MICROSCOPÍA

INTRODUCCIÓN

La microscopía tiene como misión hacer visible

al ojo humano, directamente o a través de un
medio gráfico (fotografías, monitores, etc.),
aquellos objetos o sus detalles que debido a su
pequeño tamaño pasarían totalmente
desapercibidos en condiciones normales.

La microscopía ha estado al servicio de la ciencia

desde que se descubrió la capacidad que tenían
algunos materiales para producir una imagen
aumentada del tamaño de los objetos.

De hecho, los avances de ciertas disciplinas

científicas, sobre todo las relacionadas con las
ciencias de la vida, han estado ligadas
fuertemente a los avances de la microscopía.

Debe quedar claro, por tanto, que la

microscopía solo proporciona una imagen
aumentada de la muestra, pero en ningún caso
modifica el tamaño de ella. Los instrumentos
que facilitan este proceso son llamados de
manera extendida microscopios (“para ver lo
pequeño”)

Podemos decir que a lo largo de la historia

científica ha existido una reciprocidad en los
adelantos de la microscopía y otros campos del
Aunque los microestereoscopios y las lupas saber, ya que la experimentación técnica en el
simples (incluidas las lupas de mano) también se campo de la microscopia ha tenido su banco de
deben considerar dentro del campo de pruebas en otras disciplinas del saber y éstas han
aplicación de esta disciplina técnica. sido un acicate para que las técnicas
microscópicas avanzasen.
Es decir, cualquier artefacto, simple o complejo,
capaz de permitir aumentar la visión del tamaño El potencial de la microscopía no solo se basa en
de un objeto se debería considerar un las posibilidades técnicas de las lentes utilizadas
microscopio. o de las propiedades físico-químicas de las

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fuentes de iluminación, que relacionándolas han Actualmente, se ha avanzado mucho en los

dado lugar a los diferentes tipos de microscopía, materiales utilizados para realizar las
sino también a la experimentación y avances en preparaciones, tanto en lo referente al soporte,
las técnicas de preparación de las muestras que como en lo referente a los productos para la
van a ser analizadas al microscopio. fijación, preservación, corte, montaje y tinción
de la muestra.

Es decir, que para sacar un buen rendimiento a

la microscopía es necesario que las muestras a Para obtener una imagen de un objeto tiene que
analizar estén bien preparadas. incidir sobre éste una radiación
electromagnética, fenómeno que vamos a
conocer como “ser iluminado”, y atendiendo al
tipo de radiación, o de iluminación, podemos
diferenciar los dos grandes tipos de microscopia
más conocidos: la óptica y la electrónica.

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 MICROSCOPÍA

Por tanto, una imagen microscópica sería el

resultado de los diferentes fenómenos físicos
que se producen cuando los fotones o electrones
de un haz luminoso inciden y/o atraviesan una
muestra (transmisión, reflexión, refracción,
difracción, etc.) y que son captados por un
dispositivo impresionable, bien sea la retina del
ojo humano un dispositivo físico-químico, como
una película fotográfica, una pantalla de rayos
Los dispositivos que tienen como fuente de
catódicos o un dispositivo digital.
iluminación un láser también se incluyen en esta
clase de microscopía.

-Microscopio de fluorescencia

Este microscopio hace uso de la fluorescencia y

se convierte en una herramienta de inestimable
valor para la investigación científica. Permite
La microscopía óptica interpreta las variaciones alcanzar altos niveles de sensibilidad y
de los fotones de un haz de luz en una pequeña resolución microscópica, permitiendo una
porción de su espectro electromagnético, apreciación diferente de la información que se
fundamentalmente el visible aunque también se puede obtener de los especímenes y que
extiende al infrarrojo y el ultravioleta. generalmente pasa desapercibida.

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 MICROSCOPÍA

En cambio, la microscopía electrónica con otros avances científicos, entre ellos la

interpreta las variaciones de un haz de invención del microscopio compuesto.
electrones que se mueve en el vacío.

Aparte de las diferencias técnicas asociadas a la

manipulación de cada tipo de iluminación, la
organización básica de los microscopios, ya sean
electrónicos u ópticos, es muy parecida
(condensadores, lentes, foco de emisión, etc.) y
en ambos se producen aberraciones en la
imagen, por lo que han de ser ajustados.

