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    Protocolo Electroforesis en Geles de Agarosa

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    Este documento describe el protocolo para realizar una electroforesis en geles de agarosa para separar y analizar ácidos nucleicos. El protocolo incluye preparar las muestras de ADN y un gel de agarosa al 0,8%, realizar la electroforesis aplicando un voltaje de 110V, teñir el gel con bromuro de etidio y visualizarlo para determinar el tamaño y la integridad del ADN.

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    Protocolo Electroforesis en Geles de Agarosa

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    Este documento describe el protocolo para realizar una electroforesis en geles de agarosa para separar y analizar ácidos nucleicos. El protocolo incluye preparar las muestras de ADN y un gel de agarosa al 0,8%, realizar la electroforesis aplicando un voltaje de 110V, teñir el gel con bromuro de etidio y visualizarlo para determinar el tamaño y la integridad del ADN.

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    Protocolo Electroforesis en Geles de Agarosa

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    Este documento describe el protocolo para realizar una electroforesis en geles de agarosa para separar y analizar ácidos nucleicos. El protocolo incluye preparar las muestras de ADN y un gel de agarosa al 0,8%, realizar la electroforesis aplicando un voltaje de 110V, teñir el gel con bromuro de etidio y visualizarlo para determinar el tamaño y la integridad del ADN.

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    Protocolo Electroforesis en Geles de Agarosa

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    Este documento describe el protocolo para realizar una electroforesis en geles de agarosa para separar y analizar ácidos nucleicos. El protocolo incluye preparar las muestras de ADN y un gel de agarosa al 0,8%, realizar la electroforesis aplicando un voltaje de 110V, teñir el gel con bromuro de etidio y visualizarlo para determinar el tamaño y la integridad del ADN.

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    Protocolodeelectroforesisengelesdeagarosa

    La electroforesis en geles de agarosa es una de las tcnicas ms utilizadas para analizar y


    caracterizar los cidos nucleicos. Los geles de agarosa se comportan como un tamiz
    molecular y permiten separar molculas cargadas en funcin de su tamao y forma. Los
    cidos nucleicos son macromolculas cargadas negativamente debido a la presencia de
    grupos fosfato en su estructura. As, molculas de ADN de diferente tamao migran de
    formadistintaenunaelectroforesisengeldeagarosa.Adems,siendichaelectroforesisse
    utilizanmarcadoresdepesomolecular(fragmentosdeADNdetamaoconocido)sepuede
    calculareltamaoaproximadodelADNenestudio.

    Reactivos

    Marcadoresdepesomolecular
    Tampndecarga
    TampndeelectroforesisTAE(40mMTrisacetato,1mMEDTA)
    Agarosa
    Bromurodeetidio

    Materiales

    Micropipetasypuntas
    TubosEppendorfde1,5mL
    MatrazErlenmeyerde200mL
    Probetade50mL

    Equipamiento

    Equipodeelectroforesis(cubeta,molde,peine,fuentedealimentacin)
    Microcentrfuga
    Balanza
    Microondas
    Transiluminador
    Agitador

    Objetivos

    1. Conocer el mtodo de separacin de cidos nucleicos mediante electroforesis en


    gelesdeagarosa.
    2. Comprobar la integridad del ADN extrado mediante electroforesis en geles de
    agarosa.
    3. Estimar el tamao molecular de un cido nucleico mediante electroforesis en geles
    deagarosaapartirdelacomparacinconunpatrn.

    Protocolo

    1.Preparacindelasmuestras

    1.1.Semezcla1Ldetampndecargacon1LdelmarcadordeADN(0,5g)ocon
    1 L de la muestra de ADN y se lleva hasta un volumen final de 5 L con agua
    destilada.
    1.2. Se centrifugan las muestras en una microcentrfuga para bajar la muestra al
    fondodeltubo.

    2.Preparacindeungeldeagarosaal0,8%

    2.1.Semideenunaprobeta50mLdeltampndeelectroforesisTAE1xyseaadena
    unmatrazErlenmeyer.
    2.2.Sepesan0,4gdeagarosaenunabalanzayseaadenalmatrazErlenmeyer.
    2.3.Sellevaaebullicinlasolucindeagarosaenunmicroondasysedejaenfriarla
    suspensinhastaquealcanceunos50Caproximadamente.
    2.4.Sevierteenelmoldeysedejagelificarduranteunos30minutos.

    3.Electroforesis

    3.1.Seretiraelgeldeagarosadelmolde.
    3.2.Secolocaelgeldeagarosaenlacubetadeelectroforesis.

    3.3. Se aade tampn TAE 1x en la cubeta de electroforesis hasta cubrir el gel de


    agarosa.
    3.4.Secarganlasmuestrasenlospocillosdelgeldeagarosa.
    3.5. Se tapa la cubeta de electroforesis y se conectan los electrodos a la fuente de
    alimentacin.
    3.6.Seprogramalafuentea110voltiosysecomienzaacorrerlaelectroforesisque
    durarunos3045minutos.

    4.Tincindelgeldeagarosaconbromurodeetidio

    4.1. Una vez finalizada la electroforesis se retira el gel de agarosa y se tie en una
    solucinconbromurodeetidioa1g/mL.
    4.2.Seponeenagitacindurante20minutos.

    5.Visualizacindelgel

    5.1.Secolocaelgeldeagarosasobrelabandejadeltransiluminador.
    5.2.Sevisualizaelgeldeagarosaconluzultravioleta.
    5.3.Seobtieneunafotografa.

    6.Interpretacindelosresultados

    6.1.SedeterminasielADNgenmicodeguisanteesmayorquelasbandasdelADN
    marcadorysuintegridad.

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