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VALTEK DIAGNOSTICS

Phone: + (562) 379 2100


FAX: + (562) 379 1634
Las Dalias 1900 - uoa
Santiago CHILE
E-mail: [email protected] WEB site: http:/ / www.valtekdiagnostics.com
CK-MB (NAC)
Mtodo de inmunoinhibicin (activado por N-acetilcistena), para la determinacin cuantitativa
de la actividad de la isoenzima MB de la Creatn Quinasa.
Para uso en el diagnstico in vitro.
SIGNIFICANCIA CLINICA
La enzima Creatin Quinasa (CK) es un dmero conformado
por la combinacin de las subunidades inmunolgicamente
diferentes, M y B. Existe como las isoenzmas MM, MB y BB.
Las CK-MM y CK-MB se distribuyen bsicamente en en el
msculo esqueltico y cardaco, en tanto la isoforma CK-BB
est presente principalmente en el tejido cerebral y en tejidos
compuestos por msculo liso. Ante un infarto al miocardio, la
CK-MB aumenta considerablemente, y constituye un
marcador altamente especfico para el diagnstico del
infarto.
FUNDAMENTOS DEL METODO
El mtodo VALTEK se basa en la medicin de la actividad
de la CK en presencia de un anticuerpo dirigido contra el
monmero M. Este anticuerpo inhibe totalmente la isoenzima
CK-MM, y la mitad de la actividad de la forma CK-MB, sin
afectar la actividad del monmero B de las isoenzimas MB y
BB. Dado que la isoenzima CK-BB no se encuentra
normalmente en la sangre, la determinacin de la actividad
del monmero B es prcticamente especfica para la forma
MB.
REACTIVOS
Conservados entre 2 y 8C, estable hasta la fecha de
caducidad consignada en la etiqueta.
Reactivo CK-MB (Concentraciones al reconstituir):
D-Glucosa 20 mM
Magnesio++ 10 mM
Adenosina-5'-monofosfato (AMP) 50 mM
Creatina fosfato 30 mM
Adenosina-5'-difosfato (ADP) 2 mM
NADP+ 2 mM
G-6-PDH >3.000 U/L
HK >3.000 U/L
EDTA 2 mM
Estabilizantes y preservantes c.s.
Diluyente CK-MB:
Buffer BIS TRIS pH 6.70.1 100 mM
Anticuerpo anti CK-M humana en cantidad suficiente para
inhibir hasta 1500 UI/l de CK-MM.
Estabilizantes y preservantes c.s.
Preparacin del Reactivo de Trabajo:
Reconstitur el frasco de Reactivo CK-MB con el volumen de
diluyente CK-MB indicado en la etiqueta. Estabilidad del
reactivo de trabajo: 24 horas a temperatura ambiente, 7 das
entre 2 y 8C. Descartar el reactivo si su absorbancia contra
blanco de agua a 340 nm. es mayor que 0,700.
MUESTRAS
Utilizar suero fresco libre de hemlisis o plasma
heparinizado. La CK es estable por 24 horas a temperatura
ambiente y 14 das entre 2 y 8C.
EQUIPO REQUERIDO
Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de medir
absorbancias a 340 nm., bao termorregulado, timer y
pipetas.
TECNICA
Si la actividad de CK-Total determinada con el kit VALTEK
CK-NAC fuese superior a 1500 UI/l, dilur la muestra 1:1 con
suero fisiolgico antes de efectuar el ensayo de CK-MB. El
resultado obtenido en este caso, se multiplica por 2.
Reactivo de trabajo (ml) 1.00
Muestra (ml) 0.05
Mezclar y transferir a la cubeta del equipo. Incubar 5 minutos
a la temperatura de medicin (30 37C). Leer la
absorbancia inicial (A1), y repetir la lectura a los 5 minutos
(A2).
CALCULOS
Determine el cambio de absorbancia A2-A1 (Abs).
Actividad CK-MB(UI/l)= Abs x 1350
FACTOR= Vt x 1000 x 2 = 1350
p-NADPH 340 x P x Vm x 5
Vt= Volumen total de reaccin
NADPH 340= Coef. de extincin molar del NADPH a 340 nm
P= Espesor del paso de luz en la cubeta
Vm= Volumen de muestra
OBSERVACIONES
A pesar de la ausencia de la isoenzima CK-BB en
condiciones normales o en pacientes con infarto, se ha
descrito en algunos casos una forma macro de la CK-BB que
podra sobreestimar la medicin del monmero B.
Se sospecha la presencia de esta forma macro si el valor
obtenido para la CK-MB es superior al 20% de la actividad
CK total.
Evitar el uso de sueros hemolizados ya que se pueden
obtener resultados falsamente elevados.
RANGOS DE REFERENCIA
Temperatura medicin 30C 37C
CK-MB (UI/l) 0 a 10 0 a 25
Sospecha de infarto al miocardio:
CK-MB > 6% de la actividad CK-Total cuando:
a 30C CK-MB > 10 UI/l y CK-Total > 160 UI/l
a 37C CK-MB > 25 UI/l y CK-Total > 420 UI/l
BIBLIOGRAFIA
1.Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd Ed.,
W.B.Saunders, Philadelphia, PA., 1976.
2.Szasz, G., Clin. Chem. 22 (650), 1976.
3.Moren, L.G., et al., Clin. Chem. 23(1569), 1977.
4.Young, D.S., et al., Clin. Chem. 21(10), 1975.
5.Wu, A.H.B., Bowers, C.N., Clin. Chem. 28(2017), 1982.

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