ANALIZA VALSARTANULUI DIN

COMPRIMATE

Angelescu Mihaela, grupa 1

Arpaanu Drgua, grupa 2
Yassin Abdul Halim, grupa 3

CUPRINS

Monografia de comprimate din Farmacopeea European 5............................................................

Monografia de valsartan din Farmacopeea European 8.................................................................
Monografia de comprimate cu valsartan din USP 38....................................................................
Dozarea valsartanului din comprimate printr-o metoda HPLC.....................................................
Rezultate i concluzii.....................................................................................................................

Monografia de comprimate din Farmacopeea European 5

Definiie
Comprimatele sunt preparate farmaceutice solide care conin doze unitare din una sau mai
multe substane active, obinute de obicei prin comprimarea unui volum constant de particule.
(s.a.)
Comprimatele sunt destinate administrrii orale. Ele se pot administra: ca atare, comprimate
masticabile, pot fi dizolvate sau dispersate n ap naintea administrrii sau men inute n gur
pn la eliberarea substanei active.
Particulele componente constau n una sau mai multe substan e active cu sau fr excipien i
cum ar fi: diluani, liani, ageni de dezintegrare, ageni de alunecare, lubrefiani, substan e
capabile s modifice comportamentul preparatului n tractul digestiv, colorani autoriza i de
ctre autoritatea competent i aromatizani.
Comprimatele sunt de obicei sub form de disc sau de cilindru circular, cu suprafe e plane
sau convexe i margini teite. Pot prezenta anumite lini sau anuri i pot avea un simbol sau
alte marcaje. Comprimatele pot fi acoperite.
Sunt aplicabile daca containerele pentru comprimate respect cerinele din Materiale folosite
la fabricarea de containere (3.1 i subseciuni) i Containere (3.2 i subseciuni).
Se disting mai multe categorii de comprimate orale:

Comprimate neacoperite,
Comprimate acoperite,
Comprimate efervescente,
Comprimate solubile,
Comprimate dispersabile,
Comprimate orodispersabile,
Comprimate gastro-rezistente,
Comprimate cu cedare prelungit.

Preparare
3

Comprimatele se prepar, de obicei, prin comprimarea unui volum uniform de particule sau
de agregate de particule obinute prin metode de granulare. n procesul de fabricare al
comprimatelor, se folosesc anumite mijloace(msuri) pentru a se asigura ca au o rezisten a
mecanic adecvat pentru a evita sfrmarea sau ruperea la manipulare sau n prelucrarea
ulterioar. Acestea pot fi demonstrate prin examaniarea prevederilor din Friabrilitatea
comprimatelor neacoperite (2.9.7) si din Rezistena la strivire a comprimatelor (2.9.8).
Comprimatele masticabile sunt preparate astfel nct se asigura ca acestea sunt uor de strivit
prin mestecare.
Pentru comprimatele pentru care subdiviziunea este autorizata, este demonstrat de autoritatea
competenta ca partile subdivizate sunt n concordan fie cu testul A pentru Uniformitatea
coninutului unei singure doze (2.9.6) sau cu testul pentru Uniformitatea masei pentru o
singura doz (2.9.5).
La fabricarea, ambalarea, depozitarea i distribuirea comprimatelor se iau msurile adecvate
pentru asigurarea calitii microbiologice; recomandrile cu privire la acest aspect sunt
prevzute n Calitatea microbiologic a preparatelor farmaceutice (5.1.4)
Parametri de control
Uniformitatea coninutului (2.9.6)
Se efectueaz pentru comprimate al cror coninut n substan activ < 2mg, sau la care
substana activ < 2% din masa total a comprimatului, care respect testul A de
uniformitatea coninului pentru o singura doza din preparat. n cazul n care preparatul are
mai mult de o substan activ, cerina se aplic numai pentru acele substan e care corespund
condiiilor de mai sus. Excepie fac comprimatele care au n prescripie alt mod justificat i
autorizat.
Dac nu sunt alte condiii precizate, justificate i autorizate, comprimatele acoperite, altele
dect comprimatele filmate, trebuie s respecte testul A de uniformitatea coninutului pe doz
indiferent de coninutul lor n substane active.

Uniformitatea masei (2.9.5)

