Prueba de Aptitud para Ensayos de Esterilidad
Prueba de Aptitud para Ensayos de Esterilidad
Prueba de Aptitud para Ensayos de Esterilidad
1. OBJETIVO
2. ALCANCE
3. RESPONSABILIDADES
5. METODOLOGA DE VALIDACIN
6. CONCLUSIONES
7. RECOMENDACIONES
1. OBJETIVO:
Demostrar mediante evidencia documentada que la metodologa para evaluar la esterilidad de
los geles y ungentos, est totalmente bajo control y proporciona de forma consistente y
reproducible resultados que cumplen las especificaciones establecidas.
2. ALCANCE:
Este protocolo se utilizar para la validacin de pruebas de aptitud para ensayos de esterilidad
en geles oftlmicos, as tambin en ungentos oftlmicos
3. RESPONSABILIDAD:
4.1. Equipos
FECHA
NOMBRE MARCA CDIGO
CALIBRACIN
Cabina de bioseguridad
Balanza de precisin
Estufa de Incubacin 30-35C
Autoclave
Refrigeradora de 2-8C
Espectrofotmetro
FECHA
NOMBRE MARCA CDIGO
CALIBRACIN
Frascos x 100 mL con tapa
Frasco x 250 Ml con tapa
Pipeteador variable (1-10mL)
Placa Petri descartable 90x15mm
FECHA
NOMBRE MARCA LOTE
VENCIMIENTO
Clostridium sporogenes ATCC 19404
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Bacillus subtilis ATCC 6633
Aspergillus brasiliensis ATCC 16404
Candida albicans ATCC 10231
FECHA
NOMBRE MARCA LOTE
VENCIMIENTO
Agar CASO
Agar Sabouraud
Polisorbato 80
5. METODOLOGA DE VALIDACIN:
5.2. Referencias:
5.3.2.Cultivar las bacterias aerobias en Agar CASO, e incubar de 30-35C x 18-24 horas.
5.3.3.Cultivar Clostridium sporogenes, en condiciones anaerbicas en Agar CASO a una
temperatura de 30-35 C durante un perodo de 24 a 48 horas.
5.3.4.Cultivar C. albicans y A. brasiliensis en Agar Sabouraud Dextroxa a una temperatura de
20-25C durante un periodo de 2-3 das para C. albicans, y 5-7 das para A. niger.
5.3.5.Para cosechar los cultivos bacterianos y de C. albicans, emplear solucin salina SR
estril, lavar la superficie de crecimiento y recogerlo en un recipiente adecuado. Para
cosechar las esporas de A. brasiliensis, usar solucin salina SR estril que contenga
0,05% de polisorbato 80. Utilizar las suspensiones dentro de las 2 horas o dentro de las
24 horas si se almacenan a una temperatura entre 2C y 8C.
5.3.6.Para obtener un inculo de aproximadamente 100 ufc, diluya la suspensin microbiana
con solucin salina hasta obtener una transmitancia de aproximadamente 30% a una
longitud de onda de 580nm. Obtenida esta transmitancia realice diluciones seriadas
agragando 1 mL de inoculo en 9 mL de solucin salina, repetir hasta obtener 10 -5 de la
solucin original. A cada medio inocular 100 uL de la solucin 10 -5, as obtendr
aproximadamente 100 ufc.
5.3.7.Verificar la carga microbiana inoculando 100 uL de la dilucin 10 -5 del microorganismo
evaluado en 2 placas estriles, luego agregar de 15-20 mL de medio licuados
previamente y mantenidos a 45 C. Para bacterias usa Agar CASO, y para hongos y
levaduras usar Agar Sabouraud. Incubar por el tiempo y temperatura segn lo indicado
en los puntos 5.3.2 al 5.3.4
5.4.8.Interpretacin de resultados:
5.4.9.Criterio de aceptacin:
5.4.9.1. Recuperacin de los microorganismos inoculados en presencia de producto,
manifestada por la turbidez
5.4.9.2. Ausencia de crecimiento en los controles negativos
5.4.9.3. Presencia de crecimiento en los controles positivos