LA FECUNDACIN IN

VITRO
La fecundacin in vitro (FIV o IVF por sus siglas en ingls) es una tcnica por la
cual la fecundacin de los ovocitos por los espermatozoides se realiza fuera del
cuerpo de la madre. La FIV es el principal tratamiento para la esterilidad
cuando otros mtodos de reproduccin asistida no han tenido xito. El proceso
implica el control hormonal del proceso ovulatorio, extrayendo uno o varios
ovocitos de los ovarios maternos, para permitir que sean fecundados por
espermatozoides en un medio lquido. El ovocito fecundado puede entonces ser
transferido al tero de la mujer, en vistas a que anide en el tero y contine su
desarrollo hasta el parto.

In vitro
El trmino in vitro es un trmino en latn que significa en cristal. Se utiliza
porque en los primeros experimentos biolgicos en los que se realizaban
cultivos de tejidos fuera de los organismos vivos de los cuales procedan, se
realizaban en contenedores de cristal, tales como tubos de
ensayo, probetas o placas de Petri. En la actualidad, el trmino in vitro se
refiere a cualquier procedimiento biolgico que se realiza fuera del organismo
en el que tendra lugar normalmente, para distinguirlo de un experimento in
vivo donde el tejido permanece dentro del organismo vivo en el que
normalmente se encuentra. Coloquialmente, a los bebs concebidos a travs
de FIV se les denomina bebs probeta, refirindose a contenedores de cristal o
plstico denominados probetas, que se utilizan frecuentemente en los
laboratorios de qumica y biologa. Sin embargo, normalmente la
fecundacin in vitro se realiza en placas planas denominadas placas de Petri;
las placas de Petri utilizadas ms a menudo estn producidas en plstico, sin
embargo, el nombre FIV sigue conservndose.

Indicaciones
Inicialmente la FIV se desarroll para superar situaciones
de infertilidad debidos a problemas en las trompas de Falopio, pero
posteriormente se observ que la tcnica tena xito tambin en otros casos de
infertilidad. La introduccin de la inyeccin intracitoplasmtica de
espermatozoides (ICSI) soluciona en gran medida los problemas de infertilidad
masculina.

Para que un tratamiento de FIV tenga xito, es necesario disponer

de ovocitos sanos, espermatozoides que puedan fecundarlos y un tero que
pueda mantener un embarazo. Aunque en algunos pases los tratamientos de
FIV estn cubiertos por los servicios sanitarios sociales, normalmente se
recurre a esta tcnica cuando otras opciones han fallado, debido a que la FIV
conlleva costos elevados.

La FIV puede utilizarse tambin en mujeres menopusicas, utilizando ovocitos

procedentes de una donante. Asimismo es una tcnica que puede considerarse
en pacientes que han sufrido una prdida total o parcial de fecundidad debido
a un tratamiento agresivo frente a una patologa grave (como el cncer).

Mtodo
Estimulacin ovrica

Previamente a la fecundacin in vitro, generalmente en el tercer da de

la menstruacin se estimula el desarrollo de folculos mltiples en
los ovarios mediante tratamientos hormonales. En la mayora de las pacientes
se emplean inyecciones de gonadotropinas (generalmente anlogos de la FSH),
realizando controles frecuentes de los niveles de estradiol, y del crecimiento
folicular mediante ultrasonografa ginecolgica. Normalmente se necesitan 10
das de inyecciones. La ovulacin espontnea durante el ciclo se previene por
el uso de agonistas GnRH (aGnRH) o antagonistas GnRH (agGnRH), que
bloquean el surgimiento natural de la hormona luteinizante (LH). Ambas
generan, en otras palabras, lo que se conoce como un hipogonadismo
hipogonadotrofo reversible. Sin embargo, los agonistas de la GnRH se
diferencian de los antagonistas principalmente porque su efecto no es
inmediato, sino que desencadenan en primera instancia un pico de FSH y LH
(efecto flare-up), producindose un bloqueo posterior en la liberacin de
gonadotropinas por el desacople de los receptores de GnRH de la cascada de
activacin. Sin embargo, existen diferentes protocolos de estimulacin que
varan en el da de inicio, medicamentos empleados y mtodos para prevenir e
inducir el pico de la hormona luteinizante (LH).

Bsicamente, si en el laboratorio el equipo se decanta por un tratamiento con

aGnRH, se pueden escoger entre un protocolo corto y uno largo:

- Protocolo largo: los agonistas de la GnRH se suministran a la paciente varios

das antes del nuevo ciclo y durante la administracin de las gonadotropinas
exgenas. Entre sus mltiples ventajas destaca que, con l, se asegura la no
liberacin prematura de LH, lo que garantiza la invalidacin de toda ovulacin
precoz. A su vez, este hecho permite al embrilogo planificar sin margen de
error la fecha de la captacin folicular. Por otra parte, se asegura que el
desarrollo de los folculos se sincronice. Desgraciadamente, con la aplicacin
de este protocolo, la probabilidad de que se produzca un sndrome de
hiperestimulacin ovrica (SHO) se multiplica, y se requiere un soporte de fase
ltea (administracin de progesterona), as como una mayor cantidad de
gonadotropinas.
- Protocolo corto: los agonistas de la GnRH comienzan a suministrarse en los
primeros das del ciclo, casi al mismo tiempo que las gonadotropinas exgenas.
La principal virtud de este procedimiento es que consigue mejores resultados
en mujeres con baja respuesta, aunque este hecho an no ha sido
completamente demostrado. Por contra, la aplicacin de este protocolo
multiplica el riesgo de que se produzcan picos de LH (induciendo entonces una
ovulacin precoz) y no posibilita un desarrollo sincrnico de los folculos. En
definitiva, se establece control sobre el desarrollo folicular mucho menor.

Por otra parte, cuando se emplean antagonistas de la GnRH, slo se establece

un protocolo, en el cual se administra la sustancia bloqueante varios das
despus del inicio del ciclo, al mismo tiempo que se suministran
gonadotropinas recombinantes o purificadas de la orina.

Los protocolos de estimulacin ovrica se han convertido en complejos y

costosos. Por esto, parece haber una tendencia a nivel mundial dirigida a
reducir la cantidad y la dosis de los medicamentos empleados durante la
estimulacin con el fin de reducir los riesgos y costos asociados a estos
tratamientos . Ejemplo de estos esfuerzos son los tratamientos FIV con Ciclos
Naturales, adems de los protocolos FIV con mnima estimulacin desarrollados
por los doctores John Zhang en NY , el Dr. O. Kato en Tokyo , y el Dr. Chvez-
Badiola en Mxico .

Extraccin de ovocitos

Cuando se considera que la maduracin de los folculos es adecuada, se

administra a la paciente gonadotropina corinica humana (-hCG) o
algn agonista de la GnRH. La primera acta como un anlogo de la hormona
luteinizante (LH); mientras que la segunda induce un disparo de la
propia hormona luteinizante (LH). En cualquiera de los casos, el medicamento
provocar la ovulacin alrededor de 36 horas despus de la inyeccin, pero el
procedimiento de extraccin tiene lugar justo antes de que esto ocurra.

