Ingeniera Bioqumica II Cursada 2006 CULTIVO DISCONTINUO ALIMENTADO (BATCH ALIMENTADO) Otro modo de operar un biorreactor es empleando la tcnica

de batch alimentado (BA) o fed batch. Esta tcnica se define como un cultivo en batch donde se alimenta continuamente medio nutritivo fresco o alguno de sus componentes. Si el nutriente que se alimenta es el limitante del crecimiento, esta tcnica permite controlar la velocidad de crecimiento () del microorganismo. El BA es particularmente til en procesos en los que el crecimiento celular y/o la formacin de producto son sensibles a la concentracin del sustrato limitante, es decir cuando el rendimiento celular o la poductividad de la biomasa o del metabolito buscado se ven afectados. As, este mtodo se emplea cuando se quieren evitar fenmenos de inhibicin por sustrato y se requiere alcanzar una alta concentracin de biomasa. ESQUEMA

F(t) SR(t)

Vf, Xf VR = Vf - V0 V0, X0, S0

RESERVORIO

BOMBA BIORREACTOR

Donde F(t): caudal de alimentacin Sr(t):concentracin de sustrato de la alimentacin Vf: volumen final de trabajo Vo: volumen al inicio de la alimentacin Xo: concentracin de biomasa al inicio de la alimentacin So: concentracin de sustrato limitante al inicio de la alimentacin El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo que V o, Xo y So son las condiciones finales de dicho batch. Es posible elegir distintas condiciones de alimentacin, ya sea mediante el empleo de caudales variables (F = F(t)), o bien mediante la variacin de la concentracin de sustrato limitante (Sr=Sr(t)). En el caso del Trabajo Prctico se utilizar el sistema ms simple, es decir F=cte y Sr=cte. PRODUCCION DE BIOMASA: ECUACIONES Y DISEO El cultivo puede describirse matemticamente. La resolucin de las ecuaciones as obtenidas permitir calcular la evolucin de la biomasa durante el cultivo, la velocidad especfica de crecimiento, y la productividad. Asimismo se podrn determinar parmetros de diseo, tales como F y Sr. Para estudiar la evolucin de X durante el cultivo se deben plantear las ecuaciones de balance de materia. SUSTRATO acumulacin = suministro - consumo 1

(1)

d(S. V) x V = F SR dt Yx/s

En este caso el volumen no es constante, como ocurre en cultivos en batch o en continuo. Por lo tanto la expresin (1) quedar: (2) V
dS dV x V +S = F.S R dt dt Yx/s

La condicin final del batch es S = 0, pues, como se intenta controlar , S no puede ser saturante (recordar a Monod). Si S~ 0, dS/dt = 0, con lo que (2) se transforma en (3)F . SR x V
Yx/s =0

de aqu, y recordando que r x = . X (4) F . SR =

esta ecuacin indica que la velocidad de produccin de biomasa se acomoda a la velocidad de suministro de sustrato, es decir que r x puede controlarse externamente, modificando F y/o Sr. La ecuacin (3) es en realidad un lmite superior ya que dados , X y V, cualquier par de valores F, Sr que satisfagan la condicin

xV (4) F . SR Y x/ s
harn que la velocidad de crecimiento est limitada por la velocidad de alimentacin. Esta ecuacin (3) ser muy til en el momento de disear la alimentacin. BIOMASA La velocidad de acumulacin de biomasa ser: (5) o, reordenando, (6) rx =
1 d(xV) V dt
1 d (x V) Yx/s dt

d(xV) d (xV) = x V o bien = rx V dt dt

Si se reemplaza en (4) se obtiene (7) F . SR =

que indica que la velocidad de acumulacin de biomasa depende de la velocidad de alimentacin de sustrato. Integrando (7), se llega a (8) X V = xo Vo + Yx/s F SR t Uno de los objetivos planteados es conocer cmo vara la concentracin de biomasa con el tiempo. En cultivo en batch, al ser V = cte, X.V es proporcional a X. En BA V no es constante, sino que vara con el tiempo (F = dV/dt). Integrando se tiene (9) V = Vo + F t reemplazando en (8) y despejando X, se tendr
(10)

X=

x o Vo Y FS t + x/s R Ft + Vo Ft + Vo

expresin que describe la variacin de X con t a lo largo del cultivo alimentado. Puede darse el caso en que el aumento de V sea tal que haya un efecto de dilucin que provoque la disminucin de la concentracin de biomasa. As, puede ocurrir que la concentracin final alcanzada sea menor que la inicial, pero no as la cantidad total X.V. DISEO Se desea obtener una concentracin final de biomasa X f, con un volumen final Vf. El volumen total adicionado durante el BA ser:
(11)

Vf - Vo = F.t

donde tf es el tiempo total de alimentacin. Cuando t = t f, la ecuacin (8) se transforma en

XfVf = XoVo + Yx

SR F.tf

Reemplazando (11) en (12), y despejando Sr queda

SR =

X f V f X oVo Yx s (V f Vo )

