Reporte de Identificación de Proteínas
Reporte de Identificación de Proteínas
Reporte de Identificación de Proteínas
Campus Chapultepec
Escuela de Ciencias de la Salud
Licenciatura en QFBT
Presenta:
Basilio Glvez Edna
INTRODUCCIN
La palabra Protena, del griego proteios que significa primordial o primer lugar,
fue sugerida por Berzelius para llamar as, al material que describiera el qumico
holands Mulder en 1838 como sustancia compleja en cuya composicin
intervena el nitrgeno (N), y la cual, era sin duda la ms importante de todas las
sustancias conocidas en el reino orgnico, sin la cual no pareca posible la vida
sobre nuestro planeta.
Existen muchas clasificaciones de las protenas, dependiendo de su estructura,
funcin, solubilidad, forma, etc., pero una clasificacin general para estas, las
divide en: globulares y fibrosas, las primeras son de forma esfrica o parecida a
sta, contienen en su estructura hlices y hebras , adems de estructuras no
repetitivas (asas y giros) las cuales les proporcionan diseos compactos con
funciones particulares, son solubles en agua; algunos ejemplos son: la insulina,
albmina, globulinas plasmticas y numerosas enzimas. Las protenas fibrosas
son de forma alargada, su armazn es una repeticin de elementos de estructura
secundaria (hlices y hebras), stas le confieren la forma de fibras cilndricas
observables al microscopio, son de baja solubilidad en agua, dentro de stas se
encuentran la queratina, miosina, colgeno y fibrina.
Las protenas son macromolculas las cuales desempean el mayor nmero de
funciones en las clulas de los seres vivos. Forman parte de la estructura bsica
de tejidos (msculos, tendones, piel, uas, etc.), durante todos los procesos de
crecimiento y desarrollo, crean, reparan y mantienen los tejidos corporales;
adems desempean funciones metablicas (actan como enzimas, hormonas,
anticuerpos) y reguladoras a saber: asimilacin de nutrientes, transporte de
oxgeno y de grasas en la sangre, eliminacin de materiales txicos, regulacin de
vitaminas liposolubles y minerales, etc. (1)
Los aminocidos se han clasificado, clsicamente, basndose en la posibilidad o
no de ser sintetizados de novo por el organismo. As, se incluyen los
aminocidos esenciales (o indispensables), cuyo esqueleto hidrocarbonato no se
puede sintetizar en el organismo humano y por tanto, deben ser aportados, de
forma obligatoria, por la dieta para atender a las necesidades corporales
(crecimiento y mantenimiento de estructuras). Los nueve aminocidos
indispensables son: fenilalanina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina,
treonina, triptfano y valina. En la actualidad, el grupo de aminocidos no
esenciales (o dispensables) se ha subdividido en los realmente dispensables que
son sintetizados en el organismo a partir de otros aminocidos o de otros
metabolitos (alanina, cido asprtico, asparragina, cido glutmico y serina) y los
condicionalmente indispensables que se sintetizan por vas complejas y
obligatoriamente, a partir de otros amino- cidos o su sntesis puede estar limitada
en situaciones fisiolgicas (prematuridad) o fisiopatolgicas (estrs catablico
severo o disfuncin metablica intestinal). A este grupo pertenecen la arginina,
cistena/cistina, glutamina, glicina, prolina y tirosina. Sus precursores son
nutricin)
Sitio
http://www.medigraphic.com/pdfs/revsalpubnut/spn2007/spn072g.pdf
web:
3.- Ma. De los ngeles Pajares. (2010). Las otras utilidades de los
HIPTESIS
Identificar por mtodos qumicos-colorimtricos la presencia de pptidos y grupos
funcionales (grupos R) de algunos aminocidos que se encuentran en alimentos
naturales y procesados.
PROCEDIMIENTO
Desnaturalizacin Biuret
Plomo
para
cistena
HopkinsCole
Millon
Xantoprotica
1 mL de
problema +
2 mL de
NaOH 10%
bao
mara + 3
1
mL
de
problema + 5
gotas
de
Hopkins- Cole
+ 1 mL H2SO4
concentrado.
1 mL de
problema+ 2
a 5 gotas de
Millon
y
calentar
a
bao mara.
1
mL
de
problema + 1
mL
HNO3
concentrado,
calentar
y
enfriar + 1 mL
3 tubos con 2 mL de
suero
1 mL de
problema
+ 2 mL de
NaOH
10% + 3 a
5 gotas de
Tubo 1- a bao
mara
Tubo 2- 2 mL de HCl
Tubo 3- 2 mL EtOH
reactivo de
Biuret.
a 5 gotas
de acetato
de plomo
5%
y
calentar.
(Precipita
negro).
NH4OH
concentrado.
RESULTADOS
3 (EtOH)
Observacin por
condicin
Totalidad blanca
y slida.
Sup.
Transparente
e
inferior blanco.
Sup.
Transparente
e
inferior blanco.
Tubo suero
1 (temperatura)
2 (HCl)
3 (EtOH)
Observacin por
condicin.
Halo blanco ligero
sobrenadante.
Anillo
en
sobrenadante,
turbio.
