LABORATORIO DE HISTOLOGÍA Y

ANATOMÍA PATOLOGÍA
 ¿QUE ES LA HISTOLOGÍA?

La histología es la ciencia que estudia todo lo

referente a los tejidos orgánicos:

- su estructura microscópica,

- su desarrollo

- y sus funciones.
La histología se identifica a veces con lo que se ha
llamado anatomía microscópica, pues su estudio no
se detiene en los tejidos, sino que va más allá,
observando también las células interiormente y otros
corpúsculos, relacionándose con la bioquímica y la
citología.
El desarrollo tecnológico moderno de las herramientas
de investigación permitió un enorme avance en el
conocimiento histológico.

Entre ellos podemos citar a la microscopía electrónica,

la inmunohistoquímica, la técnica de hibridación in situ.

Las técnicas recientes

sumado a las nuevas
investigaciones dieron
paso al surgimiento de
la biología celular.
Es crucial para la medicina y para la biología porque se
encuentra en las intersecciones entre la bioquímica, la
biología molecular y la fisiología por un lado y los
procesos patológicos y sus consecuencias por el otro.
En la actualidad los tejidos animales (que incluyen
naturalmente los humanos) están divididos en 4 grupos
fundamentales a saber:

-Tejido epitelial

-Tejido conectivo (que incluye varios tipos tisulares, como

el óseo)

-Tejido muscular

-Tejido nervioso
La histología jamás había tenido la importancia en el plan de
estudios de medicina y biología que ha alcanzado hoy día.
La histología es el estudio de la estructura microscópica del
material biológico y de la forma en que se relacionan tanto
estructural como funcionalmente los distintos componentes
individuales.
Métodos de estudio

Los métodos para el estudio de una materia

organizada son:

1. - Examen inmediato o en vivo:

2. - Examen mediato o de post – mortem:

1.Examen inmediato o en vivo:
Al estado fresco: Animales microscópicos uni o
multicelulares, células libres de animales superiores,
células obtenidas de cultivos de tejidos.
En éstos casos, para evitar la
desecación y prolongar las
posibilidades de observación,
se agregan líquidos como
suero sanguíneo, suero
fisiológico a temperatura
semejante a la del animal,
usando platinas calientes a
36º - 37º C.
MEDIOS DE CULTIVOS
 2. Examen mediato o de post – mortem:

Exigen la muerte de las

células y seguir una serie de
pasos que constituyen la
Técnica Histológica
Universal, ya que se utiliza
en todos los laboratorios y
sus resultados se interpretan
de la misma manera.
 Técnica Histológica
En el desarrollo de la misma, se pueden distinguir
la sucesión de los siguientes procesos:

1) Obtención del material histológico.

2) Proceso de fijación.
3) Proceso de inclusión.
4) Obtención de cortes.
5) Proceso de coloración.
6) Montaje final.
7) Observación y diagnostico
Esquema del proceso
histológico.
1) Obtención del material:

Generalmente proviene de:

a) Biopsias quirúrgicas.
b) Material obtenido de autopsias.
c) Utilización de animales de laboratorio.
d) Estudios experimentales en animales o vegetales.
e) Material obtenido por cultivo de tejidos.
f) Frotis o extendidos.( Citologías )
En la obtención del material histológico hay
que cumplir con varias reglas, como:
- Realizar la toma del tejido del lugar correcto.
- Es preciso obrar con cuidado y precaución, a fin de
evitar la destrucción de los tejidos.
- Cortar la pieza de órganos macizos en trozos
pequeños (entre 1 y 3 cm. x 0,5 cm.), teniendo en cuenta
- la configuración anatómica.
- Los órganos huecos no deben ser muy distendidos
para que se conserve su aspecto normal.
- Realizar éste proceso con la mayor rapidez posible
para evitar la autodestrucción del tejido (autolisis).
 Tallado de muestras
El estudio anatomopatológico
de las piezas de biopsia y
quirúrgicas en los laboratorios
de anatomía patológica
comienza con la descripción
macroscópica y la selección de
las áreas sobre las que se va a
realizar el estudio microscópico,
proceso conocido como
“tallado”.
Operaciones a realizar

- Registro de pesada de muestras.

- Extracción de la muestra –
Inmersa en la disolución de
conservación y fijado (del envase
que la contiene.)
- Lavado con agua de la pieza para retirar el exceso de
disolución.
- Realización de cortes e incisiones.
- Selección de las partes que se examinarán al microscopio
 Actividades conexas
Además, como actividades conexas se consideran
operaciones como la recepción de las muestras, los
trasvases de contenido, dosificaciones y preparación
de nuevas disoluciones, colocación de muestras en
los portamuestras (cassettes), rellenado de envases
de disolución de fijado,
decantación a recipiente
de reciclaje, vaciado de
residuos o el
almacenamiento de
muestras.
AGENTES QUÍMICOS:

Los agentes químicos que

pueden estar presentes en
esta situación de trabajo son:

•Formaldehído como agente

más importante.

•Metanol.
Daños para la salud:

Respecta al formaldehido
• En el Sistema Inmunitario: Reacciones de hipersensibilidad.
• En el Sistema Respiratorio: Es muy irritante.
• En la Piel: Puede producir quemaduras graves.
• En los Ojos: Produce irritación concentraciones muy bajas.
• En el Sistema Nervioso Central (SNC): irritabilidad, la
memoria, el equilibrio y fatiga, mareo, dolor de cabeza, etc.
• Se sospecha que provoca cáncer ¡AVISO!.

