Full Download Small Molecule Drug Discovery: Methods, Molecules and Applications 1st Edition Andrea Trabocchi (Editor) File PDF All Chapter On 2024

Download as pdf or txt
Download as pdf or txt
You are on page 1of 44

Small Molecule Drug Discovery:

Methods, Molecules and Applications


1st Edition Andrea Trabocchi (Editor)
Visit to download the full and correct content document:
https://ebookmass.com/product/small-molecule-drug-discovery-methods-molecules-a
nd-applications-1st-edition-andrea-trabocchi-editor/
More products digital (pdf, epub, mobi) instant
download maybe you interests ...

Applications of Nanotechnology in Drug Discovery and


Delivery Chukwuebuka Egbuna

https://ebookmass.com/product/applications-of-nanotechnology-in-
drug-discovery-and-delivery-chukwuebuka-egbuna/

Imidazole-Based Drug Discovery (Heterocyclic Drug


Discovery) Shikha Agarwal

https://ebookmass.com/product/imidazole-based-drug-discovery-
heterocyclic-drug-discovery-shikha-agarwal/

Spectroscopy and Dynamics of Single Molecules: Methods


and Applications Carey Johnson (Editor)

https://ebookmass.com/product/spectroscopy-and-dynamics-of-
single-molecules-methods-and-applications-carey-johnson-editor/

Benzodiazepine-Based Drug Discovery Farzad Zamani

https://ebookmass.com/product/benzodiazepine-based-drug-
discovery-farzad-zamani/
Piperidine-Based Drug Discovery Ruben Vardanyan

https://ebookmass.com/product/piperidine-based-drug-discovery-
ruben-vardanyan/

Design of Hybrid Molecules for Drug Development Michael


Decker

https://ebookmass.com/product/design-of-hybrid-molecules-for-
drug-development-michael-decker/

Carbohydrates in Drug Discovery and Development:


Synthesis and Application 1st Edition Vinod K. Tiwari
(Editor)

https://ebookmass.com/product/carbohydrates-in-drug-discovery-
and-development-synthesis-and-application-1st-edition-vinod-k-
tiwari-editor/

Discovery and Development of Antidiabetic Agents from


Natural Products: Natural Product Drug Discovery Goutam
Brahmachari

https://ebookmass.com/product/discovery-and-development-of-
antidiabetic-agents-from-natural-products-natural-product-drug-
discovery-goutam-brahmachari/

Peptide based Drug Discovery: Challenges and New


Therapeutics (ISSN Book 59) 1st Edition, (Ebook PDF)

https://ebookmass.com/product/peptide-based-drug-discovery-
challenges-and-new-therapeutics-issn-book-59-1st-edition-ebook-
pdf/
Small Molecule Drug
Discovery
Methods, Molecules
and Applications

Andrea Trabocchi
Department of Chemistry "Ugo Schiff"
University of Florence
Sesto Fiorentino, Florence
Italy

Elena Lenci
Department of Chemistry "Ugo Schiff"
University of Florence
Sesto Fiorentino, Florence
Italy
Elsevier
Radarweg 29, PO Box 211, 1000 AE Amsterdam, Netherlands
The Boulevard, Langford Lane, Kidlington, Oxford OX5 1GB, United Kingdom
50 Hampshire Street, 5th Floor, Cambridge, MA 02139, United States
Copyright © 2020 Elsevier Inc. All rights reserved.
No part of this publication may be reproduced or transmitted in any form or by any
means, electronic or mechanical, including photocopying, recording, or any information
storage and retrieval system, without permission in writing from the publisher. Details on
how to seek permission, further information about the Publisher’s permissions policies
and our arrangements with organizations such as the Copyright Clearance Center and the
Copyright Licensing Agency, can be found at our website: www.elsevier.com/permissions.
This book and the individual contributions contained in it are protected under copyright
by the Publisher (other than as may be noted herein).

Notices
Knowledge and best practice in this field are constantly changing. As new research and
experience broaden our understanding, changes in research methods, professional
practices, or medical treatment may become necessary.
Practitioners and researchers must always rely on their own experience and knowledge in
evaluating and using any information, methods, compounds, or experiments described
herein. In using such information or methods they should be mindful of their own safety
and the safety of others, including parties for whom they have a professional
responsibility.
To the fullest extent of the law, neither the Publisher nor the authors, contributors, or
editors, assume any liability for any injury and/or damage to persons or property as a
matter of products liability, negligence or otherwise, or from any use or operation of any
methods, products, instructions, or ideas contained in the material herein.

Library of Congress Cataloging-in-Publication Data


A catalog record for this book is available from the Library of Congress
British Library Cataloguing-in-Publication Data
A catalogue record for this book is available from the British Library

ISBN: 978-0-12-818349-6

For information on all Elsevier publications visit our website at


https://www.elsevier.com/books-and-journals

Publisher: Susan Dennis


Acquisition Editor: Emily M McCloskey
Editorial Project Manager: Kelsey Connors
Production Project Manager: Sreejith Viswanathan
Cover Designer: Alan Studholme

Typeset by TNQ Technologies


Contributors
Michelle R. Arkin
Small Molecule Discovery Center and Department of Pharmaceutical Chemistry,
University of California San Francisco, San Francisco, CA, United States; Buck
Institute for Research on Aging, Novato, CA, United States
Andrea Basso
Department of Chemistry and Industrial Chemistry, University of Genova,
Genova, Italy
Pietro Capurro
Department of Chemistry and Industrial Chemistry, University of Genova,
Genova, Italy
Stuart J. Conway
Department of Chemistry, Chemistry Research Laboratory, University of Oxford,
Oxford, United Kingdom
Margarida Espadinha
Research Institute for Medicines (iMed.ULisboa), Faculty of Pharmacy,
Universidade de Lisboa, Lisbon, Portugal
M. Isabel Garcı́a-Moreno
University of Seville, Seville, Spain
José M. Garcı́a Fernández
Institute for Chemical Research (IIQ), CSIC e University of Seville, Seville, Spain
Kamal Kumar
Max Planck Institute of Molecular Physiology, Dortmund, Germany; Aicuris
Antiinfective Cures GmbH, Wuppertal, Germany
Elena Lenci
Department of Chemistry “Ugo Schiff”, University of Florence, Sesto Fiorentino,
Florence, Italy
Qingliang Li
National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine,
National Institutes of Health, Besthesda, MD 20894, United States
José L. Medina-Franco
Department of Pharmacy, School of Chemistry, Universidad Nacional Autónoma
de México, Mexico City, Mexico
Carmen Ortiz Mellet
University of Seville, Seville, Spain

xi
xii Contributors

Amy Trinh Pham


School of Pharmacy, Health Sciences Campus, University of Waterloo, Waterloo,
ON, Canada
Praveen P.N. Rao
School of Pharmacy, Health Sciences Campus, University of Waterloo, Waterloo,
ON, Canada
Fernanda I. Saldı́var-González
Department of Pharmacy, School of Chemistry, Universidad Nacional Autónoma
de México, Mexico City, Mexico
Elena M. Sánchez-Fernández
University of Seville, Seville, Spain
Maria M.M. Santos
Research Institute for Medicines (iMed.ULisboa), Faculty of Pharmacy,
Universidade de Lisboa, Lisbon, Portugal
Arash Shakeri
School of Pharmacy, Health Sciences Campus, University of Waterloo, Waterloo,
ON, Canada
Andrea Trabocchi
Department of Chemistry “Ugo Schiff”, University of Florence, Sesto Fiorentino,
Florence, Italy
Chris G.M. Wilson
Small Molecule Discovery Center and Department of Pharmaceutical Chemistry,
University of California San Francisco, San Francisco, CA, United States
Foreword

The discovery of new drugs is an endeavor of high scientific demand and societal
relevance. It requires interdisciplinary research spanning the life sciences, chemis-
try, pharmcology, and even material science. It benefits mankind because the treat-
ment of disease is one of societies’ most urgent demands to science.
Among the pharmacopoeia available to us, small molecules historically are most
prevalent, and they form the largest group of new chemical entities in medicinal
chemistry research to this very day. Undoubtedly biologicals, in particular anti-
bodies, have gained major importance and are here to stay, but it is also evident
that small molecule drugs will remain to be of highest relevance in drug discovery
in the foreseeable future.
Hence the science that underlies the discovery and development of new bioactive
small molecules that can be considered drug candidates and that may inspire new
approaches to the treatment of disease is of utmost importance and calls for contin-
uous introduction of new methods and principles.
This necessity underlies the articles compiled in the book edited by Andrea Tra-
bocchi and Elena Lenci. Collectively the authors shine light on a very impressive
ensemble of some of the most relevant topics in contemporary medicinal chemistry
and drug discovery. These include chemical synthesis, cheminformatics, and bio-
physical and computational methods and highlight individual case studies focusing
on some of the greatest challenges in this science, as for instance Alzheimer disease.
The Editors have chosen the topics wisely and with deep insight into drug dis-
covery. Thereby the book not only gives an overview of recent developments, it
also guides the reader to the frontiers of medicinal chemistry research. It will be
both entertaining to read and educative such that it will be of interest to the profes-
sional skilled in the art, as well as to newcomers to the field, in particular, advanced
graduate and postdoctoral students.
I hope that this book will find widespread interest from practitioners in medicinal
chemistry and simply curious scientists trying to get a glimpse at and an understand-
ing of the science that drives small molecule drug discovery.

