Tesis Silvia
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FACULTAD DE FARMACIA
TESIS DOCTORAL
SILVIA PASTORIZA DE LA CUEVA
2013
Editor: Editorial de la Universidad de Granada
Autor: Silvia Pastoriza de la Cueva
D.L.: GR 1894-2013
ISBN: 978-84-9028-586-2
JOS NGEL RUFIN HENARES, Profesor Titular del Departamento de
Nutricin y Bromatologa de la Universidad de Granada.
Una de ellas dijo en voz alta: No puedo ms. Es imposible salir de aqu.
En esta materia no se puede nadar. Ya que voy a morir, no veo por qu
prolongar este sufrimiento. No entiendo qu sentido tiene morir agotada
por un esfuerzo estril. Dicho esto, dej de patalear y se hundi con
rapidez, siendo literalmente tragada por el espeso lquido blanco.
(Jorge Bucay)
A
JOS NGEL
Sin ti
este sueo
no se hubiera hecho realidad
GRACIAS
A
PABLO
y
ADRIANA
Hacis de
mi realidad
un sueo
GRACIAS
AGRADECIMIENTOS
En primer lugar quiero dar las gracias al Dr. Jos ngel Rufin Henares,
mi director de tesis y compaero de viaje por querer compartir
conmigo no solo su Proyecto de Investigacin sino tambin su Proyecto
de Vida. GRACIAS.
En segundo lugar quiero dar las gracias a todas las personas que forman
parte del departamento de Nutricin y Bromatologa de la Facultad de
Farmacia de la Universidad de Granada. Todos y cada uno de vosotros
me habis aportado algo durante mi estancia en el departamento.
Por ltimo, quiero dar las gracias al Dr. kos Vgvri por permitirme
realizar una estancia predoctoral en los laboratorios del Biomedical
Center (Universidad de Lund, Suecia) durante los meses de verano de
2012 y al Dr. Simon K Jackson (Universidad de Plymouth, UK) por la
supervisin de los resultados inmunolgicos obtenidos para la
realizacin de la presente tesis doctoral.
NDICE GENERAL
CAPTULO 1. RESUMEN 1
CAPTULO 2. INTRODUCCIN 3
2.1.2. CARAMELIZACIN 4
i
B. Efectos positivos 33
2.2.1. INTESTINO 48
ii
2.2.2.3. Enfermedad de Crohn 60
A. Dieta 64
B. Industrializacin 70
C. Tabaco 70
D. Infeccin 71
E. Estrs fisiolgico 71
F. Medicamentos 72
G. Isquemia-Ciruga 72
CAPTULO 3. OBJETIVOS 85
iii
CAPTULO 4. MATERIAL Y MTODOS 87
4.5.2.3. Mieloperoxidasa 95
iv
4.5.2.4. Permeabilidad de la mucosa intestinal 96
v
NDICE DE FIGURAS
vi
Figura 15. Papel del inflamasoma NLRP3 en la regulacin de la 81
homeostasis intestinal.
Figura 16. Papel del inflamasoma NLRP6 en la regulacin de la 82
homeostasis intestinal.
Figura 17. Esquema determinaciones ELISA. 97
vii
Figura 30. Secrecin de TNF en ratones con colitis aguda 119
inducida.
Figura 31. Secrecin de IL6 en ratones con colitis aguda inducida. 120
viii
Figura 45. Contenido de NLRP6 y citoquinas relacionadas durante 137
ingesta prolongada de CML.
Figura 46. Evolucin de mBD-3 y especies bacterianas durante la 139
ingesta prolongada de CML.
Figura 47. Evolucin de sulfatasas y CCL5 durante la ingesta 141
prolongada de CML.
Figura 48. Evolucin de la permeabilidad intestinal, ocludina y 142
MPO durante la ingesta prolongada de CML.
Figura 49. Evolucin temporal de los efectos mediados por la 143
ingesta prolongada de CML.
ix
NDICE DE TABLAS
x
Resumen
1. RESUMEN
1
Resumen
2
Introduccin
2. INTRODUCCIN
2.1. PARDEAMIENTO QUIMICO
El pardeamiento qumico (tambin conocido como
pardeamiento no enzimtico) es un conjunto de reacciones muy
complejas producidas en los alimentos tratados trmicamente y que da
lugar a la formacin de productos pardos (Cheftel and Cheftel, 1980). Se
produce durante el procesado y almacenamiento de diversos alimentos,
se acelera con el calor y se acusa especialmente durante las operaciones
de coccin, pasteurizacin, esterilizacin y deshidratacin. Estas
reacciones provocan modificaciones en el olor, color y sabor de los
alimentos. Los problemas derivados de este tipo de transformaciones en
algunos alimentos obliga a la industria alimentaria a establecer normas
de procesado y control que reduzcan este tipo de alteraciones.
El pardeamiento qumico puede producir efectos indeseables
durante la preparacin y almacenamiento de alimentos lquidos (leche,
zumos de frutas y jarabes) y deshidratados (leche, huevos, carne)
(Cheftel and Cheftel, 1980) pero tambin puede producir efectos
favorables para ciertos alimentos como el pan, cereales de desayuno,
galletas, asados, caramelos, cerveza, caf y chocolate.
El pardeamiento qumico agrupa las reacciones de degradacin
del cido ascrbico, caramelizacin (transformacin de carbohidratos) y
reaccin de Maillard (interaccin protena-carbohidrato).
3
Introduccin
2.1.2. CARAMELIZACIN
La caramelizacin se presenta cuando los azcares son
calentados por encima de su temperatura de fusin. Se produce en
ausencia de oxgeno y grupos amino, a aw bajas y a pH tanto cidos
como bsicos. En ella, los monosacridos forman enoles como paso
inicial de la reaccin (Badui, 2006). Las pentosas generan 2-furaldehido
como principal producto de degradacin, mientras que las hexosas
producen 5-hidroximetil-2-furaldehido (HMF) y otros compuestos como
4
Introduccin
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Introduccin
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Introduccin
Transposicin de Amadori
1-amino-1-desoxi-2-cetosa
-2H2O -2H2O
Productos de fisin
HMF/Furfural Reductonas
(carbonilos, dicarbonilos)
+2H -2H
Dehidroreductona +NH2
Degradacin -CO2
de Strecker
aldehdos
Aldoles +NH2
+NH2
MELANOIDINAS
(Polmeros nitrogenados pardeados)
9
Introduccin
Sustratos
Los principales sustratos involucrados en la reaccin de Maillard
son los grupos carbonilos, principalmente de azcares reductores
(aunque tambin de lpidos oxidados) y los grupos amino,
principalmente de aminocidos libres, pptidos o protenas con grupos
amino en su cadena lateral. El primer punto a tener en cuenta es que,
aunque es una reaccin isomolecular entre un azcar y un aminocido,
la prdida del primero es mayor que la del segundo, principalmente
debido a que tiene lugar otra reaccin qumica al mismo tiempo, como
es la caramelizacin (Rufin- Henares et al., 2009a). La intensidad de la
reaccin depende en gran medida de la naturaleza del azcar implicado
en el proceso. As las cetosas favorecen la formacin de productos
intermedios, como los productos de Heyns, mientras que las aldosas
favorecen la formacin de los productos de Amadori.