•Respecto del METANOL, los mismos daños pero no son

significativos respecto de los producidos por el formaldehído.
Medidas sobre el proceso, el local y la
organización

Debido a la proximidad del trabajador a la muestra y a

la peligrosidad del formaldehído, mientras no se
sustituya, se debe reducir su exposición tanto como
sea posible con medidas como:

•La realización del tallado

en una mesa o estación
específica dotada de
extracción localizada.
 Lugar para la realización
del tallado
Se realiza en una mesa de tallado
(estación, cabina, banco o
campana) que básicamente
consiste en una superficie de
trabajo que está acondicionada
para evacuar los fluidos y gases
desprendidos durante el proceso.
Interior de una mesa de tallado
La mesa de tallado:

Debe disponer de una

extracción localizada
capaz de captar la mayor
cantidad posible del
formaldehído que se
emita en su interior.
Mesa de tallado

Existen diversos tipos de diseños de mesas de

tallado en el mercado:

- Aire recirculante filtrado

- Salida al Exterior
 Abiertas con
extracción inferior

La Estación Universal de
tallado de acero inoxidable,
garantiza una atmósfera limpia
en el puesto de trabajo,
mientras se talla y prepara la
muestra.
El desarrollo especial del sistema de absorción hacia abajo
mantiene una atmósfera limpia en el puesto de trabajo.

La Estación de Tallado trabaja con sistema de aire circulante,

teniendo incorporados los filtros y los ventiladores de
dos potencias de aspirado.
Los vapores nocivos se absorben hacia abajo, y mediante
los ventiladores incorporados se proyectan por unos filtros
especiales que los regeneran y los expulsan nuevamente al
ambiente.

Mediante sus filtros de

óxido de aluminio con
permanganato
potásico, se obtiene
un buen filtrado.
Sistemas de seguridad de llenado de
bidones de recogida y control de llenado de
recipientes importantes.
 EL

RELÉ

REED
DIFERENTES ENCAPSULADOS
• SISTEMA DE SEGURIDAD DE NIVEL MÁXIMO DE
LLENADO POR RELÉ REED
• SISTEMA DE CONTROL DE NIVEL POR RELÉ REED
 EQUIPOS AUXILIARES

-Soporte magnético para útiles de corte.

-Dictáfono con pedal y micrófono integrado en el mueble.
-La aspiración se efectúa por debajo de las secciones de
las tapas perforadas, para favorecer la Absorción del aire
contaminado (Formol es más pesado que el aire), y
proyectar el aire regenerado a través de los filtros,
nuevamente a la sala según el principio de aire circulante.
-Los filtros están formados por bolas de óxido de aluminio
con permanganato potásico.
- Balanzas y balanzas de precisión
SISTEMAS MECÁNICOS DE MEDIDA
DE LAS BALANZAS

BASADOS EN RESORTES O EN
SISTEMAS DE CONTRAPESOS
Balanzas de precisión mecánicas
-Se basan en diseño de balanzas romanas

- Se utilizan juegos de
pesas de precisión
Balanzas de precisión mecánicas con selector
de contrapeso
- Son balanzas mecánicas que
funcionan con contrapesos de
precisión que se pueden
seleccionar mecánicamente
- Suelen tener mucha precisión
diezmilésimas de gramo
- Visión de escala óptica
- Disponen de amortiguadores
neumáticos de estabilidad
- Freno de platillo en stamdbay
- Burbuja de nivel
- Detalle del sistema de
estabilización Mecánica

- Detalle del visor óptico

- Detalle del freno de plato

- Detalle del sistema de selector de contrapesos
de precisión
- La cruceta se soporta en cuñas de cuarzo
-Balanzas
SISTEMAS DE MEDIDA DE PRECISIÓN
DE LAS BALANZAS ELECTRÓNICAS
- BASADOS EN CELDAS DE
CARGA POR GALGAS
EXTENSIOMÉTRICAS
Circuito de Medida
- Puente de Winston de galgas extensiométricas,
amplificadores operacionales.
- Microprocesadores, etc..
Con la palabra FIJACIÓN queremos indicar, en este
campo de la Anatomía Patológica, el procedimiento
mediante el cual detenemos la destrucción, la autolisis de
las células y el material extracelular, que se produciría en
las biopsias y, en general, en cualquier muestra de
material orgánico, una vez separado del organismo al
que pertenecía, por la acción de las enzimas liberadas
por los lisosomas destruidos.
Pero no es sólo esto (esto lo podríamos llamar
“conservación”); con la FIJACIÓN se pretende
además, mantener la ordenación espacial
tridimensional de células y fibras
La FIJACIÓN pretende no sólo la conservación de la
microanatomía, sino además de los componentes
químicos tisulares.
FIJADOR IDEAL. Características:

• Prevenir la autolisis
• Preparar el tejido para el procesado posterior
• Prevenir el daño osmótico
• Preparar al tejido para la “tinción” posterior
• Endurecer el tejido para facilitar su fácil sección
• Prevenir al tejido de retracción y de rotura
• Hacer que los componentes tisulares resistan la
extracción por el agua y los solventes orgánicos
• Preservar el tejido en un estado similar al “estado vivo”
• FIJACIÓN QUÍMICA
INCLUSIÓN (Parafina)

• CONGELACIÓN

•
1. Biopsias intraoperatorias

2. Histoquímica enzimática.
Biopsia rectal por succión. - Biopsias musculares.

3.Inmunofluorescencia
- Biopsias de piel. – Biopsias de riñón.

4. Muestras para algunas técnicas moleculares (ARN)

5. Muestras para Banco de tumores

Los más utilizados son los compuestos
aldehídicos que establecen puentes con grupos
aminos de las proteinas .

– Formaldehido HCHO ( Solución

acuosa, formalina )

– Glutaraldehido CHO-CH2- CH2-CH2-

CHO
1 Carbono, 1grupo aldehído
5 Carbonos, 2 grupos aldehídos
- El nitrógeno líquido, tiene una
temperatura de -190ºC/ 85ºK .
- Su manejo requiere precaución y se
utilizan gafas y guantes para extraerlo
de la bombona a través de un
dispensador.
- Para que tras la congelación la
morfología quede bien conservada y no
se formen cristales gruesos de
congelación del agua intracelular, la
congelación tiene que ser rápida.
CONTENEDOR DE NITRÓGENO
LÍQUIDO

- VÁLVULAS DE APERTURA/CIERRE
- LLENADO CON DISPENSADOR
- INDICADOR DE NIVEL
Y TEMPERATURA
- GUANTES PROTECTORES
- GAFAS PROTECTORAS
TANQUE DE NITRÓGENO
ULTRACONGELADOR
 Sistema de back-up de CO2 para
ultracongeladores