4

Comprimatele neacoperite i cele filmate, doar dac nu exist alte prevederi justificate i
autorizate, trebuie s corespund cu testul de uniformitate a masei pe o singur doz din
preparat. Dac parametrul pentru uniformitatea coninutului este indicat sau justificat i
autorizat pentru toate substane active, testul pentru uniformitatea masei nu mai este
obligatoriu.
Testul de dizolvare
Este un test potrivit pentru a demonstra eliberarea substantelor active, de exemplu unul din
testele descrise este Testul de dizolvare pentru formele de dozare solide (2.9.3).
Cnd este indicat testul de dizolvare, testul de dezintegrare nu mai este obligatoriu.
Comprimate neacoperite
Definiie
Comprimatele neacoperite includ comprimatele cu un singur strat care rezult dintr-o singur
comprimare a particulelor i comprimatele cu straturi multiple, dispuse concentric sau
paralel, obinute prin comprimarea succesiv a particulelor de compozi ie diferit. Excipien ii
folosii nu sunt destinai s modifice n mod specific eliberarea substan ei active n fluidele
digestive.
Comprimatele neacoperite respect definiia general a comprimatelor.
O seciune rupt, atunci cnd este examinat sub o lamel, arat fie o textur relativ
uniform(comprimate cu un singur strat) fie o textur stratificat (comprimate cu straturi
multiple), dar nici urm de nveli.
Parametrii de control
Dezagregare. Comprimatele neacoperite respect testul pentru dezagregarea comprimatelor
i capsulelor(2.9.1). Utilizai apa ca lichid de referin. Adugai un disc n fiecare eprubet.
Pornii aparatul cu 15 min nainte de evaluarea probelor, cu excepia cazului n care se
justific i se autorizeaz n alt fel, i examinai starea comprimatelor. n cazul n care
comprimatele nu se dezagreg se repet testul cu alte 6 comprimate far a folosi discurile.
Comprimatele se conform testului dac toate cele 6 comprimate s-au dezintegrat.
Comprimatele masticabile nu trebuie sa respecte testul.
5

Monografia de valsartan din Farmacopeea European 8

Definiie
Acid (2S)-3-metil-2-[pentanol[[2(1H-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]metil]amino]butanoic.
Coninut: 99.0 la suta la 101.0 suta (substan anhidra)
CARACTER
Aspect: alb sau aproape alb, pudra higroscopica
Solubilitate: este practic insolubil in apa , este solubila n etanol anhidru, moderat solubil n
clorur de metil.
IDENTIFICARE
Purttor oricare test A, B sau A, C
A Spectofotometrie de absorie IR (2.2.24).
Comparaie: valsartan CRS
B Puritate enatiomerica (vezi Teste)
C Rotaie optica specific (2.2.7): - 69.0 la -64.0 (substan anhidra).
Dizolv 0.200 g in metanol R i se dilueaz la 20.0 mL cu acelai solvent.
TESTE
Puritate enatiomerica. Cromatografie lichid (2.2.29).
Soluie test. Dizolv 50 mg din substana ce urmeaz sa fie examinat n faza mobil i
dilueaz la 50 mL cu faza mobil.
Soluia de referin (a). Dizolv 5 mg de valsartan pentru identificarea picului CRS (conine
impuritatea A) n faza mobil i se dilueaz la 5.0 mL cu faza mobil.
Soluia de referin (b) Dilueaz 1.0 mL de soluie test la 100.0 mL cu faza mobil.

Coloana:
Mrime: l=0.25m , = 4.6mm;
Faza staionar: silicagel OD pentru separaia chirala R.
Faza mobil: acid trifluoroacetic R, 2-propanol R, hexan R (0.1:15:85 V/V/V)
Debit: 0.8 mL/min
Detectare: spectrofotometru la 230 nm
Injecie: 10 L.
Timp de funcionare: de 1.5 ori timpul de retenie al valsartanului
Identificarea impuritilor: folosete cromatogramul aprovizionat cu picul de identificare
CRS al varsartanului i cromatograma obinut la soluia de referin (a) pentru a identifica
picul datorit impuritii A.
Retenia relativ cu referin la valsartan (timpul de retenie = aproximativ 13 min) :
impuritate A= aproximativ 0.6.
Sistemul de acceptabilitate: soluie de referin (a):
-rezoluia: minim 2 ntre picuri datorit impuritii A i valsartan.
Limita:
-impuritatea A: nu mai mare dect suprafaa picului principal n cromatograma obinut cu
soluia de referin (b) (1.0 %)
Substane nrudite. Cromatografia lichida (2.2.29).
Soluie test. Se dizolv 50 mg de substan pentru a fi examinat n faza mobil i se dilueaz
n 100 ml cu faza mobil.
Soluie de referin (a). Se dilueaz 1.0 mL de soluie test la 100.0 mL cu faza mobil.
Dilueaz 1.0 mL din aceast soluie la 10.0 mL cu faza mobil.
Soluie de referin (b) Se dizolv coninutul unui flacon de valsartan pentru sistemul de
acceptabilitate CRS (conine impuritatea C) n 1.0 mL faz mobil.
7

Coloana:
Mrime: l = 0.125 m, = 3.0 mm;
Faza staionar Silicagel OD pentru cromatografie R (5 m)
Faza mobil : acid acetic glacial R , acetonitril R1, apa R (1:500:500 V/V/V)
Debit: 0.4 mL/min.
Detecie: spectrofotometru la 225 nm.
Injecie: 10 L.
Timp de funcionare: de 6 ori timpul de retenie al valsartanului.
Identificarea impuritilor: se folosete cromatogramul aprovizionat cu valsartan pentru
sistemul de acceptabilitate CRS si cromatograma obinut cu soluia de referin (b) pentru a
identifica picul datorit impuritii C.
Retenia relativa cu referin la valsartan ( timpul de retenie = aproximativ 5 min): impuritate
C = aproximativ 0.8.
Sistemul de acceptabilitate : soluia de referin (b):
-rezoluie: minim 3.0 ntre picurile impuritii C i valsartan.

