Bioquimica Informe 9

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESINAL DE MEDICINA HUMANA
1.INTRODUCCION:
En la realización de un perfil lipidico de determina el colesterol total y sus

fracciones , así como los triglicéridos en la rutina diaria del laboratorio
clínicoEl colesterol es un esteroides que se encuentra distribuido en casi
todas las membranas celulares del organismo animal especialmente en tejido
nervioso.
La mayor parte del colesterol del organismo se origina por síntesis (≈1g/dia)
y una pequeña cantidad (≈0.3g/dia) es suministrado por los alimentos de la
dieta, principalmente carne, hígado, sesos yema de huevos.Se sintetiza
principalmente en hígado, corteza suprarrenal, piel e intestino. En el
organismo se encuentra bajo dos formas químicas: colesterol libre y
colesterol esterificado e su grupo 3-OH con ácidos grasos de cadena larga.
En el plasma un 25% de colesterol total se encuentra en forma libre y un

75% en forma esterificada. El colesterol es transportado como
lipoproteínas encontrándose la proporción mas alta de colesterol en las LBD
( lipoproteínas de baja densidad ) las cuales se forman a partir de LMBD (
lipoproteínas de muy baja densidad ) y una pequeña proporción en las LAD )
lipoproteínas de alta densidad) la cantidad de colesterol en los
quilomicrones es mínima y representa el colesterol suministrado por la
dieta.El colesterol tienes funciones muy importantes en el organismo ya que
es uno de los componentes estructurales de las membranas celulares y
además es precursor de hormonas esteroideas, sales biliares y vitamina
d.Loa valores de colesterol normales varian en cierto grado con la edad y el
sexo. en lactantes es frecuente encontrar cifras normales de 60mg/dl como
termino medio, pero estos valores aumentan y en la pubertad se aproximan a
los del adultos .con respecto al genero los niveles de colesterol son mas
altos que en la mujer, los estrógenos tienden a disminuir el colesterol
plasmático.
BIOQUIMICA Y NUTRICION
2.OBJETIVOS:
Determinar lo valores de Colesterol Total, HDL y

LDL con fines diagnóstico.
Interpretar los resultados de un perfil lipídico.
Determinar los rangos y valores más recomendados

en el balance de colesterol por las lipoproteínas.
3.- Marco Teórico:
Por medio de un análisis denominado "perfil lipídico", el médico podrá ver los
diferentes tipos de grasas presentes en la sangre. El perfil lipídico mide lo
siguiente: El colesterol total, que es la suma de los diferentes tipos de
colesterol.
Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) colesterol, que suelen recibir el

nombre de colesterol "bueno". Las lipoproteínas pueden considerarse el
sistema de transporte de la sangre de su hijo. Las lipoproteínas de alta
densidad transportan colesterol al hígado para su eliminación.
Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) colesterol, generalmente conocidas

como colesterol "malo". Las lipoproteínas LDL que se acumulan en el
torrente sanguíneo pueden tapar los vasos sanguíneos e incrementar el
riesgo de afecciones cardíacas. Los triglicéridos, que almacenan energía
hasta que el organismo la necesita. Si el cuerpo acumula demasiados
triglicéridos, los vasos sanguíneos se pueden tapar y provocar problemas de
salud. Un perfil lipídico más extenso puede también incluir:
* Colesterol VLDL
* Colesterol no-HDL
A veces, el informe incluye algunos cálculos adicionales como el cociente

entre colesterol total y colesterol HDL, o un índice de riesgo establecido a
partir de los resultados del perfil lipídico, la edad, el sexo y otros factores
de riesgo. El médico le informará acerca de lo que pueden significar estos
resultados.
-El perfil lipídico permite verificar los niveles de lípidos en la sangre, que
pueden indicar el riesgo de una persona de padecer enfermedades cardíacas
o arterosclerosis (el endurecimiento, estrechamiento o bloqueo de las
arterias). Algunos expertos consideran que el colesterol elevado en niños es
un gran problema de salud pública que en muchos casos pasa desapercibido.

