El Biorreactor de Imersin Temporal

(BIT) en la Micropropagacin de
plantas y su aplicacin a las
ornamentales.

Dra. Maritza M. Escalona Morgado

Laboratory for Plant Cell and Tissue Culture
Centro de Bioplantas
Universidad de Ciego de vila, Cuba

Limitaciones de la micropropagacin de
plantas
Requiere gran nmero de envases pequeos.

Transferencia peridica del material vegetal.

Generalmente se emplea medio semi-slido lo cual
dificulta la semi-automatizacin.
La manipulacin (seleccin, corte y trasplante)
representa 40-60% de los costos de produccin (Chu,

1995).

Aunque la manipulacin es la principal parte del

trabajo y la ms tcnica, la limpieza, llenado y
manipulacin de un gran nmero de envases es
engorrosa (Maene y Debergh, 1985)
Prdidas durante la aclimatizacin (Reuther, 1985).

LA APLICACIN
COMERCIAL DE LA
MICROPROPAGACIN
ESTA LIMITADA A
CULTIVOS CON ALTO
VALOR AADIDO

LAS TCNICAS DE LA
MICROPROPAGACIN
CONVENCIONAL
NO SON SIEMPRE
ESCALABLES

Para su aplicacin comercial se necesita

disponer de nuevas tecnologas para la semiautomatizacin y mejorar los protocolos de
aclimatizacin (Kitto, 1997).

Ventajas del medio lquido para la

micropropagacin de plantas.
Reduce los costos de produccin y permite
la semi-automatizacin del proceso.
Mayor facilidad de toma de los nutrientes por
los explantes ya que se evita la difusin a travs
del agar

Suministra condiciones de cultivo ms

uniformes.
El medio puede ser fcilmente renovado sin
cambio de envase.
Se reduce el tiempo de transferencia.

HIPERHIDRICIDAD: Principal desventaja del

medio lquido.
CMO
CONTROLARLA ?
Empleo de soportes (puentes de papel, bloques de celulosa o esponjas
(Etienne et al., 1991; Smith y Spomer, 1995; Wataad et al., 1997).

Raft para soportar los explantes sobre un medio lquido estacionario

(Connor y Meredith, 1984; Hamilton et al., 1985).

Adicin de medio lquido a cultivos establecidos en agar (doble capa)

(Maene y Debergh 1985).

El empleo de biorreactores de niebla (Weathers y Giles, 1988).

El uso de medio de cultivo con bajas concentraciones de sales y
sacarosa e incremento de la luz (Takayama y Akita, 2005).
El Cultivo en Inmersin Temporal (Teisson et al., 1995).

Sistemas de Inmersin Temporal: contacto parcial o

total entre los explantes y el medio de cultivo lquido.
Inmersin
completa y
renovacin del
medio lquido

Inmersin parcial y
renovacin del
medio lquido

Inmersin completa
con transferencia
neumtica del medio
de cultivo sin
renovacin del medio
lquido

RITA

BIT

Etienne & Berthouly,

2002, Plant Cell Tiss.
Org. Cult.

OPERACIONES DEL BIT (Twin Flasks System):

Air pump
Regulator valve
Solenoid valve
Hydrophobic air filter

1- Dos frascos de cultivo conectados entre s, uno para los explantes y otro
para el medio de cultivo.
2. Inicio de la inmersin, el medio de cultivo es impulsado por el aire del
compresor al frasco que contiene los explantes.
3. Fin de la inmersin, la segunda vlvula solenoide se abre y el medio de
cultivo regresa al frasco que lo contiene.
Escalona et al., 1999. Plant Cell Reports.

Ventajas del cultivo en inmersin temporal

Evita la inmersin continua de

los explantes en el medio
lquido.
Garantiza
el intercambio
gaseoso.
Limita los cortes.
Facilita cambios secuenciales
del medio.
Permite la semi-automatizacin
del proceso.
Reduce la contaminacin.
Bajos costos.

BIT : Primera Generacin para la produccin

masiva de plantas.

Produccin masiva de pia y caa de azcar. Centro de Bioplantas

BIT: Segunda Generacin

Propagacin masiva de
caa de azcar

BIT: Tercera Generacin

Inyeccin de CO2 mejora cultivo

fotomixotrfico.
Utilizacin de ventilacin
forzada.
Mayor calidad de plantas.

