Fijadores
Fijadores
Fijadores
FIJADORES HISTOLOGICOS
En anatoma patolgica el primero objetivo consiste en observar la estructura
histolgica lo ms parecido posible a como se encuentra en el organismo, por
lo tanto el rgano debe ser fijado despus de su extirpacin con el fin de que
se conserve lo ms veraz posible sus estructuras celulares,
Para de esta manera observar tanto el buen funcionamiento y estructuras que
componen del rgano as como la patologa de mismo.
Pea ello se debe mantener toda su estructura qumica lo ms inalterada
posible, de tal forma que sus componentes celulares mantengan las mismas
caractersticas que cuando dicho ser o tejido estaban vivos.
FIJADORES HISTOLOGICOS
Evitar
Dar
Debe
No
Debe
Tiempo de Accin
Alcohol
Acetona
Formalina
Mtodos de Fijacin
Existen
diferentes
formas de fijar los
tejidos dependiendo
del tipo de fijador
Fijadores Fsicos
Son aquellos que detiene la Autolisis y la
putrefaccin se basan en una congelacin muy
rpida del tejido o bien en la aplicacin de
calor elevado.
Se utilizan cuando los fijadores qumicos
alteran la estructuras que se desean observar o
cuando necesitamos una fijacin muy rpida,
Fijadores Fsicos
Los fijadores por mtodos fsicos se utilizan principalmente para
estudios morfolgicos y funcionales en los que se quiera mantener
intacta la estructura del tejido.
Fijadores Fsicos
CONGELACION
El procedimiento
para fijar tejidos
por congelacin
consiste en
utilizar
ISOPENTANO a
menos de 50C
como agente de
congelacin y
realizar una
fragmentacin
suficiente de la
muestra que se
vaya a congelar.
Normalmente se
preparan bloques
de no ms de 3
cm. cuadrados de
superficie y 3 mm
de espesor de
modo que el
proceso de
congelacin
instantnea no
requiera ms de
10 segundos.
Al enfriar tanto no
actan bacterias
ni enzimas y el
tejido se
endurece para
cortar estos
tejidos utilizamos
el micrtomo de
congelacin
Fijadores Fsicos
Criodesecacin
Consiste en someter al tejido a dos
procesos
el primero es la congelacin en
Nitrgeno lquido fijacin por
el segundo desecacin por sublimacin
directa del agua congelada
tiene una ventaja muy importante y es
que al eliminar totalmente el agua
tisular, paraliza la autolisis y produce
una conservacin indefinida
Criosustitucin:
es la sustitucin lenta y progresiva
del agua congelada de un tejido por
un lquido fijador
Tras la congelacin instantnea del
tejido con nitrgeno liquido o
isopentano a - 50C se coloca el
tejido congelado en el medio de
sustitucin, El cual esta formado por
una mezcla de alcohol etlico,
acetona y propiln- glicol., enfriado a
-40C,
El intercambio del agua de realizarse
dentro de un congelador para
procurarse que la temperatura se
mantenga
Fijadores Qumicos
Son lquidos que actan desnaturalizando e
insolubilizando las protenas tisulares, lo cual
bloquea la autolisis por inactivacin enzimtica
Adems algunos de estos lquidos fijadores
impiden el crecimiento bacteriano
o FORMALDEIDO:
En estado puedo se trata de un gas toxico y muy irritante para la mucosa, que se disuelve
con facilidad en agua. En este estado en concentraciones 35 y 40 % y estabilizado se
denomina formalina pura o formol
Alcohol Etlico
Ventajas y Desventajas
1.Preserva el glucgeno
2. Se emplea en las extensiones
citolgicas
3. Fija y deshidrata el tejido
4. Gran velocidad de Penetracin
5. Es un agente bactericida y por
lo tanto un buen conservante
Acetona
cido Actico:
cido Pcrico:
La eliminacin se realiza mediante lavados sucesivos en alcohol etlico al 7080% lo que es incompatible en la inclusin en celoidina.
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smico. en disolucin a 1 o 2 %,
Mezclas fijadoras
Mezclas fijadoras
Glutaraldehido:lquido oleoso en
comercios se encuentra en disolucin
al 25%. Mecanismo de actuacin es el
mismo que el formaldehdo y como
fijador se emplea en concentraciones
entre el 1 y el 3%
Mezclas fijadoras
Glutaraldehido:
Ventajas
Es el primer fijador de eleccin para microscopa electrnica porque tienen una
excepcional capacidad para preservar la morfologa celular.
Se emplea para fijacin de tejidos por perfusin en patologa.
Desventajas
Tiene velocidad de penetracin muy baja por lo que los fragmentos
de tejido no pueden tener volumen superior a unos pocos
milmetros cbicos.
Posee gran capacidad de retraccin y endurecimiento tisular que
impide prolongar el tiempo de fijacin por encima de las 3 horas.
Mezclas fijadoras
Mezclas fijadoras
Tetraxido de Osmio:
Ventajas
Es el mejor fijador estructural conocido, por eso se utiliza en microscopa
electrnica especficamente como 2 fijador.
Desventajas
Muy caro y descompone en preseca de luz por lo que hay que conservarlo en
recipientes opacos y oscuridad
Posee muy baja capacidad de penetracin tisular por lo que las muestras deben
tener muy poco volumen.
Es incompatible con formol y dificulta la coloracin nuclear, esto obliga a lavar
abundantemente los tejidos tras utilizarlo.
Fijador de Bouin (1897): muy utilizado en histologa embriolgica y para rganos genitales.
FORMOL
Asimismo, se lo recomienda cuando se desea colorear con cualquier tcnica tricrmica para la
diferenciacin de tejido muscular y conectivo. Las muestras se deben lavar con etanol a 70
750.0 ml
FORMALINA CONCENTRADA250.0 ml
C. ACTICO GLACIAL50.0 ml
PH. FINAL2.2
TIEMPO DE FIJACIN2 A 24 HORAS
Tiempo de fijacin 4 y 8
horas. Tras la fijacin es
necesario
lavar
abundantemente en agua
corriente
durante
unas
horas
DICROMATO POTASICO2.5gr.
SULFATO SDICO.1.0 gr.
AGUA DESTILADA 100.0 ml.
La denominacin B5 corresponde en
realidad a una modificacin de la de
Zenker.
CLORURO MERCRICO5gr.
DICROMATO POTSICO2.5 gr.
SULFATO SDICO 1 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P..100.0
ml.
La mayor utilidad de estos fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, para el diagnstico
morfolgico en las patologas del sistema linfoide y hematopoytico
Adems estas soluciones B5 zenker formol son los fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido
conectivo y para fibrin
Despus de la desparafinacin
hay que tratar los cortes durante
diez minutos con la solucin
yodada a continuacin lavar bien
en agua destilada
despus decolorar durante dos
minutos en la solucin en agua
corriente durante 10 minutos
antes de realizar la coloracin
Solucin de LUGOL:
YODURO POTSICO.2gr.
CRISTALES DE YODO .1gr.
ALCOHOL ETLICO 70-80%....100
ml.
Solucin de tiosulfato sdico:
TIOSULFATO SDICO.5gr.
AGUA DESTILADA100ml.
En el momento de usar de
debe agregar 5 ml de cido
actico glacial por cada 95
ml de la solucin stock
Composicin
Etanol absoluto 60 ml
Cloroformo 30 ml
Acido actico 10 ml
GR
AC
I
AS