Validación Procesos Térmicos-Calor Seco PDF

Validacin del proceso de
esterilizacin y despirogenacin
por calor seco

Esterilizacin y despirogenacin
por calor seco
Utilizacin
Se utiliza para productos termoestables en los que
no se puede utilizar la esterilizacin por calor
hmedo.
Es ampliamente usado para materiales de vidrio,
como ampollas, viales, matraces, frascos etc. y
materiales de acero inoxidable, depsitos de
almacenamiento o recogida de lquidos
esterilizados por filtracin.
La despirogenacin se obtiene con el calor seco y
no con el calor hmedo.
Diferencias entre calor seco y
calor hmedo
La causa de la mortalidad bacteriana en el calor
seco es distinta a la del calor hmedo. La muerte
por calor hmedo es el resultado de la
coagulacin de la protena celular, mientras que el
calor seco la causa de la muerte es
fundamentalmente por un proceso de oxidacin de
los componentes de las clulas.
Es un hecho conocido que el contenido en agua
de la clula microbiana influencia su resistencia a
la destruccin por calor seco.

Debido a que el calor seco es menos eficaz que el
calor hmedo, se requieren temperaturas y
tiempos de exposicin ms altos.
El modo de actuacin letal del calor hmedo
requiere una temperatura mucho mas baja pues la
capacidad trmica del vapor es mucho mayor que
la del aire caliente.
Cuando el vapor saturado se deposita sobre un
objeto frio y se condensa libera aproximadamente
500 veces la cantidad de energa calorfica liberada
por un peso igual de aire caliente por lo que el
objeto se calentar de forma ms rpida con el
vapor.
Diferencias entre calor seco y
calor hmedo
Definicin de esterilidad
Segn la definicin ms estricta de esterilidad,
una muestra se considera estril solamente
cuando en ella hay ausencia total de
microorganismos viables. La esterilidad absoluta
no se puede demostrar en forma prctica sin
causar la destruccin completa de cada artculo
terminado. La esterilidad de un lote que se
presenta como estril se define por lo tanto en
trminos probabilsticos, en donde la probabilidad
de que una unidad o artculo este contaminado es
remota.
En un proceso de esterilizacin, la naturaleza de la
muerte o la reduccin microbiolgica es descrito
por una funcin exponencial. Por lo tanto, el
nmero de microorganismos que sobreviven a un
proceso de esterilizacin se puede expresar en
trminos de probabilidad. Mientras que la
probabilidad puede reducirse a un nmero muy
bajo, pero no se puede reducirse a cero.

El nivel de inactivacin microbiana puede ser
descrita como una funcin exponencial nivel de
aseguramiento de la esterilidad o SAL.
En trminos probabilsticos se debe alcanzar un
SAL de 10
-6
para alcanzar la esterilidad, esto
quiere decir que la probabilidad de que un
microorganismo viable esta presente en un
producto/material esterilizado es uno en un milln
despus de que el producto/material ha sufrido un
ciclo de esterilizacin
Solo Esterilizacin
El ciclo est concebido para asegurar que la
probabilidad de supervivencia de la microflora
nativa no sea superior a una en un milln de
unidades (10
-6
probabilidad de no esterilidad)
Esterilizacin por calor seco, requisito terico:
170 C, 60 min. (F
H
)
Esterilizacin por calor hmedo, requisito
terico: 121 C, 12 min.(F
0
)

Esterilizacin - Overkill
El enfoque Overkill ofrece garantas de
esterilizacin muy por encima de la probabilidad
de no esterilidad de 10
-6
.
Por ejemplo, un F
H
proporcionada por un ciclo
overkill puede producir una reduccin de 12 log de
un indicador biolgico que presenta una alta
resistencia al calor seco (Bacillus subtillis).

Esterilizacin & Despirogenado
Se aplica a los ciclos en que el objetivo es tanto
la esterilizacin y la despirogenacin. Siempre que
el despirogenado sea el punto final deseado, las
temperaturas relativamente altas y / o los tiempos
de calentamiento prolongado son necesarios. Por
lo tanto, la letalidad microbiana emitido por estos
ciclos proporciona un margen de seguridad muy
por encima de una probabilidad de no esterilidad
de 10
-6
.
Exigencia terica de despirogenado por calor
seco : 250 C x 30 min.

