Modelamiento y Simulación de Un Biorreactor Piloto de Lecho Fijo para La Obtención de Jarabes de Fructosa A Partir de Almidón de Yuca

MODELAMIENTO Y SIMULACIN DE UN BIORREACTOR PILOTO DE
LECHO FIJO PARA LA OBTENCIN DE JARABES DE FRUCTOSA A

PARTIR DE ALMIDN DE YUCA
JORGE E. HERNANDEZ RUYDIAZ, IAI.
UNIVERSIDAD DE CRDOBA
FACULTAD DE INGENIERAS
PROGRAMA DE MAESTRA EN CIENCIAS AGROALIMENTARIAS
BERSTEGUI, CRDOBA
2013
viii
MODELAMIENTO Y SIMULACIN DE UN BIORREACTOR PILOTO DE

LECHO FIJO PARA LA OBTENCIN DE JARABES DE FRUCTOSA A
PARTIR DE ALMIDN DE YUCA
JORGE E. HERNANDEZ RUYDIAZ, IAI.
Tesis presentada en opcin al Ttulo Acadmico de Mster en Ciencias

Agroalimentarias con nfasis en Ingeniera.
Director:
EVERALDO MONTES MONTES, IQ. MSc.
Codirector:
JAIRO SALCEDO MENDOZA, IQ. Esp.
UNIVERSIDAD DE CRDOBA
FACULTAD DE INGENIERAS
PROGRAMA DE MAESTRA EN CIENCIAS AGROALIMENTARIAS
BERSTEGUI CRDOBA
2013
ix
La responsabilidad tica, legal y cientfica de las ideas, conceptos y resultados del

proyecto, sern responsabilidad de los autores.
Artculo 61, acuerdo N 093 del 26 de noviembre de 2002 del consejo superior.
Nota de aceptacin
_______________________________
_______________________________
_______________________________
_______________________________
________________________________
Firma del jurado
________________________________
Firma del jurado
xi
DEDICATORIAS
A mis padres Humberto (Q.E.P.D) y Nereyda

A mi esposa Lisbeth Tuiran
A mi hija Mara Sofa
A mi segunda madre Betty Benito Revollo
Jorge Emilio
xii
AGRADECIMIENTOS
Especial:
A Dios por darme la vida, por acompaarme en este proceso y ofrecerme la oportunidad de crecer
espiritual, profesional y acadmicamente.
Generales:
Al Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural (MADR) por el financiamiento de este proyecto.
A la Universidad de Crdoba y en especial al programa de Ingeniera de Alimentos.
A la Universidad de Sucre y en especial al programa de Ingeniera Agroindustrial.
A mi director Ingeniero Everaldo Montes Montes, por su valioso apoyo y colaboracin.
A mi codirector Ingeniero Jairo Salcedo Mendoza por sus aportes y gran experiencia.
A mis compaeros y profesores de maestra con los que compart estos aos de aprendizaje, pues de
cada uno recib informacin, conocimiento y experiencias que cambiaron mi visin.
A los ingenieros agroindustriales Robert Bettin, Bridyz Mazzy, Davier Arrieta, Anglica
Bustamante, Lina Duran, Juan Sierra y Luis Pacheco por su participacin y colaboracin en la fase
experimental de todo el proyecto.
Y a todas aquellas personas que de una u otra forma, colaboraron o participaron en la realizacin de
esta investigacin.
xiii
TABLA DE CONTENIDO
1.
INTRODUCCIN
2.
REVISIN DE LITERATURA
2.1
2.2
2.3
2.4
LA YUCA
2.1.1 Generalidades.
2.1.2 Produccin.
EL ALMIDN
2.2.1 Propiedades.
2.2.2 Usos.
2.2.3 Proceso de hidrlisis.
LOS EDULCORANTES.
2.3.1 Licuefaccin.
10
2.3.2 Sacarificacin.
12
2.3.3 Isomerizacin.
13
CINTICA ENZIMATICA.
14
2.4.1 Enzimas.
15
2.4.2 Cintica de Michaelis-Menten.
15
2.4.3 Modelos cinticos para enzimas inmovilizadas.
16
2.4.4 Mtodos para determinacin de parmetros cinticos.
18
viii
2.5
BIORREACTORES DE LECHO FIJO.

2.5.1 Usos.
23
2.5.2 Diseo y funcionamiento.
24
2.5.3 Cada de presin en FBR.
26
2.5.3.1 Flujo en sistemas porosos.
26
2.5.3.2 Modelos para la prediccin de la cada de presin.
27
2.6
3.
22
MODELAMIENTO Y SIMULACIN DE BIORREACTORES
31
2.6.1 Clasificacin de los modelos.
31
2.6.2 Simulacin de procesos.
32
2.6.3 Validacin de modelos.
33
OBJETIVOS
36
3.1
OBJETIVO GENERAL
36
3.2
OBJETIVOS ESPECIFICOS
36
4.
MATERIALES Y METODOS
38
4.1
MATERIA PRIMA.
38
4.2
ENZIMAS.
38
4.3
LICUEFACCIN
ALMIDN DE YUCA.
4.4
SACARIFICACIN
DE
SOLUCIONES
DE
39
ISOMERIZACIN DE SOLUCIONES DE GLUCOSA ANHIDRA AL
35% P/V EN LOS BIORREACTORES DIFERENCIALES DE LECHO FIJO

41
4.5
ISOMERIZACIN DE SOLUCIONES DE GLUCOSA OBTENIDA DE
ALMIDN DE YUCA EN UN BIORREACTOR DIFERENCIAL DE LECHO

FIJO
43
4.6 AJUSTE DE MODELOS CINTICOS POR REGRESIN NO LINEAL.

44
viii
4.7
ANLISIS TERICO DEL PROCESO DE CONVERSIN Y CAIDA DE
PRESIN EN EL FBR
45
4.7.1 Modelamiento del perfil de conversin de glucosa a lo largo del

biorreactor piloto de lecho fijo.
45
4.7.2 Estudio de la cada de presin a lo largo del biorreactor piloto de

lecho fijo.
4.8
46
SOLUCIN DE LOS MODELOS DE CONVERSIN Y CAIDA DE
PRESIN EN EL FBR
4.9
47
CORRIDAS EXPERIMENTALES EN EL FBR Y AJUSTE DE
VALORES DE CONVERSIN AL MODELO TERICO

5.
RESULTADOS Y DISCUSIN
5.1
50
EVALUACIN DEL INCREMENTO DE LOS EQUIVALENTES DE
DEXTROSA
EN
LOS
PROCESOS
DE
LICUEFACCIN
SACARIFICACIN
5.2
48
Y
50
SELECCIN DEL BIORREACTOR DIFERENCIAL DE LECHO FIJO
QUE GARANTIZA LA MNIMA DIFERENCIA DE CONCENTRACIN DE

GLUCOSA
5.3
CLCULO
55
DE VELOCIDADES INCIALES DE REACCIN DE
GLUCOSA A FRUCTOSA
5.4
57
DETERMINACIN DE PARMETROS A TRAVS DEL AJUSTE DE
MODELOS CINTICOS PARA ENZIMAS INMOVILIZADAS

5.5
DESARROLLO
DE
MODELOS
FENOMENOLGICOS
CONVERSIN DE GLUCOSA Y CADA DE PRESIN
59
DE
61
5.5.1 Modelamiento del perfil de conversin de glucosa a lo largo del

61
5.5.2 Estudio de la cada de presin a lo largo del biorreactor piloto de lecho

fijo
64
ix
5.6
SIMULACIN DE
LOS MODELOS
QUE REPRESENTAN LOS
PERFILES DE CONVERSIN DE GLUCOSA Y LA CADA DE PRESIN. 66

5.7
VALIDACIN DEL MODELO DE CONVERSIN DE GLUCOSA EN
EL BIORREACTOR PILOTO DE LECHO FIJO.
71
6.
CONCLUSIONES
74
7.
RECOMENDACIONES
77
BIBLIOGRAFA
78
ANEXOS
96
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Efecto del tiempo de residencia sobre las velocidades iniciales para
diferentes volmenes de reactores de lecho fijo.
56
Tabla 2. Parmetros de funcionamiento y diseo del biorreactor de lecho fijo.
70
xi
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Estructura molecular de a) amilosa y b) amilopectina.
Figura 2. Isomerizacin de glucosa a fructosa.
13
Figura 3. Fotografa de un biorreactor de lecho fijo.
23
xii
LISTA DE GRFICOS
Grafico 1. Efecto de la relacin E/S sobre el incremento de los ED en el proceso de

licuefaccin de almidn de yuca variedad Tai.
51
Grafico 2. Efecto de la relacin E/S sobre el incremento de los ED en el proceso de

sacarificacin de almidn licuado de yuca variedad Tai.
53
Grafico 3. Cintica de formacin de producto y consumo de sustrato en la

licuefaccin y sacarificacin de almidn de yuca variedad Corpoica-Tai.
55
Grafico 4. Efecto de la concentracin de sustrato sobre las velocidades iniciales de

reaccin y conversin en el proceso de isomerizacin de glucosa a fructosa.
58
Grafico 5. Ajuste de modelos del tipo Michaelis-Menten para enzimas

inmovilizadas.
Grafico 6.
Perfiles de conversin de glucosa a lo largo del FBR a una
concentracin inicial de glucosa de 250 gl-1 y tres flujos volumtricos.

Grafico 7.
67

Grafico 8.
59
67
concentracin inicial de glucosa de 350 gl-1y tres flujos volumtricos.
67
Grafico 9. Perfiles de cada de presin a lo largo del FBR a una concentracin

inicial de glucosa de 250 gl-1 y tres velocidades superficiales.
69
xiii
69
69
Grafico 12. Dependencia de la cada de presin en el FBR con la velocidad

superficial y la viscosidad del fluido de alimentacin.
70
Grafico 13. Comparacin de los perfiles experimentales y simulados de conversin

de glucosa a fructosa a una concentracin inicial de 250 gl-1 y tres flujos
volumtricos.
72

volumtricos.
72

volumtricos.
73
xiv
LISTA DE ANEXOS
ANEXO A. CURVA DE CALIBRADO PARA AZCARES REDUCTORES
97
ANEXO
B.
FOTOGRAFAS
PROCESOS
DE
LICUEFACCIN
SACARIFICACIN
ANEXO
C.
FOTOGRAFAS
98
EVALUACIN
DE
BIORREACTORES
DIFERENCIALES DE LECHO FIJO A ESCALA DE LABORATORIO

ANEXO D.
FOTOGRAFAS
99
DETERMINACIN DE VELOCIDADES
INICIALES DE REACCIN DE GLUCOSA
100
ANEXO E. FOTOGRAFAS PROCESO DE VALIDACIN DE MODELO DE

CONVERSIN DE GLUCOSA EN EL FBR
101
ANEXO F. DATOS DEL PROCESO DE LICUEFACCIN PARA LAS TRES

RELACIONES E/S
102
ANEXO G. SUPUESTOS DEL MODELO, ANOVA Y DMS PROCESO DE

LICUEFACCIN.
103
ANEXO H. DATOS DEL PROCESO DE SACARIFICACIN PARA LAS TRES

RELACIONES E/S
ANEXO I.
SUPUESTOS DEL MODELO, ANOVA Y DMS PROCESO DE
SACARIFICACIN.
ANEXO J.
CINTICOS
104
105
DATOS PARA LA DETERMINACIN DE PARMETROS

106
xv
ANEXO K.
GRFICOS DE DISPERSIN Y RESIDUOS PARA LOS
MODELOS CINTICOS
ANEXO L.
107
VALORES DE LOS PARMETROS CINTICOS PARA
MODELOS TIPO MICHAELIS-MENTEN AJUSTADOS.
LOS
108
ANEXO M. ALGORITMOS SIMULACIN PROCESOS DE CONVERSIN Y

CADA DE PRESIN EN EL FBR
109
ANEXO N. RESULTADOS VALIDACIN ESTADSTICA PARA EL MODELO

DE
CONVERSIN
LABORATORIO.
DE
GLUCOSA
EN
EL
FBR
ESCALA
DE
110
xvi
RESUMEN
La produccin industrial de jarabes de fructosa por va enzimtica tiene como operacin

limitante la isomerizacin de glucosa en reactores de lecho fijo (FBR); colocando
especial atencin al diseo y funcionamiento de estos sistemas reaccionantes. En esta
investigacin se model, simul y valid en el entorno de LabVIEW, el
funcionamiento de un FBR a escala piloto para la produccin de jarabes fructosados
obtenidos de soluciones de almidn de yuca variedad Corpoica TAI para predecir su
comportamiento ante cambios en la velocidad superficial y la concentracin de sustrato.
Se parti de la evaluacin del incremento de los ED en los procesos de licuefaccin y
sacarificacin empleando tres relaciones E/S a travs de un DCA continuando con la
determinacin de los parmetros cinticos de la reaccin de isomerizacin de glucosa,
ajustando modelos de velocidad para enzimas inmovilizadas por regresin no lineal. Se
desarrollaron modelos fenomenolgicos para la conversin y la cada de presin a lo
largo del biorreactor a travs de un anlisis terico, el planteamiento de ecuaciones de
conservacin y el uso de la correlacin modificada de Ergun para geometra cilndrica.
Las mejores alternativas en los procesos de licuefaccin y sacarificacin se obtuvieron
con 0.852 y 1.052 kgETonSS-1 para ED de 24.99 y 74.18% respectivamente. Por su
parte
el
modelo
matemtico
de
MichaelisMenten
Tradicional
(MMT)
de
xvii
equilibrio rpido present

5.77x10-4 aportando un
el mejor ajuste
con un r2 de 95.59% y un EE de
de 4.868 kgGkgE-1h-1 y un
de 210.072 kgGm-3. La
ecuacin de conservacin de la masa represent la conversin de glucosa a fructosa en

la direccin axial para un FBR y su simulacin permiti establecer que aumentos en las
velocidades superficiales de circulacin por el interior del reactor requieren longitudes
hasta 4.12 veces mayores para alcanzar el equilibrio qumico. Del estudio de la cada de
presin se determin que existe una relacin lineal para este parmetro en funcin de
velocidad superficial. Los mejores rendimientos del FBR se alcanzaron para una
velocidad superficial de 1.37x10-4 ms-1, una concentracin de glucosa de 350 kgm-3
requiriendo una longitud de 0.593 m y un tiempo de residencia hidrulico de 72.44
min. Finalmente el
modelo de conversin
represent con significativa precisin
(r2 98.25%; EE 0.028) el proceso real de isomerizacin de glucosa y es la base

para realizar el control y optimizacin de la operacin.
Palabras Clave:, reactor de lecho fijo (FBR), jarabes de fructosa, modelamiento

matemtico, simulacin, relacin enzima sustrato (E/S), equivalentes de dextrosa (ED).
xviii
ABSTRACT
The industrial production of fructose syrups enzymatically operation has as limiting the
isomerization of glucose in fixed bed reactors (FBR); by placing special emphasis to the
design and operation of these systems reacting. This research was modeled, simulated
and validated in LabVIEW environment, the operation of a pilot-scale FBR for to
produce syrups fructosados obtained from cassava starch solutions Corpoica variety
TAI to predict their behavior to changes in the surface velocity and the substrate
concentration. Is started of the evaluation of the increase in the DE liquefaction and
saccharification processes using three ratios E/S through CRD continuing the
determination of the kinetic parameters of the glucose isomerization reaction, adjusting
velocity models for enzymes immobilized by nonlinear regression. Phenomenological
models were developed for the conversion and pressure drop along the bioreactor
through a theoretical analysis, the approach of conservation equations and the use of the
modified Ergun correlation for cylindrical geometry. The best alternatives in the process
of liquefaction and saccharification were obtained with 0,852 and 1,052 kgETonSS-1 for
DE of 24.99 and 74.18 % respectively. For its part, the mathematical model of
Traditional Michaelis-Menten (TMM) of rapid equilibration presented the best fit with a
r2 of 95.59 % and a SE 5.77x10-4 providing a Vmax of 4,868 kgGkgE-1h-1 and a KM of
210,072 kgGm-3. The equation of conservation of mass accounted for the conversion of
glucose to fructose in the axial direction to a FBR and its simulation enabled it to
establish that increases in the superficial velocity of movement by the inside of the
reactor require lengths up to 4.12 times higher to achieve the chemical balance. The
xix
study of the pressure drop was determined that there is a linear relationship for this
parameter as a function of superficial velocity. The best yields of the FBR is reached for
a surface speed of 1.37x10-4 ms-1, a concentration of glucose of 350 kgm-3 requiring a
length of 0,593 m and a hydraulic residence time of 72.44 min. Finally, the conversion
model represented with significant accuracy (r2 98.25 %; SE 0,028) the actual
process of isomerization of glucose and is the basis for the control and optimization of
the operation.
Keywords: fixed bed reactor (FBR), fructose syrups, mathematical modeling,

simulation, enzyme substrate ratio (E/S), dextrose equivalent (DE).
xx
1. INTRODUCCIN
La introduccin de los jarabes de alta fructosa (HFS) como edulcorantes para el mercado
mundial ha generado incentivos para desarrollar nuevos mtodos para su produccin u
optimizar los existentes (Havewala et al, 1974). La obtencin de los HFS puede hacerse
de diversas formas, siendo las ms populares el desdoblamiento enzimtico de la
sacarosa y la isomerizacin de glucosa proveniente de materias primas ricas en almidn
(Khalilpour y Roostaazad, 2008)
A pesar de este escenario, la creciente demanda de etanol para ser utilizado como
biocombustible obtenido a partir de caa de azcar y de maz ha facilitado el montaje
de plantas productoras de alcohol anhdrido, reduciendo la disponibilidad de estas
materias primas para la fabricacin de edulcorantes tradicionales reflejado en una
disminucin del uso de la capacidad instalada en 30% en promedio en la mayora de las
noventa plantas que producen HFS a nivel mundial (Rappo 2002; Goldemberg 2007).
Esta situacin ha
conducido a buscar fuentes alternativas que permitan suplir las
necesidades de las
industrias que requieren este tipo de insumos como son las de
bebidas, confitera, chocolatera, panadera y la apicultura. (ISO 2006; McLaren 2005).
La yuca puede ser considerada para este propsito, siendo la variedad Corpoica-Tai una
de las ms atractivas para los cultivadores por sus altos rendimientos en cultivo y una de
las ms estudiadas en el pas (CIAT 2003; Salcedo et al. 2009; Pjaro y Romero 2008 y
Salcedo
2010). Adems de su gran importancia
para la
econmicos en la regin (CIAT 2002) y gracias al
generacin de ingresos
fortalecimiento de la cadena
realizado por el Instituto Colombiano Agropecuario-ICA y el Centro Internacional de