La extraccin de los ovocitos se programa unas 36 horas despus de la

induccin de la ovulacin y se realiza por va transvaginal, utilizando una aguja
guiada por ultrasonido, que pincha la pared vaginal para alcanzar los ovarios.
Un mdico aspira los folculos ayudado por un ecgrafo y recoge el lquido
folicular en unos tubos que sern introducidos a un termobloque hasta que
pasen al laboratorio. El lquido folicular es un fluido amarillento y seroso que
contiene linfocitos y clulas de la granulosa aisladas o formando cmulos con o
sin ovocitos. A medida que se punciona el ovario el lquido folicular se vuelve
de color rojo (hemtico) debido a la hemorragia provocada por la puncin. La
sangre es txica para el ovocito pues contiene muchos anticuerpos, por lo que
una vez que se termine la puncin habr que eliminarla. Este paso se realiza
en el laboratorio, donde se procesa el lquido de la puncin con el objetivo de
recuperar los ovocitos contenidos en el lquido; de esta manera se obtendrn
los ovocitos, se har un lavado de los mismos y se clasificarn segn su
morfologa. Estos tres pasos se tienen que realizar en el menor tiempo posible
para evitar el efecto de la temperatura, a la que los ovocitos son muy
sensibles, y el dao producido por el lquido hemtico.

Temperatura: el ovocito es el elemento ms sensible a la temperatura

de todo el laboratorio. Si sta bajo de 34 C el huso meitico
despolimerizar, y cuando se vuelva a forma puede crear anomalas
cromosmicas, de forma que el ovocito ser fecundable pero no dar
lugar a un embrin normal.

Se deben aislar los complejos cmulo-corona-ovocitos que se llegan a observar

a simple vista (varios mm de dimetro).

Medios: durante este proceso se emplean diferentes medios de cultivo

con diferente composicin:

En los tubos: 0,1 ml de medio tamponado (HEPES) con heparina para

evitar la formacin de cogulos.

El medio HEPES (que debe estar desde el da anterior a ser utilizado en

una estufa a 37 C) acumular temporalmente los cmulos mientras se
realiza la puncin. Adems ser empleado para lavar y reducir el tamao
de los cmulos antes de pasar al incubador.

Placas de cultivo: con un medio simple rico en glucosa (por ejemplo

HTF + HSA 10 mg/ml) para mantenerlos en el incubador al 5 % dixido
de carbono. El medio debe estar desde el da anterior a ser utilizado en
el incubador a 37 C y 5 % de dixido de corbono.

Las punciones se programan normalmente cada 30 minutos aunque la

bsqueda de los ovocitos no suele durar ms de 15 minutos. En estos procesos
se utiliza anestesia local, general o parcial para evitar el dolor producido por la
puncin.

Existen 3 estadios de maduracin en los cmulos que se extraen por puncin

folicular, a saber:

- Grado I (Maduracin nuclear MII): El cmulo y la corona del ovocito presentan

un aspecto expandido. Es el estado en el cual el ovocito presenta una mayor
maduracin y slo los de este tipo son los que se utilizan en tcnicas de
reproduccin asistida ms refinadas, como el ICSI.

- Grado III (Maduracin nuclear VG): El ovocito destaca por la gran

compactacin del cmulo, el cual cuenta con pocas clulas, muy fijadas a la
zona pelcida (ZP).
- Grado II (Maduracin nuclear MI): El ovocito presenta un aspecto intermedio
entre los dos estadios anteriores.

Esta clasificacin trata de describir el ovocito y su estado de madurancin

nuclear estando rodeado de clulas del cmulo y la corona.

Morfologa: para observar bien el ovocito habra que colocarlo en muy

poca cantidad de medio para esparcir las clulas de granulosa. De forma
que la ventaja de saber el estado madurativo no parta ningn beneficio
frente a la manipulacin que representa el poder conocerlo.

Es por ello que actualmente esta clasificacin no tiene gran relevancia y no

debe drsele mayor importancia, salvo para indicar caractersticas que se
salgan especialmente de lo considerado como normalidad: cmulos o coronas
de aspecto apopttico o postmaduro, presencia de sangre, etc.

Fecundacin
Vase tambin: Donacin de esperma

Una vez en el laboratorio, los complejos cmulo corona ovocito extrados se

lavan en medio HEPES para mantener el pH, recortando las clulas de la
granulosa que los rodean y preparndolos para la fecundacin. Los ovocitos
deben permanecer al menos 4 horas en el incubador (medio simple rico en
glucosa) hasta su inseminacin, es decir, aproximadamente 40 horas tras la
induccin de la ovulacin que sera el momento de la ovulacin espontnea.

Al mismo tiempo, el semen se prepara para la fecundacin, eliminando las

clulas inactivas, el fluido seminal y se realiza su capacitado. Los parmetros
adecuados de semen capacitado para realizar FIV son: 5-10 millones de
espermatozoides por mililitro, ms de 75 % de espermatozoides mviles
progresivos y ms de 1 % de formas normales. Si la muestra seminal posee
valores inferiores a los anteriores, se recurre a ICSI en lugar de FIV. Si el semen
proviene de un donante, probablemente habr sido preparado antes de ser
congelado y puesto en cuarentena, y cuando sea descongelado estar listo
para usar.

Existen distintos protocolos de FIV pero todos se basan en el mismo principio:

el esperma y el ovocito se incuban juntos (en un ratio de aproximadamente
75.000:1) en un medio de cultivo simple con glucosa durante unas 18 horas.
Concentraciones superiores de espermatozoides pueden producir
fecundaciones anmalas (poliespermia) y una menor concentracin de
espermatozoides puede producir fallos de fecundacin.

Trascurrido 16-18 horas se comprueba la fecundacin, que ya debera haber

ocurrido. Como los ovocitos se fecundan en los primeros 20 minutos de
exposicin. Hay autores que a la media hora lavan los ovocitos para evitar la
exposicin a ROS, que pude formarse por la presencia de espermatozoides
muertos.

El cigoto humano de 15 a 20 horas tras la concepcin permanece en el estadio

de proncleos (PN). Se considera que la fecundacin es correcta cuando el
cigoto presenta dos PN y dos corpsculos (CP). A veces es difcil interpretar los
CP y se valoran como correctamente fecundado cualquier embrin con dos PN.
Cualquier otra combinacin se considera anormal y se descarta. La mayora de
las veces aparece primero el PN paterno en la posicin central y el materno se
acerca ms tarde. Para poder valorar correctamente la fecundacin, es
necesario decumular previamente el cigoto. Es importante que en FIV no se
decumule el ovocito antes de la fecundacin, ya que conlleva alta probabilidad
de polispermia.

El vulo fecundado se pasa a un medio de cultivo simple (como HTF/HSA) o

secuencial (G1 de Vitrolife) y se mantiene durante alrededor de 48h hasta que
alcanza el estadio de 6-8 clulas.

Embrin de 8 clulas listo para ser transferido.

Hay estudios realizados que demuestran que la liofilizacin del esperma de

ratn permite el desarrollo de embriones normales tras la inyeccin de
ovocitos.

