Aspectos Generales y Potencialidades de cinco especies del Género Bacillus en la

promoción del crecimiento vegetal y el control Biológico de hongos fitopatógenos

Género Bacillus
Las bacterias Gram positivas formadoras de endospora se agrupan en el género Bacillus y otros géneros relacionados,
recientemente separados taxonómicamente. Estos microorganismos se han estudiado desde hace muchos años con fines industriales
y agrícolas. Las bacterias del género Bacillus se encuentran ampliamente distribuidas en los más diversos hábitats que incluyen
ecosistemas de agua dulce, marinos y en suelo, y sus especies están muchas veces asociadas a plantas.
En este último caso, se han demostrado las potencialidades de las especies del género Bacillus para la producción de
antibióticos, enzimas, la solubilización de fosfatos y la fijación biológica del nitrógeno. En este sentido, se han realizado estudios de
promoción del crecimiento vegetal y control biológico de patógenos, buscando estrategias que permitan la disminución del uso de
fertilizantes químicos, que no solo encarecen la producción, sino también, traen consigo un impacto negativo sobre el medio
ambiente. El estudio integral de estas bacterias permitiría su utilización en diversas esferas, fundamentalmente en la agricultura, por
lo que en el presente escrito, se abordan los principales aspectos estudiados hasta el momento en el género Bacillus, así como sus
potencialidades para ser utilizados en la Biotecnología Agrícola.

Género Bacillus. Clasificación actual

El género Bacillus comprende un grupo de especies filogenética y fenotípicamente heterogéneas. Incluye más de 100
especies y sus miembros se consideran ubicuos. En una etapa temprana de la clasificación de las especies del género Bacillus se
tienen en cuenta dos características fundamentales: el crecimiento aerobio, la respuesta positiva a la tinción de Gram, la forma
bacilar y la formación de endospora. Esto hace que exista una gran cantidad de especies de este género ocupando una gran variedad
de hábitats. Debido a esto, la heterogeneidad en la fisiología, ecología y la genética dificulta la clasificación del género o la
generalización sobre este.
Sobre la base de estudios moleculares de la secuencia del RNAr 16S, este género se ha subdividido en cuatro grupos. El
primero pertenece a Bacillus senso stricto en el cual se incluye Bacillus subtilis y otras 27 especies. El segundo, también conocido
como sensu lato, incluye bacilos formadores de esporas redondeadas, en el que se destacan las especies B. cereus, B. thuringiensis y
B. anthracis y unidos a estos se encuentran algunos taxas asporógenos como Caryphanon, Exiguobacterium, Kurtia y Planococcus
debido a que presentan cierta similitud con Bacillus subtilis. Por su parte, el grupo 3 está formado por 10 representantes, dentro de
los que se encuentra B.polymyxa y B. macerans, los cuales se han reclasificado en un nuevo género, Paenibacillus.
 El grupo 4, se encuentra formado por especies que han sido reclasificadas en dos nuevos géneros Aneuribacillus y
Brevibacillus. Por otra parte, se ha creado un nuevo género (Virgibacillus) en el que se ubicó la especie B. panthotenicus. Finalmente,
se han descrito nuevas especies del género aisladas de diversos ecosistemas que incluyen a B. mojavensis y B. vallismortis, B.
ehimensis y B. chitinolyticus, B. infernus B. carboniphilus y B. horti.

Principales características
Este género comprende una amplia diversidad de tipos fisiológicos, donde se destacan características como la degradación de
la mayoría de los sustratos derivados de plantas y animales, incluyendo celulosa, almidón, pectina, proteínas, agar, hidrocarburos y
otros; además de su capacidad para la producción de antibióticos, la nitrificación, la desnitrificación, la fijación de nitrógeno, la
litotrofía facultativa, la acidofilia, la alcalofilia, la psicrofilia, la termofilia y el parasitismo, ejemplifican su capacidad de sobrevivir en
diversos ambientes. Los miembros de este género se caracterizan por ser Gram positivos, de forma bacilar, catalasa positiva, aerobios
estrictos o anaerobios facultativos y formadores de endosporas. Su ciclo de vida se divide en dos fases: crecimiento vegetativo y
esporulación. Durante el primer estado, la bacteria crece de forma exponencial cuando se encuentra en un medio donde las
condiciones son favorables. Cuando los nutrientes comienzan a escasear, la bacteria esporula, formando una endospora, la cual
puede permanecer para volver a su forma vegetativa. También se ha visto que existe una gran distribución de estas endosporas,
estructura que les permite sobrevivir en condiciones extremas de temperatura desecacion, pH entre otros.
 Principales especies del género presentes en suelo asociadas a plantas