Agricultura Tropical-CIAT,
como nueva opcin de siembra
y de desarrollo
agroindustrial del cultivo (CORPOICA 1997), se ha venido direccionando el mercado

de almidn de yuca hacia sectores de mayor crecimiento mundial como es la industria
de edulcorantes (Gottret et al. 2001).
En relacin a lo expuesto, la operacin limitante en la obtencin
de
HFS es la
isomerizacin de los jarabes de glucosa que se realiza en diversos tipos de biorreactores

(Carrara et al. 2003). Varios diseos de reactores han tenido aplicacin en diversos
modos de funcionamiento del proceso de conversin (Khalilpour y Roostaazad 2008)
ya sea de forma continua o por lotes, con enzimas libres o inmovilizadas, y con esto la
seleccin de la ecuacin para representar su funcionamiento y realizar un correcto
escalado (Doran 1995). Se pueden sealar una serie de opciones del biorreactor, como
son los biorreactores de lecho fijo o FBR por sus siglas en ingles,
los reactores
continuos de tanque agitado (CSTR), los reactores biolgicos de membrana (MBR),

los reactores de recirculacin y los reactores tubulares con paredes enzimticamente
activas (Khalilpour y Roostaazad 2008).
En los ltimos aos la industria de produccin de jarabes ha aceptado los FBR por ser
los ms adecuados. Los FBR presentan algunas dificultades para su diseo y operacin
cuando emplean enzimas inmovilizadas, por lo que el uso de modelos y simulaciones
que muestren el comportamiento del
reactor a nivel piloto puede mejorar el
conocimiento del proceso, la optimizacin de las condiciones de funcionamiento y el

diseo del equipo (Carrara et al. 2003).
Teniendo en cuenta lo anterior, el objetivo de esta investigacin fue modelar, simular y

validar en el entorno de LabVIEW, el funcionamiento de un biorreactor piloto de lecho
fijo como herramienta que permitiera evaluar su actividad, indicar mejoras en su diseo
y proyectar el correcto escalamiento de todo el proceso a travs de la determinacin de
las condiciones de operacin. Partiendo de la evaluacin
del incremento de los
equivalentes de dextrosa en los procesos de licuefaccin y sacarificacin utilizando

diferentes relaciones enzima sustrato; continuando con la determinacin de
los
parmetros cinticos de la reaccin de isomerizacin de glucosa a fructosa y finalizando

con el desarrollo modelos fenomenolgicos para la conversin de glucosa y cada de
presin a lo largo del biorreactor; sentando las bases para determinar la viabilidad
tcnica del establecimiento de una nueva actividad agroindustrial que permita generar
mayor valor agregado en esta materia prima y proyectarse como el principal recurso
natural alternativo para la obtencin de edulcorantes como insumos de la industria de
alimentos regional ante una posible escasez (Cortes, 2008).
Esta investigacin es un componente del macroproyecto denominado desarrollo de un

proceso para la obtencin de jarabes fructosados a partir de glucosa obtenida de los
almidones de cinco variedades de yuca industrial, utilizando la enzima Sweetzyme IT
Extra de Novozymes basado en la construccin de un biorreactor piloto de lecho fijo.
Financiado por el Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural (MADR) y desarrollado
por la Universidad de Sucre y la Universidad de Crdoba (Salcedo y Montes 2009).
2. REVISIN DE LITERATURA
2.1 LA YUCA
2.1.1
Generalidades.
La yuca (Manihot esculenta Crantz), es una planta cultivada extensivamente en zonas

tropicales y subtropicales de todo el continente. El principal producto econmico de
esta son sus races. La presencia de glucsidos cianognicos en ellas es un factor
determinante para clasificar una variedad de yuca. Dependiendo de este contenido
puede ser clasificada como de calidad culinaria, industrial o de doble propsito. (Ospina
y Ceballos 2002). Las
variedades industriales
surgen como nuevas opciones de
produccin y desarrollo agroindustrial para la Regin Caribe en las que se encuentran la

Orense, Caiselli, Gins, Vernica y Tai, sobresaliendo esta ltima que fue introducida
en Colombia en 1986 con el cdigo MTAI 8. Sus races son de color blanca o crema, de
forma cnica cilndrica, amargas con
niveles de cianuro entre 7 y 9 ppm y
registrando rendimientos en promedio de 30 tonha-1 y porcentajes de materia seca de

35% (CORPOICA 2004).
2.1.2
Produccin.
A nivel mundial, la obtencin de este tubrculo alcanz en 2008 un valor de 238,5

millones de toneladas, un 5 % ms que el ao anterior, impulsado por los esfuerzos
realizados en pro de la seguridad alimentaria y por el aumento de la oferta destinada a
satisfacer las necesidades del sector del etanol en el que esta constituye una materia
prima. En Amrica Latina y el Caribe la produccin de 2008 registr una pequea
contraccin, debida a una menor superficie cultivada en Brasil. En cuanto a Colombia y
Paraguay, los otros principales pases productores de la regin, experimentaron un
crecimiento slido en el mismo perodo (FAO 2008).
En nuestro pas, se estima que existen 205.684 hectreas sembradas de yuca, de las
cuales el 13% corresponden a yuca industrial. De esta siembra se cosechan 180.566 ha
obtenindose
una produccin de
aproximadamente 1.994.049 ton,
siendo los
departamentos de Bolvar, Crdoba, Sucre y Magdalena los mayores productores con

15, 10.8, 9,8 y 9,6% respectivamente. (AGRONET 2005). A partir del ao 2000, sus
usos se han venido diversificando y orientando ms hacia el mercado de los productos
industriales como los almidones, concentrados para animales y alimentos procesados
para consumo humano. (Grottret et al. 2001).
2.2 EL ALMIDN
Es el principal polisacrido de reserva de las plantas. Est formado por una fraccin
lineal llamada amilosa, compuesto formado de la condensacin de D-glucopiranosas por
medio de enlaces -1,4 (Figura 1a) y por una ramificada denominada amilopectina,
unida al tronco central por enlaces -D-1,6 localizados cada 15 a 25 unidades lineales de
glucosa, llegando a tener una molcula de almidn de 2000 a 3000 unidades de glucosa
(Figura 1b), ambas compuestas por D-glucosa. Se encuentra en una gran variedad de
tejidos incluyendo hojas, tubrculos, frutas, semillas y troncos (Cortes 2008).
Figura 1. Estructura molecular de a) amilosa y b) amilopectina.

Fuente: Rosliza et al, 2010
2.2.1
Propiedades.
Muchas de sus propiedades pueden explicarse en la habilidad de adoptar diferentes

estructuras moleculares. La abundancia de hidroxilos otorga propiedades hidrofilicas al
polmero, impartindole afinidad por el agua. Sin embargo, debido a su linealidad, los
polmeros de la amilosa tienden a agruparse muy estrechamente en forma paralela

mediante la formacin de puentes de hidrgeno entre los hidroxilos de los polmeros
adyacentes reduciendo as su afinidad por el agua (Aristizbal y Snchez 2007).
Por otro lado, el peso molecular de la amilopectina vara entre 50 y 500 x106 Dalton.
Estas variaciones estn influenciadas por el origen botnico del almidn. Pudiendo
degradarse por accin de la enzima -amilasa en las uniones -(14) produciendo
dextrinas -lmite, que son las cadenas residuales que contienen los puntos de
ramificacin y despus puede ser atacada por las enzimas pululanasa o isoamilasa que
actan en los enlaces -(16) produciendo maltosa (Lajolo y Wenzel 2006).
2.2.2
Usos.
El almidn se emplea en la industria alimentaria para la preparacin de edulcorantes

como la glucosa y la fructuosa; como sustituto de la harina de trigo en la repostera,
pastelera; como espesante y estabilizante en helados, gelatinas, sopas y salsas. En la
industria
farmacutica es usado como materia prima para la fabricacin de dextrosa,
excipiente o mezcla para los comprimidos y pastillas, como relleno en pldoras y

tabletas. En la industria textil como material para dar apresto a los tejidos; en la
industria del papel para la fabricacin de pasta de papel, couche, kraft y papel cartn.
En minera y petrleos
como agente floculante en las minas de potasio y como
lubricante en las perforaciones petrolferas. A nivel ambiental para el tratamiento de

aguas usadas con metales pesados como el cobre y el nquel; como floculante selectivo
para recuperar vanadio, en la metalurgia del plomo y el cobre. Finalmente en la industria
qumica puede modificarse para la
fabricacin de colas y pegamentos,
o por
esterificacin para producir polister para la fabricacin de espumas de poliuretano

(Jobling 2004; Glittemberg 2012).
2.2.3
Proceso de hidrlisis.
El almidn se puede transformar en glucosa va hidrlisis enzimtica o va hidrlisis

cida. La principal ventaja del proceso enzimtico, comparado con la hidrlisis cida,
radica en la escasa formacin de subproductos y la reduccin en la demanda energtica
del proceso ya que no requiere el uso de grandes presiones ni elevadas temperaturas
como lo reporta Castao y Meja (2008). El proceso de obtencin de edulcorantes a
partir de almidn puede llegar hasta la produccin de jarabes de fructosa requiriendo
dos etapas de hidrlisis y una de cambio configuracional (Morales et al. 2008).
2.3
LOS JARABES DE FRUCTOSA.
Los edulcorantes son sustancias capaces de endulzar un alimento, una bebida o un

medicamento (Lpez y Pea 2004). Pueden clasificarse como nutritivos aquellos que
tiene un poder edulcorante entre 1 y 2 con relacin a la sacarosa, una buena sensacin
de dulzura y un sabor agradable en los que se destacan la glucosa, la fructosa y los
jarabes de fructosa;
los de menor aporte calrico que producen una dulzura
relativamente alta pero con bajo poder edulcorante entre 0.5 a 1 y sabores inspidos en
los que se encuentran el sorbitol y xilitol y por ltimo se encuentran los no nutritivos o
sintticos, es decir, aquellos que tienen un poder edulcorante alto entre 200 y 3000 con
9
relacin a un gramo de sacarosa, no hacen aportes calricos al organismo entre los que
se encuentran el asprtame y el acesulfame k.(Humboldt 2004). Las etapas claves del
proceso de obtencin del edulcorante jarabe de fructosa a partir del almidn son la
licuefaccin, la sacarificacin y la isomerizacin (Morales et al. 2008).
2.3.1
Licuefaccin.
Consiste en la hidrlisis parcial del almidn a un grupo de oligosacaridos del tipo

maltodextrinas, representados por maltopentosa, maltotriosa, maltosa y glucosa. Este
proceso se da mediante el rompimiento de los enlaces glucosdicos - D-1- 4 internos de
la molcula del almidn y se realiza en dos etapas, una licuefaccin primaria y una
secundaria, a baja o alta temperatura; que permiten una licuefaccin eficiente del
almidn (Novozymes 2008a). En general, en esta etapa una solucin de almidn debe
ser calentada para gelatinizarlo. Para continuar con el proceso, se utilizan las alfa
amilasas termoresistentes que actan a temperaturas de 90 95C que permiten efectuar
la gelatinizacin y licuefaccin simultneamente. La hidrlisis se lleva a cabo hasta
alcanzar equivalentes de dextrosa (ED) de hasta 10 % segn la dosificacin de enzima y
el tiempo de hidrlisis, suficiente para evitar el fenmeno
de retrogradacin del
almidn. La alfa amilasa es una endoamilasa con actividad solo para los enlaces
-1- 4, inactiva hacia los enlaces -1- 6 de la amilopectina (Hernndez et al. 2003).
En esta etapa se han reportado diversos estudios utilizando variedad de materias primas.
Vidal (2010), alcanzo ED de 18,82 y 22.15% para concentraciones de almidn de
ame de 36 y 46% p/v respectivamente, utilizando la enzima Liquozyme Supra de
10
Novozymes en una relacin de 0.52 kg de Enzima por Tonelada de Solido Seco

(kgETonSS-1). De igual forma Morales et al. (2008) trabajo un proceso con almidn de
yuca a una concentracin de 400 g*l-1 en un tiempo de 2.5 h utilizando la
-amilasa
120L de Novonordisk en una concentracin de 0.5 mll-1 alcanzando ED de 30.41% y

concentraciones de azucares reductores de 135 gl-1. Ms recientemente Pjaro et al.
(2008) trabajo un proceso con la misma variedad de yuca objeto de este estudio
utilizando la -amilasa Termamil 120L alcanzando ED del 50% en un tiempo de 1.2 h
para una concentracin de almidn 40% p/v. De igual forma las recomendaciones de la
casa comercial Novozymes para el uso de Liquozyme Supra en procesos de
licuefaccin indican que el ED final depender de la dosificacin de la enzima y de las
condiciones del proceso como son la temperatura, la velocidad de agitacin y el pH, para
dosificaciones
entre 0.652 y 1.052 kgETonSS-1 pueden obtenerse ED de 17.19 al
25.78% (Novozymes 2008a).
11
2.3.2
Sacarificacin.
En esta etapa se efecta la conversin de las dextrinas y del almidn licuado en glucosa,
dando como productos los denominados jarabes glucosados. En este proceso, se usan las
enzimas amiloglucosidasa o glucoamilasa, obtenidas de Aspergillus niger o Rhizopus sp,
que tienen la caracterstica de liberar glucosa fundamentalmente de enlaces -1-4, pero
tambin de enlaces -1-6 aunque a una velocidad inferior, lo que permite hidrolizar las
-dextrinas. Para la reaccin, la temperatura ptima oscila entre los 55 y 60 C y un pH
de 4.5, como resultado de este proceso, se obtiene jarabes entre 92 y 96% ricos en
glucosa en tiempos de proceso superiores a 3 h (Novozymes 2008b).
Para la etapa de sacarificacin del almidn licuado se han reportado diversos estudios
utilizando variedad de materiales, enzimas y condiciones de proceso. Morales et al.
(2008) trabaj un proceso de sacarificacin con almidn de yuca a una concentracin de
400 gl-1 en un tiempo total de 12 horas utilizando una amiloglucosidasa de la casa
comercial 120L de Novonordisk en una concentracin de 300 AGU/ml, alcanzando ED
de 85.6% y concentraciones de azucares reductores de 380 gl-1 constantes despus de las
tres horas de proceso. De igual forma Pjaro et al. (2008) trabajo un proceso con la
misma variedad de yuca objeto de este estudio utilizando la amiloglucosidasa AMG
300L de Novozymes alcanzando ED
del 80% en un tiempo de 2 h para una
concentracin de almidn 35% p/v. Ms recientemente Johnson et al. (2009) trabaj en

un proceso de produccin comparativa de glucosa utilizando almidones obtenidos de
yuca y batata en diferentes condiciones de proceso; uno de sus tratamientos consisti en
la utilizacin de la misma enzima objeto de estudio en una concentracin de 0.09% p/v
teniendo como partida soluciones de almidn al 35% por periodos de 48 h a 60oC,
12
alcanzando ED
de 95.16 y 98.52 % para yuca y batata respectivamente. En las
recomendaciones de la casa comercial Novozymes para el uso de Dextrzyme GA

1.5X se especifica que para alcanzar ED cercanos al 97% deben operarse tiempos de
hidrolisis de hasta 90 h controlando principalmente la concentracin de sustancia seca
del almidn licuado en la etapa anterior, la temperatura el pH y la dosificacin
enzimtica (Novozymes 2008b). Para tiempos cercanos a las 2 horas pueden obtenerse
ED de hasta el 80% para una relacin de 0.84 kgETonSS-1.
2.3.3
Isomerizacin.
El proceso consiste en un cambio estructural de una aldosa en este caso la glucosa a una
cetosa como es la fructosa (Royero et al.1991), por accin de la enzima glucosa
isomerasa como se muestra en la Figura 2, requiriendo de un pH de 7,5 a 8 y una
temperatura entre los 55 y 60 C. Esta enzima es producida por varios microorganismo;
algunos de ellos son el Bacillus coagulans, Streptomyces phaechromgenes y
Streptomyces olivaceus (Novozymes 2008c).
Figura 2. Isomerizacin de glucosa a fructosa.