La ecuacin (13) permite calcular la concentracin de sustrato limitante en el reservorio. Resta calcular F, cuyo valor debe ser tal que satisfaga la ecuacin (4). En particular, para t = 0 (inicio de la alimentacin )ser:
(14)

F SR

o X oVo
Yx
s

``

El valor de tf se calcula a partir de la ecuacin (11). NOTA: o puede ser igual a max si la alimentacin se inicia el final de la fase exponencial del batch. Debe destacarse que si F.S r fuera mayor que la velocidad de consumo de sustrato, habra una acumulacin de sustrato en el medio, y el crecimiento no sera limitado. Es interesante conocer la variacin de durante el batch alimentado. Recordando el balance de materia para la biomasa
d ( xV) 1 d ( xV) = xV = dt xV dt

d ( xV ) = Yx s FS R dt Por lo tanto se obtiene

= Yx s FS R

1 xV

Si se reemplaza (8) en (15), ser

= X V + FS Y t o o R x s

FS RYx

expresin que indica que disminuye con t a lo largo del batch alimentado. Puede representarse un cultivo en batch alimentado operando en las condiciones halladas.

X0'.V0' BATCH t = t0

S0 = 0 BATCH ALIMENTADO

Al obtener valores de Sr y F, se ha DISEADO una alimentacin para el cultivo en batch alimentado. El caso descrito hasta aqu tiene en cuenta que tanto F como S r sean constantes. Es claro que en caso de ser F = F(t) y/o Sr = Sr(t), dicha funcionalidad habr de ser tenida en cuenta para resolver las ecuaciones planteadas. COEFICIENTE DE MANTENIMIENTO CELULAR Los microorganismos requieren energa para mantener ciertas funciones especficas, tales como recambio de material celular, trabajo osmtico, movilidad, entre otros. Esto es decir que an cuando el crecimiento celular sea nulo (r x = 0) puede observarse cierto consumo de fuente de carbono y energa. As, puede escribirse una ecuacin para expresar la velocidad de consumo de la fuente de carbono y energa que tenga en cuenta dicho mantenimiento celular
(1)

rs =

rx + ms x Yx s

con rx = X

(2)

Esta es la famosa ecuacin lineal de consumo de sustrato descrita por Pirt, donde: ms : COEFICIENTE DE MANTENIMIENTO (g sustrato / g biomasa . hora) Yx/s : rendimiento terico (rendimiento obtenido si no hubiera consumo de fuente de carbono y energa para mantenimiento) El valor de Yx/s es mayor que Yx/s, siendo ste el nico posible de ser obtenido a partir de datos experimentales. El coeficiente ms puede variar en un amplio intervalo (0,01 - 0,1 g/g.h). ms aumenta con la temperatura, con el aumento de presin osmtica y con la fuerza inica. Es evidente que se debe tratar de trabajar en condiciones tales que m s sea bajo si se desea obtener un alto rendimiento en biomasa. Las ecuaciones que describen un cultivo en batch alimentado pueden adaptarse para el caso en que ms 0 (lo que tal vez sea ms real que considerar ms = 0) El balance de materia para la biomasa ser
(3)

d ( xV) = xV dt

y para el sustrato
d ( sV) = FS R rs V = 0 dt

(4)

que se iguala a 0 por ser crecimiento restricto. Reemplazando (1) y (2) en (4) llegamos a
(5)

d ( SV ) xV = F . SR ms xV = 0 dt Yx/ s

Si introducimos (3) en (5), ser

(6)

F. S R

1 d ( xV) m s xV = 0 Yx / s dt

y reordenando
(7)

d ( xV) + m s Yx / s xV = Yx / s FS R dt

Debe notarse que si ms = 0, esta es la expresin de velocidad de acumulacin de biomasa para batch alimentado. Integrando, con X = Xo y V = Vo para t = 0, obtenemos
(8)
ms = 0 ms > 0

FS R FS R msYx / st xV = + x o Vo e ms ms
X.V

(NOTA): paraXintegrar, hacer la sustitucin 0.V 0 Z = Yx/s F SR - ms Yx/s xV

En (X.V)max = cte, ser d(X.V)/dt = 0. Por lo tanto, de (7) surge que (X.V)max = F.Sr / ms Esto significa que todo el sustrato se utiliza en mantenimiento, y la concentracin celular X disminuye, pues hay una gran dilucin del sistema. Esto puede analizarse desde el punto de vista de d(X.V)/dt = 0 = rx.V o sea, rx = 0 Con estas consideraciones puede evaluarse ms. De la ecuacin (6 ) surge que
(9)

ms =

F. S R 1 d ( xV) 1 xV Yx / s dt xV

a)

Experimentalmente podrn encontrarse tres casos: X.V = cte, lo cual implica que (10) F. S R = ms xV

b)

Acumulacin de biomasa, es decir d(xV)/dt > 0. Por lo tanto

F. S R > ms xV 5

c)

Disminucin de la biomasa: d(xV)/dt < 0. En este caso ser (12) F. S R < ms xV

(Este ltimo caso se explica mediante el llamado modelo del metabolismo endgeno)