Este instrumento permitía analizar con mucho

más detalle las evidencias, aplicándose sobre
todo a las huellas dactilares.

La evolución técnica de la microscopía hizo

posible durante los siguientes siglos el estudio de
nuevos tipos de evidencias, como cabellos,
fibras, fragmentos de tierra, etc., ya que el
poder de aumento de estos instrumentos era
considerablemente superior al de una simple
lupa.

Ya a comienzos del siglo XX, Gravelle y Goddard

de la Oficina de Balística Forense de Nueva York
diseñaron el microscopio de comparación, que
fue un gran avance para la comparación de
marcas en los proyectiles, aunque su uso se
podía extender a otras evidencias.
La gran diferencia entre ambas microscopías es
su poder de resolución, ya que mientras la
microscopía óptica tiene su límite de resolución
en aproximadamente una micra, la microscopía
electrónica la tiene en aproximadamente el
angstrom.

Las ciencias forenses experimentan un fuerte

desarrollo desde finales del siglo XVI en paralelo

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 MICROSCOPÍA

Posteriormente y al igual que en otras ciencias,

los avances técnicos en microscopía, como la
aparición del SEM, (Microscopia electrónica de
barrido) fueron siendo asimilados también en las
ciencias forenses y han permitido una mayor
precisión en todos los campos de la analítica
forense, desde la patología hasta los estudios de
materiales.
● Platina:
Plataforma donde se encuentra el portaobjetos
de la muestra.

FUNDAMENTOS TÉCNICOS DE LA MICROSCOPÍA

ÓPTICA

Antes de entrar a estudiar cuales son los

fundamentos técnicos de la microscopía óptica,
vamos a ver cuáles son los elementos
estructurales que constituyen un microscopio
óptico, teniendo como referencia un microscopio Puede ser móvil en un plano (XY), por lo que
tipo estándar puede tener asociado dos mandos que permitan
el movimiento.
● Lentes, ocular: (próxima al ojo),
El lente ocular, también conocido como ocular,
es parte de un microscopio compuesto por
donde un usuario mira para ver una imagen
magnificada.

La platina puede ser circular y tener una

graduación en grados, lo cual es muy útil cuando
se trabaja con luz polarizada en microscopios
● Objetivo: (próxima a la muestra) petrográficos.
Representan el componente óptico más
importante del microscopio.

Su principal función consiste en colectar la luz

proveniente del espécimen y proyectar una
imagen nítida, real, invertida y aumentada hacia
el cuerpo del microscopio.

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 MICROSCOPÍA

● Revolver: En el condensador se colocan la mayoría de

Estructura circular donde se colocan los elementos que se interponen o filtran la luz con
diferentes objetivos. el fin de conseguir un contraste de la muestra.

Dependiendo de los elementos que se

● Anillos de enfoque: interponen, obtenemos los distintos tipos de
microscopía óptica.
-macrométrico, para un ajuste grosero del foco.
-micrométrico, para un ajuste fino del foco. ● Diafragma:
Se suele encontrar asociado al condensador y
regula la entrada de luz a la muestra al cerrarse
o abrirse unas piezas móviles (iris), de tal
manera que el haz luminoso tiene mayor o
menor diámetro.

● Condensador:
Se encuentra debajo de la platina y está
formado por una o un conjunto de lentes que
condensan el haz luminoso sobre la muestra.
Este sistema permite modificar la profundidad
de campo de la muestra, es decir que el grosor
de enfoque (eje Z) sea mayor o menor. También
existe un diafragma en el cuerpo del estativo
interpuesto a la fuente de luz, con el que se
controla la cantidad de luz que llega al
diafragma

● Estativo:
Es el conjunto de piezas que sostienen y
estabilizan el resto de elementos anteriormente
citados.

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 MICROSCOPÍA
hasta el tope superior. El tope tiene que
estar ajustado de tal manera que el
preparado no sea levantado por el
condensador.

 Intercalar el objetivo 10x mediante el

revólver portaobjetivos y enfocar el
preparado mediante el mando de enfoque.

