CROMATOGRAFÍA

Contenido
CROMATOGRAFÍA ................................................................................................................... 1
PLATOS TEÓRICOS ................................................................................................................ 2
DESCRIPCIÓN CUANTITATIVA DE LA EFICIENCIA DE LA COLUMNA ....................... 3
PROBLEMAS CROMATOGRAFÍA ........................................................................................... 7
Logro de sesión
 El alumno determina parámetros característicos de una columna
cromatográfica

La cromatografía es un método físico de separación, en el cual los

componentes que se van a separar se distribuyen entre dos fases; una de
estas fases constituyen una capa estacionaria de gran área superficial, la
otra es un fluido que eluye a través o a lo largo de la fase estacionaria,
Underwood(1989).

Clasificación de los métodos cromatograficos en columna

PLATOS TEÓRICOS

Donde
N es el número de platos de una columna con respecto a determinado
compuesto
tR es el tiempo de retención
wb es el ancho del máximo medido en la base, en las mismas unidades
que tR.

El número efectivo de platos corrige los platos teóricos por volumen

muerto (o vacío), por lo que es una medida del número real, útil, de platos
en una columna:

t’R =tR -tM

DESCRIPCIÓN CUANTITATIVA DE LA EFICIENCIA DE LA COLUMNA
Dos términos afines se utilizan ampliamente como medidas cuantitativas
de la eficiencia de una columna cromatografica:

1) la altura de plato H
2) el número de platos o cantidad teórica de platos, N. Los dos están
relacionados por la ecuación

Donde

L es la longitud (por lo regular en centímetros) del relleno de la columna.

La eficiencia de la columna cromatografica aumenta cuanto mayor es

el número de platos N y cuanto menor es la altura H del plato.

Ecuación de Van deemeter

Según Underwood(1989) la ecuación de Van Deemeter, tiene la siguiente
forma:

AEPT: Altura equivalente de plato teórico

Esta ecuación puede ser simplificada de la siguiente forma:

Donde:
A= difusión por remolino
B/u=difusión longitudinal
Cu=resistencia a la transferencia de masa

Según Underwood(1989) recomienda los siguientes valores típicos para

columnas empacadas. 1

1
Química analítica Pág. 602
La eficiencia de la cromatografía de gases se puede calcular por la
ecuación de Van Deemeter, donde H(altura del plato) Gary,H(2007)
tiene la siguiente forma:

Relaciones y cantidades derivadas importantes

PROBLEMAS CROMATOGRAFÍA
1. Calcular el número de platos en la columna que genera el máximo
cromatógrafo de la figura.
Calcular el factor de retención para el máximo cromatografico
Para determinar los valores de tR, t’R,tM,Wb deberá usar una regla
que mida hasta milímetros.

2. Mediante la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) se

consigue separar seis hidrocarburos aromáticos policíclicos,
empleando una columna RP-18 de 25 cm de longitud. El caudal de
la fase móvil acetonitrilo/agua de 0.8 mL/min, obteniéndose los
siguientes resultados:
Analito tR w(min)

No retenido 3.4 -

Naftaleno 5.2 .41

Fluoreno 7.4 0.62

Fenantreno 8.3 0.81

Benzoantraceno 11.5 1.53

Criseno 12.1 1.95

A partir de estos datos, calcular:

a) El factor de retención o de capacidad para las cinco
primeras especies eluidas.

b) El número de platos teóricos promedio.

 c) La resolución para el primer par y para el último par de
compuestos.

k, factor de N, Número de Rs,

Analito tR w(min)
retención platos teóricos Resolución
No retenido 3.4 -
Naftaleno 5.2 0.41 0.529411765 2573.706127
Fluoreno 7.4 0.62 1.176470588 2279.292404 4.27184466
Fenantreno 8.3 0.81 1.441176471 1679.987807
Benzoantraceno 11.5 1.53 2.382352941 903.9258405
Criseno 12.1 1.95 2.55882353 616.057857 0.34482759

Nprom =1610.59401

3. Se separan etanol y metanol en una columna capilar de

cromatografía de gases y sus tiempos de retención respectivos son
370 y 385 s. Los anchos de base respectivos (wb) son 16.0 y 17.0 s. El
máximo no retenido se presenta a los 10.0 s. Calcular el factor de
separación y la resolución.

