Saliva, o noua sursa

neinvaziva de determinari
biochimice
SALIVA
CE ESTE ?
CARE ESTE COMPOZITIA ACESTEIA ?
CE ROLURI ARE ?
CE COMPUSI PUTEM DETERMINA ?
CE SEMNIFICAIE CLINIC AU ?
Sa analizam saliva
oglinda organismului
fluid heterogen cu proteine, electroliti,
hormoni si alti compusi transportati din
sange
solutie de spalare, un lubrifiant, rezervor
de ioni, sistem tampon si antioxidant
remarcabil
prima linie defensiva in stresul oxidativ

Cavitatea orala:
mediu extrem de dinamic si unic
singurul loc din organism unde tesuturile
mineralizate sunt expuse mediului exterior
si care implica interactiuni complexe intre
suprafete diferite, tesut gazda moale si
tare/alimente/aer/microorganisme
scldat permanent de saliv, care
ncearc s fac fa unui mediu extrem
de dinamic

AVANTAJELE SALIVEI
recoltare rapida, oriunde , oricand si nestresanta
stabilitate mare a probelor si posibilitate pastrarii
lor indelungate
tehnica neinvaziva
repetarea testelor se realizeaza mai usor
minimalizarea contaminarii pacientilor si a
personalului medical
concordanta excelenta cu nivelul sanguin pentru
aproape toti compusii
sensibilitate comparabila cu a sangelui si
specificitate mai mare in unele cazuri


To be continued
ofera posibilitatea efectuarii unor studii in
dinamica
permite o colaborare mai stransa si
permanenta cu pacientul
nu necesita un echipament special
se preteaza excelent pentru screening

Interesul pentru saliva
evolutia tehnicilor de determinare cu o
mare sensibilitateconcentratia
componentelor salivare este de 10-100 de
ori mai mica decat in sange
saliva - unanim recunoscuta ca mijloc de
investigare si diagnostic in mai multe
domenii medicale: endocrinologie,
medicina legala, toxicologie, medicina
interna, medicina dentara
Mandel spunea:
Saliva nu este un lichid obinuit; aceasta
este lipsit de sinceritatea transpiraiei,
dramatismul sngelui i elocvena
lacrimilor
a devenit o alternativ neinvaziv pentru
biochimia clinic
Functiile salivei
protectie mpotriva infeciilor
bacteriene, virale i fungice
implicat n masticaie, deglutiie,
vorbire, retenie dentar, degustare i
probabil n comunicarea
chimic(srut !!!!!)

Proveniena salivei
produs de trei glande majore (2 parotide,
2 submandibulare i 2 sublinguale) i de
glande minore(GSM) localizate n buze,
mucoasa oral i limb
contribuia relativ a glandelor salivare
individuale la saliva total este diferit n
condiii normale i de stimulare
Saliva rezidual
produs n proporie de 60% de glanda
submandibular / sublingual i 30% de
parotid
prezent aproape permanent n cavitatea
oral
SALIVA TOTAL
secretat de glandele salivare dar include
i constitueni provenii din snge, bacterii
i produi ai acestora, virui, celule
epiteliale descuamate, electrolii, fluid
crevicular i resturi alimentare
ideal pentru identificarea unor biomarkeri
ai afeciunilor orale i sistemice
frecvent studiat pentru evaluarea
afeciunilor sistemice
Saliva totala
Constituentii serici (medicamente, hormoni)
ajung in saliva pe cai diferite: transport activ,
difuzie pasiva si ultrafiltrare
sau ca rezultat al secretiei fluidului crevicular
in functie de gradul de inflamatie al gingiei,
fluidul crevicular, f. mult studiat in ultimul timp-
considerat fie un transudat seric sau, mai
frecvent, un exudat inflamator ce contine
constituenti serici
Recoltarea salivei
Cu/fara stimulare
Stimulare masticatia - guma de mestecat
sau parafina
- gustativa aplicare de acid
citric pe limba
Afecteaza concentratia unor constituenti
Saliva nestimulata- afectata de gradul de
hidratare, expunerea la lumina, pozitia
corpului, momentul recoltarii

COMPOZITIA SALIVEI
Componentii salivei - mirror
of the bodys health"

COMPOZIIA CHIMIC
mai mult de 99% ap- cel mai apos produs
de secreie al organismului
substana uscat ( 0,5%): substane
organice (2/3) i anorganice (1/3)-foarte
dependent de alimentele ingerate
Compusi anorganici si organici
cele mai importante componente
anorganice-Ca, fosfat
bicarbonat, Na, K, Cl, I, F,
cele mai importante componente organice-
proteinele
identificate prin electroforez cel puin 150
Saliva total - 2,2 g/L (10-500g/mL)
salivar
Componentele salivare majore
Histatine : 2-4 kDa
Staterina : 4-6 kDa
Lizozimul : 14 kDa
Cistatine : 14 kDa
PRP : 10-30 kDa
AC : 42-65 kDa