Los carbohidratos de bajo peso molecular son ms reactivos que
los de alto peso molecular debido al menor impedimento estrico
(Stepanenko and Serbyuk, 1950). As, concentraciones estandarizadas
de azcares producen prdidas de lisina prximas al 16% para los
disacridos, 42% para las hexosas y 60% para las pentosas. La
reactividad de los azcares es proporcional a la cantidad de forma
abierta (Burton and McWeeny, 1963). En los ismeros, la configuracin
estereoqumica determina su reactividad. De forma general, el grado de
pardeamiento en los azcares decrece en el siguiente orden: (1)
10
Introduccin
pentosas, ribosa > xilosa > arabinosa; (2) hexosas, galactosa > manosa,
glucosa > fructosa; (3) disacridos, maltosa= lactosa.
Hay que tener en cuenta que el azcar no tiene un grado de
reactividad absoluta y su comportamiento depende tambin del estado
y naturaleza de la protena con la que reacciona. As, la rafinosa
destruye 6 veces ms lisina de la lactoalbmina que de la globulina,
aunque pentosas y hexosas presentan una reactividad similar en ambas
protenas (Overby and Frost, 1952; Frangne and Adrian, 1972).
Cuando el pardeamiento de Maillard no es deseado se puede
prevenir eliminando uno de los sustratos, normalmente el azcar. En el
caso de huevos deshidratados, se puede oxidar la glucosa a cido
glucnico, por medio de glucosa oxidasa o bien eliminarla por
fermentacin. Durante la formulacin de ciertos alimentos,
concretamente alimentos para animales, se evita incorporar azcares
reductores, incluso la sacarosa slo se utiliza en pequeas dosis y se
aade lo ms tarde posible, despus del tratamiento trmico (Cheftel
and Cheftel, 1980).
Otras molculas con grupos carbonilo (Montgomery and Day,
1965; Pokorny, 1981) como los formados por degradacin de Strecker
(formaldehido, acetal, propional) o los producidos durante la
degradacin de los compuestos de Amadori (furfural e
hidroximetilfurfural) (Obretenov et al., 1983) pueden reaccionar con los
grupos amino e iniciar otra vez la reaccin. Cuando un alimento
contiene productos de estas clases la reaccin de Maillard puede
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Introduccin
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Introduccin
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Introduccin
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Introduccin
pH
El desarrollo de la reaccin de Maillard est fuertemente
condicionado por el pH inicial de los reactantes as como por la
capacidad tampn del sistema (Ellis, 1959; Nursten, 1980). En general,
un incremento del pH favorece su desarrollo y la aparicin de color
(Ames, 1990) mientras que a pH cido la velocidad es mnima y su
desarrollo escaso (Lea and Hannan, 1949) alcanzando su mximo
cuando el pH se eleva a 10 (Ashoor and Zent, 1984). El avance de la
reaccin supone una disminucin del pH debido a la formacin de
cidos grasos de cadena corta y a la desaparicin de aminocidos
bsicos (Rufin-Henares et al., 2009a). La reactividad del grupo amino es
mayor cuando el aminocido est en forma aninica y este valor
depende del carcter cido-base del aminocido. En aminocidos cidos
(cido asprtico y glutmico) la forma aninica se produce a pH 3, pero
en aminocidos bsicos (lisina y arginina) se necesita un pH de 10 (Song
and Chichester, 1967; Powell and Spark, 1971). A pH mayor de 10, el
descenso de protones necesario para la catlisis de la reestructuracin
15
Introduccin
Actividad de agua
Uno de los factores que ms influencia tiene en el desarrollo de la
reaccin de Maillard es el agua presente en los alimentos, expresado
como actividad de agua (aw) (Labuza and Saltmarch, 1981; Ames, 1990).
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Introduccin
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Introduccin
Temperatura
La reaccin de Maillard se produce tanto a temperatura
ambiente (durante el almacenamiento) como a altas temperaturas
(esterilizacin). A mayor temperatura el desarrollo de la reaccin de
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Introduccin
Presencia de metales
La presencia de cationes metlicos afecta a la reaccin de
Maillard ya que mediante reacciones de oxidacin pueden favorecer la
formacin de compuestos dicarbonlicos que participan en la reaccin
(Wolf, 1996) o bien de complejos capaces de catalizarla (Kato et al.,
1981; OBrien et al., 1994) y por tanto incrementar el desarrollo del
pardeamiento. Las sales de cobre e hierro aceleran la reaccin mientras
que el manganeso la inhibe (Bohart and Carson, 1955). Hay que hacer
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A. Efectos negativos
A.1. Reduccin del valor nutritivo
Tal y como se ha comentado anteriormente, la reaccin de
Maillard puede daar seriamente el valor nutricional de los alimentos a
travs de la destruccin de aminocidos esenciales y de la produccin
de compuestos antinutritivos y txicos, as como la inhibicin de
diversos enzimas necesarios para realizar la digestin de los alimentos.
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Introduccin
Acrilamida
En Abril de 2002, la Agencia Sueca de Seguridad Alimentaria
inform de los altos niveles de acrilamida detectados en diversos
alimentos fritos de alto consumo en la dieta occidental (Tareke et al.,
2002). Los niveles excedan ampliamente las recomendaciones de 0.5
g/kg de la OMS (OMS, 1996) para agua de consumo y de los 10 g/kg
de la legislacin europea sobre migracin qumica en envolturas
plsticas (E.C. Commission Directive 92/39/EEC). Estos resultados fueron
rpidamente confirmados por diversas agencias de seguridad
alimentarias y organismos mundiales de control alimentario. La
acrilamida ha sido definida por la IARC (International Agency for
Research on Cancer) como un probable agente carcinognico para
humanos (IARC, 1994).
