Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 3K vistas

    Tabla de Purificacion Ezimatica

    Cargado por

    mariocomf
    Este documento describe los métodos para medir la actividad enzimática, incluidos los ensayos enzimáticos continuos y discontinuos. También explica cómo completar una tabla de purificación enzimática que muestra cómo los diferentes pasos de purificación afectan la actividad, proteínas totales, rendimiento y pureza. Finalmente, proporciona un ejemplo de una tabla de purificación enzimática que ilustra estas métricas a través de varios pasos de purificación como precipitación con sulfato de amonio, cromatografía y concentración

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como DOCX, PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    Tabla de Purificacion Ezimatica

    Cargado por

    mariocomf
    3K vistas4 páginas
    Este documento describe los métodos para medir la actividad enzimática, incluidos los ensayos enzimáticos continuos y discontinuos. También explica cómo completar una tabla de purificación enzimática que muestra cómo los diferentes pasos de purificación afectan la actividad, proteínas totales, rendimiento y pureza. Finalmente, proporciona un ejemplo de una tabla de purificación enzimática que ilustra estas métricas a través de varios pasos de purificación como precipitación con sulfato de amonio, cromatografía y concentración

    Descripción original:

    Pasos para construir una tabla de purificacion

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    DOCX, PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    Este documento describe los métodos para medir la actividad enzimática, incluidos los ensayos enzimáticos continuos y discontinuos. También explica cómo completar una tabla de purificación enzimática que muestra cómo los diferentes pasos de purificación afectan la actividad, proteínas totales, rendimiento y pureza. Finalmente, proporciona un ejemplo de una tabla de purificación enzimática que ilustra estas métricas a través de varios pasos de purificación como precipitación con sulfato de amonio, cromatografía y concentración

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como DOCX, PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como docx, pdf o txt
    3K vistas4 páginas

    Tabla de Purificacion Ezimatica

    Cargado por

    mariocomf
    Este documento describe los métodos para medir la actividad enzimática, incluidos los ensayos enzimáticos continuos y discontinuos. También explica cómo completar una tabla de purificación enzimática que muestra cómo los diferentes pasos de purificación afectan la actividad, proteínas totales, rendimiento y pureza. Finalmente, proporciona un ejemplo de una tabla de purificación enzimática que ilustra estas métricas a través de varios pasos de purificación como precipitación con sulfato de amonio, cromatografía y concentración

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como DOCX, PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como docx, pdf o txt
    de 4

    Tablas de purificacin

    enzimtica



    ENZIMOLOGIA Y BIOCATALISIS

    INSTITUTO TECNOLOGICO Y DE ESTUDIOS SUPERIORES DE MONTERREY
    Enzimologa y Biocatlisis ITESM Chihuahua | 1

    Tabla de purificacin enzimtica
    Ensayo enzimtico
    Los ensayos enzimticos son mtodos de laboratorio para medir la actividad
    enzimtica. Estos son de vital para el estudio de la cintica de la enzima y la inhibicin
    de la enzima. Unidades de enzima: cantidades de enzimas o bien se puede expresarse
    como cantidades molares, como con cualquier otro producto qumico, o medida en
    trminos de actividad, en unidades de la enzima. (El-Yassin)

    Para resolucin de tablas de purificacin:

    o Actividad total: Actividad enzimtica x volumen total.
    o Protenas totales: Concentracin de protenas x volumen total.
    o Rendimiento parcial (%): (Actividad total etapa/Actividad total etapa anterior) x 100
    o Rendimiento total (%): (Actividad total etapa/Actividad total primera etapa) x 100
    o Purificacin parcial: Actividad especfica etapa/ Actividad especfica etapa anterior
    o Purificacin total: Actividad especfica etapa/ Actividad especfica primera etapa [1]


    Actividad
    total
    (mol/min)
    Proten
    a total
    (gr)
    Actividad
    especifica
    mol/(min
    mg)
    Veces de
    purificaci
    n
    Rendimiento
    %

    Homogenizado de tejido
    fresco

    Precipitacin con
    (NH4)2SO4

    DEAE - celulosa
    Concentracin y dilisis
    Sephadex G200
    DEAE - celulosa
    Cromatografa de
    afinidad

    Tabla 1.- tabla de purificacin enzimtica (Rodrguez Sotres)

    o DEAE celulosa permite incrementar la pureza, aunque se pierde actividad.
    o Concentracin y dilisis es un paso que no aade nada, pero tampoco se pierde
    la protena y que es necesario para poder aplicar la muestra a la siguiente
    columna.
    o Filtacin en gel por sephadex G200 mejora la pureza y mantiene un buen
    rendimiento.
    Enzimologa y Biocatlisis ITESM Chihuahua | 2
    o DEAE-celulosa, representa una mejora con respeto a la protena obtenida del
    paso de filtracin.
    o cromatografa de afinidad, se recupera una protena 900 veces ms pura que la
    original. (Rodrguez Sotres)

    Determinacin experimental de actividad enzimtica
    Los ensayos enzimticos se pueden dividir en dos grupos en funcin de su mtodo de
    muestreo:
    - Ensayos continuos, en los que el ensayo da una lectura continua de la actividad.
    - Ensayos discontinuos, donde se toman las muestras, la reaccin se detuvo y
    entonces la concentracin de sustratos / productos es determinada.

    Ensayos Continuos:
    - Mtodo espectrofotomtrico (ensayos colorimtricos) se basa midiendo un
    cambio en la cantidad de luz que absorbe la solucin.
    - Mtodo fluorimtrico (fluorescencia) utiliza la diferencia en la fluorescencia del
    sustrato de producto para medir la enzima reaccin. Estos ensayos son en
    general mucho ms sensibles que los ensayos espectrofotomtricos.
    - Calorimtrico (calor) es la medicin del calor liberado o absorbido por
    reacciones qumicas,
    - Quimioluminiscencia (emisin de luz) es la emisin de luz por una reaccin
    qumica, algunas reacciones enzimticas producen luz y esto puede medirse
    para detectar el producto formacin,
    - Dispersin de luz.

    Ensayos discontinuos:
    - Radiomtrica. Ensayos radiomtricos miden la incorporacin de radiactividad en
    sustratos o su liberacin a partir de sustratos.
    - Cromatogrfico. Medida de la formacin de producto mediante la separacin de
    la mezcla de reaccin en sus componentes mediante cromatografa. (El-Yassin)

    Referencias:

    [1] CTEDRA de BIOQUMICA. ENZIMOLOGA Y CINTICA ENZIMTICA. Recuperado
    de:
    http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/file.php/139/Guia_de_Problemas_de_Enzimologia
    _y_Cinetica_Enzimatica.pdf



    Enzimologa y Biocatlisis ITESM Chihuahua | 3
    El-Yassin. ENZYMES ASSAY. Recuperado de :
    http://www.comed.uobaghdad.edu.iq/uploads/Lectures/Biochemistry/biochemistry%20
    2012-
    2013/dr.%20hadaf/6Enzyme%20Assay2012%20(%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%AD%D8%A7%D
    8%B6%D8%B1%D9%87%20%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%AF%D8%B3%D9%87).pdf

    Rodrguez Sotres Rogelio. SOLUCIN A PROBLEMAS SOBRE EL TEMA DE ENZIMAS.
    Recuperado de: http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/webprobs/solucion.html

    También podría gustarte