Por lo tanto, es importante estar atento a los niveles de colesterol de su
hijo, en especial si alguno de los padres sufre de colesterol elevado.
El nivel sérico de colesterol ha sido objeto en los últimos años de numerosas

investigaciones tanto en individuos sanos como enfermos.
Desde un punto de vista médico la determinación de colesterol en forma

aislada tiene utilidad diagnóstica limitada. Sin embargo, su concentración
varía de manera más o menos predecible en un gran número de condiciones
clínicas. Se ha visto que el colesterol es uno de los factores contribuyentes
a la formación de ateromas dado que las complicaciones arterioescleróticas
prevalecen en individuos hipercolesterolemicos.
Diversos estudios epidemiológicos han permitido observar además, que el

riesgo de contraer enfermedad cardíaca coronaria (ECC) para los individuos
(varones de más de 40 años) con colesterolemia menor ò igual a 200 mg% es
3 veces menor que entre individuos con más de 230 mg% y 6 veces menor
que entre individuos con más de 260mg%.
Sin embargo, actualmente se sabe que es necesario conocer además la

distribución de las lipoproteínas encargadas del transporte: HDL
(lipoproteínas de alta densidad), considerada como el “factor protector” y
LDL (lipoproteínas de baja densidad), consideradas como el verdadero
“factor de riesgo”. Las funciones biológicas inherentes a los distintos
grupos de lipoproteínas, las variaciones en su composición y los resultados
de los diversos estudios epidemiológicos, indican que los valores aislados de
colesterol HDL y colesterol LDL no pueden tomarse como índices
predicativos de riesgo, sino que es necesario conformar un perfil Lipídico
con los valores de colesterol total, colesterol LDL y colesterol HDL.
FUNDAMENTO:
Las lipoproteínas de baja densidad (LDL o β-lipoproteínas) se separan del

suero precipitándolas selectivamente mediante el agregado de polímeros de
alto peso molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las
demás lipoproteínas (HDL y VLDL); el colesterol ligado a las mismas se
determina empleando el sistema enzimático Colesterol oxidasa/Peroxidasa
con colorimetría según Trinder (Fenol/4-AF).
Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el

sobrenadante, se obtiene el colesterol unido a las LDL
Metabolismo del colesterol
Biosíntesis del colesterol
La biosíntesis del colesterol tiene lugar en el retículo endoplasmático liso de

prácticamente todas las células de los animales vertebrados. Mediante
estudios de marcaje isotópico, Rittenberg y Bloch demostraron que todos
los átomos de carbono del colesterol proceden, en última instancia,
del acetato, en forma de acetil coenzima A. Se requirieron
aproximadamente otros 30 años de investigación para describir las líneas
generales de la biosíntesis del colesterol, desconociéndose.
Degradación del colesterol
El ser humano no puede metabolizar la estructura del colesterol hasta

CO2 y H2O. El núcleo intacto de esterol se elimina del cuerpo convirtiéndose
en ácidos y sales biliares las cuales son secretadas en la bilis hacia el
intestino para desecharse por heces fecales. Parte de colesterol intacto es
secretado en la bilis hacia el intestino el cual es convertido por las

bacterias en esteroides neutros como coprostanol y colestanol
Funciones del colesterol
El colesterol es imprescindible para la vida animal por sus numerosas

funciones:
Estructural: el colesterol es un componente muy importante de

las membranas plasmáticas de las células animales (en vegetales esa
función es análoga a la del Fitoesterol). Aunque el colesterol se
encuentra en pequeña cantidad en las membranas celulares, en la
membrana citoplasmática lo hallamos en una proporción molar 1:1 con
relación a los fosfolípidos, regulando sus propiedades físico-químicas,
en particular la fluidez. Sin embargo, el colesterol se encuentra en
muy baja proporción o está prácticamente ausente en las membranas
subcelulares.
Precursor de la vitamina D: esencial en el metabolismo del calcio.
Precursor de las hormonas sexuales:

progesterona, estrógenos y testosterona.
Precursor de las hormonas corticoesteroidales:
cortisol y aldosterona.
Precursor de las sales biliares: esenciales en la absorción de algunos

nutrientes lipídicos y vía principal para la excreción de colesterol
corporal.
Precursor de las balsas de lípidos.
4.- Procedimiento experimental