 Cerrar el diafragma de campo

luminoso, hasta que se pueda ver (aunque
poco nítido) en el campo visual ,

 Bajar el condensador mediante el mando para

movimiento vertical (4-13/5 ó sea 4-14/3)
hasta que el borde del diafragma de campo
luminoso aparezca con suficiente nitidez.
 Centrar la imagen del diafragma de campo
luminoso mediante los dos tornillos de
contraje situados en el portacondensador

Ajuste centrado del condensador. Ajuste de

Köhler

 Seleccionamos en el revolver el
objetivo más pequeño que dispongamos  Abrir después el diafragma de campo
(4 ó 10). luminoso hasta que su borde justamente
 Subimos la pletina lo máximo posible. desaparezca del campo visual .
 A continuación bajamos hasta abajo el
condensador  Al cambiar de condensador, el diafragma de
 Cerramos el diafragma de la campo luminoso normalmente quedará
iluminación. centrado, siempre que no se haya movido los,
 Para enfocar regulamos la altura del tornillos de centraje.
condensador para ver el diafragma de la  Para ajustar el diafragma de apertura
fuente de luz. (contraste) sacar un ocular del portaoculares
 Mediante las ruedas moleteadas se y mirar a simple vista por el tubo- Ajustar el
ajusta para centrar. (movimiento X-Y) diafragma de apertura a unos .2/3 .,.4/5 del
diámetro de las pupilas de salida de los
Ajustes para luz transmitida-campo claro objetivos. En la mayoría de las aplicaciones,
según KÖHLER este ajuste del diafragma. de apertura
proporciona el mejor contraste con una
 El microscopio debe estar conectado, con la resolución casi completa, y por lo tanto
lámpara halógena encendida. representa el compromiso más favorable para
la vista humana.
 Regular la claridad de la imagen mediante el  Volver a insertar el ocular en el
regulador de tensión en el estativo del portaoculares
microscopio.

 Poner un preparado con contrastes fuertes en

la platina de desplazamientos en cruz.

 Intercalar en caso dado la óptica frontal del

condensador, se recomienda el objetivo de
menor aumento y llevar el condensador
mediante el mando para movimiento vertical

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PARÁMETROS TÉCNICOS ● Profundidad de campo:

Los parámetros técnicos que definen a la La profundidad de campo es el grosor de
microscopía óptica convencional están asociados muestra que queda enfocada, es decir, teniendo
a las lentes (aumentos, distancia de trabajo, como referencia un punto de enfoque en el eje
campo visual, o profundidad de campo), a la z, la profundidad de campo consistiría en la
iluminación (longitud de onda), a la muestra cantidad de muestra que queda nítida por
(índice de refracción) o a la combinación de delante y por detrás de dicho punto de enfoque.
todos (poder de resolución):
La profundidad de campo viene definida con el
● Aumentos: aumento de la lente y ésta es menor conforme
Los aumentos de una lente vienen definidos por incrementamos el aumento, pero sus límites
su tallado y, en el caso de lentes compuestas, pueden corregirse ligeramente cerrando la
por este factor y por la combinación de sus abertura del diafragma, es decir la luz que le
elementos ópticos. llega a la muestra. Esta última situación traería
La capacidad de las lentes simples o compuestas consigo un mayor contraste y por tanto una
para producir imágenes aumentadas está imagen más oscura.
relacionado con la refracción de las ondas
luminosas al atravesar estas lentes.

● Iluminación:
La naturaleza de la fuente de luz es muy
importante, ya que puede incrementar o
● Distancia de trabajo: disminuir el poder de resolución (longitud de
La distancia de trabajo es la separación que onda), pero también es esencial su intensidad y
queda entre la muestra y el objetivo. el tamaño del haz, ya que de esta forma se
A mayor distancia de trabajo mayor grosor de la mejora el contraste, la profundidad de campo y
muestra que se puede observar. el enfoque.
Mayor aumento => menor distancia de trabajo.
● Índice de Refracción:
La luz viaja con una velocidad diferente
dependiendo del medio en el que se propaga,
que siempre es menor que la velocidad en el
vacío. Referencia.

