarele particulariti0
- $rotozoarele i fungi nu produc eozinofilie circulant semnificativ/
- Sipereozinofilia este prezent n helmintioze0
f n faza de maturare a helminilor intestinali!Tenia, Tricocefal%/
f n faza obigatorie tisular la om, a formelor larvare!chist hidatic,
echinococoza alveolar%/
fn faza tisular de evoluie a unor helmini intestinali!"scaris%,
biliari!Easciola hepatica%, musculari!Trichinella%. 7n asceste cazuri hipereozinofilia
sagvin e5istent n faza de parazitism tisular dispare, prin dezvoltarea parazitului
intraluminal sau intramuscular.
Sipereozinofilia verminoas evolueaz stadial n timp, urm6nd curba 2avier
cu patru etape successive0 laten, elevaie, rapid, platou, diminuare progresiv sau
revenire la normal pentru paraziii cu faz primar tisular.
&up tratamentul antihelmintic se observ o creere tranzitorie a
eozinofilelor ca urmare a lizei paraziilor.
Sipereozinofilia verminoas prezint o deosebit importan practic,
reprezent6nd un element de orientare diagnostic, n special pentru parazitozele n care
atinge valori semnificativ crescute. Sipereozinofilia verminoas apare precoce, atinge
valori ma5ime ninte ca verminoza s poat fi detectat prin alte mi'loace.
REACGII TISULARE
1. S/l&no,&9alia /ara'i$ar4
9onstituie principala cauz de splenomegalie n rile tropicale. =a apare n0
malarie, leishmanioz visceral, aibiaz, hidatioz.
*. For,a5iuni iri$a$iv $isular&
=senial n cadrul reaciilor tisulare este constituirea de formaiuni iritativ tisulare O
perichiste, care evolueaz progresiv spre scleroz i[sau calcifiere cu tendina de
izolare progresiv a parazitului!chist hidatic, trichineloz%.
REACGII IMUNE
$araziii i produsele lor metabolice sunt antigenici i induc apariia de anticorpi
aniparazitari la persoanele parazitate. "nticorpii pot fi specifici fa de o specie i
chiar fa de un anumit stadium evolutiv al parazitului, dar unele nematode prezint
antigene comune de grup care induc anticorpi heterologi care interacioneaz cu
paraziii nrudii.
=videnierea anticorpilor este posibil n parazitozele profunde intratisulare care
asigur un contact str6ns ntre gazd i parazit, detectarea anticorpilor constituind
una dintre principalele metode de diagnostic ale acestor parazitoze.
Demnificaia anticorpilor este discutabil. Mult timp s-a negat rolul protector al
anticorpilor, acetia fiind considerai de unii autori doar martori ai infeciei.
7n realitate, imunitatea dob6ndit este important n parazitoze. 7n unele infecii
parazitare o prim contaminare poate antrena o imunitate definitiv,
protectoare!to5oplasmoz%. 7n alte parazitoze profunde, imunitatea 'oac un rol de
atenuare. "stfel, n malaria produs de $lasmodium falciparum se ntalnesc forme
grave, letale, doar la persoanele neimune.
Mmportana imunitii este relevat i de gravitatea unor parazitoze oportuniste la
imunodeprimai!to5oplasma cerebral, pneumocistoz, criptococoz%. "nJuilluloza
intestinal, afeciune benign la persoanele normale, poate determina forme severe
la imunodeprimai.
"nticorpii antiparazitari pot e5ercita i efecte imunopatologice, determin6nd
hemiliza autoimun n malaria, formarea de comple5e immune circulante, care
declaneaz glomerulonefrite n anumite forme de malarie.
7n present, descoperirea antigenelor circulante constituie o modalitate diagnostic, n
special n parazitozele instalate la persoanele imunodeprimate.