Sustancias a separar: etanol – metanol

tr(1)= 370 seg wb=16 seg
tR(2)= 385 seg wb= 17seg

tM= 10 seg

Se usa el máximo de la elución más retardado para calcular N:

Se determina el factor de selectividad:

𝑡𝑅,𝐵 − 𝑡𝑀
𝛼=
𝑡𝑅,𝐴 − 𝑡𝑀

𝛼−1 𝑘𝐵
𝑅𝑠 = √𝑁 ∗ ( )∗( )
𝛼 1 + 𝑘𝐵
4. Las sustancias A y B tienen tiempos de retención de 16.40 y de 17.63
minutos, respectivamente, en una columna de 30.0 cm. Una
especie que no es retenida pasa por la columna en 1.30 minutos.
Las anchuras de pico (en la base) para A y B son 1.11 y 1.21 minutos,
respectivamente.
Calcule
a. La resolución de la columna
b. El número de platos promedio de la columna
c. La altura de plato
d. La longitud de la columna necesaria para conseguir
una resolución de 1.5
e. El tiempo necesario para que la sustancia B eluya en
la columna que da un valor de Rs de 1.5
f. La altura de plato necesaria para obtener una
resolución de 1.5 mediante la columna original de 30.0
cm y en el tiempo que se da en un principio.
 5. Los siguientes datos corresponden a una columna para
cromatografía de líquidos:

Un cromatograma de una mezcla de las especies A, B, C y D proporciona

los siguientes datos:

Calcule
a) El número de platos para cada pico.
b) La altura de plato de la columna.
 Tiempo de Anchura de
retención, min pico(W),min N
No retenida 3.1
A 5.4 0.41 2775.49078
B 13.3 1.07 2472.04123
C 14.1 1.16 2363.97146
D 21.6 1.72 2523.3099
Nprom= 2533.70334
L= 24.7 cm
H=L/N
H= 0.00974858 cm/plato
6. Un máximo de una cromatografía de gases tuvo un tiempo de
retención de 65 s. El ancho de la base, obtenido con las
intersecciones de la línea base y las extrapolaciones de los lados
del máximo fue 5.5 s. Si la columna era de 3 pies de longitud, ¿De
cuánto fue el valor de H en cm/plato?

tR=65seg
w=5.5 seg
L=3 pies
H= ¿ cm/plato ?

N= 2234.710744
L= 3 pies 91.44 cm
H= 0.040918047 cm/plato

7. Los siguientes datos se obtuvieron mediante cromatógrafo gas-

liquido con una columna rellena de 40 cm:

Calcule
a) El número de platos promedio a partir de los datos.
b) La altura de plato promedio para la columna.

Si fuera necesaria una resolución de 1.5 para separar metilciclohexano y

metilciclohexeno.

c) Cuantos platos se necesitarían?

d) Que longitud debería tener la columna si se utiliza el mismo relleno?
e) Cuál sería el tiempo de retención del metilciclohexeno en la
columna para una resolución de 1.5.

8. Si VS y VM para la columna inicial son 19.6 y 62.6 mL respectivamente

y el pico de aire no retenido aparece después de 1.9 min, calcule:
f) El factor de retención para cada compuesto.
g) La constante de distribución para cada compuesto.
h) El factor de selectividad para el metilciclohexano y el
metilciclohexeno.