El sistema de back-up, es el encargado del control de

aporte de CO2 en caso de subida de temperatura, por
cualquier motivo, ( corte de corriente, avería, etc.)
1 Indicador LED "Power On" 5 Indicador LED "Temp Warning"
Se ilumina cuando el equipo está conectado (Advertencia de temp.)Se ilumina cuando la
a la red eléctrica temperatura interna del ultracongelador cae por
2 Interruptor "System On" (Sistema debajo de la temperatura ajustada en el botón
Encend.) Enciende o apaga el equipo "Temp Set" (Ajuste de temp.)
3 Dial "Temp Set" (Ajuste de temp.) 6 Botón "Valve Test" (Prueba de válvula)
Ajusta la temperatura de back-up en caso Botón para realizar una prueba de inyección de
de un corte de electricidad CO2
4 Indicador LED "Valve Open" (Válvula 7 Indicador LED "Battery Low" (Batería baja)
abierta) Se ilumina cuando la válvula de Se ilumina cuando la batería de back-up en el
CO2 está abierta interior del equipo está baja
SISTEMA DE
SEGURIDAD POR
CO2 PARA
ULTRACONGELADOR
, -80C, -150C

Electroválvula de control
 PROCESADOR
HISTOLÓGICO DE TEJIDOS
La deshidratación:

Podrá realizarse utilizando

cualquier reactivo capaz de
absorber el agua de los tejidos
a través de una serie de
alcoholes (etanol) de
graduación ascendente.
Graduación de los alcoholes:

Utilizando alcoholes de graduación ascendente

(70%,80%,95% y 100%), se evitaría la marcada
retracción del tejido por la acción brusca que produciría
someterlo
a una elevada
degradación de
este agente
deshidratante.
La deshidratación de los tejidos tiene dos finalidades -

- Endurecimiento de las muestras

- Extraer el agua del interior de las muestras para que la parafina ó
las resinas, que no son miscibles (no se mezclan) con el agua,
puedan penetrar posteriormente en el proceso de inclusión.

Disolvente de las grasas (xileno, benceno, tolueno )

- Eliminar el alcohol residual y las grasas

Baños de parafina (59-60º)

- Preparar el tejido para la inclusión
• La inclusión :

consiste en impregnar los tejidos en una

sustancia líquida, que penetre en el interior de la
muestra y ocupe los lugares del agua extraída, y
posteriormente pase a un estado sólido.
Razones de por qué hay que dar este paso

•Este procedimiento se realiza para que las

muestras adquieran una dureza determinada y una
estabilidad homogénea y así poder obtener cortes
finos y uniformes para poderlos
estudiar con el microscopio
óptico o electrónico.
INCLUSIÓN EN PARAFINA O PLÁSTICOS.

• Parafina.

Como medio de inclusión la parafina

es la sustancia más utilizada. Es una
cera que tiene un punto de fusión entre
45º y 60º C y que solidifica a temperatura
ambiente. Permite secciones de 3-5 micras
para estudio con microscopio óptico
INCLUSIÓN EN PARAFINA O PLÁSTICOS.

• Plásticos (epon). La inclusión en resinas acrílicas se

basa en la polimerización de una sustancia de bajo peso
molecular y su transformación en un producto
transparente y sólido de mayor dureza que la parafina.

Debido a la dureza de los bloques así obtenidos es

posible realizar cortes de 50Å con cuchillas de vidrio
para estudio con microscopio electrónico
PROCESADOR
DE TEJIDOS DE
CARRUSEL
Significado de las teclas:
El PROCESADOR DE TEJIDOS

-Posee amplias posibilidades de programación para procesos de fijación y

deshidratación de muestras histológicas con reactivos y su posterior
infiltración con parafina.
-El sistema de control permite programar hasta 10 procesos diferentes
(programas 01 al 10).
-Antes de empezar a introducir programas, debería familiarizarse con el
ciclo del carrusel.
-Para ello, observe el ciclo que realiza la cesta en cada uno de los 12
vasos.
-La figura siguiente muestra de forma gráfica el recorrido de la cesta y
las diferentes fases por las que atraviesa.
-En el texto se describen los movimientos y los tiempos que pueden
ajustarse.
El 'valor en el programa' es
un dígito que aparece en el
display al programar, con el
siguiente significado:

0 = sin agitación por rotación

1 = agitación por rotación a

60 rpm.

2 = agitación por rotación a

70 rpm

En los casos 1 y 2, el sentido

de giro del motor se invierte
cada minuto.
 COMPONENTES TÉCNICOS

Fuente de alimentación

Procesador de
procesos
Paneles de teclados

Display en:

- Monocromo

- Color
MOTORES DE
POSICIONAMIENTO

MOTORES DE
AGITACIÓN
 Coponentes técnicos

Usillos mecánicos,

Para el ascenso y descenso

del carrusel
 Componentes técnicos

Detectores de posición:

 Por ultrasonidos
 Por optoacopladores
 Por finales de carrera
 Por relé Reed
 Conclusión de los procesadores de tejidos de carrusel

Los procesadores de tejidos de carrusel, son equipos que funcionan por un

proceso secuencial, es decir, responde a unos tiempos programados, se
sumergen las muestras-espécimen en los reactivos referentes al proceso
de deshidratación, disolución de grasas e inclusión en parafina el tiempo
programado para cada estación.