Rotmetro

CO2

Compresor

Controlador

BIT para la investigacin.

Laboratorio de Inmersin Temporal.

Centro de Bioplantas
Laboratorio de Inmersin Temporal.
Universidad Gent, Blgica

BIT: Cuarta Generacin. SMART-BIT

SMART- BIT en VITROALMA, Mxico

BIT: Tipos de Frascos

5L

1L

10 L

250 mL

250 mL

Efecto del BIT en el rendimiento biolgico de la

micropropagacin.
PROLIFERACIN DE BROTES,
SEGMENTOS NODALES Y
MICROBULBOS
MICROTUBERIZACIN

EMBRIOGNESIS SOMTICA

Propagacin de la pia (Ananas comosus

L. (Mer) ) en BIT
Variedad
Cayena Lisa
MD2

Micropropagacin
convencional

BIT

8.0
5,8

68,8
26,8

14
12
10
8

Multiplication rate x10

pH value

6
4
2
0
0

w eeks

Escalona et al., 1999. Plant Cell Reports.

Propagacin de Musa sp en BIT

Variedad

Micropropagacin
convencional

BIT

FHIA-18
FHIA-01
G. Nine

3.6
3.4
4.0

7.4
10.4
16.6

PLATANO CEMSA 3/4

Roels et al., 2005. Plant Cell Tiss. Org. Culture.

Noceda et al., 2012. HortScince

Propagacin de caa de azcar en BIT

Variedad

Micropropagacin
convencional

BIT

C 91-301
C1051-73
C120-78
C323-68
CP-5243

3.7
4.1
3.9
4.3
4.0

34.1
58.0
30.2
39.5
32.5

Lorenzo et al., 2001. Plant Cell Tiss Org. Culture.

Propagacin in vitro del guayabo (Psidium

guajava L.) cv. EEA 18- 40 en BIT
No. de Nudos del BP

20.0
15.0
10.0

5.0
0.0

Coeficiente de Multiplicacin

40.0

25.0

35.0
30.0
25.0
20.0

15.0
10.0
5.0
0.0

PBZ 0 mg/L

PBZ 0.5 mg/L

PBZ 1 mg/L

Tratamientos

Npoles et al., Biotecnologa Vegetal (2010)

Con refrescamiento

Sin refrescamiento
Tratamientos

Coeficiente de Multiplicacin

Propagacin de Stevia rebaudiana en BIT

35

30
25

20

Convencional
BIT

15

a
10

c
5
0
MS

MS + 0,25 PB MS + 0,5 PB

Tratamientos

Propagacin de prunus (GF677) en BIT

9
a

Tasa de Multiplicacin

8
7

a
b

5
4
3
2
1
0
Control/2F Control/3F PB 0,5/2F

PB 0,5/3F

PB 1,0/2F

PB 1,0/3F

Tratamientos

7
6
5
4
3
2
1
0
10/600

15/600
TE

TMP

10/400
Longitud (cm)

Agregados de brotes de GF677 despus de 30 das en medio de enraizamiento en

el propio BIT

15/400

Empleo del BIT en la microtuberizacin de

variedades de papa.
a

Nmero de semilla/planta

14
12
10
8

microtubrculo

b
c

bc

minitubrculo
c

4
2
0
Capiro

Canchan

Papa-3

Percentage of
tubers
< 4 mm
4-6 mm
> 6 mm

cv Desiree
Solid culture
TIS
33.3 a
51.7 a
15.0 b

21.8 a
16.2 b
62.0 a

cv Atlantic
Solid culture
TIS
25.7 a
32.4 a
41.9 b

Jimnez et al., 1999. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 59: 1923.

3.1 b
24.9 a
72.0 a

Masa fresca de la semilla (g)

Genotipo
12

10

8
microtubrculos

minitubrculos
4
2

0
Capiro

Canchan

Papa-3

Genotipo

Microtuberizacin de tres genotipos de papa en BIT y

procedentes de planta in vitro. (Obtencin de semilla prebsica). Laboratorio de Biotecnologa Universidad Nacional
Agraria La Molina, Per (2012)

Empleo del BIT en la microtuberizacin de

ame (Dioscorea sp)

Etapa de formacin de
microtubrculos

Seis semanas de cultivo

MS+sacarosa (30gL-1) Luz

18 semanas de cultivo
MS+sacarosa. Oscuridad

A: Microtubrculos MF 1,0 g
B: Microtubrculos MF 1,0 - 2,9 g
C: Microtubrculos con una MF 3,0 g

Cabrera et al., 2005. Plant. Cell. Tiss. Org. Cult., 83: 103-107.