Experimento A: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SUERO
FUNDAMENTOS DEL METODO:
El colesterol es oxidado enzimáticamente por la colesterol oxidasa

(CHOD), previa hidrólisis enzimática de los esteres mediante una
lipasa de origen fungal. El agua oxigenada generada en la
oxidación, produce la copulación oxidativa del fenol con la
4aminofenazona (4-AF) mediante una reacción catalizada por la
peroxidasa.
El producto es una quinonaimina roja con absorbancia máxima a
505 nm.
REACTIVOS:
Standard: solución de colesterol 200 mg%
Enzimas: suspensión conteniendo lipasa fungal (300 U/ml),

colesterol oxidasa (3 U/ml) y peroxidasa (20 U/l).
Reactivo 4-AF: solución de 4-aminofenazona (25 mmol/l).
Reactivo Fenol: solución de fenol (55 mmol/l).
Reactivo de trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo colocar en
una probeta 50 partes de agua destilada, 5 partes de reactivo 4-AF,
5 partes de reactivo fenol y llevar a 100 partes con agua destilada.
Agregar 2 partes de enzimas previamente homogenizadas. Mezclar
por inversión, sin agitar.
PROCEDIMIENTO:
En tres tubos colocar:
Incubar 15 minutos en Baño María a 37ºC.

Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.
CALCULO DE RESULTADOS:
Calcular la concentración de colesterol total en suero, aplicando el

método del factor de calibración.
Recordar que la concentración del standard de colesterol es de 200
mg%
VALORES DE REFERENCIA:
Los valores de colesterol en sangre fluctúan según edad, sexo y

hábitos de dieta y de ejercicio. Sin embargo, es preferible no hacer
referencia a valores “normales”, pues la norma promedio de una
población no necesariamente refleja ausencia de riesgo patológico
en el caso de colesterol.
Menos de 200 mg% valor deseable

200 a 239 mg% valor frontera
Mayor de 240 mg% valor alto
Experimento B: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL HDL EN SUERO

Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se separan precipitando
selectivamente las lipoproteínas de baja y muy baja densidad (LDL y VLDL)
mediante el agregado de Sulfato de Dextrán de PM 500,000 en presencia de
iones Mg++.
En el sobrenadante separado por centrifugación, quedan las HDL y se realiza la

determinación del colesterol ligado a las mismas, empleando el sistema más
conveniente.
REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Contiene una solución de Sulfato de Dextrán y de
Cl2 Mg.H2O
PROCEDIMIENTO:
En un tubo medir 0.5 ml de muestra y agregar 0.05 ml (50 ul) de Reactivo
Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 30-40 minutos en refrigeración (4-10°C). No colocar en el congelador.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos
Usar el sobrenadante como muestra.
Incubar 15 minutos en Baño María a 37ºC.

CALCULOS:
De acuerdo al método del factor de calibración, considerando que la

concentración del standard es de 45.7 mg%.
VALORES NORMALES:
40 – 65 mg%
Experimento C: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL LDL EN SUERO

Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) se separan del suero precipitándolas
selectivamente mediante el agregado de polímeros de alto peso molecular.
Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las demás lipoproteínas (HDL
y VLDL), el colesterol ligado a las mismas se determina empleando el sistema
más conveniente.
Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el sobrenadante, se
obtiene el colesterol unido a las LDL.
REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Solución de sulfato de polivinilo disuelto en

polietilenglicol (PM 600).
PROCEDIMIENTO:
En un tubo, colocar 0.2 ml (200 ul) de suero problema y añadir 0.1 ml (100 ul)
de Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 15 minutos en un baño de agua a 20-25°C.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos. Usar el sobrenadante como muestra.
Incubar 15 minutos en baño de agua a 37ºC.

