UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

DPTO. ACAD. DE BIOLOGIA, MICROBIOLOGIA Y BIOTECNOLOGIA

FACULTAD DE CIENCIAS

EXPERIENCIA PRCTICA NO 01

USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO OPTICO

1.0

INTRODUCCIN El microscopio ptico de campo claro es ! i!str me!to de so r ti!ario e! el la"oratorio de Micro"iolo#$a, es sado para a me!tar el tama%o de las m estras o"ser&adas. La o"ser&aci! del o"'eto, es co!se# ida, primerame!te por el le!te del o"'eti&o, la c al es tra!smitida al le!te del oc lar e! do!de oc rre la ampli(icaci! (i!al. El a me!to total de !a m estra microscpica o"ser&ada se o"tie!e m ltiplica!do el a me!to del o"'eti&o por el a me!to del oc lar. El le!te de "a'o poder )*+ ,- es tili.ado para seleccio!ar el esp/cime! 0 " scar el campo microscpico adec ado co! ! " e! co!traste. El le!te de alto poder seco )1+ ,- es sado para la o"ser&aci! detallada de microor#a!ismo #ra!des como2 proto.oarios, al#as 0 3o!#os 0 el le!te de *++ , so! sados para la o"ser&aci! de "acterias 0 e cariotas pe4 e%as.

2.0 *.

OBJETIVOS Ide!ti(icar los compo!e!tes pticos 0 mec5!icos de ! microscopio ptico sado e! el la"oratorio )microscopio 0 N06o! "i!oc lar-. 7. Determi!ar los a me!tos empleados e! !a o"ser&aci! microscpica. 8. Ma!ip lar adec adame!te las m estras microscpicas para o"te!er !a o"ser&aci! !$tida co! los di(ere!tes o"'eti&os. MATERIAL M estras "iol#icas 9 : spe!si! de Saccharomyces cerevisiae 9 L5mi!a coloreada de Bacillus

3.0 8.*

8.7 Material de &idrio, e4 ipo 0 otros2 9 L5mi!as portao"'etos

9 9 9 9 4.0

L5mi!illa c "reo"'etos Aceite de i!mersi! Pipetas Paste r Microscopios de campo claro

PROCEDIMIENTO Tiempo: 15 minutos A. PRECAUCACIONES EN EL USO DEL MICROSCOPIO OPTICO *. Traslada el microscopio, co#ie!do co! !a ma!o el "ra.o del mismo 0 co! la otra ma!o la "ase. NO VOLTEAR HORIZONTALMENTE> C;E:TA MA: DE ?*+++

7. 8. 1.

@. B. =. C.

Coloca el microscopio e! el "orde de t mesa de tra"a'o a !a dista!cia de *+ 9 *@ cm, e! do!de !o eAista pol&o o &i"raci!. No to4 es el le!te del oc lar 0 de los o"'eti&os co! t s ma!os, e! caso 4 e se te se%ale, sa papel especial para limpiarlo. Limpia a!tes 0 desp /s de sar el microscopio e! clase. Para los o"'eti&os *+ ,, 1+ , 0 o"'eti&o de i!mersi!, sa ! pa%o s a&e de al#od! o papel especial para limpiar le!tes o #asa li#erame!te 3 medecido co! Ailol. :olo retirar 3 ellas di#itales o #rasa, sa!do #asa 3 medecida co! alco3ol a"sol to et$lico o met$lico de los le!tes de los oc lares. E&ita el so de c al4 ier disol&e!te or#5!ico )Ailol, /ter, alco3olpara limpiar las s per(icies pi!tadas. N !ca i!te!tes desmo!tar parte del microscpico, si e!c e!tra de(ect oso !oti(ica al pro(esor. E&ita #olpes "r sco, pol&o 0 eAposici! a altas temperat ras 0 3 medad del microscopio.

NO DEBES ARRASTRAR EL MICROSCOPIO

D. *+. **.

Limpiar el o"'eti&o de i!mersi! si lo 3as sado co! la s sta!cia i!dicadas el paso 1, 0 cam"ia al o"'eti&o de "a'o poder. Apa#a el i!terr ptor del microscopio c a!do 0a !o lo ses 0 desco!ecta el ca"le el/ctrico del toma corrie!te. Coloca la c "ierta de pl5stico 0 ase#Erate 4 e c "ra todo el i!str me!to.
Pro(. M. :c. A!#el Castro Al&arado

MAN;AL DE PR<CTICA: DE MICROBIOLOGIA GENERAL

G ardar e! ! l #ar li"re de 3 medad 0 3o!#os. B. *. Tiempo: 20 minutos COMPONENTES DEL MICROSCOPIO OPTICO Ide!ti(icar los compo!e!tes mec5!icos del microscopio proporcio!ado e! clase2 "ase, plati!a, re&ol&er, "ra.o, tor!illo macro 0 microm/trico. A0Edate co! el es4 ema proporcio!ado por el pro(esor. 7. Ide!ti(icar los compo!e!tes pticos del microscopio2 co!de!sador, dia(ra#ma, oc lar, o"'eti&os 0 espe'o. A0Edate co! la (i# ra proporcio!ada2

Fi# ra *.*. Microscopio NYGON

C.