Esterilizacin por calor seco-
Cintica
Bien definidos
cintica de
inactivacin 1 orden.
Z = 20 C.
F
H
a 170 C.
Matar 10
6
esporas de
Bacillus Subtillis.

Valor - D
Valor - D: Tiempo requerido para la reduccin de un logaritmo (o
90%) de la poblacin de microorganismos en la temperatura de
base. Por lo tanto un tiempo de 3D dar una reduccin de tres
logaritmos. Mide la rapidez con la que un microorganismo muere.

Valor-Z:
El incremento de la temperatura necesaria para
cambiar el valor D en un logaritmo.

En general, para esterilizacin por calor seco,
valor de Z se puede suponer 20 C.
Sin embargo, ser adecuado para verificar los
indicadores biolgicos cuando se utilizan para
medir la letalidad integrada de un calor seco o
ciclo de esterilizacin por vapor.

Determinacin del Valor - Z :
Determinar el valor - D de un organismo en min. a tres
temperaturas diferentes.
Construir una curva de la muerte trmica trazando el
logaritmo del valor D - temperatura.

Valor de Z: Tasa de mortalidad
constante
Tasa de letalidad
Tambin se define como:
F
H
para esterilizacin por calor seco
F
0
para el caso de la esterilizacin a vapor
El tiempo de esterilizacin equivalente pas a la
temperatura de base.
TB: 170 C (para la esterilizacin por calor seco)
TB: 121 C (caso de la esterilizacin de vapor)

Clculo de Letalidad
" Mtodo Patashnik "
Clculo de F
H
para 170 C (esterilizacin)
Tasa de Letalidad: 10
(T-Tb)/Z

F
H
= Dt x Tasa de letalidad
F
H
= t 10
(T170)/20

Dt: Tiempo de ciclo
T: temperatura del ciclo,
TB: temperatura Base
Z: Constante de Mortalidad Microbiana

CALCULO DE LA LETALIDAD
Ejemplo:
Determinacin del F
H
de 3 min. de un ciclo de
esterilizacin por calor seco a 175 C
t = 3 min
T = 175
0
C F
H
= 4 x 10
(175-170)/20
Tb = 170 C F
H
= 5.31
z = 20 C
Esterilizacin a 175 C por 3 min. Es equivalente
a 5.31 min. a 170 C .
La letalidad en la esterilizacin
por calor seco
de tasas letales:
10.1912
F
H
= t x de la
letalidad

t = 5 min.
F
H
= 5 x 10.192
F
H
= 50.961 min. a
170 C .
Definicin
El proceso de despirogenacin se define
como la eliminacin de todas las
sustancias pirognicas incluyendo las
endotoxinas bacterianas, y se logra
generalmente por separacin o
inactivacin.
Despirogenacin
Despirogenado:

El proceso validado diseado para eliminar o
inactivar la endotoxina (ANSI / AAMI ST72: 2002).

"La eliminacin de todas las sustancias pirgenas,
incluyendo las endotoxinas bacterianas, y se logra
generalmente mediante la eliminacin o
inactivacin"
(Grupo de usuarios de PDA LAL, 1989)

Despirogenacin
Despirogenado:
Se demuestra por una mnima reduccin de tres
ciclos logartmicos de un mnimo de 1000 UE de la
cantidad original (materiales de vidrio o envases).
(USP <1211> Sterilization and Sterility
Assurance y FDA Aseptic Processing
Guidelines 2004)
Despirogenacin
Despirogenacin por calor seco
-Generalmente en el rango > 200-300 C de
temperatura.
-Las temperaturas superiores a 180 C pueden destruir
efectivamente la endotoxina. Por debajo de 180 C, el
despirogenado puede ser incompleto, incluso despus
de perodos prolongados.
El "rgimen clsico" de 250 C durante 30 min. ofrece
un alto nivel de fiabilidad de al menos tres reducciones
logartmicas. Este rgimen tambin tiene la ventaja de
los precedentes, habiendo sido ampliamente utilizado
en la industria durante muchos aos.

Despirogenacin
Pirgenos: cualquier sustancia que induce una
fiebre.
exotoxina: protena soluble secretada por los
microorganismos que es txica para las clulas
(toxina del botulismo, la difteria, el sndrome de
shock txico, etc.)
Enterotoxina: protena soluble secretada por
los microorganismos en el envenenamiento de
intestino (alimentacin).
Endotoxina: son lipopolisacridos (LPS) que se
localizan exclusivamente en la membrana
externa de las bacterias gramnegativas y poseen
una alta potencia que se conserva aun despus
de la muerte de la bacteria.