Sup.
Turbio,
inferior
blanquecino.
Biuret Plomo
HopkinsCole
Xantoproti
Millon ca
+++
+++
+++
No
+++
No
++
No
+++
+++
+++
+++
+++
No
No
No
+++
No
+++
++
+++
+++
No
No
No
No
No
No
+++
+++
No
No
No
No
++
+
++
+++
+++
No
Tabla 2. Nivel de reaccin por muestra. Cada prueba se identifica con cruces,
siendo (+++) fuerte, (++) regular y (+) dbil, las soluciones problema que no
reaccionaron se identificaron con la palabra No.
Muestra Biuret
Albmi
na de
Huevo
Gelatin
a al 5%
Leche
entera
Manzan
a
Suero
de rata
1:10
Peptona
al 5%
Tirosina
al 1%
Triptfa
no al
1%
Cistena
al 1%
Plomo
Halo
morad Formacin de
o
color negro
Halo
morad
o
Negativa
Hopkins-Cole
Millon
Cogulo
rojo
Sup. Bco, halo
blanqueci
violeta, inf. Caf no
Sup. Rosa, halo
caf, inf.
Amarillo
Negativo
Halo
Divisin de fases, Sup. Bco, halo
morad precipitado verde violeta, inf.
o
oscuro
Amarillo
Sup. Caf, halo
Negati
violeta, inf.
vo
Negativa
Amarillo
Halo
Sup. Turbio, halo
morad
violeta, inf.
o
Negativa
Amarillo
Halo
Sup. Caf, halo
morad
violeta, inf.
o
Negativa
Transparente
Negati
vo
Negativa
Sup. Transp.,
Negati
halo violeta, inf.
vo
Transp.
Negati
vo
Negativa
Xantoproti
ca
Sup.
Amarillo,
interfase
blanca
Negativo
Transparent
e
Sup.
Amarillo,
interfase
blanca
Negativo
Amarillo
claro H
Negativo
Amarillo
claro H
Amarillo
transparent
eH
Amarillo
claro H
Negativo
Amarillo
fuerte H
Negativo
Negativo
DISCUSIN
Experimento 1 (protena desnaturalizada)
Para el experimento 1 de desnaturalizacin, se sabe que los enlaces peptdicos
pueden ser rotos por distintos mtodos, ocasionando as la desnaturalizacin de la
protena, estos factores son principalmente la temperatura, el pH y la agitacin
(para pptidos de cadena corta). La desnaturalizacin de protenas puede derivar
en una modificacin fsica de la muestra, como pudo observarse, indicando las
condiciones de sta.
Reaccin entre enlace peptdico (amida) y Cu, el color se produce por el enlace
entre el Cu y los pares de electrones libres de los Nitrgenos participantes del
enlace peptdico, lo que reduce al cobre de Cu 2+ a Cu+.
Reaccin de Milln
Es especfica para el grupo fenlico por lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen esta funcin, como la Tirosina y todas las protenas que
contengan Tirosina. El primer paso de la reaccin de Millon consiste en la nitracin
del anillo fenlico de la Tirosina, por el cido Ntrico del reactivo. La Tirosina
nitrada forma complejos con los iones Mercurioso Hg(I) y Mercrico Hg(II) del
reactivo produciendo un precipitado rojo o una solucin roja, ambos resultados
positivos. Algunas protenas pueden formar el precipitado rojo desde el inicio,
mientras que otras primero forman un precipitado blanco, que se debe calentar
para dar el color rojo indicativo de la presencia de Tirosina. Cualquier sustancia
con un grupo fenlico dar positiva la reaccin de Millon y puede interferir con la
deteccin de Tirosina.
Se observa aqu como el fenilo, al cual es fcil introducir grupos por su alta
reactividad en presencia de energa, es nitrado mediante el reactivo de Milln, no
obstante no es la nitracin lo que produce el color rojo de la muestra, sino la
reduccin del Mercurio dada a partir de sta nitracin.
Reaccin Xantoprotica
Algunos aminocidos como Fenilalanina, Tirosina y Triptofano, tienen anillo
aromticos derivados de benceno y por ello tiene las propiedades qumicas del
benceno y sus derivados. Una de estas propiedades es la reaccin de nitracin del
anillo bencnico con cido Ntrico concentrado. Los anillos Benceno de Tirosina y
Triptofano estn activados y reaccionan fcilmente, mientras que el benceno de la
Fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y reacciona con ms dificultad.
El nombre de la reaccin se deriva del griego xantos, que significa amarillo, que es
el color caracterstico de la reaccin positiva. El color amarillo se intensifica en
medio alcalino. Esta reaccin es la que provoca el color amarillo cuando se salpica
la piel con cido Ntrico concentrado, las protenas de la piel tienen Tirosina y
Triptfano, los cuales al nitrarse, le dan a la piel un color amarillo caracterstico.
Para esta prueba todas las muestras dieron positivo demostrando que en su
composicin haba algn aminocido con un anillo aromtico, circunstancia cierta
pues todas las muestras posean ya fuera tirosina o triptfano en su composicin.