Tiempo: 85 minutos MANEJO DEL MICROSCOPIO OPTICO C.* PREPARACIHN DE LA M;E:TRA *. Coloca e! el ce!tro de !a l5mi!a, !a #ota de s spe!si! de
Pro(. M. :c. <!#el Castro Al&arado

MAN;AL DE PR<CTICA: DE MICROBIOLOGIA GENERAL

le&ad ra co! la a0 da de !a pipeta Paste r, l e#o c "re co! !a lami!illa, te!ie!do c idado de !o (ormar " r" 'as de aire. Para ello si# e las si# ie!tes preca cio!es. a- Coloca el "orde de la lami!illa e! la #ota de s spe!si!, de modo 4 e se (orme !a pel$c la 3Emeda e! el "orde. "- L e#o coloca de"a'o, del otro "orde li"re de la lamilla ! o"'eto 4 e permita "a'ar s a&eme!te 3asta 4 e c "ra la #ota retira!do el o"'eto. 7. Coloca el microscopio proporcio!ado e! el l #ar do!de reali.ar t s o"ser&acio!es. INO ARRA:TRE: EL MICRO:COPIO>.

No e!ce!der el e4 ipo co! las ma!os mo'adas, p edes electroc tarte.

8.

:aca la c "ierta protectora 0 ase#Erate 4 e el o"'eti&o de 1 , se e!c e!tra e! la posici! adec ada, l e#o co!ecta a la ( e!te de e!er#$a 0 procede a s e!ce!dido co! el i!terr ptor 4 e se e!c e!tra e! el lado i.4 ierdo.

C.7 COLOCACIHN DE LA M;E:TRA EN LA PLATINA *. A"re la pi!.a de s 'eci! co! el dedo e! la plati!a del microscopio 0 coloca la l5mi!a a!terior co! el c "reo"'eto 3ac$a arri"a. 7. Retor!a la pi!.a s a&eme!te a s l #ar de ori#e! ase# ra!do 4 e la m estra se e!c e!tra (irmeme!te e! s posici! 8. Co! la a0 da del sistema de tra!sporte coloca las m estra microscpica e! el ce!tro del (oco de o"ser&aci!. C.8 IL;MINACIHN *. A"re la pala!ca del dia(ra#ma de apert ra del co!de!sador, e! se!tido i!&erso de las a# 'as del relo' para a"rirlo totalme!te.... 7. Gira el i!terr ptor del e!ce!dido 3asta o"te!er !a " e!a l mi!osidad. NO LO GIRE: JA:TA EL TOPE. C.1 AK;:TE DE DI:TANCIA INTERP;PILAR *. A' sta el i!ter&alo e!tre los oc lares derec3o e i.4 ierdo para 4 e las im5#e!es derec3a e i.4 ierda lle# e! a ser !a. AK;:TE DE DIOPTRIA: Mira!do por el oc lar derec3o co! el o'o derec3o, #ira el tor!illo macro 0 microm/trico para &is ali.ar la ima#e! adec adame!te. Mira!do por el oc lar i.4 ierdo co! el o'o i.4 ierdo, si! ma!ip lar los tor!illo macro 0 microm/trico, #ira el a!illo de dioptr$a del oc lar 3asta &is ali.ar la ima#e! adec adame!te.

C.@ *. 7.

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*+

C.B *. 7.

