Inmunologia Guia 2017
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PRACTICA N 1
INTRODUCCIN
La sangre es un tejido muy sui generis, ya que se encuentra en fase lquida y posee
enorme actividad metablica e inmunolgica. Es una suspensin heterognea de varios
elementos formes (leucocitos, eritrocitos, plaquetas) en un medio acuoso rico en mltiples
protenas , enzimas. electrolitos , lpidos, etc.(albmina, globulinas, factores de
coagulacin). Las anteriores caractersticas le imprimen un carcter dinmico a este
elemento y por lo tanto hay que tener en mente esto cuando hagamos uso de el.
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OBJETIVOS
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
Obtencin de suero
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Obtencin de plasma
RESULTADOS
CUESTIONARIO
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INTRODUCCIN
Los glbulos blancos tambin denominados leucocitos, son los encargados de la defensa
del organismo frente a infecciones. Los leucocitos (mononucleados o polinucleados), a
diferencia de los eritrocitos, no contienen pigmentos y son verdaderas clulas con ncleo,
mitocondria y organoides, cabe recalcar que solo un pequeo porcentaje de leucocitos se
encuentra circulando en el torrente sanguneo, la mayor cantidad se encuentra en la
medula sea, tejidos y rganos, donde cumplen funciones especiales.
El recuento leucocitario es una prueba que nos permite determinar el nmero de glbulos
blancos por milmetro cbico de sangre. Se encuentran normalmente entre 5000 y 9000
leucocitos por mm3 de sangre. Estas cifras varan con la edad y con el momento que se
toma la muestra.
RECUENTO DE LEUCOCITOS
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HEMOGRAMA
Hay cinco tipos principales que se diferencian por el tamao, la forma del
ncleo y el color de los grnulos del citoplasma.
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Para trabajar esta frmula se cuentan 100 leucocitos y se anota el nmero que
se ha encontrado de cada tipo de ellos.
Cuando las clulas anotadas a la izquierda del recuadro se encuentran por encima
de los porcentajes considerados normales, se dice que hay una desviacin a la
izquierda (infeccin aguda). En ocasiones puede registrarse un aumento del
porcentaje de las clulas anotadas a la derecha, (linfocitos y monocitos) y se dice
que el hemograma muestra una desviacin a la derecha. El aumento de un
determinado tipo de clulas tiene que repercutir en la disminucin de las otras,
para que la suma total sea 100%
a. Examen de la extensin
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b. Recuento de leucocitos
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PROCEDIMIENTO HEMOGRAMA
6. Tome nota del tipo le leucocitos que se observe en cada campo. Cuente un total de
100 leucocitos.
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RESULTADOS ANORMALES
NEUTROFILIA
LEUCOCITOSIS
DESVIACIN A LA IZQUIERDA
EOSINOFILIA
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LINFOCITOSIS
MONOCITOSIS
NEUTROPENIA
PREDOMINIO DE LINFOCITOS
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PREDOMINIO DE NEUTRFILOS
Forma y tamao del ncleo en relacin con el rea total de la clula de los
diferentes leucocitos:
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EJEMPLO
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CUESTIONARIO Y ACTIVIDADES
I. Cuestionario
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Leucocitos / mm 3 = leucocitos contados x 50
Notificar el resultado como el nmero de leucocitos que hay en 1 mm3 de
sangre sin diluir.
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Ejemplo:
En los cuatro cuadros se cuentan 188 clulas.
Leucocitos por mm3 = 188 x 50
Resultado que se notifica: 9 400 leucocitos/mm3 de sangre.
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Prctica N 2
LINFOIDES
I. INTRODUCCIN
Los rganos linfoides centrales son la mdula sea y el timo, un rgano que se encuentra
en la parte alta del trax. Los rganos linfoides perifricos comprenden los ganglios
linfticos, el bazo, y los tejidos linfoides de la mucosa del intestino, las vas nasales y
respiratorias, las vas urogenitales, y otras mucosas. Los ganglios linfticos estn
interconectados por medio de un sistema de vasos linfticos, que drenan lquido
extracelular desde los tejidos, a travs de los ganglios linfticos, y de regreso hacia la
sangre.
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III. PROCEDIMIENTO
A) OBTENCION DE CELULAS
MDULA SEA
1. Matar la rata por dislocacin cervical o inhalacin de CO2. Colocar la rata sobre
una tabla de diseccin con el vientre hacia arriba. Empapar la rata con etanol para
reducir el transporte de pelos con el aire.