Cultivo de embriones
Una vez el vulo ha sido fecundado y se ha obtenido un cigoto, ste es
cultivado para promover su divisin celular y crecimiento para dar lugar a un
embrin. Este cultivo dura entre 2 y 5 das, y es muy importante que se lleve a
cabo en las condiciones ptimas para el embrin, ya que de ello depender su
calidad y la tasa de implantacin del mismo cuando sea transferido a un tero.
Para que el crecimiento del embrin se lleve a cabo en las mejores condiciones
posibles se utilizan distintos tipos de medio de cultivo:

Medios simples: de composicin sencilla y fciles de preparar. La composicin

de estos medios se determina a partir de la composicin terica del lquido de
la trompa (medios HTF o P1) o de la composicin de medios de cultivo para el
desarrollo de cigotos de ratn (medios KSOM, Earle, M16 y T6), y suelen
suplementarse con suero materno o albmina srica humana (HSA). Son
ptimos para el crecimiento inicial del embrin (hasta los 3 das de cultivo). A
partir del da cuatro no garantizan el desarrollo ptimo debido al comienzo de
la transcripcin activa del embrin, para lo que se requieren sustancias que
estos medios no contienen. Los embriones suelen ser cultivados durante 3 das
antes de su implantacin, periodo tras el cual alcanzaran un estadio de 6-8
clulas. Ello permite que el embrilogo pueda monitorizar su tasa de divisin
celular y la activacin de genes, para asegurarse de que el embrin sea viable
y de que se implantar adecuadamente. Tan slo se adelantar el momento de
la implantacin, normalmente a los dos das de cultivo, cuando la pareja
sometida a FIV cuente con pocos embriones disponibles para ser transferidos o
cuando los embriones se desarrollen con lentitud.

Medios complejos: su composicin es ms compleja, incluye vitaminas,

aminocidos, metales, suero,... Son medios comerciales que han sido
diseados para el cultivo de clulas somticas en cultivo, como el medio Ham
F10, de modo que aunque mejoran el desarrollo embrionario hasta blastocisto
(da 5) en comparacin con los medios simples, no estn optimizados para el
cultivo de embriones. Tras cinco das de cultivo el embrin alcanza el estadio
de blastocisto, en el que est compuesto por 12-16 clulas y posee una alta
tasa de implantacin. Suelen cultivarse hasta este estadio cuando previamente
se han dado abortos o fallos de implantacin en la paciente.

Medios secuenciales: tienen en cuenta el hecho de que el embrin atraviesa

distintos ambientes desde que es fecundado en la trompa de Falopio hasta que
alcanza el tero. Los medios secuenciales se componen de tres tipos de
medios: un medio para la preparacin de los gametos (medio simple), otro para
el desarrollo hasta el da 3 (medio G1) y un tercero para alcanzar la fase de
blastocisto (medio G2). Estos medios s estn optimizados para el desarrollo de
los embriones hasta blastocisto pero son ms sensibles a la temperatura, y por
lo tanto ms inestables.

Aparte de esto, tambin es muy importante controlar las condiciones de

temperatura, luz y pH.
En algunos casos en reproduccin asistida se opta por mantener el embrin en
cultivo hasta da 5 o 6 en lugar de transferirlo en da 3. El cultivo largo presenta
algunas ventajas como seleccionar mejor al embrin o aumentar la tasa de
implantacin. Aunque tambin existen algunos inconvenientes como el alto
riesgo de bloqueo embrionario. As, se observan una serie de cambios
continuos en el embrin que se clasifican en estadios:

Mrula (M): embrin de ms de 12 clulas sin compactar del todo.

Presente en da 4.

Mrula compacta (MC): en da 4 5. Es un embrin con 16 clulas o ms

pero en el que ya no se distinguen las clulas entre s, ni se diferencia el
blastocele o clulas del trofoectodermo.

Blastocisto temprano: embrin en da 4 5 en el que se distinguen las

clulas planas del trofoectodermo en la superficie del embrin y una
cavidad menor del 50% del volumen del embrin.

Blastocisto cavitado: es el estadio tpico de da 5. Se distingue

claramente el trofoectodermo y un blastocele que ocupa al menos la
mitad del interior del embrin.
El dimetro del embrin sigue siendo en torno a 140 micras. No siempre
de distingue la masa celular interna.

Blastocisto expandido: se aprecia en da 5 6. Se distingue el

trofoectodermo, el blastocele y la masa celular interna. El dimetro es
mayor de 150 micras y la zona pelcida se afina.

Blastocisto inicando eclosin (BHi): es un blastocisto expandido en el que

se distingue una hernia por donde est comenzando la eclosin.

Blastocisto eclosionado (BH): es un blastocisto totalmente fuera de la

zona pelcida, con un dimetro normalmente mayor de 300 micras, ms
del doble que en el estadio anterior. Es el estadio ms tardo que se
puede mantener in vitro.

La morfologa de la masa celular interna y del trofoectodermo se usa como

criterio de calidad del embrin.
Para llevar a cabo el cultivo largo de embriones se usan medios secuenciales o
el cocultivo sobre monocapa de clulas endometriales. Es el estadio ms tardo
del embrin que se puede mantener in vitro.

Laboratorio de FIV
No existe un consenso sobre cmo debe ser un laboratorio destinado a la
fecundacin in vitro. Sera apropiado que fuese una sala blanca con control
absoluto de todos los parmetros y con el menor nmero posible de superficies
horizontales, pero actualmente no es as debido a su alto coste. Aun as, es
necesario controlar ciertos parmetros, pues aunque los embriones son fuertes
y robustos, su tasa de implantacin se ve influida por las condiciones
ambientales. Los parmetros ms habituales controlados en un laboratorio de
FIV son:

-Temperatura: los incubadores deben estar a 37 C, por lo que hay que

mantenerlos siempre encendidos y evitar que las condiciones externas varen,
pues el incubador tender a equilibrarse con stas; para ello ser necesario
mantener encendido el termostato del laboratorio (condiciones externas) 24
horas con una temperatura estable de unos 21-24 C (consenso con el personal
para ver cmo estn ms cmodos).1

-pH: Es muy importante incubar los gametos y cultivar los embriones en

medios de cultivo con un pH similar a su pH interno (pH=7, 2). Cuando la
diferencia entre stos es muy diferente la tasa de desarrollo disminuye.La
mayora de los medios de cultivo son preparados usando bicarbonato como
buffer de pH, controlndolo por equilibrio entre el CO2 atmosfrico, el CO2
disuelto, el bicarbonato y los iones hidrgeno en solucin. El principal propsito
de mantener los niveles de CO2 en la incubadora es mantener el pH del medio.
Algunos autores opinan que se puede medir el pH del medio como una medida
indirecta de los niveles de CO2.2

Se puede hacer con un Analizador de gases sanguneos o un PHmetro calibrado

justo antes de medir una alcuota mantenida dentro de la incubadora. La
alcuota de medio utilizada para medir el pH debe ser descartada.

-Partculas: habra que colocar filtros HEPA en la cabina de flujo laminar, en la

climatizacin y en la salida del laboratorio para evitar la presencia de partculas
(inertes o contaminantes) en el ambiente. Se considera que el ambiente es
estril cuando hay menos de 100 partculas/m3 (Clase 100). Urbina MT.
Optimizacin de la eficiencia de la Fecundacin in vitro. En: Urbina MT, Lerner J.
Fertilidad y Reproduccin Asistida. Caracas: Editorial Mdica Panamericana.
2008.

