68 Extraccion de ADN (Experimento Ambiguo)

EXTRACCIN DE ADN (1)
UN EXPERIMENTO AMBIGUO EN EL LABORATORIO DE ENSEANZA

Muchos estudios de Biologa Molecular comienzan con la extraccin de cidos nucleicos. La lisis
celular libera las molculas en una fase acuosa que es separada de los restos celulares por
centrifugacin. Las protenas son removidas de la fase acuosa con solventes orgnicos (fenol,
cloroformo). El ADN, que permanece en la fase acuosa, precipita junto al etanol y posteriormente
es purificado y resuspendido en un buffer adecuado.
La existencia de kits comerciales ha modificado la rutina de muchos laboratorios. En los kits, los
solventes orgnicos son sustituidos por filtros que retienen el ADN, en condiciones de alta
concentracin salina. La elucin del ADN retenido en el filtro ocurre en baja concentracin salina.
Por alguna razn que se nos escapa, la extraccin de ADN es una actividad que entusiasma a
algunos y decepciona a otros. Probablemente, las diferencias de opinin tengan ms que ver con la
personalidad de los alumnos y sus fantasas que con la actividad en s. Los pasos posibles en un
laboratorio de enseanza son los siguientes:
1. Triturar el tejido para separar las clulas.
2. Lisis de las membranas celulares con detergente, en
una solucin salina para liberar los cidos nucleicos y
las protenas.
3. Digestin de las protenas por accin enzimtica de
proteasas (Opcional).
4. Precipitacin con etanol fro. El ADN es soluble en
alcohol, pero se torna insoluble en presencia de sal
(NaCl) porque el sodio neutraliza la carga negativa de
los grupos fosfatos. El etanol formar una capa en la
superficie por ser menos denso que la solucin acuosa.
5. Observacin de agregados moleculares, de
consistencia mucoidea, en la interfase entre la solucin
acuosa y el alcohol.
Los agregados moleculares obtenidos son una mezcla
de proporcin variable de cidos nucleicos, protenas y
pectina, un carbohidrato presente en la lamela
intercelular y en la vacuola de las clulas vegetales.
BIBLIOGRAFIA
MADDEN D. Discovering DNA. Science in School 1: Spring 2006. http://www.scienceinschool.org.
THE SCIENCE BEHIND OUR FOOD http://discover.uga.edu/sbof/index.htm
MANN, V. S. Educao Tecnolgica no Ensino fundamental: Da Teoria Prtica. Desenvolvida no Instituto de
Tecnologia ORT. Dissertao (Mestrado em Educao) Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro UNIRIO, Rio de Janeiro, 2010.
Gua 68
Mara Antonia Malajovich / Guas de actividades

Biotecnologa: enseanza y divulgacin
http://www.bteduc.bio.br
EXTRACCIN DE ADN (1) / UN EXPERIMENTO AMBGUO
ACTIVIDAD PRCTICA
OBJETIVO
Extraer ADN mediante un procedimiento simple. Las
membranas celulares y nucleares de las clulas del
tomate son disgregadas con detergente, en solucin
salina, liberando los cidos nucleicos que precipitan con
el agregado de etanol fro.
MATERIALES
Un tomate maduro, cuchillo y tabla, 2 bolsas plsticas, 1 vaso de precipitados, 1 colador de tela, 2
ml de detergente, 2 o 3 granos de sal gruesa, tubos de ensayo y gradilla (sustituibles por frascos
pequeos o vasos), 1 pipeta de 10 ml, tubos con 5 ml de etanol 95% bien fro, varilla de madera o
aguja de crochet.
El etanol debe ser colocado en el congelador al menos un da antes de la realizacin de la prctica.
PROCEDIMIENTO
1.
Cortar el tomate en trozos pequeos.
2.
Colocar los trozos del tomate en una bolsa de plstico y amasar bien. Si el tomate no
estuviera suficientemente maduro o sacara poco jugo, agregar hasta un volumen equivalente
de agua.
3.
Agregar la sal gruesa y el detergente a la masa de tomate. Mezclar bien.
4.
Luego de 5 a 10 minutos, filtrar la masa de tomate con un colador de tela.
5.
Distribuir 10 ml del lquido filtrado en cada uno de los tubos de ensayo.
6.
Inclinar levemente el primer tubo y muy despacio dejar

escurrir 10 ml de etanol 95% sobre el lquido. El etanol
formar una segunda capa por encima de la solucin.
7.
Esperar 10 minutos sin mezclar las capas y observar el

ADN que precipita en la interfase de las dos capas y
llega hasta la superficie.
8.
Retirar el ADN con una varilla de madera o con una

aguja de crochet.
Gua 68
Etanol
muy fro

PASO A PASO EN LA EXTRACCION DE ADN DE TOMATE
Preparacin de la masa de tomate (tomate + sal + detergente)
Filtrado
ADN + protenas + pectina
DNA + protenas + pectina
Gua 68
Etanol muy frio

NUESTRO COMENTARIO
Desde el punto de vista tcnico se trata de una actividad cuyo nico requisito es colocar etanol en
el congelador, en un frasco cerrado, al menos un da antes de la realizacin de la prctica. El
tomate puede ser reemplazado por frutillas, un poliploide con alto contenido de ADN.
En el mdulo de Tecnologa de los Alimentos del Curso de Introduccin a la Tecnologa del Instituto
de Tecnologa ORT, la actividad prctica de produccin de mermeladas introduce un test simple
para determinar la proporcin de pectina de una fruta. Como el test involucra la precipitacin de la
pectina con etanol, pensamos que la mayor parte de los agregados moleculares podran ser de
pectina y no de ADN.
La Figura 1 muestra tres experimentos de extraccin de ADN de tomate. El primer frasco
corresponde al protocolo detallado en esta Gua. En el segundo se agreg una pizca de
ablandador de carne que contiene papana, y en el tercero una pizca de pectinasa. La imagen
muestra que la pectinasa elimina la mayor parte de la sustancia gelatinosa de la superficie,
confirmando que se tratara de pectina. Los filamentos de ADN estaran en la nube observada en
la capa de etanol prxima a la interfase.
Como la pectinasa no es una enzima fcil de conseguir, incluimos en nuestro protocolo un test que
detectase la presencia de pectina en el material escogido como fuente de ADN. El protocolo
modificado se encuentra en la Gua 70 (Extraccin de ADN: fuentes alternativas)
Figura 1. Extraccin de ADN de tomate.
1: Protocolo bsico
2: Protocolo bsico + proteasa
3: Protocolo bsico + pectinasa
Pectina
ADN
CMO MONTAR UN PROYECTO?

Ver las Guas 69 (Extraccin de ADN: Procedimiento bsico) y 70 (Extraccin de ADN: fuentes
alternativas).
Gua 68

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Cortar el tomate en trozos pequeos.

Agregar la sal gruesa y el detergente a la masa de tomate. Mezclar bien.

Luego de 5 a 10 minutos, filtrar la masa de tomate con un colador de tela.

Distribuir 10 ml del lquido filtrado en cada uno de los tubos de ensayo.

Inclinar levemente el primer tubo y muy despacio dejar

Esperar 10 minutos sin mezclar las capas y observar el

Retirar el ADN con una varilla de madera o con una

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Preparacin de la masa de tomate (tomate + sal + detergente)

ADN + protenas + pectina

DNA + protenas + pectina

Etanol muy frio

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2: Protocolo bsico + proteasa

3: Protocolo bsico + pectinasa

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