El suelo constituye el sustrato en el que la mayor variedad de microorganismos se pueda encontrar. Esto se justifica por la
presencia de elevadas concentraciones de nutrientes que existen en él. Los géneros más comunes encontrados en ecosistemas
terrestres son Pseudomonas, Burkholderia, Acinetobacter, Arthrobacter, Azospirillum y Bacillus, entre otros. Este último comprende
una amplia variedad de especies que se encuentran en muchas ocasiones, asociadas a las plantas, ejerciendo un efecto positivo sobre
el crecimiento a través de una serie de mecanismos que involucran la promoción del crecimiento vegetal y el control biológico de
patógenos. Los miembros de este género, se han aislado de numerosos cultivos de interés económico como la caña de azúcar, el
algodón, el trigo, el maíz, la papa y el arroz. Dentro de las especies que se pueden aislar de forma más frecuente asociadas a las
plantas, ya sea la rizosfera o los tejidos internos, se destacan B. subtilis, B. megaterium, B. licheniformis, B. circulans y B. cereus. Se
han descrito diferentes potencialidades en cepas de este género para promover el crecimiento de las plantas, aunque sin dudas, se
ha estudiado más profundamente la capacidad de ejercer efecto antagónico contra una gran variedad de hongos fitopatógenos.
 MECANISMOS DE ACCIÓN DEL GÉNERO BACILLUS EN BENEFICIO DE LAS PLANTAS

La promoción del crecimiento vegetal por parte de las especies del género Bacillus puede ocurrir de forma directa o indirecta.
Un efecto directo sobre la promoción del crecimiento vegetal se observa en bacterias rizosféricas que tienen la capacidad de llevar a
cabo la fijación biológica del nitrógeno, la solubilización de minerales como el fósforo y la producción de hormonas reguladoras del
crecimiento vegetal. Por su parte, la forma indirecta de promoción del crecimiento vegetal está relacionada con la producción de
sustancias que actúan como antagonistas de patógenos o induciendo resistencia en las plantas.

Reguladores del crecimiento vegetal

Los reguladores del crecimiento vegetal son sustancias que en pequeñas concentraciones influyen sobre el metabolismo de las
plantas, lo que trae consigo variaciones en su crecimiento y desarrollo, tanto por inhibición como por promoción. Dentro de los
reguladores del crecimiento vegetal se encuentran las fitohormonas, formadas por un grupo de sustancias con actividad biológica
que actúan sobre una determinada parte de la planta causando un efecto de crecimiento específico o de diferenciación. Entre ellas,
se pueden encontrar auxinas, giberelinas y citoquininas. En el caso del género Bacillus, se ha demostrado la producción de
fitohormonas por las especies Bacillus pumilus y Bacillus licheniformis en la rizosfera de la planta Alnus glutinosa. Por otra parte se ha
informado la producción de este tipo de metabolitos en Bacillus subtilis aislados de la planta Dioscorea rotundata , en la que ejerce
un efecto positivo sobre el crecimiento vegetal.
 Solubilización de fosfatos