To be continued
Amilaza : 56-60 kDa
Peroxidaze : 75-78 kDa
Lactoferina : 75-78 kDa
Mucina 2 (MG2) : 130 kDa
IgAs : 280 kDa
Mucina 1 (MG 1) : >1000 kDa
Albumina

1 -10% din proteinele totale salivare i
concentraia ei scade cu creterea fluxului
salivar
rol antioxidant + uratul i ascorbatul
Valori crescute la pacienii supui chimioterapiei
i la care apare stomatitamarker predictiv al
complicaiior
Valori scazute la pacientii diabetici, probabil
datorita accentuarii stresului oxidativ la nivelul
cavitatii orale, in conditiile existentei unei boli
parodontale
To be continued
rolul albuminei in saliva, desi minor, nu
poate fi neglijat, deoarece, n absenta
acesteia, activitatea de scavenger a
uratului scade
scaderea albuminei la pacientii cu
parodontopatii indica un consum
accentuat al acestei proteine , in conditiile
cresterii stresului oxidativ

Saliva mai conine
Factori de crestere: factorul de cretere
neuronal (NGF), epitelial (EGF), insulin-like
(IGF)- justific activitatea paracrin i endocrin
a glandelor salivare
n saliva parotidian parotina -activitate
hormonal-implicat n calcifiere i meninerea
homeostaziei calcemice
chemokine i citokine -implicate n procese
acute, inflamatorii i imunoreglatoare
Chemokinele i receptorii lor - cheia nelegerii
infeciilor cu HIV



Citokinele salivare
grup de GP cu rol imunoreglator
secretate i de keratinocitele mucoasei
orale mucoasa are, pe lng alte funcii
i o foarte important funcie imunitar
implicate n inflamaie, aprarea antiviral
i antitumoral

Compui cu greutate molecular
mic
saliva total 18 aminoacizi
cel mai abundent Gly- probabil datorit
scindrilor hidrolitice ale proteinelor prin
intermediul enzimelor bacteriene
GABA i fosfatidiletanolamine
tetrapeptin (Gly-Gly-Lys-Arg) - implicat n
metabolismul plcii dentare
Alte proteine salivare
proteina care ndeprteaz mirosul -
odorant binding protein- leag acidul
3-metil-2-hexenoic, componentul major al
mirosului transpiraiei
aceeai protein - implicat n respiraia
patologic, cu miros neplcut (ca o surs
de acizi volatili) i n comunicarea chimic
(srutul !!!!, salivatia sugarilor la vederea
parintilor )
Sialina
oligopeptid
stimuleaz metabolismul bacteriilor prin
creterea producerii de acid lactic din glucoz
creterea pH-ului prin sinteza de compui bazici
responsabil - un rest de Arg (din cei 4 AA ai
peptidei)
denumit i factor de cretere a pH-ului
rezultatul amplificrii metabolismului -
ndeprtarea rapid a glucidelor
important sistem tampon alternant sistemului
bicarbonat

DEFENSINELE
Ce denumire sugestiv !!!!
Peptide cu valene antimicrobiene i
citotoxice
Valori crescute n saliv au fost detectate
la pacienii cu cancere orale

Istoric
Surprinzator- saliva a fost utilizata in scop
diagnostic in urma cu aproape 2000 de ani !!!
In medicina traditionala chineza- saliva si
sangele- are brothers
Au origine comuna semnificatie diagnostica
hipersalivatiaarsuri gastrice
saliva dulce in afectiuni ale splinei sau intoxicatii
cu metale
Afectiuni sistemice (ereditare, autoimune,
cancer si boli infectioase)

Afecteaza direct sau indirect glandele
salivare volumul si compozitia salivei
Modificarile unor markeri specifici
diagnosticul si prognosticul acestor
afectiuni