Herbert Waldmann
Max Plank Institute of Molecular Physiology
Dortmund, Germany
September 2019

xiii
Preface

The identification of novel molecular entities capable of specific interactions repre-


sents a significant challenge in early drug discovery. Despite the success of bio-
pharmaceuticals, small molecules still dominate the market, being more than 95%
of the top 200 most prescribed drugs in 2018. Small molecules are low-
molecular-weight organic compounds that include natural products and metabolites,
as well as drugs and other xenobiotics. The entire drug discovery process has
changed a lot during the last decades due to the difficulties in finding new lead com-
pounds for all those “undruggable” targets and for addressing complex oncology and
CNS diseases. The rational design of ligands is still a powerful approach, especially
in combination with computer-aided methods when the biological target is well-
defined and structurally known. Nevertheless, new synthetic methods able to
generate high-quality chemical libraries have been exploited over the last decades
to meet the need of improving the quality and quantity of small molecules for bio-
logical screenings. Since the synthetic efforts characterized by the trial-and-error
approach of the 1980s and combinatorial chemistry of the 1990s, new attitudes
are now gaining wide attention in synthetic chemistry for small molecule drug dis-
covery, in order to maximize the quality of libraries and reducing the waste of gener-
ating and screening random unnecessary compounds. New frontiers in the synthesis
of small molecule libraries have been explored. Diversity-Oriented Synthesis has
proven to be very effective to access large areas of the chemical space, primarily
through the creation of many distinct molecular scaffolds. Also, Biology-Oriented
Synthesis has been conceived with the purpose of taking inspiration from nature
to select promising molecular scaffolds being related to natural products in terms
of biological output. Today, an important part of modern medicinal chemistry is rep-
resented by computer-aided methods, for rational drug design (i.e, virtual
screening), and for the smart design of small molecule libraries. As the number of
publicly accessible biological data is rapidly increasing, chemoinformatics is gain-
ing relevance as a tool for developing better chemical libraries.
The book is organized in three parts, exploring selected topics on small molecule
drug discovery on key synthetic and screening methods, representative small mole-
cule categories, and selected biomedical applications. The first part encompasses the
methods for the synthesis, structure classification, and biological evaluation of small
molecules. Specifically, Chapter 1 reports an in-depth overview of strategic ap-
proaches for the achievement of small molecules, and Chapter 2 gives a thorough
account about most relevant chemical reactions for building small molecules. Chap-
ters 3 and 4 report the chemoinformatic tools to assess chemical diversity of small
molecule libraries and virtual screening methods, respectively. Chapter 5 concludes
the first part on methods discussing screening approaches and biophysics of small
molecules. In the second part, representative small molecule classes derived from
natural products are reported. Chapter 6 describes the principles and applications
of small molecule peptidomimetics, and Chapter 7 reports the chemistry of sp2-
xv
xvi Preface

iminosugars within the field of carbohydrates. Chapter 8 outlines the synthesis and
structural features of small molecules characterized by spiroacetal moiety, and
Chapter 9 reports the case study of centrocountins as nature inspired indoloquinoli-
zines. The third part contains two selected case studies about the successful applica-
tion of small molecules in biomedical research. Chapter 10 deals with PPIs as
therapeutic targets for anticancer drug discovery and describes the case study of
MDM2 and BET bromodomain inhibitors, and Chapter 11 is an account of the dis-
covery of small molecules for the treatment of Alzheimer disease.
These presentations have been conceived for a broad readership and should in-
terest not only those readers who currently work in the field of organic and medicinal
chemistry addressing drug discovery, but also those who are considering this
approach in the field of chemical biology, taking advantage of the use of small mole-
cule as chemical probes for dynamically interrogating biological systems and for
investigating potential drug targets. We hope these Chapters will stimulate further
advances in the ever-developing field of small molecule drug discovery.

Andrea Trabocchi
Elena Lenci
Florence, September 2019
Abbreviations

(TR)-FRET Time-resolved fluorescence resonance energy transfer


2D Two-dimensional
3D Three-dimensional
ACD Available chemicals directory
ACE Angiotensin-converting enzyme
ACh Acetylcholine
AChE Acetylcholinesterase
ACN Acetonitrile
AcOH Acetic acid
AD Alzheimer disease
ADME Absorption-distribution-metabolism-excretion
ADP Adenosine diphosphate
AIDS Acquired immunodeficiency syndrome
ALK Anaplastic lymphoma kinase
AlphaScreen Amplified luminescent proximity homogeneous assay
AMBER Assisted Model Building with Energy Refinement
ANS Anthocyanidin synthase
APDS/TRP Alanine-proline-aspartate-serine/threonine-arginine-proline
ApoA1 Apolipoprotein A-1
APP Amyloid precursor protein
APT1 Acyl protein thiosterase 1
APV Amprenavir
AR Androgen receptor
AS/MS Affinity selection followed by mass spectrometry
ATP Adenosine triphosphate
B/C/P Build/couple/pair
BACE-1 Beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1
BAL Backbone amide linker
BBB Blood-brain barrier
BET Bromodomain and extraterminal domain
Bcl-XL B-cell lymphoma
BCPs Bromodomain-containing proteins
BEDROC Boltzmann enhanced discrimination of ROC
BIOS Biology-oriented synthesis
BLI Bio-layer interferometry
BOP Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphonium
hexafluorophosphate
BRCA Breast cancer gene
BRD Bromodomain
BRET Bioluminescence resonance energy transfer
BSA Bovine serum albumin
BZD Benzodiazepine
CAN Ceric ammonium nitrate

xvii
xviii Abbreviations

CAS Catalytic active site


CBD Condition-based divergence
CCR2 Chemokine Receptor type 2
CCR5 Chemokine Receptor type 5
CDC Cross-dehydrogenative couplings
CDK Chemistry Development Kit
CDKs Cyclin-dependent kinases
CDP Consensus diversity plot
CETP Cholesteryl ester transfer protein
CETSA Cellular thermal shift assay
ChE Cholinesterase
CHI Chalcone isomerase
CHS Chalcone synthase
CLL B-cell chronic lymphocytic leukemia
clogP Calculated octanol/water partition coefficient
CMC Critical micelle concentration
CNS Central nervous system
COPD Chronic obstructive pulmonary disease
COX Cyclooxigenase
cAMP Cyclic adenosine monophosphate
cGMP Cyclic guanosine monophosphate
CPA Chiral phosphoric acid
CPAs Carboxypeptidases A
Crm1 Chromosome region maintenance 1
Cryo-EM Cryogenic electron microscopy
CS Castanospermine
CSA Camphorsulphonic acid
CSP Chemical shift perturbation
CSR Cyclic system recovery curves
CuAAC Cu-catalyzed Azide Alkyne Click
CYP3A4 Cytochrome P450 3A4
DIPEA N,N-Diisopropylethylamine
DCE Dichloroethane
DCM Dichloromethane
DCN 1,4-Dicyanonaphthalene
DDQ Dichlorodicyanobenzoquinone
DECLs DNA-encoded chemical libraries
DEEP-STD Differential epitope mapping-STD
DIAD Diisopropyl azodicarboxylate
DLS Dynamic light scattering
DMAP 4-Dimethylaminopyridine
DMEDA 1,2-Dimethylethylenediamine
DMF N,N-Dimethylformamide
DMPU N,N0 -dimethyl-N,N0 -propylene urea
DMSO Dimethylsulfoxide
DNA Deoxyribonucleic acid
DNJ Deoxynojirimycin
DNP Dictionary of Natural Products
Abbreviations xix

DOS Diversity-oriented synthesis


DPPH Diphenyl-1-picrylhydrazyl
DR Diabetic retinopathy
DRR Double reactant replacement
DRV Darunavir
DSF Differential scanning fluorimetry
EC50 Half maximal effective concentration values
ECFP Extended-connectivity fingerprint
EeAChE Electric eel acetylcholinesterase
EF Enrichment factor
ELT Encoded library technology
EMA European Medicines Agency
ERa Estrogen receptor a
ESIPT Excited state intramolecular proton transfer
ET Energy transfer
EYFP Enhanced yellow fluorescent protein
FA Fluorescence anisotropy
FACS Fluorescence-activated cell sorting
FC Fusicoccin
FDA US Food and Drug Administration
FLIM Fluorescence lifetime imaging microscopy
FP Fluorescence polarization
FPV Fosamprenavir
FRET Fluorescence resonance energy transfer
GalNAc N-Acetyl-d-galactosamine
GABA Gamma-aminobutyric acid
GBSA Generalized Born surface area
GFP Green fluorescent proteins
GlcNAc N-Acetyl-d-glucosamine
GluCl Glutamate-gated chloride channel
GOLD Genetic Optimisation for Ligand Docking
GPCRs G proteinecoupled receptors
GPx Glutathione peroxidase
GSK3b Glycogen synthase kinase 3b
GTM Generative topographic mapping
H3R Histamine H3 receptor
HAT Hydrogen atom transfer
HATU 1-[Bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium
3-oxid hexafluorophosphate
HBA Hydrogen bond acceptors
HBD Hydrogen bond donors
hBuChE Human butyrylcholinesterase
HCV Hepatitis C virus
HCV NS3 Hepatitis C Virus nonstructural protein 3
HDx Hydrogen/deuterium exchange
HER2 Human epidermal growth factor receptor 2
Hh Hedgehog
HIV Human immunodeficiency virus
xx Abbreviations