E2IDEMIOLOGIE _ CICLUL BIOLOGIC
$entru perpetuarea propriei specii, parazitul este supus unor transformri pentru
adaptarea la ci evolutive, uneori comple5e. "ceste transformri poat numele de
ciclu parazitar!biologic%. "cesta poate fi0
- simplu0 trecerea direct a parazitului de la omul infectat la omul sntos/
- comple50 parazitul necesit intervenia gazdelor intermediare sau a vectorilor,
pentru a deveni contagios.
ELEMENTELE CICLULUI 2ARA3ITAR
7n cursul ciclului evolutiv al paraziilor intervin0 parazitul, gazda definitiv, gazda
intermediar, vectori.
Lazda definitiv0 este organismul viu care poart forma adult a parazitului capabil
de reproducere se5ual. 7n cazul helminilor, gazda definitiv gzduiete viermii
aduli, care produc, n urma fecundrii, ou. )ule pot fi0 embrionate,
infestante!contagioase% pentru alte persoane, sau neembrionate, neinfestante pentru
alte persoane.
Lazda definitiv este omul i mai rar unele animale!pisica pentru To5oplasma
gondii, c6inele pentru &iph@lidium caninum, To5ocara canis, vulpea pentru
=chinococcus multilocularis%.
Lazda intermediar este organismul viu, care gzduiete formele ase5uate le
paraziilor. Lazda intermediar este necesar n unele cazuri pentru a-M asigura
parazitului maturarea, multiplicarea sau ambele.
Lazdele intermeiare pot fi animale!bovine, porcine%, poate fi 6narul pentru
$lasmodium sau omul pentru To5oplasmo gondii, =chinococcus granulosus,
To5ocara canis etc.
7n cazul helminilor, n special al plathelminilor, la gazdele intermediare rezult
forme larvare, care sufer un process de poliembrionie i adaptare, astfel nc6t sa
devin infestate pentru gazda definitiv.
Lazdele intemediare se mpart n0
a% Lazde intermediare pasive0 gzduiesc forma infestant sau stadiile
anterioare formei adulte, fr a se deplasa la rezervorul de parazii pentru
prelucrarea lor, nici spre gazda receptiv pentru a tranzmite formele
infestante.
b% Lazde intermeiare active0 gzduiesc parazitul in dezvoltare i se
deplaseaz pentru prelucrarea parazitului de la gazda rezervor i
transmiterea sau inocularea la gazda receptiv. Lazdele active sunt, n
general, vectorii biologici.
Gectorii sunt ageni transmisibili ai parazitului. De disting0
a% vectori biologici, indispensabili ciclului vital al parazitului, asigur6ndu-i
maturarea i multiplicarea. Dunt gazdele intermediare active.
b% vectorii mecanici care au rol de transport, nefiind eseniali n ciclul
biologic al parazitului!mute care transport chisturi de Liardia, chisturi
de amibe%.
Aezervorul de parazii este habitatul n care se menine i supravieuiete parazitul.
Aezervorul de parazii poate fi mediul e5tern sau o gazd definitiv.
&up natural or, se pot diferenia trei tipuri de rezervoare de parazii0
a% )mul este rezervor de parazii n parazitozele strict umane. 7n
parazitozele commune omului i animalului, omul poate fi un accident n
ciclu, fr rol epidemiologic!chist hidatic, to5oplasmoz, trichineloz%.
b% "nimalele constituie un rezervor esenial pe plan epidemiologic pentru
ma'oritatea atropozoonozelor. =5ist rezervoare de parazii, care
funcioneaz n diferite condiii ecologice0 aminale domestice sau
animale slbatice. Aezervorul constituit de animalele slbatice, toler6nd
bine parazitismul, sub forma unei afeciuni inaparente, reprezint un
rezervor de baz pentru parazii!roztoarele slbatice pentru
leishmanioza cutanat%.
c% Dolul reprezint rezervorul de parazii pentru unii helmini!geohelmini%
cum ar fi "scaris lumbricoides, Tricocefal.
d% "pa poate fi un rezervor de parazii pentru forma de rezisten a
protozoarelor!chist%, declan6nd epidemii hidrice!amibiaz, giardioz%.