Fuente: Xinua et al. 2008
Para este tipo de procesos, se han desarrollado estudios orientados hacia la

determinacin de mejores condiciones de operacin. Blanco 2000 evalu inicialmente
13
las mejores condiciones de produccin de jarabes de glucosa a partir del almidn

extrado de tres variedades de yuca; los resultados obtenidos mostraron que la
concentracin de sustrato y el tiempo de reaccin son las variables con mayor influencia
sobre el porcentaje de conversin. En una segunda parte de esta investigacin se
determinaron las mejores condiciones de produccin de jarabes de fructosa en un
proceso por lotes, obtenindose como mejores condiciones, la concentracin de jarabes
de 50% p/p, un pH de 7.5, una temperatura a 82 oC y una relacin carga enzimtica-flujo
de 2.98 gEml-1min-1.
En el 2002, Rojas y Mazo determinaron las mejores condiciones para producir jarabe
fructosado con mnimo de 42 % a partir de jarabes glucosados obtenidos de almidn de
yuca,
a nivel de laboratorio con glucosa isomerasa inmovilizada. Los resultados
obtenidos demostraron un volumen de reaccin adecuado de 36.8 cm3 y una

concentracin de glucosa de 34.7 % p/p, el jarabe fructosado obtenido present un
grado de conversin de 46 %, para una temperatura de 60C y un pH 7.5.
2.4
CINTICA ENZIMATICA.
La cintica qumica constituye el estudio de la velocidad y del mecanismo por medio de

los cuales una especie se transforma en otra. La velocidad es la masa, de un producto
formado o de un reactante consumido por unidad de tiempo, el mecanismo es la
secuencia de eventos qumicos individuales cuyo resultado global produce la reaccin
observada (Smith 1986; Segel 2004).
14
2.4.1
Enzimas.
Los enzimas son protenas que catalizan reacciones bioqumicas. Debido a que estas son
extremadamente selectivas con sus sustratos, el conjunto de enzimas sintetizadas en una
clula, determina el camino metablico que ocurre en la misma. Como todos los
catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energa de activacin, acelerando
su velocidad sin consumirse ni alterar su equilibrio (Najafpour 2007). De igual forma
la actividad de los enzimas puede ser afectada por otros factores llamados inhibidores o
activadores como son la temperatura, el pH, y la concentracin del sustrato o producto
(van Boekel 2009).
2.4.2
Cintica de Michaelis-Menten.
El estudio de la cintica de enzimas solubles, generalmente se describe por el modelo

tradicional de Michaelis-Menten. En cuanto a la inmovilizacin de enzimas,
las
partculas porosas imponen resistencias adicionales a la cintica de biocatalizadores

inmovilizados en presencia de factores de modificacin y su cintica se refiere a la
cintica aparente (zdural et al. 2008).
Por estas razones, para enzimas inmovilizadas, la cintica aparente difiere

significativamente de las libres en las constantes cinticas enzimticas debido a los
cambios en las estructuras internas y en el restringido acceso a los sitios activos. Por otra
parte, los parmetros cinticos aparentes pueden ser influenciados por las restricciones
en la transferencia de masa o las interacciones superficiales de la solucin y sus valores
globales calculados pueden diferir de los valores intrnsecos de la enzima libre. Para
incorporar estos aspectos en la cintica de enzimas inmovilizadas, otros dos factores se
15
introducen como son el de efectividad () y el de desactivacin ( (t)) (Khalilpour y

Roostaazad 2008).
De esta forma, la velocidad y los parmetros cinticos de la isomerizacin de glucosa a

fructosa, estn determinados por el modelo tipo Michaelis-Menten para una reaccin
enzimtica reversible, donde se propone una ecuacin de velocidad que explica el
comportamiento cintico para una reaccin de nico sustrato con nico producto (van
Boekel 2009). Este modelo aplicado a la isomerizacin, permite conocer las condiciones
de equilibrio en la mezcla glucosa - fructosa y las constantes cinticas. (Missen et al
1999; McNeil y Harvey 2008)
2.4.3
Modelos cinticos para enzimas inmovilizadas.
El primer modelo propuesto, que permite determinar los parmetros cinticos de la

isomerizacin de glucosa a fructosa es el modelo de MichaelisMenten Tradicional
(MMT) de equilibrio rpido (Illanes 1994; Morales 2004) en el cual se propone una
ecuacin de velocidad que explica el comportamiento cintico de las enzimas y permite
conocer las condiciones de equilibrio en la mezcla glucosa-fructosa y los valores de los
constantes. Este modelo es representado por la ecuacin 1:
(1)
16
Donde rG es la velocidad de consumo de glucosa en (kgGkgE-1h-1), Vmax es la velocidad

intrnseca mxima de reaccin (kgGkgE-1h-1), [G] es la concentracin de glucosa
(kgGm-3), KM es la constante intrnseca de Michaelis-Menten (kgGm-3).
Otro modelo que permite determinar los parmetros cinticos aparentes es el de

Michaelis-Menten con inhibicin por producto (MMP), propuesto por Mahoney y
Whitaker en (1978) y citado por Carrara et al. (2003). Esto se plantea debido a que
algunas sustancias se comportan como inhibidores competitivos y reducen la afinidad
aparente de la enzima por el sustrato, dando lugar a que el sustrato y el inhibidor
compitan por el mismo lugar en la enzima y no se lleve a cabo una reaccin productiva.
La ecuacin 2 describe este modelo de la siguiente forma:
ma
(2)
Donde rG es la velocidad de consumo de glucosa (kgGkgE-1h-1), Vmax es la velocidad

intrnseca mxima de reaccin (kgGKgE-1h-1), [G] es la
concentracin de glucosa
(kgGm-3), KM es la constante intrnseca de Michaelis-Menten (kgGm-3), P es la

concentracin de producto (kgFm-3) y Kp es la constante intrnseca de inhibicin
(kgFm-3).
Finalmente el modelo
de Michaelis-Menten con tasa de desactivacin (MMD),
propuesto Verhoff y Goldstei (1982) citado por Khalilpour y Roostaazad
(2008)
17
tambin permite determinar los parmetros cinticos aparentes de la reaccin de glucosa

a fructosa. En l, se introducen dos factores que incorporan las restricciones de
transferencia de masa y las interacciones superficiales de la solucin, que influyen en los
parmetros cinticos globales de enzimas inmovilizadas
y se representa por la
ecuacin 3.
(t)
( )
Donde rG es la velocidad de consumo de glucosa (kgGkgE-1h-1), es el factor de

eficacia (-), (t) es la tasa de desactivacin (-), [G] es la concentracin de glucosa
(kgGm-3), Vmax es la velocidad intrnseca mxima de reaccin (kgGkgE-1h-1) y KM es la
constante intrnseca de Michaelis-Menten (kgGm-3).
2.4.4
Mtodos para determinacin de parmetros cinticos.
Los valores de los parmetros cinticos de los modelos de velocidad se obtienen por
medio de la interpretacin de datos medidos en un reactor. Generalmente estos datos
consisten en concentraciones de sustratos y productos, y los resultados especficos
dependen del tipo de reactor usado, ya que las concentraciones suelen ser afectadas por
procesos fsicos tales como la conveccin, la difusin y la propia reaccin (Morales
2004).
Para la cintica de enzimas inmovilizadas, normalmente se utiliza un reactor diferencial

de lecho fijo para determinar velocidades iniciales
de reaccin en funcin de la
18
concentracin de sustrato. Este se compone de un tubo que contiene una cantidad muy
pequea de catalizador por lo general dispuestos en forma de cilindro o un disco, el
criterio de funcionamiento y uso de un reactor diferencial para la determinacin de
parmetros cinticos requiere que la conversin de los reactivos en el lecho sea muy
pequea y la concentracin de sustrato a travs del reactor sea esencialmente constante
y aproximadamente igual a la concentracin de entrada. Es decir, la velocidad de
reaccin se considera espacialmente uniforme dentro del lecho (Fogler 1999; van Boekel
2009). En este sentido Bales y Rajniack (1986); Vasic-Racki et al (1991); Khalilpour y
Roostaazad (2008) concluyeron que para una concentracin de glucosa constante al
aumentar las velocidades de flujo y disminuir el volumen del reactor, la velocidad de
conversin disminuye debido a que el sustrato tiene menos tiempo para interactuar con
el catalizador.
Por estas razones este reactor es fcil de construir y a un bajo costo. Debido a las bajas
conversiones alcanzadas en este, la liberacin de calor por unidad de volumen ser
pequea. Al operar este reactor, se deben tomar precauciones para que el sustrato no
forme canales a travs del biocatalizador, sino que fluya de manera uniforme a travs de
este (Fogler 1999). Por consiguiente, la determinacin de los parmetros cinticos
aparentes en reactores de lecho empacado con enzima inmovilizada requiere la medicin
de las concentraciones de sustrato a la entrada y salida a un tiempo determinado con el
fin de encontrar la conversin de sustrato a producto. Este impone una limitacin
importante cuando el tiempo de residencia ( ) de lecho fijo es baja y/o cuando la
actividad del biocatalizador o su masa es baja (zdural et al. 2003).
19
Los parmetros cinticos para este tipo de modelos determinados en reactores de lecho
fijo, dependen de las condiciones de operacin. Esto es, del tamao del reactor, del
modo de funcionamiento ya sea en recirculacin o en un solo paso, del flujo volumtrico
del sustrato que afectan el tiempo de residencia y de la forma de medicin (Khalilpour y
Roostaazad 2008).
Una de las primeras metodologas utilizadas para la determinacin de parmetros

cinticos en reacciones enzimticas es la Representacin de Michaelis-Menten. Este
procedimiento consiste en graficar directamente parejas de velocidades iniciales
frente a concentraciones iniciales de glucosa
; de esta forma
es la velocidad
cuando la concentracin inicial tiende al y
es el valor de [G] cuando
los cuales se pueden estimar aproximadamente, pero con una precisin baja debido a la
dificultad de extrapolar los resultados y de la ausencia de parmetros estadsticos que
validen el ajuste de los datos (Doran 1995; Najafpour 2007). Otra tcnica utilizada es la
Representacin de Lineweaver-Burk en la cual los inversos de las velocidades iniciales
de reaccin
pendiente
y las concentraciones iniciales de glucosa

y ordenada en el origen
coeficiente de correlacin estadstica
darn una lnea recta de

contando al final con el
que dar una aproximacin del ajuste de los
datos al modelo pero pudiendo obtenerse resultados con sesgos importantes. (Spiegel
2008; Biondi et al 2012). De igual forma la Regresin No Lineal ha tomado uso en
cintica especialmente en reacciones del tipo Michaelis-Menten ya que presentan un
comportamiento asinttico. (van Boekel 2009) Esta tcnica estadstica busca obtener
los parmetros de un modelo cintico enzimtico como los descritos anteriormente
20
basados en datos multidimensionales
, minimizando los residuos de la suma de
cuadraros entre los datos experimentales y los del modelo a travs de procedimientos
numricos iterativos como los mnimos cuadrados y con la ayuda de diversos software,
siendo un poco mejor que las tcnicas anteriores en trminos de residuos y menos
influenciados por los puntos de referencia ( van Boekel 2009).
En relacin a lo expuesto Seung et al (2000) estudi la cintica de isomerizacin de

glucosa a fructosa, utilizando un reactor de lecho fijo de 0,15 m de longitud y 0,085 m
de dimetro, manteniendo la temperatura a 60 oC. A travs de la determinacin
experimental de los parmetros del modelo utilizando el mtodo de linealizacin de
Lineweaver-Burk, los resultados mostraron valores de Kmf y Kmf de 37,8 y 52,2
kgGm-3 respectivamente y de igual forma valores de Vmf y Kmf
de 37,8 y 2,29
kgGkgE-1h-1. De igual forma Dehkordi et al (2008) evalu la cintica y el equilibrio de

la reaccin de isomerizacin de la D-glucosa y la D-fructosa utilizando GII comercial,
tipo Sweetzyme IT, en un reactor por lotes de tanque agitado. Se obtuvo una
conversin de equilibrio
de 0.499, a una temperatura de 60,8C. El reactor de
lecho empacado fue modelado dinmicamente mediante el modelo de fase dispersa y los
de 212.743 kgGm-3 y un
de 15.742
kgGkgE-1h-1. Al siguiente ao, Dehkordi et al. (2009), determin
los parmetros
valores determinados fueron un
cinticos de la isomerizacin de la glucosa a fructosa mediante GII Sweetzyme IT esta

vez usando un reactor por lotes de tanque agitado; esta nueva investigacin se realiz a
diferentes temperaturas, entre (50 - 65 C). Para una temperatura de 60 C el valor
obtenidos de
fue 226.231 kgGm-3, un
de 26.55 kgGkgE-1h-1, una
de 0.5 y
21
una
de 1.0. Davdar et al (2001) tambin calcul los parmetros cinticos de un
modelo con desactivacin reportando un valor para

8.77 X10-4 kgGkgE-1h-1m-3, una
de 0.5, una
de 126.12 kgGm-3, un
de
de 1.0 y unos valores del factor de
efectividad () y de desactivacin (t) que oscilan entre 0.87 y 0.95 dependiendo de la

velocidad superficial de circulacin del sustrato por el lecho. Con anterioridad a estos
Converti y Del Borghi (1997)
reportaron
para un reactor batch, usando una GII
comercial y para una temperatura de 60 oC un valor para

de 51.3
kgGh-1m-3, una
de 0.495 y
una
de 126 kgGm-3, un
de 0.98. Se observa la escasa
homogeneidad en los valores reportados para los parmetros cinticos; obedeciendo las
diferencias principalmente al tipo de reactor, al modo y condiciones de operacin
utilizados para la determinacin de las velocidades iniciales (Ozdural et al.2008); en lo
que no existen diferencias es en las condiciones de equilibrio para una temperatura de
60 oC.
2.5
BIORREACTORES DE LECHO FIJO.
O FBR por sus siglas en ingls (Fixed Bed Reactor), consisten en uno o ms tubos
cilndricos que se operan en posicin vertical (Doran 1995; Asad et al 2007)
horizontal (Fogler 1999; Martnez 2005; Schuurman 2008) como se muestra en la

Figura 3. En estos la alimentacin del sustrato puede realizarse por la parte inferior,
superior o por uno de sus extremos (Andrigo et al.1999; Alexiadis y Mazzarino 2005) y
el lecho catalco se compone de un conjunto de capas con partculas de biocatalizador de
varios
tamaos entre 0.3 a 1.5 mm y de diferentes formas geomtricas
ya sean
22
granulares, cilndricas o esfricas (Carrara el al. 2003; Khalilpour y Roostaazad 2008;

Dehkordi et al. 2009).
Figura 3. Fotografa de un biorreactor de lecho fijo.

Fuente: Pope et al. 2010
2.5.1
Usos.
Estos equipos se han utilizado comercialmente para diferentes aplicaciones. Las ms

conocidas son en la industria qumica para la produccin de ciclohexano a partir de
benceno, estireno utilizando etilbenceno, formaldehido a partir de metanol e hidrogeno
usando cloruro de cobre entre otras (Andrigo et al.1999; Abashar 2011; Pope et al
2010). En el campo medioambiental, se han usado en el tratamiento de aguas con alto
contenido de fenol (Bajaj et al. 2008), en el tratamiento de los residuos pecuarios de la
cra de ganado porcino (Nikolaeva et al. 2002) y en la reduccin de cromo hexavalente
(Kathiravan et al.2010). A nivel agroindustrial, se han empleado en la hidrlisis de
almidn a glucosa utilizando glucoamilasa inmovilizada (Sanjay y Sugunan 2005), en
la hidrlisis de la olena de palma a cidos grasos (Chew et al.2008), en la produccin
de glicerol a partir de aceites comerciales usando lipasas inmovilizadas (Oddone et al.
23
2010), para la hidrlisis de la lactosa a glucosa con
-galactosidasa inmovilizada
(Carrara et al. 2003) y para la isomerizacin de glucosa a fructosa utilizando diferentes

formas comerciales de glucoisomerasa inmovilizada (Khalilpour y Roostaazad 2008;
Dehkordi et al. 2009 ). Finalmente en el campo biomdico se han utilizado en la
produccin del virus de la fiebre aftosa (Meuwly et al. 2007), en la produccin de
varias vacunas (Pardo et al. 2001) y en la obtencin de cultivos inmovilizados de
hepatocritos como parte de un dispositivo que funcionan como un hgado artificial
(Allen 2001).
2.5.2
Diseo y funcionamiento.
El diseo de un FBR slo puede hacerse de forma confiable si se dispone de parmetros

cinticos, ya sean intrnsecos o aparentes que pueden utilizarse cuando
estos son
escalados en tamao y geometra utilizando el mismo biocatalizador y en ausencia de

los efectos trmicos; por esta razn y con el fin de dimensionarlos adecuadamente los
parmetros cinticos y la hidrodinmica necesitan ser bien conocidos y definidos
(Berendsen et al. 2007). Estos sistemas son cada vez, los de mayor eleccin para el
desarrollo de bioprocesos; ya que ofrecen una mayor selectividad y conversin de
sustrato, la ms alta relacin sustrato carga de biocatalizador y un bajo costo de
operacin debido al poco intercambio de calor en comparacin con otros sistemas
reaccionantes (Schuurman 2008).
El siguiente paso en el diseo, construccin y modelamiento consiste en evaluar su

funcionamiento a travs de un anlisis terico. En este aspecto los FBR se consideran
como sistemas heterogneos con una fase liquida compuesta por el sustrato y una fase
24
solida constituida por el biocatalizador y ocurren en presencia de un gradiente de

concentracin (Smith 1991; Mayerhofer et al. 2005; Manenti et al.2011), funcionan en
modo continuo con o sin recirculacin de sustrato y en estado estable ya que las
propiedades fsicas no cambian con el tiempo (Doran 1995; Mc Niel y Harvey 2008;
Manenti et al.2011), operando en dos tipos de rgimen trmico; el adiabtico sin
intercambio de calor con los alrededores, para reacciones exotrmicas y con alto valor
del calor de reaccin
como en la descomposicin del perxido de hidrgeno con
-93 kJmol-1 y el dimetro del lecho es mayor a 2.54 cm (Liang et al. 1997; Berendsen
et al. 2007; Sainio et al. 2011) o el isotrmico si no se utiliza ningn sistema de
aislamiento, es necesario el uso de un dispositivo externo para suministro de calor, la
reaccin es endotrmica y de bajo valor como en la isomerizacin de glucosa que
presenta un valor 16.9 kJmol-1, el dimetro del tubo es inferior a 2.54 cm y se desea
mantener la actividad del biocatalizador (Converti et al.1997; Andrigo et al.1999; Xiu et
al. 2001). De igual forma en relacin a la condicin de flujo, este puede desarrollarse
en pistn cuando no existen gradientes radiales de concentracin pero si longitudinales,
se forman perfiles laminares y los nmeros de Reynolds (Re) son menores a 150 o en
dispersin cuando los gradientes de concentracin existen tanto en posicin axial y
radial, se forman pequeos remolinos y los nmeros de Re son superiores a 150. (Carrara
et al. 2003; Berendsen et al. 2007; Schuurman 2008; Lainfiesta 2009). Finalmente la
verificacin de la conversin de sustrato a producto en estos reactores puede realizarse
haciendo uso de la velocidad total que es una funcin exclusiva de la concentracin de
sustrato, formulando ecuaciones de conservacin de masa para el fluido que se desplaza
a travs del lecho de biocatalizador y su solucin proporciona la concentracin y
25
conversin en cualquier punto, incluyendo la salida del reactor (Smith 1991; Levenspiel
2004).
2.5.3
Cada de presin en FBR.
Otro parmetro importante al analizar el diseo y operacin de un FBR es la cada de