El fósforo es uno de los nutrientes limitantes del crecimiento de las plantas. Dentro de las funciones que se le han atribuido, se
encuentran la captación, almacenamiento y transferencia de energía, además de formar parte de macromoléculas tales como, ácidos
nucleicos y fosfolípidos presentes en la membrana citoplasmática. Una gran cantidad de fosfatos inorgánicos aplicados al suelo como
fertilizantes son inmovilizados después de su aplicación, permaneciendo de forma inaccesible para la planta. Esto permite predecir
que aquellos microorganismos que colonicen la raíz de estas plantas y que tengan la capacidad de solubilizar este fósforo, como por
ejemplo, bacterias de los géneros Bacillus y Enterobacter, actúen como promotores del crecimiento vegetal.
El género Bacillus es uno de los más estudiados respecto a esta capacidad y dentro de él se destacan las especies B.
megaterium y B. subtilis debido a que excretan al medio ácidos orgánicos como principal mecanismo de solubilización, aunque
también pueden actuar enzimas como las fitasas. En este sentido, Rudresh et al. han determinado que B. megaterium subsp.
Phospaticum tenido elevados valores de eficiencia de solubilización de fosfatos inorgánicos in vitro.
 Fijación biológica del nitrógeno

La fijación biológica del nitrógeno atmosférico constituye, después de la fotosíntesis, la ruta metabólica más importante para
el mantenimiento de la vida en la biosfera. Curiosamente, este proceso crucial solo pueden llevarlo a cabo unos pocos grupos de
seres vivos, todos ellos procariotas, los cuales están distribuidos prácticamente en todas las ramas de bacterias y archeas. La fijación
biológica del nitrógeno es un proceso microbiano en el que el nitrógeno atmosférico se reduce a amonio y se incorpora a la biomasa,
con lo que pasa a constituir la fuente principal de nitrógeno para las plantas. Este proceso se lleva a cabo por la enzima nitrogenasa,
presente en todos los microorganismos fijadores del nitrógeno. Se estima que 175 millones de toneladas de nitrógeno por año se
adicionan al suelo a través de la fijación biológica del nitrógeno y se calcula que el 60 % del nitrógeno usado por las plantas proviene
de la fijación biológica. Teniendo en cuenta esto, se podría reducir considerablemente el uso de fertilizantes nitrogenados en la
agricultura si se emplearan los microorganismos que puedan llevar a cabo esta función.
El género Bacillus presenta una gran versatilidad metabólica y se ha demostrado su capacidad de llevar a cabo el proceso de
fijación biológica de nitrógeno. En Cuba se han utilizado especies del género Bacillus en coinoculaciones con bacterias del género
Azospirillum en plantas de soya. Estos trabajos han posibilitado un aumento en la actividad nitrogenasa, lo que estaría relacionado
con un aumento en la fijación del nitrógeno atmosférico.
 Control biológico de patógenos

Los microorganismos patógenos de plantas influyen de forma negativa sobre la producción de alimentos y la estabilidad de los
ecosistemas. Debido a la intensificación en el uso de compuestos químicos como un método de protección de las cosechas, lo que ha
incrementado efectos negativos como el desarrollo de cepas patógenas resistentes a estos compuestos, además del impacto
ambiental que ellos ocasionan. Por otra parte se ha observado que la aplicación de compuestos químicos en la agricultura es
insuficiente para ejercer el control de patógenos en cultivos de importancia económica.
En las últimas décadas, gran diversidad de microorganismos rizosféricos, se han descrito, caracterizado y en muchos casos
probado en cuanto a su actividad como agentes de control biológico de patógenos de cultivos de importancia económica.
Aprovechando las relaciones de competencia, la producción de antibióticos, enzimas y de otras sustancias como sideróforos, estos
microorganismos ejercen su capacidad biocontroladora, lo que permite la reducción del uso de plaguicidas de origen químico, por lo
que las producciones se hacen menos costosas y se disminuyen las afectaciones al medio ambiente. El género Bacillus es uno de los
más explotados en este sentido dada su gran versatilidad metabólica y su amplia capacidad de producir metabolitos contra
microorganismos patógenos. En numerosos trabajos realizados, se ha informado la capacidad que presentan cepas de Bacillus
licheniformis, Brevibacillus laterosporum y Paenibacillus polymyxa como agentes de control biológico al ejercer efecto antagónico in
vitro contra Pectobacterium carotovorum, agente causal de la pudrición blanda de la papa. En cepas aisladas del cultivo del arroz en
se ha demostrado in vitro la capacidad de inhibir el crecimiento de hongos fitopatógenos que causan grandes pérdidas en este cultivo
como es el caso de Pyricularia grisea, Alternaria solani, Curvularia sp. y Fusarium sp.
 Se destaca la inhibición del crecimiento fúngico de estos hongos fitopatógenos al enfrentarlos a los distintos aislados de
especies pertenecientes al género Bacillus, lo que está relacionado con la amplia versatilidad metabólica de estos microorganismos
que les permite la producción de compuestos antifúngicos.
La actividad antagónica contra una amplia variedad de microorganismos fitopatógenos es una ventaja de las cepas de este
género que debe aprovecharse en función de la obtención de bioproductos, así como la diversidad de mecanismos que acción de
estas bacterias, en los cuales se debe profundizar aún más. La determinación de los mecanismos involucrados en la actividad
antagónica y la realización de experimentos PGPB-planta patógeno contribuirían al uso de estos microorganismos en el control
biológico de una amplia variedad de hongos fitopatógenos de cultivos de interés económico.