CI DE TRANSMITERE A 2ARA3IGILOR
De disting0
C4i (& /4$run(&r& a paraziilor n organismul uman. 9unoaterea acestor ci este
important pentru pro5ila5ia individual n parazitoze.
$rincipalele ci de ptrundere sunt0
fdigestive !helmintioze, giardioz, amibiaz%
f cutanate, mucoase passive !trichomoniaz, micoze%
f transcutanate active !strongiloidoz, anczlostomiaz, malarie O transmitere prin
vector hematofag%
f pulmonare !pneumocistoz, aspergiloz, criptococoz%
C4i (& &li,inar&. 9unoaterea lor prezint un dublu interes, permi6nd alegerea
modalitilor de optime de diagnostic parazitologic i a msurilor de profila5ie colectiv.
=5ist ci digestive de eliminare prin materiile fecale, urinare, pulmonare, cutanate.
&e asemenea, e5ist parazii fr posibiliti normale de ieire/ sunt parazii n impas
parazitar0 larva migrans, chist hidatic, Trichinella spiralizat n muchi.
2ROFILAXIA 2ARA3ITO3ELOR
9unoaterea de ansamblu a elementelor ciclului biologic parazitar este indispensabil
pentru cunoaterea i nelegerea modului de producere a unei boli parazitare, a
modalitilor de ntrerupere a ciclului i de evitare a contaminrii umane. $rofila5ia
cuprinde0
- $rofila5ia individual0 ncearca s evite contaminarea persoanelor sntoase,
acion6nd la un singur nivel al ciclului biologic0 mpiedicarea ptrunderii parazitului,
distrugerea dup ptrundere sau mpiedicarea dezvoltrii acestuia.
=ste scopul igienei alimentare, al chimioprofila5iei i al vaccinrii.
- $rofila5ia colectiv0 se realizeaz prin intervenia la toate nivelele vulnerabile ale
ciclului biologic. :rmrete0
- izolarea rezervorului de parazii i sterilizarea lui prin igien colectiv/
- lupta mpotriva gazdelor intermediare i antivectorial/
- vaccinarea i tratamentul populaiei receptive
7n producerea bolilor parazitare intevin i ali factori care influieneaz transmiterea
parazitozelor0
- factori umani!obiceiuri almentare, mod de via, nivel de cultur, nivel terapeutic%
- factori economici!standard de via%
- factori climatici!temperatur, umiditate%
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
7n cele mai multe infecii parazitare, diagnosticul etiologic se bazeaz pe
evidenierea direct a parazitului n produsele biologice ale bolnavului i pe
rspunsul gazei fa de agresiunea parazitar!martor indirect al prezenei al prezenei
parazitului%.
1. E6a,&nul (ir&#$
E6a,&nul #o/ro/ara'i$olo9i#
9onstituie e5amenul de baz pentru evidenierea infeciilor cu0
- protozoare0 amibiaza, giardioz, coccidioze intestinale
- helmini0 ascaridioz, tricocefaloz, strongiloidoz, achilostomiaz, teniaze.
Aezultatul e5amenului coproparazitologic trebuie s menioneze prezena parazitului
precum i abundena lui. $entru protozoare!amibe%, rezultatul trebuie s precizeze genul
i specia parazitului gsit i stadiul su evolutiv0 forma vegetativ sau chistic. 9ontrolul
dup tratament este necesar dup trei sptm6ni de la terminarea tratamentului.
E-amenl macroscopic al materiilor fecale. &eterminarea consistenei
scunului!format, semiformat, moale, lichid% poate constitui un indiciu asupra parazitului
present. Trofozoiii protozoarelor intestinale se nt6lnesc de obicei n scaunul moale sau
lichid/ formele chisice se nt6lnesc n scaunele formate. )ule de helmini se pot gsi n
orice scaun. $roglotele mobile de tenie pot fi gsite pe sau l6ng prob, iar adultul de
"scaris poate fi gsit pe suprafaa scaunului. $rezena s6ngelui n prob trebuie
consemnat ntotdeauna. D6ngele proaspt pe suprafaa scaunui format indic prezena
unor hemoroizi care s6ngereaz/ s6ngele gsit mpreun cu mucusul format ntr-un scaun
lichid sau moale sugereaz o infecie amibian.
