UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

Prof. Dr. Dana Iordachescu

3
Catabolismul principalelor tipuri de biomolecule (proteine, polizaharide si
lipide) parcurge in celulele aerobe 4 faze

I hidroliza la unitati de baza:

aminoacizi, monozaharide, acizi
grasi - in citosol

II

III

II scindarea unitatilor de baza

la acetil CoA - in mitocondrie
IV
III oxidarea gruparii acetil la 2
moli de CO2 in ciclul Krebs (in
prezenta NAD+, FAD) in
mitocondrie

IV - refacerea NADH si FADH2 in cadrul catenei transportoare de

electroni mitocondriale (CTEM) proces exergonic cuplat cu
fosforilarea ADP (fosforilarea oxidativa)

zaharoza
lactoza

fructoza
galactoza

Catabolismul glucidelor
Glicogen
glicogenoliza

glucoza

ATP

Hexokinaza/
glucokinaza

Glucozo P

+
NADPH

glicoliza

Piruvat
Alcool DHaza

suntul
pentozo P

Pentozo P

Lactat DHaza

Lactat

Complexul piruvat
dehidrogenazei
Acetil CoA

Etanol
CO2

Ciclul Krebs +
fosforilarea oxidativa
CO2, H2O, ATP

GLICOLIZA
Calea Embden Mayerhof Parnas 10-11 etape enzimatice
Cea mai veche cale metabolica legatura cu fermentatiile
In citoplasma animalelor, plantelor, majoritatii bacteriilor

Viteza maxima in celulele musculare, unde furnizeaza energie (ATP) pt

contractia musculara
Glicoliza aeroba
C6H12O6 + 2NAD+ + 2 (ADP + Pi)

2 PIRUVAT + 2 NADH+ 2 ATP

Glicoliza anaeroba
C6H12O6 + 2 (ADP + Pi)

LACTAT + 2 ATP

Prima faza a glicolizei C6

cuprinde 5 etape enzimatice:

2 C3 consumatoare de 2 moli ATP

Glucoza
ATP
1

Hexokinaza/
glucokinaza
Glucozo 6-P

ADP

C6H12O6 + 2 ATP

fosfoglucomutaza

2 GAP + 2 ADP

Fructozo 6-P
3

fosfofructokinaza

ATP
ADP

Enzimele reglatoare catalizeaza

reactii ireversibile 1 si 3

Fructozo 1,6-bisP
4

aldolaza

Dihidroxiaceton P

Gliceraldehid P

DHAP

GAP

96 %

fosfotriozoizomeraza

4%

A doua faza a glicolizei este formatoare de ATP

Coeficienti stoichiometrici X 2 deoarece C6
GAP
6

Reactia 6

H3PO4

NAD+

R-CHO + NAD+ + H2O R-COOH + NADH+H+

GAP DHaza

NADH

2 C3

Go= 10,3 kcal/mol

1,3-difosfoglicerat

R-COOH + H3PO4 R-CO~OPO3H2 + H2O

1,3-DPG
7

Go= + 11,8 kcal/mol

Fosfoglicerat kinaza
Suma a + b

3-fosfoglicerat

aproape 0, reactie reversibila

3-PG
8

Go= +1,5 kcal/mol

Fosfoglicerat mutaza
2-fosfoglicerat
2-PG

Enolaza

H2O

ADP ATP

Fosfoenol piruvat
PEP

Piruvat
Piruvat kinaza

10

a
b

Suma reactiilor 1 - 6
Glucoza + 2 NAD+ + 2 ATP

Suma reactiilor 6 + 7

2 x 1,3-DPG + 2 NADH+2H+ + 2 ADP + 2Pi

reprezinta o fosforilare oxidativa la nivel de substrat

R-CHO + NAD+ + Pi + ADP

Componenta exergonica

R-COOH + NADH+H+ + ATP

Componenta endergonica

Bilantul total al glicolizei

C6H12O6 + 2 NAD+ + 2 (ADP + Pi)
Etapa exergonica: C6H12O6 + 2 NAD+

2 PIRUVAT + 2 NADH+2H+ + 2 ATP

2 PIRUVAT + 2 NADH+2H+
Go= 47 kcal/mol

Etapa endergonica: 2 ADP + 2 Pi

2 ATP + 2 H2O Go= + 14,6 kcal/mol

Gototal = 47 + 14,6= 32,4 kcal/mol reactie ireversibila

Randamentul glicolizei: = 14,6/47 x 100 = 31 % tinand seama de valorile Go
In realitate randamentul glicolizei ~ 53 % (in functie de valorile G)

10
Reglarea glicolizei
1) La nivelul transportorilor glucozei GLUT
2) La nivelul hexokinazei
3) La nivelul fosfofructokinazei
4) La nivelul piruvat kinazei
1) La nivelul transportorilor GLUT
Glucoza din sange patrunde in celula prin
difuzie facilitata de proteinele transportor
GLUT- codificate de gene distincte, exprimati intr-o maniera tesut-specifica
Glucoza este transportata in sensul gradientului
de concentratie, nu nece
sita energie (ATP)