Producción de antibióticos
La producción de compuestos antimicrobianos es muy común entre las bacterias y los hongos. Estos compuestos son
sintetizados y excretados con el objetivo de eliminar la competencia que pueda existir en su hábitat natural. En muchos sistemas de
control biológico, uno o más antibióticos desempeñan un papel importante en la supresión de enfermedades. Además, se han
realizado estudios moleculares que han sido efectivos para determinar esta capacidad presente en algunas bacterias, debido a la fácil
obtención de mutantes defectivos en la producción de estos compuestos. El género Bacillus ha sido estudiado ampliamente respecto
a la producción de antibióticos. En este sentido, se ha informado que especies como Bacillus subtilis producen algunos antibióticos,
dentro de los que se encuentra la fengicina, con elevado potencial de aplicación en la industria-biofarmacéutica y Bacillus cereus que
tiene la capacidad de producir zwitermicina A, un antibiótico que no solo suprime el crecimiento de hongos fitopatógenos que
afectan a cultivos de interés agrícola, sino que también potencia la acción insecticida de las toxinas proteicas producidas por B.
thuringiensis.

Producción de enzimas líticas

Una gran variedad de microorganismos producen enzimas de diferentes tipos que actúan contra otros microorganismos que
están presentes en su hábitat. Entre ellas, se destacan las quitinasas, hidrolasas y proteasas que actúan fundamentalmente sobre los
hongos. Estos hongos resultan en muchos casos fitopatógenos, lo que trae consigo grandes pérdidas en cultivos de importancia
económica como el arroz, sorgo, y soya, entre otros. Se ha demostrado la producción de este tipo de metabolitos en B. subtilis y entre
ellos, se destacan lipasas, proteasas y β glucanasas que actúan sobre el patógeno fúngico Fusarium oxysporum.

Producción de sideróforos
El hierro es un elemento esencial en el crecimiento de los organismos. La escasez de este elemento en formas asimilables por
los microorganismos en el suelo o en la superficie de las plantas, fomenta una gran competencia. Bajo condiciones limitantes de
hierro (Fe3+), el cual es muy insoluble, algunas bacterias promotoras del crecimiento vegetal producen sideróforos para competir por
la adquisición de este elemento. Estos son compuestos de bajo peso molecular y solubles en disoluciones acuosas a pH neutro, que
pueden ser fluorescentes o no. Se ha propuesto un mecanismo de acción para el secuestro de hierro por parte de estos
microorganismos. El mecanismo plantea que en condiciones de escasez de hierro, las bacterias producen y excretan los sideróforos,
una vez que es secuestrado el hierro del medio, el complejo sideróforo-hierro es reconocido por receptores específicos de membrana
y una vez dentro de la célula, se deposita en un sitio específico por un proceso que involucra un intercambio de ligandos que puede
estar precedido o no por la reducción del hierro o por la hidrólisis del sideróforo.
La producción de este tipo de metabolito está mejor caracterizada en el género Pseudomonas aunque también, se ha visto
que las especies del género Bacillus produce sideróforos, tal es el caso de la especie Bacillus megaterium en la que se ha descrito el
sideróforo esquizokinen. También se determinó la producción de los sideróforos bacilibactina, ácido itoico y ácido 2,3
dihidroxibenzoico por parte de la especie B. subtilis. La presencia de este tipo de metabolito representaría una ventaja para estos
microorganismos, ya que podrían adquirir el hierro proveniente del medio ambiente de una forma más fácil que el resto de los
microorganismos. De esta forma, se podría aprovechar esta competencia para combatir las enfermedades en los cultivos de
importancia económica producidas por microorganismos patógenos.
 Particularidades de algunas especies del Género Bacillus