HLMs Human liver microsomes


HMG-CoA 3-Hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme A
HMQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence
HO-1 Heme oxygenase-1
HPLC High-performance liquid chromatography
HRP Horseradish peroxidase
HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence
hTR Human telomerase RNA
HTRF Homogeneous time-resolved FRET
HTS High-throughput screening
ICR Institute of Cancer Research
icv Intracerebroventricular
IDH1 Isocitrate dehydroganse type 1
IDV Indinavir
IMAP-FP Ion affinity-based fluorescence polarization
IMCRs Isocyanide-based multicomponent reactions
iNOS Inducible nitric oxide synthase
ISC Intersystem crossing
ITC Isothermal titration calorimetry
IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry
JAK2 Janus kinase 2
KAc Acetylated lysine residues
KAHA a-KetoAcid-HydroxylAmine
KATs Lysine acetyltransferases
KDACs Deacetylated by lysine deacetylases
KNIME Konstanz Information Miner
LBVS Ligand-based virtual screening
LC-MS Liquid chromatography-mass spectrometry
LD50 Lethal dose, 50%
LED Light-emitting diode
LPS Lipopolysaccharide
LSDs Lysosomal storage diseases
LSF Late-stage functionalization
LTP Long-term potentiation
mAb Monoclonal antibody
MACCS Molecular ACCess System
MAO Monoamine oxidase
MAPK Mitogen-activated protein kinase
MB Methylene blue
MCF-7 Michigan Cancer Foundation-7
mCPBA m-Chloroperoxybenzoic acid
MCR Multicomponent reaction
MCR2 Combining multicomponent reactions
MCSS Maximum Common Substructure
MDM2 Mouse double minute 2 homolog
MeCN Acetonitrile
MEK1/2 MAP (mitogen-activated protein) kinase/ERK (extracellular signal-regulated
kinase) Kinase 1/2
Abbreviations xxi

MFS Multifusion similarity maps


MMP Matrix metalloprotease
MptpA Low-molecular-weight protein-tyrosine phosphatase A
MptpB Low-molecular-weight protein-tyrosine phosphatase B
MRS Modular reaction sequences
MS Mass spectrometry
MST Microscale thermophoresis
MCC Matthews correlation coefficient
MOE Molecular Operating Environment
MTDLs Multi-target-directed ligands
MTT 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide
MUC1 Mucin 1
MW Molecular weight
NADPH Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate hydrogen
NaN3 Sodium azide
NF-kB Nuclear factor-kappa B
NFTs Neurofibrillary tangles
NHC N-heterocyclic carbene
NK1 Neurokinin 1 receptor
NMDA N-methyl-D-aspartate
NMDAR NMDA receptor
NMP N-Methyl-2-pyrrolidone
NMR Nuclear magnetic resonance
NN Neural network
NOR Novel object recognition
NPM Nucleophosmin
ORAC-FL Oxygen radical absorbance capacity
ORTEP Oak Ridge Thermal Ellipsoid Plot
P-3CR Passerini reaction
PADAM Passerini reaction/Amine Deprotection/Acyl Migration
PAINs Pan-assay interference compounds
PAMPA Parallel artificial membrane permeability assay
PBMC Peripheral blood mononuclear cells
PBSA Poisson-Boltzmann surface area
PCA Principal component analysis
PCIs Protein-chromatin interactions
PCR Polymerase chain reaction
PD Pharmacodynamics
PDB Protein Data Bank
PDE Phosphodiesterase
PDE5 Phosphodiesterase type 5
PET Positron emission tomography
PHFs Paired helical filaments
PIAs Phosphatidylinositol ether lipid analogues
PI3K Phosphoinositide-3-kinase
PK Pharmacokinetics
PMI Principal moment of inertia
PPI Protein-protein interaction
xxii Abbreviations

PS Polystyrene
PSSC Protein structure similarity clustering
PTP1B Protein-tyrosine phosphatase 1B
PUMA Platform for Unified Molecular Analysis
PVDF Polyvinylidene difluoride
QSAR Quantitative structureeactivity relationship
RB Rose bengal
RBs Rotatable bonds
RCM Ring closing metathesis
RF Random forest
RGD Arg-Gly-Asp
RIfS Interference spectroscopy
RNA Ribonucleic acid
ROC Receiver operating characteristics
ROCS Rapid Overlay of Chemical Structures
ROM Ring opening metathesis
ROS Reactive oxygen species
RTV Ritonavir
RU Response units
RXR Retinoid X receptor
SAR Structureeactivity relationship
SBS Society for Biomolecular Sciences
SBVS Structure-based virtual screening
ScFv Single-chain variable fragment
SCONP Structural classification of natural products
SDS-PAGE Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis
SE Shannon entropy
sEH Soluble epoxide hydrolase
SET Single electron transfer
SGLT2 Sodium-glucose linked transporter 2
SHG Second harmonic generation
SIFt Structural interaction fingerprint
SLL Small lymphocytic lymphoma
SlogP Octanol/water partition coefficient
SMM Small molecule microarray
SOCE Store-operated calcium entry
SOMs Self-organizing maps
SPOS Solid-phase organic synthesis
SPR Surface plasmon resonance
SPRs Structureeproperties relationships
SPS Solid-phase synthesis
SRR Single reactant replacement
SQV Saquinavir
STAT3 Signal transducers and activators of transcription 3
STD Saturation transfer difference
SVM Support vector machines
t-SNE Distributed stochastic neighbor embedding
TASK3 TWIK-related acid-sensitive K þ channel 3
Abbreviations xxiii

TBAF Tetrabutylammonium fluoride


TCM Traditional Chinese medicine
TEM Transmission electron microscopy
TFA Trifluoroacetic acid
THF Tetrahydrofuran
ThT Thioflavin T
TINS Target immobilized NMR screening
TNF-a Tumor necrosis factor-a
TPP Tetraphenylporphirine
TPSA Topological polar surface area
TOS Target-oriented synthesis
TRH Thyrotropin-releasing hormone
TRK Tropomyosin receptor kinase
TrxR Thioredoxin reductase
U-5C-4CR Ugi 5-center-4-component reaction
UDC Ugi/deBoc/cyclization
Ugi-4CC Ugi-4 component reaction
UNPD Universal Natural Product Database
USR Ultrafast shape recognition
UV-B Ultraviolet B-rays
VE-PTP Vascular endothelial-protein-tyrosine phosphatase
VHR Vaccinia H1-related
WHO World Health Organization
YFP Yellow fluorescent protein
CHAPTER

Synthetic approaches
toward small molecule
libraries 1
Elena Lenci, Andrea Trabocchi
Department of Chemistry “Ugo Schiff”, University of Florence, Sesto Fiorentino, Florence, Italy

1.1 Introduction
Drug discovery is the long and arduous process that can eventually bring molecules
from the laboratories to the market. Although the number of new approved drugs
showed about a 30% increase over 2017, marking a new record after 1996 [1], in
general only 1 molecule out of 5000 hit candidates can reach the market [2].
The process of discovering, testing, and gaining approval for a new drug has
changed a lot during the last century. From the isolation of active ingredients
from traditional remedies and natural products, drug discovery has evolved into a
multidisciplinary and complex process that brings together the efforts of biologists,
pharmacologists, and chemists. Many different approaches nowadays can be applied
in drug discovery. From one hand, the rational design of ligands remains the “gold
standard” in medicinal chemistry, especially when the biological target is well
defined and structurally known (Fig. 1.1, top) [3]. On the other hand, a parallel
new approach has emerged, especially in those fields, such as cancer and neurode-
generative disorders, where the biological target or the mode of binding is not well
known [4,5], or difficult to study in traditional drug discovery programs [6].

FIGURE 1.1
Comparison between conventional target-based and chemical genetics drug discovery
approaches.

Small Molecule Drug Discovery. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-818349-6.00001-7 1


Copyright © 2020 Elsevier Inc. All rights reserved.
2 CHAPTER 1 Synthetic approaches toward small molecule libraries

When researchers are experiencing this impasse, one alternative, for the discov-
ery of new targets and new lead compounds, is the application of large small mol-
ecules libraries in high-throughput screening (HTS), phenotypic assays, and
chemical genetics studies (Fig. 1.1, bottom) [2,7e10]. The relevance of this
approach is also highlighted by the emergence of international screening initiatives,
such as EU-OPENSCREEN [11] or the European Lead Factory [12,13].
In both approaches, synthetic chemistry plays a key role in generating high-
quality small molecules collections. In fact, despite the vast success of the biological
drugs (monoclonal antibodies or recombinant proteins), the favorable pharmacoki-
netic properties of small molecules libraries allowed them to remain as the gold stan-
dard for the development of new medications, especially in the case of enzyme
inhibitors. In fact, among the 59 new drugs approved by the FDA in 2018, 42 are
small molecules and only 17 are biologic drugs [1]. In Table 1.1 are reported, for
example, the 11 small molecules approved by the FDA as new drugs for cancer ther-
apy in 2018.