Hasta la fecha diversos mecanismos tericos han sido propuestos
para explicar la formacin de acrilamida en los alimentos procesados
trmicamente (Mottram et al., 2002; Stadler et al., 2002; Zyzak et al.,
2003). Las investigaciones apuntan a que muy probablemente la
acrilamida se forme mayoritariamente a partir de la reaccin de
Maillard, donde la asparragina sea el principal reactante en sistemas
ricos en carbohidratos. En concreto, el contenido en asparragina
representa el 40% del total de aminocidos de la patata, lo que hace a
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Introduccin
Hidroximetilfurfural
El hidroximetilfurfural (HMF) es un compuesto que se forma en
grandes cantidades a partir del procesado trmico de los alimentos. Uno
de sus metabolitos, el sulfoximetilfurfural (SMF) posee una actividad
mutagnica y nefrotxica bastante elevada, aunque hasta la fecha no se
ha podido evidenciar su formacin in vivo. El HMF est presente en
niveles altos en muchos alimentos, encontrando concentraciones
particularmente altas (hasta 9,5 g/Kg) en vinos dulces y vinagre
balsmico (Bachmann et al., 1997; Hussoy et al., 2008). Sin embargo, el
caf es la mayor fuente de exposicin en muchas personas debido a las
grandes cantidades consumidas de este alimento (Murkovic and Pichler,
2006). La ingesta diaria estimada de HMF oscila entre los 30-150
mg/persona (Ulbricht et al., 1984; Janzowski et al., 2000; Rufin-
Henares and de la Cueva, 2008).
Aunque el HMF es inactivo en los test estndares de evaluacin
genotxica (Janzowski et al., 2000; Glatt and Sommer, 2006), se ha
32
Introduccin
B. Efectos positivos
B.1. Actividad antioxidante
Una de las caractersticas positivas ms conocidas de la reaccin
de Maillard es su accin antioxidante, ya que algunos de los compuestos
generados tienen propiedades antioxidantes. En los ltimos aos se ha
incrementado el estudio de las diferentes propiedades funcionales de
las melanoidinas. Su actividad antioxidante resulta especialmente
interesante ya que se forman de manera natural en el alimento durante
su procesado o su almacenamiento (Bendinghaus and Ockerman, 1995).
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al., 2007; Mucida et al., 2007). Este balance precario entre respuesta
proinflamatoria e inmunosupresora puede fallar si existe una respuesta
exagerada a las citoquinas proinflamatorias, la cual se puede producir
en pacientes que por diversas mutaciones tengan una insuficiente
produccin de IL10 o una inadecuada tolerancia inmunolgica a los
antgenos luminales y productos microbianos (Sartor, 2008). Como
resultado, la activacin inmunolgica de la mucosa no se puede
controlar, de forma que la liberacin de citoquinas proinflamatorias
como el TNF incrementan la prdida de la funcin barrera, lo que hace
que entre en contacto con ms material luminal y de esta manera se
perpete el ciclo proinflamatorio. Este modelo subraya que, el ser un
paciente susceptible y el tener una funcin barrera defectuosa, son los
componentes principales de la patognesis de la EII y todo ello explica el
papel crucial que tiene la barrera epitelial para modular la respuesta
inmune de la mucosa intestinal.
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existen indicios suficientes para pensar que AGEs como la CML puedan
tener una relacin directa con la EII.
B. Industrializacin
La incidencia de la EII sufri un fuerte incremento durante el
siglo XX en pases del norte de Europa y EEUU, frente a los pases no
desarrollados, un hecho que se denomin gradiente Norte-Sur
(Hanauer, 2006). Sin embargo, en los ltimos aos, en pases del sur de
Europa, incluyendo Espaa, estas diferencias son cada vez ms discretas
ya que la incidencia ha aumentado, de forma paralela a la mejora del
nivel de vida. Por ello, hoy se habla ms bien de un gradiente Este-
Oeste, relacionado con el desarrollo tecnolgico, un mejor acceso de la
poblacin a la medicina de calidad, modificaciones dietticas, diferente
tratamiento de aguas, condiciones higinicas, etc. La incidencia de EII es
mayor en reas urbanas que en reas rurales, por lo que algunos
investigadores sugieren que empleos que se realizan al aire libre y que
implican actividad fsica podran proteger frente a la EII.
C. Tabaco
El consumo de tabaco es el factor de riesgo externo asociado a la
EII mejor estudiado aunque con los conocimientos actuales es difcil
explicar el papel que desempea el tabaco en la fisiopatologa de la EII.
Cuando se estudian parejas de gemelos se observa que el hecho de ser
fumador al diagnstico se asocia a un mayor riesgo de desarrollar EC en
70
Introduccin
D. Infeccin
Se conoce que existen patgenos severos que actan a nivel
mitocondrial de las clulas epiteliales, produciendo toxinas como es la
toxina A, que activa la disgregacin de los filamentos de actina del ATP
(He et al., 2002) afectando as de forma negativa a la barrera epitelial.
Entre estos patgenos se encuentran Clostridium difficile, Campilobacter
jejuni, Yersinia enterocolitica o Salmonella typhimurium (Jesenberger et
al., 2000; Maki et al., 1980).
E. Estrs fisiolgico
Hay estudios que relacionan el estrs fisiolgico con la
potenciacin de la EII (Berstein et al., 2010; Mawdsley and Rampton,
2005) y hay otros estudios que dicen que no existe tal relacin
(Goodhand et al., 2009). En estudios animales y observaciones en
humanos se ha revelado que el estrs fisiolgico crnico aumenta la
permeabilidad intestinal (Soderholm and Perdue., 2001). En
concordancia con esto se ha podido observar que en pacientes con EII
71
Introduccin
F. Medicamentos
Ciertos medicamentos como los antiinflamatorios no esteroideos
que producen cambios a nivel mitocondrial y estrs oxidativo,
aumentado as la permeabilidad intestinal (Soderholm et al., 1999;
Higuchi et al., 2009). Otros frmacos como los inmunosupresores
(Tacrolimus) inhiben la activacin de las clulas T y la actividad
mitocondrial, aumentando as la permeabilidad intestinal (Gabe et al.,
1998; Madsen et al., 1995). En el caso de los antibiticos como las
tetraciclinas pueden inhibir la funcin mitocondrial y modificar la
composicin de la microbiota intestinal (De Jonge, 1973).
G. Isquemia-Ciruga
En pacientes con EII, la ciruga y el estrs oxidativo aumentan la
permeabilidad intestinal. As, el 70% de los pacientes con EII sufren
algn tipo de ciruga intestinal y
prcticamente el 100% de stos sufren una recidiva en la enfermedad
en el lugar de la reseccin en los 2-5 aos siguientes (Schoultz et al.,
2011). La ciruga siempre origina una isquemia localizada, lo que da
lugar a un incremento del estrs oxidativo que conduce finalmente a un
incremento en la permeabilidad intestinal (Willoughby et al., 1996).
