Infeccion Microbiana
Infeccion Microbiana
Infeccion Microbiana
has been learned from examining innate and adaptive immune responses to experimental
Listeria monocytogenes infection in mice. Murine listeriosis involves the complex interplay
between host and pathogen and has served as an attractive infection model for several key
reasons. Infection is very reproducible and bacterial loads in the host are easily enumerated.
At sublethal doses L. monocytogenes induces a strong immune response that leads to bacterial
clearance. At the molecular level, L. monocytogenes is genetically tractable allowing for
deletion of individual virulence factors or insertion of genes expressing different antigens. In
this review we will provide an update of recent findings in the field of infection and immunity
in which L. monocytogenes has served as a model pathogen.
Although other animals, such as guinea pigs, are sometimes used to study the immune
response to L. monocytogenes, mice have proven to be the most useful model for
immunological studies due to availability of reagents, including knock-out mice deficient in
specific genes. Inbred strains of mice, such as C57BL/6 and BALB/c, allow for ease in the study
of epitope-specific T cell responses. In BALB/c mice there are several strong known L.
monocytogenes-MHC class I restricted epitope responses, including LLO91–99, and p60217–
225 [5,6]. In addition to CD8 T cell responses, there is a MHC class II restricted epitope,
LLO190–201, that generates a strong CD4 T cell response in C57BL/6 mice [7]. These
endogenous epitopes have been useful, but studies were limited due to the absence of a
strong known CD8 T cell epitope in C57BL/ 6 mice. This situation has been remedied by the
construction of recombinant L. monocytogenes expressing foreign H2-Kb epitopes, such as
those derived from the model antigen ovalbumin (OVA) or from lymphocytic choriomenigitis
virus (LCMV) [8,9]. These L. monocytogenes engineered to express model antigens take
advantage of immunological reagents such as TCR transgenic mice, tetramers for detecting
antigen-specific T cells, and other bacterial or viral pathogens sharing these antigens for
heterologous infections.
2. Innate immune responses Innate immune responses are essential for early control of L.
monocytogenes infection. Upon infection in the murine spleen, L. monocytogenes first
localizes within macrophages in the marginal zone between the T cell rich white pulp and the B
cell rich red pulp [2]. These infected cells then migrate into the white pulp region and form the
beginning of a focus of infection that expands as neighboring cells become infected by the
intercellular spread of bacteria. The innate immune response plays an important role in
controlling bacterial growth and dissemination, preventing the spread into systemic, lethal
infection.
2.1 Phagocytes Neutrophils are important for the initial control of bacterial growth through
their antimicrobial activities [10,11]. Neutrophils can kill bacteria through engulfment of the
bacteria followed by generation of reactive nitrogen and oxygen intermediates [12] and can kill
extracellular bacteria through release of extracellular traps (called NETs) consisting of granule-
derived proteins and chromatin that ensnare and kill bacteria [13]. Neutrophils are rapidly
recruited into infectious foci by the cytokine IL-6 and other factors [14] and they in turn
secrete chemokines such as CSF-1 and MCP-1, that signal to macrophages to traffic to the site
of infection [15].
Macrophages have been the focus of innate immunity during L. monocytogenes infection since
replication occurs primarily within them and they are also an essential cell subset in mediating
clearance of bacteria. Resident macrophages, especially Kupffer cells in the liver, are
responsible for the initial killing of the majority of the injected bacteria. In response to
infection, macrophages secrete TNFα and IL-12 [16–18]. These two cytokines drive natural
killer (NK) cells to produce IFNγ, which in turn leads to activation of the macrophages and
increases their bactericidal activity. As with neutrophils, generation of reactive oxygen and
nitrogen intermediates is important for macrophage-mediated killing of L. monocytogenes.
Mice deficient in phagocyte oxidase have slightly greater bacterial burden than wild-type
controls, and mice deficient in nitric oxide synthase have even greater bacterial burdens
[19,20]. Other interferon-inducible genes, such as the p47 GTPases, are also involved in
macrophage killing of bacteria through yet to be determined mechanisms [21].
2.2 Inflammatory cytokines IFNγ may be the most important cytokine for controlling a primary
L. monocytogenes infection. NK cells and γδ T cells are important early sources of IFNγ [17,22].
Mice deficient in IFNγ are highly susceptible to L. monocytogenes infection [23]. However, IFNγ
plays a less important role for protective immunity against re-infection. If IFNγ deficient mice
are immunized with an attenuated strain of L. monocytogenes, and then challenged with
virulent L. monocytogenes, these mice are protected against the challenge infection [24].