Table 1.1 Small molecules approved by the FDA as new drugs for cancer
therapy in 2018.
Name Structure Company Biological effect
Encorafenib Array BRAF inhibitor.
Used in combination with
binimetinib for the
treatment of BRAF-
mutated melanoma

Binimetinib Array MEK1/2 inhibitor. Used in


combination with
Encorafenib for the
treatment of BRAF
mutated melanoma

Talazoparib Pfizer Poly (ADP-ribose)


polymerase type 1 and 2
inhibitor. Used in the
treatment of BRCA-
mutated HER2-negative
breast cancer
Ivosidenib Agios Isocitrate dehydrogenase
type 1 (IDH1) inhibitor.
Used in the treatment of
acute myeloid melanoma
Gilteritinib Astellas FLT3, AXL, and ALK
kinases inhibitor. Used in
the treatment of acute
myeloid melanoma
1.1 Introduction 3

Table 1.1 Small molecules approved by the FDA as new drugs for cancer therapy in
2018.dcont’d
Name Structure Company Biological effect
Glasdegib Pfizer Hedgehog (hh) signaling
pathway inhibitor. Used in
the treatment of acute
myeloid melanoma
Duvelisib Verastam Phosphoinositide-3-
kinase (PI3K) inhibitor.
Used in the treatment of
chronic lymphocytic
leukemia or small
lymphocytic lymphoma
Larotrectinib Bayer and Tropomyosin receptor
Loxo kinase (TRK) A/B/C
inhibitor. Used in the
treatment of solid tumors
that have the neurotrophic
receptor tyrosine kinase
gene fusion
Lorlatinib Pfizer ATP-competitive inhibitor
of anaplastic lymphoma
kinase (ALK) and c-Ros
oncogene 1 (Ros)1. Used
in the treatment of ALK-
positive metastatic non
esmall cell lung cancer
Dacomitinib Pfizer Covalent ligand of human
epidermal growth factor
receptors Her-1, Her-2,
and Her-4. Used in the
treatment of metastatic
nonesmall cell lung
cancer
Apalutamide Janssen Androgen receptor (AR)
antagonist. Used in the
treatment of prostate
cancer

Thus, to address this demand, very powerful synthetic methods are necessary for
the generation of large small molecules libraries. Several efforts have been devoted
to improve the quality and quantity of small molecules representing a library. In
particular, during last decades, organic chemists have taken advantage of high-
throughput synthesis methods, such as solid-phase techniques [14e17], and
combinatorial chemistry [18,19]. Unfortunately, despite the apparent success, these
chemistry approaches have not fulfilled the desired expectations as the automation
of discovery processes has proven to be inefficient [20,21]. Thus, new frontiers in
4 CHAPTER 1 Synthetic approaches toward small molecule libraries

the synthesis of small molecules libraries are being explored, with the aim of
improving the quality of the small molecules representing a library, where the syn-
thetic efforts are not guided by a specific core structure, but rather by concepts like
molecular diversity (i.e., diversity-oriented synthesis) and bioactivity or biosynthetic
pathway (i.e., biology-oriented synthesis). This chapter focuses on main synthetic
approaches for the generation of large, high-quality small molecule collections,
with an emphasis on organic synthesis and technical methods rather than assay
results.

1.2 What is a small molecule?


Considering that there is no strict definition, the term small molecule can be referred
to any organic compound with a molecular weight of less than 1500 Da [22]. The
cutoff limit of 1500 Da is arbitrary, as in the literature it is possible also to find
this limit fixed on 900e1000 Da, but it is correlated to the ability of small molecules
to rapidly diffuse across cell membranes and reach the intracellular sites of action
[22]. Small molecules are compounds that alter the activity or the function of a bio-
logical target, by interacting with a biological macromolecule, such as DNA, RNA,
and proteins [23], often in a selective and dose-dependent manner, showing a bene-
ficial effect against a disease, or a detrimental one (such as in the case of teratogens
and carcinogens). Small molecules can be naturally occurring or of synthetic origin
and can have a variety of different applications beyond drugs, as pesticides [24] or as
probes and research tools to perturb biological systems in order to identify and
discover novel biological targets, such as in the field of chemical genetics
[2,7e10,25,26]. In fact, they work rapidly, reversibly, and in tunable conditions
depending on the concentration, in contrast with genetic approaches, so they are bet-
ter probes to analyze complex biological networks. In pharmacology, the term
“small molecule” is used to differentiate drugs below 1000 Da from all the other
classes of larger and complex biologic drugs that include antibodies, peptides,
nucleic acid-based compounds, cytokines, replacement enzymes, polysaccharides,
and recombinant proteins.
Biologic drugs have been increasing over the last decade, thanks to the advances
of biotechnology and analytical techniques. Although they have some advantages
over small molecules, such as their high specificity and biocompatibility, they often
suffer of poor Absorption, Distribution, Metabolism, and Excretion (ADME) prop-
erties, and the oral delivery route remains practically unattainable, as most of them
are still delivered using subcutaneous injections. Also, they are much more expen-
sive as compared to low-molecular-weight drugs, and their structural characteriza-
tion and quality control is more challenging.
Small molecules still dominate the market, as more than 95% among the top 200
most prescribed drugs in 2018 are small chemical entities [27]. In Table 1.2, the first
15 small molecules of this list are reported. Despite that, in the list of 15 top selling
drugs of 2018, only five are small molecules (Table 1.3), whereas all the rest are
1.2 What is a small molecule? 5

Table 1.2 First 15 small molecules of top 200 most prescribed drugs in
2018.
Name Structure Biological effect
Lisinopril ACE inhibitor, used in the
treatment of hypertension and
symptomatic congestive heart
failure

Levothyroxine Natural thyroxine analogue, used


in the treatment of
hypothyroidism
Atorvastatin 3-hydroxy-3-methyl glutaryl
coenzyme A (HMG-CoA)
reductase inhibitor, used in the
treatment of hyperlipidemic
diseases
Metformin Antihyperglycemic agent, used in
the treatment of type II diabete
Simvastatin 3-hydroxy-3-methyl glutaryl
coenzyme A (HMG-CoA)
reductase inhibitor, used in the
treatment of
hypercholesterolemia
Omeprazole proton-pump (potassium-
transporting ATPase alpha chain
1) inhibitor, used for the treatment
of gastric acid-related disorders
Amlodipine calcium channel blocker, used in
the treatment of high blood
pressure and angina

Metoprolol Beta-1 blocker, used in the


treatment of angina, heart failure,
and hypertension
Paracetamol Antipyretic and analgesic

Salbutamol Beta-2 adrenergic receptor


agonist, bronchodilator, used in
the treatment of asthma and
Chronic Obstructive Pulmonary
Disease (COPD)
Hydrochlorothiazide Diuretic, used in the treatment of
edema, hypertension, and
hypoparathyroidism
Losartan Angiotensin-receptor blocker,
used in the treatment of
hypertension

Continued
Another random document with
no related content on Scribd:
ja luotisuora asento kaikkien muurien ja seinien säännöllistä
asentoa, voisimme laskea ilman muuta, sillä se varmaan lepäisi
paikoillaan oman painonsa varassa. Mutta tässäkään ei pidä
puuttuman kalkkia, sideainetta, sillä kuten ihmiset, jotka
luonnostansa taipuvat toisiinsa, pysyvät vieläkin paremmin yhdessä,
jos laki liittää heidät toisiinsa, samoin kivetkin, jotka jo muodoltansa
toisiinsa sopivat, yhtyvät vielä paremmin näiden sitovien voimien
nojalla, ja koska ei ole oikein soveliasta pysytellä joutilaana työtä
tekevien joukossa, niin ette pitäne halpana ryhtyä tässäkin ottamaan
työhön osaa.

Sitten hän ojensi muurauslastan Charlottalle, joka heitti sillä


kalkkia kiven alle. Useita toisia kehoitettiin tekemään samoin, ja
kohta laskettiin kivi. Senjälkeen ojennettiin Charlottalle ja muille
vasara, jotta he nimenomaisesti siunaisivat kiven ja perustuksen
liiton kolmesti kopahduttamalla. Muuraajan työ, tästä lähin tosin
taivasalla suoritettu, jatkoi puhuja, ei tosin aina tapahdu salassa,
mutta kumminkin salattuna olemaan. Säännöllisesti rakennettu
perustus peitetään, ja seinämuuritkaan, jotka rakennamme päivän
aikaan, eivät lopulta enää johda mieleen meitä. Kivenhakkaajan ja
kuvanveistäjän työt ovat silmiinpistävämmät, ja meidän täytyy
hyväksyä vielä sekin, että rappaaja kerrassaan pyyhkii käsiemme
työn jäljet näkymättömiin anastaen teoksemme omaksensa sitä
sivelemällä, silittämällä ja värittämällä.

Kenelle siis olisikaan tärkeämpää suorittaa työnsä niin


kunnollisesti, ettei hän itsekään keksi siitä moitteen sijaa, kuin
muuraajalle? Kenellä olisi enemmän syytä olla itsetietoinen? Kun
rakennus on valmis, tanner tasoitettu ja kivetty, ulkosivu koristuksilla
peitetty, tunkeutuu hänen katseensa yhä kaiken kuoren läpi ja
havaitsee vieläkin ne säännölliset ja huolellisesti suoritetut liitokset,
joita kokonaisuus saa kiittää olemassaolostansa ja
kestävyydestänsä.

Mutta samoinkuin jokaisen pahantekijän täytyy pelätä rikoksensa


kaikista varokeinoista huolimatta tulevan ilmi, samoin täytyy sen,
joka on salaa tehnyt hyvää, odottaa sen tulevan tunnetuksi vastoin
hänen tahtoansa. Senvuoksi teemme tästä kivestä samalla
muistokiven. Näihin hakattuihin syvennyksiin upotetaan erinäisiä
esineitä todistukseksi kaukaisille jälkipolville. Nämä metalliset
umpeenjuotetut kotelot sisältävät kirjallisia tiedonantoja, näihin
metallilevyihin on kaiverrettu kaikenlaista merkittävää, näissä
kauniissa lasipulloissa on parasta vanhaa viiniä, joiden syntymävuosi
on ilmoitettu, lisäksi on tässä vielä erilaisia tänä vuonna lyötyjä
rahoja: kaiken tämän on meille toimittanut aulis rakennuttajamme.
Onpa tässä vielä vapaatakin sijaa, jos jonkun vieraan tai katselijan
tekee mieli luovuttaa jotakin jälkipolville.

