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    1039 Agar Eosina y Azul de Metileno Agar E.M.B Rev 0 Abril 2010 01

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    Armando Cerra
    Este documento proporciona instrucciones para el uso del agar Eosina y Azul de Metileno, un medio de cultivo diferencial para el aislamiento y diferenciación de bacterias entéricas gramnegativas en muestras clínicas. El medio contiene peptona, lactosa, sacarosa, fosfato dipotásico y agar bacteriológico como nutrientes para el crecimiento, y eosina y azul de metileno como indicadores. Se describe la preparación, principio, tipo de muestras, procedimiento, controles y almacenamiento

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    Descripción original:

    agar MB

    Título original

    1039 Agar Eosina y Azul de Metileno Agar e.m.b Rev 0 Abril 2010 01

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    Este documento proporciona instrucciones para el uso del agar Eosina y Azul de Metileno, un medio de cultivo diferencial para el aislamiento y diferenciación de bacterias entéricas gramnegativas en muestras clínicas. El medio contiene peptona, lactosa, sacarosa, fosfato dipotásico y agar bacteriológico como nutrientes para el crecimiento, y eosina y azul de metileno como indicadores. Se describe la preparación, principio, tipo de muestras, procedimiento, controles y almacenamiento

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    INSTRUCCIONES DE USO

    Revisin 0 Abril 2010


    AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO (AGAR E.M.B)
    Agar Eosina y azul de Metileno (AGAR E.M.B) presentacin 500 gramos, 5, 25, 50 kilos. Catlogo 1039

    USO PREVISTO
    Agar Eosina y Azul de Metileno est recomendado para el aislamiento, cultivo y diferenciacin de bacilos entricos
    gram negativos en muestras clnicas.

    FORMULA EN g/l
    Peptona Bacteriolgica 10.00 Eosina Y 0.04

    Lactosa 5.00 Azul Metileno 0.065

    Sacarosa 5.00 Agar Bacteriolgico 13.50

    Fosfato Dipotasico 2.00

    Final pH 7.2 0.2 at 25C

    PREPARACION
    Agar Eosina y azul de Metileno (AGAR E.M.B) presentacin 500 gramos, 5, 25, 50 kilos. Catlogo 11039(Medio
    deshidratado)
    Suspender 36 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien. Calentar agitando frecuentemente. Dejar hervir
    durante un minuto o hasta disolucin completa. Distribuir en recipientes adecuados y esterilizar en autoclave a 121C
    durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C. Remover con cuidado, evitando la formacin de burbujas y verter cuidadosamente
    en placas de Petri. NO SOBRECALENTAR. Las placas preparadas deben almacenarse 8-15C. El color es azul-tornasol. La
    esterilizacin reduce el azul de metileno, dejando el medio de color naranja. El color prpura puede ser restaurado
    mezclando el medio suavemente. El medio reducido debe mezclarse para que el azul de metileno se oxide, de otro modo,
    aparecer una zona oscura en la parte alta de la placa, que se ir extendiendo gradualmente hacia el fondo.

    El medio deshidratado debe ser homogneo, libre de floculos y de color beige claro. Si hay algn cambio fsico no utilizar
    el medio.

    PRINCIPIO Y APLICACION
    AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO (E.M.B) es un medio diferencial similar al Agar Levine (Cat. 1050) y es utilizado
    para el aislamiento de Enterobacterias. El uso de Eosina y Azul de Metileno permite la diferenciacin entre organismos
    fermentadores y no fermentadores de lactosa. Es muy utilizado en bacteriologa mdica. La Peptona aporta nitrgeno,
    vitaminas, minerales y aminocidos esenciales para el crecimiento. La Sacarosa se aade adems de la lactosa como
    carbohidrato fermentable, para detectar coliformes que fermentan la sacarosa ms rpidamente que la lactosa. La
    Eosina y azul de metileno son inhibidores parciales de bacterias Gram-positivas e indicadores de pH. Debido a la lactosa
    y la sacarosa en el medio se puede diferencia en cultivo primario Salmonella y Shigella las cuales son lactosa negativo y
    pueden ser diferenciados de otras lactosa negativos y sacarosa positivos tales como Proteus vulgaris, Citrobacter y
    Aeromonas. El Fosfato dipotsico acta como buffer del sistema y al Agar bacteriolgico es el agente solidificante.

    TIPO DE MUESTRAS

    Heces, orina

    La recoleccin, el manejo y el procesamiento de las muestras se llevan a cabo segn Recomendaciones y Standards en
    Microbiologa Clnica.

    LABORATORIOS CONDA, S.A. www.condalab.com


    PROCEDIMIENTO

    1.- Inocular en superficie. Estras paralelas con el asa o hisopo


    2.- Incubar a 35 2C durante 24-48 horas

    3.- Lectura e interpretacin de los resultados

    Salmonella y Shigella colonias translucidas color mbar o incoloras

    Coliformes que fermentan la lactosa o la sacarosa producen colonias de azul oscuras con centros oscuros a verdosas
    con brillo metlico. Otras coliformes como Entrobacter colonias aspecto mucoide, colonias rosas. Enterococcos faecalis
    parcialmente inhibidos aparecen como colonias incoloras. Estafilococos, Estreptococos y levaduras pueden crecer en este
    medio. Algunas bacterias gram-negativas no fermentadores pueden aparecer como no fermentadores de lactosa. A
    veces son necesarios los test bioqumicos para identificacin del gnero.

    CONTROL MICROBIOLOGICO
    Los siguientes resultados, fueron obtenidos en el desarrollo del medio a partir de clulas tipo, despus de incubacin a
    temperatura de 35 2C y observados despus de 24 - 48 horas.

    Microorganismos Desarrollo Color Colonia


    Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Bueno Rosa
    Escherichia coli ATCC 25922 Bueno Verde con brillo metlico
    Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno Incolora
    Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 Bueno Incolora
    Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido Incolora

    BIBLIOGRAPHY
    American Public Heath Association. Diagnostic Procedures and Reagents. 2nd Ed. APHA, Inc. New York, 1950
    A.P.H.A Examination of dairy products. 10th Ed. APHA, Inc. New York, 1953. Society of American Bacteriologists. Manual of
    Microbiological Methods MacGraw-Hill New York, 1957.

    Diagnostico in vitro
    Solo para uso profesional

    Ver indicaciones generales de uso y ficha de seguridad


    www.condalab.com

    ALMACENAMIENTO 25C

    Una vez abierto guardar el medio cerrado para evitar la hidratacin.


    Utilizable hasta la fecha de caducidad. 2C

    Laboratorios Conda S.A


    C/ La Forja 9 28850 Torrejn de Ardoz
    Madrid, Espaa

    LABORATORIOS CONDA, S.A. www.condalab.com

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