In addition to its well-described induction of IFNγ, L. monocytogenes has been long known to
also induce type I interferons [25,26]. Interferon-α and -β, which are usually associated with
anti-viral immune responses, are potent stimulators of anti-viral genes, including pro-apoptotic
and antigen presentation genes, as well as down-regulating the cell machinery that viruses
hijack in order to produce new viruses [27]. Induction of type I interferons is essential for the
immune system to clear many viral pathogens. On the contrary, induction of type I interferons
by L. monocytogenes is beneficial to the bacteria. In the absence of type I interferon signaling,
L. monocytogenes cannot reach as high titers in mice and mice with elevated levels of type I
interferons have greater bacterial loads [28–30]. This suggests that L. monocytogenes induces
type I interferon to its benefit to either directly enhance its growth, or more likely,
downmodulate a part of the immune response that plays an important role in controlling
bacterial growth. A recent study by Carrero et al. shows that type I interferons induce T cell
apoptosis early during L. monocytogenes infection, resulting in greater IL-10 secretion by
phagocytic cells in turn dampening the innate immune response [31].
2.3 Toll-like receptor recognition Many different bacterial-, viral- and protozoan-derived
ligands, as well as synthetic ligands, have been identified for the eleven Toll-like receptors
(TLRs) expressed by mice. TLRs are expressed by many different immune cell subsets, including
macrophages. TLR recognition of pathogen-derived products leads to activation of these cells,
resulting in upregulation of expression of different inflammatory cytokines. As a Gram-positive
bacterium, L. monocytogenes does not express the prototypical TLR ligand lipopolysaccharide
(LPS). However, it does express a myriad of other TLR ligands, including peptidogylcan,
flagellin, and bacterial DNA which can activate macrophages. Studies of TLR-deficient
macrophages have revealed roles for these pattern recognition receptors in L. monocytogenes
infection. The most important TLR for L. monocytogenes recognition appears to be TLR2. TLR2-
deficient macrophages after in vitro infection with L. monocytogenes secrete less TNFα, IFNγ,
IL-1β and IL-12 [39–41]. However, mice deficient in TLR2 have little increase in bacterial burden
compared to wild-type mice [40]. It remains to be determined if mice deficient in other TLRs
that recognize bacterial products, such as TLR9 (recognizes CpG motifs found in bacterial DNA)
and TLR5 (flagellin), will also be able to control L. monocytogenes infection [42]. Since infection
involves many different TLR ligands, a deficiency in recognition of one bacterialderived ligand
appears negligible to the overall immune response. However, TLRs clearly play an important
role in immune recognition of L. monocytogenes and initiation of a protective response.
Binding of the TLR ligand to its appropriate receptor initiates a signaling cascade that results in
activation of the transcription factor NF-κB resulting in expression of different cytokine and
antigen presentation related genes. Mice deficient in the key adaptor molecule, MyD88, which
is important for signaling from several TLRs, are highly susceptible to L. monocytogenes
infection [39,40].
What cellular surveillance system is recognizing cytosolic bacteria and what is initiating these
responses? This is an active area of investigation and in the past few years several key
molecules have been identified that are involved in this process. The NLR family of cytosolic
proteins contains about 20 members and includes both nucleotide-binding oligomerization
domain (NOD) proteins and NACHT-, LRR- and pyrin-domain-containing proteins (NALPs) [45].
Some of these proteins have been identified as intracellular recognition molecules that
operate independently of TLR signaling. Recognition of cytosolic microbial products initiates
signaling cascades distinct from TLR signaling, involving different signaling molecules and
results in distinct immune responses. The best studied NLR family members are NOD2 and
NALP3, due to their association with the inflammatory disorders Crohn’s disease and
MuckleWells syndrome, respectively.
Both NOD2 and NALP3 play a role in recognition of intracellular L. monocytogenes. The ligand
for NOD2 is muramyl dipeptide (MDP), a component of both Gram-negative and Grampositive
peptidogylcan [46]. In the absence of NOD2, mice are more susceptible to oral, but not
intravenous, L. monocytogenes infection [37]. NALP3, also known as cryopyrin, is one
component of an intracellular inflammatory complex that activates caspase-1, leading to
processing and secretion of mature IL-1β and IL-18, which are important for the activation of
innate and adaptive immune responses. When macrophages deficient in NALP3 are infected
with L. monocytogenes, they have reduced caspase-1 activation and release significantly less
IL-1β [38].
The specific ligand(s) for activation of the NALP3 pathway by L. monocytogenes remains
unknown. On the other hand, L. monocytogenes DNA in the host cell cytosol is a ligand for a
yet to be identified pattern recognition receptor that signals through interferon regulatory
factor (IRF) 3 [47]. IRF3 is an important transcription factor in the induction of IFNβ and is
downstream of several different cytosolic pattern recognition receptors, including retinoic acid
inducible gene I (RIG-I) and melanoma-differentiation-associated gene 5 (MDA5) [48].
However, recognition of L. monocytogenes DNA is independent of these two receptors since
their shared adaptor molecule, MAVS, is not essential for L. monocytogenes-induced IRF3
activation [35,36].