La nica muestra que no result positiva fue la gelatina, circunstancia
incongruente con el ensayo de Milln, y el de Hopkins-Cole, que demostraban la
presencia tanto de triptfano como de tirosina, por lo que se podra explicar ste
suceso con un error en el rtulo del tubo, pudiendo haber aadido cistena en
lugar de gelatina, dado que la cistena es una estructura aliftica.
La aparicin de un sobrenadante blanco en las muestras de leche y albmina de
huevo se pueden justificar por el medio cido en el que se encontraban, que pudo
haber promovido la desnaturalizacin y posterior coagulacin de las protenas,
dado que stas dos eran las que mayor concentracin protica contenan.
CONCLUSIN
La desnaturalizacin provoca, generalmente, una disminucin de la solubilidad de
las protenas, que pueden precipitar, sto es, las protenas se coagulan
(solidifican) o aparecen grumos en la disolucin. Ello se debe a la prdida de su
estructura globular, que pasa a filamentosa, de manera que quedan expuestos al
agua tanto los residuos polares (hidrfilos) como los apolares (hidrfobos),
responsables de la prdida de solubilidad.
Los factores que provocan la desnaturalizacin pueden ser fsicos (variaciones de
T o presin) o qumicos (cambios de pH, presencia de iones, urea, etc.).
Si los cambios ambientales son poco intensos o de corta duracin, la
desnaturalizacin es temporal y reversible y, una vez que se recuperan las
condiciones iniciales, la protena vuelve a plegarse hasta alcanzar la conformacin
nativa. Pero si los cambios ambientales son intensos o de larga duracin, la
desnaturalizacin es permanente e irreversible, de forma que la protena no
recupera su conformacin nativa ni sus propiedades biolgicas.
Dentro de las reacciones realizadas durante esta prctica, se modificaron
severamente las condiciones de pH y temperatura de las muestras por lo que
adems de mostrar un resultado especfico a la reaccin mediante color, las
muestras con altas concentraciones proticas (leche, albmina de huevo y
gelatina en ocasiones), evidenciaron una desnaturalizacin a partir de la aparicin
de sobrenadantes o cogulos blanquecinos en el tubo de reaccin. Esto no
significa que los otros tubos no presentaran esta circunstancia, sino que por las
bajas concentraciones de las soluciones (1% y 1:10), los cambios resultaban un
poco ms difciles de evidenciar.
CUESTIONARIO
1. Qu son las protenas?
Las protenas son biomolculas de elevado peso molecular (macromolculas) y
presentan una estructura qumica compleja. Sin embargo, cuando se someten a
hidrlisis cida, se descomponen en una serie de compuestos orgnicos sencillos
de bajo peso molecular: los - Aminocidos. Estos aminocidos se encuentran
enlazados entre s mediante enlaces peptdicos (amino-carboxilo)
2. Cul es la funcin de las protenas en los seres vivos?
Poseen varias funciones entre las que se encuentran el sostn, proteccin,
transporte, constitucin, como catalizadores de reacciones internas, entre otras.
3. Cul es la reaccin qumica que une a dos aminocidos?
Reaccin de Plomo
Reaccin de Hopkins-Cole
Reaccin de Milln
Reaccin Xantoprotica
7.- Qu es Tripsinizacin?
La tripsinizacin es una tcnica permite separar las clulas de su soporte
mediante un enzima, la tripsina, que rompe las uniones de las clulas al soporte
de un cultivo, as como las uniones entre las clulas de un tejido. Este proceso
debe realizarse con cuidado ya que la tripsina tambin es capaz de destruir las
clulas por digestin total. Cuando las clulas se hayan separado deben aadirse
a una placa con medio o suero. En el suero hay molculas que inhiben a la
tripsina, parando la reaccin impidiendo as la destruccin de las clulas.
8.- Qu es protemica?
Es el estudio de las protenas desde un punto de vista integral que incluye
diversas tcnicas y el apoyo de otras ciencias como la genmica. Se vale de la
Bioinformtica para recolectar los datos obtenidos.
9.- Para qu se utiliza la espectrofotometra de masas?
La Espectrometra de Masas es una poderosa tcnica microanaltica usada para
identificar compuestos desconocidos, para cuantificar compuestos conocidos, y
para elucidar la estructura y propiedades qumicas de molculas. La deteccin de
compuestos puede ser llevada a cabo con cantidades realmente pequeas
(algunos pmoles) de muestra y obtener informacin caracterstica como el peso y
algunas veces la estructura del analito.
En todos los casos, alguna forma de energa es transferida a las molculas a
analizar para afectar la ionizacin. En la tcnica clsica de impacto electrnico
(electron ionization EI), algunas de las molculas ionizadas del analito explotan
en una variedad de fragmentos ionizados, el patrn de fragmentacin resultante
as como los iones residuales constituyen el espectro de masas.
10.- Qu es un punto isoelctrico?
Existe un pH para el cual la carga elctrica media de las molculas es cero. Este
pH se llama punto isoelctrico (pI). El pI es el pH en el que la molcula se disocia
por igual en ambos sentidos, y como equidista de los dos valores de pK, puede
obtenerse por su semisuma:
pI =
pK 1+ pK 2
2