Pirgenos y Endotoxinas
Endotoxina:
Umbral de respuesta pirgenas de 1 ng / kg ,
donde 5 UE es equivalente a 1 ng de E. coli (EC-2)
de endotoxina de referencia.
Complejo de la respuesta del husped (citoquinas
inflamatorias) puede dar lugar a fiebre alta, dao
tisular severo y la muerte.

Las endotoxinas son muy estables al calor a
diferencia de las exotoxinas que son muy
termolbiles, por lo que solo se considerara a las
endotoxinas en los procesos de validacin.
Ambas se liberan durante la muerte y lisis de las
bacterias Gram + (exotoxinas) y Gram
(endotoxinas)
El mtodo de deteccin y cuantificacin de
endotoxinas bacterianas es realizado por el
ensayo de LAL (lisado de amebocitos de lmulo)
El cual usa un extracto acuoso de las clulas de la
hemolinfa del cangrejo de herradura , limulus
polyphemus. El LAL coagula en presencia de
endotoxinas. El mecanismo implicado es una
reaccin enzimtica entre una protena coagulable
contenida en los amebocitos y la endotoxina.
Para la mayora de
productos farmacuticos el
lmite de endotoxina
generalmente aceptados
vara con la va de
administracin:
- 5 EU / kg / h - por va
intravenosa;
- 0,2 EU / kg / h - intratecal.
Consultar farmacopeas y
aplicabler las directrices
reguladoras.
Despirogenado por calor seco -
Cintica
La validacin del despirogenado es generalmente
aceptado como prueba de la validacin con xito
de la esterilizacin por calor seco debido a la
resistencia mucho mayor de endotoxina al calor
seco en comparacin con las esporas bacterianas.

* Tiempo de exposicin real puede variar con la carga y las
condiciones.

Esterilizacin tiempo-
temperatura
140C (285F) 3 horas.
150C (300F) 2,5 horas.
160C (320F) 2 horas (Ph.Eur).
170C (340F) 1 hora.
180C (356F) 30 minutos
> 220C (428F) (Ph. Eur)
250C (482F) (U.S.P); 30 minutos (The
Pharmaceutical Codex)
Cintica
La cintica de inactivacin de las endotoxinas son
de 2 orden en lugar de primer orden
(esterilizacin).
- Tsuji, K. y Harrison, S.J. 1978. Appl. Environ. Microbio.
36 (5) :710-714.
- Akers. M.J. et al. 1982. JPDA 36 (1) :23-27.

Validacin emprica - de tres reducciones
logartmicas de endotoxina es generalmente
aceptado como evidencia de un exitoso
despirogenado y esterilizacin.
Los indicadores biolgicos (B. atrophaeus)
normalmente no son empleados.

Equipos
Transferencia de calor:
Conductiva:
- La transferencia de calor a travs del contacto fsico
directo.
Conveccin o radiacin:
- Transferencia de calor a travs de un fluido (lquido o
gas).
- El flujo de aire / efectos de sombreado / filtracin
HEPA.
Radiacin:
- La transferencia de calor a travs de la radiacin
electromagntica (infrarrojos o microondas).

Despirogenado por calor seco-
Equipos
Esterilizador por lotes:
Ampliamente utilizado
en la industria.
Simple, diseo
reforzado.
Utiliza ventiladores para
circular aire caliente en
toda la carga.
Ideal para diferentes
tipos de carga, cargas
pequeas, y poco uso
frecuente.

PDA Technical Monograph #3
- equipos
Tnel :
Funciona de forma continua.
Ideal para las dimensiones de carga de gran tamao.
Tiempo de procesamiento rpido.
Por conveccin, infrarrojos.
Zonas de calefaccin variable.
Flujo de aire contrario al flujo del producto.

PDA Technical Monograph #3
- equipos
- equipos
Despirogenado por calor seco
Consideraciones de la instalacin
Integracin / Flujo del proceso - Cmo es la
integracin del horno de despirogenado con otros
equipos, tales como lavadoras de vial, llenadoras
y taponadoras, equipos de embalaje, etc, para ser
realizado de tal manera que el procesamiento
puede lograrse sin interrupciones?

