Pruebas Bioquímicas para Enterobacterias
Pruebas Bioquímicas para Enterobacterias
Pruebas Bioquímicas para Enterobacterias
Ureasa
COLOR: ROSADO
INDICADOR: ROJO FENOL
SUSTRATO PRINCIPAL: UREA
PRINCIPIO
Es una diamida del ácido carbónico
Todas las amidas se hidrolizan fácilmente, con liberación de amoniaco y
dióxido de carbono.
El amoniaco reacciona en solución para formar carbonato de amonio, lo que
produce alcalinización y aumento de pH del medio.
MEDIOS DE CULTIVO
Los dos medios utilizados con mayor frecuencia son el caldo urea de Stuart y el
agar urea de Christensen.
PROCEDIMIENTO El medio liquido se siembra con un ansa de cultivo puro del
microorganismo por probar. La superficie inclinada del agar (pico de flauta) se
siembra en estría con el microorganismo por probar. Ambos medios se incuban
a 35 °C durante 18 a 24 horas.
RESULTADOS Los microorganismos que hidrolizan la urea rápidamente pueden
producir reacciones positivas en l o 2 horas; las especies menos activas pueden
requerir 3 días o más. Las reacciones son las siguientes:
Caldo de Stuart: Un color rojo en todo el medio indica alcalinización e
hidrolisis de la urea.
Agar de Christensen: Degradadores rápidos de la urea (especies de
Proteus): color rojo en todo el medio. Degradadores lentos de la urea
(especies de Klebsiella): inicialmente color rojo solo en el pico de flauta,
que gradualmente se extiende a todo el tubo.
Ausencia de hidrolisis de la urea: el medio conserva su color amarillo
original.
Voges- Proskauer
El acido pirúvico, se metaboliza da como resultado la producción de
acetoina (acetil metil carbinol)
Los microorganismos del grupo Klebsiella- Enterobacter-Hafnia-Serratia
producen acetoina como producto metabólico final principal del
metabolismo de la glucosa y forman cantidades pequeñas de ácidos mixtos.
En presencia de oxigeno atmosférico e hidróxido de potasio al 40%, la
acetoina se convierte a diacetilo y el a-naftol sirve de catalizador para
producir un complejo de color rojo.
MEDIOS DE CULTIVO A. Caldo VP/RM El medio utilizado con mayor frecuencia
es el caldo de rojo de metilo- Voges-Proskauer (MR/VP) según la fórmula de
Clark y Lubs.
PROCEDIMIENTO Sembrar un tubo de caldo MR/VP con un cultivo puro del
microorganismo por probar.
Incubar 24 horas a 35 °C.
Finalizada la incubación, transferir 1 ml del caldo a un tubo de ensayo limpio.
Agregar 0,6 ml de a-naftol al 5%, seguidos de 0,2 ml de KOH al 40%.
Es esencial que los reactivos sean agregados en ese orden.
Agitar suavemente el tubo para exponer el medio al oxigeno atmosférico y
dejar el tubo en reposo durante 10 a 15 minutos.
RESULTADOS
Positivo: desarrollo de color rojo 15 minutos o más después del agregado de
los reactivos, que indica la presencia de diacetilo, el producto de oxidación
de la acetoina. La prueba no debe leerse más allá de una hora después de
dejar los tubos en reposo, porque los cultivos Voges-Proskauer negativos
pueden producir un color cobrizo, que se puede interpretar como un positivo
falso.
Agar sangre
El agar sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con fuente
proteica (digeridos trípticos, digeridos proteicos de soja) el cual tiene un
agregado de 5 % de sangre ovina, (también puede usarse sangre humana, para
cultivos en una placa de Agar) con una pequeña cantidad de hidratos de carbono
naturales y cloruro sódico.
Se usa para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos
(que es un factor de virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor
de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee:
Alfa: halos verdosos Beta: halos incoloros Gamma: inexistencia de halos.