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Tipos de inflamasomas
El inflamasoma NLRP3 de los macrfagos se activa siempre que
exista ATP extracelular a travs de un gran nmero de estmulos
microbianos como pueden ser diversos agonistas de los TLRs (como el
LPS) y el muramil dipptido (MDP), agonista del NOD2 (Mariathasan et
al., 2006; Sutterwala et al., 2006; Franchi et al., 2007). Adems, el Nlrp3
tambin se activa en fagocitos pre-estimulados con LPS a partir de
diversas toxinas bacterianas y algunas partculas slidas como los
cristales de urato, slice, asbestos, hidrxido de aluminio o el pptido -
amiloide. (Martinon, et al., 2006; Hornung et al., 2008; Dostert et al.,
2008; Franchi et al., 2009a). La capacidad de los distintos PAMPs para
activar el NLRP3 es compleja, ya que la mayor parte de estas molculas
no estn estructuralmente relacionadas. As, resultados recientes
(Bauernfeind et al., 2009; Franchi et al., 2009b) sugieren que los
estmulos microbianos, en vez de activar directamente al inflamasoma,
lo que hacen es inducir su produccin va NFkB, mientras que la seal
directa de activacin es dada por el ATP tal y como se observa en la
figura 14. De forma similar, las toxinas bacterianas y las partculas
slidas activan al NLRP3 tal y como hace el ATP, aunque necesitan de la
estimulacin previa con ligandos para los TLRs, los cuales inducen la
77
Introduccin
As, tanto el TNF como la IL1 (los cuales activan la va del NFkB)
son tan efectivos como los agonistas de los TLRs para promover la
activacin de la caspasa-1 en respuesta al ATP o los cristales de slice
(Franchi et al., 2009a; Franchi et al., 2009b). De esta forma, la activacin
del NLRP3 requiere dos tipos de seales. La primera consiste en
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Objetivos
3. OBJETIVOS
El objetivo principal de la presente tesis doctoral consiste en
estudiar el efecto que tiene la ingesta de compuestos avanzados de la
reaccin de Maillard sobre la inflamacin a nivel intestinal. Para ello, se
proponen 3 objetivos parciales:
85
Objetivos
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Material y mtodos
4. MATERIAL Y MTODOS
4.1. PREPARACIN CML
Para obtener una protena glicosilada rica en CML se sigui la
tcnica descrita por Valencia et al. (2004). De forma breve, se disuelve
albmina srica bovina (BSA) en tampn fosfato 150mM, pH 7.4 que
contiene cido glioxlico (25mM) y NaBH3CN (75mM). A continuacin,
esta solucin se filtra de forma estril y se incuba a 50C durante 48
horas para dar lugar a la BSA glicosilada (BSA-G). Como muestra control
se utiliz la BSA calentada sin cido glioxlico ni NaBH3CN (BSA-C). Tras la
incubacin, la BSA se ultrafiltra con una membrana de 5kDa para
eliminar los restos de cido glioxlico que no reaccionaron y las sales del
tampn y finalmente se liofiliza.
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Material y mtodos
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Material y mtodos
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Material y mtodos
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Material y mtodos
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Material y mtodos
4.5.2.3. Mieloperoxidasa
La mieloperoxidasa (MPO) es un enzima utilizado como
marcador de la infiltracin de neutrfilos, aunque no es un enzima
estrictamente especfico de estos fagocitos (Vinolo et al., 2011). El
anlisis de la MPO se analiz en tres segmentos colnicos de cada
animal siguiendo la tcnica de Vieira et al. (2005). Los tejidos se
homogeneizaron y centrifugaron, realizando el ensayo de la MPO
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Material y mtodos
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Material y mtodos
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Material y mtodos
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Material y mtodos
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Material y mtodos
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Resultados y discusin
5. RESULTADOS Y DISCUSIN
5.1. EFECTO DE LA CML SOBRE EL RECEPTOR GPR43
La dieta es uno de los factores principales que contribuyen a la
regulacin de la respuesta inmune (Maslowski and Mackay, 2011). Por
un lado, estn los AGEs formados durante el procesado trmico de los
alimentos o en los lugares de inflamacin o incluso en las lceras
intestinales producidas durante el shock hemorrgico (Raman et al.,
2006) que dan lugar a una inflamacin sistmica de bajo nivel (Vlassara
et al., 2002). Este efecto proinflamatorio est mediado por la activacin
del receptor RAGE por la CML presente en las protenas glicosiladas.
Por otro lado, estn los SCFAs resultantes de la fermentacin
fibra diettica que, a nivel colnico, son capaces de unirse al receptor
GPR43, inhibiendo en gran medida la respuesta inflamatoria ante
diversos estmulos (Maslowski et al., 2009). Los SCFAs como el cido
propinico interaccionan a travs de su grupo cido con los residuos
polares TM5 y TM7 del receptor GPR43 (Xue et al., 2011). Puesto que la
CML (Figura 18), presenta un grupo carboxlico en posicin de este
aminocido, esto podra permitir su interaccin con el receptor GPR43
tal y como lo hacen los SCFAs (Lee et al., 2008).
103
Resultados y discusin
CML
? ?
Propionic acid
104
Resultados y discusin
120
120
100
100
60
60
Propionate + CML 10-2 M
CML
40
40 Propionate + G-BSA 10-2 M
G-BSA
20
20
00
-7 -6 -5 -4 -3 -2
105
Resultados y discusin
4
4.0
P < 0.01
3,5
3.5 P < 0.01
3
3.0 P < 0.001
Chemotactic intex (CI)
2,5
2.5
P < 0.01
2
2.0
P < 0.05
1,5
1.5
1
1.0
0,5
0.5
00
Control
Control CML4
CML CML2
CML BSA-G
G-BSA4 BSA-G
G-BSA2 Pro4
Propionate Pro2
Propionate CML-Pro2
CML 10 -2 M G-BSA 10-2 M
BSA-G-Pro2
10-4 M 10 -2 M 10-4 M 10-2 M 10-4 M 10-2 M + +
Propionate Propionate
10-2 M 10 -2 M
106
Resultados y discusin
107
Resultados y discusin
108
Resultados y discusin
250
5
200
4
change)
P < 0.05
l)
150
3
(pg/m
BSA-G
IL-6
100
2
ROS
50
1
P < 0.01
0
0
RAGE+
Control Propionate
RAGE - CML 10-2 M
GPR+ G-BSA
GPR10--2 M
10 -2 M + +
Propionate Propionate
10 -2 M 10-2 M
109
Resultados y discusin
250
5
200
4
change)
P < 0.05
l)
150
3
(pg/m
BSA-G
IL-6
100
2
ROS
50
1
P < 0.01
0
0
RAGE+
Control Propionate
RAGE - CML 10-2 M
GPR+ G-BSA
GPR10--2 M
10 -2 M + +
Propionate Propionate
10 -2 M 10 -2 M
110
Resultados y discusin
111
Resultados y discusin
112
Resultados y discusin
14
12
10
Rage-/- Gpr43+/+
8
Rage+/+ Gpr43-/-
DAI
6 WT
0
0 1 2 3 4 5 6 7
Time (days)
Figura 23. Evolucin del DAI en ratones con colitis aguda inducida y
alimentados con BSA-C.