2.5 Autophagy Once intracellular bacteria are recognized by the cell, it can attempt to destroy
the pathogens. This can be accomplished by the process of autophagy [49]. First discovered as
a way for cells to recycle their own intracellular organelles and cytoplasmic contents, a double
membrane vacuole forms in the cytosol around the target. This vacuole can then be shuttled
into the lysosome pathway, where with maturation the contents are degraded. Intracellular
bacteria can also be sequestered in these vacuoles, leading to their destruction. This
phenomenon has been well described for intracellular pathogens including invasive group A
Streptococcus and Mycobacterium tuberculosis [50,51]. Many intracellular bacteria can be
found in autophagolysosomes and cells that are deficient in essential components of the
autophagolysosomal machinery are unable to destroy these bacteria. Intracellular L.
monocytogenes can be autophagocytosed, but this has only been observed when the
macrophages are first treated with chloramphenicol [52]. Possibly, autophagocytosis of L.
monocytogenes may be a rare event compared to other bacterial pathogens since its
intracellular motility and secretion of the pore-forming LLO may impede membrane formation
around the bacterium.
3.1 CD4 and CD8 T cell responses Although innate immune cells are important for initial
control of L. monocytogenes infection, T cells are needed for final clearance of bacteria. CD4
and CD8 T cells are important for conferring sterilizing immunity since SCID mice develop a
chronic infection [3,4]. While both CD4 and CD8 T cells contribute to protective immunity, in
vivo depletion and adoptive transfer studies have clearly demonstrated that memory CD8 T
cells are the most effective T cell subset capable of mediating protection [55,56].
Recognition of infection by the immune system is the first and most important step to
eliminating pathogens. For an intracellular bacterial pathogen such as L. monocytogenes,
recognition of infected cells is critical to controlling infection. L. monocytogenes antigen can be
presented in several ways depending on the type of cell infected. When L. mononcytogenes is
in the cytosol of almost any cell type, proteins it secretes are subject to degradation by the
host proteasome. These peptides are then transported to the endoplasmic reticulum, loaded
onto MHC class I molecules, and presented on the cell surface to CD8 T cells. Furthermore,
professional antigen presenting cells are able to present antigen from bacteria destroyed in
lysosomes via the MHC class II pathway to CD4 T cells. This antigen is comprised of bacterial
secreted, non-secreted and surface proteins. Antigens from the lysosome can also traffic to the
endoplasmic reticulum where they are presented by MHC class I molecules via a process called
cross-presentation [57–59]. In addition, uninfected professional antigen presenting cells are
also able to present bacterial antigen found in debris from dead cells to both CD4 and CD8 T
cells. Thus, presentation of L. monocytogenes antigens to T cells is dependent on the type of
cell infected as well as compartmentalization of the antigen.
The prevailing notion is that CD8 T cells mediate anti-listerial immunity through two synergistic
mechanisms: (1) lysing infected target cells via perforin and granzymes to expose intracellular
bacteria for killing by activated macrophages, and (2) secreting IFNγ to activate macrophages
[60]. Complete protective immunity requires infection with live L. monocytogenes capable of
escaping from the vacuole [61]. This is in part due to the generation of the CD8 T cell response
and a proper memory T cell population [62]. The role of CD4 T cells in controlling L.
monocytogenes infection is less well understood than that of CD8 T cells. Depletion of CD4 T
cells during primary L. monocytogenes infection results in diminished granuloma formation
[63]. L. monocytogenes induces a strong Th1 response and like CD8 T cells, L. monocytogenes-
specific CD4 T cells also secrete IFNγ which may aid macrophage activation [64].
Compared to naïve T cells, these memory T cells are greater in number, have a lower
stimulation threshold for activation and upon secondary infection can quickly exert effector
functions allowing rapid control of infection and elimination of the bacteria [69]. Memory T
cells swiftly mobilize to the site of infection, and secrete IFNγ leading to activation of
macrophages, and rapidly secrete molecules which are directly toxic to infected cells such as
perforin and granzyme. L. monocytogenes-specific memory T cells are very specific for the
elimination of only bacteria that they can recognize and there is little bystander killing of
nonrecognizable bacteria [70]. Memory T cell killing is also limited to the ability of the T cells to
recognize all infected cells—if some infected cell subsets cannot present the recognized
antigen, then memory T cells are not be able to adequately control infection [71,72]. In fact,
perforin is perhaps the most important effector protein to provide protective immunity against
L. monocytogenes. Mice deficient in perforin are able to clear primary infection, albeit slightly
slower than wild-type mice, but have a severe defect in clearing a challenge infection after
immunization [73]. Interestingly, perforin-dependent killing is only important when L.
monocytogenes has its natural ability to spread intercellularly. Challenge infection of
immunized perforin-deficient mice with L. monocytogenes lacking the virulence factor needed
for motility (ActA) results in the same rate of clearance as in immunized wild-type mice [74].
Thus, memory T cells are essential for protection from re-infection with L. monocytogenes due
to their ability to quickly recognize and destroy infected cells. 3.2 Regulatory T cells Regulatory
T cells are a subset of T cells that have suppressive effects on the activities of other T cells by
secreting such immunosuppressive cytokines as TGF-β and IL-10, and thus are responsible for
limiting the extent of the immune response. Naturally occurring regulatory T cells are
characterized as CD4+CD25+ and express the transcription factor Foxp3, which is essential for
their function. Important for preventing autoimmunity, during infection regulatory T cells play
a role in down-regulating the T cell responses. No role has been shown for these cells during
primary L. monocytogenes infection, but during a rechallenge response CD4+CD25+ cells are
important for limiting the expansion of memory CD8 T cells [75].