-VOCs: deben reducirse al mnimo los compuestos orgnicos voltiles (VOCs),

ya que podran tener efectos embriotxicos (dainos para los embriones).
Algunos VOCs no son filtrables por mtodos normales, y por tanto hay que
emplear filtros de carbn activo con distintas concentraciones de
permanganato potsico en la entrada de cualquier gas en el laboratorio. Es
necesario recalcar que estos filtros tiene una vida limitada por su capacidad de
absorcin, por lo que hay que cambiarlos peridicamente. Urbina MT.
Optimizacin de la eficiencia de la Fecundacin in vitro. En: Urbina MT, Lerner J.
Fertilidad y Reproduccin Asistida. Caracas: Editorial Mdica Panamericana.
2008. Di

-Presin positiva: el laboratorio de FIV debe estar ligeramente presurizado, es

decir, la presin del interior debe ser mayor que la exterior, de forma que
cuando se abran las puertas slo saldr el aire del interior (de una limpieza
extrema), evitndose as que entre aire sucio del exterior. Al ser el aire del
interior del laboratorio tan limpio, suele haber sistemas de recirculacin. Urbina
MT. Optimizacin de la eficiencia de la Fecundacin in vitro. En: Urbina MT,
Lerner J. Fertilidad y Reproduccin Asistida. Caracas: Editorial Mdica
Panamericana. 2008. Disponible en : Existen tambin otros parmetros que
pueden ser controlados, aunque no son tan importantes como los anteriores:

-Luz: por precaucin los laboratorios de FIV suelen trabajar a bajas

intensidades lumnicas, pues existen embriones que son extremadamente
sensibles a la luz, como son los de hmster o conejo; sin embargo, no est
demostrado que los embriones humanos tambin sean sensibles a ella.

-Humedad relativa (HR): no influye directamente al trabajo, pero s al

crecimiento de hongos. Al ser muy caro su control, slo los laboratorios que
realmente lo necesitan (HR>90%) tienen climatizadores para ello. Por confort,
la HR debera estar alrededor del 50%.

En cuanto al diseo y la distribucin, estos dos parmetros influyen bastante

en las tasas de xito del laboratorio. Los materiales empleados para el suelo,
las paredes y el techo deben ser siempre nobles (acero inoxidable, linleo,
cermica, etc.), y se debe evitar la presencia de superficies horizontales (para
que no se acumule suciedad). Asimismo, debe procurarse tener una esclusa de
entrada separada del resto de habitculos: la sala principal (con la zona
quirrgica, incubadora y de micromanipulacin distribuidas), el laboratorio de
criopreservacin, el laboratorio de preparacin, el laboratorio de androloga y el
laboratorio de DPI. El equipamiento de un laboratorio destinado a la
reproduccin, debe constar de una cabina de flujo laminar, un microscopio
invertido con 400 aumentos y contraste de fase modular sobre una mesa
antivibratoria y un incubador temporal.

Seleccin]

Criterios de calidad embrionaria segn ASEBIR en das 2 y 3

Los laboratorios especializados en FIV han desarrollado mtodos de puntuacin

para juzgar la calidad de los ovocitos y los embriones. Tpicamente, los
expertos examinan la simetra del embrin, la integridad estructural de sus
clulas y el crecimiento general entre dos y cinco das tras la fecundacin.
Ahora los cientficos estn empezando a analizar no slo el embrin, sino
tambin el medio en el que crece. Algunos centros estn utilizando anlisis
qumicos y frmulas matemticas para crear una "huella metablica" de un
embrin sano, que podra utilizarse como barmetro para estimar el potencial
de supervivencia de un embrin. Otros estn intentando analizar las protenas
secretadas por los embriones y a medir la cantidad de oxgeno consumido, que
es una seal habitual de crecimiento.3
Normalmente, los embriones que han alcanzado el estadio de 6-8 clulas se
transfieren 3 das despus de la extraccin. En ocasiones, sin embargo, los
embriones se mantienen en cultivo por un periodo ms largo (unos 6 das), y la
transferencia se realiza en el estadio de blastocisto, sobre todo si se observan
muchos embriones de 3 das de buena calidad. Pero nunca superando los 14
das tras la fecundacin. Las transferencias en estadio de blastocisto muestran
mejores tasas de embarazo.4

La Asociacin para el Estudio de la Biologa Reproductiva (ASEBIR) especific

en 2007 una clasificacin con las que evaluar los embriones antes de su
transferencia, basndose en los resultados obtenidos de estudios realizados en
centros de reproduccin nacionales y en la literatura cientfica publicada. Sobre
la base de ellas, las cuatro categoras que se establecen son:

Categora A: ptimos. Son los que tienen un desarrollo correcto y

ninguna caracterstica de mal pronstico, por lo que sern siempre
transferidos o criopreservados. En pacientes de buen pronstico
(mujeres de menos de 36 aos y ninguna patologa adversa o en
receptoras de ovocitos) los embriones tipo A suelen tener un 40-60% de
posibilidades de implantar.

Categora B: Buenos. Son embriones de buena calidad con elevada

capacidad de implantacin. Lo habitual es que tengan entre un 20 y un
40% de probabilidad de implantacin.

Categora C: Subptimos. Son los embriones que presentan una serie

de caractersticas que si bien van asociados a una menor viabilidad no
son completamente descartables y sern transferidos si no se dispone
de otro con mejor morfologa, por eso tambin son conocidos como
embriones acompaantes. Suelen tener algo menos de la mitad de
posibilidades de implantar (1-20%) aunque siempre depender del tipo y
extensin de las anomalas morfolgicas que presentan.

Categora D: No viables. Tienen una capacidad de implantacin del 1%

o menos, incluso 0,1%. Incluyen tanto los embriones evolutivos in vitro,
cuyas caractersticas estn relacionadas con una falta de potencial
implantatorio, como los que estn bloqueados. No son transferidos
prcticamente en ningn caso.

Evaluacin de la calidad embrionaria

El objetivo de la fecundacin in vitro es seleccionar y transferir un buen
embrin para ello se siguen los Criterios de Valoracin Morfolgicos de Oocitos,
Embriones tempranos y Blastocitos Humanos recogidos en el consenso ASEBIR.
Este consenso se ha establecido estudiando caractersticas morfolgicas de los
embriones y determinando su capacidad de implantacin. De esta manera, los
parmetros morfolgicos que ayudan a determinar la calidad embrionaria son
los siguientes: nmero de clulas, velocidad de divisin, fragmentacin,
tamao y simetra de las blastmeras, multinucleacin, aspecto del citoplasma
y zona pelcida. Estudiando todos estos parmetros podemos determinar la
calidad del embrin

Nmero de clulas: El nmero de clulas es uno de los parmetros

ms importantes. El nmero de clulas ptimo en da 2 es de cuatro
clulas y en da 3 es de siete u ocho clulas. Generalmente, los
embriones que se encuentran dentro de estos lmites son clasificados
como embriones tipo A. Los embriones que presentan entre seis y diez
clulas pueden ser viables y son embriones tipo B. Los embriones con
cinco clulas o ms de 10 se consideran embriones tipo C. No obstante,
embriones que presentan un elevado nmero de clulas en da 2 y da 3
pueden tener una elevada probabilidad de presentar alteraciones
cromosmicas tales como aneuploidas o blastmeras multinucleadas. El
potencial de implantacin de estos embriones es muy bajo por lo que se
consideran embriones tipo D. Por otro lado, embriones con un bajo
nmero de clulas en da 2 y da 3 se consideran bloqueados y su
capacidad de implantacin es muy baja (tipo D). En la siguiente tabla se
observa la calidad del embrin en funcin del nmero de clulas en da 2
y 3:

Grupo de Nmero de Clulas en Nmero de Clulas

calidad da 2 da 3

A 4 7-8

B 2-5 7 o ms

B 4 9 o ms

C 2-5 7 o ms

C 2-4 6

C 6 8 o ms

C 3 6 o ms

D 7 o ms Cualquier valor

D Cualquier nmero 5 o menos

 Velocidad de divisin: La velocidad de divisin es otros de los
parmetros ms importantes. La velocidad de divisin normal es la que
se observa en un embrin que dobla su nmero de clulas en 24 horas
de da 2 a da 3 y es un pronstico de viabilidad. Una velocidad mayor
est asociada a anomalas cromosmicas, por lo que la calidad del
embrin es mnima. Por otro lado una velocidad menor est relacionada
con el bloqueo embrionario. Un embrin se considera bloqueado cuando
no incrementa su nmero de clulas despus de un periodo de 24 h.
Este tipo de embriones tambin presenta una tasa de implantacin muy
baja porque se considera embrin no viable. El bloqueo cromosmico
podra estar originado por anomalas cromosmicas del embrin o por
condiciones de laboratorio no apropiadas.

Fragmentacin: El tercer parmetro en importancia es la

fragmentacin. La fragmentacin consiste en la generacin de porciones
de citoplasma rodeadas por membrana sin ncleo. Las causas de
aparicin de fragmentos no se conocen, se estima que pueda ser una
consecuencia de las condiciones del medio de cultivo o bien una
propiedad inherente del desarrollo embrionario.El tamao del fragmento,
el nmero y la localizacin son elementos relativamente importantes. El
tamao del fragmento se estima como un porcentaje del total del
embrin. Tamaos relativamente pequeos no estn asociados con un
deterioro de la capacidad de implantacin, mientras que a medida que
se incrementa el tamao disminuye la calidad del embrin. Los
embriones con un porcentaje de fragmentacin inferior a 11% son
considerados de tipo A; entre 11-25% se consideran embriones tipo B;
entre 26-35% son embriones tipo C; cuando el porcentaje de
fragmentacin es mayor al 35% nos encontramos ante embriones tipo D.
El nmero de fragmentos tambin es un factor importante,
generalmente la presencia de fragmentos aislados no daa la capacidad
de implantacin del embrin, mientras que la presencia de numerosos
fragmentos puede tener un efecto perjudicial sobre la calidad del
embrin.

Tamao celular y simetra: El tamao celular se considera normal

cuando el tamao de todas las blastmeras es similar, aunque
generalmente existe una ligera asimetra en los embriones. La presencia
de una asimetra elevada, con clulas que difieren entre s un 20% del
volumen total, puede considerarse de mal pronstico, reducindose la
calidad del embrin hasta embrin tipo C.

Multinucleacin:La multinucleacin, es decir, presencia de uno o ms

ncleos en el interior de una clula puede estar originada por un error en
la divisin celular, fragmentacin del ncleo o una migracin incorrecta
de los cromosomas durante la anafase. Los embriones pueden mostrar
 blastmeras multinucleadas tanto en ensayos in vitro como in vivo. La
ausencia de multinucleacin se correlaciona con una elevada tasa de
implantacin y viceversa. De esta manera, la presencia de blastmeras
multinucleadas en da 2 se asocia con baja capacidad de implantacin
(embriones tipo D); la presencia de blastmeras multinucleadas en da 2
y da 3 se correlaciona con embriones subptimos (tipo C); y por ltimo,
la aparicin de multinucleacin en da 3 no afecta tanto a la capacidad
implantatoria. La existencia de blastmeras multinucleadas est
relacionada con embriones mosaicos y aneuploides.

Aspecto del citoplasma: En el aspecto del citoplasma podemos

evaluar distintos parmetros como la presencia de vesiculacin, de
vacuolas y de anillos acitoplasmticos. Generalmente durante los
primeros das de desarrollo el citoplasma presenta un aspecto claro,
mientras que en el tercer da tiene lugar la activacin del genoma
embrionario, apareciendo vesculas que originan un aspecto granulado.
Este cambio determina el correcto desarrollo del embrin pero presenta
una gran relevancia para distinguir la capacidad implantatoria de un
embrin. Por otra parte, la aparicin de vacuolas y la contraccin del
citoplasma se correlacionan con la degeneracin y lisis del embrin. Por
lo que los embriones que presentan estas alteraciones en ms de dos
blastmeras se consideran anormales (tipo D). Generalmente se
prolonga el cultivo de estos embriones hasta blastocito para observar su
evolucin.

Zona pelcida: La zona pelcida es una capa de 15 a 20 m de espesor

que rodea y protege al ovocito maduro. La presencia de anomalas
estructurales o funcionales en las glicoprotenas que forman la zona
pelcida puede originar problemas como la disminucin de la viabilidad
embrionaria y el descenso de la capacidad de implantacin. El grosor de
la zona pelcida es determinante tanto para la viabilidad del embrin,
como en su capacidad de eclosionar. As si la zona pelcida es delgada,
el embrin puede eclosionar fcilmente, aumentndose la capacidad de
implantacin. Por el contrario, si la zona pelcida es muy gruesa o
presenta tabiques se dificulta la eclosin y la implantacin del embrin.

Transferencia de embriones[editar]

Artculo principal: Transferencia de embriones

Los embriones se puntan por el embrilogo segn el nmero de clulas, la

paridad del crecimiento, el grado de fragmentacin, el estado del citoplasma...
Normalmente, para mejorar las posibilidades de implantacin y embarazo, se
transfieren varios embriones simultneamente. El nmero de embriones que se
transfieren depende del nmero disponible, la edad de la mujer,
consideraciones diagnsticas y limitaciones legales (en algunos pases, el
nmero mximo se limita a dos o a tres, en Espaa se pueden transferir un
mximo de 3 embriones). Los embriones que se consideran "mejores" se
transfieren al tero de la mujer a travs de una cnula de plstico muy fino,
que se introduce a travs de la vagina y el crvix y se controla mediante su
visualizacin por ultrasonidos o ecoguiada. La cnula puede ser flexible, lo cual
resulta ms cara pero es el ms recomendable ya que reduce el dao al
introducirse por la vagina hasta llegar al tero. O cnula rgida, ms barata
pero menos eficaz. Hay que tener cuidado con estimular el tero al realizar la
transferencia. Si se punza el tero con la cnula puede dar lugar a
contracciones del tero, perjudiciales para la implantacin del embrin tras la
transferencia. Por lo tanto no son recomendadas la utilizacin de la pinzas Pozzi
o cualquier instrumento que punce o agreda el cuello del tero ya que provoca
contracciones perjudiciales para el embarazo. Para disminuir el riesgo de
contracciones se le administra a la mujer receptora de los embriones
progesterona, que es una hormona que relaja el msculo liso y evita las
contracciones.

Blastocisto listo para ser transferido.