ENFOL;E DE LA IMAGEN DE LA M;E:TRA Meri(icar 4 e el o"'eto de 1 , se e!c e!tre e! el campo de &is ali.aci! 0 4 e este adec adame!te e! posici! de tri!4 e e! el re&ol&er. Ma!ip la el tor!illo macrom/trico para s "ir la plati!a 3asta lle&ar la m estra a o"ser&arse de!tro de la dista!cia li"re de tra"a'o, aproAimadame!te 7@ mmN l e#o "a'a li#erame!te la plati!a " sca!do la &is ali.aci! del micro"io. ;!a &e. o"ser&ado la m estra, ma!ip la co! el tor!illo microm/trico 3asta o"te!er !itide. e! la o"ser&aci!. Nota 1. Cam"ia el campo microscopio sa!do el sistema de tra!sporte, " sca!do ! campo microscpico co! micro"ios aislados 0 co! ! " e! co!traste. A!ote 0 es4 emati.a t s o"ser&acio!es. Para 4 e o"ser&es co! el o"'eti&o de alto poder seco )1+ ,- #ira el re&ol&er 3asta 4 e 4 ede e! s posici! correcta )a"re li#erame!te el dia(ra#ma- 0 a!ota t s o"ser&acio!es 0 res ltados. Para la o"ser&aci! de !a l5mi!a coloreada, procede de la si# ie!te ma!era (Nota 2): aO"ser&a co! los o"'eti&os *+ , 0 1+ , " sca!do ! campo microscpico adec ado )coloreado co! !itide.- e! do!de se e!c e!tra! los micro"ios. Es Etil cerciorarse por el lado e! 4 e se e!c e!tra coloreado la l5mi!a. "Reali.a el a' ste de l mi!osidad a"rie!do el dia(ra#ma casi e! s totalidad. cRem e&e el o"'eti&o de 1+ , 0 colocar !a #ota de i!mersi! e! la l5mi!a. L e#o cam"ia el o"'eti&o *++ , 3asta 4 e 4 ede e! s posici! !ormal o correcta. La #ota de aceite !o de"e te!er " r" 'as de aireN si ( era s$ retira el aceite co! ! papel para limpiar le!tes 0 aplica otra #ota d- Ma!ip la co! "asta!te c idado el tor!illo macrom/trico proc ra!do 4 e el o"'eti&o (orme !a del#ada pel$c la co! el aceite de i!mersi!, l e#o si# e ma!ip la!do s a&eme!te 3asta o"ser&ado los micro"ios. ;!a &e. o"ser&ado co! el tor!illo macrom/trico sa el tor!illo microm/trico par o"ser&ar co! !itide.. Nota 3. e- A!ota t s o"ser&acio!es 0 res ltados. RESULTADOS *. Es4 emati.a t s o"ser&acio!es 0 coloca los a me!tos empleados.

8. 1. @. B. =.

.0

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**

G/!ero2 .. A me!to2 ..

G/!ero2 .. A me!to2 ..

!.0

NOTAS " PUNTOS PARA OBSERVAR Nota 12 :iempre c a!do mires por el microscopio sa los dos o'os a"iertosN aE! c a!do el microscopio sea mo!oc lar. Nota 22 A!tes de o"ser&ar co! el o"'eti&o de i!mersi!, siempre sa pre&iame!te el o"'eti&o de 1+ ,. Nota 32La dista!cia li"re de tra"a'o de los o"'eti&os *+ ,, 1+ , 0 *++ , es eAtremadame!te corta )@,7N +,B mm 0 +,*1 mm, respecti&ame!te-, por lo 4 e 3a0 4 e te!er "asta!te c idado de romper la l5mi!a co! la m estra co! el o"'eti&o 4 e se esta o"ser&a!do.

#.0

RE$UERIMIENTOS ESPECIFICOS Los re4 erimie!tos para cada #r po de pr5ctica so!2 A. DEL E:T;DIANTE Le&ad ra de pa!ader$a e! pasta2 * sema!a a!tes. B. DEL LABORATORIO : spe!si! de Saccharomyces cerevisiae: +* L5mi!as coloreadas de Bacillus sp: +7 Microscopios pticos Pipetas Paste r2 +7 L5mi!as 0 lami!illas

%.0

PRE&UNTAS "'O TAREAS *. OPor4 / se sa el aceite de i!mersi! co! el o"'eti&o *++ ,P. 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 De(i!a los si# ie!tes t/rmi!os2 a- Apert ra ! m/rica )A.NOA.N. Q N se!P Do!de2 N Q I!dice de re(racci! del medio + Q A!# lo e!tre la l . di&er#e!te re !ido por el le!te 0 por ce!tro del le!te.
Pro(. M. :c. A!#el Castro Al&arado

7.

MAN;AL DE PR<CTICA: DE MICROBIOLOGIA GENERAL

*7

999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 "- Poder de resol ci! )P.R.OP.R. Q Lo!#it d de o!da sada R )7 S A.N.-P 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 c- Aceite de i!mersi!. 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 d- A"erraci! es(/rica 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 e- A"erraci! crom5tica. 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 OL e lo!#it d de o!da sa el microscopio 4 e estas tili.a!doP 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999 999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999999

8.

9.0

INFORMACION ADICIONAL La imagen microscpica final es controlada primeramente por la calidad del objetivo. La informacin concerniente a las caractersticas pticas normalmente se encuentran grabados en cada objetivo; as por ejemplo un tpico objetivo tiene: Para este ejemplo, el objetivo es planacromatico (Plan), con 4 veces de aumento ! con apertura num"rica de ,#$; teniendo una longitud del tubo de %# mm. Para la observacin se usar& laminillas de ,%' mm de grosor.