3.3 Non-classical MHC T cell responses Besides classical MHCIa antigen presentation, L.
monocytogenes antigens can be presented by non-classical MHCIb molecules. These molecules
have similar structure to MHCIa molecules and also associate with β2-microglobulin, however
MHCIb molecules lack the polymorphicity of MHCIa molecules. In murine L. monocytogenes
infection, the best studied MHCIb molecule is H2-M3, which binds peptides that contain a
formylated amino terminal methionine residue. Since N-formylation of proteins is mainly
limited to bacteria (the bacterial evolutionary remnants of mitochondria and chloroplasts also
have this activity), the H2-M3 molecule specifically binds bacterial-derived peptides. Several L.
monocytogenes-derived peptides presented by H2-M3 have been identified and used for
studying MHCIb restricted responses.
H2-M3 restricted T cells respond differently than classical MHCIa restricted T cell responses
during L. monocytogenes infection. Firstly, the kinetics of T cell expansion and contraction are
faster for H2-M3 restricted cells. The number of H2-M3 L. monocytogenes-specific cells peaks
five to six days post-infection, compared to MHCIa-restricted cells which peak seven to nine
days post-infection. Contraction of H2-M3 restricted T cells does result in generation of a pool
of memory cells, but they only have some of the hallmarks of traditional memory cells. When
rechallenged with a second L. monocytogenes infection, although these cells rapidly
upregulate surface expression of activation markers, these cells do not proliferate [76,77]. This
suppression of proliferation is mediated by the expansion of the MHCIa response in turn
limiting available DCs for antigen presentation [78]. Not surprisingly, without expansion of H2-
M3-restricted cells these cells cannot provide protection to secondary L. monocytogenes
infection. However, these cells do play a role in control of primary infection since H2-M3
knockout mice have a defect in bacterial clearance suggesting that early expansion and IFNγ
production by these cells cannot be compensated by other cell subsets [79].
3.4 B cell responses Since the 1960s when Mackaness showed that transfer of cells from L.
monocytogenesimmunized mice, but not serum, provided protection against L.
monocytogenes infection of naïve mice, it has been known that antibodies do not have a major
role in L. monocytogenes infection. Since the majority of the bacteria remain intracellular
during infection and spread intercellularly without encountering the extracellular milieu, L.
monocytogenes-specific antibodies would be of limited to no use in controlling bacterial
spread. However, under certain experimental conditions antibodies can affect the course of
infection. Although infection itself does not generate high titers of antibodies, a monoclonal
antibody against the pore-forming virulence factor LLO can provide protection by acting
intracellularly to neutralize LLO and block bacterial escape from the phagosome [80]. Also,
using B cell-deficient mice, natural antibodies in naive animals may play a role in reducing early
dissemination of L. monocytogenes into vital organs [81]. By trapping bacteria and their
antigens in secondary lymphoid organs where specific immune responses are initiated, B cells
and antibodies can facilitate the generation of the protective T cell response. Lastly, B cells
have been shown to be important in the maintenance of memory CD8 T cells generated during
L. monocytogenes infection [82]. Thus, B cells and antibodies do play a minor, yet significant,
role during L. monocytogenes infection.
4. Conclusions Infection is a complex interplay between host and pathogen. The model of
murine listeriosis allows for careful dissection of both host and bacterial factors that are
important for infection and immunity. Infection outcome depends on the effectiveness of the
host immune response against a particular pathogen. In the case of L. monocytogenes, both
innate and adaptive immunity are critical for controlling infection of the intracellular
bacterium. Infection is first recognized by the innate immune system, leading to the rapid
production of anti-microbial factors, as well as chemokines and cytokines that aid in initiation
of the adaptive immune response. L. monocytogenes antigen presented by DCs drives strong
CD4 and CD8 T cell responses that result in a stable population of L. monocytogenes-specific
memory T cells. This has made L. monocytogenes infection a useful model for recent vaccine-
related studies in the generation, maintenance, and challenge responses of memory T cells. In
addition, as a cytosolic intracellular pathogen, L. monocytogenes is an ideal model for the
burgeoning field of intracellular recognition.
Even though L. monocytogenes has been used as a model pathogen for over forty years, the
recent studies highlighted in this review suggest there are still unidentified immunological
aspects of L. monocytogenes infection and immunity. Many of the immune system
mechanisms elucidated in murine listeriosis serve homologous functions in other hosts,
including humans. In the future, L. monocytogenes will continue to be a key pathogen in the
identification of new molecules in the regulation of the innate and adaptive immune
responses.
