Reporte Proteinas.
Reporte Proteinas.
Reporte Proteinas.
12 de Mayo.
Proteínas.
Objetivo:
Resumen
Determinación de proteínas.
Metodología.
Resultados obtenidos.
0.3
0.25
0.2
Absorbancia.
0.15
0.1
y = 0.0245x - 0.0006
0.05
0
0 2 4 6 8 10 12 14
-0.05
Cantidad de proteina.
Al graficar los datos es posible obtener la ecuación de la recta, y es con ésta con
la que obtendremos la concentración de las 3 muestras problema.
Teniendo:
Y= 0.186
𝑌 + 0.0006
𝑥=
0.0245
0.186 + 0.0006
𝑥=
0.0245
𝑥 = 7.616 µ𝑔.
Segundo valor de Absorbancia.
Y= 0.153
𝑌 + 0.0006
𝑥=
0.0245
0.153 + 0.0006
𝑥=
0.0245
𝑥 = 6.269 µ𝑔.
Y= 0.144
𝑌 + 0.0006
𝑥=
0.0245
0.144 + 0.0006
𝑥=
0.0245
𝑥 = 5.9 µ𝑔.
Metodología
Tubo Absorbancia
1 0.228
2 0.244
3 0.354
4 0.17
5 0.11
6 0.09
7 0.085
8 0.138
9 0.093
10 0.137
11 0.439
12 0.283
13 0.252
14 0.267
15 0.226
16 0.21
17 0.219
18 0.214
19 0.23
20 0.048
21 0.031
22 0.094
23 0.284
24 0.078
25 0.066
26 0.026
27 0.012
Absorbancia
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25 Absorbancia
0.2 Linear (Absorbancia )
0.15
0.1
y = -0.0053x + 0.2456
0.05
0
0 5 10 15 20 25 30
Metodología.
Resultados.
log P.M. vs Rf
5.4
5.3
5.2
y = -0.8484x + 5.4386
log Peso Molecular
5.1
5
4.9
4.8
4.7
4.6
4.5
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1
Rf
y = log P.M
Distancia recorrida = 33 mm
33 𝑚𝑚
𝑅𝑓 =
58 𝑚𝑚
𝑅𝑓 = 0.5689
𝑦 = 4.955
𝑃. 𝑀. = 𝑎𝑛𝑡𝑖𝑙𝑜𝑔 4.955
𝑷. 𝑴. = 𝟗𝟎𝟏𝟓𝟕. 𝟏𝟏𝟑𝟕
Para la segunda banda.
Distancia recorrida = 37 mm
37 𝑚𝑚
𝑅𝑓 =
58 𝑚𝑚
𝑅𝑓 = 0.638
𝑦 = 4.8973
𝑃. 𝑀. = 𝑎𝑛𝑡𝑖𝑙𝑜𝑔 4.8973
𝑷. 𝑴. = 𝟕𝟖 𝟗𝟒𝟒. 𝟑𝟎𝟒
Actividad enzimática en geles.
Metodología.
Para empezar preparamos la cámara de electroforesis siguiendo los pasos
ya realizados en la práctica anterior.
Al posicionar el gel en la base sufrió una pequeña rotura que nosotros
consideramos que podrían causar alguna anomalía en el resultado final.
La mezcla a añadir ya estaba preparada y la colocamos en la cámara
con una pipeta Pasteur y un bulbo de plástico.
Agitamos y vaciamos la solución en la cámara.
Retiramos el peine y enjuagamos los pozos con agua desionizada.
Colocamos en cada pozo 5 a 10 µL de la solución de proteínas ya
preparada en amortiguadora de carga que nos fue proporcionada.
Dejamos una hora las proteínas en su proceso de migración a 110 volts,
manteniendo la cámara en hielo .
Posteriormente desmontamos el gel con mucho cuidado y la sumergimos
en una solución de Tritón X-100 al 2,5% V/V, en agua durante 45 min a 4 °C.
Lo lavamos dos veces con agua e incubamos en el amortiguador de
reacción (30 ml de PBS LX con 50 µL de ɞ-mercaptoetanol) a 37 °C durante
30 min.
Lo lavamos dos veces con agua y teñimos con azul de Cromassie durante
15 min.
Desteñimos en una sol de metanol al 40% V/V y ácido acético al 10% V/V
durante 15 min.
Colectamos los residuos en frascos.
Observaciones:
Pudimos ver que dependiendo del volumen colocado en cada uno de los
pocitos, se formó una línea sin tintura. Un espacio de blanco en medio del gel.