CALCULOS:
LDL Colesterol = Colesterol total - (Abs muestra neta x factor de calibración)

La concentración del standard es de 62.4 mg%.
VALORES NORMALES:
Riesgo bajo o nulo: Menor de 140 mg%

Riesgo moderado: 140 a 190 mg%
Riesgo elevado : Mayor de 190 mg%
7.- Cuestionario:
1.- Qué es RIESGO CORONARIO y como se calcula?
Es un grupo de exámenes de sangre utilizados para medir los niveles de
colesterol y triglicéridos. El perfil puede ayudar a determinar su riesgo de
cardiopatía. Algunos tipos de colesterol se consideran "buenos" y algunos
son considerados "malos". Se necesitan exámenes de sangre diferentes para
medir cada tipo de colesterol.
Se calcula dividiendo el colesterol total y el colesterol HDL.
2.- Explique qué diferencias hay entre la arterioesclerosis y

la ateroesclerosis?
La arterioesclerosis, es el endurecimiento, la pérdida de
elasticidad de las arterias y la ateroesclerosis es el acúmulo de
ateromas en las paredes de las arterias. La formación de la placa
de ateroma se da por gran cantidad de grasa circundando en el
torrente sanguíneo y va achicando cada vez más la luz arterial.
La arteriosclerosis es una enfermedad que se caracteriza por

modificaciones estructurales que consisten en engrosamiento de
la capa íntima, duplicación de la lámina elástica interna y cambio
de colágeno en lugar de células musculares lisas y fibras elásticas
en la túnica media.
3.- Describa como se produce la biosíntesis de colesterol

dentro del organismo.
BIOSÍNTESIS DEL COLESTEROL
Un poco menos de la mitad del colesterol en el cuerpo se deriva

de la biosíntesis de novo. Cada día aproximadamente el 10% de la
biosíntesis del colesterol se hace en el hígado, y
aproximadamente el 15 % en el intestino. La síntesis del
colesterol se hace en el citoplasma y los microsomas a partir del
grupo acetato de dos carbonos la Acetil-CoA.
La Acetil-CoA que se utiliza para la biosíntesis del colesterol se

deriva de una reacción de oxidación en las mitocondrias y es
transportada al citoplasma la oxidación del etanol, que se inicia
por el alcohol deshidrogenasa citoplasmática (ADH3). Todas las
reacciones de la reducción de la biosíntesis del colesterol
utilizan NADPH como cofactor. Los intermediarios isoprenoides
de la biosíntesis del colesterol pueden ser dirigidos a otras
reacciones de síntesis, tal como para el dolicol o la cadena lateral
heme-α. Además éstos intermediarios se utilizan en la
modificación con lípidos de algunas proteínas.
El proceso tiene 5 pasos importantes:
Las Acetil-CoAs se convierten en 3 hidroxi-3-metilglutaril-

CoA (HMG-CoA)
Las HMG-CoA se convierten en mevalonato.
El mevalonato se convierte en l molécula isopreno, el

isopentenil pirofosfato (IPP), con la pérdida concomitante
de CO2.
El IPP se convierte en escualeeno.
El escualeno se convierte en colesterol.
4.- Explique que es el colesterol VLDL y como se calcula.

VLDL es la sigla en inglés que corresponde a lipoproteína de muy
baja densidad (LMBD en español). No hay ninguna manera sencilla
para medir directamente el VLDL. Por lo general se infiere de los
demás números de colesterol sérico. Aunque los resultados de
laboratorio no suelen dar un número de VLDL, puedes fácilmente
calcularlo tomando la cantidad total de colesterol y restar tanto
el LDL y HDL. Este cálculo es una buena estimación, pero no es
exacto. Esto se debe a las VLDL puede transformarse en algunos
otros tipos menos conocidos de colesterol. Estos incluyen el IDL
(lipoproteínas de densidad intermedia), los residuos de VLDL
nacientes y VLDL, que a veces se incluyen en el número de LDL.
La primera fórmula básica para crear una estimación VLDL es
como sigue: El colesterol total - HDL - LDL = VLDL.
5.- Que rol cumplen los triglicéridos y como se realiza su