Aunque a veces se utilizan otros animales, como los conejillos de indias, para estudiar la
respuesta inmune a L. monocytogenes , los ratones han demostrado ser el modelo más útil
para los estudios inmunológicos debido a la disponibilidad de reactivos, incluidos los ratones
knock-out deficientes en genes específicos. Las cepas endogámicas de ratones, como C57BL / 6
y BALB / c, facilitan el estudio de las respuestas de células T específicas de epítopo. En ratones
BALB / c hay varias respuestas epítopos restringidas de clase I de L. monocytogenes- MHC
conocidas , incluidas LLO91-99 y p60217-225 [5 , 6 ]. Además de las respuestas de las células T
CD8, existe un epítopo restringido del MHC de clase II, LLO190-201, que genera una fuerte
respuesta de las células T CD4 en ratones C57BL / 6 [7]. Estos epítopos endógenos han sido
útiles, pero los estudios fueron limitados debido a la ausencia de un epítopo de células T CD8
conocido fuerte en ratones C57BL / 6. Esta situación se ha remediado mediante la construcción
de L. monocytogenes recombinantes que expresan epítopos extraños de H2-Kb, como los
derivados del antígeno modelo ovoalbúmina (OVA) o del virus de la coriomenigitis linfocítica
(LCMV) [8,9]. Estos L. monocytogenes diseñados para expresar antígenos modelo aprovechan
reactivos inmunológicos como ratones transgénicos TCR, tetrámeros para detectar células T
específicas de antígeno y otros patógenos bacterianos o virales que comparten estos antígenos
para infecciones heterólogas.
2. Respuestas inmunitarias innatas Las respuestas inmunitarias innatas son esenciales para el
control temprano de la infección por L. monocytogenes . Tras la infección en el bazo murino, L.
monocytogenes se localiza primero dentro de los macrófagos en la zona marginal entre la
pulpa blanca rica en células T y la pulpa roja rica en células B [2]. Estas células infectadas luego
migran a la región de la pulpa blanca y forman el comienzo de un foco de infección que se
expande a medida que las células vecinas se infectan por la propagación intercelular de
bacterias. La respuesta inmune innata juega un papel importante en el control del crecimiento
y la diseminación bacteriana, evitando la propagación a una infección letal sistémica.
2.1 Fagocitos Los neutrófilos son importantes para el control inicial del crecimiento bacteriano
a través de sus actividades antimicrobianas [10 , 11 ]. Los neutrófilos pueden matar bacterias a
través de la absorción de las bacterias seguida de la generación de intermediarios reactivos de
nitrógeno y oxígeno [12] y pueden matar bacterias extracelulares mediante la liberación de
trampas extracelulares (llamadas NET) que consisten en proteínas derivadas de gránulos y
cromatina que atrapan y matan bacterias [13 ]. Los neutrófilos son reclutados rápidamente en
focos infecciosos por la citocina IL-6 y otros factores [14] y, a su vez, secretan quimiocinas
como CSF-1 y MCP- 1, que señalan a los macrófagos para que se dirijan al sitio de infección
[15].
Los macrófagos han sido el foco de la inmunidad innata durante la infección por L.
monocytogenes ya que la replicación ocurre principalmente dentro de ellos y también son un
subconjunto de células esenciales en la mediación de la eliminación de bacterias. Los
macrófagos residentes, especialmente las células de Kupffer en el hígado, son responsables de
la muerte inicial de la mayoría de las bacterias inyectadas. En respuesta a la infección, los
macrófagos secretan TNF α e IL-12 [16-18]. Estas dos citocinas impulsan a las células asesinas
naturales (NK) a producir IFN γ , que a su vez conduce a la activación de los macrófagos y
aumenta su actividad bactericida. Al igual que con los neutrófilos, la generación de
intermediarios reactivos de oxígeno y nitrógeno es importante para la destrucción de L.
monocytogenes mediada por macrófagos . Los ratones deficientes en fagocitos oxidasa tienen
una carga bacteriana ligeramente mayor que los controles de tipo salvaje, y los ratones
deficientes en óxido nítrico sintasa tienen cargas bacterianas aún mayores [19 , 20 ]. Otros
genes inducibles por interferón, como las p47 GTPasas , también están implicados en la
muerte de bacterias por macrófagos a través de mecanismos aún por determinar [21].
2.2 Citocinas inflamatorias El IFN γ puede ser la citocina más importante para controlar una
infección primaria por L. monocytogenes . Las células NK y las células T γδ son importantes
fuentes tempranas de IFN γ [17 , 22 ]. Los ratones deficientes en IFN γ son muy susceptibles a
la infección por L. monocytogenes [23]. Sin embargo, el IFN γ juega un papel menos
importante para la inmunidad protectora contra la reinfección. Si los ratones deficientes en
IFN γ se inmunizan con una cepa atenuada de L. monocytogenes y luego se desafían con L.
monocytogenes virulenta , estos ratones están protegidos contra la infección de desafío [24].
Además de su bien descrita inducción de IFN γ , se sabe desde hace mucho tiempo que L.
monocytogenes también induce interferones de tipo I [25 , 26 ]. El interferón- α y- β , que
generalmente se asocian con respuestas inmunitarias antivirales, son potentes estimuladores
de genes antivirales, incluidos genes proapoptóticos y de presentación de antígenos, además
de regular negativamente la maquinaria celular que los virus secuestran con el fin de para
producir nuevos virus [27]. La inducción de interferones tipo I es esencial para que el sistema
inmunológico elimine muchos patógenos virales. Por el contrario, la inducción de interferones
de tipo I por L. monocytogenes es beneficiosa para las bacterias. En ausencia de la señalización
del interferón tipo I, L. monocytogenes no puede alcanzar títulos tan altos en ratones y los
ratones con niveles elevados de interferones tipo I tienen mayores cargas bacterianas [28-30].