Se colocara en una campana o cabina extractora de gases para evitar la

expulsión de gases tóxicos al laboratorio o lugar de trabajo

Es recomendable que estén instalados dentro de un cabina de flujo laminar,

ya que al ser un sistema abierto desprenden vapores de los reactivos
instalados, que pueden ser perjudiciales para la salud.

http://myr.com.es/index.php/productos/procesador-de-tejidos-stp-120
 Procesador de tejidos por infiltración de vacío

La Tecnología de un
procesador de tejidos para
histología por infiltración por
vacío, consta de las
siguientes características:

- Dispone de una retorta o

cámara donde se coloca la
muestra en la que se hace el
vacío.
- El vacío realizado en la
retorta mediante una
bomba, facilita la infiltración
de los reactivos en los
procesos de fijación,
deshidratación, aclarado e
inclusión de parafina.
Se considera que es un
sistema cerrado ya que lo
mismo los reactivos, que
la retorta están cerrados
herméticamente,
imposibilitando la emisión
de vapores tóxicos al
exterior, por lo que no es
preciso su instalación
dentro de una campana
de flujo laminar.
Otra de sus ventajas es la
rapidez de procesado de
muestras, respecto a los
procesadores de carrusel,
favorecido por la infiltración
forzada producida por el
vacío de la retorta.
Suelen disponer de un
sistema de filtrado de
reactivos, evitando que se
contaminen fácilmente.
Funcionamiento
- Se vasa en la creación de vacío
en una cámara-retorta en la cual
se introducen las reactivos
correspondientes a los procesos
programados.
- Dichos procesos están
controlados por un circuito
electrónico y microprocesador,
siendo visualizados en una
pantalla para monitorizar su
funcionamiento y así el usuario
tenga un control sencillo y preciso
del proceso.
- El componente empleado
para llevar a cobo los
procesos son;
electroválvulas que dan
paso secuencialmente a los
procesos consecutivos de
reactivos.

- Uno de los mayores

problemas técnicos de
estos equipos son las
posibles obstrucciones de
parafina en tubos y
electroválvulas.
Las electroválvulas son
componentes
electromagnéticos, que
funcionan cuando
aplicamos corriente
eléctrica a un solenoide,
el cual crea un campo
magnético retrayendo un
pistón y dando paso al
flujo de fluido o gas.
La válvula se mueve mediante una bobina, solenoide.

Tienen dos posiciones: abierto y cerrado, todo y nada.

También están las válvulas
distribuidoras

Estas son capaces de seleccionar

entre varias salidas o entradas.
Estos equipos mantienen la parafina caliente en los
baños, siendo en ese caso liquida, su temperatura
ronda los 60ºC, no pasando de 5ºC respecto a los
datos marcados por el fabricante de la parafina,
para lo cual
se dispone
de termostatos
o controles de
temperatura.
Además disponen de baterías para posibles cortes de
luz, en cuyo caso el equipo se pondría en posición de
estambay haciendo regresar toda la parafina liquida a
los baños, aunque ciertos modelos disponen de tubos
calefactados para evitar obstrucciones por la
solidificación
de la parafina.
Movimiento del fluido por todo el circuito.

Bombas de vacío y presión

Bombas rotatorias de aceite
 Bombas de pistón

Capaces de generar vacío y presión

 Movimientos de membrana
y válvulas

Membranas

Entrada Salida

Válvulas ( entrada y salida)

COMPRESORES SCROLL
COMPRESORES SCROLL
 Conclusiones

-Los procesadores de tejidos por infiltración de vacío:

-Realizan la infiltración en los tejidos gracias al vacío en

la retorta o cámara de muestras.
-Al ser de cámara cerrada estanca, no emite vapores
tóxicos al exterior.
-Gracias a las amplias cámaras procesan gran cantidad
de muestras al mismo tiempo.
-Hay que prestar mucha atención a los atascos de
parafina
 La Inclusión

• Es el método más común de endurecer el tejido y consiste en

infiltrar la muestra con sustancias líquidas que tras un
proceso de polimerización
o enfriamiento se solidifican,
sin afectar a las
características
del tejido.

• Con ello se consigue obtener cortes del orden de µm a

nm, según el medio de inclusión, sin que el tejido se
rompa o se deteriore.
• Además, son un buen método para preservar las muestras durante
largos periodos de tiempo.

• Existen diferentes sustancias o medios de inclusión dependiendo del

grosor del corte y de la técnica que necesitemos realizar.
•
• Cuando se quieren hacer secciones para su observación con
el microscopio óptico los medios de inclusión más frecuentemente
usados son la parafina☆ o la celoidina, mientras que si vamos a
realizar observaciones con el microscopio electrónico☆ la inclusión
se realiza con resinas☆, principalmente de tipo acrílicas o epoxi.
• La mayoría de estas sustancias no son hidrosolubles, es
decir, no son miscibles con el agua, luego si queremos que la
sustancia en la que vamos a incluir ocupe todo el tejido
tenemos que eliminar el agua y sustituirla por un líquido
miscible con dicha sustancia.
• Si una muestra no está completamente embebida en el
medio de inclusión se deteriorará y la obtención de secciones
homogéneas será imposible.
Equipo: Centro de inclusión

-Consola de inclusión en parafina.

Proporciona un flujo constante
y regulado para una
dosificación correcta de
parafina.

-Con la consola se optimiza el

control del operador y la
eficiencia.

-Mejora el flujo de trabajo durante

el proceso de inclusión de los
tejidos en parafina.
 Componentes del centro de inclusión
Pantalla LCD de fácil lectura.
(Construido en una placa de c.i. en la que esta
ubicado el teclado también )

Encendido/apagado automático completamente

programable para el inicio/parada del sistema
para economizar, mejorar la seguridad y la
disponibilidad.( El uso de temporizadores
electrónicos hacen posible estas posibilidades)

Conexión para pinzas eléctricas. ( Una fuente de

alimentación variable, monitorizada en el display
nos da la posibilidad de ajustar la temperatura
de las pinzas)
Ajuste preciso del dispensador de parafina para
suministrar la cantidad adecuada desde el
reservorio ( 3,5 a 5 litros )

- Sistema controlado por una electroválvula

calefactada, para evitar atascos en los conductos de
parafina.
- La regulación de flujo la realiza una válvula por
ajuste manual
Pulsador de mano o interruptor de pie para activar el flujo de
parafina.

Dicho sistema acciona en el pedal un micro interruptor

el cual lleva la información mediante un cable y un
conector al aparato.
En el equipo, un circuito
mediante un rele, activa la
electroválvula de control.
Estos dispositivos periféricos
son propensos a tener
averías, por roturas de cables,
o por daños funcionales.
Vista
general
Zonas de trabajo
Cámaras calientes con un rango de
temperatura entre 50°C a 75°C en pasos de
1°C.