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TIPOS DE MICROSCOPÍA ÓPTICA

El uso de determinados elementos colocados en

el condensador y/o los objetivos (raramente en
los oculares), que se interponen al haz luminoso
filtrándolo u obstaculizándolo da lugar a los
distintos tipos de microscopía óptica.

Este tipo de dispositivos manipulan físicamente

La ralentización de la luz al atravesar un medio el haz luminoso seleccionando parte de las ondas
se interpreta visualmente como un cambio en la de las que se compone dicho haz, lo que provoca
dirección de propagación del haz (figura 2), una imagen contrastada de la muestra sin
material necesidad de teñirla. Podemos definir los
siguientes tipos de microscopía (más usuales).

● Campo claro:

No se interpone ningún elemento más allá de un

filtro de luz de día (color azul), que
simplemente modifica la temperatura de color
de la iluminación proveniente de una lámpara
convencional haciéndola más fría, más azulada,
y de esa manera es más natural y menos molesta
a la vista (lámina 1A).
Por tanto cuanto más homogéneo sea el índice
de refracción de los diferentes materiales
(condensador, portaobjetos, medio de montaje,
cubreobjetos, espacio de trabajo y lente
objetivo) que tiene que atravesar un haz
luminoso hasta llegar a nuestros ojos, o al
impresionable, mejor será la imagen obtenida.

● Poder de Resolución:

El poder de resolución, o la resolución óptica, es

la capacidad que tiene un objeto de permitir
diferenciar dos puntos muy próximos como
imágenes separadas.

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 MICROSCOPÍA

● Contraste de Fases:

Las estructuras internas de las muestras (como

por ejemplo las células) tienen diferentes
índices de refracción, al igual que el medio que
les rodea, y este tipo de microscopía intenta
potenciar este fenómenos físico (recordar que la
onda al refractarse pierde velocidad, provocando
un desfase).

Para poder llevar a cabo este tipo de

microscopía es necesario seleccionar también
una parte del haz de luz, que afecta tanto al haz
antes de atravesar la muestra como a los rayos
que la han atravesado.

● Campo oscuro:

Se interpone un dispositivo opaco entre el haz

de luz y la muestra que solo permite pasar los
rayos periféricos y el objetivo solo recibe
aquellos rayos dispersados por la muestra,
mientras el resto se pierde.

De esta manera observamos unos límites muy

definidos sobre un fondo oscuro. Es muy útil para
muestras que no se pueden teñir y preparaciones
en vivo (lámina 1B) Por esta razón, se utiliza un condensador y un
objetivo especiales llamados de fase, y cada
objetivo de aumento ha de estar compaginado
con el del condensador.

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El resultado es un fondo grisáceo donde la

muestra queda muy contrastado y el interior con
diferentes grados de gris.

● Contraste de interferencia (Nomarski y

polarización):

Es una técnica de microscopía de luz que emplea

filtros polarizadores y prismas que producen
imágenes con tridimensionalidad, aunque el
relieve obtenido no es real
El paso de la luz a través de los prismas produce
birrefringencia, que es el fenómeno físico que
explota esta técnica.

También es útil para muestras que no se pueden

teñir, que se han de estudiar en vivo, o que
tienen numerosas ornamentaciones, como pelos,
escamas, etc (lámina 1C)

La polarización de la luz produce una mayor

acutancia de la imagen en los bordes de la
muestra. Este tipo de microscopía se caracteriza
por su buena resolución y contraste que ayudan
a discernir tanto detalles superficiales como
estructuras internas.

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 MICROSCOPÍA

Además, el uso de prismas permite obtener

imágenes de colores brillantes sin necesidad de
aplicar protocolos de tinción, ni de preparación
de muestras (lámina 1D).

● Epifluorescencia:
La fluorescencia es la capacidad que tienen
algunas sustancias de emitir luz en una longitud
de onda determinada, bien de forma espontánea
(natural) o bien provocada, cuando se excita
mediante una onda electromagnética de longitud
de onda característica.

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 MICROSCOPÍA

El microscopio de fluorescencia aprovecha esta

propiedad de las sustancias al poder manejar
mediante filtros la longitud de onda que incide y
que emite una muestra determinada.