Limite:
-impuritatea C: nu mai mult de doua ori dect aria picului principal n cromatograma obinut
cu soluia de referin (a) (0.2 %) ;
-impuriti nespecificate: pentru fiecare impuritate , nu mai mult dect aria picului principal
n cromatograma obinut cu soluia de referin (a) (0.10 %);
-total: nu mai mult de 3 ori dect aria picului principal n cromatograma obinut cu soluia de
referin (a) (0.3 %);
-limita de nerespectat: 0.5 ori aria picului principal n cromatograma obinut cu soluia de
referin (a) (0.05 %).
8

Metale grele (2.4.8): maxim 20 ppm.

Dizolva 1.0 g ntr-un amestec de 15 volume de apa R si 85 volume de acetona R i dilueaz la
20 mL cu acelai amestec de solveni. 12 mL de soluie corespunde cu testul B. Se prepara
soluia de referin folosind 10 ml de soluie standard de plumb (1 ppm Pb) R.
Apa (2.5.12) : maxim 2.0 % , determinat pe 0.500 g.
Cenu sulfata (2.4.14) : maxim 0.1 % , determinat pe 1.0 g.

DOZARE
Se dizolva 0.170 g n 70 mL de 2- propanol R. Se titreaza cu hidroxid de tetrabutilamoniu
0.1M n 2- propanol, determinnd punctul de sfrit poteniometric (2.2.20). Se efectueaz
toate operaiile in atmosfera de nitrogen.
1 ml de hidroxid de tetrabutilamoniu 0.1M n 2- propanol este echivalent la 21.78 mg de
C24 H 29 N 5 O3

Depozitare
ntr-un container etan.
IMPURITAI
Impuriti specificate A, C.
Alte impuriti detectabile ( urmtoarele substane, dac sunt prezente ntr-un nivel suficient,
pot s fie detectate prin unul sau mai multe teste n monograf. Ele sunt limitate criteriului
general de acceptare pentru alte / impuriti nespecificate si/sau de monografia general
Substane pentru uz farmaceutic (2034). Deci nu este necesar s identifici aceste impuriti
pentru demonstrarea conformitii. Vezi de asemenea 5.10.
Control impuritii pentru substanele cu uz farmaceutic): B.

A: R1 = H, R2 = CO2H, R3 = CH3: Acid (2R)-3-metil-2-[pentanoil[[2'-(1H-tetrazol-5-il)bifenil4-il]metil]amino]butanoic.

C: R1 = CO2H, R2 = R3 = H: Acid (2S)-2--[butanoil[[2'-(1H-tetrazol-5-il)bifenil-4il]metil]amino]-3-metilbutanoic.

B: R1 = H, R2 CH3: benzil(2S)-3-metil-2-[pentanoil[[2'-(1H-tetrazol-5-il)bifenil-4il]metil]amino]butanoat.

10

Monografia de comprimate cu valsartan din USP 38

Definiie
Comprimatele de valsartan conin ntre 95,0% - 105,0% din cantitatea inscripionat pe
eticheta de valsartan.
Identificare
Timpul de retenie al picului major al soluiei prob corespunde cu cel al soluiei etalon
obinut la dozare.
Dozare
Procedur
Faza mobil: acetonitril, ap i acid acetic glacial (50:50:0,1)
Solvent: acetonitril i ap (1:1)
Soluie pentru testarea comformitii sistemului: 2 g/ml din soluia standard de referin
a impuritii B a valsartanului i 20 g/ml din soluie de referin a valsartanului n solvent.
Soluia standard: 0,20 mg/ml din soluia standard a valsartanului n solvent.
Soluie stoc: se introduc 20 de comprimate ntr-un pahar gradat potrivit i, iniial, se adaug
ap (10% din volumul vasului). Se agit sau se amestec pn la dezintegrarea comprimatelor
(aproximativ 5 min.). Se adaug acetonitril (aproximativ 80% din volumul vasului). Se agit
sau se amestec pentru 30 de min i pentru 10 min se aplic ultrasonare. Se race te i se
completeaz la volum cu acetonitril, apoi se amestec i se centrifugheaz o parte din
suspensie.
Proba: 0,2 mg/ml de valsartan din soluia stoc n solvent.
Sistem cromatografic: (vezi Cromatografia 621)
Mod: cromatografie lichid
Detector: UV 230 nm
Coloan: 4,6-mm x 25-cm; 10- m ambalat L1;
11

Temperatur coloane: 30
Debit: 1,0 ml/min
Dimensiunea injeciei: 20 l;
Cerine de conformitate:
Rezoluie: nu mai puin de 1,5 ntre soluia de referin a impuritii B a valsartanului i
soluia de referin de valsartan
Deviaie standard relativ: nu mai mult de 2.0%
Analiza probei: soluia standard i soluia probei
Se calculeaz procentul din cantitatea declarat pe eticheta de valsartan (