Lupa, ajustable hacia cualquier posición.

cavidades adecuadamente localizadas para

calentar pinzas.

Grandes áreas calientes de trabajo, permiten

depositar cassettes.
• - Las cámaras calientes (donde se guardan los cassettes y
los moldes) funcionan por medio de resistencias
controladas por circuitos que miden la temperatura a base
de sondas de Tº ( pt 100, ntc, termistor, termopar, etc..) y
la regulan por circuitos de control ( circuitos por Triac y
moc)

- Las lupas suelen estar dotadas de iluminación controlable

desde el teclado.
 Circuito de control de temperatura

Circuitos de regulación de temperatura

basados en optoacopladores
- Las lupas suelen estar dotadas de iluminación situadas
en el brazo del dispensador controlable desde el teclado.
Placa fría:

Mantiene fríos los bloques de parafina y por tanto con la

dureza adecuada para realizar el corte.
Funcionan mediante compresores de frio.
Especificaciones
• Dimensiones
• Consola distribución 59 x 62 x • Placa fría 60 cassettes
38 cm • Rango de Temperaturas • Accesorios Opcionales
• Cryo Consola 33 x 59 x 38 cm • Cámara Parafinas 50ºC -
• Placa fría 31 x 38 cm 70ºC
• Códigos Descripción
• Peso • Cámaras Calientes 50ºC
• 5784 Lupa
• Consola distribución 20 kg - 70ºC
• 5785 Interruptor de pie
• Cryo Consola 20 kg • Placas calientes y
soportes • 5786 Pinzas eléctricas
• Capacidad
• De pinzas 50ºC - 70ºC
• Cámara Parafinas 4 litros
• Placa fría -10ºC - 0ºC
• Cámaras Calientes 1.8 litros
Centro de inclusión con zona
fría modular
CARACTERÍSTICAS
Y
DETALLES
 En ambas consolas, deberá
conectar el cable de red en
el zócalo correspondiente.

La consola dispensadora debe

unirse a la crioconsola con el cable
de interconexión suministrado,
como indica la figura superior.

Además, en la consola dispensadora, deberá conectarse el

cable para el pedal y, si se ha pedido como opción, las pinzas
auxiliares.
Estos contenedores técnicamente disponen de resistencias
para su calentamiento, y de sondas que llevan la información
a un circuito de control electrónico para regular la
temperatura.
Así mismo la dispensación de la parafina se realiza por
el cierre y la apertura de una electroválvula, controlada
por un pulsador en la consola o por un pulsador de
pedal.

Interruptor de pie

La válvula de escape del

dispensador puede accionarse
mediante el interruptor de pie
para que de esa forma las
manos queden libres al trabajar
en el aparato.
El clip de un manejo es ajustable en altura, giratorio a
ambos lados y también completamente abatible hacia atrás.
Permite activar el flujo de parafina a través del molde o con
la mano.
Para trabajar con el interruptor de pedal, el clip debe estar
abatido.
Esta última modalidad es especialmente útil para llenar
moldes de gran tamaño.
La regulación del caudal de parafina se hace por una
válvula manual o electromagnética y ajustable ( según
modelos )
Queda detallar el modulo de frio, encargado de
mantener los bloques de parafina refrigerados y así
confiarles la dureza apropiada para realizar los cortes.
Estos equipos de frio pueden ir incluidos en el propio
dispensador o ser un modulo independiente, en cuyo
caso se podrá instalar a derecha o izquierda del
dispensador.
 Conclusion es
El equipo “centro de inclusión”, se caracteriza por disponer
de varios contenedores para casetes de histología, donde
se alojan las muestras después de procesarlas, moldes
para realizar los bloques y contenedor de parafina, los
cuales están calefactados con una regulación
independiente por contenedor, así como brazo dosificador.
 Obtención de cortes.
Criostato Microtomo
Un microtomo (del griego
mikros, que significa
"pequeño", y tomo, que
significa "parte" o "división")
es un instrumento de corte
que permite obtener
rebanadas muy finas de
material, conocidas como
secciones.
Los microtomos son un instrumento importante de
la microscopía porque permiten la preparación de
muestras para su observación en el microscopio óptico
o en el electrónico de transmisión.
Los microtomos utilizan cuchillas de acero, vidrio o
diamante, dependiendo
del tipo de muestra que
se esté cortado en lonchas
y del grosor deseado de
las secciones del corte.
Las cuchillas empleadas para
hacer secciones ultra finas son de
vidrio especial y se obtienen
mediante unos aparatos que
mediante ralladuras con puntas de
diamante y golpes secos sobre
barras de vidrio son capaces de
producir dichas cuchillas.

La mejor calidad de corte se

consigue con cuchillas con filo de
diamante, pero son mucha más
caras.
Los mecanismos de avance y de desplazamiento
vertical están provistos de guías por rodamiento a
bolas, libres de juego y libres de mantenimiento.
Una carcasa de plástico protege estos dos
mecanismos así como el mecanismo de avance macro
contra el polvo.
A través de la manivela, el volante puede bloquearse en la
posición superior.
Además existe la posibilidad de bloquear el volante en
cualquier posición mediante una palanca de sujeción
situada en la placa base.
El corte se realiza de forma manual mediante el giro
suave del volante, exactamente equilibrado mediante un
contrapeso.
El mecanismo de ajuste basto se acciona a través de la manivela
de avance macro situada en el lado izquierdo del aparato.
El usuario puede seleccionar el sentido de giro de la
manivela de avance macro de acuerdo con sus necesidades (en
el sentido de las agujas del reloj, o en sentido contrario)
Mecanismo de desbaste mecánico, accionado a través
de palanca de desbaste.
Pueden realizarse cortes de 10 µm y de 50 µm.
• El espesor de corte se selecciona a través de un
botón giratorio y se visualiza en una ventanilla
integrada en la carcasa del microtomo.
Ajuste de espesor de corte desde 0,5 hasta 60 µm.
Retracción de la muestra

• Protege tanto la muestra como el filo de la cuchilla.