Esto sugiere que L. monocytogenes induce el interferón de tipo I en su beneficio para mejorar
directamente su crecimiento o, más probablemente, modular a la baja una parte de la
respuesta inmune que juega un papel importante en el control del crecimiento bacteriano. Un
estudio reciente de Carrero et al. muestra que los interferones de tipo I inducen la apoptosis
de las células T temprano durante la infección por L. monocytogenes , lo que produce una
mayor secreción de IL-10 por parte de las células fagocíticas, lo que a su vez reduce la
respuesta inmune innata [31].
2.3 Reconocimiento del receptor tipo Toll Se han identificado muchos ligandos diferentes
derivados de bacterias, virus y protozoos, así como ligandos sintéticos, para los once
receptores tipo Toll (TLR) expresados por ratones. Los TLR son expresados por muchos
subconjuntos de células inmunes diferentes, incluidos los macrófagos. El reconocimiento de
TLR de productos derivados de patógenos conduce a la activación de estas células, lo que
resulta en una regulación positiva de la expresión de diferentes citocinas inflamatorias. Como
bacteria Gram-positiva, L. monocytogenes no expresa el lipopolisacárido del ligando TLR
prototípico (LPS). Sin embargo, expresa una miríada de otros ligandos de TLR, incluidos el
peptidogilcano , la flagelina y el ADN bacteriano que puede activar los macrófagos. Los
estudios de macrófagos deficientes en TLR han revelado la función de estos receptores de
reconocimiento de patrones en la infección por L. monocytogenes . El TLR más importante
para el reconocimiento de L. monocytogenes parece ser TLR2. Los macrófagos deficientes en
TLR2 después de una infección in vitro con L. monocytogenes secretan TNF α , IFN γ , IL-1 β e
IL-12 [39-41]. Sin embargo, los ratones deficientes en TLR2 tienen un pequeño aumento de la
carga bacteriana en comparación con los ratones de tipo salvaje [40]. Queda por determinar si
los ratones deficientes en otros TLR que reconocen productos bacterianos, como TLR9
(reconoce motivos CpG encontrados en el ADN bacteriano) y TLR5 ( flagelina ), también podrán
controlar la infección por L. monocytogenes [42]. Dado que la infección involucra muchos
ligandos TLR diferentes, una deficiencia en el reconocimiento de un ligando derivado de
bacterias parece insignificante para la respuesta inmune general. Sin embargo, los TLR juegan
claramente un papel importante en el reconocimiento inmunológico de L. monocytogenes y el
inicio de una respuesta protectora. La unión del ligando TLR a su receptor apropiado inicia una
cascada de señalización que da como resultado la activación del factor de transcripción NF- κ B
dando como resultado la expresión de diferentes genes relacionados con la presentación de
citocinas y antígenos. Los ratones deficientes en la molécula adaptadora clave, MyD88, que es
importante para la señalización de varios TLR, son muy susceptibles a la infección por L.
monocytogenes [39 , 40 ].
¿Qué sistema de vigilancia celular está reconociendo bacterias citosólicas y qué está iniciando
estas respuestas? Esta es un área de investigación activa y en los últimos años se han
identificado varias moléculas clave que están involucradas en este proceso. La familia NLR de
proteínas citosólicas contiene aproximadamente 20 miembros e incluye tanto proteínas de
dominio de oligomerización de unión a nucleótidos (NOD) como proteínas que contienen
dominios NACHT, LRR y pirina (NALP) [45]. Algunas de estas proteínas se han identificado
como moléculas de reconocimiento intracelular que operan independientemente de la
señalización de TLR. El reconocimiento de productos microbianos citosólicos inicia cascadas de
señalización distintas de la señalización de TLR, que involucran diferentes moléculas de
señalización y da como resultado distintas respuestas inmunes. Los miembros de la familia NLR
mejor estudiados son NOD2 y NALP3, debido a su asociación con los trastornos inflamatorios
enfermedad de Crohn y síndrome de MuckleWells , respectivamente.
Sigue sin conocerse el ligando o los ligandos específicos para la activación de la vía NALP3 por
L. monocytogenes . Por otro lado, el ADN de L. monocytogenes en el citosol de la célula
huésped es un ligando de un receptor de reconocimiento de patrones aún no identificado que
envía señales a través del factor regulador de interferón (IRF) 3 [47]. El IRF3 es un factor de
transcripción importante en la inducción de IFNβ y está aguas abajo de varios receptores
citosólicos de reconocimiento de patrones diferentes, incluido el gen I inducible por ácido
retinoico (RIG-I) y el gen 5 asociado a la diferenciación del melanoma (MDA5) [48]. Sin
embargo, el reconocimiento del ADN de L. monocytogenes es independiente de estos dos
receptores, ya que su molécula adaptadora compartida, MAVS, no es esencial para la
activación de IRF3 inducida por L. monocytogenes [35 , 36 ].
