Practica 7 Reactivos Comerciales
Practica 7 Reactivos Comerciales
Practica 7 Reactivos Comerciales
PROFESORES:
ALUMNO:
PRÁCTICA 7
GRUPO 5QM1
SECCIÓN 3
Las enzimas son catalizadores biológicos que disminuyen la energía de activación de las
reacciones que catalizan, de forma que se aceleran sustancialmente la tasa de reacción.
En una reacción catalizada por un enzima:
La sustancia sobre la que actúa la enzima (sustrato), se une a una región concreta de la enzima
(sitio activo), un sitio de unión formado por los aminoácidos que están en contacto directo con el
sustrato, el grupo de aminoácidos que se encuentra en el sitio activo, así como la posición que
estos tienen en el espacio tridimensional, le dan al sitio activo un tamaño, forma y
comportamiento químico muy específicos. Gracias a estos aminoácidos, el sitio activo de una
enzima es apto de modo exclusivo para unirse con una molécula objetivo en particular -el
sustrato o sustratos de la enzima- y le ayudan a experimentar una reacción química. La cinética
enzimática se encarga del estudio de la velocidad de reacciones catalizadas enzimáticamente.
La velocidad de una reacción catalizada por un enzima depende de
1. La concentración de moléculas de sustrato [S].
2. La temperatura.
3. La presencia de inhibidores.
4. pH del medio, que afecta a la conformación (estructura espacial) de la molécula enzimática.
Medida de actividad enzimática
Los métodos más comunes de valoración de enzimas son:
a) Volumétricos, cuando en la reacción enzimática se consume o se produce un producto
gaseoso.
b) Colorimétricos, cuando el producto formado es coloreado o da color en una reacción
posterior (por ejemplo en la valoración de la fosfatasa alcalina).
c) Espectrofotométricos, para aquellas reacciones enzimáticas que utilizan
NAD (P) o NAD (P)H como coenzimas.
d) Radiométricos, utilizando un sustrato marcado radiactivamente.
Objetivos
Fundamento
Inicio
Clocar 2 ml de
sustrato (tubo 1)
Repetir
Verter en celda
Analizar
Ajustar al aire a 405 nm
CUMPLE
Registrar
No cumple Si
Tomarvlecturas cada min. en
manual
No
10 veces Si
menor a
La lectura es
[S] Dejar de leer
constante?
No
Cálculos realizados :
∑ 𝐴𝑏𝑠 0.051+0.052+0.050+0.048+0.047
𝑥̅ ∆𝐴𝑏𝑠 = 𝑛
𝑥̅ ∆𝐴𝑏𝑠 = 5
= 0.0496 para concentración sin dilución.
10𝑚𝑚𝑜𝑙 10µ𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠
[ 𝑆𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜] = [ 𝑆𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜] = = 2.5𝑚𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 4
1 1
1/[Sustrato]= 4 = 0.40 1/Act. Enzimática=64 = 0.0156
1
0.9 8
0.8
0.7 16
0.6
0.5 32
0.4
0.3 64
0.2
0.1 128
0
256
0 1 2 3 4 5 6
512
Tiempo
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
-3 -0.05
-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
-0.1
-0.15
1/concentracion de sustrato
Km= 1.50
Obtención de la Km
Concentración del
Sustrato
sustrato Grafico Gráfico
Teórica
interpolación Lineweaber-Burk
P-nitrofenil fosfato 10mmol 4.48 6.2 1.50
Interpretación de resultados
Verificación del kit comercial:
Identificación de puntos críticos del procedimiento:
Realizar las diluciones.
Utilizar un blanco para ajustar.
Tiempo correcto.
Colocar suero.
Pregunta extra
Referencias.
Gonzalez de Butrago J. M., Técnicas y métodos de laboratorio clínico, 2ª ed., Ed.
Masson. Barcelona España. 2005.
Las enzimas y el sitio activo (© 2018 Khan Academy) Disponible en:
https://es.khanacademy.org/science/biology/energy-and-enzymes/introduction-to-
enzymes/a/enzymes-and-the-active-site2514 consulta (05/2018)