Actualmente, el microscopio de fluorescencia

más utilizado es el de epifluorescencia, que
simplemente indica que la luz filtrada no
atraviesa la muestra sino que incide sobre ella a
través de la lente objetivo, y esta misma lente
es la encargada de recoger la luz que emite la
muestra excitada.

Generalmente, en microscopía de fluorescencia

la muestra es tratada con marcadores
fluorescentes, basados en fluorocromos
(sustancias capaces de emitir luz en una longitud
de onda determinada), de tal forma que se
puede controlar el tipo de fluorescencia que se
quiere observar y relacionarla con la estructura
marcada

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MICROSCOPÍA

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 MICROSCOPÍA

Los detalles de la óptica del microscopio

confocal son complejos y complementado por
métodos electrónicos y de computación, este
instrumento permite enfocar únicamente un
plano determinado del espécimen, eliminando la
luz (fluorescencia) procedente de las regiones
que no están en el plano de enfoque.

-Ventajas del microscopio confocal

• Uso de la fluorescencia (epi-fluorescencia).

• Enfoca un solo plano del espécimen.
• Elimina la información proveniente de otros
planos no enfocados del espécimen.
• Obtención de cortes ópticos seriados a partir
de muestras con cierto grosor o cuyo corte fino
se dificulta.
MICROSCOPIO CONFOCAL: • Gracias a programas de computación, se
combinan los cortes ópticos seriados y a partir
O Microscopio láser de barrido de ellos se reconstruye en tres dimensiones la
En la microscopía fotónica clásica el tejido debe estructura observada.
cortarse finamente para ser examinado y
mientras más delgado sea, más nítida será la -Principio de la microscopía confocal
imagen; pero con este método se pierde la
información tridimensional durante el corte. El microscopio confocal añade el principio de
iluminar el espécimen punto por punto y elimina
Si una muestra gruesa es observada al la luz proveniente de los planos no enfocados.
microscopio fotónico, la imagen que se enfoca se Para ello se necesita una fuente de luz muy
ve contaminada por la superposición de los potente, así como también un filtro con un
elementos del tejido que están fuera de foco, agujero que se coloca en el trayecto del rayo de
tanto por encima como por debajo del plano luz.
enfocado; la imagen enfocada se deteriora a
causa de las estructuras superpuestas borrosas o Minsky lo logró con una lámpara de arco de
no enfocadas. zirconio, pero en los microscopios modernos se
emplea un rayo láser, cuya longitud de onda
Con el microscopio confocal estas limitaciones puede estar disponible en un amplio rango de
han sido superadas, ya que es un instrumento frecuencias.
que permite realizar cortes ópticos finos a
muestras de tejidos más o menos gruesos y Esquema que muestra de manera simplificada el
realizar reconstrucciones en tres dimensiones a principio del microscopio confocal y el trayecto
partir de cortes seriados. de la luz. El rayo láser (luz azul) es filtrado por
un agujero y un espejo dicroico; luego es
Fue inventado en el año 1955 por el científico enfocado mediante un lente objetivo sobre el
estadounidense Marvin Minsky (116) al estudiar espécimen y estimula la fluorescencia presente
neuronas. Su mecanismo, basado en el en el mismo (luz verde).
microscopio de fluorescencia hace posible la
obtención de imágenes de la arquitectura
tridimensional de células y tejidos.

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microagujeros. Esta última técnica de
iluminación disminuye el daño a los especímenes
e incrementa la detección.

• Sistema óptico:
El sistema óptico de los microscopios está
basado en los principios fundamentales que se
mantienen inalterados, sin embargo están
complementados con los avances en óptica
moderna y la tecnología electrónica.

• Filtros de interferencia:
Incluyen espejos dicromáticos o dicroicos,
barreras con agujero de diámetro variable y
diversos filtros de excitación (para seleccionar la
longitud de onda de excitación del fluorocromo).