11

Schema structurii transportorilor GLUT catena polipeptidica

de ~ 500 resturi de aminoacizi, 12
segmente de -helix
sGLUT 1, GLUT 1, GLUT 2,
GLUT 3, GLUT 4, GLUT 5

sGLUT 1 exprimat majoritar in mucoasa intestinala si tubulii renali, cotransporta o molecula de Glc sau Gal impreuna cu 2 ioni Na+. Nu transporta
Fru
GLUT 1 exprimat in multe tipuri celulare (creier, eritrocite, celule endoteliale,
testuri fetale); transporta Glc (cu o inalta afinitate) si Gal. Nu transporta Fru

GLUT 2 exprimat de celule pancreatice, hepatocite, etc; are o mica

afinitate si inalta capacitate de transport; KM ~ 15-20 mM; functioneaza ca
un sensor al glicemiei in celulele pancreatice; transporta Glc, Gal si Fru
Viteza de intrare a Glc proportionala cu nivelul glicemiei
GLUT 4 exprimat de celule musculare si adipocite, sensibil la insulina,
inalta afinitate pentru Glc; KM 5 mM; creste viteza preluarii glucozei
Cand nivelul insulinei in sange
creste, se leaga la IR care induce
translocarea
GLUT
4
(si
fosforilarea) din citosol pe
membrana favorizand preluarea
de glucoza de catre celula din
sange (efect hipoglicemiant)
Cand nivelul
transportorii
translocati de
citoplasma

insulinei scade
GLUT
4
sunt
la membrana in

12

A. Transportul glucozei insensibil la insulina (GLUT 1 sau GLUT

GLUCOZA

eritrocit

creier
ficat
rinichi

B. Transportul glucozei sensibil la insulina (GLUT-4)

+
muschi
cord

INSULINA
GLUCOZA

+
adipocit

13

Controlul glicolizei la nivelul

enzimelor reglatoare

14

2) Reglarea glicolizei la nivelul hexokinazei

hexokinaza/glucokinaza
Glucoza + ATP

Glucozo 6-P + ADP

Hexokinaza

Glucokinaza

D-Glc,Fru, Man, GlcNH2

D-Glc

Enzima reglatoare

Enzima comuna

Inhibata de Glc-6-P

Neinhibata

+ Muschi

Absenta in muschi

+ Ficat

+++ Ficat

KM 1 x 10-4 M (Glc)

KM 1 x 10-2 M (Glc)

In sange [Glc] 5 mM hexokinaza complet saturata;

cand [Glc] creste - intervine glucokinaza hepatica
In diabet glucokinaza insuficienta!!!

15

Hexokinaza enzima musculara, implicata in glicoliza aeroba sau anaeroba

Glucokinaza enzima implicata in sinteza glicogenului in muschi sau ficat,
atunci cand glicemia este crescuta
Hexokinaza este inhibata de fondul metabolic de glucozo 6-P existent in
muschi; glicoliza de la glicogen fiind mai avantajoasa energetic
glicogen

Glc-6-P

Piruvat

Lactat
16

17

3) Reglarea glicolizei la nivelul fosfofructokinazei

ATP

PFK-2

ADP

La nivelul ficatului, fosfofructokinaza

1 (PFK-1) este:
i) Inhibata de [ATP]mari

hipoglicemie

Fru-6-P

Fru-2,6 P2

ATP se leaga la un situs reglator, diferit

de centru catalitic activ, inhibitia este
reversata de AMP
[ATP]/[AMP] scazut stimuleaza PFK1, stimuleaza glicoliza

Pi

PS

ii) Inhibata de [H+] crescuta, formarea excesva de lactat scade pH

sangvin produce acidoza

H2O

PS-fosfataza specifica
iii) Inhibata de [citrat] mari

iv) Activata de Fru-2,6-bis fosfat, creste afinitatea PFK-1 pentru Fru-6-P, scade
efectul inhibitor al ATP, deplaseaza echilibrul T
R
1
Domeniu reglator

32

470

250
PFK2

PS

Enzima bifunctionala
de 55 kDa, cu ambele
activitati PFK2 si PS

Glucagonul (ficat) sau epinefrina (muschi) cresc nivelul cAMP, activeaza

PKA. In ficat aceasta conduce la scaderea [Fru-2,6-P2] si inhiba glicoliza.

PFK-2
Fru-6-P
PFK-1

F-2,6-P2

Fru-1,6-P2

glicoliza

18

In muschi, epinefrina are un efect opus

activeaza glicoliza!!!!!!