BOLI EREDITARE

Fibroza chistica- concentratii salivare crescute
de calciu, fosfati(incidenta calculilor dentari la
copii), proteine si lipide(alterarea proprietatilor
fizico-chimice ale salivei), uree, acid uric,
prostaglandine si EGF(epidermal growth factor)
cu activitate biologica scazuta
17-OHP(17-hidroxi-progesterona)- excelent test
screening hiperplazia congenitala a glandelor
suprarenale-corelare perfecta intre nivelul
salivar si cel sanguin
Afectiuni autoimune
Alterare- flux salivar, pH, capacitate
tampon, profilul citokinelor-
diagnosticul si monitorizarea
sindromului Sjgren
CANCER
Datorita localizarii sale, saliva fluid biologic
ideal pentru screening-ul leziunilor orale
premaligne si maligne, prognosticul malignizarii
Markerii tumorali identificati in saliva utili in
screening-ul afectiunilor maligne orale-
anticorpii p53(P53 mutation and mitotic infidelity
!!!!) si defensinele
Nivelul catechinelor salivare(provenite din ceai)
i activitatea catechin-esterazei salivare-rol n
prevenirea cancerului oral i esofagian
Prognosticul cancerului de san si ovar
Boala Alzheimer
Activitatea acetilcolinesterazei
salivare - marker util al
modificarilor asociate bolii si al
eficientei terapeutice cu inhibitori
ai enzimei
Saliva-mediu ideal
pentru evaluarea markerior turnoverului
tesutului osos
impact deosebit in implantele dentare
diagnosticarea si monitorizarea
osteoporozei si parodontopatiilor
fosfataza alcalina, osteocalcina,
osteopontina, etc.
Afectiuni virale
Saliva- o alternativa utila pentru
diagnosticul hepatitelor virale(A, B, C)
sensibilitate si specificitate
remarcabile
HIV
Teste salivare pentru diagnosticul HIV-Orasure
(SUA)
recoltarea si analiza salivei modalitate simpla,
sigura, rapida, bine tolerata si precisa de
diagnosticare a infectiei cu HIV
concordan excelent ntre concentraia
sanguin si cea salivara
saliva pacienilor infestai cu HIV - cantiti
semnificativ mai mari de colagenaze i inhibitori
ai acestora, comparativ cu pacienii care nu sunt
seropozitivi-HIV
Monitorizarea medicamentelor
Avantajele salivei
- corelare perfecta intre nivelul salivar si cel
sanguinindex al nivelului sanguin(etanol)
- apar rapid in salivadetectare rapida
- monitorizare rapida a nivelului unor
medicamente sau depistarea consumului
acestora
- monitorizarea expunerii la tutun (tiocianat ,
cotinina, enzime) sau toxine, consumul de
droguri
Toxine
Determinarea concentraiei salivare a PG a
evideniat la fumtori o inciden crescut a
afeciunilor orale corelat cu o concentraie
salivar sczut a acestor compui
Saliva - mediu optim de monitorizare a unor
substane chimice toxice pentru organismul
uman (pesticide, tetraclorur de carbon, nitraI,
etc.) reprezantnd n acelai timp i o modalitate
de evaluare a concentraiei tisulare a acestor
compui

Substante sau compusi care sunt
corelati cu nivelul de stres
Modificri ale unor componente salivare,
glucagon, cortisol, adrenalin, noradrenalin,
dopamin, peroxizi lipidici, antioxidani, sunt
relevante n stres, aa cum au evideniat
determinrile efectuate pe personalul medical de
pe ambulane, pacienii care se prezint la
cabinetele stomatologice, etc.
Remarcabil este i corelarea perfect ntre
parametrii salivari i cei sanguini n stresul oxidativ

HORMONI
Concordan excelent ntre concentraia sanguin i cea
salivar
Reflecta concentratia hormonilor liberi
Saliva- curent folosita pentru determinarea de cortisol,
dehidroepiandrosterona, testosteron, estradiol, estriol si
progesterona
monitorizare a pubertii precoce sau ntrziate, a
hiperplaziei corticosuprarenalei, bolii Addison, amenoreei,
hipopituitarismului, dezvoltarea ftului n ultima perioad a
sarcinii
progesterona i estradiolul n saliv s-a impus ca o metod
neinvaziv de investigare a funciei ovariene




Hormoni
Cortisolul( C ), testosteronul( T ) i raportul T/C n saliv
variaz semnificativ n timpul competiiilor sportive i in
perioada de recuperare
Cortisolul salivar crete semnificativ n cursul
competiiilor sportive nivelul salivar al testosteronei fiind
neafectat
La sfritul competiiei, cortisolul scade rapid, n
aproximativ 1,5 ore, la valoarea bazal iar testosterona
crete rapid, rezultnd un raport T/C foarte mare. In
perioada de recuparare fizic, raportul se menine
crescut , >30% fa de condiiile bazale, timp de 5 zile
Cortisolul salivar
Raportul T/C sczut din timpul competiiei
corespunde fazei catabolice
Perioada de refacere post-competiional se
caracterizeaz printr-o senzaie de oboseal,
incapacitate de antrenare intensiv, recunoscut
i de antrenori i, paradoxal, printr-un raport T/C
mare, corespunztor aa-numitei faze anabolice
cortisolului salivar faciliteaz diferenierea
pacienilor cu obezitate de cei cu sindrom
Cushing i poate fi un parametru util de
screening pentru pacienii cu sindrom Cushing