2. Hacer un corte transversal largo a travs de la piel en la parte media del rea
abdominal. Retirar la piel de las patas traseras.
3. Separar las piernas del cuerpo al nivel de la articulacin de la cadera. Retirar la
grasa y colocar las piernas en una placa petri con medio.
4. Retirar el tejido muscular del fmur y la tibia. Separar el fmur y la tibia y cortar las
epfisis en ambos extremos.
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5. Inyectar por los extremos del hueso 3ml de medio o PBS, con una jeringa para
expulsar la medula sea
6. Remover los desechos grandes y los acmulos celulares.
7. Lavar la suspensin por centrifugacin a 300xg por 10 minutos a 4 grados y
colocar en el medio al 5% de FS.
TIMO
1. Matar la rata por dislocacin cervical o inhalacin de CO2. Colocar la rata sobre
una tabla de diseccin con el vientre hacia arriba. Empapar el abdomen la rata con
etanol para reducir el transporte de pelos con el aire.
2. Usando la tijera, hacer una incisin desde la regin xifoidea hasta la regin
submandibular y retirar la piel lateralmente.
3. Hacer una incisin en el trax y separar los bordes de la incisin.
4. Usando el frceps, cuidadosamente agarrar los lbulos tmicos y levntelos.
5. Poner el timo en una placa petri con medio.
6. Cortar el timo en pequeos trozos y haga una suspensin.
7. Cuidadosamente triturar el tejido en el homogeneizador de vidrio, utilizando el
embolo de una jeringa de 5 ml
8. Remover los desechos grandes y los acmulos celulares.
9. Lavar la suspensin por centrifugacin a 300xg por 10 minutos a 4 grados y
colocar en el medio al 5% de FS.
BAZO
1. Matar la rata por dislocacin cervical o inhalacin de CO2. Colocar la rata sobre
una tabla de diseccin con el vientre hacia arriba Empapar el abdomen la rata con
etanol para reducir el transporte de pelos con el aire.
2. Hacer una incisin a travs de la piel en la regin inguinal. Con los dedos sobre
ambos lados del corte, tire entre la cabeza y la cola hasta que la pared peritoneal
este lo suficientemente expuesta. Empapar la cavidad peritoneal con etanol.
3. Cortar el peritoneo, levante el bazo con los frceps, y separe este de los tejidos
adyacentes con la tijera. Colocar el bazo en una placa petri con medio.
4. Cortar el bazo en pequeos trozos y haga una suspensin.
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B) CONTEO CELULAR
1. Diluir las clulas en la solucin de Turk.
2. Mezclar completamente y aadir 1 gota en la cmara de Neubauer usando la
pipeta Pasteur o micropipeta
3. Contar las clulas de los cuadrantes de los extremos (1,3,7 y 9). Incluya en este
recuento las clulas que se observan sobre las lneas de dos lados de cada
cuadrado revisado.
4. Conteo de clulas/ml=Numero de clulas (promedio correspondiente a un rea de
1mm2) x factor de dilucin x104.
COMENTARIO
- El azul de trypan tiene mayor afinidad por las protenas del suero que por las
protenas celulares. Si el extendido es muy oscuro, resuspender las clulas en
PBS antes de realizar el conteo.
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- No incubar las clulas con azul de trypan por ms de 15 minutos de lo contrario las
clulas viables empezaran a captar el colorante.
MATERIALES Y REACTIVOS
- Suspensin celular
- Tubo falcon de 15 ml
- PBS
- Buffer Lisis de eritrocitos (NH4Cl 0,15M, KHCO3 y EDTA 0,1mM)
PROCEDIMIENTO
IV. RESULTADOS
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V. CUESTIONARIO
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PRACTICA N 3
I. INTRODUCCIN
Una de las clulas de mamferos ms utilizadas como sistema biolgico para hacer
investigacin en el campo de la Inmunologa, son los macrfagos.
Los macrfagos son glbulos blancos de la sangre que son especializados en la digestin
de partculas y son distribuidos indistintamente en la sangre y tejidos y participan en la
defensa, tanto en la respuesta inmune adaptativa, como en la respuesta inmune innata, a
travs de la ingestin de patgenos, estas clulas tambin participan en el importante rol de
limpieza de clulas daadas o muertas.
II. OBJETIVOS.
- Ratas adultas.