presin. Esta se caracteriza por una prdida de energa del fluido en proceso entre dos
puntos de una tubera (Foumeny et al.1996). En la mayor parte de los casos, para
sistemas biolgicos estos diferenciales resultan ser pequeos respecto a la presin total
del sistema, por lo que se justifica ignorar sus efectos sobre la velocidad de reaccin
(Smith 1991; Pope et al. 2010). No obstante se necesita conocer
su valor para
dimensionar el equipo auxiliar de bombeo y otras prdidas intiles, las cuales sern
proporcional a la longitud del lecho y las condiciones hidrodinmicas de funcionamiento
(Montbrun y Jenny 2003; Nemec y Levec 2005; Fernndez et al. 2006).
2.5.3.1
Flujo en sistemas porosos.
Cuando un
lquido se mueve a travs de un lecho de partculas, no produce el
movimiento de las mismas y circula a travs de canales pequeos y tortuosos, perdiendo

energa debido a los efectos viscosos y de forma, manifestados en una disminucin de la
presin del fluido (Lage 1998) que resulta de especial relevancia, pues este fenmeno
est relacionado con la velocidad superficial del fluido ( ), la porosidad ( ) del lecho,
la esfericidad ( ) y el dimetro equivalente (
) de las partculas y su orientacin
(Hermida 2000). De esta manera incrementos en la velocidad superficial del fluido y

disminuciones en la porosidad y la esfericidad generarn mayores cadas de presin en el
sistema y viceversa (Urzua 2008; Presa 2009). En este sentido la influencia de la
26
velocidad superficial del fluido sobre la cada de presin por la distancia (
) est
representada en una relacin lineal para flujos pequeos ubicados en rgimen laminar y
una relacin exponencial para flujos altos ubicados en rgimen turbulento (Sharma et
al. 2001; Presa 2009).
2.5.3.2
Modelos para la prediccin de la cada de presin.
Hay numerosas correlaciones para la cada de presin a travs de lechos, que

comprenden dos teoras principales; el modelo discreto y la analoga del flujo de
partculas en las tuberas; siendo este ltimo el ms popular. Ambas teoras tienen
predicciones razonables a travs de los lechos de partculas esfricas y pseudoesfricas,
pero no son adecuados para camas con partculas de diferentes esfericidades. (Yang
2003). En la actualidad el enfoque anlogo macroscpico es el ms utilizado para
describir el flujo en un medio poroso realizando una caracterizacin del sistema en
trminos de su resistencia hidrulica al flujo cuyos modelos han evolucionado con el
tiempo (Dzmitry y Tallarek 2006)
Una de las primeras correlaciones utilizadas para representar el flujo
en sistemas
porosos fue la desarrollada por Forchheimer en 1901 quien sugiri que este poda ser
descrito por una relacin emprica de orden superior entre la cada de presin y el caudal
y que se representa por la ecuacin 4 como:
27
En esta ( ) representa la viscosidad del fluido en kgms-1 y los valores de y pueden

obtenerse mediante la solucin de un sistema de ecuaciones diferenciales de
Navier-Stokes relacionando la presin y la velocidad y suponiendo condiciones de
contorno iguales; Sin embargo, la compleja geometra de los medios porosos y la no
linealidad de las ecuaciones de Navier-Stokes resultan en una solucin analtica muy
difcil (Presa 2009).
A mediados del siglo XIX, Henry Darcy en su investigacin del flujo de agua a travs de
filtros de arena seal que, bajo ciertas circunstancias, la tasa fue proporcional a la cada
de presin en la direccin de flujo (Dzmitry y Tallarek 2006). Esta teora de flujo
laminar a travs de medios porosos homogneos se basa en su experimento clsico
realizado originalmente en 1856 y es conocida como la ley de Darcy y se puede
representar como muestra la ecuacin 5:
Donde
es una constante que depende de las propiedades del medio poroso y es
llamada conductividad hidrulica o permeabilidad,

ms-1 y
es la velocidad superficial en
es la viscosidad en kgms-1. El flujo de un lquido newtoniano a un pequeo
nmero de Reynolds es conocido como una corriente que sigue la ley de Darcy. Para
lquidos a altas velocidades, esta ley deja de ser validada (Yang 2003).
28
Seguidamente entre los aos 1927 a 1937 Carman-Kozeny estudiaron ampliamente los
flujos de fluidos a travs de varios lechos en rgimen laminar y encontraron una
correlacin que se pudiera aplicar a diferentes formas regulares siempre que sus reas
superficiales pudieran ser determinadas, dicha analoga se expresa como lo indica la
ecuacin 6:
Donde
es la velocidad superficial en ms-1,
porosidad de la partcula sin dimensiones,
es la viscosidad en kgms-1,
es el dimetro de la partcula en m y
es la
es
la esfericidad de la partcula sin dimensiones. Esta correlacin fue deducida suponiendo

un lecho granular
equivalente a un conjunto similar de canales paralelos y para
encontrar el dimetro de partculas irregulares los autores propusieron la medicin

experimental de la cada de presin a travs del lecho (Yang 2003).
Finalmente la correlacin ms utilizada es la presentada por Ergun en 1952, la cual se

obtiene a travs de una combinacin de las ecuaciones Blake-Kozeny y de BurkePlummer descritas por Prieur et al. (2008) representando los efectos viscosos y de forma
para partculas esfricas (Lage 1998) la cual se representa por la ecuacin 7 y los
valores de los factores de forma A y B para biocatalizadores con este tipo de geometras
se estimaron en 150 y 1.75 respectivamente.
29
es la velocidad superficial en ms-1,
Donde
porosidad de la partcula sin dimensiones,
es la viscosidad en kgms-1,
es la
es el dimetro equivalente de la partcula
en m. Esta correlacin ha extendido su aplicabilidad a otras geometras, cambiando los

valores de los factores de forma segn las caractersticas de la partcula. En este sentido
Nemec y Levec (2005) desarrollaron expresiones adicionales que permiten determinar
los valores de A y B para diferentes geometras en funcin de la esfericidad ( ), el rea
superficial ( ) y el volumen de la partcula ( ) como se muestra en las ecuaciones
8, 9 y 10.
En relacin a lo expuesto la correlacin de Ergun es la que presenta mayor uso por la

comunidad cientfica para la determinacin de la cada de presin por unidad de longitud
(
) para FBR usando como sustrato fluidos gaseosos o lquidos ya que ha
representado aceptablemente los datos experimentales con los del modelo.

Especficamente para reacciones en la que la fase fluida es un gas, la mayora de los
30
estudios han evaluado el efecto del incremento de la velocidad superficial, la porosidad

y la esfericidad sobre la
en rgimen de flujo turbulento, encontrado que esta
aumenta de manera no lineal al incremento de las velocidades superficiales y a la

disminucin de la porosidad y la esfericidad (Morgan-Sagastume et al. 2001; Giacoman
et al. 2003; Gmez et al. 2007; Urzua 2008; Mayerhofer et al. 2011), mientras que para
reacciones en la que la fase fluida es un liquido estos parmetros ( ,
y ) influyen
igual pero de forma lineal debido a la dificultad de desarrollar el mismo tipo de rgimen
predominando el laminar (Morgan- Sagastume et al. 2001; Sandidge et al. 2005; Presa
2009; Sharma et al.2011).
2.6
MODELAMIENTO Y SIMULACIN DE BIORREACTORES
Un modelo es una imagen de un sistema real que presenta un comportamiento anlogo

de este en sus propiedades ms importantes y que permite, predecir su comportamiento
original (Pascal et al. 1995; Donoso-Bravo et al 2011). De esta manera el modelamiento
de biorreactores permite establecer una estructura matemtica que describe de manera
cualitativa y/o cuantitativa las caractersticas del proceso de conversin que se sucede en
su interior, ante cambios en las variables de funcionamiento (Scenna 1999; JimnezGonzales y Woodley 2010); adems es una herramienta muy til en la simulacin,
escalado, puesta en marcha, optimizacin y control del proceso (Hassam et al. 1996;
Sablani et al. 2006).
2.6.1
Clasificacin de los modelos.
31
Los modelos para describir un proceso agroindustrial se clasifican de acuerdo al

conocimiento que se tiene del sistema en fenomenolgicos, empricos y semiempiricos.
(Corredor y Caicedo 2005). Los fenomenolgicos o de caja blanca son transparentes al
entendimiento del proceso debido a que provienen de los fenmenos de transporte en
ingeniera y las leyes de conservacin de la masa y la energa siendo los ms empleados
en diseo y optimizacin; los empricos denominados tambin de caja negra reflejan
que el conocimiento del proceso est dado por datos obtenidos del sistema pero que
poco es conocido acerca del mecanismo real del proceso y son el resultado de la
experimentacin y observacin empleando ecuaciones de ajuste donde los parmetros
tienen poco o ningn significado fsico, finalmente los semiempiricos o de caja gris que
resultan de la combinacin del conocimiento y la experimentacin que se realiza sobre el
proceso para estimar los parmetros que se requieren para su solucin, incorporando
empricas a las ecuaciones fenomenolgicas (Hagos et al.2001; Sablani et al. 2006)
2.6.2
Simulacin de procesos.
Una vez planteado el modelo que representa el proceso, es necesario su simulacin

haciendo uso de herramientas informticas especialmente softwares como LabVIEW,
MatLab, Hysys, Aspen, Fortran, Desing II o Consol Multifisics a travs de
mtodos numricos que permitan la solucin del sistema de ecuaciones ya sean
algebraicas o diferenciales y de esta manera efectuar la evaluacin y optimizacin
preliminar del proceso justificados en su habilidad de proporcionar informacin sobre la
capacidad potencial de funcionamiento (Nakamura 1997; Romero et al.1998; Garca et
al. 2008).
32
Los simuladores se pueden clasificar en cualitativos cuando tienen por objeto el estudio
de las relaciones causales y las tendencias temporales de un sistema, la propagacin de
perturbaciones, aplicados en el anlisis de tendencias, la supervisin y diagnostico de
fallas, el anlisis e interpretacin de alarmas y el control estadstico de procesos; en
cuantitativos cuando describen numricamente el comportamiento de un proceso, a
travs de un modelo matemtico del mismo, para ello se procede a la resolucin de los
balances de materia, energa y cantidad de movimiento, junto a las ecuaciones de
restriccin que imponen aspectos funcionales y operacionales del sistema y finalmente
los simuladores estacionarios y dinmicos que resuelven los balances de un sistema no
involucrando la variable temporal, por lo que el sistema de ecuaciones reflejar en el
modelo los cambios de las variables de inters con las coordenadas espaciales utilizando
un sistema de ecuaciones diferenciales en derivadas parciales segn el nmero de
coordenadas espaciales consideradas (Romero et al.1998; Scenna 1999; Martnez et al.
2000; Jafari et al. 2008; Sandrock y de Vaal 2009 ).
2.6.3
Validacin de modelos.
Una vez desarrollado y simulado el modelo, la tarea siguiente y ms importante es la

validacin del mismo, proceso que busca comparar la salida del modelo con el
comportamiento real del proceso en un rango satisfactorio de precisin consistente con
la aplicacin para la que se desarroll (Rebba y Mahadevan 2006; Benfenati et al.2007)
Existen diferentes parmetros estadsticos que permiten correlacionar el grado de ajuste
entre los datos experimentales y los resultados del modelo, entre estos se encuentran el
coeficiente de determinacin (r2); un grafico de residuos para la distribucin normal; el
ndice de eficacia del modelo (NS); el ndice de ajuste modificado (W) y el cociente
33
entre el error cuadrtico medio y el error absoluto medio identificado como

MSE/MAE.(Spiegel 2008; Biondi et al 2012)
En referencia a lo descrito; el modelamiento, simulacin y validacin de FBR ha sido

estudiado por diferentes autores quienes tuvieron en cuenta variedad de simetras,
cinticas y tipos de reaccin, regmenes trmicos y de flujo y fenmenos de transporte a
nivel intraparticula o macroscpico. (Corredor y Caicedo 2005; Berendsen et al.2007)
En la mayora de los casos se han usado ecuaciones de conservacin de la masa y de la
energa a nivel intraparticula en forma unidimensional especialmente cuando estos
operan en rgimen isotrmico, el flujo desarrollado es de tipo pistn y los gradientes
radiales de temperatura y concentracin son despreciables (Hassan et al. 1996; Xiu et al.
2001; Faquir y Attarakik 2002; Stadler 2005); no obstante otros autores en menor
proporcin han planteado estas ecuaciones de conservacin en forma bidimensional,
cuando estos sistemas operan en rgimen adiabtico, con dimetros de lecho altos, en
flujo de dispersin y cuando los gradientes radiales de temperatura y concentracin son
considerables pero tambin a nivel intraparticula (Lin 1972; Smith 1991;Fogler 1999). A
nivel macroscpico algunos autores han evaluado el funcionamiento y conversin en
FBR planteando ecuaciones de conservacin de la masa y de la energa en una o dos
dimensiones y
para diferentes aplicaciones sin incluir la conversin de glucosa a
fructosa (Carrara et al. 2003; Coulson et al. 2004; Berendsen et al.2007; Rincn et
al.2009; Oddone et al.2010; Manenti et al.2011)
34
En este orden de ideas se pueden referenciar los trabajos de Hagos y Cameron 2001;
Carrara et al. (2003); Khalilpour y Roostaazad et al. (2008); Solano et al. (2008);
Oddone et al. (2010); Manenti et al. (2011) quienes en diferentes aplicaciones realizaron
modelamiento, simulacin y validacin de FBR aplicando ecuaciones de conservacin
de la masa y de la energa a nivel macroscpico, en simetra unidimensional en direccin
axial, trabajando en forma isotrmica y requiriendo de diversos mtodos numricos
como Runge-Kutta, Crank-Nicolson, Gauss-Siedel y Predictor-Corrector para la
solucin de las ecuaciones con ayuda de herramientas como MatLab y LabVIEW
reportando en todos los casos que el modelo desarrollado lograba representar
satisfactoriamente los datos experimentales con errores inferiores al 5% y r2 superiores
al 90%. Como parte de sus investigaciones tambin evaluaron los cambios que
generaban en el funcionamiento del sistema, variaciones en la velocidad superficial, el
tiempo de residencia, la concentracin de sustrato sobre la conversin de sustrato y
respecto a la longitud del lecho; en todos los casos determinaron que disminuciones en
las velocidades superficiales y las concentraciones de sustrato se reflejaban en menores
tiempos de residencia hidrulicos para alcanzar la conversin de equilibrio y por su
puesto en menor distancia.
35
3. OBJETIVOS
3.1 OBJETIVO GENERAL
Modelar, simular y validar un biorreactor piloto de lecho fijo para la produccin de

jarabes de fructosa obtenidos de almidn de yuca variedad Corpoica TAI.
3.2
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Evaluar el incremento de equivalentes de dextrosa (ED) en la produccin de

jarabes glucosados en los procesos de licuefaccin y sacarificacin, a partir de
almidn de yuca utilizando tres relaciones enzima sustrato (E/S) (0.652, 0.852 y
1.052 KgETonSS-1)
Seleccionar un biorreactor de lecho fijo que garantice la mnima diferencia de
concentracion de glucosa ( G), evaluando el efecto de
seis tiempos de
residencia (0.010, 0.084, 0.125, 0.170, 0.242 y 0.324 h).
36
Determinar los parmetros cinticos de la reaccin de isomerizacin de glucosa

a fructosa a travs del ajuste de modelos cinticos enzimticos para enzimas
inmovilizadas.
Desarrollar modelos fenomenolgicos que representen los perfiles de conversin

de glucosa y cada de presin a lo largo del biorreactor piloto de lecho fijo.
Simular los modelos que representan los perfiles de conversin de glucosa y la
cada de presin a lo largo de un biorreactor piloto de lecho fijo usando el
entorno de LabVIEW.
Validar con datos experimentales y tericos
el modelo matemtico que
representen la conversin de glucosa a lo largo de un biorreactor piloto de lecho

fijo.
37
4. MATERIALES Y METODOS
4.1 MATERIA PRIMA.
Se prepar almidn a partir de yuca (Manihot esculenta Crantz) variedad TAI (CIAT
2004) suministrada por la Asociacin de Productores de Yuca de las Sabanas de Sucre
y Crdoba (APROYSA) y obtenido del proceso piloto de extraccin va hmeda,
instalado en la Planta de Operaciones Unitarias de la Universidad de Sucre, sede Granja
Perico ubicada en el kilmetro 7 va Sampus-Sincelejo, Departamento de Sucre,
Colombia.
4.2 ENZIMAS.
En la etapa de licuefaccin se emple la -amilasa Liquozyme Supra 2.2X

