Scribd Logo
Încărcați

Bine ați venit la Scribd!

  • 320 vizualizări

    Elisa

    Încărcat de

    Madalin George Danila

    Drepturi de autor:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)
    Descărcați ca PPT, PDF, TXT sau citiți online pe Scribd

    Elisa

    Încărcat de

    Madalin George Danila
    320 vizualizări24 pagini

    Drepturi de autor

    © Attribution Non-Commercial (BY-NC)

    Formate disponibile

    PPT, PDF, TXT sau citiți online pe Scribd

    Vi se pare util acest document?

    Este necorespunzător acest conținut?

    Drepturi de autor:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)
    Descărcați ca PPT, PDF, TXT sau citiți online pe Scribd
    Descărcați ca ppt, pdf sau txt
    320 vizualizări24 pagini

    Elisa

    Încărcat de

    Madalin George Danila

    Drepturi de autor:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)
    Descărcați ca PPT, PDF, TXT sau citiți online pe Scribd
    Descărcați ca ppt, pdf sau txt
    din 24

    TEHNICA IMUNOENZIMATICA

    CE ESTE TEHNICA IMUNOENZIMATICA?

    ELISA=Enzyme-linked Immunosorbent Assay Metoda de detectare a unor molecule (proteine, carbohidrati, etc.) cu ajutorul complexelor antigen-anticorp conjugate cu o enzima Foarte sensibila (pg/ml) Cantitativa sau calitativa Utilizeaza anticorpi monoclonali si enzime

    PRODUCEREA ANTICORPILOR MONOCLONALI


    Antigen Fuzionarea celulelor HIBRIDOM

    Mielom

    Plasmocite producatoare de Ac

    Testarea clonelor

    Cultivarea hibridoamelor

    Hibridoamele se separa si se cultiva Mentinerea hibridoamelor in soareci

    Clonele dorite se cultiva sau se congeleaza

    Anticorpii monoclonali sunt purificati

    ENZIMELE

    Enzime=catalizatori biochimici, compusi care maresc viteza reactiilor chimice ce se desfasoara in sistemele biologice, fara sa se consume in cursul lor Intensitatea reactiei ~ cantitatea de enzima Enzime utilizate:

    Peroxidaza Fosfataza alcalina Glucozoxidaza G6PH

    ENZIMELE

    Substraturi: substante cromogene, care formeaza produsi de reactie colorati (cromofore) Enzima + substrat cromofor citire la spectrofotometru

    PROBE BIOLOGICE

    Ser Plasma Urina Scaun Lichid sinovial LCR Lichid de lavaj bronsic

    PLACA PENTRU ELISA


    96 godeuri Plastic pe care adera usor proteinele

    TIPURI DE ELISA

    ELISA necompetitiva sandwich


    ELISA competititiva ELISA indirecta (dozarea Ac)

    ELISA SANDWICH

    Ag trebuie sa prezinte 2 epitopi (identici sau diferiti) Ac primar (Ac1):


    Imobilizat in faza solida in godeurile placii Nemarcat enzimatic Marcat enzimatic

    Ac secundar (Ac2):

    ELISA SANDWICH
    1. Se pipeteaza proba (cu Ag) in godeurile cu Ac1 fixat 2. Se incubeaza complexe Ag-Ac1 3. Se spala excesul de Ag (Ag liber) 4. Se pipeteaza Ac2 (marcat enzimatic) 5. Se incubeaza complexe Ac1-Ag-Ac2 6. Se spala excesul de Ac2 (Ac2 liber) 7. Se adauga substratul colorarea mediului de reactie ~ cantitatea de Ag din proba 8. Se citeste la spectrofotometru

    ELISA SANDWICH

    ELISA COMPETITIVA

    Ac primar (Ac1):

    Specific pentru Ag de determinat Nemarcat enzimatic

    Ac secundar (Ac2):

    Specific pentru Fc al Ac1 Marcat enzimatic

    ELISA COMPETITIVA
    1. Se amesteca proba (cu Ag) cu o cantitate cunoscuta de Ac1, in solutie 2. Se pipeteaza amestecul in godeurile cu Ag fixat 3. 2 situatii:

    Exces de Ag Exces de Ac1

    ELISA COMPETITIVA

    Exces de Ag:

    Solutie (cu Ag) + Ac1 Ag-Ac1 + Ag libere Se pipeteaza amestecul in godeuri (cu Ag fixat) nu se formeaza complexe Ag-Ac1 fixe Se spala Ag-Ac1 libere si Ag libere Se pipeteaza Ac2 in godeuri nu se formeaza complexe Ag-Ac1 - Ac2 fixe Se spala Ac2 liber (tot Ac2, de fapt) Se adauga substratul nu apare nicio reactie incolor

    ELISA COMPETITIVA

    Exces de Ac1 :

    Solutie (cu Ag) + Ac1 Ag-Ac1 + Ac1 liberi Se pipeteaza amestecul in godeuri (cu Ag fixat) complexe Ag-Ac1 fixe Se spala Ag-Ac1 libere Se pipeteaza Ac2 in godeuri complexe AgAc1-Ac2 fixe Se spala Ac2 liber Se adauga substratul colorarea mediului de reactie i.p. cantitatea de Ag din proba Se citeste la spectrofotometru

    ELISA COMPETITIVA

    ELISA INDIRECTA

    Dozarea Ac Ag fixat in godeuri, specific Ac de determinat Ac primar (Ac1):


    =Ac de determinat Nemarcat enzimatic

    Ac secundar (Ac2):

    Specific pentru Fc al Ac1 Marcat enzimatic

    ELISA INDIRECTA

    Se pipeteaza proba (cu Ac1) in godeurile cu Ag fixat Se incubeaza complexe Ag-Ac1 fixe Se spala Ac1 liber Se pipeteaza Ac2 Se incubeaza complexe Ag-Ac1-Ac2 fixe Se spala Ac2 liber Se adauga substratul colorarea mediului de reactie ~ cantitatea de Ac1 din proba Se citeste la spectrofotometru

    ELISA INDIRECTA

    ELISA

    AVANTAJE

    Sensibila Reproductibila Cantitati mici de reactivi (ieftina) Determina si Ag, si Ac Automata (rapida) Noniradianta

    APLICATII

    Hormoni Markeri tumorali Droguri, medicamente Citokine Ag virale (HIV!), bacteriene, parazitare Ac (HIV!)

    TEST HIV

    TEST DE SARCINA

    S-ar putea să vă placă și