- Cultivo de bacterias (E.coli).
- Jeringas hipodrmicas
- Pipetas pasteur
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- Pipetas de 1,2 y 5 ml
- NaCI 0.9 % y NaCI 1.8 %.
- Sulfanilamida
- Naftilendiamina
- Medio de Cultivo RPMI 1640
IV. PROCEDIMIENTO
1. Con la ayuda de una asa de col cosechar las bacterias crecidas en una placa de
agar nutritivo y resuspenderlas en un tubo de ensayo que contiene 1ml de NaCI al
0.9%.
2. Calentar la suspensin de clulas bacterianas hasta ebullicin, durante tres veces,
agitando cuidadosamente el tubo para evitar que el contenido se proyecte.
3. Abrir el abdomen del ratn como indica el esquema y con ayuda de una pipeta, retirar
cuidadosamente todo el lquido ctrico y colocarlo en un tubo de ensayo.
4. Para concentrar los macrfagos, centrifugar la suspensin celular a 2000 r.p.m.,
durante cuatro minutos.
5. Retirar el sobrenadante y resuspender el pellet con 1ml de NaCI a 0.9 %.
6. Realizar el recuento celular con objetivos de mediano aumento.
D) Cultivo de macrfagos
En una placa de cultivo celular de 24 pozos que contiene 0,5 ml de medio de cultivo
para macrfagos (medio RPMI 1640) sembrar 1x106 clulas e incubar a 37C en un
atmosfera de O2 y 5% CO2 durante 30 a 40 minutos
V. RESULTADOS
VI. CUESTIONARIO.
1. Qu es un sistema biolgico?
2. Describa una aplicacin que dara al sistema macrfago para hacer investigacin en
Inmunologa.
3. Indique 4 caractersticas de un macrfago activado
4. Describa la respuesta inmunolgica al inyectar LPS (lipopolisacaridos)
5. Cul es el mecanismo por el cual el macrfago produce NO?
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PRACTICA N 4
I. INTRODUCCIN
Este mtodo es simple y rpido y toma ventajas de las diferencias de densidad entre las
clulas mononucleares, polimorfonucleares y otras clulas encontrados en la sangre.
Primero las clulas son sedimentadas en dextrano y luego hay una separacin diferencial
en una gradiente de densidad discontinua de ficollhypaque. En el dextrano los eritrocitos
forman roulex y de este modo sedimentan ms rpidamente que los granulocitos En el
ficollhypaque las clulas mononucleares y plaquetas son colectadas en la parte superior
de la capa de, debido a que estas clulas tiene una baja densidad. En contraste los
granulocitos (neutrfilos) tienen una densidad mayor que el ficollhypaque y son
colectados en la parte inferior de la capa ficollhypaque las plaquetas son separadas de
las clulas mononucleares por subsecuentes pasos de lavados y centrifugacin.
II. OBJETIVOS
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Materiales
Reactivos
- Ficoll hypaque
- dextrano
- medio de cultivo RPMI 1640
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- PBS
- Sangre con anticoagulante ( EDTA )
- Azul de trypan
- NaCl 1,8 %
IV. PROCEDIMIENTO
A. Obtencin de la Sangre
B. Sedimentacin en dextrano
V. RESULTADOS
VI. CUESTIONARIO
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PRACTICA N 5
I. INTRODUCCIN
Los neutrfilos juegan un rol clave en proteger al cuerpo, utilizando una amplia variedad
de mecanismos microbiocidas dependientes e independientes de oxigeno para eliminar
los agentes infecciosos. Los mecanismos dependientes de oxigeno implican la produccin
de especies reactivas de oxigeno (ROS), atravez de lo que se conoce como la explosin
respiratoria oxidativa, que implica un elevado consumo de oxigeno por estas clulas, y
que son escenciales para la proteccin contra los patgenos invasores. Mientras que los
mecanismos independientes de oxigeno incluyen muchas otras funciones del neutrfilo,
tales como quimiotaxais , fagocitosis, desgranulacion y liberacin de enzimas lticas y
pptidos bactericidas
El ensayo del NBT se basa en la acumulacin del precipitado formazan azul oscuro El
NBT, permeable a la membrana es reducido al formazan por el O2- el cual es generado
luego de la activacin de los neutrfilos Este ensayo es colorimetrico, sensible y
cuantitativo y puede detectar pequeas cantidades de O2-
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II. OBJETIVOS