Hetkisen vaiti oltuansa puhuja silmäili ympärillensä, mutta kuten


sellaisissa tilaisuuksissa yleensä käy, kukaan ei ollut varautunut,
kaikki olivat hämillänsä, kunnes vihdoin eräs nuori hilpeä upseeri
aloitti virkkaen: Jos minun on annettava lisäksi sellaista, mitä tähän
aarteistoon ei vielä ole laskettu, niin leikkaanpa univormustani pari
nappia, jotka luullakseni nekin ansaitsevat joutua jälkipolvien
nähtäviin. Sanottu ja tehty! Nyt johtui monen mieleen samantapaista.
Naisväki jouduttihe laskemaan pieniä hiuskampojansa; hajupulloja ja
muita korujakaan ei säästelty. Ottilia yksin epäröi, kunnes Eduardin
ystävällinen huomautus käänsi hänen huomionsa kaikkien
luovutettujen ja kiven uurroksiin sijoitettujen esineiden katselusta.
Sitten hän irroitti kaulaltansa ne kultaiset vitjat, joissa hänen isänsä
kuva oli riippunut, ja laski sen hellävaroen toisten kalleuksien
joukkoon. Senjälkeen Eduard huolehti hieman kiireellisesti siitä, että
tiivissaumainen kansi kohta painettiin paikoillensa ja iskostettiin
kiinni.

Nuori kisälli, joka oli ottanut tehtävään tehokkaimmin osaa,


paneutui jälleen puhujaksi ja jatkoi: Me perustamme tämän kiven
ikuisiksi ajoiksi, tämän talon nykyisten ja tulevaisten omistajien
kaikkein pisimmän nautinnon turvaamiseksi. Mutta koska olemme
ikäänkuin aarretta kätkemässä, ajattelemme samalla, tässä kaikkein
perusteellisimmassa toimessa, inhimillisten asioiden katoavaisuutta,
ajattelemme sitä mahdollisuutta, että tämä lujasti sinetöity kansi
voidaan jälleen avata, mikä saattanee tapahtua ainoastaan siten,
että kaikki se, mitä emme ole vielä rakentaneetkaan, joutuu jälleen
hävitetyksi.

Mutta juuri siinä tarkoituksessa, että tämä rakennus valmistuisi,


ohjaamme ajatuksemme pois tulevaisuudesta, takaisin nykyisyyteen!
Vietettyämme tämän päivän juhlan tahdomme heti ryhtyä työtämme
jatkamaan, jottei yhdenkään meidän laskemallamme perustalla
edelleen työskentelevän ammatin tarvitse viettää vapaapäiviä, jotta
rakennus kohoaa nopeasti korkeuteen ja valmistuu ja jotta
ikkunoista, joita ei vielä ole olemassa, voisi iloiten silmäillä
ympäristöä talon herra omaisinensa ja vierainensa. Heidän ja
kaikkien läsnäolevien terveydeksi olkoon tämä malja juotu!

Samassa hän tyhjensi yhdellä siemauksella kauniisti hiotun


lasimaljan ja heitti sen ilmaan, sillä ilon ylenpalttisuutta ilmaistaan
särkemällä se juoma-astia, jota riemuitessa käytetään. Mutta tällä
kertaa kävi toisin: lasi ei pudonnutkaan maahan, vaikka ei mitään
ihmettäkään tapahtunut.

Jotta rakentaminen edistyisi, oli näet vastakkaisessa kulmassa jo


alettu kohottaa seinämuuria ja sitä varten pystytetty telineet, niin
korkeat kuin asia vaati.

Työmiesten etua silmälläpitäen oli telineet tätä juhlaa varten


varustettu laudoilla ja päästetty ylös koko joukko katselijoita. Sinne
lensi lasi, ja sen sieppasi käteensä eräs, joka piti tätä sattumaa
hyvänä enteenä itsellensä. Vihdoin hän sitä näytteli antamatta pois
kädestänsä, ja sen kyljessä nähtiin kirjaimet E ja O siroin kiemuroin
toisiinsa yhdistettyinä: se oli eräs nuorta Eduardia varten aikoinansa
valmistettuja laseja.

Telineet olivat jälleen tyhjät, ja kepeimmät vieraat nousivat ylös


silmäilläkseen ympärillensä. He eivät osanneet kylliksensä ylistää
joka puolelle avautuvaa kaunista näköalaa, sillä mitä kaikkea
keksiikään se, joka korkealla paikalla oltaessa seisoo vaikkapa vain
yhtäkin kerrosta korkeammalla. Tasankomaan suunnalla ilmestyi
näkyviin useita uusia kyliä, joen hopeajuova oli selvästi
havaittavissa, olipa joku näkevinänsä pääkaupungin tornejakin.
Toisaalla, metsäisten kukkulain takana, kohosivat etäisen vuoriston
sinervät huiput, ja lähiseutu näkyi kokonaisuudessaan. Nyt pitäisi
vielä, huudahti eräs, yhdistää nuo kolme lampea yhdeksi järveksi;
silloin sisältyisi näköalaan kaikki, mikä on suurta ja toivottavaa.

Se kai voitaisiin tehdä, virkkoi kapteeni, sillä lammet ovat


aikoinaan muodostaneet yhden ainoan vuorijärven.

Minä pyydän vain säästämään plataani- ja poppeliryhmääni, joka


kasvaa kauniina keskimmäisen lammen rannalla, sanoi Eduard.
Nähkääs, — virkkoi hän sitten kääntyen puhuttelemaan Ottiliaa,
jonka hän johti muutamia askelia eteenpäin, viitaten alas laaksoon,
— nuo puut minä olen itse istuttanut.

Kuinka kauan ne ovatkaan siinä jo kasvaneet? kysyi Ottilia.


Suunnilleen yhtä kauan kuin te olette maailmassa ollut, vastasi
Eduard. Niin, rakas lapseni, kun minä ne istutin, lepäsitte te vielä
kehdossanne.

Seurue palasi linnaan. Aterian päätyttyä se kutsuttiin


kävelyretkelle läpi kylän, jotta olisi tilaisuutta sielläkin tarkastella
uusia rakennelmia. Kapteenin toimesta olivat asukkaat kerääntyneet
asuntojensa edustalle. He eivät seisoneet riveissä, vaan perheittäin
luontevasti ryhmittyneinä, osaksi illan askareissa, osaksi lepäillen
uusilla raheilla. Heille määrättiin mieluisaksi velvollisuudeksi uudistaa
tämä puhtaus ja järjestys ainakin kaikkina pyhä- ja juhlapäivinä.

Tuttavallista seuramieltä, joka idättää sellaista taipumusta kuin


ystäviemme kesken, suurempi seura voi vain epämieluisasti häiritä.
Kaikki neljä olivat jälleen tyytyväiset jäädessään yksin suureen saliin.
Kotoinen tunne kuitenkin hieman kärsi, kun Eduardille tuotu kirje
ilmoitti huomenna saapuvan uusia vieraita.

Kuten otaksuimme, huudahti Eduard Charlottalle: kreivi ei jää


tulematta, hän saapuu huomenna.

Silloinpa ei paronitarkaan ole kaukana, virkkoi Charlotta.

Eipä suinkaan! vastasi Eduard. Hän saapuu hänkin huomenna


taholtansa.
He pyytävät yösijaa ja aikovat ylihuomenna matkustaa yhdessä
eteenpäin.

Niin ollen meidän täytyy ajoissa ryhtyä toimenpiteisiin, Ottilia!


sanoi
Charlotta.
Miten käskette asian järjestää? kysyi Ottilia.

Charlotta antoi ylimalkaiset ohjeet, ja Ottilia poistui.

Kapteeni tiedusteli mainittujen henkilöiden välistä suhdetta, jonka


hän tunsi vain suurimpia piirteitä myöten. He olivat aikoinansa,
kumpikin jo naimisissa ollen, intohimoisesti rakastuneet toisiinsa.
Kahta avioliittoa ei käynyt häiritseminen huomiota herättämättä;
ajateltiin avioeroa. Paronittarelle se oli onnistunut, kreiville ei. Heidän
täytyi näön vuoksi erota toisistansa, mutta heidän suhteensa säilyi,
ja jos he eivät voineetkaan talvisin olla yksissä pääkaupungissa, niin
he korvasivat asian kesäisin huviretkillä ja kylpylaitoksissa. He olivat
kumpikin hieman vanhemmat kuin Eduard ja Charlotta, ja kaikki
olivat likeisiä ystäviä varhemmilta hovissaoloajoilta. Hyvät suhteet oli
yhä säilytetty, vaikka ei kaikkia ystävien toimia voitukaan hyväksyä.
Ainoastaan tällä kerralla heidän tulonsa oli Charlottan mielestä
tavallaan sopimaton, ja jos hän olisi tarkoin tutkinut, minkätähden,
olisi hän huomannut varsinaisena syynä olevan Ottilian. Hyvän,
puhtaan lapsen ei pitänyt niin varhain nähdä sellaista esimerkkiä.

He olisivat tosiaankin voineet pysyä poissa vielä pari päivää, sanoi


Eduard Ottilian astuessa jälleen huoneeseen, kunnes olemme
saaneet järjestetyksi ulkotilan myynnin. Kauppakirja on valmis;
toinen jäljennös on minulla tässä, mutta toista vielä puuttuu, ja vanha
kanslistimme on pahoin sairastunut. Kapteeni tarjoutui työn
suorittamaan, samoin Charlotta, mutta ehdotuksia ei hyväksytty
ilman muuta.

Antakaa se vain minulle! huudahti Ottilia hieman hätäisesti.

Sinä et saa sitä valmiiksi, sanoi Charlotta.


Minun pitäisi se tosiaankin saada varhain ylihuomisaamuna, ja
siinä on paljon työtä, sanoi Eduard.

Se on oleva valmis, huudahti Ottilia pidellen jo papereita


käsissään.