C24 H 29 N 5 O3

) n

poriunea de comprimate luate n lucru:

Rezultat = (

ru / rs

)(

C s /Cu

) 100

r u = picul soluiei prob/monstr

rs

= picul soluiei standard

C s = concentraia de USP Valsartan RS n soluia standard (mg/ml)

Cu

= concentraia nominal a soluiei prob/monstr (mg/ml)

Interval de admisibilitate: 95.0% - 105.0%

Teste de performan
Dizolvare (711)
Mediu: tampon fosfat pH=6,8 ; 1000 ml, degazat
Aparat 2: 50 rpm
Timp: 30 de min

12

Soluie standard: (L/1000) mg/ml din soluia standard de referin a valsartanului n mediu,
unde L reprezint cantitatea inscripionat pe etichet, exprimat n mg/comprimat.
Observaie: Se dilueaz cu solvent att ct este necesar.
Soluia prob: se filtreaz o parte din soluia de testat printr-un filtru adecvat.
Analiz
Lungime de und analitic: UV 250 nm
Martor: tampon fosfat pH=6,8
Probe: Soluie standard i Soluia prob
Se calculeaz procentul de valsartan(

C24 H 29 N 5 O3

) dizolvat, din cantitatea declarat pe

etichet:
Rezultat = (

AU / AS

)(

CS/ L

) V 100

AU

= absorbana probei

AS

= absorbana soluiei standard

C S = concentraia solutiei de referin de valsartan n soluia standard (mg/ml)

L = cantitatea declarat pe etichet (mg/comprimat)
V = volumul mediului, 1000 ml
Toleran: nu mai puin de 80% din cantitatea declarat de valsartan(

C24 H 29 N 5 O3

) s-a

dizolvat.
Uniformitatea coninutului <905>: Trebuie mplinite condiiile.
Impuriti
Impuriti organice.

13

Faza mobil, solvent, soluia pentru testarea conformitii sistemului, solu ia prob i
sistemul cromatografic: se procedeaz conform tehnicilor descrise la parametrul Dozare
Soluia standard: 0,4 g/ml din soluia de referin de valsartan n solvent
Sensibilitatea soluiei: 0,1 g/ml din soluia de referin de valsartan n solvent, din soluia
standard

Sistemul de acceptabilitate
Prob: soluia standard, soluia pentru sensibilitate soluiei i soluia pentru testarea
conformitii sistemului
Cerine de acceptabilitate
Rezoluie: nu mai puin de 1.5 ntre soluia de referin a impuritii B i valsartan, solu ia
pentru testarea conformitii
Deviaie standard relativ: nu mai puin de 10.0% , soluia standard
Zgomotul de fond: nu mai puin de 10
Analiz
Prob: soluia prob si soluia standard
Se calculeaz procentul pe impuritate din poriunea de comprimate luate:
Rezultat =(

r U /r S

)(

C S /CU

) 100

rU

= picul fiecrei impuriti din soluia prob

rS

= picul corespunztor valsartanului din soluia standard

C S = concentraia soluiei de referin a valsartanului din soluia standard (g/ml)

14

CU

= concentraia nominal de valsartan din soluia probei

Criteriu de acceptibilitate
Fiecare impuritate: s nu depeasc 0.2%
Totalul impuritilor: s nu depeasc 0.4%. [OBS.- calculai totalul impuritilor din suma
picurilor impuritilor. Nu luai n considerare orice pic al soluiei de referin al impurit ii B
a valsartanului sau orice alt pic 0.05 %.]
Cerine adiionale
Ambalare i depozitare: se pastreaz n recipiente nchise etan.

Dozarea valsartanului din comprimate printr-o metoda HPLC

Abstract
RP-HPLC este o metod simpl, rapid, sensibil ce a fost utilizat pentru determinarea
comprimatelor de valsartan.
Metoda utilizeaz coloane Thermo hyperil ODS ( 150 mm x 4.6 mm i.d., particule de 5 m)
cu o faz mobil compus din ap:acetonitril:acid acetic glacial ( 500:500:01). Debitul este
setat la 1 ml/min, iar efluentul a fost detectat la lungimea de und de 273 nm. Timpul de
retenie al valsartanului este de 4,6 minute. Metoda a fost validat pentru specificitate,
acuratee, precizie, liniaritate, limita de detecie, limita de cuantificare, robuste e i
stabilitatea solubulitii. Limita de detectie i limita de cuantificare au fost detectate a fi 2.72
g/ml i respectiv 8.25 g/ml. Curba de calibrare a fost liniar pe variaia de concentra ie
cuprins ntre 40-140g/ml cu un coeficient de corelaie de 2%. Procentajul de recuperare a
valsartanului a fost cuprins ntre 99.0 -100.2 i % RDS mai mic de 2 %. Metoda propus a
fost cu succes utilizat pentru determinarea cantitativ a valsartanului din comprimate.
Introducere:
Valsartanul sau acid 3-metil-2- [pentanoil-[ [4-[2-(2H-tetrazol-5-il) fenil] fenil] metil]amino]
-butanoic, antagonist pe receptorii angiotensinei II, acioneaz la nivelul AT1 i este folosit n
tratamentul hipertensiunii arteriale, n insuficiena cardiac congestiv, n post infarct