Tasas de xito[editar]

En EE. UU. la tasa de nacidos vivos va FIV es alrededor del 27% por ciclo (con
una tasa de embarazo del 33%), pero las posibilidades de xito varan mucho
dependiendo de la edad de la mujer (o ms concretamente, de la edad de los
ovocitos que se utilizan).[11] Cuando se utilizan los propios ovocitos de la
mujer (y no de donante), para mujeres por debajo de los 35 aos la tasa de
embarazo es alrededor de 43% por ciclo (36,5% de nacidos vivos), mientras
que para mujeres por encima de 40 la tasa cae drsticamente, hasta slo un
4% para mujeres por encima de 42 aos.[12] Otros factores que determinan la
tasa de xito incluyen la calidad de los ovocitos y los espermatozoides, la salud
del tero y la experiencia de la clnica. Normalmente se transfieren varios
embriones simultneamente, para mejorar la tasa de xito, lo que tiene como
contrapartida el riesgo de embarazo mltiple.

Una tcnica reciente consiste en sumergir un embrin en un cultivo de

nutrientes durante 5 das hasta que alcanza el estadio de blastocisto. Los
mdicos determinan entonces qu embriones son los que tienen ms
posibilidades de desarrollarse. Los de mejor calidad se transfieren al tero de la
mujer. De esta manera es posible mejorar la tasa de embarazo sin aumentar el
riesgo de embarazo mltiple. Esta es una tcnica relativamente nueva y est
en fase de experimentacin. La Asociacin Americana de Medicina
Reproductiva (ASRM) opina que ya existe evidencia cientfica suficiente que
demuestra que la transferencia de blastocistos es la mejor opcin en pacientes
de buen pronstico. ASRM recomienda la transferencia de un solo embrin para
minimizar la probabilidad de tener un embarazo mltiple. 5

Las clnicas con programas de FIV generalmente publican sus tasas de

embarazo. Sin embargo, es difcil hacer comparaciones entre clnicas, debido a
que los resultados son la consecuencia de muchas variables. Adems, los
resultados tambin dependen mucho del tipo de pacientes seleccionados.

Hay muchas razones por las cuales puede no conseguirse un embarazo

despus de un tratamiento de FIV y transferencia de embriones, entre las
cuales se incluyen:

El momento de la ovulacin puede haberse interpretado mal, o tal vez

no se pueda predecir, o puede que no ocurra.

Los intentos de obtener ovocitos que se desarrollen durante el ciclo

controlado pueden no tener xito.

Los ovocitos obtenidos pueden ser anormales o pueden haber sido

daados durante la extraccin.

Tal vez no se pueda disponer de una muestra de semen adecuada.

La fecundacin de los ovocitos para generar embriones puede no ocurrir.

La divisin celular de los ovocitos fecundados puede no tener lugar.

El embrin puede que no se desarrolle normalmente.

Puede que la implantacin no tenga lugar.

Fallos con los equipos, infecciones o errores humanos u otros factores

imprevistos e incontrolables, que pueden resultar en prdida o dao de
los ovocitos, de la muestra de semen o de los embriones 6
De acuerdo con un estudio sueco del ao 2005 publicado en la revista de
Oxford "Human Reproduction",7 166 mujeres fueron controladas comenzando
un mes antes de sus ciclos de FIV, y los resultados no mostraron correlacin
significativa entre los resultados de la FIV y el estrs psicolgico. El estudio
conclua con la recomendacin a las clnicas de que si se informaba a los
pacientes de FIV de los resultados de dicho estudio, podra ser posible reducir
el estrs experimentado durante el protocolo de tratamiento. Aunque tal vez el
estrs psicolgico experimentado durante un ciclo puede no afectar al
resultado de la FIV, es posible que la experiencia de la FIV pueda resultar en
estrs que aumente las probabilidades de depresin. Slo las consecuencias
econmicas de la FIV (si se recurre a una clnica privada) pueden generar
ansiedad y resultar abrumadoras. Sin embargo, para muchas parejas la
alternativa es la infertilidad, y la experiencia de la infertilidad en s misma
tambin puede causar estrs y depresin.

Complicaciones[editar]

La mayor complicacin de la FIV es el riesgo de embarazo mltiple.[13] Este

est relacionado directamente con la prctica de transferir embriones mltiples
para aumentar la tasa de embarazo. Los embarazos mltiples estn
relacionados con un incremento en el riesgo de aborto, complicaciones
obsttricas, nacimiento prematuro y morbilidad neonatal con la posibilidad de
dao a largo plazo. En muchos pases existen lmites estrictos al nmero
mximo de embriones que pueden transferirse, para reducir el riesgo de
embarazo mltiple (trillizos o ms). Tambin puede ocurrir una divisin
espontnea del embrin en el tero (como en un embarazo natural), pero ste
es un caso raro, que genera gemelos idnticos. Un estudio clnico randomizado
doble ciego sigui los embarazos tras FIV que generaron 73 bebs (33 nios y
40 nias) y concluy que el 8.7% de los bebs nicos y el 54.2% de los
gemelos tenan un peso al nacer < 2500 gr. 8 En ciclos donde se transfieren dos
embriones la probabilidad de tener un embarazo gemelar es del 6%. En ciclos
donde se transfieren tres embriones la probabilidad de tener un embarazo
gemelar es del 12% y de tener un embarazo triple es del 3%.

Otro riesgo de la estimulacin ovrica es el desarrollo del sndrome de

hiperestimulacin ovrica, con un riesgo para la paciente inferior al 1%.

Si el problema de infertilidad subyacente est relacionado con anormalidades

en la espermatognesis, es posible que la descendencia masculina tenga
mayor riesgo de presentar el mismo problema.

Defectos en los bebs[editar]

El tema de la presencia de defectos asociados a la tcnica de FIV permanece

controvertido. La mayora de los estudios muestran que no existe un
incremento significativo tras una FIV, mientras que otros no apoyan este
hecho.9

Algunos investigadores consideran que manipular gametos y embriones fuera

del cuerpo podra estimular la aparicin de cambios genticos (mutaciones)
que se pueden manifestar como defectos congnitos en el
nacimiento.10 Aunque no hay evidencia gentica que apoye esta idea, algunos
estudios epidemiolgicos sugieren una posible conexin entre la reproduccin
asistida y sndromes genticos poco frecuentes en recin nacidos, como el
sndrome de Beckwith-Wiedemann, que se caracteriza por nacimiento
prematuro, lengua ms grande de lo normal y mayor susceptibilidad a tumores
y defectos respiratorios y oratorios.11 Este sndrome es raro: afecta slo a 1 de
cada 12.000 recin nacidos en todo el mundo, pero algunos estudios sugieren
que es ms frecuente en nios nacidos con tcnicas de reproduccin
asistida.12 13

Sin embargo, el riesgo absoluto de tener un beb que presente el sndrome de

Beckwith-Wiedemann es bajo, por lo que los expertos encuentran difcil
aconsejar a una pareja con problemas de fertilidad no seguir adelante con las
tcnicas de reproduccin asistida. Algunos investigadores sugieren que tal vez
podran reducirse los riesgos potenciales si se evitan ciertos procedimientos
invasivos cuando no sean estrictamente necesarios, como las biopsias de
embriones implantados, el cultivo de embriones en el laboratorio por periodos
superiores al mnimo necesario y el uso de ICSI en ausencia de problemas de
fertilidad masculina.