Seuraavana aamuna, kun he olivat yläkerrassa tähystelemässä


odotettuja vieraita, joita vastaan he välttämättä tahtoivat lähteä,
virkkoi Eduard: Kuka se tuolla ratsastelee hitaasti tännepäin?
Kapteeni kuvaili tarkemmin ratsastajan ulkonäköä. Hän se siis
sittenkin on, sanoi Eduard, sillä yksityiskohdat, jotka sinä näet
paremmin kuin minä, sopivat sangen hyvin minun varsin selvästi
näkemääni kokonaisuuteen. Se on Mittler. Mutta mistä johtuukaan,
että hän ratsastaa hitaasti ja noin hitaasti?

Ratsastaja tuli lähemmäksi ja oli tosiaankin Mittler. Hänet otettiin


ystävällisesti vastaan, kun hän hitaasti asteli portaita ylös. Miksi ette
tullut eilen? huusi hänelle Eduard.

Minä en pidä äänekkäistä juhlista, vastasi Mittler. Mutta nyt minä


tulen viettämään kerallanne kaikessa rauhassa ystävättäreni
syntymäpäivän jälkijuhlaa.

Kuinka olettekaan saanut liikenemään niin paljon aikaa? kysyi


Eduard leikillänsä.

Vierailustani, jos se on teille jonkin arvoinen, saatte kiittää erästä


eilistä harkintaani. Minä iloitsin sydämestäni puolisen päivää eräässä
talossa, jossa olin rakentanut rauhan, ja sitten kuulin täällä
vietettävän syntymäpäivää. Voidaanpa sanoa, että käyttäydyt
itsekkäästi, ajattelin minä, jos iloitset aina vain niiden keralla, jotka
olet taivuttanut sopuun ja rauhaan. Miksi et iloitse joskus sellaisten
ystäviesi keralla, jotka rauhaa säilyttävät ja vaalivat? Sanottu ja
tehty! Tässä olen, päätökseni mukaan.

Eilen olisitte löytänyt täältä suuren seuran, nyt löydätte vain


pienen, sanoi Charlotta. Te tapaatte kreivin ja paronittaren, jotka ovat
hekin jo teitä askarruttaneet.

Neljän talonasukkaan keskeltä, jotka olivat keräytyneet tuon


omituisen, tervetulleen miehen ympärille, hän käännähti pois
ärtyisän vilkkaasti, heti etsien hattuansa ja ratsupiiskaansa. Turmion
tähti väikkyy yläpuolellani aina, jos kerrankin aion levätä ja olla
armelias itselleni! Mutta miksi pyrinkään pois luonnostani! Minun ei
olisi pitänyt tulla, ja nyt minut ajetaan pois. Niiden keralla minä en
tahdo jäädä saman katon alle, ja varokaa: he tuovat mukanansa
pelkkää onnettomuutta! Heidän olentonsa on kuin hapatus, jonka
tartunta yhä laajenee.

Häntä yritettiin suostutella, mutta turhaan. Se, joka loukkaa


aviosäätyä, huudahti hän, se joka sanoin, jopa teoinkin horjuttaa
koko siveellisen yhteiskunnan perustusta, joutuu tekemisiin
kanssani, ja ellen minä kykene saamaan häntä valtoihini, ei minulla
ole mitään tekemistä hänen kanssansa. Avioliitto on kaiken kulttuurin
alku ja huippu. Se tekee karkean leppoisaksi, ja
sivistyneimmälläkään ei ole mitään parempaa tilaisuutta osoittaa
sävyisyyttänsä. Sen tulee olla purkamaton, sillä se tuottaa niin paljon
onnea, ettei kaikki yksityinen onnettomuus siihen verrattuna merkitse
mitään. Ja miksi tahdotaankaan puhua onnettomuudesta?
Kärsimättömyys se ajoittain valtaa ihmisen, joka silloin suvaitsee
havaita itsensä onnettomaksi. Jos hän antaa tuokion vierähtää ohi,
niin hän vielä ylistää itseänsä onnelliseksi, että kauan säilynyt liitto
on yhä voimassa. Eroamiseen ei ole mitään riittävää syytä.
Inhimillinen olotila on asetettu niin korkealle kärsimykseen ja iloon,
ettei voi ollenkaan arvata, mitä aviopuolisot tulevat olemaan
toisillensa velkaa. Velka on äärettömän suuri; ja iäisyys yksin
kykenee sen vähitellen maksamaan. Epämukavaa se saattaa
useinkin olla, sen minä kyllä uskon, ja se on aivan oikein. Eikö meillä
ole aviopuolisonamme myöskin omatunto, josta usein haluaisimme
päästä eroon, koska se on epämukavampi kumppani kuin mies tai
vaimo konsanaan?

Niin hän puheli vilkkaasti ja olisi kaiketi vielä kauankin puhunut,


elleivät ajomiesten torvet olisi ilmoittaneet vieraita, jotka ajoivat kuin
sopimuksesta yht'aikaa linnanpihaan, kumpikin taholtansa.
Talonväen kiiruhtaessa heitä vastaan Mittler piiloutui, antoi tuoda
hevosensa majatalon edustalle ja ratsasti nyrpeissään pois.
KYMMENES LUKU.

Vieraat oli lausuttu tervetulleiksi ja viety sisään; he iloitsivat


saadessaan jälleen astua taloon, jossa olivat aikaisemmin viettäneet
monta hyvää päivää ja jota eivät olleet pitkään aikaan nähneet.
Erittäin mieluinen oli myös ystäville heidän läsnäolonsa. Sekä kreivi
että paronitar voitiin lukea niiden kookkaiden, kauniiden henkilöiden
joukkoon, jotka tekevät melkeinpä edullisemman vaikutuksen keski-
iällänsä, kuin nuoruudessaan, sillä jos heiltä puuttuukin jotakin ensi
kukkeudestansa, herättävät he nyt mieltymyksen ohella ehdotonta
luottamusta. Tämäkin pari osoittautui yhä varsin miellyttäväksi.
Heidän vapaa elämäänsuhtautumistapansa, heidän hilpeytensä ja
näennäinen luontevuutensa tarttui kohta kaikkiin, seurustelun
pysytellessä ehdottoman säädyllisyyden rajoissa minkäänlaisen
pakon silti tuntumatta.

Tämä vaikutus ilmeni heti seurueessa. Äskensaapuneet, jotka


tulivat suoraan suuresta maailmasta, kuten saattoi havaita yksin
heidän vaatteistansa, matkatavaroistansa ja koko asustansa,
muodostivat tavallansa ystäviemme, heidän maalaisen ja salaisesti
intohimoisen tilansa vastakohdan, joka kuitenkin pian tasoittui
vanhojen muistojen ja nykyhetkisen myötätunnon toisiinsa yhtyessä
ja vilkkaan keskustelun nopeasti liittäessä kaikki toisiinsa.
Ei kumminkaan kestänyt kauan, kun jo tapahtui ryhmittymistä.
Naiset vetäytyivät omaan kylkirakennukseensa ja löysivät siellä,
toisillensa erinäisiä salaisuuksia uskoen ja samalla alkaen tarkastella
aamupukujen, hattujen ja muun sellaisen uusimpia muoteja ja
kuoseja, riittävästi puheenaihetta; miehet taas hyörivät uusien
ajoneuvojen ja esille talutettujen hevosten ympärillä ryhtyen heti
kauppa- ja vaihtopuuhiin.

Vasta aterialla oltiin jälleen yhdessä. Oli muutettu vaatteita, ja


nytkin esiintyi vastatullut pari eduksensa. Kaikki, mitä heillä oli
yllänsä, oli uutta ja ikäänkuin ennennäkemätöntä ja kuitenkin
käyttämisen nojalla totunnaiseksi ja mukavaksi muuttunutta.

Keskustelu oli vilkasta ja vaihtelevaa; sellaisten henkilöiden


läsnäollessa näet näyttää herättävän mielenkiintoa kaikki,
olematonkin. Käytettiin ranskankieltä, jotteivät palvelijat voisi
keskustelua seurata, ja kosketeltiin vallattoman miellyttävästi
korkeiden ja keskinkertaisten seurapiirien elämänsuhteita. Erääseen
kohtaan keskustelu takertui pitemmäksi ajaksi kuin oikeastaan oli
soveliasta. Charlotta tiedusteli erästä nuoruudenystävätärtä ja kuuli
hieman oudoksuen, että hänen avioliittonsa tulisi aivan pian
purkautumaan.

On ikävää, virkkoi Charlotta, kun luulee poissa olevien ystäväinsä


tulevan hyvin toimeen, rakastetun ystävättären olevan turvattuna, ja
saakin äkkiarvaamatta kuulla, että heidän kohtalonsa on häilymässä
ja että heidän on jälleen lähdettävä uusille ja kenties taaskin
epävarmoille elämänpoluille.

Oikeastaan olemme itse syypäät joutuessamme sellaisen


yllätyksen uhreiksi, lausui kreivi. Meidän tekee mieli kuvitella
maalliset asiat ja erikoisesti myöskin aviolliset liitot erittäin kestäviksi,
ja mitä viimeksimainittuun kohtaan tulee, viettelevät huvinäytelmät,
joita alinomaa näemme esitettävän, sellaisiin luulotteluihin, jotka
eivät vastaa elämän todellisuutta. Näytelmässä meille esitetään
naimisiinmeno useita näytöksiä täyttävien esteiden takaisena
äärimmäisenä päämääränä, ja sinä hetkenä, jolloin se saavutetaan,
laskeutuu esirippu, ja hetkellinen tyydytys jää soimaan
mielessämme. Elämässä on toisin laita: siinä näytellään yhä
edelleen, ja kun esirippu jälleen kohoaa, ei tahdota mielellään enää
mitään nähdä eikä kuulla.