(Novozymes 2008a), para el proceso de sacarificacin se us la amiloglucosidasa
Dextrozyme GA 1.5X (Novozymes 2008b) y en el proceso de isomerizacin se utiliz
la glucoisomerasa inmovilizada Sweetzyme IT Extra (Novozymes 2008c). Todas estas
enzimas son comercializadas en Colombia por Coldanzimas Ltda.
38
4.3
LICUEFACCIN
SACARIFICACIN
DE
SOLUCIONES
DE
ALMIDN DE YUCA.
Se seleccionaron tres relaciones enzima sustrato (E/S): 0.652, 0.852 y 1.052 kg Enzima
por Tonelada de Slido Seco (kgETonSS-1) para los dos procesos de hidrlisis de
almidn a glucosa de acuerdo a las recomendaciones de Novozymes (2008a; 2008b).
Para la correcta valoracin del cambio en la concentracin de azcares reductores, se
utiliz el mtodo D.N.S. (Miller 1959), previa construccin una curva de calibrado
(Anexo A: Grafico A1.1) que representar el cambio en la concentracin de azcares
reductores en funcin de la absorbancia de la muestra, utilizando reactivos de grado
analtico como
glucosa anhidra (Parnceac PRS) y
cido 3.5 dinitrosaliclico
(Aldrich). Se prepararon 500 ml de soluciones de almidn al 35 % (p/v) corrigiendo la

cantidad necesaria de acuerdo al valor de humedad de la muestra determinada en una
balanza humidificadora MB 200X (Citizen), ajustando el pH en un rango de 5.4 5.6
con soluciones tampn de hidrxido de sodio 0.1 N (Carlo Erba Reagents) y cido
actico 0.1 N (RA Chemicals ). La temperatura se control con un bao termostatado
(Julabo T5) y la agitacin a 120 rpm con un agitador (MLW). La licuefaccin se
realiz en un beaker de 1000 ml sellado y en dos etapas. Una licuefaccin primaria a
60oC durante 30 min y una secundaria a 90 oC durante 120 min. La cantidad total de
enzima fue aadida en una sola dosificacin, evaluando la variacin en el nivel de
equivalentes de dextrosa (ED) a lo largo del tiempo en intervalos de 30 min, realizando
lecturas a una longitud de onda de 540 nm en un espectrofotmetro (Genesys 10s UVVIS), teniendo en cuenta la concentracin de azucares reductores en cada tiempo y la
concentracin inicial de almidn de acuerdo a la ecuacin 11.
39
lmidn
100
Donde ED son los equivalentes de dextrosa en porcentaje;

azucares reductores en
es la concentracin de
es la concentracin de almidn en
y K es
un factor que considera la diferencia de masa entre el anillo de glucosa y el de

anhidroglucosa y que toma un valor de 1.11
Para medir el efecto de la variable independiente sobre la variable de respuesta, el
experimento fue conducido bajo un diseo completamente al azar (DCA), con el factor
relacin E/S en tres niveles, con tres repeticiones para un total de nueve unidades
experimentales, aplicando un anlisis de varianza y una prueba de comparacin de
medias MSD de Fisher (Vertel 2004; Sprinthall 2007; Johnson et al. 2009) usando el
paquete estadstico STATGRAPHICS Centurin XV.
Habiendo seleccionado la relacin E/S
del proceso de licuefaccin, se obtuvieron
soluciones de almidn licuado al 35% (p/v) para evaluar las tres relaciones E/S del
proceso de sacarificacin en un beaker de 1000 ml controlando la temperatura a 60 C,
el pH a un valor 4.5 y velocidad de agitacin en 120 rpm. La cantidad total de enzima
fue aadida en una sola dosificacin, evaluando la variacin en el nivel de ED a lo largo
del tiempo en intervalos de 30 min durante 2.5h, realizando lecturas a una longitud de
onda de 540 nm, teniendo en cuenta la concentracin de azucares reductores [AR] en
cada tiempo y la concentracin inicial de almidn de acuerdo a la ecuacin 11.
40
Para medir el efecto de la variable independiente sobre la variable de respuesta, el

experimento fue conducido bajo un DCA, con el factor relacin E/S en tres niveles, con
tres repeticiones para un total de nueve unidades experimentales, aplicando un anlisis
de varianza y una prueba de comparacin de medias MSD de Fisher (Vertel 2004;
Vicente et al. 2005; Johnson et al. 2009) usando el paquete estadstico
STATGRAPHICS Centurin XV. (Lpez 2002) Un arreglo esquemtico de estos
procesos y del equipo empleado para la valoracin se muestra en el Anexo B (Figuras
B1.1 y B1.2).
4.4
ISOMERIZACIN DE SOLUCIONES DE GLUCOSA ANHIDRA AL
35% P/V EN LOS BIORREACTORES DIFERENCIALES DE LECHO FIJO
Se prepararon 300 ml de soluciones de glucosa anhidra de grado analtico al 35% (p/v)

corrigiendo la cantidad necesaria de acuerdo al valor de humedad de la muestra,
controlando la temperatura a 60 oC y el pH entre 7.4 y 7.8 utilizando soluciones tampn
de acido actico 0.1 N e hidrxido de sodio 0.1 N. Las soluciones se hicieron circular,
con la ayuda de una bomba peristltica (MasterFlex) al interior de tres biorreactores
diferenciales de lecho fijo de 0.1, 0.15 y 0.2 m de altura y de un dimetro de 0.05 m
previamente cargados 4 g de enzima Sweetzyme IT Extra. Una vez que el sistema se
estabilizo se procedi a determinar las concentraciones iniciales y finales de glucosa [G]
utilizando el mtodo de la glucosa oxidasa/peroxidasa (GOD/POD) descrito por
Werner et al. (1970) y utilizado por Lpez et al. (2006) midiendo la absorbancia en un
41
espectrofotmetro (Genesys 10s UV-VIS) a una longitud de onda de 500 nm,

empleando la ecuacin 12.
Donde [G] es la concentracin de glucosa en

muestra;
es la absorbancia del blanco y
valores se calcularon las
es la absorbancia de la
es la absorbancia del patrn. Con estos
conversiones fraccionales ( ) y las diferencias de
concentracin de glucosa [G] a la entrada y salida del biorreactor por la ecuacin 13:
De igual forma se calcularon los tiempos de residencia hidrulico ( ) en h, cuantificando

en m3, los flujos volumtricos ofrecidos por la
el volumen de cada biorreactor (

bomba
en
y las velocidades iniciales de reaccin ( ) en k
considerando el cambio en la concentracin de glucosa

biocatalizador en el reactor
en
en k
y la carga de
de acuerdo a la ecuaciones 14 y 15
respectivamente.
42
Para medir el efecto sobre la velocidad inicial de reaccin ( ); el cambio en la

concentracin de glucosa (
) y la conversin fraccional (x), fueron manipulados el
tiempo de residencia ( ) en seis niveles: (0.010, 0.084, 0.125, 0.170, 0.242 y 0.324 h) y
el flujo volumtrico ( ) en dos niveles (4.783 x10-5 y 9.395x10-5 m3h-1) con tres
repeticiones para un total de 36 unidades experimentales. Para tal efecto fue utilizado el
mtodo de las velocidades inciales descrito por Fogler (1999; 2001) e Izquierdo et al
2004 aplicable a reacciones de isomerizacin de glucosa en condiciones isotrmicas de
60C (Carrara et al. 2003; Dehkordi et al. 2008; Dehkordi et al. 2009). Los resultados
de los tiempos de residencia
[
contra los diferenciales de concentracin de glucosa
se tabularon para seleccionar aquel que present el menor valor. Un arreglo
esquemtico de este proceso se muestra en el Anexo C (Figuras C1.1 y C1.2).
4.5
ISOMERIZACIN DE SOLUCIONES DE GLUCOSA OBTENIDA DE
ALMIDN DE YUCA EN UN BIORREACTOR DIFERENCIAL DE LECHO

FIJO
Previa seleccin de la relacin E/S para los procesos de licuefaccin y sacarificacin se

procedi a la obtencin de jarabes glucosados mediante hidrlisis enzimtica de
soluciones de almidn. Se parti de la precedente obtencin del almidn de yuca,
preparando soluciones en concentraciones de 4, 6, 9, 14, 19, 24, 29, 34, 39, 44, 49, 54,
43
59 y 64 % p/v. A estas soluciones se les determinaron la concentracin de azucares

reductores por el mtodo D.N.S. (Miller, 1959). Las soluciones se hicieron circular al
interior del biorreactor diferencial de lecho fijo seleccionado, de manera continua con
ayuda de una bomba peristltica (MasterFlex), controlando la temperatura a 60 oC y el
pH entre 7.4 y 7.8 utilizando soluciones tampn de cido actico 0.1 N e hidrxido de
sodio 0.1N. Una vez que el sistema se estabilizo se procedi a determinar las
concentraciones iniciales y finales de glucosa utilizando el mtodo de la GOD/POD
descrito por Werner et al (1970) y utilizado por Lpez et al. (2006) midiendo la
absorbancia en un espectrofotmetro (Genesys 10s UV-VIS) a una longitud de onda de
500 nm.
Se fij como variable independiente la concentracin de glucosa [ ] en 14 niveles, de
forma aleatorizado y con tres repeticiones sobre la variable de respuesta velocidad
inicial de reaccin
para un total de 42 unidades experimentales y tomando como
base las variaciones en las concentraciones de glucosa ] antes y despus de circular

por el biorreactor, el tiempo de residencia () y la carga de enzima
, calculando las
velocidades iniciales de reaccin utilizando la ecuacin 15. Un arreglo esquemtico de

este proceso se muestra en el Anexo D (Figuras D1.1 y D1.2).
4.6
AJUSTE DE MODELOS CINTICOS POR REGRESIN NO LINEAL.
Los datos experimentales fueron ajustados al modelo de MichaelisMenten Tradicional

(Ecuacin 1), el modelo de Michaelis-Menten con Inhibicin por Producto (Ecuacin 2)
44
y el modelo de Michaelis-Menten con Desactivacin (Ecuacin 3); aplicando regresin

no lineal a los datos de velocidades iniciales de reaccin
versus concentraciones
iniciales de glucosa [ ] de acuerdo a lo planteado por Dehkordi et al. (2009) y van

Boekel (2009) a travs del software STATGRAPHICS Centurin XV. Para seleccionar
el modelo que presento el mejor ajuste se utilizaron como criterios estadsticos el valor
del coeficiente de determinacin ( ) y el menor valor en el error estndar (SSE) de
acuerdo a lo planteado por Montgomery (1997), Sprinthall 2007 y Gutirrez y de la
Vara 2008).
4.7
ANLISIS TERICO DEL PROCESO DE CONVERSIN Y CAIDA DE
PRESIN EN EL FBR
4.7.1
Modelamiento
del
perfil de
conversin de glucosa
a lo largo del
Se desarroll un modelo matemtico a travs de ecuaciones de conservacin de la masa

(Hagos et al. 2001; Sablani et al. 2006) que representan la conversin fraccional (
de
glucosa a fructosa en un medio slido a lo largo de un biorreactor de lecho fijo a escala

piloto de forma cilndrica con un dimetro de 0.018 m y una longitud de 3.2 m, a travs
de un anlisis terico que permiti establecer los supuestos del modelo (Afandizadeh y
Foumeny 2001; Levenspiel 2004; Corredor y Caicedo 2005; Asad et al 2007;Oddone et
al 2010) y las condiciones hidrodinmicas de funcionamiento (Smith 1991; van Boekel
45
2009). Este permiti determinar la simetra; el tipo, mecanismo y orden de reaccin,

el rgimen trmico y de flujo, el estado y modo de operacin del sistema reaccionante.
En este se incorporaron el modelo cintico tipo Michaelis-Menten escogido en el
objetivo anterior y la
establecida para reacciones isotrmicas de isomerizacin de
glucosa a fructosa a 60 oC segn lo planteado por Khalilpour y Roostaazad (2008).
4.7.2
Estudio de la cada de presin a lo largo del biorreactor piloto de lecho
fijo.
Para el clculo de la cada de presin del flujo a travs del lecho de biocatalizador
inmovilizado en el biorreactor de lecho fijo a nivel piloto, se utiliz la ecuacin de
Ergun modificada descrita en la ecuacin 7 y presentada por Mayerhofer et al. 2011,
calculando el valor promedio de la porosidad
a travs de la determinacin de la
densidad real de partculas de biocatalizador ( ) en

biocatalizador en el lecho (
) en
y la densidad aparente del
, como lo muestra la ecuacin 16. La
densidad real se determino cuantificando la masa promedio de una partcula de

biocatalizador y el volumen promedio de una partcula de biocatalizador asumiendo
geometra cilndrica.
El dimetro de partcula
se determin a travs de la medicin de las dimensiones
de la enzima inmovilizada Sweetzyme IT Extra segn lo recomendado por
Presa
46
(2009). Los valores de la viscosidad
y la densidad
de las soluciones de glucosa
se calcularon de la correlacin desarrollada por Khalilpour y Roostaazad (2008) y de

acuerdo a las ecuaciones 17 y 18 respectivamente.
17)
(18)
Donde [G] es la concentracin de glucosa en

en
; y
es la viscosidad de la solucin en
La velocidad superficial
es la densidad de la solucin
.
se determin midiendo los flujos volumtricos (Q) por
triplicado relacionndolos con el rea transversal (A) del dimetro interno del FBR. Los
valores de los factores de forma A y B para biocatalizadores con geometras cilndricas
fueron calculados con la correlacin desarrollada por Nemec et al. (2005) y citada por
Mayerhofer et al. (2011) de acuerdo a las ecuaciones 8, 9 y 10 respectivamente.
4.8
SOLUCIN DE LOS MODELOS DE CONVERSIN Y CAIDA DE
PRESIN EN EL FBR
Se desarrollo un programa para resolver los modelos usando el entorno de LabVIEW ,

estructurado como un algoritmo y utilizando el mtodo numrico RUNGE KUTTA de
cuarto orden (Constantinides 1987; Mathews y Fink 2000; Kreyszig 2001), manejando
47
las herramientas grficas del entorno del software y realizando ciclos de clculo en
tiempo real y arrojando los resultados en una interfaz interactiva, que permiti una
mejor comprensin de la operacin. Los perfiles de conversin y cada de presin
fueron ilustrados para diferentes concentraciones de glucosa [G], flujos volumtricos
(
de alimentacin, viscosidades de la solucin ( ) y las velocidades superficiales ( )
determinando el efecto de estas variables sobre las condiciones de equilibrio de la

reaccin, la potencia del equipo auxiliar
, la longitud del biorreactor
, la carga
de enzima ( ) y el tiempo de residencia ( ) segn lo planteado por Smith (1991);

Nakamura (1997); Romero et al. (1998) y Garca et al. (2008)
4.9
CORRIDAS EXPERIMENTALES EN EL FBR Y AJUSTE DE VALORES
DE CONVERSIN AL MODELO TERICO
Se realizaron corridas experimentales en una configuracin que incluy un biorreactor

piloto de lecho fijo construido en acero inoxidable con un dimetro de coraza de 0.33 m
como se muestra en al Anexo E (Figura E1.1) El interior del lecho del biorreactor fue
cargado con
600 g de enzima Sweetzyme IT Extra (Anexo E: Figura E1.2). Se
obtuvieron soluciones de glucosa a partir de almidn de yuca variedad TAI a travs de

procesos de licuefaccin y sacarificacin utilizando las relaciones E/S seleccionadas.
Una bomba peristltica ZD con ayuda de una manguera siliconada recibi el jarabe de
glucosa desde el beaker de alimentacin, fue forzado a travs del interior del lecho de
relleno del biorreactor. La
temperatura de la columna del biorreactor se mantuvo
constante en 60 oC con la ayuda de un bao termostatado Julabo 5. El jarabe de
48
alimentacin se calent previamente hasta 60 oC para garantizar una temperatura lo ms

cercana posible a las condiciones de operacin al entrar al reactor. Una vez estabilizado
el sistema se procedi a tomar muestras de jarabe en cinco puntos a lo largo del
biorreactor (0.0; 0.8; 1.6; 2.4 y 3.2 m) determinando el nivel de conversin de glucosa
en cada punto utilizando mtodo de la GOD/POD descrito por Werner et al. (1970) y
utilizado por Lpez et al. (2005).
Para validar el modelo, se perturbaron tanto en el sistema experimental como en el
simulador las variables independientes, concentracin de glucosa [G] en tres niveles
(25, 30 y 35 % p/v) y los flujos volumtricos ( ) en tres niveles (0.125; 0.250 y
0.500 lh-1) por triplicado y de forma aleatoria para un total de 27 unidades
experimentales. En esta retroalimentacin de la informacin se ajustaron los valores de
conversin experimentales y tericos arrojados por el modelo, realizando un anlisis de
correlacin estadstica teniendo en cuenta el r2 y el error estndar (EE) a travs del
software STATGRAPHICS Centurin XV.
49
5. RESULTADOS Y DISCUSIN
5.1
EVALUACIN DEL INCREMENTO DE LOS EQUIVALENTES DE
DEXTROSA EN LOS PROCESOS DE LICUEFACCIN Y SACARIFICACIN
Se utiliz la curva de calibrado representada en el Anexo A (Grafico A1.1) en la que es

evidente una relacin lineal entre la concentracin de glucosa y la absorbancia corregida
por el blanco con un r2 ajustado de 98.51% por encima de lo recomendado por
Montgomery D (1997); Spiegel (2008) y Biondi et al. (2012). En esta, la inclusin de
todos los puntos de la curva entre los lmites internos de color caf proveen una
confianza del 95% para el valor medio de la concentracin de azucares reductores; esta
relacin se expresa a travs de la ecuacin 19:
En el Grfico 1 y en el Anexo F (Tabla F1.1) se muestran los resultados de la evolucin

de los
ED en el proceso de licuefaccin de soluciones de almidn para las tres
relaciones E/S objetos de estudio. Se observa que existe una relacin directamente
proporcional entre los ED y la relacin
E/S; esta
se manifiesta en incrementos
50
aproximados del 29.71 y 49.85% para las dos ltimas relaciones en comparacin a la
inicial, dando como resultados disminuciones en la concentracin de sustrato disponible
a medida que se aumenta la relacin E/S para esta primera etapa.
Equivalentes de Dextrosa (%)
30
25
20
15
10
(E/S) kgE/TonSS
0,652
0,852
1,052
5
0
0
30
60
90
120
150
Tiempo (min)
Grfico 1. Efecto de la relacin E/S sobre el incremento de los ED en el proceso de