2.5 Autofagia Una vez que la célula reconoce las bacterias intracelulares, puede intentar
destruir los patógenos. Esto se puede lograr mediante el proceso de autofagia [49].
Descubierta por primera vez como una forma para que las células reciclen sus propios
orgánulos intracelulares y contenidos citoplasmáticos, se forma una vacuola de doble
membrana en el citosol alrededor del objetivo. Esta vacuola puede luego ser transportada a la
vía del lisosoma, donde con la maduración el contenido se degrada. Las bacterias
intracelulares también se pueden secuestrar en estas vacuolas, lo que lleva a su destrucción.
Este fenómeno ha sido bien descrito para patógenos intracelulares, incluidos los invasores
Streptococcus del grupo A y Mycobacterium tuberculosis [50 , 51 ]. Se pueden encontrar
muchas bacterias intracelulares en los autofagolisosomas y las células que son deficientes en
componentes esenciales de la maquinaria autofagolisosómica son incapaces de destruir estas
bacterias. L. monocytogenes intracelular puede autofagocitarse , pero esto sólo se ha
observado cuando los macrófagos se tratan por primera vez con cloranfenicol [52].
Posiblemente, la autofagocitosis de L. monocytogenes puede ser un evento raro en
comparación con otros patógenos bacterianos, ya que su motilidad intracelular y la secreción
del LLO formador de poros pueden impedir la formación de membranas alrededor de la
bacteria.
3.1 Respuestas de las células T CD4 y CD8 Aunque las células inmunitarias innatas son
importantes para el control inicial de la infección por L. monocytogenes , las células T son
necesarias para la eliminación final de las bacterias. Las células T CD4 y CD8 son importantes
para conferir inmunidad esterilizante ya que los ratones SCID desarrollan una infección crónica
[3 , 4 ]. Si bien tanto las células T CD4 como las CD8 contribuyen a la inmunidad protectora, los
estudios de depleción in vivo y transferencia adoptiva han demostrado claramente que las
células T CD8 de memoria son el subconjunto de células T más eficaz capaz de mediar la
protección [55 , 56 ].
La noción predominante es que las células T CD8 median la inmunidad antilisterial a través de
dos mecanismos sinérgicos: (1) lisar las células diana infectadas a través de perforina y
granzimas para exponer las bacterias intracelulares para su destrucción por los macrófagos
activados, y (2) secretar IFNγ para activar los macrófagos [60 ]. La inmunidad protectora
completa requiere la infección con L. monocytogenes vivos capaces de escapar de la vacuola
[61]. Esto se debe en parte a la generación de la respuesta de células T CD8 y una población de
células T de memoria adecuada [62]. El papel de las células T CD4 en el control de la infección
por L. monocytogenes se comprende menos que el de las células T CD8. El agotamiento de las
células T CD4 durante la infección primaria por L. monocytogenes da como resultado una
disminución de la formación de granulomas [63]. L. monocytogenes induce una fuerte
respuesta Th1 y, al igual que las células T CD8, las células T CD4 específicas de L.
monocytogenes también secretan IFNγ, que puede ayudar a la activación de los macrófagos
[64].
En comparación con las células T vírgenes, estas células T de memoria son más numerosas,
tienen un umbral de estimulación más bajo para la activación y, tras una infección secundaria,
pueden ejercer rápidamente funciones efectoras que permiten un control rápido de la
infección y la eliminación de las bacterias [69]. Las células T de memoria se movilizan
rápidamente al sitio de la infección y secretan IFNγ que conduce a la activación de los
macrófagos, y secretan rápidamente moléculas que son directamente tóxicas para las células
infectadas, como la perforina y la granzima . Las células T de memoria específicas de L.
monocytogenes son muy específicas para la eliminación de sólo las bacterias que pueden
reconocer y hay poca destrucción por parte de los espectadores de las bacterias no
reconocibles [70]. La muerte de las células T de memoria también se limita a la capacidad de
las células T para reconocer todas las células infectadas; si algunos subconjuntos de células
infectadas no pueden presentar el antígeno reconocido, las células T de memoria no pueden
controlar adecuadamente la infección [71,72]. De hecho, la perforina es quizás la proteína
efectora más importante para proporcionar inmunidad protectora contra L. monocytogenes .