Eficiencia del BIT en la germinacin de embriones somticos de

Pinus radiata (Proyecto Neiker-Tecnalia, Espaa, 2010-2012).
control

1 V/da
400

2 V/da

350
b

300

250
200

Incremento MF

150

Rango Crecimiento

100
50

5,6

5,6

0
3 Inm/da

3 Inm/da/1V

3 Inm/da/2V

Eficiencia del BIT la germinacin de embriones somticos de

Quercus suber (Proyecto , UNIOVI, Espaa, 2010-2012).
Volumen de medio
(mL)

NECA pregerminados

NECA
germinados/gMF

150

6,05 1,38

0,25 0,02

300

16, 5 9,90

2,50 0,28

Escalona et al., 2014 Trees Forest (in

press)

A: Agregados pre-germinados, B:
Embriones pre-germinados con
recurrencia, C: Embriones sin
recurrencia en distintos estadios de la
diferenciacin radicular, D: embrin
somtico germinado. E: ES germinado
espontneamente en proliferacin en
SS.

Experiencias en la comercializacin de plantas

ornamentales

Plantas ornamentales propagadas in vitro en el Centro de Bioplantas.

Familia Botnica
Moraceae

Araceae

Araliaceae

Especie

Variedad

Ficus elstica

Decora, Decora variegado, Burgundy, Melany

Ficus benjamina

Natasja, Golden King, Starlight, Extica.

Ficus binnendijkii

Allii

Syngonium podophyllum

Infra red, White Butterfly, Pixie

Caladium sp

Ms de 10 variedades

A. andreanum.

Tropical, Merengue, Sonate, Pasin,

Lambada, Fantasa.

Spathiphyllium sp.

Sensation, Starlight, Petite.

Philodendron sp.

Xanadu, Silver Grey.

Brassaia actinophylla

Schefflera amate.

Radermachia sp.

Kaprima.

Plantas ornamentales propagadas in vitro en el Centro de Bioplantas.

Rubiaceae

Ixora coccinea

Guillermina.

Rosaceae

Rosa sp.

Miniatura.

Nyctaginaceae

Bougainvillea spectabilis

Morado, Blanco.

Orchidaceae

Spathoglottis plicata

Morado.

Plumbaginaceae

Limonium sinuatum

Morado, Amarillo.

Droceraceae

Dionea muscipula

Venus Fly Trap.

Polypodiaceae

Cyathea arborea

Helecho arborescente

Nephrolepis exaltata

Helecho encaje

Rhapis excelsa

Palma Dama

Chamaedorea seifrizii

Palma Bamb.

Arecaceae

Cambios tecnolgicos en la micropropagacin

de plantas ornamentales en Cuba.
Empleo de medios de cultivo
simples y econmicos.
Uso de la luz solar.
Utilizacin de medios de cultivo
lquidos
Introduccin del vitrofural.
Empleo de normas de produccin
y un personal calificado.
Riguroso sistema de control de la
calidad.
Utilizacin de los Sistemas de
Inmersin Temporal.

Propagacin de plantas ornamentales en BIT

Cultivo

Variedad

Micropropagacin
convencional

Syngonium

W. Butterfly
Pixie

7.3
2.2

28.0
18.4

Philodendron

Xanadu

3.0

103

Anthurium

Tropical

3.5

79.8

Spathyphyllum

Sensation
Starlight

3.7
3.0

61.5
56.5

BIT

Araceaes

Proliferacin de brotes de Paeonia sp en BIT.

Coeficiente de Multiplicacin

(Contrato Plantek, Canad)

12
10

a
a

8
6

bc

2
0
0

Nmero de cambios de medio

Variedad

Micropropagacin
Convencional

BIT

SeSu

2.1

6.8

Lezcano et al., 2012 Actualidades Biolgicas

Proliferacin de brotes de Bromelias en BIT

Micropropagacin
convencional

BIT

Vriesea
Aechmea fasciata
Neoregelia carolina
Cryptanthus bromeloides

2.0
2.2
2.1
1.8

10.6
24.6
32.4
22.9

Multiplication rate

Variedad

12
10
8
6
4
2
0
cluster

shoot divided

Brote seccionado

BROMELIA ORNAMENAL Vriesea.