15

miocardic. n urma blocarii angiotensinei, valsartanul dilat vasele de snge i reduce

tensiunea arterial.
Metode precum HPLC, Cromatografie lichid-Spectometrie de mas (LC-MS), precipitarea
proteinelor, electoforez capilar i metode spectrofotometrice n UV sunt utilizate pentru
evaluarea individual a valsartanului sau mpreuna cu alte substane. Totui, sunt nregistrate
puine metode de determinare a individualitii valsartanului.
Scopul acestui studiu a fost cercetarea i validarea unei metode HPLC rapid, stabil i
economic pentru evaluarea comprimatelor de valsartan.
Materiale si Metode:
Substane i reactivi
Valsartanul a fost procurat din Cadila Healthcare Ltd, Ahmedabad, India. Comprimatele de
valsartan, ce contin 320 mg de substane, au fost procurate de Zydus Cadila Ltd, Ahmedabad,
India. Solventul pentru HPLC folosit au fost E-Merck (India) Ltd, Mumbai. Apa pentru
HPLC a fost preparat utiliznd Millipore System( Millipore, Molesheim France, Model
Elix-10).

Figura 1. Structura valsartanului

Condiiile cromatografice
Pentru HPLC, faza mobil compus din apa: acetonitril: acid acetic glacial (500:500:01) a
fost filtrat si degazat. Volumul injectat a fost de 20 l cu un debit de 1 ml/min. Detec ia a
fost la 273 nm la o temperatura a coloanei de 250C i un timp de lucru de 10 minute.
Metoda de dozare:
Prepararea standardului
O soluie stoc de valsartan a fost preparat din 100 mg de substan i adugat intr-un balon
cotat de 100 ml, unde substana a fost dizolvat in 50 ml solvent apa: acetonitril (50:50) i
16

sonicat pentru a se dizolva. Balonul cotat se aduce la semn cu solvent. Se prelev din aceast
soluie 5 ml i se dilueaz pana la 50 ml cu solvent pentru a ob ine solu ia de etalon final de
100 g/ml valsartan.
Prepararea probei
Se cntaresc 20 de comprimate i se calculeaza masa medie a comprimatelor. Acestea se
mrunesc pn se obine o pulbere fin. Se aduce o cantitate de pudr echivalent cu 100 mg
de valsartan ntr-un balon cotat de 100 ml. Se adaug 50 ml de solvent, se aplic timp de 30
de minute ultrasonarea i din cnd n cnd se agit pn la dizolvare. Balonul cotat se aduce
semn cu solvent i se amestec. Soluia se filtreaz printr-un filtru cu porii de 0,45 m, se
colecteaz filtratul dup ce se elimin primii ml. 5ml din aceast solu ie se dilueaz la 50 ml
cu solvent pentru a obtine o solutie standard de 100 g/ml.

Determinarea valsartanului
Etalonul i proba de valsartan se injecteaz. Determinarea valsartanului se efectueaz
conform condiiilor cromatografice. Cantitatea de valsartan prezent n prob a fost calculat
din curba de liniaritate.
Validarea metodei
Metoda a fost validat pentru parametrii precum sistemul de acceptabilitate, specificitate,
liniaritate, limita de detecie (LOD), limita de cuantificare (LOQ), acuratee, precizie,
rigurozitate i robustee.
Sistemul de accesibilitate
Sistemul de accesibilitate al metodei a fost evaluat analiznd repetat simetria picurilor,
talerele teoretice ale coloanei, aria picurilor i timpul de retenie.
Variaie i liniaritate
Pentru a evalua liniaritatea, o serie de diluii din analit au fost preparate din soluia stoc lund
un volum adecvat i apoi diluat pn la 50 ml pentru a obine concentraiile dorite (40, 80,
100, 120 i 140 g/ml) pentru liniaritatea cuprins ntre 40 i 140 g/ml. Solu iile preparate
au fost filtrate prin membrane cu porii de 0.45 m i fiecare dilu ie a fost injectat de 5 ori n
coloan. Absorbana la 273nm a fost setat i curba de calibrare pentru valsartan a fost
17

constituit prin reprezentarea grafic a ariei picului principal (axa ordonatei) n funcie de
concentraie (axa abscisei).