• Detectores:
Son fotodetectores muy sensibles a la
fluorescencia emitida. Para los microscopios con
múltiples rayos generalmente se usan cámaras
La luz coherente del rayo láser es dirigida por CCD (charge-coupled device).
espejos hacia el espécimen (el cual ha sido
previamente tratado mediante marcadores • Computadora:
fluorescentes) iluminándolo punto por punto y Configurada con los requisitos suficientes de
de manera seriada; la fluorescencia resultante memoria y procesador, tarjetas de video de alta
es medida también punto por punto. resolución, complementadas con software de
captura, análisis y procesamiento de imágenes,
Para obtener la información completa, el rayo así como también de impresoras de muy alta
láser debe ser desplazado por todo el espécimen calidad.
(en los planos x, y, z) y este proceso es lo que se
conoce como escaneo o barrido. Para reconstruir Micrografías comparativas entre las técnicas de
las imágenes a partir de los datos obtenidos, se fluorescencia con iluminación convencional o de
emplean programas de computación adecuados. campo amplio (serie superior, a, c, e) y la
iluminación en microscopía confocal (serie
-Configuración del microscopio confocal inferior b, d, f). Nótese en la serie superior la
cantidad de señal (fluorescencia) que está fuera
Los microscopios confocal modernos son de foco y la contrastante nitidez de las imágenes
instrumentos altamente sofisticados y sus de la serie inferior en las cuales sólo se obtiene
elementos principales son: exclusivamente la información del plano de
enfoque.
• La fuente de luz: Generalmente emplea una
fuente de luz muy poderosa (laser o lámpara de
arco). Se pueden utilizar sistemas de rayos laser
multi-frecuencia (en el rango ultravioleta, luz
visible e infra-roja) adaptados a los tipos de
marcadores fluorescentes empleados para el
contraste de los elementos celulares. Se han
desarrollado dos técnicas, la de escaneo con un
solo rayo (laser) y el escaneo con múltiples
rayos.

La primera es la más popular y emplea un par de

espejos controlados por computadora para
escanear el espécimen. La técnica multi-rayos
utiliza una lámpara de arco y el escaneo se
realiza gracias a un disco rotatorio (disco de
Nipkow) conformado por micro-lentes y

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 MICROSCOPÍA

-Cortes ópticos y reconstrucción 3D

Con el microscopio confocales posible obtener
una imagen de un plano determinado del
espécimen. Esta imagen se denomina sección o
corte óptico fino y puede estar en el rango de
0.5-1.5 micrómetros. Se pueden obtener de una
manera no invasiva a partir de especímenes -Aplicaciones del microscopio confocal:
fluorescentes cuyo espesor puede variar entre
50-100 micrómetros. En comparación a los otros tipos de
microscopios, el microscopio confocal
Las imágenes se obtienen en una secuencia o proporciona un método altamente sofisticado y
serie, de manera manual o mediante un sistema mejorado para obtener imágenes.
automatizado. Las imágenes 2D (dos
dimensiones) obtenidas a intervalos regulares En investigaciones en el campo de la biología
siguiendo el eje óptico son combinadas y celular y biomedicina es muy útil para medir
utilizadas para recrear una estructura en tres procesos dinámicos, realizar videos para
dimensiones (3D) mediante el empleo de capturar secuencias en muy corto tiempo en
software especializados. células vivas y otras aplicaciones.
Secciones ópticas seriadas de un grano de polen • Estudios de ADN y ARN.
de Pinus. Cada imagen fue obtenida a un • Morfología de organoides citoplasmáticos.
intervalo de 3 micrómetros. • Cirugía y otros métodos clínicos.
• Otras aplicaciones en el campo de la física, la
química y en tecnología alimentaria.

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN:

Se observa a través del espécimen (trans-

iluminación). El espécimen se corta en láminas
ultrafinas (en el orden de nanómetros) que se
colocan en una rejilla de cobre, la cual es
bombardeada con un haz de electrones
enfocado.

Una silueta del espécimen se proyecta en una

pantalla fluorescente o placa fotográfica situada
por debajo del mismo. La resolución puede ser
Reconstrucciones tridimensionales a partir de de 0,2nm
cortes ópticos obtenidos con el microscopio
confocal.