El rendimiento total del proceso est vinculado a
paso limitante. seleccionar el Horno y validar el
tiempo de ciclo de despirogenado adecuada para
la fabricacin global de proceso.
Capacidad - El horno tiene capacidad suficiente
para satisfacer las necesidades de procesamiento
actuales y futuros?
Clasificacin - Es la clasificacin de la estufa
compatible con la clasificacin de la zona donde
se encuentra y el proceso de fabricacin en
general? La mayora de los hornos de
despirogenado estn clasificados como clase 100
y por lo tanto debe ser adecuado para su
aplicacin en instalaciones de fabricacin
asptica.

HVAC / Utilidades - Son los actuales controles
de climatizacin y servicios pblicos (electricidad,
agua, aire) suficientes para satisfacer las
necesidades del horno de despirogenado?
Cunto ms se har hincapi en el sistema de
climatizacin existentes y el suministro de
servicios pblicos y qu impacto tendr esto
sobre el funcionamiento de otros equipos?
Instalacin - son las dimensiones del horno de tal
manera que pueden ser transportadas e instaladas
en el lugar deseado o podra modificar las
instalaciones existentes y el diseo de ser
necesario?

Consideraciones del equipo
Balanceo de presiones- Es el flujo de aire del
horno de modo que el balanceo de la presin
adecuada se puede mantener de manera que se
mueve progresivamente producto a zonas
"limpias" y la clasificacin de las zonas
alrededores no se vea impactada?
Vas de aire - Existen disposiciones para la
esterilizacin de las vas de aire dentro del horno,
en particular la zona de enfriamiento? Cmo es la
calidad del aire de la zona que se mantenga
durante la reparacin y el mantenimiento del
horno?

Materiales de construccin - SS 304L tpico con el
indicador y el acabado adecuado para la
aplicacin y las condiciones de carga.
Dispositivos de bloqueo de puertas - de acuerdo
a el flujo de productos con una secuencia de
bloqueo de seguridad en caso de prdida de
energa (evitar que el producto salga de la cmara
sin ser adecuadamente despirogenado).

Alarmas - Baja / Alta temperatura, flujo de aire,
velocidad de la cinta, parada de emergencia, etc.
Contaminacin - es el horno una fuente potencial
de partculas (material ligante de filtro, el material
desprendido de las partes mviles, etc) o de
contaminantes qumicos (lubricantes) durante la
operacin de rutina? Es el uso de la DOP una
preocupacin durante la validacin de los filtros
HEPA?
Caso de estudio
Gruenberg L55H8.3PTSS:

Cmara interior:
20 x 30 x 24 (8.3 ft
3
/ 0.2 m
3
).
Cmara exterior:
68 x 44 x 70.
Flujo horizontal clase 100 HEPA aire
filtrado.
Intercambiador de calor (agua fra)
para enfriar.

Gruenberg L55H8.3PTSS:

Rango de temperatura:
- Max. 280 C.
- 250 C funcionamiento.

Control de temperatura:
- 0,25% de la escala a 250 C.

Uniformidad de temperatura:
- /+ 5 C a 250 C.

Caso de estudio
Validacin
PDA TR 3 1981 Dry Heat Processes for sterilization
and depyrogenation.
USP <1211> Sterilization and Sterility Assurance.
EMEA: Decision Trees for sterilization.
ISO 14937 General requirements for sterilization.
PDA TR 7 Depyrogenation.
FDA Aseptic Processing Guidelines 2004.
Normatividad & guias
Documentacin:
Plan Maestro de Validacin(PMV).
Especificacin de Requisitos de usuario (URS).
Solicitud de Cotizacin (RFQ).
Propuesta de proveedores (incluidos los
dibujos).
Funcional / especificaciones de diseo.
Prueba de aceptacin en fbrica (FAT).
Prueba de aceptacin en sitio (SAT).
Documentacin de Validacin (IQ / OQ / PQ).