E-amenl microscopic "in materiile fecale> De efectueaz urmtoarele preparate care
vor fi e5aminate0
- preparat direct n soluie fizilogic i soluie 2ugol. =ste e5amenul cel mai ultil
pentru detectarea trofozoiilor mobile ai protozoarelor intestinale i larvelor mobile de
strongiloides stercoralis. $oate evidenia i chiti de protozoare i ou de helmini.
- preparat n strat gros!metoda Bato O Miura%. De pot decela toate oule de helmini,
mai ales cele cu coa' groas.
- preparat dup concentrarea elementelor parazitare. Metodele de concentrare permit
decelarea oulor atunci c6nd se gsesc n numr mic n prob i pot scpa neobservate
ntr-un e5amen direct. Dunt flotarea i sedimentarea.
- preparat permanent colorat. 9oloraiile utilizate n identificarea trofozoiilor i
chitilor de protozoare sunt0 tricrom, hemato5ilina feric, Liemsa, Piehl O 1eelsen.
1.*. E6a,&nul /ara'i$olo9i# al s;n9&lui.
=ste indicat atunci c6nd se suspicioneaz0 malaria, leishmanioza visceral,
tripanosomiaza, filariozele. 7n cazul suspectrii unei malaria, se efectueaz frotiu n
pictura groas cu prile'ul acceselor febrile, c6nd paraziii sunt mai numeroi. 7n filarioz
trebuie s se in seama de periodicitatea microfilaremiei0 diurn pentru 2oa- loa i
nocturn pentru Uuchereria O Cancrofti.
1.A. E6a,&nul /ara'i$olo9i# al s/u$&i. =ste indicat n suspiciunea unor infecii cu
$neumoc@stis carinii i $aragonimus 3estermani.
1.D. E6a,&nul /ara'i$olo9i# al urin&i. =ste indicat n cazul suspectrii unei
schistosomiaze urinare sau trichomoniaze urogenitale. 7n urina persoanelor
endemice de filorioz, se pot gsi i microfilaria de )ncocerca volvulus.
*. Cul$uri (& /ro$o'oar&.
7n scop diagnostic, unele protozoare pot fi cultivate pe medii precum0 2oeffler, TTQ,
T$D-1, TQM!pentru Trichomonas vaginalis%, 111!1ov@, 1icole, Mc 1eal pentru
2eichmania%.
A. Dia9nos$i#ul i,,unolo9i# al inf&#5iilor /ara'i$ar&.
9a rspuns la o agresiune parazitar, organismul produce anticorpi specifici i
mobilizeaz diferite mecanisme celulare n scopul distrugerii parazitului sau
limitrii proliferrii lui.
a% investigarea imunitii umorale. De apeleaz la immunodiagnostic n
urmtoarele situaii0
- c6nd localizarea parazitului n organismul uman nu poate fi accesibil sau
necesit manevre invasive de recoltare!to5oplasmoz, hidatidoz, cisticercoz,
larva migrans visceral%.
- c6nd infeciile sunt cu numr redus de parazii la care metodele directed au
rezultate negative!schistostomiaz, filarioze, leichmanioz, malarie%
- c6nd infecia parazitar este recent, iar parazitul este nc imatur, fie migreaz
n esuturi, fie nu produce nca ou sau larve care ar putea permite vizualizarea
sa n e5amenul direct.