Contrato Empresa SBW, Holanda

Brote no seccionado

Daquinta et al., 2001. J Bromeliad Soc 51(2): 80-85

Capote et al., Biotecnologa Vegetal .

Proliferacin de brotes de Alstroemeria en BIT

Efecto de la frecuencia de inmersin en
variables fisiolgicas de los brotes en el BIT.
Variables

Cada 3h

Cada 5 horas

Nmero de brotes.

3.2 b

5.5 a

Nmero de hojas

8.3

Nmero de races

8.0

11.0

Altura de las
plantas (cm)

2.0

4.22

Masa Fresca (mg)

396

471

Brotes (Estado III)

2.8 (87.5%)

3.5 (63.6%)

Brotes (Estado IV)

0.4 (12.5%)

2.0 (36.3%)

Daquinta et al., 2010, Biotecnologa Vegetal.

Contrato Laboratorio Comercial SBW,

Holanda

Proliferacin de brotes de Zantesdechias sp en

BIT
Variedad

SS

Lquido

BIT

Treasure

3.63 b

3.96 b

7.93 a

Golden Affair 6.50 b

3.70 c

10.7 a

Magister Red 7.23 b

4.26 c

11.3 a

Frecuencia de
Inmersin

Coeficiente de
Multiplicacin

3h
4h
6h

11.3 b
12.5 a
9.3 c
Snchez et al., Ciencia y Tecnologa. 3 (1): 1-5. 2010
M. Daquinta et al., Floriculture and Ornamental Biotechnology 2009

Propagacin in vitro de Caladium hortulanum en BIT

Semi-slido

BIT

CM en BIT: 43.5

Aclimatizacin

12 veces en
comparacin con el
SS
Daquinta et al. Floriculture and Ornamental Biotechnology 1(1), 2007
Global Science Books

Proliferacin de brotes de rosa miniatura en

BIT

Proyecto: Obtencin de una produccin sostenible de bulbos

de Lilium con resistencia a Fusarium oxysporum mediante un
mtodo compatible con el ambiente (CB- VITROALMA).
ESTABLECIMIENTO IN VITRO

1.0 BA + 0.3 ANA, 30 g/l sacarosa, luz

0,2 ANA
80g/L sacarosa
Oscuridad
42 das
MULTIPLICACION

Nmero de microbulbos/explante

Formacin de microbulbos de Lilium a partir de

escamas en BIT
5
4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0

a
b

c
c

escamas/4F- escamas/2F- bulbos/4F-da bulbos/2F-da 1/2 bulbo/4F- 1/2 bulbo/2Fda

da
da
da

Tipo de explante

Desarrollo de microbulbos de Lilium a partir de

escamas en BIT

9
8
7
6
5
4
3
2
1
0

a
b

Naranja

Santander Blanco
Variedades
mb/escama

MF (g)

Circunferencia (cm)

Concador

Factores que determinan la eficiencia

biolgica del BIT
Tiempo de inmersin
Frecuencia de Inmersin
Volumen de medio de cultivo
Capacidad del frasco de cultivo
Nmero de Subcultivos en el BIT
Duracin de la fase de proliferacin
Empleo de retardantes del crecimiento
Tipo de explante a inocular.
Manejo del explante.

Principales caractersticas que determinan la

eficiencia biolgica del BIT
INTERCAMBIO
GASEOSO

MAYOR TASA DE MULTIPLICACIN

MAYOR CALIDAD MORFOLGICA

ALTOS PORCENTAJE DE SUPERVIVENCIA

EN LA ACLIMATIZACION

CONTACTO
INTERMITENTE ENTRE
LA SUPERFICIE DE
LOS TEJIDOS Y EL
MEDIO LQUIDO

La Fisiologa de las plantas micropropagadas en

el BIT
Fotosntesis in vitro y en el trnsito
ex vitro de las plantas

Metabolismo del
Carbono

Caracterizacin del espacio

gaseoso interno del BIT

Asimilacin de nutrientes

Fotosntesis de las plantas in vitro en el BIT

10
5

Pn

0
0

14

21

-5

SS
BIT

-10

Pltano

-15

Days before acclimatization

Aragn et al., 2006. In Vitro Cell. Dev. Biol. Plant.