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 MICROSCOPÍA
imagen aumentada que se proyecta en una
pantalla fluorescente o una película fotográfica.
El espécimen se coloca en un dispositivo que
permite moverlo en dos direcciones, en un plano
perpendicular al plano del eje del microscopio.
La columna posee un sistema de vaciado
conectado a bombas de difusión o bombas
mecánicas que crean el vacío.

Conformación del microscopio electrónico de

transmisión:

• Una cámara al vacío, el cual es generado por

una bomba.
• Una columna donde se genera y viaja el haz de
electrones.
• Un sistema óptico que forma una imagen en
una pantalla fluorescente o en una placa El alto voltaje negativo aplicado al cátodo es
fotográfica. producido por un circuito eléctrico de alto
• Circuito electrónico estabilizador de voltaje. voltaje y las corrientes aplicadas a las lentes son
producidas por circuitos de bajo voltaje. Las
Como se vio anteriormente, el haz de electrones bombas de difusión e incluso las lentes (en
se obtiene calentando el filamento del cátodo; ciertos modelos de microscopios) son enfriadas
los electrones se aceleran aplicando un voltaje mediante un mecanismo de circulación de agua.
entre el cátodo y el ánodo. El cátodo posee un
potencial altamente negativo. MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO:

Se observa la superficie de un espécimen sólido

(epi-iluminación). Se puede lograr una resolución
de 10nm y un aumento hasta de 20.000x. Se
producen imágenes muy interesantes en 3D
(tridimensionales) gracias a una mayor
profundidad de campo.

Se escanea la superficie del espécimen con un

haz de electrones (primarios) y los electrones
que rebotan (secundarios) son recogidos por un
detector. La señal se observa en un monitor de
televisión. Los átomos del espécimen producen
rayos X que también son detectados.

Diseño del microscopio electrónico de barrido

Los cortes finos de tejido no muestran el arreglo
tridimensional de los constituyentes celulares y
aunque la tercera dimensión puede ser
reconstruida a partir de cortes seriados, es un
método largo y pesado.
El sistema óptico consiste en un condensador
que concentra y dirige el haz de electrones hacia El microscopio electrónico de barrido permite la
el espécimen; una lente objetivo y otra lente visualización de las muestras en 3D y el haz de
proyectora, las cuales en conjunto producen una electrones no atraviesa la muestra, por el

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 MICROSCOPÍA

contrario, incide sobre la superficie de la misma Componentes básicos del microscopio

y los electrones secundarios son captados por un electrónico de barrido:
detector y la señal es enviada a una pantalla de
televisión. • Sistema de alto vacío.
• El filamento emisor de electrones (cátodo).
La profundidad de campo obtenida por este • Lentes (electromagnéticas, electrostáticas o
microscopio es considerable; la imagen es superconductoras).
constituida de zonas brillantes y zonas oscuras • Generador del escaneo: El haz de electrones es
que dan un aspecto tridimensional. Sin embargo, desplazado por la superficie del espécimen de
solamente la superficie puede ser observada. una manera predeterminada.
• Detector de electrones secundarios.
• Pantalla de televisión.

Aberraciones:

Las mismas aberraciones que afectan las lentes

ópticas de cristal afectan la formación de las
imágenes en las lentes electromagnéticas:
• Aberración de esfericidad: Es la más
importante en la microscopía electrónica y es el
factor que más limita el poder de resolución.
• Distorsión: Cambios en la imagen de la forma
de los objetos (en barril, en almohadilla y
distorsión espiral).
• Curvatura de campo.
• Astigmatismo.
• Aberraciones cromáticas: Originadas por
variaciones en la velocidad de los electrones, los
cuales pueden abandonar el cátodo emisor a
diferentes velocidades, las cuales pueden ser
modificadas al ser sometidos a la aceleración por
la diferencia de voltaje.
• Otras: producidas por la rotación de los
electrones al pasar por el campo magnético.
La técnica se emplea para estudiar células Propiedades de las lentes electromagnéticas:
intactas y tejidos.
• Cada campo magnético posee una simetría
axial y actúa como una lente para los electrones.
• Todas las lentes electromagnéticas son
positivas.
• La velocidad de los electrones no se ve
afectada.
• La imagen formada está rotada e invertida en
relación al objeto.

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