Precizia
Precizia metodei ( Repetabilitate)
Precizia metodei a fost evaluat prin repetare i rigurozitate.
Precizia metodei pentru dozare a fost stabilit prin determinarea a 6 probe preparate n
aceleai condiii. 6 soluii de probe replicate de valsartan au fost preparate, la aceeai
concentaie ca i a probei, de acelai analist i analizate n aceeai zi.
Precizie intermediar ( Rigurozitate)
Un analist diferit a utilizat un sistem diferit, repetnd procedura anterioar pentru precizia
metodei, ntr-o alt zi utiliznd acelai lot de probe.
Acuratee
Acurateea a fost determint prin variaia concentraei probei ntre 50% si 150%. Valoarea
calculat de valsartan din soluia standard stoc a fost adaugat n probe placebo pentru a
atinge 50%, 100% si 150% din concentaia probei. Fiecare prob a fost triplicat la fiecare
etapa. Martorul si probele standard au fost injectate i cromatogramele au fost nregistrate.
Specificitate
Specificitatea este o procedur pentru a determina cantitativ analitul n prezena unui
componet ce poate fi prezent n matricea probei. Excipienii comuni folosii n prepararea
comprimatelor sunt adulterai ntr-o cantitate precntarit de medicament, absorbana se
msoar i se fac calcule pentru a determina cantitatea de medicament.
Robustee
Metoda s-a dovedit a fi robust, mici, dar deliberate modificri la parametrii metodei nu au
avut un efect defavorabil n performana metodei. Modificri n debitul fazei mobile la 0.9
ml/min i 1.1 ml/min (10%) sau temperatura coloanei ( 5 0C absolut) la 250C si 350C sau
raportul fazei organice din faza mobil (2% absolut) precum ap:acetonitril (49:51),
ap:acetonitril (51:49) i observarea efectului asupra sistemului de acceptabilitate.

18

Stabilitatea soluiei standard i a probei

Preparare etalonului i a probei au fost realizate conform procedurii de testare i dozarea
soluiei standard i a probei conform metodei. Etalonul i proba au fost lsate 24 de ore la
temperatura camerei. Dozarea etalonului i a probei a fost realizat la ore diferite pn n 24
de ore, utiliznd etalon proaspt preparat.
Limita de detecie i cuantificare
Limitele de detecie i cuantificare au fost calculate conform metodei propuse care se bazeaz
pe deviaia standard () a rspunsului i panta curbei de calibrare(S), aproximnd limita de
detecie (LOD) i limita de cuantificare(LOQ), LOS = 3.3 (/S) i LOQ = 10 (/S).
Nr. crt.
Parametrii
Valsartan
1.
Aria picurilor
1425053
2.
Talere teoretice
4882.90
3.
Timp de retenie (min)
4.63
4.
Asimetrie
1.11
5.
Deviaia standard relativ %
0.05
Tabel 1. Datele obinute din testarea sistemului de accesibilitate pentru Valsartan
Nivel
ml
Diluie
Ppm
25%
2
200
5
50%
2
100
10
100%
2
50
20
125%
1
20
25
150%
3
50
30
Tabel 2. Date obinute din testarea liniaritii Valsartanului
Lot
1
2
3
4
5
6

Lot

A (mg)

Interpretarea
Mg/cpr.
Dozare %
rezultatelor
360.30
1446042
320.47
100.1
360.00
1442130
319.87
100.0
360.00
1465730
325.11
101.6
360.00
1500679
332.86
104.0
360.10
1476739
327.46
102.3
360.30
1466463
325.00
101.6
Tabel 3 Date obinute la testarea preciziei a Valsartanului
A(mg)

Interpretarea
rezultatelor

Mg/cpr.

Dozare

Absorbana
0.159
0.313
0.620
0.803
0.921
Medie
dozare

RSD %

101.6

1.5

Medie
dozare

RDS %

19

1
2
3
4
5
6

Nivele

50%
50%
50%
100%
100%
100%
150%
150%
150%
Loturi

1
2
3
4
5
Medie
SD
RSD%

360.30
1431913
320.89
100.3
360.30
1469703
329.35
102.9
360.20
1427392
319.96
100.0
360.10
1426762
319.91
100.0
360.10
1426638
319.88
100.0
360.00
1426750
319.99
100.0
Tabel 4. Date obinute la testarea rigurozitii a Valsartanului
Loturi

Aria

Mg
adaugate

Mg adaugate
(exact)

Mg
recuperate

%
recuperare

1
716155
50.20
50.13
50.29
100.3
2
715299
50.10
50.03
50.23
100.4
3
712169
50.20
50.13
50.01
99.8
1
1414634 100.40
100.26
99.34
99.1
2
1415360 100.30
100.16
99.39
99.2
3
1417169 100.40
100.26
99.52
99.3
1
2110922 150.10
149.89
148.24
98.9
2
2116916 150.20
149.99
148.66
99.1
3
2114882 150.10
149.89
148.52
99.1
Tabel 5. Date obinute la testarea acurateii metodei a Valsartanului
Sistem de
acceptabilitat
e
1426885
1426049
1426644
1426469
1427763