Fi# ra *.7. O"'eti&o microscpico

(ste objetivo refiere a: )umento inicial* apertura num"rica Longitud del tubo *grosor de la l&minilla cubreobjeto
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*8

+no de los principales problemas de los objetivos es la aberracin esf"rica. (l objetivo planacrom&tico produce una imagen plana con correccin crom&tica; el tipo de correccin en este objetivo es intermedio entre los objetivos acrom&ticos ! apocrom&ticos.
10.0 &LOSARIO CONDEN:ADOR2 Es ! sistema 4 e co!tie!e &arios le!tes 4 e co!ce!tra la l . e! la lami!a portao"e'to, a tra&/s de ! co!o.

IRI: DEL DIAFRAGMA2 Co!trola el 5!# lo 0 el tama%o del co!o de l . del co!de!sador.

11.0

AUTOEVALUACIN IN:TR;CTIMO2 Lea c idadosame!te la pre# !ta 0 marca la letra correcta2

*. El microscopio NYGON :E sado e! el la"oratorio de pr5cticas es microscopio comp esto, por4 e2 *. ;sa dos tipos de le!tes de a me!tos 7. :e compo!e de oc lar co! ! co!de!sador 8. Los le!tes de a me!tos so! el oc lar 0 el o"'eti&o 1. ;sa le!tes de a me!tos s perp estos e! el o"'eti&o @. La ima#e! (i!al o"te!ida es i!&ertida. :o! ciertas2 A- *,8,@ B- 7,8,@ C- *,8,1 D- *,8,@ E- *,7,1 7. El le!te de 1+ , es sado para disti!# ir2 *- Bacterias 7- Le&ad ras 8- Mo3os 1- Cia!o"acterias @- Proto.oarios. :o! ciertas2 A- *,8,@ B- 7,8,@ C-*,8,1

D- *,8,@

E- 7,1,@

8. Preca cio!es 4 e de"e tomarse e! c e!ta para reali.ar !a preparaci! e! mo!ta'e 3Emedo2 *. La s spe!si! !o de"e (ormar " r" 'as 7. Colocar la m estra e! el ce!tro de la plati!a 8. Colocar e! posici! correcta el o"'eti&o 1. A"rir li#erame!te el dia(ra#ma
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*1

@. A"rir la perillas para te!er m5Aima ca!tidad de l .. :o! ciertas2 A- *,8,@ B-7,8,@ C- *,8,1 D-8,1,@ E-Todas. 1. El a me!to de !a o"ser&aci! microscpica de "acterias, se o"tie!e2 *.M ltiplicar el o"'eti&o de 1 , co! el oc lar 7. M ltiplicar el o"'eti&o de 1+ , co! el oc lar 8. M ltiplicar el o"'eti&o de *++ , co! el oc lar 1. M ltiplicar el o"'eti&o de *+ , co! el oc lar @. M ltiplicar dos le!tes de a me!to :o! ciertas2 A- *,8,@ B-7,8,@ C- *,8,1 D- solo 1,@ E-Todas. RE:P;E:TA: 1( A 7.

2( B

3( E

4( D

E! la si# ie!te (i# ra, escri"e los !om"res se%alados2 7............... 1.............. B.............. C............ *+..........

*................ 8............... @.............. =............. D............

**.........

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*@

Fi# ra *.8. Es4 ema de ! microscopio a!ti# o.

12.0 *. 7. 8. 1. @. B.

REFERENCIAS BIBLIO&RAFICAS Broc6 T.O., :mit3 D. 0 Madi#a! M. *DC=. Micro"iolo#$a. Pre!tice Jall Jispa!oamerica!a :.A. M/Aico. Castro A. *DCD. M/todos e! Micro"iolo#$a. Mod lo de a toapre!di.a'e No +7. ;!i&ersidad Nacio!al del :a!ta. C3im"ote9PerE. Pelc.ar M. K. Reide 0 C3a! E. C. :. *DC7. Micro"iolo#$a. Pre!tice Jall. Jispa!oamerica :.A. MeAico. :ta!ier R. Y Adel"er# E.A. 0 I!#ra3am K. L. *D=B. T3e Micro"ial Torld. Pre!tice Jall. NeU Yerse0. ;:A Tille0 R. *D=*. Microtec3!i4 es2 A la"orator0 # ide. Mac Milla! compa!0. NeU Yor6. ;:A 3ttp2RR UUU. tem.ed Rperso!alRt3'o!esR3istR3istVmic.3tm 3istoria del microscopio ptico. @. 3ttp2RRUUU.p3a#e.or#Rmicro"iolo#0.3tm Moca" lario de t/rmi!os micro"iol#icos. T3eO3io :tate ;!i&ersit0

13.0

INVESTI&ACION ADICIONAL Ela"ora ! microscopio artesa!al, a0Edate de INTERNET

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*B