14
12
10
Rage-/- Gpr43+/+
8
Rage+/+ Gpr43-/-
DAI
6
WT
0
0 1 2 3 4 5 6 7
Time (days)
Figura 24. Evolucin del DAI en ratones con colitis aguda inducida y
alimentados con BSA-G.
113
Resultados y discusin
250
10
P < 0.01
200
8
(pg/m(cm)
l)
150
6
IL-6length
BSA-C
BSA-G
Colon
100
4
50
2
0
0
RAGE+
WT RAGE
Rage - +/+
-/- Gpr43 RageGPR+
+/+ Gpr43 -/- GPR -
Figura 25. Longitud del colon en ratones con colitis aguda inducida y
alimentados con BSA-C.
114
Resultados y discusin
250
10
200
8
P < 0.05
(pg/m(cm)
l)
150
6
IL-6length
BSA-C
BSA-G
Colon
100
4
50
2
0
0
RAGE+
WT RAGE
Rage -/- - +/+
Gpr43 RageGPR+
+/+
Gpr43 -/- GPR -
Figura 26. Longitud del colon en ratones con colitis aguda inducida y
alimentados con BSA-G.
115
Resultados y discusin
250
200
IL10 (pg/100 mg colon)
150
P < 0.01
P < 0.05
C-BSA
100
G-BSA
50
0
WTFFAR2+ -/- +/+
Rage - Gpr43 +/+
Rage FFAR2-
Gpr43 -/-
RAGE+ RAGE FFAR2+ RAGE+
116
Resultados y discusin
P < 0.05
500
P < 0.01
400
MPO (arbitrary units)
300
C-BSA
G-BSA
200
100
0
RAGE+WT
FFAR2+ RAGE
Rage-/-- Gpr43
FFAR2++/+ RAGE+ FFAR2-
Rage +/+ Gpr43 -/-
117
Resultados y discusin
P < 0.05
Intestinal Permeability
350
(units/ml plasma)
C-BSA
G-BSA
175
0
RAGE+WT
FFAR2+ Rage-/-- Gpr43
RAGE FFAR2++/+
Rage +/+ Gpr43
RAGE+ FFAR2--/-
118
Resultados y discusin
150
P < 0.01
125
(pg/100 mg colon)
100
75 C-BSA
G-BSA
50
TNF
25
0
RAGE+WT
FFAR2+ RAGE
Rage -/-- Gpr43
FFAR2++/+ RAGE+ FFAR2-
Rage +/+ Gpr43 -/-
119
Resultados y discusin
P < 0.01
250
P < 0.01
200
IL6 (pg/100 mg colon)
150
C-BSA
G-BSA
100
50
0
RAGE+WT
FFAR2+ RAGE
Rage-/-- Gpr43
FFAR2++/+ RAGE+
Rage +/+ FFAR2-
Gpr43 -/-
120
Resultados y discusin
250
200
IL10 (pg/100 mg colon)
150
P < 0.01
P < 0.05
C-BSA
100
G-BSA
50
0
WTFFAR2+ -/- +/+
Rage - Gpr43 +/+
Rage FFAR2-
Gpr43 -/-
RAGE+ RAGE FFAR2+ RAGE+
121
Resultados y discusin
122
Resultados y discusin
12
10
Rage-/- Gpr43+/+
8
Rage+/+ Gpr43-/-
DAI
6 WT
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
Time (days)
Figura 33. Evolucin del DAI en ratones con colitis crnica inducida y
alimentados con BSA-C.
123
Resultados y discusin
14
12
10
8
DAI
Rage-/- Gpr43+/+
6
Rage+/+ Gpr43-/-
WT
4
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
Time (days)
Figura 34. Evolucin del DAI en ratones con colitis crnica inducida y
alimentados con BSA-G.
124
Resultados y discusin
250
10
200
8
P < 0.05
(pg/m(cm)
l)
150
6
IL-6length
BSA-C
BSA-G
Colon 100
4
50
2
0
0
RAGE+
WT RAGE
Rage -/- - +/+
Gpr43 RageGPR+
+/+
Gpr43 -/- GPR -
Figura 35. Longitud del colon en ratones con colitis crnica inducida
y alimentados con BSA-C.
250
10
200
8
P < 0.01
(pg/m(cm)
l)
150
6
IL-6length
BSA-C
BSA-G
100
Colon
50
2
0
0
RAGE+
WT RAGE
Rage -/- - +/+
Gpr43 RageGPR+
+/+
Gpr43 -/- GPR -
Figura 36. Longitud del colon en ratones con colitis crnica inducida
y alimentados con BSA-G.
125
Resultados y discusin
35
30
P < 0.01
Neutrophilic infiltration score
25
P < 0.05
20
C-BSA
15 G-BSA
10
0
-/- +/+ +/+ -/-
RAGE+WT
FFAR2+ Rage- FFAR2+
RAGE Gpr43 Rage FFAR2-
RAGE+ Gpr43
126
Resultados y discusin
500
P < 0.05
MPO (arbitrary units)
300
C-BSA
G-BSA
200
100
0
-/- +/+ +/+ -/-
WTFFAR2+
RAGE+ Rage -Gpr43
RAGE FFAR2+ Rage Gpr43
RAGE+ FFAR2-
127
Resultados y discusin
525
P < 0.01
Intestinal Permeability
350
(units/ml plasma)
P < 0.05
C-BSA
G-BSA
175
0
-/- +/+ +/+ -/-
RAGE+WT
FFAR2+ Rage - Gpr43
RAGE FFAR2+ Rage FFAR2-
RAGE+ Gpr43
128
Resultados y discusin
150
P < 0.05
P < 0.01
125
(pg/100 mg colon)
100
75 C-BSA
G-BSA
TNF
50
25
0
-/- +/+ +/+ -/-
RAGE+WT
FFAR2+ Rage - Gpr43
RAGE FFAR2+ Rage Gpr43
RAGE+ FFAR2-
129
Resultados y discusin
250
P < 0.01
P < 0.01
200
IL6 (pg/100 mg colon)
150
C-BSA
G-BSA
100
50
0
WT -/-
Rage - Gpr43 +/+ +/+
Rage FFAR2-
Gpr43 -/-
RAGE+ FFAR2+ RAGE FFAR2+ RAGE+
250
200
IL10 (pg/100 mg colon)
C-BSA
100 G-BSA
50
0
WTFFAR2+ -/-
Rage - Gpr43 +/+ +/+
Rage FFAR2-
Gpr43 -/-
RAGE+ RAGE FFAR2+ RAGE+
130
Resultados y discusin
131
Resultados y discusin
132
Resultados y discusin
220
200
180
Citokines (pg/100 mg colon) 160
140 IL6
120
100 IL10
80
TNF
60
40
20
0
0 2 4 6 8 10 12
Time (weeks)
133
Resultados y discusin
134
Resultados y discusin
2,0
RAGE expression
Receptor expression (fold change)
1,5
CML (mmol/mol Lys)
1,0
Colon CML
0,0
0 2 4 6 8 10 12
Time (weeks)
135
Resultados y discusin
136
Resultados y discusin
200
IL1B
Citokines (pg/100 mg colon)
150
100
IL18
NLRP6
50
0
0 2 4 6 8 10 12
Time (weeks)
137
Resultados y discusin
138
Resultados y discusin
7,0
mBD-3
Prevotella spp.