9. Se desea resolver dos máximos de una cromatografía de gases con

tiempos de retención de 85 y 100 s, respectivamente, usando una
columna con H =1.5 cm/plato bajo las condiciones de operación.
¿Qué longitudes de columna se requieren? Asumir que los dos
máximos tienen el mismo ancho de base. La longitud de estas
columnas es variable, de 2 a 60 metros.
tR1=85 seg w1=w
tR2=100 w2=w
H=1.5 cm/plato
85 2
𝑁1 = 16 ∗ ( ) Rs L,m w
𝑤
0.1 0.122488 150
2
100 0.2 0.489952 75
𝑁1 = 16 ∗ ( )
𝑤 0.3 1.102392 50
0.4 1.959808 37.5
852 + 1002
𝑁1 = 16 ∗ 0.5 3.0622 30
15 2
( ) 0.6 4.409568 25
( 𝑅𝑠 )
𝑁𝑝𝑟𝑜𝑚 = 1224.88 ∗ 𝑅𝑠2 0.7 6.001912 21.4285714
𝐻 = 𝐿/𝑁𝑝𝑟𝑜𝑚 0.8 7.839232 18.75
𝐿 = 1.5 ∗ 1224.88 ∗ 𝑅𝑠2 0.9 9.921528 16.6666667
Podemos seleccionar una columna de 1 12.2488 15
27.5 metros con la cual tenemos una 1.1 14.821048 13.6363636
resolución aceptable de 1.5 y un ancho 1.2 17.638272 12.5
de pico de 10 seg los cuales son valores 1.3 20.700472 11.5384615
razonables para cromatografía de gases. 1.4 24.007648 10.7142857
1.5 27.5598 10
10. Se obtuvieron los siguientes datos para cuatro compuestos
separados en una columna Adsorbosphere CN-AQ, 5µm, 150 mm x
4.6 mm.
a) Calcular el número de platos teóricos para cada uno de los
compuestos y el número promedio de platos teóricos de la
columna,
b) Calcular la altura promedio
c) Explicar por qué cada compuesto tiene un número diferente de
platos teóricos.
Compuesto tR (min) W (min)

tM 2.51

A 8.04 0.15

B 8.26 0.15

C 8.43 0.16

D 9.01 0.14

11.

12. Mostrar la curva de Van Deemter para HPLC difiere cuando se usan
partículas de 10 μm y partículas de 3 μm.
Explique por qué estas curvas son diferentes.

With smaller particles, the A term of the van Deemter equation is

smaller because with smaller particles the differences in path
lengths is less dramatic. This results in the entire curve being shifted
downward (to lower H). Also, the C term is smaller because the
equilibrium between the mobile and stationary phases is more
 efficient. This results in a shallower slope for the curve at higher
values of u.

13. En una columna GC tubular abierta, ¿Cuál término en la ecuaciòn

de Van Deemter es normalmente insignificante?
El término A, ya que la columna está abierta tubular.

14. A chromatography column with L = 10.3 cm and ID = 4.61 mm is

packed with a stationary phase that occupies 61.0% of the volume.
The linear flow rate = 17.4 cm min-1.
a) ¿How long does it take for solvent to pass through the column?
b) ¿Find the retention time for a solute with a capacity factor of
10.0?

L=10.3 cm
Diameter intern=4.61 mm
Fase estacionaria ocupa el 61%
Velocidad lineal=17.4 cm/min
k’=10
a) tM = L / ux = 10.3 cm / [17.4 cm min-1] = 0.592 min.
b) k' = t'R / tM = (tR-tM) / tM
 tR = k' tM + tM = tM (1 + k') = 0.592 min x 11 = 6.51 min.

15. A chromatogram with ideal Gaussian bands has tR = 9.0 min and
w0.5 = 2.0 min.
a) ¿How many theoretical plates are present?
b) ¿Find the plate height if the column is 10 cm long?

N = 5.54 tR2 / w0.52 = 5.54 * 92 min2 / 22 min2 = 112.

H = L / N = 10 cm / 112 = 0.89 mm/plato.