Enzima bifunctionala este fosforilata de PKA la nivelul unui rest Ser din domeniul
reglator:
activitatea PS creste
activitatea PFK-2 scade
Hipoglicemie

glucagon

cAMP

PKA

Enzima bifunctionala

Fru 2,6 bis P

Fru 6-P

Scade glicoliza
Hiperglicemie

Insulina scade
nivelul cAMP,
creste nivelul
Fru-2,6 P2.
stimuleaza
glicoliza

Creste glicoliza
19

La nivelul muschilor, fosfofructokinaza este inhibata de concentratii mari

de:
ATP, citrat, acizi grasi superiori, H+
4) Reglarea glicolizei la nivelul piruvat kinazei (PyrK)
Constructii tetramerice din monomeri L (liver) ce predomina in ficat, M
(muscle) ce predomina in muschi si A (other tissues)
Hipoglicemie

Glucagon

cAMP

PyrK (L)-OH

PKA

inactiveaza

PyrK (L)-OP

PyrK (L)-OP

ADP
PKA
ATP

PyrK (L)-OH

PEP + ADP

+
20

Fru-1,6-bis P

H2O
Pi
PYR + ATP

ATP, ALA

Efectori alosterici

21

Transformarile piruvatului

1) Transformarea piruvatului in lactat

22

Reactia 11 a glicolizei, catalizata de lactat dehidrogenaza

Izoenzime

Piruvat

L-lactat

Cord Lac
Pyr
H4
Muschi Pyr
M4

Acetil CoA
Lac

Cand ecuatia totala a glicolizei devine:

Glucoza + 2 ADP + 2 P1

2 Lactat + 2 ATP

In ecuatie nu mai intervine NAD+/NADH datorita cuplarii reactiilor 6-11 care

permite refacerea NAD+
In lipsa etapei 11 a glicolizei refacerea NAD+ se realizeaza prin oxidarea
NADH in cadrul CTEM

23
Glucoza

Fermentatia
lactica

Glc-6-P
Fru-6-P
Fru-1,6-P2

DHAP

GAP
NAD+

Lactat
11

NADH+
1,3-DPG

3-PG

11
Pyr

2-PG

Etanol

PEP

12
Acetaldehida

Fermentatia alcoolica

24
Muschi
Contractia musculara necesita mult ATP
care sustine contractia musculara
Lactatul format poate produce dureri
musculare, poate fi transportat in ficat
unde participa la glucogeogeneza
Bacterii lactice
Realizeaza fermentatia homolactica

2) Transformarea piruvatului in etanol

11

25

12

Ecuatia totala a glicolizei este:

C6H12O6 + 2 (ADP + Pi)

2 Etanol + 2 CO2 + 2 ATP

In ecuatie nu mai intervine NAD+/NADH datorita cuplarii reactiilor 6-12

care permite refacerea NAD+
Piruvat decarboxilaza are tiamin pirofosfatul (TPP) ca grupare prostetica
Alte TPP enzime:
Transcetolaza
Componenta A a
piruvat dehidrogenazei

26

Piruvat decarboxilaza
- prezenta la microorganisme
- absenta la om si animale
Alcool dehidrogenaza prezenta la
- drojdii 4

1 Zn2+/mer

- om (ficat) 2

2 Zn2+/mer metabolizeaza alcoolul ingerat

NAD+ NADH

CH3-CH2-OH

NAD NADH

CH3-CHO

ATP

AMP,Pi

CH3-COOH

alcool

aldehid

dehidrogenaza

dehidrogenaza

CO2,H2O,
ATP

CH3-CO~SCoA

acetil CoA
sintetaza

Grasimi

3. Transformarea piruvatului in acetil CoA

27

v.p.20

piruvat

NAD+ CoASH

Complexul piruvat
dehidrogenazei

NADH
Acetil CoA

Va fi discutat ulterior !

CO2

INTRAREA OLIGOZAHARIDELOR, FRUCTOZEI SI

GALACTOZEI IN GLICOLIZA

Invertaza-zaharaza-sucraza

lactaza- galactozidaza

28

29
Fructoza
Adipocit
[Fru] >>> [Glc]

Ficat

ATP

ATP

[Glc] >>> [Fru]

hexokinaza

glucokinaza

Fru 1-P

Fru 6-P

Fru 1-P aldolaza (tip B)

Gliceraldehida

DHAP

ATP

GAP

Gliceraldehid
kinaza

30
galactokinaza

Gal + ATP

Gal-1-P + ADP
uridilil transferaza

Gal 1-P + UDP-Glc

Glc 1-P + UDP-Gal

4-epimeraza

UDP-Gal

UDP-Glc

Fosfoglucomutaza

Glc 1-P
Gal + ATP

Glc 6-P
Glc 6-P + ADP

31

32

Intoleranta la fructoza

Maladie genetica, deficienta in aldolaza tip B, acumulari de Fru 1-P,

bolnavii nu suporta glucide, Fru nu alimenteaza glicoliza
Galactozemie
Maladie genetica, poate lipsi orice enzima din calea de alimentare a
glicolizei cu Gal, mai frecvent uridilil transferaza, Gal nu alimenteaza
glicoliza
Acumularea de Gal toxica
aldozo reductaza

Galactoza

galactitol (toxic, acumulari in ochi, cataracta)

Simptome
Cataracta, crestere lenta, retardare mentala, insuficienta hepatica, voma,
diaree, icter, moarte
Se impune scoaterea Gal (laptelui) din dieta