El usuario puede conectar o desconectar la función de
retracción. En la retracción, la muestra retrocede 20
µm desde la cuchilla hasta la posición de salida
superior después de cada corte. Antes del corte
siguiente, el brazo porta-muestras avanza por el
espesor de corte seleccionado más el valor de
retracción.
Movimiento de retracción
El desplazamiento circular de la manivela equilibrada por el
contrapeso, mediante un mecanismo mecánico produce un
movimiento vertical del porta-muestras y en cada vuelta
otro mecanismo hace avanzar el cilindro del porta-muestras
el corte seleccionado.
Para determinar que el movimiento de avance del
portamuestras es correcto, tendremos que comprobar el
avance con un micrómetro y una sujeción del mismo al
cabezal.
El micrómetro
10-Dispositivo de sujeción.

11-Tornillo de cabeza hexagonal

para aflojar la fijación.

12-Pinza porta-muestras.

13-Guia de la pinza porta-muestras.

14-Soporte de cola de milano.

15-volante
Montaje directo de la
pinza porta-muestras en
el dispositivo de sujeción.
• Aflojar la palanca de sujeción (20)
girándola en el sentido contrario a las
agujas del reloj(posición “o” aflojada).

• Colocar la base porta-cuchillas

universal (21) sobre la placa base (23)
del microtomo deslizando la ranura
(22) sobre la pieza en "T" (19).

• Sujetar la base porta-cuchillas

girando la palanca de sujeción (20) en
el sentido de las agujas del reloj
(posición • = bloqueada)
Para aflojarlo, girar el tornillo de
cabeza hexagonal (24) en el
sentido contrario a las agujas del
reloj.

• Deslizar la ranura del

porta-cuchillas (25) sobre la pieza
en T (26) de la base porta-
cuchillas (21).

• Para fijar el tornillo de cabeza

hexagonal (24), girarlo en el
sentido de las agujas del reloj.
Ajustar el ángulo libre
Las rayas índice (0°, 5° y 10°) para el ajuste del ángulo
libre (27) se encuentran en el lado derecho del porta-
cuchillas (25).

• En el lado derecho de la base porta-cuchillas (21) se

encuentra otra raya índice (28) que sirve como punto de
referencia para seleccionar el ángulo libre.
• Si se utiliza el tornillo de cabeza hexagonal de la base
porta-cuchillas (rígida) (24), aflojar la sujeción con la llave
Allen cuádruple en sentido contrario a las agujas del reloj.
• Si se utiliza la base porta-cuchillas (con-desplazamiento
lateral), girar la palanca del lado derecho de la base del
porta-cuchillas en sentido contrario a las agujas del reloj.
• Ajustar el porta-cuchillas hasta que la raya índice
correspondiente al ángulo deseado coincida con la raya
índice de referencia en la base porta-cuchillas.
Ejemplo:
La foto en detalle muestra un ángulo libre de 5°.
Orientar la muestra

• Aflojar la palanca excéntrica (29)

girándola en el sentido contrario a
las agujas del reloj.

• Orientar la muestra en dirección

frontoposterior (norte-sur) con el
tornillo (31) y en dirección lateral
(este-oeste) con el tornillo(30).

• Sujetar la palanca (29) girándola

en el sentido
de las agujas del reloj.
Manivela de avance macro (37)

El avance macro sirve para el desplazamiento horizontal rápido de la

muestra - para acercarla a la cuchilla (hacia adelante) y para alejarla
(hacia atrás).
El equipo puede utilizarse optativamente con giro hacia la derecha o giro
hacia la izquierda
para la manivela de avance macro (37).
Desbastar la muestra con la
manivela de avance macro • Soltar el bloqueo del volante.
Para ello, extraer el puño (1) del
volante hacia la derecha
y soltar el freno con la palanca (2).
• Freno apretado
o Freno suelto

• Aproximar la muestra girando la

manivela de
avance macro (37, Fig. 2) a la
cuchilla y comenzar
a cortar girando el volante de forma
simultánea (15) hasta alcanzar el
nivel de la
muestra deseado.
 Desbastar con la función
de desbaste mecánico

La palanca de desbaste tiene 3

posiciones de desbaste:
O 0 µm (desbaste desactivado),
• 10 µm
• • 50 µm.
Los puntos (36) corresponden a los
dos espesores de desbaste:
 Cortar
El indicador rojo (38) indica el espesor de corte seleccionado

• Para cortar, no trabaje con la misma zona del filo de la

cuchilla que ya ha sido usada para el desbaste.
Insertar la cuchilla desechable
Abatir el estribo protector
del filo (5).
• Girar la palanca de
sujeción (81) hacia adelante
para poder insertar la
cuchilla.
• Insertar la cuchilla (77 o
78) cuidadosamente desde
un lado.
• Para sujetar la cuchilla,
girar la palanca de sujeción
(81) hacia arriba.
Cambiar la placa de presión posterior (80)

Con la llave Allen no. 4, destornillar los

cuatro tornillos (82) en la parte posterior
del porta-cuchillas.
• Quitar la placa de presión (80).
• Fijar la nueva placa de presión con los 4
tornillos (82).
No apriete los tornillos completamente,
porque el paso siguiente será el
ajuste de altura y paralelidad de la placa de
presión posterior.
Ajuste de la placa de presión anterior
Colocar la placa de presión (86)
en su posición correcta, insertar
la palanca de sujeción (89)
y apretar la palanca solo
ligeramente.
• Con los tornillos (87) ajustar la
placa de presión en altura.
Los bordes superiores de ambas
placas de presión (86) y (80)
tienen que estar paralelos y a la
misma altura.
Rutina de mantenimiento Preventivo planificado
1. Inspeccionar las condiciones ambientales en las que se encuentra el equipo
(cuidar que el equipo tenga su protector de polvo). Ya sea en funcionamiento o en
almacenamiento. Los aspectos que se recomiendan evaluar son: humedad,
exposición a vibraciones, presencia de polvo, seguridad de instalación y
temperatura.
2. Efectuar limpieza integral externa (limpiar meticulosamente las guías del bloque
porta cuchillas, utilizar bencina).
3. Lubricar guías del bloque porta cuchillas con vaselina.
4. Lubricar guía del carro porta objetos.
5. Lubricar el eje de la manivela con aceite.
6. Verificar estado de piezas móviles por desgaste.
7. Verificar estado del micrómetro.
8. Verificar funcionamiento del equipo.
Recomendaciones
1. Completar la ejecución de la rutina con el manual del fabricante, si éste está
disponible.
2. Cualquier anormalidad o no cumplimiento de estas condiciones, debe ser
notificado como observación en la rutina.
2 Instrucciones de mantenimiento
por un fabricante
Para que el microtomo funcione correctamente y
sin problemas, se recomienda:

Por lo menos 1 vez al año haga revisar el equipo

por un técnico autorizado

• Limpiar el microtomo diariamente.

• Una vez al mes lubrificar las piezas siguientes con
aceite.

• Las piezas móviles del dispositivo de sujeción (14)

y del soporte de cola de milano (10).

- La pieza en T (19) en la placa base del microtomo.

- La palanca de sujeción (2) y (20) del micrótomo.

- Los rieles guía (91) en la placa base del

microtomo.

- Las palancas de sujeción (39) y (24) derecha

e izquierda de la base portacuchillas.
- La guía (92) del desplazamiento lateral de la
base portacuchillas (21).

- La pieza en T (26) en la base portacuchillas (21).

- Las superficies de deslizamiento del protector

de dedos (3) y las tuercas moleteadas (57) del
portacuchillas N.

- La palanca de sujeción (89) del portacuchillas

COMPONENTES DE UN MICROTOMO
•Portabloques:

- En el que apoyamos el casete con la muestra.

- Dispositivo donde colocamos el material tisular sumergido en
algún medio de inclusión, (parafina)
- Llevan un sistema de pinzas que se adaptan a cualquier tipo de
base o molde.
- Lleva un sistema de orientación que permite conseguir la
posición en paralelo entre el bloque y la cuchilla.
•Portacuchillas:

- Dispositivo de fijación basado en una pinza que sujeta y orienta

adecuadamente la cuchilla.
Esta pinza permite variar el ángulo de inclinación de la cuchilla.
•Mecanismo de avance del portabloques sobre la cuchilla:

- Sistema de avance mecánico o electrónico que proporciona cortes

sucesivos de tejido a partir del bloque

•Base:

- Sirve para sustentar el microtomo a la mesa.

•Caja:

- También llamada carcasa, aloja el mecanismo de engranajes de

precisión y el mecanismo para seleccionar el espesor de la sección.
•Manivela:

- Está situada a la derecha del aparato; consiste en un volante con

una manilla y un freno.
- En el volante hay una flecha pintada que indica la dirección en la
que se debe mover la manivela.

•Freno:

- Es un tornillo que, accionándolo hacia afuera y/o girándolo sobre sí

mismo un cuarto de vuelta, libera la manivela.
•Manivela de recuperación:

- Está situada a la izquierda del microtomo.

- Una vez utilizado el microtomo es conveniente hacerle volver a la
posición de inicio.
- Para ello se acciona la manivela en sentido anti horario hasta
que la base del brazo portabloques esté cercano a la caja de
engranajes.
 Conclusiones

Un microtomo (del griego mikros, que significa "pequeño",

y tomo, que significa "parte" o "división") es un instrumento
de corte que permite obtener rebanadas muy finas de
material, conocidas como secciones. Los microtomos son
un instrumento importante de la microscopía porque
permiten la preparación de muestras para su observación
en el microscopio óptico o en el electrónico de transmisión.
Los microtomos utilizan cuchillas de acero, vidrio o
diamante, dependiendo del tipo de muestra que se esté
cortado en lonjas y del grosor deseado de las secciones
del corte.
 Baño de flotación para histología de regulación
analógica
Baño de agua para estirar los cortes
hechos por el microtomo regulado por
un termostato analógico.

Posibles regulaciones: Temperatura

del agua
Baño de agua para estirar los
cortes hechos por el microtomo
regulado por un termostato digital.

Posibles regulaciones:
-Temp. del agua precion de 0,1 gº
-Programador puesta en marcha
y paro
EL CRIOSTATO
Aparato utilizado para
realizar cortes histológicos
de tejidos congelados.

El criostato mantiene el
tejido cortado en una
cámara a una temperatura
inferior
a - 20º C.

Aparato utilizado para

realizar cortes
histológicos de tejidos
congelados.
 Funcionamiento

1. Verter una pequeña cantidad del

compuesto OCT en la matriz
de montaje y la muestra de
tejido de manera que se
enfriará y creará una
plataforma.
El criostato (microtomo
introducido en una
cámara frigorífica
especial, donde la
congelación se produce
mediante el enfriamiento
de la cámara y la platina
por la forzada circulación
de gas freón).
En el criostato, gracias al antiroll, el corte queda extendido sobre la
cuchilla y se extrae colocando el portaobjetos sobre la cuchilla, sin
tocarla.
El corte se adhiere al porta por efecto de la diferencia de
temperaturas.
Una vez colocados los cortes sobre el porta, se puede proceder a
la tinción.
Resumen criostato
El criostato se utiliza para obtener secciones por congelación de 10 a 30 µm de grosor,
aproximadamente. En este aparato todo el sistema de corte se encuentra encerrado en
una cámara refrigerada cuya temperatura se puede regular, normalmente entre -20 y -30
°C. La congelación se suele hacer en una plataforma dentro de la propia cámara
refrigerada que se encuentra a una temperatura inferior, en torno a -50 °C. También se
puede congelar el tejido externamente con la rapidez que deseemos, por ejemplo con
nitrógeno líquido, pero es conveniente colocar la muestra en la cámara del criostato hasta
que consiga igualar su temperatura con la de ésta para obtener secciones homogéneas.
Antes de la congelación, la muestra se encastra en un medio que es líquido a temperatura
ambiente y sólido a la de corte. Por tanto, tenemos nuestra muestra en un bloque sólido,
encastrada pero no incluida. Esto permite manipular la muestra y adherirla a un soporte
portamuestras, el cual se fijará a un eje que avanza sobre la cuchilla. La preparación del
bloque y el mecanismo de corte es similar al que se describió para el microtomo de
rotación para parafina. Las secciones que se van obteniendo se adhieren por contacto a
portaobjetos con superficies adhesivas. Las secciones se descongelan rápidamente en
este proceso de pegado puesto que los portaobjetos están a temperatura ambiente y una
vez secas pueden procesarse para las técnicas que deseemos.
Equipo de tinción
de carrusel