Criopreservacin[editar]

Artculo principal: Criopreservacin

Criopreservacin de embriones[editar]

Cuando se generan embriones mltiples tras la FIV, los pacientes pueden

elegir congelar los embriones que no se transfieren al tero de la mujer. Esos
embriones se mantienen en nitrgeno lquido congelados hasta un mximo de
5 aos. Segn se public en 2006, en EE. UU. haba cerca de 500 000
embriones congelados.[14] La ventaja es que los pacientes que no consiguen
concebir tras el primer ciclo pueden reintentarlo utilizando los embriones
congelados, sin tener que realizar de nuevo un ciclo de FIV completo: slo
tendran que realizar la transferencia de dichos embriones, sin pasar de nuevo
por la estimulacin, la extraccin y la fecundacin. O, en el caso de pacientes
que consiguen un embarazo, pueden mantenerlos para un segundo embarazo
posterior. Los embriones restantes procecentes de FIV pueden donarse a otras
mujeres o parejas para reproduccin o para investigar con ellos.
Existen diferentes tcnicas para criopreservar (congelar) embriones, cada una
con diferentes posibilidades de lograr la supervivencia. En la actualidad el
mtodo ms efectivo es la vitrificacin (supervivencia de hasta 98 %) [15], lo
que a su vez ser refleja en una posibilidad de hasta el 50 % de embarazo con
embriones congelados, segn reportes en la literatura mdica [16].

Si, a pesar de todo, siguen existiendo embriones criopreservados que, por el

tiempo transcurrido o por otras razones, no vayan a utilizarse para su
implantacin, las dos alternativas posibles (que normalmente estn reguladas
por leyes estrictas) son la donacin para la investigacin y la destruccin. En el
caso de donacin de embriones para investigacin, sta se debe llevarse a
cabo en centros acreditados y sobre la base de proyectos autorizados por las
autoridades correspondientes. Normalmente, se establecen plazos
postfecundacin para la investigacin en los embriones y, una vez terminada la
investigacin, no se permite llevar a cabo una transferencia embrionaria con
ellos. La investigacin con embriones procedentes de FIV ha permitido hasta el
momento la realizacin de estudios en clulas madre, de gran importancia en
la comprensin del desarrollo embrionario y en el avance de las terapias
regenerativas de tejidos. En cuanto a la destruccin de los embriones
congelados, se considera como ltima alternativa, a peticin explcita de los
progenitores, o bien cuando no los quieran para ellos y no hayan autorizado la
donacin a otras parejas ni la investigacin en ellos. Tanto la utilizacin de
embriones para fines de investigacin como su destruccin generan extensos
debates ticos entre partidarios y oponentes, que se traducen en leyes que
limitan las posibilidades existentes, muy variables dependiendo de los pases.

En Espaa el perodo que obliga la ley a mantener los embriones congelados es

de cinco aos. Ser en este momento cuando la clnica que posee los
embriones congelados deber contactar va carta para solicitar las acciones a
llevar a cabo con los embriones. Tras pasar 5 aos, y sin haber conseguido
respuesta por parte de los dueos de los embriones congelados, ser la clnica
responsable de los embriones pudiendo utilizarlos para las 3 causas
mencionadas anteriormente.

Criopreservacin de ovocitos[editar]

La criopreservacin de ovocitos maduros sin fertilizar ha sido llevada a cabo

con xito, por ejemplo en mujeres que tienen alta probabilidad de perder sus
reservas de ovocitos debido a que deben ser sometidas a un proceso
de quimioterapia.14

Criopreservacin del tejido ovrico[editar]

La criopreservacin del tejido ovrico interesa a las mujeres que quieren

preservar su funcin reproductora ms all del lmite natural, o cuya capacidad
reproductiva est amenazada por una terapia agresiva contra el cncer, por
ejemplo.15 16 La investigacin en este terreno es prometedora.

Intervenciones asociadas[editar]

Existen algunas variaciones o mejoras de la FIV, tales como ICSI, IMSI, ZIFT,
GIFT y PGD.

Inyeccin de un ovocito durante una ICSI.

ICSI
Artculo principal: Inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides

La inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides (ICSI) es un desarrollo

reciente asociada a la FIV que permite inyectar directamente un
espermatozoide en el citoplasma del ovocito utilizando tcnicas
de micromanipulacin. Se utiliza cuando los espermatozoides tienen
dificultades para penetrar en el ovocito, y en ese caso se puede utilizar
esperma del compaero o de donante. La ICSI tambin se utiliza cuando el
recuento de espermatozoides es muy bajo.

Inyeccin intra citoplasmtica de espermatozoides morfolgicamente

seleccionados (IMSI)[editar]

Artculo principal: Inyeccin intra citoplasmtica de espermatozoides

morfolgicamente seleccionados

La IMSI o Inyeccin intra citoplasmtica de espermatozoides

morfolgicamente seleccionados (del ingls: Intracytoplasmic
morphologically-selected sperm injection) es una tcnica de fecundacin in
vitro (FIV). Consiste en realizar una seleccin morfolgica de
los espermatozoides antes de inyectarlos en los ovocitos.
Se selecciona un espermatozoide utilizando un microscopio invertido con
una magnificacin de ms de 6000 veces su tamao con el fin de observar con
ms precisin la composicin de la cabeza de los espermatozoides, detectando
posibles anomalas de las vacuolas o los daos de la cadena de ADN de los
espermatozoides y escogiendo solo los que no presentan anomalas para
proceder a la fertilizacin con los ovocitos.

Eclosin Asistida (Assisted Hatching)

Antes de la transferencia, los embriones estn envueltos por una capa de
glicoproteinas y, para lograr un embarazo, los embriones deben romper y salir
de esta envoltura antes de implantarse. Est envuelta se llama zona pelcida y
la eclosin asistida (assisted hatching) consiste en realizar un orificio en esta
zona para facilitar el proceso de eclosin del embrin y as aumentar la tasa de
implantacin.

La eclosin asistida(tambin llamada AHA) es una tcnica que se lleva

utilizando desde los aos 80, cuando se vio que los embriones de PZD
(diseccin parcial de la zona pelcida)efectivamente parecan tener una tasa
de implantacin ms alta que los embriones normales. Este mtodo se puede
realizar cualquier da de desarrollo, aunque normalmente se suele hacer en el
tercero.

Existen diferentes formas de hacer Eclosin Asistida, ya sea por el mtodo

qumico, mecnico o con lser. Este ltimo es el que ha ganado ms
popularidad por sus buenos resultados. Mtodo qumico: consiste en introducir
cido de Tyroide, que es una solucin salina tamponada con un pH de 2,5 (con
un margen de error de 0,3), en una pipeta de AHA. Al embrin, por otra parte,
se le tiene sujetado con una micropioeta de sujecin y en una solucin de 20
microlitros de HEPES. Se acerca la pipeta con la solucin de Tyrode y se libera
en las cercanas del embrin. La zona pelcida se va degradando, ya que al ser
un pH tan bajo, se desnaturalizan las protenas que la forman, dando lugar a un
orificio en esa zona.Una vez formado, se aspira con la pipeta esta solucin para
que no afecte al interior del embrin, y alejamos al embrin de esta zona. La
ventaja de este mtodo es que es econmico y los extremos son suaves. Los
inconvenientes que tiene este mtodo son: el embrin se expone a una
solucin cida incrementando el riesgo de dao de este y, adems, la apertura
es permanente con lo que puede ser perjudicial por afectar al medio interno del
embrin.