Metodele serologice folosite n diagnosticul parazitologic sunt0
- raeacii de precipitare0 dubl imunodifuzie n gel, contraimunelectroforez,
imunelectroforez
- reacii de hemaglutinare pasiv
- reacii de fi5are a complementului
- imunoflorecena indirect
- testul imunoenzimatic!=2MD"%
- radioimunotestul!AM" sau A"DT%
b% investigarea imunitii celulare. $oate fi pus n evidena prin urmtoarele reacii0
- intradermoreacia. =videniaz reacia de hipersensibilitate nt6rziat care apare
pe pielea unor persoane sensibilizate dup ,; de ore de la in'ectarea antigenului parazitar.
=ste mai puin utilizat n ultima vreme pentru c este relative nespecific i rm6ne
pozitiv mult vreme dup dispariia parazitului din organism. =ste considerat numai un
test de depistare epidemiologic n0 hidatidoz, schistosomiaz, leichmanioz.
- testul de inhibiie a migrrii macrofagelor
- testul de transformare blastic
- testul de degranulare a bazofilelor
FUNGI
Eungii sau micromicetii sunt bioentitati microscopice, eucariote, uni- sau pluricelulare,
heterotrofe, care contin chitina in peretele celular. 9u siguranta, aceasta definitie este
incompleta si ramane perfectibilia, deoarece particularitatile morfo-structurale, eco-
fiziologice si de inmultire, etalate de cele cca. 1.8.888 specii de fungi, fac imposibila
enuntarea unei caracterizari unitare si general valabile a acestor organisme.
&in multitudinea criteriilor de clasificare a fungilor, criteriul morfologic este cel mai
cunoscut si agreat in micologie medicala si permite descrierea a trei tipuri principale de
micromiceti0
filamentosi
levuriformi
dimorfici
Mn prezent, cele patru ph@lum-uri acceptate in regnul E:1LM sunt 9hitridiom@cota,
P@gom@cota, "scom@cota si Casidiom@cota.
Eungii se cultiva pe mediul Daubouroud.
Dia9nos$i#ul (& la%ora$or al inf&#$iilor o#ular&
Conditia anatomica O globul ocular este delimitat prin trei tunici, e5terna, medie si
interna si contine mai multe medii dioptrice rezistente.
Tunica e5terna, groasa, fibroasa si rezistenta, da forma globului ocular si ii prote'eaza
structurile fragile. =ste alba posterior formand sclerotica si transparenta anterior, formand
corneea.
Tunica medie, uveea, cuprinde o bogata retea vasculara care asigura nutritia tesuturilor
oculare, pigment si doua sisteme musculare. :veea are trei parti0 anterioara!irisul%,
mi'locie!corpul ciliar% si posterioara!coroida%.
Tunica interna sau retina, delimitata intr-o parte posterioara, unde isi au originea fibrele
nervului optic si o parte anterioara, lipsita de proprietati senzoriale.
)rganele si ane5ele de protectie O globii oculari sunt prote'ati prin sprancene, pleoape
si glande lacrimale.
Conditia microbiolo)ica.
Microbiota indigena a pleoapelor o reflecta pe cea a tegumentului, cu particularitati
legate de dispozitia unitatilor pilosebacee si glandulare ale marginii libere la zona de
tranzitie tegument-con'unctiva. 9ele mai mari densitati bacteriene sunt realizate in
unitatile pilosebacee si in orificiile glandulare. &ominanti apar stafilococii coagulazo-
negativi si organismele facultativ anaerobe, care colonizeaza orificiile pilosebacee si ale
glandelor sudoripare. 9onditii prielnice de dezvoltare gaseste aici si Dtafilococul aureu.
Dpecii de $riponibacterium, in special $riponibacterium acnes, organisme anaerobe,
colonizeaza mai profund unitatile polisebacee.
9on'unctiva si corneea, desi e5puse continuu contaminarii cu microorganisme, raman
cu o incarcatura microbiana redusa, datorita spalarii prin secretia lacrimala si miscarilor
palpebrale.