Validacin
Estrategia General de la Validacin :
Prueba de aceptacin de fbrica (FAT).
Prueba de aceptacin de sitio (SAT).
Calificacin de Instalacin (IQ).
Calificacin Operacional (OQ) - 3 ciclos.
Ciclo de desarrollo / Estudios de Penetracin de
calor (HP).
Reduccin del ciclo de prueba - 1 ciclo.
Pruebas de calificacin de desempeo(PQ) - 3
ciclos.
Revalidacin anual
Validacin
FAT
Prueba de aceptacin en fbrica (FAT):
Verificar las dimensiones fsicas de la unidad.
Verificar que el equipo funciona correctamente.
Verificar los puertos de acceso para las pruebas
de integridad de filtros HEPA.
Conducir el ensayo de Distribucin de calor
(cmara vaca).
Verificar el diferencial de presin adecuada a
travs de filtros HEPA.
Capacitacin del personal en el funcionamiento
de la unidad.

IQ
Calificacin de la instalacin (IQ):
"obtener y documentar pruebas de que el equipo
ha sido suministrado e instalado de acuerdo con
sus especificaciones." ISO 14937:2002.
Disponemos de todas las partes?
La unidad se ajusta en el espacio asignado?
Disponemos de los servicios necesarios?
Est la unidad a la especificacin?

IQ
Posicionamiento de
la unidad.
Nivelacin / anclaje.
Pantallas y paneles.
Sellos y juntas.
Aislamiento.
Servicios pblicos
(aire, agua,
electricidad, etc.)

Canalizacin y
fontanera.
Instalacin de filtro
HEPA y la certificacin.
Medio Ambiente y la
inspeccin de
seguridad.
Manuales y dibujos.
Lista de repuestos.
Confirme la instalacin fsica de las especificaciones:
IQ
Instrumentacin:
Control de
temperatura.
registrador grfico.
Alarma de lmite alto.
Presin de admisin.
Presin de escape.
Presin de
recirculacin.
Presin de la Cmara.

Equipo de calibracin:
Tacmetro
Calibrador de
Temperatura
Bao de termopar
Registrador de datos
Calibrador de presin
Anemmetro trmico
Contador de partculas
Verificar la calibracin:
IQ
Nota: Los filtros HEPA son frgiles y no se
entregar instalado en la unidad. Nuevos filtros se
deben instalar una vez que la unidad ha sido
recibido y quemados" en la temperatura mxima
de funcionamiento segn la recomendacin del
fabricante. Esto puede crear un olor y humo en el
aire. Haga esto durante el fin de semana para
minimizar las molestias a los dems.

OQ
Calificacin de operacin (OQ):
"El proceso de obtener y documentar pruebas de
que el equipo instalado funciona dentro de lmites
predeterminados cuando se usa de conformidad
con sus procedimientos operativos." ISO 14937:
2000.
La unidad funciona como se prometi?
Vamos a dar por una prueba de manejo ...

OQ
Comprobar la estructura operativa :

Verificar el controlador de velocidad establecido
segn manual.
Verificar el controlador de temperatura establecido
segn manual.
Verificar la direccin correcta del sentido de giro del
ventilador.
Compruebe las rpm correctos del ventilador
(tacmetro).
Compruebe las alarmas, los indicadores, los
dispositivos de seguridad, etc
OQ
Ensayo en cmara vaca:
Colocar 12 TC /a 8 cm
de la superficie de la
cmara como se indica.
Horno a 250 C.
20 min. de
estabilizacin.
Verificar la estabilidad
de temperatura :250 C
15 C (USP <1211>) en un
perodo de 60 minutos.
OQ
Equipos para validacin
OQ
Dispositivos de ingreso de termopares
OQ
OQ
Dispositivos de ingreso de termopares
S:1 Ch1:CH 1
S:1 Ch2:CH 2
S:1 Ch3:CH 3
S:1 Ch4:CH 4
S:1 Ch5:CH 5
S:1 Ch6:CH 6
S:1 Ch7:CH 7
S:1 Ch8:CH 8
S:1 Ch9:CH 9
S:1 Ch10:CH 10
S:1 Ch11:CH 11
S:1 Ch12:CH 12
Scanner 1
Time
14:39:12 14:49:22 15:00:23 15:11:33 15:22:33 15:33:43 15:44:44 15:55:44 16:06:54 16:17:54 16:29:04
T
e
m
p
e
r
a
t
u
r
e
280
270
260
250
240
230
220
210
200
190
180
170
160
150
140
130
120
110
OQ
Ensayo en cmara vaca:
OQ
Velocidad y volumen del aire :