-defensin (pg/100mg colon)
6,5
Bacteria (log10)
6,0
Faecalibacterium prausnitzii
5,5
5,0
0 2 4 6 8 10 12
Time (weeks)
139
Resultados y discusin
140
Resultados y discusin
200
Sulfatases activity (units/g dry faeces)
CCL5
150
CCL5 (pg/100 mg colon)
100
Sulfatases
50
0
0 2 4 6 8 10 12
Time (weeks)
141
Resultados y discusin
140
Permeability
Permeability (fluorescence units/ml plasma)
120
MPO
Ocludin (pg/100 mg colon)
100
MPO (arbitrary units)
80
60
40
20 Ocludin
0
0 2 4 6 8 10 12
Time (weeks)
142
Resultados y discusin
CCL5
Epithelial
Low grade
damage
inflammation
sulphatases Permeability
Altered
microbiota
mBD-3
Proinfammatory
citokines
+RAGE
-GPR43
High CML
intake
143
Resultados y discusin
144
Conclusiones
6. CONCLUSIONES
Los resultados de la presente tesis doctoral demuestran que la
ingesta de CML, compuesto avanzado de la reaccin de Maillard
generado durante el procesado trmico de los alimentos, da lugar a un
desequilibrio del status inmunolgico a nivel intestinal, lo que origina
una inflamacin de bajo grado. Esta conclusin general se apoya en tres
conclusiones parciales:
145
Conclusiones
146
Bibliografa
7. BIBLIOGRAFA
147
Bibliografa
148
Bibliografa
149
Bibliografa
ARTHUR, J.C., LICH, J.D., AZIZ, R.K., KOTB, M., TING, J.P. Heat shock
protein 90 associates with monarch-1 and regulates its ability to
promote degradation of NF-kappaB-inducing kinase. J. Immunol.,
2007, 179, 62916296.
ASHOOR, S.H., ZENT, J.B. Maillard browning of common amino acids
and sugars. J. Food Sci., 1984, 49, 1206-1207.
BACHMANN, S., MEIER, M., KANZIG, A. 5-Hydroxymethyl-2-
furfural(HMF) in food. Lebensm. Lebensmittelchem., 1997, 51, 49
50.
BADUI DERGAL, S. Qumica de los alimentos, Edition 4, Publisher,
Pearson Educacin, 2006.
BALTES, W. Chemical changes in food by the Maillard reaction. Food
Chem., 1982, 9, 59-73.
BARNES, P.J., KARIN, M. Nuclear factor-B-a pivotal transcription factor
in chronic inflammatory diseases. N. Engl. J. Med., 1997, 336,
10661071.
BAUER-MARINOVIC, M., FLORIAN, S., MLLER-SCHMEHL, K., GLATT,H.,
JACOBASCH, G. Dietary resistant starch type 3 prevents tumor
induction by 1,2- dimethylhydrazine and alters proliferation,
apoptosis and dedifferentiation in rat colon. Carcinogenesis, 2006,
27, 1849-59.
BAUERNFEIND, F.G., HORVATH, G., STUTZ, A. Cutting edge: NFkappaB
activating pattern recognition and cytokine receptors license
NLRP3 inflammasome activation by regulating NLRP3 expression.
150
Bibliografa
151
Bibliografa
152
Bibliografa
153
Bibliografa
154
Bibliografa
BUTTERY, R.G., SEIFERT, R.M., LING, L.C. 1970. Citado por Velisek y col.
1976.
CAMMERER, B., JALYSCHKOV, V., KROH, L.W. Carbohydrate structures
as part of the melanoidin skeleton. International Congress Series,
2002, 1245, 269-273.
CARSON, J.F. The reaction of fructose with isopropyl-amine and
cyclohexylamine. J. Am. Chem. Soc., 1955, 77, 1881-1887.
CASTRILLON, A.M., NAVARRO, M.P., GARCA-ARIAS, M.T. Tuna protein
nutritional quality changes alter canning. J. Food Sci., 1996, 61,
1250-1253.
CHAVAKIS, T., BIERHAUS, A., AL-FAKHRI, N., SCHNEIDER, D., WITTE, S.,
LINN, T., NAGASHIMA, K., MORSER, J., ARNOLD, B., J.,
PREISSNER, K.T., NAWROTH, P.P. The pattern recognition
receptor (RAGE) is a counterreceptor for leukocyte integrins: a
novel pathway for inflammatory cell recruitment. J. Exp. Med.,
2003, 198, 10, 1507-1515.
CHEFTEL, J.C., CHEFTEL, H. Introduccin a la bioqumica de los
alimentos. Ed. Acribia, Zaragoza, 1980, 306-308.
CHEN, G.Y., LIU, M., WANG, F. A functional role for nlrp6 in intestinal
inflammation and tumorigenesis. J. Immunol., 2011, 186, 7187
7194.
CHEN, G.Y., NEZ, G. Sterile inflammation: sensing and reacting to
damage. Nat. Rev. Immunol., 2010, 10, 826837.
CHEN, G.Y., NEZ, G. Inflammasomes in Intestinal Inflammation and
155
Bibliografa
156
Bibliografa
157
Bibliografa
158
Bibliografa
DONOSO, G., LEWIS, O.A.M., MILLER, D.S., PAYNE, P.R. Effect of heat
treatement an the nutritive value of proteins. Chemical and
balance studies. J. Sci. Food Agric., 1962, 13, 192-196.
DOSTERT, C., PETRILLI, V., VAN BRUGGEN, R. Innate immune activation
through Nalp3 inflammasome sensing of asbestos and silica.
Science, 2008, 320, 674677.
DRUSCH, S., FAIST, V., ERBERSDOBLER, H.F. Determination of N-"-
carboxymethyllysine in milk products by a modified reversed-
phase HPLC method. Food Chem., 1999, 65, 547553.
DUPAUL-CHICOINE, J., YERETSSIAN, G., DOIRON, K., BERGSTROM, K.S.,
MCINTIRE, C.R., LEBLANC, P.M., MEUNIER, C., TURBIDE, C., GROS,
P., BEAUCHEMIN, N., VALLANCE, B.A., SALEH, M. Control of
intestinal homeostasis, colitis, and colitis-associated colorectal
cancer by the inflammatory caspases. Immunity, 2010, 32, 367-
378.