Condiciones crecimiento pia

Medio Lquido
BIT

Produccin O2
(mol. m-2. s-1)

PNmax
(mol O2. m-2. s-1)

Fv/Fm

5.9316

0.71

Bajo FFF

0.211c

Allto FFF

0.270c

5.7783

0.75

Bajo FFF

0.480b

6.3166

0.77

Alto FFF

0.910a

5.3933

0.79

Escalona et al., 2003. (39) : 661-666 . In Vitro Cell Dev Plant

Contenido de azcares en los brotes en la fase de

crecimiento en el BIT y durante la aclimatizacin
SACAROSA

3,0
b

2,0

1,5

Starch concentration
(mg/g FW)

2,5

1,0
a

0,5

0,0

ALMIDN

200

ab

14 21 28 35 42 49 56 63 70

150
100
50

c
IC

days

14

t (days)
suc. Media

suc. Leaves

PLTANO

Aragn et al. (2006). In Vitro. Cell. Dev. Biol. Plant.

leaves

Stem

b
ab
35

Cambios en la fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC) y piruvato

quinasa (PK) de los brotes de pltano durante la fase de
crecimiento en el BIT
a

18
16

14
12

120

c
c

10
8
6
4

2
0

EA PK (U/g FW)(h)

EA PEPC (U/g FW)(h

20

a
90

60

a
b

30
b

21

14

time (days)
EA SS

EA TIB

0
0

14

21
time (days)

*5 EA SS

EA TIB

En el cultivo en SS se muestra una mayor actividad catablica. La actividad PK fue

mayor en SS (5 veces) y 28 veces mayor que la actividad PEPC.
En el SS (sistema cerrado) presenta mayor condiciones estresantes que en el BIT la

mayor actividad respiratoria como una conecuencia de procesos oxidativos.

Composicin del volumen gaseoso interno del frasco durante la

proliferacin y previo a la aclimatizacin en los brotes de pltano
en el BIT y el cultivo SS.
Grandes diferencias en la
concentracin de gases entre
BIT y SS.

La renovacin del volumen

gaseoso resulta en un
suministro de O2 y la retencin
de CO2 y acumulacin de C2H4

Los niveles de etileno fueron

indetectables en el BIT
Roels et al., 2006. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 84 (2): 138-146.

Fisiologa y Morfologa de los brotes de pltanos cultivados en el

BIT previo a la aclimatizacin.
Das

Mtodo
Cultivo

Pn

Transp.

Long.
(cm)

Diam. Nmero
(cm)
hojas/
brote

-7.63 c

1.33 b

3.02 c

0.41 c

SS

-10.9 c

0.81 c

3.23 c

TIB

-12.5 c

2.17 a

SS

1.92 b

TIB

MF
(g)

Nemro
races

1.40 c

0.67 b

0.00

0.51 b

2.07 b

0.60 b

0.00

3.17 c

0.53 b

2.27 b

0.49 c

0.00

1.34 b

3.63 b

0.57 b

2.33 b

0.71 b

0.00

8.86 a

1.56 a

4.19 a

0.56 b

2.73 a

0.86 a

1.80 b

SS

2.12 b

1.29 b

3.85 b

0.73 a

2.07 b

0.77 b

1.60 b

TIB

6.04 a

1.90 a

4.18 a

0.71 a

2.80 a

0.86 a

2.93 a

0
7
14
21

BIT mejora la calidad morfolgica de los brotes.

BIT, se encontr mejor relacin Fotosintsis/Transpiracin. Esta
relacin permiti mayor asimilacin de nutrientes preparando a los
brotes para la aclimatizacin.
Aragon et al., 2006. In Vitro Cell Dev Plant. Biol.

Tecnologa BIT y la variacin somaclonal.

EVALUACIN EN EL CAMPO

Plantas de pltano CEMSA en el campo. Plantas

fueras de tipo.