Niin huonosti ei asian laita liene, virkkoi Charlotta hymyillen, koska


näemme sellaistenkin henkilöiden, jotka ovat mainitusta teatterista
eronneet, mielellänsä jälleen haluavan esittää siinä jotakin osaa.

Sitä ei sovi moittia, sanoi kreivi. Uuden osan voi varsin hyvin ottaa
esitettäväksensä, ja kun tuntee maailman, oivaltaa varsin hyvin, että
aviosäädyn jossakin määrin vaikeakäänteinen luonne johtuu sekin
yksinomaan ikuiseksi määrätystä kestosta keskellä maailman suurta
liikkuvaisuutta. Eräs ystävistäni, joka hyväntuulisena enimmäkseen
laati uusia lakiehdotuksia, väitti, että avioliitto olisi aina solmittava
viideksi vuodeksi. Hän huomautti, että siinä oli kaunis, pariton, pyhä
luku ja että siinä ajassa juuri ehtisi oppia toisensa tuntemaan, saada
aikaan muutamia lapsia, riitaantua, ja mikä kaikkein parasta: tehdä
jälleen sovinto. Hänellä oli tapana huudahtaa: Kuinka onnellisesti
sujuisivatkaan ensimmäiset ajat! Ainakin pari kolme vuotta kuluisi
sangen iloisesti. Sitten tuntuisi kaiketi toisesta asianosaisesta
tärkeältä saada suhde kestämään kauemmin, ja hyväntahtoisuus
lisääntyisi, mitä lähemmäksi irtisanomisaikaa saavuttaisiin.
Välinpitämättömän, vieläpä tyytymättömänkin asianosaisen mielen
sellainen käytös lepyttäisi, jopa valloittaisikin. Ajan juoksu unohtuisi,
niinkuin hyvässä seurassa unohtuvat tunnit, ja erittäin mieluisa olisi
yllätys, kun vasta määräajan kuluttua havaittaisiin, että se on jo
kaikessa hiljaisuudessa pitennetty.

Vaikka tuo kuulostikin sangen sievältä ja sukkelalta, ja vaikka


Charlotta hyvin tiesi tähän leikkipuheeseen voitavan sisällyttää syvää
moraalista tarkoitusta, eivät sellaiset lausunnot, varsinkaan Ottilian
vuoksi, olleet hänelle mieluisat. Hän tiesi varsin hyvin, ettei mikään
ole vaarallisempaa kuin liian vapaa keskustelu, joka käsittelee
rangaistavaa tai puolittain rangaistavaa olotilaa yleisenä, tavallisena,
jopa kiitettävänäkin, ja siihen ryhmään kuuluu epäilemättä kaikki,
mikä loukkaa avioliittoa. Senvuoksi hän yritti neuvokkaalla tavallansa
suunnata keskustelua toisaalle. Kun se ei onnistunut, pahoitteli hän
itseksensä, että Ottilian hyvä tarjoilujärjestys teki hänelle
mahdolliseksi pysyä koko ajan läsnä. Levollinen ja tarkkaavainen
neito osasi katsein ja viittauksin antaa määräyksiä hovimestarille,
joten kaikki sujui mitä parhaiten, vaikka liveripukuisten joukossa oli
pari uutta, tottumatonta palvelijaa.

Niin jatkoi kreivi, joka ei huomannut Charlottan suistamisyritystä,


esitystänsä näistä asioista. Hän, joka ei muuten ollut tottunut
keskustelussa ketään rasittamaan, tunsi tämän asian liiaksi
rasittavana sydämellänsä, ja ne vaikeudet, joita eron saaminen
hänelle itsellensä aiheutti, herättivät hänessä katkeruutta koko
avioliittoa kohtaan, johon hän kuitenkin paronittaren kanssa
innokkaasti pyrki.

Samainen ystävä, jatkoi hän, esitti vielä erään toisenlaisen


lakiehdotuksen. Avioliitto oli julistettava purkamattomaksi ainoastaan
siinä tapauksessa, että molemmat tai ainakin toinen asianosainen on
kolmansissa naimisissa. Sellainen henkilö näet tunnustaa
eittämättömästi pitävänsä avioliittoa välttämättömän tarpeellisena.
Sitäpaitsi on jo ilmennyt, kuinka hän edellisissä liitoissansa on
käyttäytynyt ja onko hänessä omituisuuksia, jotka useasti antavat
aihetta eroon suuremmassa määrässä kuin huonot ominaisuudet.
On siis molemmin puolin otettava toisistansa selkoa, varottava sekä
naineita että naimattomia, koska ei voi tietää, miten saattaa käydä.

Se varmaan suuresti lisäisi seurapiirien mielenkiintoa, virkkoi


Eduard, sillä niin on tosiaankin laita, ettei nyt, kun olemme
naimisissa, kukaan tiedustele hyveitämme enempää kuin
puutoksiammekaan.

Sellaisen järjestyksen vallitessa, puuttui paronitar hymyillen


puheeseen, olisi herttainen isäntäväkemme jo onnellisesti noussut
kaksi askelmaa ja voisi varustautua kolmanteen.

Heidän on käynyt hyvin, sanoi kreivi: täällä on kuolema ottanut


hyväntahtoisesti suorittaaksensa sen, mitä konsistoriot yleensä
tekevät vain vastahakoisesti.

Jätetään vainajat rauhaan, virkkoi Charlotta melkein vakavin


katsein.

Miksi niin, kysyi kreivi, kun voi muistella heitä kaikella kunnialla.
He tyytyivät vaatimattomina muutamaan vuoteen jättäen
korvaukseksi kaikkinaista hyvää.

Kunhan vain, virkkoi paronitar huokausta pidättäen, ei sellaisissa


tapauksissa täytyisi uhrata elämänsä parhaita vuosia.

Niinpä kyllä, myönsi kreivi. Täytyisi joutua sen johdosta


epätoivoon, ellei maailmassa yleensäkin vain harva asia johtaisi
toivottuun tulokseen. Lapset eivät täytä mitä lupaavat, nuoret
harvoin, ja jos he pitävät sanansa, niin maailma pettää heidät.

Charlotta, joka iloitsi keskustelun käänteestä, virkkoi hilpeästi:


Entä sitten! Täytyyhän meidän muutenkin aivan pian tottua
nauttimaan hyvää vain kappaleittain ja osittain.

Epäilemättä, virkkoi kreivi. Te olette kumpikin nauttinut ihania


aikoja. Muistellessani niitä vuosia, joina te ja Eduard olitte hovin
kaunein pari, sanon itselleni, ettei niin mainioista ajoista eikä niin
loistavista henkilöistä ole enää puhettakaan. Kun te molemmat
tanssitte yhdessä, suuntautuivat kaikkien katseet teihin, ja te, jotka
kuvastelitte itseänne vain toisissanne, olitte kaikkien toiveiden
esineinä.

Koska sangen moni asia on muuttunut toiseksi, sanoi Charlotta,


niin voinemme vaatimattomina kuunnella kauniita lausumianne.

Eduardia olen sentään usein hiljakseni moitiskellut, sanoi kreivi,


moitiskellut itsepintaisuuden puutteesta. Hänen omituiset
vanhempansa olisivat kaiketi lopulta myöntyneet, ja kymmenen
varhaisen vuoden voittaminen ei olisi ollut mikään vähäpätöinen
asia.

Minun täytyy häntä puolustella, puuttui paronitar puheeseen.


Charlotta ei ollut aivan syytön, ei aivan vapaa kaikesta ympärillensä
katselemisesta, ja vaikka hän sydämestänsä rakastikin Eduardia ja
määräsi hänet salaa puolisoksensa, näin kuitenkin, kuinka ankarasti
hän häntä toisinaan kiusasi, siinä määrin, että hänet voitiin helposti
pakottaa onnettomaan päätökseen: matkustamaan, poistumaan,
vieraantumaan Charlottasta.
Eduard nyökkäsi paronittarelle ja näytti olevan kiitollinen hänen
puolustavista sanoistansa.

Minun on vielä lisättävä eräs seikka, Charlottan hyväksi, jatkoi


paronitar. Se mies, joka silloin häntä kosi, oli jo pitkät ajat osoittanut
vakaata taipumusta ja oli, kun häneen lähemmin tutustuin,
kieltämättä rakastettavampi kuin te toiset haluatte myöntää.

Rakas ystävä, virkkoi kreivi hieman vilkkaasti, tunnustakaamme


vain, ettei hän ollut teille ihan yhdentekevä ja että Charlottalla oli
syytä pelätä teitä enemmän kuin ketään muuta. Minä pidän erittäin
kauniina piirteenä naisissa sitä, että he säilyttävät kiintymyksensä
johonkin mieheen uskomattoman kauan, eivätpä salli minkäänlaisen
eronkaan sitä häiritä tai hävittää.

Tuo ominaisuus on miehissä kenties vieläkin voimakkaampi,


vastasi paronitar. Ainakin mitä tulee teihin, kreivi hyvä, olen
huomannut, ettei kukaan vallitse teitä suuremmassa määrässä kuin
nainen, jolle olette aikaisemmin ollut suosiollinen. Niinpä olen
nähnyt, että olette sellaisen henkilön pyynnöstä vaivautunut ja
toimittanut asioita, joihin kulloisenkin hetken ystävätär tuskin olisi
kyennyt teitä innostamaan.

Sellaisen moitteen saanee pitää hyvänänsä, virkkoi kreivi, mutta


mitä tulee Charlottan ensimmäiseen puolisoon, en voinut häntä
sietää, koska hän hajoitti minulta kaikkein kauneimman parin,
todellakin toisillensa määrätyt henkilöt, joiden ei olisi tarvinnut,
kerran toisiinsa liityttyänsä, viittä vuotta kartella toisiansa eikä
odotella toista tai kolmatta liittoa.