En$i$a$i nosolo9i#&
9omple5itatea structurilor care compun globul ocular sau il prote'eaza se reflecta in
varietatea entitatilor nosologice cauzate de cei mai diferiti agenti infectiosi prin
mecanisme patogenetice multiple0
con'unctivite si 4eratite
endoftalmite
infectii ale pleoapelor
infectii ale aparatului lacrimal
celulite orbitare
S/&#$ru &$iolo9i#
Cacterii0 Saemophilus influenzae, 1eisseria gonorrhoeae, 1eisseria meningitidis,
Treponema pallidum, M@cobacterium tuberculosis, Erancisella tularensis,
9or@nebacterium diphtheriae, Saemophilus ducre@i, Dtretococcus pneumoniae,
Dtrectococcus p@ogenes, Dtaph@lococcus aureus, =nterobacteriaceae, $seudomonas
aeruginosa, "ctinom@ces spp., Cacillus spp., Eusobacterium spp., 2actobacillus spp.,
$ropionibacterium spp., $eptostreptococcus spp.
9hlamidii0 9hlam@dia trachomatis serovar0 ", C, Ca, 9/ &-B/ 21-2+.
Girusuri0 "denoviride, serovaruri mai frecvente0 +, ;, , 1;/ Serpetoviride0 v.herpes
simple5, v.varicela-zoster, v.=pstein-Carr/ )rthom@5oviridae0 v.gripal/ $aram@5oviridae0
v.ru'eolic, v.urlian/ $icornaviridae0 v.9o5ac4ie/ Togaviridae0 v.rubeolic.
$araziti0 To5oplasma gondii.
Eungi0 9andida spp, Ahinosporidium seeberi, Dporothri5 schenc4ii.
Co,/li#a$ii o#ular& al& folosirii l&n$il&lor (& #on$a#$
2entilele de contact se folosesc astazi la scara larga, uzul lor fiind de foarte multe ori
pur estetic, dar si terapeutic. $ortul lentilelor de contact nu este lipsit de reactii adverse si
complicatii, de aceea, trebui intotdeauna puse in balanta beneficiile si riscurile.
)data aleasa varianta folosirii lentilelor de contact, indiferent de scop, monitorizarea
portului lor este vitala pentru a putea diagnostica si trata la timp complicatiile ce pot
aparea in urma folosirii lor, in special cele infectioase.
$ortul lentilelor de contact reprezinta un factor de risc, prin0
- efectul mecanic asupra ochiului al lentilelor
- modificari ale metabolismului corneean, variabile in functie de materialul din care
sunt confectionate lentilele, gradul de curbura al lentilelor, portul nocturn al lentilelor
- posibilitatea dezvoltarii unei alergii fata de produsele de intretinere a lentilelor si
eventual o suprainfectie bacteriana
- probleme de iginena sau de modul de intretinere al lentilelor, portul prelungit, ce pot
duce la colonizarea sub lentile a microorganismelor.
9ontactul prelungit al acestor microorganisme cu epiteliul corneean, asciat cu prezenta
microleziunilor date de punerea si scoaterea lentilelor sunt la originea complicatiilor
infectioase ale ochiului la persoanele purtatoare de lentile.
9omplicatiile folosirii lentilelor de contact sunt0
- neinfectioase O iritativ-alergice, legate de substantele dezinfectante sau conservantii
din substantele dezinfectante pentru lentile si sunt reprezentate de0 con'unctivite
alergice, con'unctivite papilare gigante, edeme epiteliale corneene, infiltrate sterile
corneene
- infectioase O tin in special de proasta manipulare a lentilelor de contanct. 9ele mai
frecvente sunt reprezentate de 4eratite microbiene!bacteriene, virale, parazitate,
fungice%. 9ele mai frecvente infectii la purtatorii de lentile de contact sunt date de coci
LramR!streptococi, stafilococi%, desi studiile florei con'unctivale la purtatorii
asimptomatici au demonstrat o modificare a florei normale prin predominenta bacililor
Lram-, in special $seudomonas, Derratia, =.coli, Blebsiela, $roteus, 9itrobacter etc.