Materiales
Reactivos
- Ficoll hypaque
- dextrano
- medio de cultivo RPMI 1640
- PBS
- Sangre con anticoagulante ( EDTA )
- Azul de trypan
- NaCl 1,8 %
- NBT
- Dimetilformamida
- KOH 2M
- DMSO
- EDTA
IV. PROCEDIMIENTO
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2. Sembrar 1x 105 neutrofilos por pozo en una placa de cultivo celular de 24 pocillos
en 500 ul de medio DMEM
3. Adicionar 100ul de solucin de NBT a cada pozo
4. Adicionar 1ul de PMA (200ng/ml) o buffer (control no estimulado) a los pozos e
incubar por 30 min a 37 oC
5. Lavar las clulas dos veces con PBS (37oC )
6. Fijar las clulas con metanol y dejar secar las placas al aire
7. Agregar 120ul de KOH 2M por pozo
8. Agregar 140ul de DMSO por pozo y disolver el formazan precipitado por pipeteo
9. Transferir la solucin de NBT disuelta a una cuveta de espectrofotmetro y medir
la absorbancia a 620nm
10. Comparar la absorbancia entre lo neutrfilos estimulados y los no estimulados
para cuantificar la produccin de O2- en cada muestra
V. RESULTADOS
1. Esquematice el ensayo del NBT
2. Hacer los clculos para determinar la cantidad de O2- producida
VI. CUESTIONARIO
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PRACTICA N 6
I. INTRODUCCIN
El proceso inflamatorio es complejo e involucra una serie de fenmenos que pueden ser
desencadenados por varios estmulos, entre los que se incluyen factores endgenos
(necrosis tisular o rotura sea) o factores exgenos como lesiones por agentes mecnicos
(corte), fsicos (quemaduras, radiaciones, fro, calor), qumicos (corrosivos, venenos,
toxinas), biolgicos (bacterias, virus, parsitos, hongos) e inmunolgicos (reacciones de
hipersensibilidad)
Estos leucocitos se sitan sobre el endotelio vascular, lo que se conoce como rodamiento,
se produce la adhesin leucocitaria y posteriormente, la trasmigracin que es el proceso
mediante el cual los leucocitos (fundamentalmente neutrfilos en la inflamacin aguda)
abandonan la circulacin mediante diapdesis.
Una vez fuera del sistema vascular se produce el fenmeno de quimiotaxis, migrando los
leucocitos hacia la zona de lesin. Los factores quimiotcticos pueden ser exgenos o
endgenos. Entre los exgenos estn los productos bacterianos como los pptidos; entre
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los endgenos estn los componentes del complemento, productos de lipoxigenasa y las
citoquinas.
Los modelos in vivo para la investigacin de la actividad antiinflamatoria tienen como base
para el ensayo los sntomas de la inflamacin, siendo el ms frecuentemente utilizado el
edema. En estos modelos, la mayora de veces solamente nos permite llegar a determinar
la actividad ms no el mecanismo implicado en el proceso antiinflamatorio que presenta el
compuesto a investigar, pero son de gran importancia ya que nos permiten hacer un
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Se prefiere la carragenina ante otros irritantes porque el edema producido esta menos
modificado por factores ajenos a los propiamente caractersticos de la inflamacin y
adems, porque la actividad antiinflamatoria de este ensayo guarda una buena
correlacin con la actividad anti-inflamatoria en clnica.
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II. OBJETIVOS
3.1 REACTIVOS
- Carragenina
- Suero fisiologico
- NaCl 0.1%
- Triton X100
- EDTA 5mM
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3.2 MATERIALES
- Pletismometro
- Micropipetas
- Jeringas 1ml
- Tubos Eppendorf
- Bao maria
IV. PROCEDIMIENTO
B. Induccin de inflamacin
C. Medicin de la Inflamacin
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V. RESULTADOS
Haga los clculos para determinar el porcentaje de inflamacin hasta las dos horas
VI. CUESTIONARIO
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INMUNOAGLUTINACION N 7
OBJETIVO
1. INTRODUCCION
Los FR son generalmente de tipo IgM anti-IgG, es decir que reaccionan con las
fracciones Fc de las IgG. Tambin se han encontrado FR de tipo IgG, aunque en
menor proporcin de casos.