licuefaccin de almidn de yuca variedad Tai.
Los residuos estadsticos para el ED en esta etapa comprobaron los supuestos del
modelo, presentando una distribucin normal y una homogeneidad entre sus varianzas.
(Anexo G: Grfico G1.1 y Tabla G1.2). Para determinar si estas diferencias eran
significativas estadsticamente se realiz un ANOVA para ED (Anexo G: Tabla G1.3)
identificando que el valor-P de la prueba-F es < 0.05 lo cual prueba la diferencia a un
nivel de significancia del 5%. Para comprobar cules medias fueron significativamente
diferentes de otras, se realiz una prueba de comparacin de mltiples rangos
Diferencia Minina Significativa (DMS). (Anexo G: Tabla G1.4) identificado dos grupos
homogneos correspondientes a las relaciones
E/S de 0.852 y 1.052 kgETonSS-1,
indicando que no existen diferencias estadsticamente significativas entre estas

relaciones. A partir de estos datos se determin que la mejor alternativa para el proceso
51
de licuefaccin es relacin E/S de 0.852 kgETonSS-1, alcanzando con estas condiciones

una concentracin de azucares reductores de de 97,11 gl-1 y un ED de 24.99%,
resultados estadsticamente semejantes con una menor relacin disminuyendo los costos
de produccin ya que esta es una de las variables que ms influye en este proceso
(Salcedo y Montes 2009). Estos resultados corresponden con las recomendaciones de
Novozymes (2008a) donde se especifica que para este rango de relaciones enzima
sustrato se obtienen ED de 23.7%, tambin con los presentados por Vidal (2010) quien
utiliza la misma enzima pero en una relacin menor y con los publicados por Morales et
al. (2008), quien obtuvo ED de 30.41% resultando ser un 5.4% menor pero en un tiempo
adicional de una hora para el proceso, sin embargo al compararlos con los de Pjaro et
al. (2008) resultan ser muy inferiores pues este publica valores de 50% para la etapa de
licuefaccin debido a la dosificacin enzimtica.
As mismo, los resultados del proceso de sacarificacin se muestran en el Grfico 2 y

el Anexo H (Tabla H1.1) representando la evolucin de la concentracin de azcares
reductores, el porcentaje de ED y la disminucin en la concentracin de sustrato
disponible para las tres relaciones E/S. Al igual que en la licuefaccin los resultados
muestran una relacin directamente proporcional entre las variables de estudio. Estas
muestran un incremento del 29,94 y 55,46 % aproximadamente para las dos ltimas
relaciones E/S en comparacin a la inicial. De igual forma se registra la cintica de
consumo de sustrato con una disminucin gradual en su concentracin a medida que se
aumenta la relacin E/S y el tiempo para esta segunda etapa del proceso de hidrolisis
del almidn.
52
Equivalentes de Dextrosa (%)
76
66
56
46
(E/S) kgE/TonSS
0,652
0,852
1,052
36
26
0
30
60
90
120
150
Tiempo (min)
Grfico 2. Efecto de la relacin E/S sobre el incremento de los ED en el proceso de

sacarificacin de almidn licuado de yuca variedad Tai.
Se verificaron los supuestos del modelo en esta etapa, presentando una distribucin
normal y una homogeneidad entre sus varianzas. (Anexo I: Grfico I1.1 y Tabla I1.2).
De igual forma, para constatar si estas diferencias eran significativas, se realiz un
ANOVA para ED segn la relacin E/S utilizada. En estos se observa (Anexo I: Tabla
I1.3) que este supuesto fue comprobado ya que el valor-P de la prueba-F es < 0,05 en un
nivel de significancia del 5%. Seguidamente se realiz la prueba de comparacin de
mltiples rangos Diferencia Minina Significativa (DMS) para determinar cules medias
fueron significativamente diferentes de otras (Anexo I: Tabla I1.4) identificado tres
grupos homogneos, mostrando que existen diferencias estadsticamente significativas
entre estas relaciones a una significancia del 95% de confianza. A partir de estos
resultados, se determin que la mejor alternativa para el proceso de sacarificacin es la
relacin E/S de 1,052 kgETonSS-1 ya que s mxima la produccin de ED al aumentar
la cantidad de enzima, alcanzando con estas condiciones una concentracin de azcares
reductores de 288.21 gl-1 y un ED de 74.18%. Estos resultados son cercanos a lo
53
recomendado por Novozymes (2008b) y Pjaro et al. (2009) donde se especifica que
para relaciones E/S como la utilizada en este estudio se obtienen valores de 80.7%. De
igual forma son 11.22 % menores que los reportados por Morales et al. (2008) gracias al
tiempo adicional de 2.5 horas utilizado en su proceso. Finalmente son muy inferiores a
los reportados por Johnson et al. (2007) quien reporta valores de ED de 95.16 y 98.52%
para yuca y batata respectivamente pero un tiempo de 48 h. Estos resultados muestran
que los aumentos en los ED finales del proceso generados por las variaciones en las
relaciones E/S no compensan las disminucin en tiempo necesario para alcanzar los
valores finales del proceso reportados por diversos autores; pudiendo convertirse en
condiciones de baja competitividad por el uso ineficiente del sustrato y de la cantidad de
enzima, compensadas un poco por la disminucin del suministro de energa (Sierra
2012, Salcedo y Montes 2011).
Bajo estas condiciones, la produccin de glucosa en los procesos de licuefaccin y

sacarificacin se presenta en el Grfico 3 a travs de una cintica de formacin de
producto y consumo de sustrato. En l se observa la produccin de azucares reductores
a partir de una concentracin de almidn del 35% p/v como sustrato, en un tiempo de
150 minutos; tiempo en el cual esta concentracin disminuye en un 10%
aproximadamente, bajo las condiciones de pH de 5.4 5.6, temperatura de 90 C y
agitacin de 120 rpm. En esta etapa de licuefaccin se logra obtener una concentracin
de azucares reductores de 97,11 gl-1 y ED de 24,99 %, resultados que indican una clara
actividad por parte de la enzima. A medida que transcurre la etapa de sacarificacin y
bajo las condiciones de pH de 4.2 - 4.5, temperatura de 60 C y agitacin de 120 rpm, se
observa un incremento en la formacin de
azucares reductores hasta alcanzar

54
288,21 gl-1, una notable disminucin del sustrato y una produccin de aproximadamente
74,18% de ED; valores que permiten identificar el cese de la actividad enzimtica.
400
80
300
60
Variables
SD (g/L)
AR (g/L)
ED (%)
200
40
100
ED (%)
Concentracin (g/L)
Licuefaccin
20
Sacarificacin
0
0
50
100
150
200
250
300
Tiempo (min)
Grfico 3. Cintica de formacin de producto y consumo de sustrato en la

licuefaccin y sacarificacin de almidn de yuca variedad Corpoica-Tai.
5.2
SELECCIN DEL BIORREACTOR DIFERENCIAL DE LECHO FIJO
QUE GARANTIZA LA MNIMA
DIFERENCIA DE CONCENTRACION DE
GLUCOSA
De acuerdo a los resultados obtenidos, en cada volumen de reactor de lecho fijo

evaluado, se observa que el tiempo de residencia (
dismunuye debido al aumento en la
velocidad superficial ( ), dando como resultados porcentajes de conversion ( ) bajos,

ya que el sustrato tiene menor tiempo en contacto con el catalizador para realizar la
reaccion como se observa en la Tabla 1.
55
Tabla 1. Efecto del tiempo de residencia sobre las velocidades iniciales para
diferentes volmenes de reactores de lecho fijo.
-6
V *10
3
(m )
7,854
11,79
15,71
-5
F *10
3 -1
(m h )
4,621
0,111
9,368
0,117
4,882
0,004
9,402
0,017
4,845
0,152
9,414
0,027
(h)
0,170
0,004
0,084
0,001
0,242
0,000
0,125
0,002
0,324
0,010
0,167
0,000
(%)
52,461
4,513
35,516
8,301
52,498
1,407
43,066
0,399
55,258
0,837
43,593
1,963
G
-3
(kgGm )
180,81
(kgGkgE h )
1,90
123,31
2,63
231,80
1,71
188,94
0,27
164,20
0,90
129,58
1,39
-1 -1
Para los flujos volumetricos estudiados, se observa un aumento en el tiempo de

residencia ( ), debido a que existe mayor periodo de contacto entre el sustrato y la carga
de catalizador; esto trae como consecuencia una disminucion en la velocidad de reaccion
y mayores porcentajes de conversion porque la reaccion ocurre a una velocidad mxima,
con minimas diferencias de concentracion entre la salida y entrada al reactor. Estos
resultados concuerdan con los reportados por Khalilpour y Roostaazad (2008), quienes a
una concentracin de glucosa de 306 kgm-3, diferentes velocidades superficiales
para diferentes longitudes en el reactor, concluyen que aumentos de la velocidad

superficial, disminuyen el tiempo de residencia, porque el sustrato tiene menos tiempo
de interactuar con el catalizador y
por tanto la tasa de conversin disminuye.
Resultados anlogos reportan tambin Hagos y Cameron (2001); Carrara et al. (2003);
Solano et al. (2008); Oddone et al. (2010) y
Manenti et al. (2011) en diferentes
aplicaciones y escalas de funcionamiento para reactores de lecho fijo.
56
De acuerdo a estos resultados, la relacin volumen de reactor (V) vs tiempo de

residencia ( ) que minimiza las velocidades iniciales de reaccin ( ) es la que maneja
un volumen de 7.854 x10-6 m3 para una longitud de 0.1 m en un tiempo de residencia de
0.084 h debido a que esta longitud de lecho proporciona una carga de enzima ( )
suficiente para una conversin ( ) de 35.52 % y un diferencial de concentracin de
glucosa
de 123,31 kgGm-3 en el estado de equilibro para este tipo de reacciones,
adems esta cantidad proporciona que los cambios de temperatura, y composicin que se
producen al pasar sobre el lecho de catalizador, sean pequeos (Smith 1991; Levenspiel
2004).
5.3
CLCULO
DE VELOCIDADES INCIALES DE REACCIN DE
GLUCOSA A FRUCTOSA
Despues de haber seleccionado la mejor relacion E/S para los procesos de licuefaccin y
sacarificacin, se obtuvieron jarabes glucosados a diferenes concentraciones, los cuales
fueron aliementados al biorreactor diferencial de lecho fijo de 0.1 m de longitud para
evaluar el efecto de la concentracin de glucosa [G] sobre las velocidades iniciales de
reaccin ( ) de isomerizacin de glucosa, obtenindose los resultados que se muestran
en el Grfico 4 y el Anexo J (Tabla J1.1).
Con el aumento de las concentraciones iniciales de glucosa, se observa que disminuye el

porcentaje de conversin en el proceso de isomerizacin esto se debe a que
concentraciones menores, la enzima isomeriza una mayor proporcin de sustrato, por
57
ende la conversin es alta. Por el contrario a concentraciones mayores, la enzima

isomeriza ms cantidad de sustrato que a concentraciones bajas y en el mismo tiempo
pero en menor proporcin que a concentraciones bajas, dejando excesos de sustrato sin
isomerizar reduciendo entonces la conversin. Todo esto ocurre porque los sitios activos
de las enzimas son limitados durante la formacin de los complejos enzima sustrato (ES)
y enzima producto (EP) con su posterior liberacin y slo cierta cantidad de sustrato se
puede unir en un momento especfico al sitio activo de estas. Adems, cuando los sitios
activos de los catalizadores se saturan, la reaccin se vuelve insensible a los aumentos de
concentracin. (Segel 2004)
74
64
54
Variables
Velocidad Inicial
Conversin
44
Conversin (%)
Velocidades Iniciales (kgG/kgE*h)
34
24
40
190
340
490
640
Concentracin de Glocosa (kgG/m3)
Grfico 4. Efecto de la concentracin de sustrato sobre las velocidades iniciales de

reaccin y conversin en el proceso de isomerizacin de glucosa a fructosa.
Estos resultados concuerdan con los obtenidos por Khalilpour y Roostaazad (2008);
quienes experimentaron varias concentraciones de sustrato (100, 300 y 580 kgm-3) y
diferentes tasas de flujo de alimentacin, calcularon la conversin de isomerizacin de
glucosa a fructosa, encontrando que al aumentar la concentracin del sustrato en la
58
alimentacin, se produce una notable disminucin en la conversin y por tanto la

cintica de reaccin ya que esta se rige por la carga de enzima en el reactor (Illanes et
al. 1992; Banerjee et al. 1993; Converti et al. 1997) .
5.4
DETERMINACIN DE PARMETROS A TRAVS DEL AJUSTE DE
MODELOS CINTICOS PARA ENZIMAS INMOVILIZADAS
Los valores de las concentraciones iniciales de glucosa y de las velocidades iniciales

de reaccin fueron ajustados a los tres tipos de modelos cinticos del tipo MichaelisMenten para enzimas inmovilizadas descritas con anterioridad utilizando las mismas
condiciones prcticas y su aproximacin a los datos experimentales se representa en el
Velocidad Inicial de Reaccin (kgG/kgE*h)
Grfico 5.
4
3
Ajuste de Modelos
Datos Experimentales
MMT. r2=95.59%
MMP. r2=82.72%
MMD. r2=91.81%
0
0
200
400
600
800
Concentracin Inicial de Glucosa (kgG/m3)
M-MT: Tradicional; M-MP: Inhibicin por Producto; M-MD: Desactivacin.
Grfico 5. Ajuste de modelos del tipo Michaelis-Menten para enzimas

inmovilizadas.
En este, se establece una comparacin entre las predicciones de los modelos y

los valores obtenidos experimentalmente. Como se puede observar, la velocidad de
59
reaccin depende de la concentracin de sustrato en una tendencia hiperblica pues

despus de cierto valor de concentracin de sustrato la velocidad no se ve afectada por
este parmetro, segn la tendencia descrita por los valores experimentales representado
por los puntos. De acuerdo al grfico, el modelo de Michaelis-Menten Tradicional
(MMT) de pseudoprimer orden de enzima sencilla con nico sustrato descrito por la
Ecuacin 1 es el que mejor representa la tendencia en la cintica de conversin de
glucosa a fructosa ya que su ajuste proporciona una menor diferencia y una mayor
correlacin entre los valores observados y los predichos (Anexo K: Grafico K1.1 a K1.3)
en comparacin a los otros modelos (Spiegel 2008; Biondi et al 2012) reflejado en el
mayor valor del r2 (95.59%) y el menor valor para el EE (5,77x10-4). Sin embargo, los
otros modelos cinticos presentaron un ajuste matemtico aceptable ya que presentaron
r2 > al 80%. Los valores de los parmetros cinticos y estadsticos para cada modelo
se presentan en el Anexo L (Tabla L1.1).
De esta manera el modelo cintico de Michaelis-Menten para las condiciones de

operacin toma la forma descrita en la ecuacin 19.
4.868
(19)
210.0 2
En este modelo, los valores de Vmx y KM
son consistentes con
los reportados
Dehkordi et al. (2008) y (2009) y las pequeas diferencias radican en las condiciones de
experimentacin ya que este desarrollo el proceso con tiempos de residencia mayores.
60
Al compararlos con los de Davdar et al. (2001); Converti y Del Borghi (1997) estos
difieren considerablemente confirmando lo propuesto por Ozdural et al. (2008) quien
expresa que estos parmetros son influenciados por las condiciones hidrodinmicas de
operacin del FBR adems de la temperatura, la concentracin de sustrato y el pH.
5.5
DESARROLLO
DE
MODELOS
FENOMENOLGICOS
DE
CONVERSIN DE GLUCOSA Y CADA DE PRESIN
5.5.1 Modelamiento del perfil de conversin de glucosa a lo largo del biorreactor

piloto de lecho fijo.
El anlisis terico realizado al FBR permiti establecer las siguientes consideraciones de

funcionamiento para la solucin de las ecuaciones del balance de masa:
El flujo es constante a lo largo del biorreactor, se desarrolla en rgimen de
pistn y los
gradientes de concentracin en la direccin
radial
son
insignificantes.
El biorreactor funciona en modo continuo sin recirculacin de sustrato,
alcanzando el estado estable y operando en rgimen isotrmico.
El sistema reaccionante es heterogneo, solo hay un sustrato reaccionante y la
reaccin ocurre en presencia de gradientes de concentracin longitudinales.
La porosidad del lecho y la densidad de la solucin son constantes a lo largo
del biorreactor.
61
La verificacin de la conversin de sustrato puede realizarse haciendo uso de la

velocidad total considerando que el rea a lo largo del biorreactor permanece
constante.
De acuerdo a estos supuestos, el balance de conversin de glucosa a lo largo del

biorreactor se puede expresar por la ecuacin 20.
De esta expresin puede considerarse que la velocidad de generacin de glucosa (
) es
igual a cero (Doran 1995) y una vez que el biorreactor alcanza el estado estable (Mc
Niel y Harvey 2008; Manenti et al.2011) el cambio en la masa de glucosa que se
acumula al interior de este con respecto al tiempo en un instante determinado es igual a
cero
(
y al dividir toda la expresin por la variacin en la direccin axial
), el balance toma la forma de la expresin 21:
Tomando el lmite del cambio en la direccin (
cercano a cero y como el rea ( ) y
la velocidad superficial ( ) son constantes y no dependen de la direccin ( ) al derivar

la ecuacin 21 resulta la ecuacin diferencial 22:
62
En esta expresin la velocidad total de consumo de glucosa (
) est dada por el
modelo propuesto por Dehkordi et al. (2009) que es funcin de la concentracin inicial
de glucosa [ ] y de las condiciones de equilibrio como son la concentracin de glucosa
en el equilibrio [
], la conversin de equilibrio ( ) y la constante de equilibrio (
para esta reaccin (Banerjee et al. 1993; Converti et al. 1997) como se muestra en la
ecuacin 23.
La concentracin de glucosa en el equilibrio [
] en la expresin 23 se calcul mediante
el modelo de Khalilpour y Roostaazad (2008) representado por la ecuacin 24, que