Pruebas realizadas a temperatura ambiente.
Flujo de aire medido con anemmetro trmico.
Flujo de aire medido en el conducto de inyeccin y
escape durante la fase de enfriamiento.
Flujo de aire de circulacin medido cada 15 cm
2

aprox. a 15 cm. de la cara de los filtros HEPA .
Rendimiento segn especificaciones del fabricante.
50 pies por minuto (FPM) de la velocidad media

CFM = Velocidad(pie/min) x rea media (pie
2
)
OQ
Recuentos de partculas:
Limpieza del Horno con API y un pao limpio
libre de pelusas.
Comunicar el contador de partculas (se ubica en
la parte externa) con la cmara a travs del
agujero de ingreso de TC, introduciendo la sonda
de muestreo. Colocar la sonda de muestreo en el
centro de cada filtro HEPA. Realizar las lecturas
cada 10 minutos por tres veces. La clasificacin
debe ser Clase 100.
Desempeo de conformidad con las
especificaciones del fabricante y la aplicacin
prevista.
Prueba de integridad de filtros HEPA
No debe detectarse fugas superiores a 0,01 %
(ISO 14644-3: 2005)
Las zonas obturadas no deben exceder el 5 % de
la superficie expuesta del filtro y la obturacin no
debe ser mayor a 3,8 cm por lado (NEBB 1996)

OQ
Ingreso de aerosol de
prueba (P.A.O.)
Toma del
100 % [
] aerosol
(P.A.O.)
II
I
III
Filtros HEPA de alta
temperatura (4)
IV
Rejillas de
extraccin de aire
OQ
Prueba de integridad de filtros HEPA
OQ
Diferencial de presin de la cmara :

Medir el diferencial de presin de la cmara
durante el ciclo a travs del puerto sanitario.
Ciclo de temperatura establecidos en
condiciones de ambiente para evitar lesiones.
Presin diferencial > 0,03 "C.A. con respecto a la
atmsfera segn las especificaciones del
fabricante.

Manmetro

Etapa
INTAKE
(Ingreso de aire)
Inch W.G.
CHAMBER
(cmara)
Inch W.G.
RECIRCULATION
(recirculacin)
Inch W.G.
EXHAUST
(extraccin)
Inch W.G.
Calentamiento 0,2 0,35 1,6 0,3
Despirogenado 0,15 0,35 1,6 a 1,7 0,35
Enfriamiento 0,5 1,0 1,6 a 1,8 0,95
Diferencial de presin:

OQ
OQ
Confirme la documentacin:
Verificar el xito IQ / OQ con
el informe firmado.
Verificar procedimientos
normalizados de trabajo
aprobados para el
funcionamiento y la limpieza.
Compruebe el mantenimiento
y el programa de calibracin.
Verifique las piezas de
repuesto entrado en el sistema
de instalacin.
Reunir toda la
documentacin relacionada
con proveedores.

HP
Ciclo de Desarrollo y Estudios de Penetracin de
Calor (HP):
Preparar modelo de carga mxima.
Calcular los parmetros del ciclo de las condiciones
del proceso y la aplicacin deseada.
Considere la posibilidad de la masa de cada
elemento, la complejidad, cavidades, la composicin,
densidad, etc.
Coloque Termopares en la cmara y dentro de la
carga para determinar zonas de lento calentamiento
dentro de los productos que se procesan. Termopares
a ser introducidos en las zonas de lento calentamiento
durante las pruebas de PQ posteriores.

HP
HP
Desafo de endotoxinas
Indicadores de endotoxinas:

> 1000 UE (ejemplo: 2000 UE, 10 000 UE)
La inoculacin directa de producto, pero puede
presentar problemas de recuperacin.
Por lo general preparado en 5 -10 frascos de
vidrio selladas situadas dentro de la carga en los
puntos fros.
Los controles positivos y negativos.
Indicadores de endotoxinas(recomendado):
Viales de liofilizado de endotoxina de una
concentracin apropiada se puede utilizar
directamente como artculos de desafo.
Puede ser utilizados directamente como artculos
reto, siempre que se quitan los tapones y
etiquetas. Esta es una forma conveniente de
realizar estudios de despirogenado y evita el
problema de la deficiente recuperacin de
endotoxina.