Mtodo mecnico: este mtodo se realiza en 20 microlitros de medio con

HEPES y consiste en fijar con una pipeta de sujecin el embrin, por otra parte
se toma una pipeta (PZD) con la que se atraviesa tangencialmente la zona
pelcida. Una vez atravesado el embrin, se suelta y se rasga la zona contra la
pipeta de sujecin. En este caso como resultado final obtenemos un ojal que se
mantiene cerrado y por el cual despus el embrin le ser fcil salir e
implantar. El ojal puede tener unas dimensiones de 50 micras
aproximadamente. Las ventajas que tiene este mtodo son: que el embrin
est ms protegido por el efecto que hace el ojal, es ms natural que los
dems mtodos y adems es ms barato. En cambio su inconveniente es: que
es difcil de aprender, adems de laborioso.

Mtodo fsico(lser): este mtodo se realiza en un medio con HEPES en donde

se encuentra el embrin. El lser de diodo infrarrojo (1,48 micras) se apunta y
dispara, a travs del objetivo, cerca de donde se encuentra el embrin. Se
puede variar el tiempo de accin del lser (0,1 a 50 ms). El lser calienta
localmente el agua, y al aumentar la temperatura hace que las protenas que
constituyen la zona pelcida cercanas al lser se desnaturalicen y as se origine
un orificio. La forma del orificio del lser es un ojal abierto siempre mayor al
que se ve en el plano del microscopio. La ventaja de este mtodo es que es
muy rpido adems de reproducible, en cambio sus desventajas son: es muy
caro, se expone al embrin a un riesgo como es el propio lser, y la abertura es
permanente adems de que es ms grande de lo que parece y esto como
hemos dicho antes puede afectar al embrin.

Hay que decir que esta tcnica solo ofrece ventajas en los siguientes casos:
-mujeres mayores de 37 aos. -Fallo de gestacin tras FIV/ICSI.

y otras indicaciones propuestas pero an no demostradas: -Zona pelcida

anormal. -Mala calidad embrionaria. -Baja respuesta ovrica.

Por ltimo, es oportuno decir que tambin se ha intentado la eclosin total del
embrin a travs del mtodo qumico o con pronasa. Slo es posible realizarlo
en estadio de blastocisto, ya que si se hiciera antes se disgregara el embrin
en sus blastmeras. Pero esta tcnica apenas se utiliza en el laboratorio.

Transferencia intrafalopiana de cigotos

Artculo principal: Transferencia intrafalopiana de cigotos

En la transferencia intrafalopiana de cigotos (ZIFT en ingls), los ovocitos se

extraen de la mujer, fecundados in vitro, y los embriones se sitan en
las trompas de Falopio, en lugar de en el tero.

TGIF[editar]

Artculo principal: Transferencia de gametos intrafalopiana

En la TGIF (GIFT en ingls), los ovocitos se extraen de la mujer, y se sitan en

una de las trompas de Falopio, junto con los espermatozoides del varn. Por
tanto, esta variacin es en realidad una fecundacin in vivo y no in vitro.
DGP
Artculo principal: Diagnstico gentico preimplantacional

El DGP puede realizarse en los embriones previamente a la transferencia. Un

test similar pero ms general es el haplotipado gentico preimplantacin o HGP
(PGH en ingls). Sin embargo, la tasa de xito de la DGP es baja.

Mini FIV[editar]

Tambin denominada Soft-FIV, o FIV-suave, tiene la particularidad de estimular

el ovario de forma muy sutil con el empleo mnimo de medicamentos
hormonales. El resto de etapas en las tcnicas de mini FIV son exactamente las
mismas que en FIV tradicional. Esta tcnica est recomendada para mujeres
con buen pronstico, pacientes que no pueden recibir una estimulacin de
vulos completa o para mujeres que no desean recibir un tratamiento
hormonal ms agresivo. En definitiva, es un tratamiento ms natural, menos
costoso pero que no es vlido para todos los casos.

Historia
El primer embarazo conseguido mediante FIV con un ovocito humano fue
descrito por el equipo de Monash en la revista The Lancet en 1973, aunque
slo dur algunos das y hoy en da se denominara un embarazo bioqumico. A
continuacin se public un embarazo ectpico en las trompas por Steptoe y
Edwards en 1976 17 . En 1978, Edwards y Steptoe lograron el primer nacimiento
por FIV 18 , la nia Louise Brown naci el 25 de julio de 1978 en Oldeham and
District General Hospital de Lncashire, cerca de Mnchester (Reino Unido) 19 y
de otro beb desconocido, los primeros bebs FIV. Robert G. Edwards recibi
el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina 2010 por el desarrollo de la
fecundacin in vitro'.20

Despus tuvo lugar el nacimiento de Candice Reed en Melbourne en 1980. La

utilizacin del uso de ciclos estimulados con citrato de clomifeno y el uso
de gonadotropina corinica humana (hCG) para controlar el momento de la
maduracin de los ovocitos, permitiendo as controlar el momento de la
extraccin, convirti a la FIV de una herramienta de investigacin en un
tratamiento clnico.

A continuacin se produjeron 14 embarazos, seguidos de 9 nacimientos en

1981 con el equipo universitario de Monash. El equipo de Jones en Norfolk,
Virginia, mejor los ciclos de estimulacin incorporando el uso de una hormona
estimulante de los folculos (uHMG). Esto se dio a conocer con el nombre de
hiperestimulacin ovrica controlada (HOC). Otro paso adelante fue el uso
de agonistas de la hormona que libera la gonadotropina (GnRH-A),
disminuyendo as la necesidad de control al prevenir la ovulacin prematura, y
ms recientemente antagonistas de la hormona que libera la gonadotropina
(GnRH-Ant), con una funcin similar. El uso adicional de contraceptivos orales
ha permitido la programacin de los ciclos de FIV, lo que hace el tratamiento
ms fcil de realizar para los mdicos y los pacientes.

En la Clnica Dexeus se realiz la primera fecundacin in vitro de Espaa el 12

de julio de 1984, por el gineclogo Pedro Barri y la biloga Anna Veiga.21

El primer beb por FIV en Amrica Latina naci en Colombia en 1985, en el

laboratorio del Dr. Elkin Lucena. El mismo equipo tambin es responsable de
los primeros embarazos por congelacin de embriones en Amrica Latina. 22

La capacidad de congelar y posteriormente descongelar y transferir embriones

tambin ha mejorado significativamente la efectividad de la FIV. Otro momento
significativo fue el desarrollo de la inyeccin intracitoplasmtica de
espermatozoides (ICSI) por Gianpiero Palermo en Bruselas, en 1992. Esto ha
permitido que hombres con una produccin mnima de espermatozoides
consigan embarazos, a veces conjuntamente con recuperacin de esperma,
utilizando una aguja testicular fina o una biopsia testicular abierta, de manera
que incluso hombres con el sndrome de Klinefelter pueden a veces conseguir
un embarazo. Por tanto, la FIV se ha convertido en la solucin de la mayora de
los problemas de infertilidad, desde problemas en las trompas hasta factores
masculinos, subfertilidad idioptica, endometriosis, edad materna avanzada y
anovulacin.