restringe el mximo valor que puede alcanzar esta en el proceso.
Para el clculo del valor de la conversin de equilibrio ( ) se utiliz la ecuacin 25

propuesta por Carrara et al. (2003) ya que las condiciones equilibrio para la
isomerizacin de glucosa a fructosa est dada para una
=1.0 a 60 oC.
63
Al sustituir estas expresiones en el modelo de consumo de glucosa descrito en la

ecuacin 23 este toma la siguiente forma de la ecuacin 26:
Y al incorporar los parmetros cinticos descritos en la ecuacin 19 en la ecuacin 26 y

a su vez sustituir est en la ecuacin 22, la ecuacin diferencial toma la forma definitiva
que muestra la ecuacin 27:
La ecuacin 27 representa el modelo de conservacin de masa para la conversin

unidireccional de glucosa por glucoisomerasa inmovilizada (Sweetzyme IT Extra) en
rgimen isotrmico que permite determinar la concentracin de glucosa [G] en cualquier
posicin del FBR ante cambios en la concentracin inicial [ ], en la velocidad
superficial ( ) y con este valor poder determinar la conversin ( ) en cualquier posicin
del sistema reaccionante.
5.5.2 Estudio de la cada de presin a lo largo del biorreactor piloto de lecho fijo
64
La cada de presin causada por la matriz slida del lecho de biocatalizador
diferentes velocidades superficiales de flujo y viscosidades se describi por la

correlacin de Ergun modificada para geometra cilndrica como se muestra en la
ecuacin 28:
Esta expresin representa la cada de presin por unidad de longitud y muestra nuevos
valores para los factores de forma A y B tradicionales de la correlacin de Ergun. En
este caso el valor de A cambia de 150 a 199.25 13.91 y el valor de B cambia de 1.75 a
2.25 0.12; esto se debe principalmente a la modificacin de la esfericidad ( ) para
este tipo de geometra afectando igualmente el valor de la porosidad ( ) aumentando su
valor hasta 59.7% muy por encima de los valores para partculas cilndricas que se
ubican alrededor del 30% dejando ms espacio para el trnsito del fluido por el interior
del lecho (Foumeny et al.1996; Nemec y Levec 2005; Urzua 2008; Presa 2009).
De esta forma y considerando que los parmetros calculados
(A, B, ,
permanecen constantes; la expresin es funcin de la viscosidad ( ), de la densidad ( )

de las soluciones de glucosa (Khalilpour
y Roostaazad 2008) y de la velocidad
superficial ( ) cuyo valor estar condicionado por el tiempo de residencia ( ) necesario

para que el sistema alcance el equilibrio qumico en la menor distancia posible (Hagos y
Cameron 2001; Carrara et al. 2003).
65
5.6
SIMULACIN DE
LOS MODELOS
QUE REPRESENTAN LOS
PERFILES DE CONVERSIN DE GLUCOSA Y LA CADA DE PRESIN.
La solucin de la Ecuacin 27 del modelo de conversin de glucosa en el biorreactor

de lecho fijo se llev a cabo usando un algoritmo (Anexo M: Imagen M1.1) en el
entorno de LabVIEW con el mtodo numrico Runge-Kutta de cuarto orden.
Las Grficas 6,7 y 8 representan los perfiles de conversin a lo largo del biorreactor
para concentraciones iniciales de glucosa de 250, 300 y 350 gl-1 y flujos volumtricos
de 0.125, 0.250 y 0.500 lh-1 con un dimetro constante de 0.018 m, mostrando un
comportamiento hiperblico hasta alcanzar la conversin de equilibrio (Segel 2004). Se
puede observar, que al aumentar el flujo volumtrico y con este la velocidad superficial
de circulacin de las soluciones de glucosa por el interior del lecho, se requieren
longitudes del biorreactor mayores para alcanzar la conversin de equilibrio en el
proceso de isomerizacin. Estas longitudes resultan ser hasta 4.12 veces mayores al
comparar los requerimientos entre los flujos estudiados, en correspondencia con lo
reportado por Hagos y Cameron (2001); Carrara et al. (2003); Giacoman et al. 2003;
Khalilpour y Roostaazad et al. (2008); Solano et al. (2008); Lainfiesta 2009; Oddone et
al. (2010) y Manenti et al. (2011) quienes determinaron que disminuciones en la
velocidad superficial y la concentracin de sustrato se reflejaban en menores tiempos
de residencia para alcanzar la conversin de equilibrio en menores longitudes.
66
Conversion X (-)
0,5
0,4
0,3
Flujo Volumetrico (L/h)

0,125
0.250
0.500
0,2
0,1
0
0
80
160
240
Longitud del Biorreactor de Lecho Fijo (cm)
320
Grfico 6. Perfiles de conversin de glucosa a lo largo del FBR a una

Conversion X (-)
0,5
0,4
0,3

0,125
0,250
0,500
0,2
0,1
0
0
80
160
240
320

Conversion X (-)
0,5
0,4
0,125
0,250
0,500
0,3
0,2
0,1
0
0
80
160
240
320

concentracin inicial de glucosa de 350 gl-1y tres flujos volumtricos.
67
Esta proporcin se refleja igualmente en el volumen del FBR y en la carga de enzima,

sin disminuciones considerables en los tiempos de residencia como se muestra en la
Tabla 2. De igual forma los resultados de esta tabla muestran que aumentos en el rango
de concentraciones de glucosa evaluados para los diferentes flujos volumtricos no
reflejan variaciones considerables en las longitudes de lecho necesarias y por ende en el
volumen (V), la carga de enzima ( ) y el tiempo de residencia ( ).
Seguidamente se solucion la ecuacin 28 que representa la cada de presin en un

FBR en el entorno de LabVIEW usando un algoritmo (Anexo M: Imagen M1.2). Para
este parmetro las graficas 9,10 y 11 representan los perfiles de cada de presin
resultando ser poco considerables con valores inferiores a los 400 Pa (Smith 1991; Pope
et al. 2010) y en una dependencia lineal con la longitud del lecho de catlisis para las
velocidades superficiales de 1.37 E-4, 2.73E-4 y 5.47 E-4 ms-1 y concentraciones
iniciales de glucosa de 250, 300 y 350
gl-1 en concordancia con lo plateado por
Foumeny et al. (1996); Sharma et al. (2001); Presa 2009; Mayerhofer et al. (2011).
De igual forma los resultados de la Tabla 2 muestran el consolidado de parmetros de

funcionamiento para el FBR; determinndose que para las condiciones de operacin su
mejor actividad se alcanza en una concentracin inicial de glucosa de 350 kgm-3, un
flujo volumtrico de 0.125 lh-1 que equivale a una velocidad superficial de 1.37x10-4
ms-1, una longitud de 0.593 m para un volumen de 1.51x10-4 generando una cada de
presin de 18.11 Pa, requiriendo una carga de enzima de 0.113 kg y necesitando un
tiempo de residencia de 72.44 min para alcanzar el equilibrio.
68
Caida de presin (Pa)
200
Velocidad superficial (m/s)
1.37E-4
2.73E-4
5.47E-4
160
120
80
40
0
0
80
160
240
Longitud del biorreactor de lecho fijo (cm)
320
Grfico 9. Perfiles de cada de presin a lo largo del FBR a una concentracin

300
1.37E-4
2.73E-4
5.47E-4
250
200
150
100
50
0
0
80
160
240
320
400
1.37E-4
2.73E-4
5.47E-4
300
200
100
0
0
80
160
240
320
69
Como se muestra en el Grafico 12 la cada de presin por unidad de longitud (
para el lecho de biocatalizador del FBR maneja un rango bajo de valores que se
encuentran entre los 12 a 125 Pam-1, indicando como se planteo anteriormente que al
aumentar la longitud del sistema mayor ser su valor.
Caida de Presin (Pa/m)
150
120
Viscocidad (kg/m*s)
1.01E-3
1.47E-3
2.10E-3
90
60
30
0
0,000137
0,000274
0,000411
0,000548
Velocidad Superficial (m/s)
Grfico 12. Dependencia de la cada de presin en el FBR con la velocidad

superficial y la viscosidad del fluido de alimentacin.
Tabla 2. Parmetros de funcionamiento y diseo del biorreactor de lecho fijo.
kgm
-3
lh-1
0.125
x10-4
m2
x10-4
ms-1
m
1.37
0.534
x10-4
m3
Pa
kg
min
1.36 07.89 0.102 65.26
5*10-3
0.055
0.021
0.054
250
0.250
2.73
1.052
2.68
21
4*10-3
0.041
0.016
0.043
0.500
5.47
2.201
5.60
3*10-3
0.032
0.013
0.033
0.125
1.37
0.621
1.58
5*10-3
0.055
0.025
0.063
300
0.250
2.54
2.73
0.988
2.51
10
4*10-3
0.15
0.041
0.016
0.040
0.500
5.47
2.072
5.27
3*10-3
0.032
0.012
0.031
0.125
1.37
0.593
1.51
5*10-3
0.055
0.023
0.061
350
0.250
2.73
0.945
2.40
15
4*10-3
0.041
0.015
0.039
0.500
5.47
2.201
5.60
3*10-3
0.032
0.011
0.032
0.316
0.011
2.612
31.07 0.201 64.27

0.497
0.018
3.213
131.9 0.420 67.22

0.766
0.021
2.016
13.25 0.119 75.89

0.535
0.013
3.035
42.16 0.189 60.33

0.674
0.017
3.016
178.8 0.396 63.28

1.037
0.019
1.898
18.11 0.113 72.44

0.105
0.012
2.897
57.70 0.180 57.72

0.923
0.016
2.886
271.1 0.420 67.22

10.84
0.013
2.016
70
5.7
VALIDACIN DEL MODELO DE CONVERSIN DE GLUCOSA EN EL
BIORREACTOR PILOTO DE LECHO FIJO.
Una vez realizadas las corridas experimentales para cada concentracin inicial de
glucosa y velocidad superficial se determinaron los niveles de conversin promedios en
cada punto de muestreo a lo largo de todo el biorreactor.
Las Grficas 13, 14 y 15 muestran los resultados de la validacin para los perfiles de
conversin, como una funcin dependiente de la concentracin inicial de glucosa entre
niveles 250, 300 y 350 kgm-3 y del flujo volumtrico de alimentacin tambin en tres
niveles (0.125, 0,250 y 0,500 lh-1). En estas, las lneas continuas representan
los
resultados de la simulacin y los puntos del mismo color representan los resultados
experimentales. En todos los casos el modelo propuesto represent con significativa
precisin
el proceso de conversin reflejado en los altos
valores del r2 ajustado
superiores al 70% y en los bajos valores del error estndar (EE) que en ningn caso
fueron superiores al 0.028 como lo recomienda Montgomery (1997) (Anexo N: Tablas
N1.1 a N1.3). Estos valores para el EE representan la escasa dispersin de los valores
experimentales alrededor de la curva de simulacin con el uso del modelo de conversin
desarrollado (Kuehl 2000).
Es evidente en estas grficas que la mayor parte de la conversin se realiza en la primera
seccin del biorreactor, antes de completar los primeros 0.8 m para el menor valor de la
velocidad superficial mantenindose relativamente constante hasta completar toda la
longitud del FBR, razn por la cual el ajuste entre los datos experimentales y los del
modelo presentan la exactitud reportada, originndose en la dificultad de realizar el
71
muestreo en esta zona, pues la configuracin experimental solo permiti dicho proceso
cada 0.8 m, es decir, en cinco puntos y de esta manera poder verificar la precisin del
modelo en esta seccin revalidando su uso en el control del proceso, realizar el anlisis
de las condiciones de operacin, predecir el comportamiento de la cintica a diferentes
velocidades superficiales y concentraciones de glucosa que maximicen los rendimientos
del proceso y sirvan como base para el escalado definitivo a nivel industrial (Morales et
al. 2008).
Conversin X (-)
0,5
0,4
Flujos Volumetricos (L/h)

0,125-Exp
0,250-Exp
0,500-Exp
0,125-Mod
0,250-Mod
0,500-Mod
0,3
0,2
0,1
0
0
80
160
240
320
Grfico 13. Comparacin de los perfiles experimentales y simulados de conversin

volumtricos.
0,5
Conversin X (-)
0,4
0,125-Exp
0,250-Exp
0,500-Exp
0,125-Mod
0,250-Mod
0,500-Mod
0,3
0,2
0,1
0
0
80
160
240
320

volumtricos.
72
0,5
Conversin X (-)
0,4
0,125-Exp
0,250-Exp
0,500-Exp
0,125-Mod
0,250-Mod
0,500-Mod
0,3
0,2
0,1
0
0
80
160
240
320

volumtricos.
73
6. CONCLUSIONES
Los incrementos de los ED finales en los procesos de licuefaccin y sacarificacin

estuvieron influenciados por las relaciones E/S utilizadas y las mejores alternativas
se encontraron para 0.852 y 1.052 kgETonSS-1 respectivamente.
Los aumentos en la dosificacin enzimtica aplicada durante el proceso de

sacarificacin no lograron compensar la disminucin en el tiempo recomendado
para alcanzar los ED normalmente reportados.
El biorreactor diferencial de lecho fijo que minimiza las diferencias de concentracin

de glucosa es el de 0.1 m de altura con un valor 123.31 kgGm-3, un tiempo de
residencia de 0.084h y una conversin de 35.56%.
Los aumentos en las concentraciones iniciales de glucosa alimentadas al biorreactor

diferencial de lecho fijo seleccionado, generan mayores velocidades iniciales de
reaccin a costas de disminuciones en la conversin fraccional.
74
El modelo cintico que present mejor ajuste fue el de MichaelisMenten

Tradicional (MMT) con un coeficiente de correlacin estadstico (r2) de 95.59% y un
error estndar (EE) de 5.77x10-4 aportando un
de 4.868 kgGkgE-1h-1 y un
de 210.072 kgGm-3.
La ecuacin de conservacin de la masa permiti desarrollar un modelo

unidimensional, en rgimen permanente, isotrmico y de flujo pistn que representa
la conversin de glucosa a fructosa en la direccin axial para un FBR incorporando
parmetros cinticos y de equilibrio.
La simulacin del modelo de conversin de glucosa en el entorno de LabVIEW a

travs de perfiles longitudinales permiti establecer que aumentos en las velocidades
superficiales requieren longitudes de lecho hasta 4.12 veces mayores del FBR para
alcanzar la conversin de equilibrio.
El estudio de la cada de presin a travs de la ecuacin de Ergun usando el entorno

de LabVIEW permiti establecer que las variaciones en la velocidad superficial
presentan una dependencia lineal para este parmetro con la longitud del FBR.
Las condiciones que mejoran el funcionamiento del FBR se presentan para una
concentracin inicial de glucosa de 350 kgGm-3, una velocidad superficial de
1.37x10-4 ms-1 requiriendo una longitud del lecho de 0.593 m para un volumen de
1.51x10-4 m3, generando una cada de presin de 18.11 Pa, una carga de enzima de
0.113 kg y un tiempo de residencia de 72.44 min.
75
El modelo desarrollado para la conversin de glucosa en el FBR a escala piloto

represent con significativa precisin (r2 98.25%; EE 0.028) el proceso, por la
escasa dispersin de los valores experimentales alrededor de la curva de simulacin.
76
7. RECOMENDACIONES
Establecer parmetros de optimizacin para la produccin de glucosa en los procesos

de licuefaccin y sacarificacin a partir de almidn de yuca evaluando el efecto
combinado de la velocidad de agitacin, la concentracin de sustrato, el tiempo de
proceso y la relacin E/S utilizando la metodologa de superficies de respuesta.
Realizar estudios cinticos de isomerizacin de glucosa que incorporen al modelo el

efecto de la velocidad superficial y la temperatura as como la determinacin de
parmetros de reemplazo de GII en procesos industriales derivados de estudios de
desactivacin en FBR.
Redisear el FBR con cambios geomtricos en el dimetro y longitud del lecho e

hidrodinmicos que incrementen su capacidad de produccin facilitando el
funcionamiento en continuo de todo el proceso de obtencin de jarabes de fructosa.
Relacionar el modelo de conversin desarrollado con fenmenos de transporte como

la
transferencia de calor y de masa a nivel macroscpico e intraparticula que
aumenten
su
precisin facilitando su uso en una estrategia de control.

77
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ANEXOS
96
ANEXO A. CURVA DE CALIBRADO PARA AZUCARES REDUCTORES
Azucares Reductores (mg/L)
1000
800
600
400
(AR)=47.06 + 1060.4*Abs
r2=98.51%
200
0
0
0,2
0,4
0,6
0,8
Absorbancia a 540 nm
Grafico A1.1 Curva de calibrado para patrones de azucares reductores*.