Determinari de Ig
sportivii de performan(atleti, jucatori de tenis,
schiori) -stresul fizic din perioada
antrenamentelor i a competiiilor induce o
supresie a sistemului imunitar oral diminuare
semnificativ a IgA salivar
La aceleai concluzii -studiu efectuat cu cadre
didactice, n timpul anului universitar i studeni,
dup o sesiune de examene
Persoanele cu bun dispoziie, cu mult umor, se
caracterizeaz printr-o concentraie crescut de
IgA salivar i deci predispoziie mai mic la
afeciuni respiratorii sau oro-dentare

To be continued
Extrem de utila in screening-ul infectiilor
virale(virusul herpesului la om, citomegalovirus,
Epstein-Barr)
IgA cel mai bun marker al infectiei cu
rotavirus(RV)
IgAs - rol major n mecanismul de aprare local
relaie invers ntre IgAs i susceptibilitatea la
carii
subiecii cu concentraii salivare mici de IgA i
IgM -inciden mare a cariilor dentare
Boli infectioase
Posibilitatea monitorizarii prin detectarea
de anticorpi specifici in saliva
Helicobacter pylori stimuleaza sinteza de
anticorpi specifici IgG (ELISA si PCR)
A relevat prevalenta in salivaexplica
transmiterea pe cale orala
Alte aplicatii ale determinarilor
salivare
Gangliozidele din glandele salivare au probabil
un rol n complicaiile din diabet.
Studiile relev c polimorfismul
dezoxiribonucleazei I n saliv este deosebit de
util n medicina legal
Factorul de activare plachetar(PAF) detectat
n saliva persoanelor sntoase i nivelul su
este crescut n parodontopatii
Sursa celular de PAF salivar este
controversat dei numeroase date sugereaz
originea sa n relaie cu prezena inflamaiei

Recent
diagnosticarea unor afeciuni dureroase
cronice(artrita reumatoid, osteoartrita,
migrenele, etc.) prin estimarea concentraiei
salivare de serotonin, substan P(SP),
calcitonin gene-related peptide(CGRP), factorul
de cretere neuronal(NGF)
Concentraiile salivare ale acestor parametrii
sunt semnificativ crescute la pacienii cu astfel
de afeciuni, comparativ cu persoanele
sntoase.
Concentraiile salivare ale SP i CGRP sunt de
aproape 3 ori mai mari dect n plasm

In patologia orala
Parametrii salivari ca peroxidaza salivar, acidul
uric, albumina, acidul ascorbic, GGT- indicatori
ideali ai stresului oxidativ din diferite afeciuni
orale: gingivite, parodontopatii, etc.
Potenialul antioxidant al salivei, asigurat n
principal de acidul uric, precum i concentraia
antioxidanilor salivari scad n gingivite i
parodontopatii
Activitile mieloperoxidazei din LPMN
polimorfonucleare, determinat prin
chemiluminescena LPMN i peroxidazei salivare
cresc n gingivite si parodontopatii, constituind un
bun indicator al procesului inflamator

Markeri ai afectiunilor orale
AST si FA din saliva markeri ai
afectiunilor parodontale
sistemul enzimatic salivar-compromis in
cazul expunerii la fum de tigara
GGT salivar marker al stresului oxidativ
indus de fumul de tigara


To be continued
cistatina S salivar - biomarker al rezistenei la placa
bacterian
nivelului salivar al amilazei i lizozimului -modalitate
neinvaziv de monitorizare a activitii glandelor salivare
Trombomodulina( TM )-proteoglican din keratinocitele
gingivale poate regla activitatea trombinei
rol anticoagulant major- receptor al trombinei-
acioneaz ca i cofactor n activarea proteinei C
sczut n inflamaiile gingivale i parodontopatii
Parodontopatiile din diabet se coreleaz cu valori
crescute ale metaloproteazelor salivare-utile astfel n
monitorizarea afeciunilor parodontale asociate
diabetului
Perspective
elaborarea unor biomolecule n care domeniile
structurale s corespund unor necesiti
individuale
saliv artificial care s includ oligozaharide
ale PRG - facilita lubrifierea n masticaie
diminund astfel abraziunile asociate
xerostomiei
un domeniu adeziv de la mucin sau
fibronectin, prin cuplare cu un domeniu de la
lactoferin sau peroxidaz tratamentul
afeciunilor orale asociate plcii dentare
Continuarea investigaiilor pe saliv
va conduce cu siguran la descoperirea unor
noi utiliti, saliva putnd s ne ofere n
continuare multe surprize
Era genomica in care am intrat a deschis noi
perspective determinarilor pe saliva-determinari
de ADN, ARN
Dovada: initierea in 2004 a unui consortiu de
cercetare multidisciplinara da catre National
Institute of Dental and Craniofacial Research
pentru elaborarea unui catalog complet al
proteinelor salivare (Human Salivary Proteome
Project)