DWORSCHAK, E., RSI, F. Study into the Maillard reaction occuring
between methionine and tryptophan on the one hand and glucose
on the other. I. Studies in aqueous solutions. Acta Aliment. Acad.
Sci. Hung., 1977, 6, 59-71.
E.C. Commission Directive 92/39/EEC, amending Directive 90/128/EEC
relating to plastic materials and articles intended to come in
contact with foodstuffs. Official Journal of the European
Communities, L168, 21-29.
159
Bibliografa
160
Bibliografa
161
Bibliografa
FAIST, V., WENZEL, E., ERBERSDOBLER, H. F., In vitro and in vivo studies
on the metabolic transit of Ne-carboxymethyllysine, Czech J. Food
Sci., 2000, 18, 116119.
FAHLGREN, A., HAMMARSTROM, S., DANIELSSON, A.,
HAMMARSTROM, M.L. Increased expression of antimicrobial
peptides and lysozyme in colonic epithelial cells of patients with
ulcerative colitis. Clin. Exp. Immunol. 2003, 131, 90101.
FARHADI, A., KESHAVARZIAN, A., VAN DE KAR, L.D., SHRIRAN JAKATE,
M.D., LEI ZHANG, M.D., MALIHA SHAIKH, MS, ALI BANAN, P.D.,
JEREMY FIELDS, P.D. Heightened Responses to Stressors in
Patients with Inflammatory Bowel Disease Am. J. Gastroenterol.,
2005, 100, 17961804.
FELLERMANN, K., STANGE, D.E., SCHAEFFELER, E., SCHMALZL, H.,
WEHKAMP, J., BEVINS, C.L., REINISCH, W., TEML, A., SCHWAB,
M., LICHTER, P., RADLWIMMER, B., STANGE, E.F. A chromosome
8 gene-cluster polymorphism with low human beta-defensin 2
gene copy number predisposes to Crohn disease of the colon. Am.
J. Hum. Genet. , 2006, 79, 439448.
FENNEMA, O.R. Qumica de los alimentos. Ed. Acribia, Zaragoza, 1993.
FIHN, B. M., SJOQVIST, A., JODAL, M. Permeability of the rat small
intestinal epithelium along the villus crypt axis: effects of glucose
transport. Gastroenterology, 2000, 119, 10291036.
162
Bibliografa
163
Bibliografa
164
Bibliografa
165
Bibliografa
166
Bibliografa
167
Bibliografa
168
Bibliografa
169
Bibliografa
170
Bibliografa
171
Bibliografa
172
Bibliografa
173
Bibliografa
174
Bibliografa
175
Bibliografa
176
Bibliografa
177
Bibliografa
228232.
MARTIN, F., AMES, J. Formation of Stecker aldehydes and pyrazines in
fried potato model systems. J. Agric. Food Chem. 2001, 49, 3885-
3892.
MARTN, M.M., RAMOS, S., MATEOS, R., RUFIN-HENARES, J.A.,
MORALES, F.J., BRAVO, L., GOYA, L. Biscuit melanoidins of
different molecular masses protect human HepG2 cells against
oxidative stress. J. Agric. Food Chem., 2009, 57, 72507258.
MARTINON, F., BURNS, K., TSCHOPP, J. The inflammasome: a molecular
platform triggering activation of inflammatory caspases and
processing of proIL-beta. Mo.l Cell., 2002, 10, 417426.
MARTINON, F., PETRILLI, V., MAYOR, A. Gout-associated uric acid
crystals activate the NALP3 inflammasome. Nature, 2006, 440,
237-241.
MASLOWSKI, K.M., VIEIRA, A.T., KRANICH J. Regulation of
inflammatory responses by gut microbiota and chemoattractant
receptor GPR43. Nature, 2009, 461, 12821286.
MATSUKI, T., WATANABE, K., FUJIMOTO, J., TAKADA, T., TANAKA, R.
Use of 16S rRNA Gene-Targeted Group-Specific Primers for Real-
Time PCR Analysis of Predominant Bacteria in Human Feces. Appl.
Environm. Microbiol. 2004, 71, 72207228.
MAUKONEN, J., MATTO, J., SATOKARI, R., SODERLUND, H., MATTILA-
SANDHOLM, T., SAARELA, M. PCRDGGE and RT-PCRDGGE show
diversity and short-term temporal stability in the Clostridium
178
Bibliografa
179
Bibliografa
180
Bibliografa
181
Bibliografa
NIKOLAUS, S., BAUDITZ, J., GIONCHETTI, P., WITT, C., LOCHS, H.,
SCHREIBER, S. Increased secretion of pro-inflammatory cytokines
by circulating polymorphonuclear neutrophils and regulation by
interleukin 10 during intestinal inflammation. Gut, 1998, 42(4),
470-476.
NORMAND, S., DELANOYE-CRESPIN, A., BRESSENOT, A. Nod-like
receptor pyrin domain-containing protein 6 (NLRP6) controls
epithelial self-renewal and colorectal carcinogenesis upon
injury.Proc. Nat.l Acad. Sci., 2011, 108, 96019606.
NURSTEN, H.E. Recent developments in studies of the Maillard
reaction. Food Chem., 1980, 6, 263-277.
NURSTEN, H.E. Maillard browning reactions in dried foods,
Concentration and Drying of Foods, Elsevier Applied Science
Publishers, London, 1986, 53-68.
OBRETENOV, T.D., ARGIROV, O.K., RASHKOV, I.B. On melanoidin
formation with furfural participation, synthesis of melanoidins
from furfural and glycine. J. Food Process. Preser., 1983, 7, 115-
126.
OBRIEN, J., MORRISEY, P.A. Metal ion complexation by products of the
Maillard reaction. Food Chem. Toxicol., 1988, 26 (9), 775-783.
O'BRIEN, J. A., MORRISEY, P.A. Nutritional and toxicological aspects of
the Maillard browning reaction in foods. Crit. Rev. Food Sci. Nutr.,
1989, 28, 211-248.
182
Bibliografa
183
Bibliografa
ONO, S., KARAKAI, S.I., KUWAHARA, A. Short chain fatty acids decrease
the frecuency of spontaneous contractions of longitudinal muscle
via enteric nerves inrat distal colon. Jpn. J .Physiol, 2004, 54, 483-
93.
O'REILLY, R. The nature of the chemical grouping is responsible for the
colour of the products of the Maillard reaction, Ph.D. Thesis
University of Reading, Reading, 1982.
OSTE, R., BJORK, I., DAHLQVIST, A., JAGERSTAD, M., SJODIN, P.,
SJOSTROM, H. Effect of a glucose-lysine reaction mixture on
protein and carbohydrate digestion and absortion. En: The
Maillard reaction in foods and nutrition, Waller, G.R. y Feather,
M.S., (Eds.), American Chemical Society, Symposium Series, 215,
Washintgton D.C., 1983, 405-417.