Los FR de tipo IgM estn presentes en el 85-90% de los adultos con artritis
reumatoidea aunque no es especfico de la enfermedad puesto que tambin se
han encontrado en individuos sanos (en un 3 a 5% de los casos).
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3. REACTIVOS Y MATERIALES
3.1. REACTIVOS
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BUFFER SALINO: Solucin salina fisiolgica (NaClO, 9%). Listo para usar.
CONTROL POSITIVO: Suero Humano prediluido y estabilizado
conteniendo RF que aglutina con el reactivo latex.
CONTROL NEGATIVO: Suero Humano prediluido y estabilizado, no
reactivo en el test de aglutinacin.
Solucion fisiolgica.
3.2. MATERIALES
Muestra de Sangre
Tubos Vacutainer Seco (Tapa roja)
Algodn
Etanol al 70%
Ligadura
Jeringas de 3 cc
Descartador de punzocortantes
Timer
Fuente de luz
Micropipetas Automticas de 20ul, 200ul a 1000ul.
Tips para micropipetas de 20ul, 200ul a 1000ul
01 placa de fondo oscuro con 3 o 6 reas de reaccin.
Varillas mezcladoras
4. METODOLOGIA
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5. DESARROLLO
Interpretacin:
6. CUESTIONARIO
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PRACTICA N 8
INMUNOPRECIPITACION
IDENTIFICACION SEROLOGICA DE SIFILIS, EMPLEANDO LA TECNICA RAPIDA DE
REAGENTES DE SIFILIS (RPR)
1. OBJETIVOS
2. INTRODUCCION
3. REACTIVOS Y MATERIALES
3.1. REACTIVOS
REACTIVOS PROVISTOS
B. Reactivos
Antigeno RPR Carbon, que contiene:
Cardiolipina 0.003%
Lecitina 0.022%
Colesterol 0.09%
Cloruro de Colina 10.0%
Carbon 0.02%
EDTA 0.0125M
Na2HPO4 0.01M
KH2PO4 0.01M
Control Positivo (Suero de origen humano, reactivo frente al
antigenoRPR Carbon)
Control Negativo (Mezcla de sueros de origen animal, no reactivos.
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3.2. MATERIALES
Muestra de Sangre
Tubos Vacutainer Seco (Tapa roja)
Algodn
Etanol al 70%
Ligadura
Jeringas de 3 cc
Descartador de punzocortantes
Timer
Fuente de luz
Micropipetas Automticas de 20ul, 200ul a 1000ul.
Tips para micropipetas de 20ul, 200ul a 1000ul
01 placa de fondo oscuro con 3 o 6 reas de reaccin.
Varillas mezcladoras
Tarjetas de reaccin
Gotero metlico para dispensar el Reactivo
Goteros plsticos descartables para dispensar y distribuir las muestras
4. METODOLOGIA
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6. LIMITACIONES DE LA TECNICA
7. CUESTIONARIO
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PRACTICA N 9
INMUNOCROMATOGRFIA
1. INTRODUCCION
2. INMUNOCROMATOGRAFIA
a. Primero: La muestra se pone en contacto con la zona del conjugado. Esta lleva
impregnada un conjugado formado por un anticuerpo especfico contra uno de los
eptopos del antgeno a detectar y un reactivo de deteccin. Si la muestra contiene
el antgeno a detectar, ste se unir al conjugado formando un complejo y
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c. Tercero: La zona control est formada por un tercer anticuerpo que reconoce al
reactivo de deteccin. Cuando el resto de muestra alcanza esta zona, el
anticuerpo se unir al conjugado libre que no ha quedado retenido en la zona de
captura. Esta lnea es un control de que el ensayo ha funcionado bien, porque se
colorea siempre, con muestras positivas y negativas.
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3. REACTIVOS Y MATERIALES
a. REACTIVOS
b. MATERIALES
4. METODOLOGIA
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5. RESULTADOS
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6. CUESTIONARIO
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PRACTICA N 10
ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA)
DETERMINACION DE ANTICUERPOS CONTRA PROTEINAS Y PEPTIDOS
CITRULINADOS
1. OBJETIVO
2. INTRODUCCION
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que los convierten de esta manera en residuos de citrulina (Fig.1). El suero de los
pacientes con AR posee frecuentemente anticuerpos que reconocen regiones
citrulinadas de la filagrina, as como de al menos dos protenas ms que presentan
este tipo de modificacin posttraduccional, como lo son la fibrina y la vimentina
citrulinadas. Interesantemente, existe evidencia de que los autoanticuerpos que
reconocen protenas citrulinadas no solo tienen un inters diagnstico, sino que
pueden jugar un papel patognico en modelos de artritis reumatoide
experimentales (Kuhn et al., 2006), a diferencia del factor reumatoide.