Fuente: Autor
97
ANEXO B. FOTOGRAFAS PROCESOS DE LICUEFACCIN Y

SACARIFICACIN
(a)
(b)
Figura B1.1 Arreglo esquemtico en la evaluacin de las relaciones E/S durante los
procesos de licuefaccin (a) y sacarificacin (b) de soluciones de almidn *.
*Fuente: Autor.
Figura B1.2 Soluciones de dextrina para evaluacin de las relaciones E/S en el proceso
de sacarificacin *.
*Fuente: Autor.
98
ANEXO C. FOTOGRAFAS EVALUACIN DE BIORREACTORES

DIFERENCIALES DE LECHO FIJO A ESCALA DE LABORATORIO
Figura C1.1 Biorreactores diferenciales de lecho fijo a escala de laboratorio de 0.1; 0,15
y 0,2 m de altura *.
*Fuente: Autor.
Figura C1.2 Montaje para calcular los valores de conversin de glucosa en el

biorreactor diferencial de lecho fijo a escala de laboratorio para una altura de 0,15 m *.
*Fuente: Autor.
99
ANEXO D. FOTOGRAFAS DETERMINACIN DE VELOCIDADES

INICIALES DE REACCIN DE GLUCOSA
Figura D1.1 Montaje para la obtencin de jarabes de glucosa en los procesos de

licuefaccin y sacarificacin con las relaciones E/S seleccionadas. *.
*Fuente: Autor.
Figura D1.2 Montaje para la isomerizacin de glucosa a fructosa en el biorreactor

diferencial de lecho fijo de 0.1 m de altura *.
*Fuente: Autor.
100
ANEXO E. FOTOGRAFAS PROCESO DE VALIDACIN DE MODELO

DE CONVERSIN DE GLUCOSA EN EL FBR
(a)
(b)
Figura E1.1 Montaje para la validacin del modelo de conversin de glucosa en el FBR
a escala de laboratorio. Vista frontal (a). Vista lateral (b) *.
*Fuente: Autor.
Figura E1.2 Enzima Sweetzyme IT Extra de Novozymes cargada al FBR a escala de

laboratorio *.
*Fuente: Autor.
101
ANEXO F. DATOS DEL PROCESO DE LICUEFACCIN PARA LAS TRES

RELACIONES E/S
Tabla F1.1. Evolucin del proceso de licuefaccin de almidn de yuca variedad

Corpoica-Tai para las tres relaciones enzima/sustrato.
1,052
kgE/TonSS
0,852
kgE/TonSS
0,652
kgE/TonSS
Relacin Variable
E/S
Medida
0
0,318
AR
0,054
g/L
0,082
0,014
%
349,71
0,049
g/L
0,200
0,008
g/L
0,051
0,002
%
349,81
0,007
g/L
0,23
0,04
g/L
0,06
0,011
%
349,78
0,04
g/L
Tiempo de Hidrlisis (min)

30
60
90
120
37,88 56,35 63,68 73,48
0,581 2,705 3,26 8,43
9,75
14,50 16,39 18,91
0,149 0,696 0,839 2,17
315,87 299,22 292,62 283,80
0,52 2,43 2,93 7,60
41,64 63,94 76,16 88,36
2,58 0,76 9,41 14,49
10,72 16,46 19,60 22,74
0,66 0,19 2,42 3,73
312,47 292,38 281,38 270,38
2,33 0,68 8,48 13,05
47,48 77,82 91,35 113,40
13,47 13,23 2,26 11,52
12,22 20,03 23,51 29,19
3,46 3,40 0,58 2,96
307,22 279,88 267,69 247,83
12,14 11,92 2,04 10,37
Concentracin promedio de azucares reductores.
150
74,87
1,78
19,27
0,45
282,54
1,60
97,11
1,62
24,99
0,41
262,50
1,46
112,19
14,38
28,88
3,70
248,91
12,96
Concentracin promedio de almidn.
102
ANEXO G. SUPUESTOS DEL MODELO, ANOVA Y DMS PROCESO DE

LICUEFACCIN.
Grafico G1.1. Grafico de residuos para ED en el proceso de licuefaccin.
5,7
residuos
3,7
1,7
-0,3
-2,3
-4,3
0.652
0.852
1.052
Relaciones Enzima Sustrato
Tabla G1.2. Resultados de la prueba de Levene pasa homogeneidad de varianzas
Levene's
Prueba
Valor-P
1,38649
0,319899
Tabla G1.3. ANOVA para ED segn la relacin E/S utilizada en la licuefaccin.

Fuente
Relaciones E/S
Error
Total
Suma de
Cuadrados
140,171
28,2156
168,386
GI
2
6
8
Cuadrado
Medio
70,0853
4,7026
Razn-F
Valor-P
14,90
0,0047
Tabla G1.4. Contraste de mltiples rangos DMS para ED segn la relacin E/S
utilizada en la licuefaccin.
Relacin
E/S
0,652
0,852
1,052
Casos
Media
3
3
3
19,272
24,998
28,88
Grupos
Homogneos
X
XX
XX
Contraste
Significancia
Diferencia
|0,652-0,852|
|0,652-1,052|
|0,852-1,052|
*
*
-5,726
-9,608
-3,882
103
ANEXO H. DATOS DEL PROCESO DE SACARIFICACIN PARA LAS

TRES RELACIONES E/S
Tabla H1.1 Evolucin del proceso de sacarificacin de almidn licuado de yuca

variedad Corpoica-Tai para las tres relaciones enzima/sustrato.
0,652
kgE/TonSS
Relacin Variable
E/S
Medida
g/L
%
0,852
kgE/TonSS
g/L
g/L
%
1,052
kgE/TonSS
g/L
g/L
%
g/L
0
106,46
18,95
27,40
4,87
254,08
17,07
101,45
17,98
26,11
4,62
258,59
16,19
112,19
14,38
28,88
3,70
248,91
12,96
Tiempo de Hidrlisis (min)

30
60
90
120
122,21 146,94 160,57 193,14
5,34 3,31 23,10 35,86
31,45 37,82 41,33 49,71
1,37 0,85 5,94 9,23
239,89 217,61 205,34 175,99
4,81 2,98 20,81 32,31
133,44 176,67 217,05 226,98
13,14 12,55 6,53 6,54
34,34 45,47 55,87 58,425
3,38 3,23 1,68 1,68
229,77 190,82 154,45 145,50
11,84 11,31 5,89 5,89
162,36 229,91 270,53 291,28
27,19 30,26 49,93 52,37
41,79 59,17 69,63 74,97
6,99 7,79 12,85 13,48
203,72 142,87 106,27 87,57
24,49 27,26 44,98 47,18
Concentracin promedio de azucares reductores.
150
185,38
3,98
47,71
1,025
182,98
3,59
240,89
1,24
62,00
0,31
132,97
1,11
288,21
8,74
74,18
2,25
90,34
7,88
Concentracin promedio de almidn.
104
ANEXO I. SUPUESTOS DEL MODELO, ANOVA Y DMS PROCESO DE

SACARIFICACIN.
Grafico I1.1. Grafico de residuos para ED en el proceso de sacarificacin.
2,7
residuos
1,7
0,7
-0,3
-1,3
-2,3
0.652
0.852
1.052
Relacion Enzima Sustrato
Tabla I1.2. Resultados de la prueba de Levene pasa homogeneidad de varianzas en el

procesos de sacarificacin.
Levene's
Prueba
Valor-P
1,42063
0,312544
Tabla I1.3. ANOVA para ED segn la relacin E/S utilizada en la sacarificacin.

Fuente
Relaciones E/S
Error
Total
Suma de
Cuadrados
1053,0
12,4524
1065,46
GI
2
6
8
Cuadrado
Medio
526,502
2,0754
Razn-F
253,69
Valor-P
0,0000
Tabla I1.4. Contraste de mltiples rangos DMS para ED segn la relacin E/S utilizada
en la sacarificacin.
Relacin
E/S
0,652
0,852
1,052
Casos
Media
3
3
3
47,7187
62,007
74,186
Grupos
Homogneos
X
XX
XXX
Contraste
Significancia
Diferencia
|0,652-0,852|
|0,652-1,052|
|0,852-1,052|
*
*
*
-14,2883
-26,4673
-12,179
105
ANEXO J. DATOS PARA LA DETERMINACIN DE PARMETROS

CINTICOS
Tabla J1.1. Efecto de la concentracin de sustrato sobre las velocidades iniciales de

reaccin de isomerizacin de glucosa a fructosa.
[Gi]
[Gf]
[Ff]
[ ]
[ ]
(kgG/m3) (kgG/m3) (kgF/m3) (kgG/kgC*h)
(%)
49,11
12,89
36,214
0,770
72,477
10,127
2,455
12,452
0,265
9,388
66,84
17,53
49,310
1,048
73,505
14,454
3,008
11,940
0,254
2,649
89,73
26,89
62,836
1,335
69,977
12,361
3,489
9,300
0,198
1,849
136,96
43,89
93,070
1,978
66,768
25,101
10,481 31,973
0,679
12,356
194,70
84,31
110,399
2,346
56,655
9,241
2,846
8,589
0,183
1,986
236,071
110,486
125,585
2,669
53,275
12,675
23,068 19,963
0,424
8,654
298,43
162,91
135,514
2,880
45,339
41,222
23,531 24,407
0,519
4,524
355,70
202,87
152,830
3,248
42,698
33,145
9,784
31,814
0,676
5,106
396,21
234,19
162,021
3,443
40,815
29,450
18,859 23,702
0,504
3,980
425,98
276,80
149,176
3,170
34,768
23,116
15,593 38,645
0,821
6,971
500,35
335,17
165,183
3,510
32,911
62,525
47,705 41,489
0,882
6,934
528,02
359,06
168,960
3,590
31,300
62,295
18,752 69,243
1,471
9,789
612,49
450,76
161,726
3,437
24,009
140,152 30,455 118,959
2,528
15,956
634,71
472,04
162,666
3,457
25,419
107,673 92,897 79,989
1,700
11,634
Gi: Concentracin inicial de glucosa. Gf: Concentracin final de glucosa. Fr:
: Velocidad de conversin. x: Conversin de glucosa a fructosa.
106
ANEXO K. GRAFICOS DE DISPERSION Y RESIDUOS PARA LOS

MODELOS CINTICOS
Grafico K1.1. Grafico de dispersin (a) y residuos para el modelo de Michaelis-Menten

Tradicional.
Grafica de Residuos MMM
Grfica de MMM
2,7
Residuo Estudentizado
observado
1,7
0,7
-0,3
-1,3
-2,3
0
0
2
predicho
(a)
2
Predicho
(b)

con Desactivacin.
Grfica de MMD
Grfica de Residuos MMD
2,6
Observado
3,5
3
2,5
2
1,5
1,6
0,6
-0,4
-1,4
-2,4
1,5
2,5
Predicho
3,5
1,4
1,9
2,4
2,9
3,4
3,9
Predicho
(a)
(b)
con inhibicin por producto.
Grfica de MMP
Grfica de Residuos MMP
4,1
2,7
Observado
3,6
3,1
2,6
2,1
1,6
1,7
0,7
-0,3
-1,3
-2,3
1,1
1,1
1,6
2,1
2,6
Predicho
3,1
3,6
4,1
1,4
1,9
2,4
2,9
3,4
3,9
Predicho
(a)
(b)
107
ANEXO L. VALORES DE LOS PARMETROS CINTICOS PARA LOS

MODELOS TIPO MICHAELIS-MENTEN AJUSTADOS.
Tabla L1.1. Parmetros cinticos aparentes de modelos del tipo Michaelis-Menten para
enzimas inmovilizadas.
Modelo Cintico
MMT
MMP
MMD
Vmx
4,868
2,650
5,417
Parmetros Cinticos
Km
Vp
Kp
210,072
093,631 1,866 31,16
133,360
1
0,75
Parmetros Estadsticos
r2
MAE
95.59
5,77*10-4
82.72
1,53*10-3
91.81
2,72*10-4
MMT: Modelo de Michaelis-Menten Tradicional. MMP: Modelo de Michaelis-Menten con Inhibicin por
producto. MMD: Modelo de Michaelis-Menten con Tasa de Desactivacin.
108
ANEXO M. ALGORITMOS SIMULACIN PROCESOS DE CONVERSIN

Y CADA DE PRESIN EN EL FBR
Imagen M1.1. Algoritmo solucin modelo de conversin de glucosa en el FBR a escala
de laboratorio.
Imagen M1.2. Algoritmo solucin modelo de cada de presin en el FBR a escala de

laboratorio.
109
ANEXO N. RESULTADOS VALIDACIN ESTADSTICA PARA EL

MODELO DE CONVERSIN DE GLUCOSA EN EL FBR A ESCALA DE
LABORATORIO.
Tabla N1.1. Correlacin datos validacin del modelo de conversin a una

concentracin de 250 gl-1.
Distancia
0,125 L/h
(cm)
Xmod Xexp
r2
(%)
0,000
80,00
160.0
240,0
320,0
0,00
0,50
0,50
0,50
0,50
0,00
0,48
0,50
0,50
0,50
99,84
EE
0,010
0,250 L/h
Xmod Xexp
r2
(%)
0,00
0,49
0,50
0,50
0,50
0,00
0,47
0,50
0,50
0,50
99,84
EE
0,011
0,500 L/h
Xmod Xexp
r2
0,00
0,49
0,50
0,50
0,50
0,00
0,44
0,48
0,50
0,50
98,78
EE
0,023

Distancia
0,125 L/h
(cm)
Xmod Xexp
r2
EE
Xmod
0,250 L/h
Xexp
r2
EE
Xmod
0,500 L/h
Xexp
r2
0,000
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
80,00
0,50
0,46
0,49
0,46
0,46
0,42
160.0
240,0
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,49
0,50
0,46
0,50
320,0
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
99,17
0,020
99,53
0,015
99,01
EE
0,021

Distancia
(cm)
Xmod
0,000
80,00
160.0
240,0
320,0
0,00
0,50
0,50
0,50
0,50
0,125 L/h
Xexp
r2
0,00
0,44
0,49
0,50
0,50
98,25
EE
Xmod
0,028
0,00
0,49
0,50
0,50
0,50
0,250 L/h
Xexp
r2
0,00
0,43
0,48
0,50
0,50
98,25
EE
Xmod
0,028
0,00
0,46
0,49
0,50
0,50
0,500 L/h
Xexp
r2
0,00
0,41
0,46
0,50
0,50
98,59
EE
0,025
110

Modelamiento y Simulación de Un Biorreactor Piloto de Lecho Fijo para La Obtención de Jarabes de Fructosa A Partir de Almidón de Yuca

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MODELAMIENTO Y SIMULACIN DE UN BIORREACTOR PILOTO DE

LECHO FIJO PARA LA OBTENCIN DE JARABES DE FRUCTOSA A

JORGE E. HERNANDEZ RUYDIAZ, IAI.

MODELAMIENTO Y SIMULACIN DE UN BIORREACTOR PILOTO DE

JORGE E. HERNANDEZ RUYDIAZ, IAI.

Tesis presentada en opcin al Ttulo Acadmico de Mster en Ciencias

La responsabilidad tica, legal y cientfica de las ideas, conceptos y resultados del

A mis padres Humberto (Q.E.P.D) y Nereyda

2.2.3 Proceso de hidrlisis.

2.4.2 Cintica de Michaelis-Menten.

2.4.3 Modelos cinticos para enzimas inmovilizadas.

2.4.4 Mtodos para determinacin de parmetros cinticos.

BIORREACTORES DE LECHO FIJO.

2.5.2 Diseo y funcionamiento.

2.5.3 Cada de presin en FBR.

2.5.3.1 Flujo en sistemas porosos.

2.5.3.2 Modelos para la prediccin de la cada de presin.

MODELAMIENTO Y SIMULACIN DE BIORREACTORES

2.6.1 Clasificacin de los modelos.

2.6.2 Simulacin de procesos.

2.6.3 Validacin de modelos.

ISOMERIZACIN DE SOLUCIONES DE GLUCOSA ANHIDRA AL

35% P/V EN LOS BIORREACTORES DIFERENCIALES DE LECHO FIJO

ISOMERIZACIN DE SOLUCIONES DE GLUCOSA OBTENIDA DE

ALMIDN DE YUCA EN UN BIORREACTOR DIFERENCIAL DE LECHO

4.6 AJUSTE DE MODELOS CINTICOS POR REGRESIN NO LINEAL.

ANLISIS TERICO DEL PROCESO DE CONVERSIN Y CAIDA DE

4.7.1 Modelamiento del perfil de conversin de glucosa a lo largo del

4.7.2 Estudio de la cada de presin a lo largo del biorreactor piloto de

SOLUCIN DE LOS MODELOS DE CONVERSIN Y CAIDA DE

CORRIDAS EXPERIMENTALES EN EL FBR Y AJUSTE DE

VALORES DE CONVERSIN AL MODELO TERICO

EVALUACIN DEL INCREMENTO DE LOS EQUIVALENTES DE

SELECCIN DEL BIORREACTOR DIFERENCIAL DE LECHO FIJO

QUE GARANTIZA LA MNIMA DIFERENCIA DE CONCENTRACIN DE

DETERMINACIN DE PARMETROS A TRAVS DEL AJUSTE DE

MODELOS CINTICOS PARA ENZIMAS INMOVILIZADAS

CONVERSIN DE GLUCOSA Y CADA DE PRESIN

5.5.1 Modelamiento del perfil de conversin de glucosa a lo largo del

5.5.2 Estudio de la cada de presin a lo largo del biorreactor piloto de lecho

QUE REPRESENTAN LOS

PERFILES DE CONVERSIN DE GLUCOSA Y LA CADA DE PRESIN. 66

VALIDACIN DEL MODELO DE CONVERSIN DE GLUCOSA EN

EL BIORREACTOR PILOTO DE LECHO FIJO.

Tabla 2. Parmetros de funcionamiento y diseo del biorreactor de lecho fijo.

Figura 1. Estructura molecular de a) amilosa y b) amilopectina.

Figura 2. Isomerizacin de glucosa a fructosa.

Figura 3. Fotografa de un biorreactor de lecho fijo.

Grafico 1. Efecto de la relacin E/S sobre el incremento de los ED en el proceso de

Grafico 2. Efecto de la relacin E/S sobre el incremento de los ED en el proceso de

Grafico 3. Cintica de formacin de producto y consumo de sustrato en la

Grafico 4. Efecto de la concentracin de sustrato sobre las velocidades iniciales de

Grafico 5. Ajuste de modelos del tipo Michaelis-Menten para enzimas

Perfiles de conversin de glucosa a lo largo del FBR a una

concentracin inicial de glucosa de 250 gl-1 y tres flujos volumtricos.

Perfiles de conversin de glucosa a lo largo del FBR a una

concentracin inicial de glucosa de 300 gl-1 y tres flujos volumtricos.

Perfiles de conversin de glucosa a lo largo del FBR a una

concentracin inicial de glucosa de 350 gl-1y tres flujos volumtricos.