OSTE, R., SJODIN, P., JAGERSTAD, M., BJORCK, I., DAHLQVIST, A. Effect
of Maillard reaction products on carbohydrate utilization -studies
in vitro and in vivo. Food Chem., 1985, 16, 37-47.
OSTE, R., DAHLQVIST, A., SJOSTROM, H., NOREN, O., MILLER, R. Effect
of Maillard reaction products on protein digestion. In vitro studies.
J. Agric. Food Chem., 1986, 34, 355-358.
OSTE, R., MILLER, R., SJOSTROM, H., NOREN, O. Effect of Maillard
reaction products on protein digestion. Studies on pure
compounds. J. Agric. Food Chem., 1987, 35, 938-942.
OVERBY, L. R., FROST, D. V. The effect of heat on the nutritive value of
protein hydrolyzates with dextrose. J. Nutr., 1952, 46, 39-550.
184
Bibliografa
PALAZZO, M., BALSARI, A., ROSSINI, A., SELLERI, S., CALCATERRA, C.,
GARIBOLDI, S., ZANOBBIO, L., ARNABOLDI, F., SHIRAI, Y.F.,
SERRAO, G., RUMIO, C. Activation of enteroendocrine cells via
TLRs induces hormone, chemokine, and defensin secretion. J.
Immunol., 2007, 178, 42964303.
PARKOS, C.A. Molecular events in neutrophil transepithelial migration.
Bioessays. 1997, 19(10), 865-873.
PASTORIZA, S., DELGADO-ANDRADE, C., RUFIN-HENARES, J.A. A
physiologic approach to test the global antioxidant response of
foods. The GAR method. Food Chem. 2011, 129, 19261932.
PENG, I., HE, Z., CHEN, W., HOLZMAN, I.R., LIN, J. Effects of butyrate on
intestinal barrier function in a caco-2 cell monolayer model of
intestinal barrier. Pediatr. Res., 2007, 61, 37-41.
PEPPA, M., BREM, H., EHRLICH, P., ZHANG, J.G. Adverse effects of
dietary glycotoxins on wound healing in genetically diabetic mice,
Diabetes, 2003, 52, 2805-2813.
PEPPA, M., URIBARRI, J., VLASSARA, H. The role of advanced glycation
end products in the development of atherosclerosis, Curr. Diab.
Rep., 2004, 4, 31-36.
PERKINS, E.G., BAKER, D.H., JOHNSON, G.H., MAKOWSKI, E. The
metabolism of fructose-phenylalanine in the rat. Prog. Food Nutr.
Sci., 1981, 5, 229-242.
185
Bibliografa
186
Bibliografa
187
Bibliografa
188
Bibliografa
189
Bibliografa
190
Bibliografa
191
Bibliografa
192
Bibliografa
193
Bibliografa
194
Bibliografa
195
Bibliografa
196
Bibliografa
VAN ITALLIE, C. M., HOLMES, J., BRIDGES ,A., GOOKIN, J.L, COCCARO,
M.R., PROCTOR, W., COLEGIO, O.R., ANDERSON, J.M. The
density of small tight junction pores varies among cell types and is
increased by expression of claudin-2. J. Cell Sci., 2008, 121, 298
305.
VELISEK, J., DAVIDEK, J., KUBELKA, V., ZELINKOV, Z., POKORNY, J
.Volatile degradation products of L-dehidroascorbic acid. Z.
Lebensm. Unters Forsch., 1976, 162, 285-290.
VERNIA, P., MARCHEGGIANO, A., CAPRILLI, R., FRIERI, G., CORRAO,
G., VALPIANI ,D., DI PAOLO ,M.C., PAOLUZI, P., TORSOLI, A.
Short-chain fatty acid topical treatment in distal ulcerative colitis.
Aliment. Pharmacol. Ther., 1995, 9(3),309-313.
VIEIRA, A.T., PINHO, V., LEPSCH, L.B., SCAVONE, C., RIBEIRO, I.M.,
TOMASSINI, T., RIBEIRO-DOS-SANTOS, R., SOARES, M., TEIXEIRA,
M.M., SOUZA, D.G. Mechanisms of the anti-inflammatory effects
of the natural secosteroids physalins in a model of intestinal
ischaemia and reperfusion injury. Br. J. Pharmacol., 2005,146,
244251
VIEIRA, A.T., DE LEON, E., SHIM, D., SCHILTER, H., MASLOWSKI, K.,
AMARAL, F.A., TEIXEIRA, M.M., MACKAY, C.R. Activation of g-
protein coupled receptor 43 by short chain fatty acids regulates
inflammation on acute gout: role of diet and commensal
microbiota. Inflamm. Res., 2011, 60, 177.
VILLANI, A.C., LEMIRE, M., FORTIN, G. Common variants in the NLRP3
197
Bibliografa
198
Bibliografa
199
Bibliografa
200
Bibliografa
XUE, J., RAI, V., SINGER, D., CHABIERSKI, S., XIE, J., REVERDATTO, S.,
BURZ, D.S., SCHMIDT, A.M., HOFMANN, R., SHEKHTMAN, A.
Advanced glycation end product recognition by the receptor of
AGEs. Structure, 2011, 722-732.
YAN, Y., KOLACHALA, V., DALMASSO, G., NGUYEN, H., LAROUI, H.,
SHANTHI V. Temporal and Spatial Analysis of Clinical and
Molecular Parameters in Dextran Sodium Sulfate Induced Colitis.
Plos One, 2009, 4, e6073-6073.
YU, H., PARDOLL, D., JOVE, R. STATs in cancer inflammation and
immunity: a leading role for STAT3. Nat. Rev. Cancer, 2009, 9,
798809.
ZAKI, M.H., BOYD, K.L., VOGEL, P. The NLRP3 inflammasome protects
against loss of epithelial integrity and mortality during
experimental colitis. Immunity, 2010, 32, 379391.
ZAKI, M.H., VOGEL, P., MALIREDDI, S., BODY-MALAPEL, M., NAND,
P.K., BERTIN, J., GREEN, D.R., LAMKANFI, M., KANNEGANTI, T-D.
The NOD-Like receptor NLRP12 Attenuates Colon Inflammation
and Tumorogenesis. Cancer Cell, 2011, 20, 649-660.
ZHANG, X.M., CHAN, C.C., STAMP, D., MINKIN, S., ARCHER, M.C.,
BRUCE, W.R. Initiation and promotion of colonic aberrant crypt
foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed
sucrose. Carcinogenesis 1993, 14, 773775.
ZHERNAKOVA, A., FESTEN, E.M., FRANKE, L. Genetic analysis of innate
immunity in Crohns disease and ulcerative colitis identifies two
201
Bibliografa
202
Bibliografa
203