3. REACTIVOS Y MATERIALES
a. REACTIVOS
b. MATERIALES
Muestra de Sangre
Tubos Vacutainer Seco (Tapa roja)
Algodn
Etanol al 70%
Ligadura
Jeringas de 3 cc
Descartador de punzocortantes
Timer
Micropipetas Automticas de 20ul, 200ul a 1000ul.
Tips para micropipetas de 20ul, 200ul a 1000ul
Tubos Eppendorf de 1.5ml.
Papel Toalla.
4. METODOLOGIA
a. Recoleccin de la Muestra
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Depositar la muestra dentro del tubo seco (tapa roja) o con anticoagulante
(EDTA y/o Heparina) , centrifugar y separar el suero o plasma del paquete
globular.
5. DESARROLLO
b. INCUBACION DE LA MUESTRA
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f. SOLUCION STOP
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6. RESULTADOS
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7. CUESTIONARIO
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PRACTICA N12
1. OBJETIVO
2. INTRODUCCION
La IFI para Virus Resiratorios es una tcnica de tincin indirecta de anticuerpo fluorescente
para la identificacin de virus en cultivos de tejido infectado y en muestras preparadas de
de hisopados nasal y farngeo combinado. Consta de dos reactivos inmunolgicos, un
anticuerpo monoclonal antiviral de ratn sin conjugar que se aplica a clulas fijas y se une
al antgeno viral en cuestin, si est presente en el sustrato celular; luego se aade una
inmunoglobulina anti-ratn conjugada con fluorescena isotiocianato (FITC) y se observa
en microscopio de inmunofluorescencia a 570 nm. El uso de anticuerpos monoclonales
maximiza la especificidad. Una reaccin positiva es aquella en la cual se observa una
fluorescena brilante de color verde manzana y la clulas no infectadas se contratien con
azul de Evan.
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3. PRECAUCIONES DE BIOSEGURIDAD
4. EUIPOS Y MATERIALES
5. PROCEDIMIENTOS TECNICOS
Colocar sobre cada pocillo de la lmina una gota que cubra el pozo con la solucin
de trabajo del anticuerpo monoclonal especfico para el virus que se desea
detectar y el control negativo es el suero normal de ratn o adicionar PBS. Evitar la
contaminacin entre pozos continuos.
lncubar en cmara hmeda a 37C por 30 minutos. La cmara debe estar
suficientemente hmeda para evitar que los monoclonales se sequen en la lmina.
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Lavar la lmina con PBS pH 7.6, primero agregando en forma de chorro y luego
sumergir las lminas de 5 - 10 minutos en un couplin conteniendo PBS.
Eliminar el exceso de lquido. No dejar que los pocillos que contienen la muestra
se sequen, deben estar hmedos durante el proceso (no debe haber lquido entre
los pocillos).
Colocar una gota del conjugado anti-ratn lgG - FITC. El conjugado fluorescente no
debe exponerse a la luz durante periodos prolongados.
lncubar a 37C por 30 minutos en cmara hmeda.
Lavar la lmina con PBS pH 7.2, primero agregando en forma de chorro y luego
sumergir las lminas de 5 - 10 minutos en un couplin conteniendo PBS.
Eliminar el exceso de lquido y dejar secar al medio ambiente, proteger las lminas
de la luz . Agregar a la lmina la solucin de montaje.
Colocar la laminilla cubreobjetos evitando se formen burbujas de aire.
Leer al microscopio de luz UV (Epifluorescencia) con objetivo de 40X y ocular de
10 X longitud de emisin de onda 520 nm. La observacin de las lminas deber
realizarse inmediatamente despus de su montaje o guardar a -20C.
LECTURA E INTERPRETACION
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PRACTICA TALLER N 12
I. INTRODUCCIN
Cetuximab es el primer anticuerpo monoclonal aprobado para uso clnico que acta bloqueando lo
que se conoce como receptor del factor de crecimiento epidrmico (EGFR), una protena
expresada en la mayora de los cnceres colorrectales. Cuando est presente esta protena, se
produce un crecimiento mucho ms rpido del tumor y las perspectivas de supervivencia
disminuyen. Cetuximab bloquea el EGFR e inhibe el crecimiento anormal de las clulas cancerosas,
reduciendo adems el tamao de la metstasis.