16. En una separación HPLC dos componentes tienen tiempos de

retención que difieren 15 segundos. El primer pico eluye en 90
minutos y los anchos de picos son casi iguales. El tiempo muerto es
de 65 segundos. Determine la cantidad mínima de platos teóricos
que se necesitan para alcanzar los siguientes valores de resolución:
0.5 , 0.75, 0.90, 1.0, 1.10, 1.25, 1.50, 1.75, 2.0, 2.5. ¿Cómo afectaría a
la resolución que el segundo pico tuviera el doble de ancho que el
primero?
17. Two compounds with partition coefficients of 0.15 and 0.18 are to
be separated on a column with Vm / Vs = 3.0.
Calculate the number of theoretical plates needed to produce a
resolution of 1.5.
  K 2 K  0.18 / 0.15  1.2
N    1  k '2  1
R   
4    1  k 'av  k '2  K 2 
Vs
 0.18 / 3  0.060
Vm
2
    1  k 'av 
N   4 R  
    1  k ' 2 
 Vs
k '1  K1   0.15 / 3  0.050
Vm

N = [6 * 1.2/0.2 * 1.055/0.06]2 = (400689 =) 4 x105.

18. An open tubular column (OTC)

with L = 30.1 m and ID = 0.530
mm is coated on the inside wall
with a layer of stationary phase
that is 3.1 m thick.
Unretained solute passes
through in 2.16 min, whereas a
particular solute has a retention
time of 17.32 min.
a) Find the capacity factor
for the solute and the
fraction of time spent in
the stationary phase.
b) Find the partition coefficient Cs/Cm for this solute.

tM=2.16 min
tR=17.32 min
L=30.1 m
ID=0.530 mm
Espesor de fase estacionaria=3.1m

k' = t'R / tM = (tR-tM) / tM = (17.32 min – 2.16 min) / 2.16 min = 7.02.
k' = ts / tM => ts = k' * tm = 7.02 x 2.16 min = 15.16 min.
fraction in stat. phase = 15.16/17.32 = 0.875

K = Cs / C m
k' = K Vs/Vm
=> K = k' * Vm / Vst = k' * (L*Amob)/(L*Ast) = k' Amob / Ast
Ast=Atotal-Amob=D2/4-Dmob2/4=/4[(530x10-6m)2–(523.8 x10-6 m)2]
= 5.13 x10-9 m2
 K = k' *Amob/Ast=7.02 * 2.15 x10-7 m2/ 5.13 x10-9 m2 = 294.

19. A chromatographic procedure separates 4.0 mg of unknown

mixture on a column with a length of 40 cm and a diameter of 0.85
cm.
¿What size column would you use to separate 100 mg of the same
mixture?

Same length=40 cm
Diameter: mB / mA = rB2 / rA2 = dB2 / dA2
dB2 = dA2 * mB/mA = 0.852 cm2 * 100 mg/4 mg = 18.06 cm, dB = 4.25
cm

20. Heptane and toluene were separated with retention times of 15.4
and 16.5 min respectively on a 1.0 meter packed column. An
unretained species passed through the column in 1.8 min. The peak
widths measured at the base were 1.15 for heptane and 1.20 min
for toluene.

a) Calculate the resolution between the peaks

b) Calculate the average number of plates for the column.
c) Calculate the average plate height.
d) Calculate what column length will be necessary to achieve
a resolution of 1.5 on this column.
 Since k’ and el factor de separación no cambian con la longitud de
columna, Equation 4.13 indicates that the resolution is proportional to

. So, and .
N2 =7504.

Since L=NH, the length required to generate this number of plates is :

L = 7504 x 0.34 = 2551 mm or 2.5 meters

e) Calculate the capacity factor for toluene:

21. In a normal phase LC separation, nitrobenzene had a retention time

of 28.0 min, while an unretained compound eluted in 0.9 min. The
mobile phase was a 50:50 mixture of chloroform and hexane. What
mixture of chloroform and hexane will reduce the k’ to 9.0.
The following data were obtained for a separation using a 0.5 mm
id, 10 meter open tubular column:
Retention time Peak base width
(min) (min)
Methane 2.0
Cyclohexane 8.0 0.65
Methylcyclohexane 8.17 0.72
Toluene 10.2 0.95
Draw the chromatogram and label the peaks
a) Calculate the number of peaks for each compound
b) Calculate the capacity factor for toluene
c) Calculate the length of the column needed to separate
cyclohexane and methylcyclohexane at a resolution of 1.6 .