metabolismo.
Constituyen la principal reserva energética del organismo animal
(como grasas) y en los vegetales (aceites). El exceso de lípidos se
almacena en grandes depósitos en los animales, en tejidos
adiposos.
Son buenos aislantes térmicos que se almacenan en los tejidos

adiposos subcutáneos de los animales de climas fríos como, por
ejemplo, las ballenas, el oso polar, etc.
Son productores de calor metabólico, durante su degradación. Un

gramo de grasa produce 9,4 kilocalorías. En las reacciones
metabólicas de oxidación, los prótidos y glúcidos producen 4.1
Kcal.
Dan protección mecánica, como los constituyentes de los tejidos

adiposos que están situados en la planta del pie, en la palma de la
mano y rodeando el riñón (acolchándolo y evitando su
desprendimiento).

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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

En la realización de un perfil lipidico de determina el colesterol total y sus

En el plasma un 25% de colesterol total se encuentra en forma libre y un

Determinar lo valores de Colesterol Total, HDL y

Interpretar los resultados de un perfil lipídico.

Determinar los rangos y valores más recomendados

3.- Marco Teórico:

Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) colesterol, que suelen recibir el

Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) colesterol, generalmente conocidas

A veces, el informe incluye algunos cálculos adicionales como el cociente

un gran problema de salud pública que en muchos casos pasa desapercibido.

El nivel sérico de colesterol ha sido objeto en los últimos años de numerosas

Desde un punto de vista médico la determinación de colesterol en forma

Diversos estudios epidemiológicos han permitido observar además, que el

Sin embargo, actualmente se sabe que es necesario conocer además la

Las lipoproteínas de baja densidad (LDL o β-lipoproteínas) se separan del

Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el

Metabolismo del colesterol

Biosíntesis del colesterol

La biosíntesis del colesterol tiene lugar en el retículo endoplasmático liso de

Degradación del colesterol

El ser humano no puede metabolizar la estructura del colesterol hasta

secretado en la bilis hacia el intestino el cual es convertido por las

Funciones del colesterol

El colesterol es imprescindible para la vida animal por sus numerosas

Estructural: el colesterol es un componente muy importante de

Precursor de la vitamina D: esencial en el metabolismo del calcio.

Precursor de las hormonas sexuales:

Precursor de las hormonas corticoesteroidales:

Precursor de las sales biliares: esenciales en la absorción de algunos

Precursor de las balsas de lípidos.

4.- Procedimiento experimental

FUNDAMENTOS DEL METODO:

El colesterol es oxidado enzimáticamente por la colesterol oxidasa

Standard: solución de colesterol 200 mg%

Enzimas: suspensión conteniendo lipasa fungal (300 U/ml),

Incubar 15 minutos en Baño María a 37ºC.

Calcular la concentración de colesterol total en suero, aplicando el

Los valores de colesterol en sangre fluctúan según edad, sexo y

Menos de 200 mg% valor deseable

Experimento B: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL HDL EN SUERO

FUNDAMENTOS DEL METODO:

En el sobrenadante separado por centrifugación, quedan las HDL y se realiza la

En tres tubos colocar:

Incubar 15 minutos en Baño María a 37ºC.

De acuerdo al método del factor de calibración, considerando que la

Experimento C: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL LDL EN SUERO

FUNDAMENTOS DEL METODO:

REACTIVO PRECIPITANTE.- Solución de sulfato de polivinilo disuelto en

En tres tubos colocar:

Incubar 15 minutos en baño de agua a 37ºC.

LDL Colesterol = Colesterol total - (Abs muestra neta x factor de calibración)

Riesgo bajo o nulo: Menor de 140 mg%

Se calcula dividiendo el colesterol total y el colesterol HDL.

2.- Explique qué diferencias hay entre la arterioesclerosis y

La arteriosclerosis es una enfermedad que se caracteriza por

3.- Describa como se produce la biosíntesis de colesterol