II. OBJETIVOS
- Analizar la aplicacin de los anticuerpos monoclonales en el tratamiento del cncer
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radica en que la inhibicin especfica de un receptor determinado dar lugar a una eficacia
teraputica exenta de las toxicidades asociadas a muchos frmacos citotxicos empleados en la
actualidad. Los mecanismos conocidos de la sealizacin del EGFR sugieren que la combinacin de
algunos inhibidores especficos del EGFR con ciertos agentes citotxicos, o con radioterapia,
debera potenciar los efectos teraputicos de estas estrategias sin incrementar las reacciones
adversas, txicas y especficas de estos tratamientos.
Se han investigado diversas estrategias para la inhibicin del EGFR, que se dividen en dos
categoras principales:
Anticuerpos monoclonales orientados hacia el do-minio externo del receptor, como cetuximab.
Pequeas molculas inhibidoras de la tirosincinasa asociada al EGFR, como gefitinib.
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Definicin
Cetuximab es un anticuerpo monoclonal de la subclase IgG1 que acta sobre el EGFR humano y
consta de 4 cadenas polipeptdicas, 2 cadenas pesadas idnticas de 449 aminocidos cada una y 2
cadenas ligeras idnticas de 214 aminocidos cada una.
Las cadenas de anticuerpos contienen el dominio de unin funcional entre el anticuerpo murino y
el EGFR humano.
Las 4 cadenas se mantienen unidas a travs de una combinacin de enlaces covalentes y no
covalentes.
Mecanismo de accin
Cetuximab es un anticuerpo monoclonal IgG1 que se une especfica-mente al EGFR y tiene una
mayor afinidad que los ligandos naturales. Asimismo, inhibe competitivamente la unin a los
ligandos endgenos.
Los efectos biolgicos del bloqueo del EGFR los media la activacin reducida de la tirosincinasa, e
impactan en todas las funciones ce-lulares implicadas en el crecimiento y la metstasis tumoral,
como la proliferacin celular, la supervivencia celular, la reparacin del ADN, la angiogenia
tumoral, la motilidad celular y la invasin celular.
Cetuximab promueve la internalizacin del EGFR, lo que causa una regulacin por disminucin de
los receptores de la superficie celular y una reduccin de la sealizacin de los receptores. El
frmaco ejerce una citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.
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Eficacia clnica
Por lo general, cetuximab se tolera bien cuando se utiliza en asociacin con irinotecn, y no parece
agravar la toxicidad asociada a este ltimo principio activo cuando se utiliza en asociacin.
Las reacciones adversas ms comunes fueron erupcin cutnea acneiforme, astenia/malestar,
fiebre, nuseas, estreimiento, diarrea y dolor abdominal, reaccin a la infusin, cefalea, vmitos
y anorexia.
IV. CUESTIONARIO
1. Describir la estructura del receptor Del factor de crecimiento epidrmal EGFR y las vas de
traduccin de seales activadas por este receptor.
2. Cules son los principales mecanismos que aumentan la activacin del receptor EGFR?.
3. Explicar los distintos mtodos de inhibicin del receptor EGFR
4. Describir la estructura molecular del Cetuximab
5. Definir qu es un anticuerpo quimrico y uno humanizado?
6. Explicar el mecanismo de accin del Cetuximab
7. Cules son las principales ventajas del tratamiento antitumoral con anticuerpos monoclonales
respecto a otros tratamientos?
8. Por qu mejora la eficacia clnica Cetuximab cuando se aplica con l irinotecn
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ANEXOS
PRINCIPIOS GENERALES
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SANGRE COAGULADA
SANGRE ANTICOAGULADA
MATERIALES
MTODO DE OBTENCIN
Si el paciente se encuentra en el
laboratorio, hacer que se siente.
Poner el brazo del paciente sobre la
mesa de trabajo apoyndolo en un
pequeo cojn bajo el codo, con la
palma de la mano hacia arriba.
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USO DE LA JERINGA
APLICAR LA LIGADURA
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forme un hematoma.
Llenar los frascos o tubos rotulados con la muestra de sangre. Si estos recipientes
contienen anticoagulante, mover varias veces con suavidad y uniformidad el
recipiente. No agitar el contenido.
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