REVERSION A
DOMINICO HARTOON
(UNA PLANTA)

PLANTAS ELONGADAS
(2.7%)

PLANTAS ENANAS
(2.7%)

Plantas pltano CEMSA en el campo

TRATAMIENTOS

PLANTAS
NORMALES
(%)

BIT

94.6

SS

86.1

Treatments

PLANTAS NORMALES CULTIVADAS

EN REA DE CORBANA, Costa Rica,
(2004-2006)

MET-BIT

Weight of
bunches
(kg)
12.1 0.3

Number of
fruits
40.8 0.8

BA -BIT

11.6 0.1

40.2 0.0

MET-SS

12.2 0.0

40.0 0.1

BA-SS

12.3 0.1

40.5 0.3

Aplicacin comercial BIT

Centro de Bioplantas. BioPlant

Export. Produccin de semilla
de alta calidad de la variedad de
pia MD2

Aplicacin comercial BIT

Produccin de semilla de alta

calidad de Bananos.

AGROGENESIS SA, Lima,

PER

Aplicacin comercial BIT

Produccin de semilla de alta

calidad de Bananos.

EMPRESA ROICA S.A, PANAMA

Aplicacin comercial BIT

Produccin semilla
variedades de caa de
azcar. Ingenio La Estrella,
CALESA, PANAM

Aplicacin comercial BIT

Produccin semilla caa

de azcar, SYNGENTA,
BRASIL

Aplicacin comercial BIT

Produccin Stevia rebaudiana,

Empresa STEVIGRAN, Granada,
Espaa.

Aplicacin comercial BIT

Produccin patrones de Prunus,

Empresa INVITROTEK, Bibao,
Espaa.

Aplicacin comercial BIT

Propagacin de pia,
SBW, HOLANDA EN
GHANA

PRODUCCIN IN VITRO DE PLANTAS

UN PROCESO QUE TERMINA CUANDO EL AGRICULTOR

TIENE SUS GANANCIAS EN UNA CUENTA BANCARIA

RETOS...

Desarrollo de protocolos eficientes.

Produccin a partir de genotipos seleccionados.

Produccin de plantas a bajo costo.
LA PRINCIPAL DIFICULTAD EN EL USO DE LOS
BIORREACTORES EST EN LA BIOLOGA Y NO EN LA
INGENIERA. (Vasil et al., 1999).

Efecto beneficioso del BIT en la produccin de

metabolitos secundarios.

D. purpurea, M. royoc, C. citratus, H.

perforatum.
Wilken et al., 2005. In vitro Liquid systems for plant
mass propagation. Yvos Eide, Preil (Eds)

PRODUCCIN DE
ANTHRAQUINONAS

RENDIMIENTO
(mg anthraquinones/g
m. f)

Nordamnacantal (F1.1 y F2.3.1)

0.672

Morindone (F.2.3.4)

0.616

Efecto beneficioso del BIT en reducir la accin de

sustancias txicas o inhibidores del crecimiento
producidos por el propio cultivo.

Lorenzo et al., 2001. Plant. Cell. Tiss. Org. Cult.

Efecto beneficioso del BIT en la produccin de

bromelina, una proteasa importante de la pia.

Prez et al., 2003, 2004. In Vitro Cell. Dev. Biol.Plant.

BIT MODELO PARA ESTUDIAR PROCESOS

FISIOLGICOS.
HIPERHIDRICIDAD

ESTRS OXIDATIVO

ESTRS BITICO Y
ABITICO

CONCLUSIONES

El Biorreactor de Inmersin Temporal es una tcnica eficiente

para la propagacin masiva de plantas porque incrementa el
coeficiente de multiplicacin, la calidad de los brotes, permite
la semi-automatizacin del proceso y la reduccin de los
costos de produccin.

Varios son los factores que determinan la eficiciencia de la

tcnica de inmersin temporal en la propagacin de planta. La
determinacin de los mismos est en dependencia de la
especie de planta y de su capacidad morfogentica.

El Biorreactor de Inmersin Temporal puede ser empleado

para la obtencin de metabolitos secundarios y como modelo
experimental para estudiar procesos fisiolgicos.

PARA
REFLEXIONAR
EL BIORREACTOR PARA LA PROPAGACION
MASIVA DE PLANTAS CONTINUAR
EVOCANDO DIFERENTES DISEOS EN
FUNCIN DE LA FISIOLOGA DE LOS
CULTIVOS, LOS COSTOS DE PRODUCCIN,
LOS RETOS RELATIVOS A LA MANO DE
OBRA IMPUESTOS POR EL SISTEMA DE
CULTIVO Y LA ECONOMA GLOBAL.