100.5

Debit
+10%

Debit
-10%

1424865
1425047
1425401
1424931
1425196

1423492
1423425
1423424
1423649
1424120

1588196
1589272
1588967
1588620
1589590

1293693
1293934
1294665
1295069
1294528

RSD
%

100.2

0.3

99.2

0.1

99.0

0.1

Raport
solvent
org. +2%
1416310
1416215
1416655
1416546
1416457

1426762
1425088 1423624
1588929
1294377 1414332
637.43
215.46
291.46
545.16
558.73
245.97
0.04
0.02
0.02
0.03
0.04
0.02
Tabel 6. Date obinute la testarea robusteii metodei a Valsartanului

1416436
176.93
0.01

LOD
(g/ml)

Temp.
-50c

Medie
%
recuperare

Raport
solvent
org. -2%
1413993
1414270
1414549
1414255
1414597

Component

Temp.
+50c

1.2

LOQ(g/ml)
n=(5)

Liniaritate
(g/ml)

Coeficient
Deviaia
Panta de
de
standard() regresie(S)
2
corelaie(r )
Valsartan
2.72
8.25
40-140
0.9999
11951.55
14490.14
Tabel 7. Caracteristici ale metodei analitice derivate din curba de calibrare etalon

20

Figura 2. Cromatograma etalonului de valsartan

Figura 3. Cromatograma soluiei test de valsartan

21

Figura 4. Curba de calibrare liniar a valsartanului

Rezultate i discuii
Dezvoltarea metodei
Scopul acestui studiu este Acela de a dezvolta o metod HPLC simpl i precis pentru
analiza valsartanului n mas i n comprimate utiliznd faz mobil i coloan Thermohypersil ODS cu detector UV la 273 nm. Cromatograma valsartanului este prezentat n
figura 2 i figura 3. Timpul optim de retenie a fost de 4,6 minute.
Validarea metodei
Metoda descris a fost validat pentru testarea medicamentelor n mas sau n comprimate.
Parametrii pentru care a fost validat aceast metod sunt urmtorii: gradul de potrivire din
punct de vedere al sistemului, specificitate, linearitate, limita de detec ie (LOD) , limita de
cuantificare (LOQ), acuratete, precizie, rigurozitate i robustee.
Testarea sistemului de acceptabilitate
Gradul de potrivire al sistemului trebuie realizat i calculat la nceputul studiului fiecrui
parametru de validare. Rezultatele obinute pe parcursul studiul sunt prezentate n tabelul 1.
Testul de potrivire al sistemului reprezint o parte integral din metodele cromatografice iar
reproductibilitatea sistemului este adecvat pentru realizarea analizei.

22

Liniaritate
Variabilitatea metodei analitice este dat de intervalul dintre concentraia inferioar i cea
superioar a probei, unde metoda a avut rezultate acceptabile pentru acuratee, precizie i
liniaritate. Studiul liniaritii a fost realizat prin prepararea unor solu ii standard de diferite
concentraii. Liniaritatea unei metode analitice reprezint capacitatea acestei metode de a
obine rezultate care sunt direct proporionale cu concentraia analitului in probe. Liniaritatea
metodei a fost observat n variabilitatea concentraiei demonstrnd astfel gradul de potrivire
al sistemului pentru analiz. Curba de calibrare a fost efectuat i a artat c a fost liniar
ntre concentraiile 40-140 g/mL (Figura 4). Rezultatele liniaritii sunt prezentate n tabelul
2.

Precizia
Precizia este o masur a abilitii metodei de a genera rezultate reproductibile. Precizia
metodei a fost evaluate utiliznd repetabilitate i rigurozitate. Repetabilitatea se refer la
utilizarea unei proceduri analitice ntr-un laborator pentru o scurt perioad de timp folosind
acelai analit i acelai echipament fiind exprimat ca % RSD( deviatia standard relativ).
Rezultatele sunt prezentate n tabelul 3. Deviatia standard relativ pentru precizia metodei
este 1,5. Rigurozitatea unei metode analitice este reprezentat de gradul de reproductibilitate
a unor rezultate obinute din aceleai probe n urma unor condiii : laboratoare diferite,
analiti diferii, instrumente diferite, loturi diferite de reactivi i zile diferite. Rezultatele
testului au artat c metoda prezint o precizie nalt (tabelul 4). Rezultatele deviaiei standard
relativ(1,2%) au demonstrat rigurozitatea metodei.
Acurateea
Acurateea unei metode analitice reprezint apropierea dintre valorile reale acceptate sau
valorile de referin i rezultatele actuale obinute. Studiile de acuratee sunt evaluate
determinnd recuperarea unei probe adulterate de analit din matricea probei ce urmeaz a fi
analizat.Rezultatele testului de acuratee sunt prezentate n tabelul 5. Rezultatele recuperrii
i coeficientului de variaie ( %RSD) indic acestei metode o acuratee nalt.