Me yritämme korvata mitä olemme laiminlyöneet, sanoi Charlotta.


Siinä tapauksessa teidän on pidettävä siitä huolta, virkkoi kreivi.
Teidän ensimmäiset naimiskauppanne, jatkoi hän tuimanlaisesti,
olivat oikeastaan vihattavaa lajia, ja ikävä kyllä on naimiskaupoissa
yleensäkin — suokaa anteeksi käyttämäni voimallinen sana —
jotakin kömpelöä: ne pilaavat kaikkein herkimmät suhteet, ja se
johtuu kuitenkin oikeastaan vain siitä tökeröstä varmuudesta, jota
ainakin toinen asianosainen pitää jossakin määrin etunansa ja
ansionansa. Kaikki on itsestäänselvää, ja liitto näyttää solmitun vain
sitä varten, jotta asiat tästä puoleen saavat mennä menojansa.

Kreivin ehdittyä tuon sanomaan käytti Charlotta, joka tahtoi kerta


kaikkiansa lopettaa tämän keskustelun, rohkeata käännettä. Se
onnistui. Puhelu muuttui ylimalkaisemmaksi, molemmat aviopuolisot
ja kapteeni voivat ottaa siihen osaa; Ottiliankin oli lausuttava jotakin,
ja jälkiruokaa nautittaessa vallitsi mitä parhain mieliala, jota
erikoisesti koroitti siroissa säiliöissä lepäävä hedelmäin runsaus ja
loistomaljakkoihin kauniisti sijoitetun kukkapaljouden kirjava
väriloisto.

Puhe sattui myös uusiin puistorakennelmiin, joita käytiin kohta


aterialta päästyä katsomassa. Ottilia jäi pois mainiten syyksi
talousaskareita; itse asiassa hän ryhtyi jatkamaan jäljennöstyötänsä.
Kreivin kanssa jutteli kapteeni, ja myöhemmin liittyi Charlotta heidän
seuraansa. Kun he olivat ehtineet kukkulalle ja kapteeni riensi
kohteliaasti alas hakemaan karttaa, sanoi kreivi Charlottalle: Tuo
mies miellyttää minua tavattomasti. Hänen tietonsa ovat hyvät ja
yhtenäiset. Samoin näyttää hänen toimintansakin vakaalta ja
johdonmukaiselta. Se, mitä hän täällä suorittaa, merkitsisi paljon
jossakin korkeammassa vaikutuspiirissä.
Kuullessaan kapteeniin kohdistuvan ylistyksen Charlotta tunsi
harrasta iloa. Hän malttoi kuitenkin mielensä ja vahvisti sanotun
todeksi rauhallisin ja selvin lausein. Mutta kovin hän hämmästyi, kun
kreivi jatkoi: Tämä tuttavuus sattuu erittäin sopivaan aikaan. Minä
tiedän paikan, johon mies sopii mainiosti, ja voin häntä suositellen ja
hänelle onnea tuottaen samalla saattaa erään korkean ystäväni mitä
suurimpaan kiitollisuudenvelkaan.

Charlotta seisoi kuin ukkosen iskemänä. Kreivi ei huomannut


mitään, sillä naiset, jotka ovat tottuneet aina itseänsä hillitsemään,
säilyttävät erinomaisimmissakin tapauksissa näennäisesti malttinsa.
Kuitenkin jäi häneltä kuulematta, mitä kreivi sanoi jatkaessaan: Jos
olen varma asiastani, niin toimin ripeästi. Olen jo sommitellut kirjeen
mielessäni ja haluan sen kohta kirjoittaa. Te hankitte minulle
ratsastavan lähetin, jonka voin jo tänä iltana toimittaa matkaan.

Charlottan mieltä ahdisti. Kreivin suunnitelmien ja oman itsensä


yllättämänä hän ei voinut lausua sanaakaan. Onneksi kreivi selitteli
yhä edelleen aikeitansa, joiden suotuisuuden Charlotta liiankin hyvin
oivalsi. Kapteeni saapui oikeaan aikaan ja levitti kartan kreivin
nähtäviin. Kuinka toisin Charlotta nyt katselikaan ystäväänsä, jonka
tulisi menettämään! Tuskin nyökäten hän kääntyi pois ja riensi alas
sammalmajalle. Jo puolitiessä tulvahtivat hänen silmiinsä kyynelet, ja
nyt hän syöksyi pienen erakkoasumuksen ahtaaseen suojaan
antautuen kerrassaan sellaisen tuskan, intohimon ja epätoivon
valtoihin, jonka mahdollisuudesta hänellä muutamia silmänräpäyksiä
aikaisemmin ei ollut vähintäkään aavistusta.

Toisaalla oli Eduard kulkenut paronittaren keralla lampien


rannoille. Älykäs nainen, joka oli mielellään kaikesta selvillä,
huomasi pian, keskustelua sopivasti suuntaillen, että Eduard kovin
ylisteli Ottiliaa, ja osasi saada hänet vähitellen ilmaisemaan itsensä
siinä määrin, ettei lopulta jäänyt vähintäkään epäilystä: tässä ei ollut
kysymyksessä kehkeytyvä, vaan jo kypsynyt intohimo.

Naimisissa olevat naiset, nekin, jotka eivät toisistansa pidä, ovat


kuitenkin vaieten liitossa keskenänsä, varsinkin nuoria tyttöjä
vastaan. Tuollaisen kiintymyksen seuraukset selvisivät paronittaren
maailmaakokeneessa mielessä liiankin pian. Hän oli sitäpaitsi jo
saman päivän aamuna jutellut Charlottan kanssa Ottiliasta, oli
huomauttanut, ettei maallaoleskelua sopinut väittää tytölle
terveelliseksi, varsinkaan jos piti silmällä hänen hiljaista
luonnonlaatuansa, ja oli tarjoutunut viemään Ottilian kaupunkiin
erään ystävättärensä luo, joka hoiti erittäin huolellisesti ainoan
tyttärensä kasvatusta ja haeskeli vain tytölle hyväntapaista
kumppania, joka pääsisi toisen lapsen asemaan ja saisi nauttia
kaikkia etuja. Charlotta oli luvannut asiaa harkita.

Silmäys Eduardin tunteisiin kehitti nyt paronittaren aikeen


varmaksi päätökseksi, ja mitä nopeammin tuo tapahtui hänen
mielessänsä, sitä enemmän hän ulkonaisesti sukoili Eduardin
toivomuksia. Kukaan näet ei vallinnut olemustansa paremmin kuin
tämä nainen, ja sellainen erinomaisissa tapauksissa ilmenevä
itsensähillintä totuttaa meitä käsittelemään jokapäiväistäkin tapausta
teeskennellen, taivuttaa meitä, jotka siinä määrin hallitsemme
itseämme, ulottamaan valtaamme toistenkin yli, jotta se, mitä
ulkonaisesti voitamme, tavallansa meille korvaisi, mitä meiltä
sisäisesti puuttuu.

Tähän mielialaan liittyy tavallisesti jonkinlaista salaista


vahingoniloa, jonka esineenä on toisten epäselvyys, heidän tiedoton
ansaan astumisensa. Me emme iloitse ainoastaan nykyisestä
onnistumisesta, vaan samalla tulevaisesta, yllättävästä häpeään
joutumisesta. Niinpä oli paronitar kyllin ilkeä kutsuakseen Eduardin
ja Charlottan viininkorjuuseen kartanoonsa ja vastatakseen
Eduardille, joka tiedusteli, saisivatko he tuoda Ottilian mukanansa,
siten, että hän saattoi selittää sen mielin määrin omaksi eduksensa.

Eduard puhui jo ihastuneena kauniista seudusta, suuresta joesta,


kukkuloista, kallioista ja viinimaista, vanhoista linnoista,
vesimatkoista, viininkorjuun, viininpusertamisen y.m. riemuista
sydämensä yksinkertaisuudessa jo ennakolta ääneen iloiten siitä,
miten sellaiset kohtaukset tulisivat vaikuttamaan Ottilian raikkaaseen
mieleen. Samassa näkyi Ottilia saapuvan, ja paronitar pyysi nopeasti
Eduardia olemaan puhumatta mitään tästä suunnitellusta
syysretkestä, koska se, mistä kauan ennakolta iloitsee, yleensä jää
toteutumatta. Eduard lupasi, mutta pakotti hänet kulkemaan
nopeammin Ottiliaa vastaan kiiruhtaen lopulta itse herttaista tyttöä
kohti useita askeleita edellä. Hänen koko olemuksessaan ilmeni
sydämellinen ilo. Hän suuteli Ottilian kättä painaen siihen kimpun
nurmikukkia, jotka oli kulkiessaan poiminut. Paronitar tunsi tuota
katsellessaan mielensä melkein katkeraksi. Joskaan hän näet ei
saanut hyväksyä sitä, mikä tuossa kiintymyksessä saattoi olla
rangaistavaa, ei hän toisaalta suinkaan voinut suoda sen
rakastettavia ja miellyttäviä puolia tuolle tytölle, mitättömälle vasta-
alkajalle.

Kun oli istuuduttu yhdessä illallispöytään, vallitsi seurassa aivan


toinen tunnelma. Kreivi, joka oli jo ennen ateriaa kirjoittanut kirjeensä
ja lähettänyt sen matkaan, jutteli kapteenin kanssa, jonka hän nyt oli
toimittanut viereensä istumaan, udellen hänestä yhä enemmän tietoa
ymmärtäväiseen ja vaatimattomaan tapaan. Kreivin oikealla puolella
istuva paronitar ei siis saanut hänestä moneksikaan hetkeksi

You might also like