Indicadores de endotoxinas:
Ciclo reducido
Realizar al menos un ciclo en condiciones de ciclo
reducido (punto de control del ciclo reducido en
un 10 C y tiempo de exposicin reducido en 10
minutos) con una carga mxima. Con termopares y
los indicadores de endotoxina reto para demostrar
la solidez del proceso ( "las peores condiciones
de") y cabida a las variaciones del proceso y la
variabilidad potencial en la interpretacin de los
parmetros del proceso.

Calificacin de desempeo (PQ)
Colocar 12 TC en " la
posicin peor de los casos"
dentro de la carga
determinada para los
estudios de HP. Coloque una
TC en la sonda de control del
equipo, una TC en el centro
de la cmara.
Colocar los viales de
endotoxinas de desafio
adyacentes a las TC en la
carga.
Proceso de 3 ciclos.
200.0
210.0
220.0
230.0
240.0
250.0
260.0
270.0
280.0
T
E
M
P
E
R
A
T
U
R
A

(
C
)

DISTRIBUCIN DE CALOR CON CARGA (VIALES)
HORNO
T.C1
T.C2
T.C3
T.C4
T.C5
T.C6
T.C7
T.C8
T.C9
T.C10
T.C11
T.C12
Calificacin de desempeo (PQ)
PQ
Clculo F
endo
a 250 C:
t (T Tb)/Z
F
H
= 0 10 dt =Min equivalentes
F
endo.
= t 10
(T250)/54
donde:
t = tiempo al final de cada periodo.
T = temperatura (actual temperatura).
Tb = temperatura base (250 C).
Z = Valor-Z de la endotoxina (54 C). Para
endotoxinas de E. coli
Tsuji and Harrison. 1978. Appl. Environ. Mbio. 36(5): 710-713.
Akers et. Al.1982. J. Parent. Sci. Technol. 36(1):23-27.
PQ
Calcular el valor de la reduccin logartmica (VRL)
de la endotoxina:

VRL endotoxina = log (A) log (B)
donde: A = positive control
B = muestra de prueba

VRL endotoxina = log (2200 EU/vial) log (0.01
EU/vial)
= 3.34 EU ( 2 EU)
= 5.34 EU
Diluciones
Indicadores de endotoxinas
Vial 1 Vial 2 Vial 3 Vial 4 Vial 5 Vial 6 Vial 7 Vial 8 Vial 9 Vial 10 Control
Sin diluir - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + +
1:2 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + +
1:4 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + +
1:8 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Concentracin final de endotoxinas por vial
Conc.UE/m
L
< 0,06 < 0,06 < 0,06 < 0,06 < 0,06 < 0,06 < 0,06 < 0,06 < 0,06 < 0,06 2 400
Reduccin
logartmica
mnima
4,6 4,6 4,6 4,6 4,6 4,6 4,6 4,6 4,6 4,6 -
PQ
Mtodo Gel-clot

VRL endotoxina = log (2400 EU/vial) log (0,06 EU/vial)
= 3,38 EU ( 1,22 EU)
=4,6 EU
PQ
Mtodo Turbidimtrico

PQ
PQ Criterios de aceptacin:
Todas las TC estn dentro de 15 C del punto
de consigna (250 C ) durante el periodo de
retencin.
La sonda de control est dentro de 5 C de la
TC adyacente al punto medio del periodo de
retencin.
F
endo

(250 C)
acumula valores 30 minutos.
Todas las endotoxinas de desafo exhiben 3
reducciones logartmicas.
Controles de endotoxina positivo 1000 UE.
Controles de endotoxina negativos indican que
no hay contaminacin por endotoxinas residual.

Despirogenado por Calor seco -
Hecho!
Todas las fases de validacin exitosamente
completado y el informe final firmado.
Revisar el proceso de validacin global y las
desviaciones para determinar cmo el proceso se
podra controlar mejor en el futuro:
- Cuidadosamente escribir protocolos y criterios de
aceptacin, tratar de anticiparse a los problemas o
cuestiones con antelacin.
- Coordinacin con otras actividades en curso para
garantizar que los recursos necesarios estarn
disponibles cuando sea necesario.
- Coordinacin con los proveedores.

Despirogenado por Calor seco -
Hecho!
Asignar tiempo
extra para su
validacin. Siempre
toma ms tiempo de
lo que piensa, en
particular con una
instalacin de
nuevo!

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