23

Specificitate
Specificitatea este abilitatea metodei de a diferenia analitul de celelalte componente din
prob. Metoda a demonstrat o separare bun a peak-urilor care nu au interferat. Pentru a
demonstra specificitatea metodei n formularea medicamentelor, acestea au fost adulterate iar
excipienii utilizai n diferite formulri nu au interferat cu peak-urile probelor, de aceea
aceast metod este una specific pentru valsartan.
Robustee
Robusteea fost studiat prin mici modificri deliberate alea condiiilor cromatografiei.
Rezultatele studiului de robustee sunt prezentate n tabelul 6 i indic faptul c metoda a fost
sufficient de robust nct factorii selectai au rmai neafectai de micile modificri ai
acestor parametri.
Studii de stabilitate
Stabilitatea reactivilor, fazei mobile, soluiilor standard i probelor au fost studiate timp de 48
de
ore i comparate cu soluii proaspt pregtite. n urma acestor teste, a reieit faptul ca acestea
au
fost stabile.
Limita deteciei i de cuantificare
Limita de detecie (LOD) este reprezentat de cantitatea minim de analit dintr-o prob care
poate fi detectat . LOD exprim concentraia care prezint un semnal la zgomotul de fond de
2:1 sau 3:1.
Limita de cuantificare ( LOQ) reprezint cantitatea minim de analit dintr-o prob care poate
fi determinat cu o anumit precizie i acuratee respectnd condiiile impuse. LOQ exprim
concentraia care prezint semnal la zgomotul de fond de 10:1.
LOD i LOQ au fost calculate cu ajutorul ecuaiei dat de ghidurile ICH.
LOD = 3,3 / S
LOQ = 10 / S
24

unde = deviaia standard a rspunsului;

S = panta curbei de calibrare ( poate fi estimat din curba de calibrare a analitului).
Limita deteciei i a cuantificrii metodei propuse la 273 nm au fost 2,72 g/mL, respectiv
8,25 g/mL prezentate n tabelul 7.
Metoda HPLC propus a fost evaluat conform ghidurilor ICH, parametri ca liniaritate,
precizie, acuratee, LOD, LOQ, specificitate i robustee i a demonstrat c este o metod
potrivit pentru controlul calitii comprimatelor de valsartan.
Metoda RP-HPLC propus permite determinarea valsartanului datorit bunei separri ale
picurilor cromatografice.
Metoda poate fi utilizat cu succes n analiza comprimatelor de valsartan.

25

Rezultate i concluzii
Valsartanul este un antihipertensiv ce acineaz antagonist pe receptorii angiotensinei
II, acioneaz la nivelul receptorilor AT1 (situai mai ales n vase i miocard) i este folosit n
tratamentul hipertensiunii arteriale, n insuficiena cardiac congestiv, n post infarct
miocardic. n urma blocarii angiotensinei, valsartanul dilat vasele de snge i reduce
tensiunea arterial.
n cercetare, dozarea valsartanului se poate realiza prin cromatografie.
Conform monografiei de comprimate cu valsartan din USP 38, acesta se dozeaz prin
cromatografia lichid, aceasta fiind o determinare semicantitativ, n urma creia se
calculeaz procentul din cantitatea declarat pe eticheta de valsartan n poriunea de
comprimate luate n lucru (20 de comprimate). Calcului acestei dozarii se face n func ie de
valoarea picurilor obinute n urma analizei soluiei etalon i a probei prin intermediul
cromatografiei lichide.
n articolul prezentat anterior, este descris dozarea comprimatelor de valsartan prin
RF-HPLC ( Cromatografie lichid de nalt performan n faz invers), o metoda de dozare
mult mai precis, sensibil n comparaie cu cromatografia lichid utilizat n monografia de
comprimate cu valsartan din USP 38, care se bazeaz, la fel ca i cromatografia lichid, pe
determinarea picurilor cromatografice. n urma acestei dozrii, are loc o analiz mult mai
ampl i complet, observndu-se i n numrul mare de parametrii determinai, precum
precizia, acurateea, liniaritatea, sensibilitatea, testarea sistemul de acceptabilitate, robuste ea,
rigurozitatea, limita de detecie i limita de cuantificare.
n concluzie, metoda de dozare RF-HPLC este folosit cu succes n determinarea
comprimatelor de valsartan datorit unei separri bune a picurilor cromatografice n
comparaie cu cromatografia lichid utilizat n dozarea comprimatelor de valsartan din
monografia descris n USP 38, unde separarea picurilor cromatografice nu este att de
precis i exact.

26

BIBLIOGRAFIE

1.
2.
3.
4.

Farmacopeea European 5, Monografia de comprimate, pag. 626-627

Farmacopeea European 8, Valsartan, pag. 3524-3525
Farmacopeea American 38, Monografii oficiale, Valsartan, pag. 5742-5743
Sailor G.U, Sheth N. R, Vinzuda D.U. , Jurnalul Internaional al cercetrilor
ChemTech, nr.2, vol. 2, iulie-septembrie 2010, pag 1461-1467.

Anexa:

http://sphinxsai.com/july-sept_2010_vol2.3/chemtech/chemtechvol2.3july-

sept210/CT=16%20(1461-1467).pdf

27