Equipo diseñado para teñir las muestras de los

portaobjetos, obtenidas por los cortes del microtomo
 Funcionamiento
Irrigación:

- Este equipo regula la irrigación de agua en ciertos recipientes,

(en los que hay una circulación
- de agua continua) dispuestos
- para el lavado de portaobjetos
- entre colorante y colorante.
 Elevación y descenso
del carrusel:
- Movimiento de elevación y
descenso del carrusel,
para permitir el paso de
las cestas de porta
objetos de una estación
a la siguiente.
 Movimiento de giro del carrusel
- Este movimiento hace girar el carrusel, para ir pasando las
cestas de los porta objetos de una estación
de tinción a la siguiente.
- Se puede programar el tiempo que las cestas
permanecen en cada estación independientemente.
Movimiento de agitación
- Movimiento que permite la agitación de las cestas,
una vez que están dentro de la estación
correspondiente, y así hacer
mas efectivo el
desplazamiento del fluido
teñidor por la superficie del
portaobjetos.
Componentes Mecánicos
- Para el control de agua de lavado cuenta con electroválvulas
para la apertura y cierre del paso de agua
- Para los movimientos mecánicos, se usan motores libres de
mantenimiento sin escobillas, acompañados por
desmultiplicadores, para aumentar la fuerza y la precisión.

- Regulados por finales de carrera.

- La parte electrónica se compone por una placa electrónica de
control, la cual programa las transiciones de movimientos y los
tiempos de inclusión en las estaciones, acompañada por la placa
de relés de estado solido que serán los que soportan la apertura y
cierre de paso de corriente a las diversas partes partes del equipo,
( electroválvulas y motores).
Equipo de tinción lineal
- En este equipo, las estaciones de tinción
están estáticas, siendo un plotter x, y, z el que
realizara el trabajo de soportar las cestillas de
portaobjetos pasándolas, agitándolas de una
estación de tinción a otra.

- Sera un plotter, movido por motores de alta

precisión ( de tipo paso a paso ) el que se
encargue de dichos movimientos.
Plotter de tipo X, Y, Z
Este equipo esta controlado por electrónica de control de
motores paso a paso y control de tiempos, para el tiempo
de paso por cada estación.
Conclusiones
Equipos principalmente mecánicos, existiendo dos tipos, el de
carrusel, comandado por motores que mueven un carrusel el
cual introduce las cestas secuencialmente, el tiempo
seleccionado en las estaciones de tinción y el equipo de tinción
lineal el cual dispone de un
plotter X, Y, Z , que se podrá
programar la inclusión en cada
estación el tiempo programado,
pero en este caso podemos
hacerlo de forma
aleatoria.
MONTADOR DE LAMINAS AUTOMÁTICO CON FILM

Equipo automático, cuya función es montar film

protectores en los portaobjetos con el fin de proteger las
finas muestras.
Su funcionamiento de basa en la utilización de un rollo de
film, que de forma automática va cortando con una
guillotina en forma de tijeras y colocándolo encima de los
portaobjetos.

Por un lado se colocan las

gradillas con los portaobjetos
que el equipo va cogiendo
automáticamente de una en una
y la va pasando por el proceso:
cortar film, dosificar una
cantidad de xilol, y color el film
encima del portaobjetos.
- Utiliza xilol como adherencia del film con el porta objetos,
una vez puesto el film deposita el portaobjetos en otra
gradilla, la cual saldrá ordenada por la zona de salida.
- El proceso es automático en detección de gradillas y
expulsión de las mismas, deteniendo el proceso cuando
no detecta gradillas.
- Dispone de otro recipiente,
como colector de excesos de
líquidos.
Técnicamente disponen de electrónica, que controla los
procesos descritos, procesos realizados por motores de
precisión, que realizan los desplazamientos de los portas,
electroimanes, para el corte de la guillotina, bomba de
presión, para el suministro de xilol, y detectores de
posición de las gradillas y portas
MONTADOR DE LAMINAS AUTOMÁTICO CON
CRISTAL

Utiliza procesos mecánicos, con los cuales va montando

los cubreportas de cristal encima de los portaobjetos.
Por succión coge los cubreportas de
un deposito y los va colocando
encima de los portamuestras,
después de aplicar una pequeña
cantidad de pegamento especial.
En este caso utilizan bombas de
succión, para coger los cubre portas
que son como las de presión
pero invirtiendo las tomas.
Detalle del elemento aspirador Detalle del contenedor del
del cubreportas por aspiración pegamento especial
En ciertas instalaciones, el teñidor o equipo de tinción y
el montador de cubreportaobjetos van conectados entre si
de manera que las gradillas procesadas en la tinción pasan
automáticamente al equipo de monta cubre portas,
mediante un modulo de transferencia.
Conclusiones
Los equipos de procesamiento cubreportaobjetos
son equipos automáticos, programables, con
elementos mecánicos de precisión, (motores, bombas
de vacío, aspiración, electroimanes) que realizan un
trabajo de mecanizado dentro del laboratorio,
realizando una producción de procesado, que un
técnico a mano seria incapaz de realizar.
No son imprescindibles, dichas técnicas se pueden
realizar a mano, pero muy útiles para la agilidad en el
procesado de muestras.
Una vez obtenidas las muestras, serán observadas
al microscopio por un Medico Patólogo, para su
diagnostico.
Gracias por la atención prestada