Los ratones deficientes en perforina son capaces de eliminar la infección primaria, aunque un
poco más lento que los ratones de tipo salvaje, pero tienen un defecto severo en la eliminación
de una infección de provocación después de la inmunización [73]. Curiosamente, la muerte
dependiente de la perforina solo es importante cuando L. monocytogenes tiene su capacidad
natural para propagarse intercelularmente . La infección de provocación de ratones
inmunizados con deficiencia de perforina con L. monocytogenes que carece del factor de
virulencia necesario para la motilidad ( ActA ) da como resultado la misma tasa de eliminación
que en los ratones inmunizados de tipo salvaje [74]. Por tanto, las células T de memoria son
esenciales para la protección frente a la reinfección con L. monocytogenes debido a su
capacidad para reconocer y destruir rápidamente las células infectadas. 3.2 Células T
reguladoras Las células T reguladoras son un subconjunto de células T que tienen efectos
supresores sobre las actividades de otras células T al secretar citocinas inmunosupresoras
como TGF-β e IL-10 y, por lo tanto, son responsables de limitar el alcance de la respuesta
inmune. . Las células T reguladoras de origen natural se caracterizan como CD4 + CD25 + y
expresan el factor de transcripción Foxp3, que es esencial para su función. Importante para
prevenir la autoinmunidad, durante la infección, las células T reguladoras juegan un papel en la
regulación a la baja de las respuestas de las células T. No se ha demostrado el papel de estas
células durante la infección primaria por L. monocytogenes , pero durante una respuesta de
reexposición a la estimulación, las células CD4 + CD25 + son importantes para limitar la
expansión de las células T CD8 de memoria [75].
3.3 Respuestas de células T MHC no clásicas Además de la presentación del antígeno MHCIa
clásico, los antígenos de L. monocytogenes pueden presentarse mediante moléculas MHCIb no
clásicas . Estas moléculas tienen una estructura similar a las moléculas de MHCIa y también se
asocian con β2-microglobulina, sin embargo, las moléculas de MHCIb carecen de la
polimorficidad de las moléculas de MHCIa . En la infección por L. monocytogenes murina , la
molécula de MHCIb mejor estudiada es H2-M3, que se une a péptidos que contienen un
residuo de metionina amino terminal formilado . Dado que la N- formilación de proteínas se
limita principalmente a las bacterias (los restos evolutivos bacterianos de las mitocondrias y los
cloroplastos también tienen esta actividad), la molécula H2-M3 se une específicamente a
péptidos derivados de bacterias. Se han identificado y utilizado varios péptidos derivados de L.
monocytogenes presentados por H2-M3 para estudiar respuestas restringidas de MHCIb .
Las células T restringidas a H2-M3 responden de manera diferente a las respuestas clásicas de
células T restringidas a MHCIa durante la infección por L. monocytogenes . En primer lugar, la
cinética de la expansión y contracción de las células T es más rápida para las células
restringidas a H2-M3. El número de células específicas de L. monocytogenes H2-M3 alcanza un
máximo de cinco a seis días después de la infección, en comparación con las células
restringidas por MHCIa , que alcanza un máximo de siete a nueve días después de la infección.
La contracción de las células T restringidas a H2-M3 da como resultado la generación de un
conjunto de células de memoria, pero solo tienen algunas de las características de las células
de memoria tradicionales. Cuando se reexpone a una segunda infección por L.
monocytogenes , aunque estas células regulan rápidamente al alza la expresión superficial de
los marcadores de activación, estas células no proliferan [76 , 77 ]. Esta supresión de la
proliferación está mediada por la expansión de la respuesta MHCIa , lo que a su vez limita las
CD disponibles para la presentación de antígenos [78]. No es sorprendente que sin la
expansión de las células restringidas a H2-M3, estas células no puedan proporcionar
protección contra la infección secundaria por L. monocytogenes . Sin embargo, estas células
juegan un papel en el control de la infección primaria ya que los ratones knockout H2-M3
tienen un defecto en el aclaramiento bacteriano, lo que sugiere que la expansión temprana y
la producción de IFNγ por estas células no pueden ser compensadas por otros subconjuntos
celulares [79].
3.4 respuestas de células B desde los años 1960 cuando Mackaness mostró que la
transferencia de células de L. monocytogenesimmunized ratones, pero no en suero,
proporcionó protección contra L. monocytogenes infección de ratones naïve, se ha conocido
que los anticuerpos no tienen un papel importante en L. infección por monocytogenes . Dado
que la mayoría de las bacterias permanecen intracelulares durante la infección y se diseminan
intercelularmente sin encontrar el medio extracelular, los anticuerpos específicos de L.
monocytogenes serían de uso limitado o nulo para controlar la diseminación bacteriana. Sin
embargo, en determinadas condiciones experimentales, los anticuerpos pueden afectar el
curso de la infección. Aunque la infección en sí misma no genera títulos elevados de
anticuerpos, un anticuerpo monoclonal contra el factor de virulencia LLO formador de poros
puede proporcionar protección actuando intracelularmente para neutralizar LLO y bloquear el
escape bacteriano del fagosoma [80]. Además, utilizando ratones con deficiencia de células B,
los anticuerpos naturales en animales sin tratamiento previo pueden desempeñar un papel en
la reducción de la diseminación temprana de L. monocytogenes en órganos vitales [81]. Al
atrapar bacterias y sus antígenos en órganos linfoides secundarios donde se inician respuestas
inmunes específicas, las células B y los anticuerpos pueden facilitar la generación de la
respuesta protectora de las células T. Por último, se ha demostrado que las células B son
importantes en el mantenimiento de las células T CD8 de memoria generadas durante la
infección por L. monocytogenes [82]. Por tanto, las células B y los anticuerpos desempeñan un
papel menor, aunque significativo, durante la infección por L. monocytogenes .