Bacillus subtilis

Es una bacteria Gram positiva, Catalasa-positiva, aerobio, comúnmente encontrada en el suelo. Miembro del Género Bacillus,
B. subtilis tiene la habilidad para formar una resistente endospora protectora, permitiéndole tolerar condiciones ambientalmente
extremas. Tiene una actividad fungicida natural, y es empleado como un agente de control biológico.

Se encuentra dentro de las bacterias antagonistas más estudiadas, donde se destaca en el control de enfermedades del
filoplano y en post cosecha. B. subtilis es efectivo en la prevención y control de enfermedades causadas por varias especies de
patógenos. Actúa inhibiendo la germinación de las esporas y el crecimiento del tubo germinativo y micelial de los patógenos,
bloqueando al ataque del patógeno en la superficie foliar por la formación de una zona de inhibición y también por inducción de
resistencia en el hospedero. Productos formulados a partir de Bacillus subtilis son utilizados en todo el mundo desde 1983, para el
tratamiento de las semillas, aplicaciones foliares y el suelo. Las condiciones edafoclimáticas ideales para su desarrollo se sitúan en
un rango de pH 5-8 y una Tª de 15 a 50 ºC con un optimo de 28 a 35 ºC con valores altos de humedad relativa.

Pertenece al grupo de bacterias denominadas psb (phosphate solubilizing bacteria), es decir, que es capaz de solubilizar el
fósforo mineral haciéndolo accesible a la planta. De los bacilos hasta ahora estudiados, este es el más versátil, ya que su rápida
colonización inhibe el desarrollo de hongos y bacterias fitopatógenas, además de que promueve el crecimiento cuando se aplica al
suelo, ya que ayuda a la microflora de la rizósfera a desarrollarse adecuadamente.

Distintos autores la han descrito como agente de biocontrol capaz de ejercer un papel protector frente a determinados
patógenos vegetales. Promotor de microbiología benéfica y auxiliar en el combate de plagas en el suelo.
Bacillus megaterium

Pertenece al grupo de bacterias denominadas PSB (Phosphate Solubilizing Bacteria), es decir que es capaz de solubilizar el
fósforo mineral haciéndolo accesible a la planta, algunos estudios la han descrito como agente de biocontrol capaz de ejercer un
papel protector frente a determinados patógenos vegetales. Es muy común encontrarla en el suelo y se considera saprófita. Produce
numerosas enzimas como amilasas y proteasas. Gram positiva, aerobia y anaeróbica facultativa, formadora de esporas. Llega a medir
hasta 4 micras de longitud y 1.5 micras de diámetro, por lo que se considera una de las bacterias más grandes conocidas. Crece en
temperaturas que van desde los 3-45 grados, con una óptima de 30.
Bacillus megaterium es una de las bacterias más conocidas utilizadas en la mejora de cultivos debido a su capacidad endófita
que lo hacen un buen agente de control biológico frente a enfermedades fúngicas. También se ha demostrado la capacidad de
fijación del nitrógeno y del potasio presente en el suelo. Activa rutas fotosintéticas, aumentando el desarrollo vegetativo e interviene
en el transporte de azúcares. También mejora la absorción de nutrientes y activa el desarrollo de raíces y tubérculos.
Se cree que Interviene en varias rutas metabólicas de la planta debido a la gran cantidad de fósforo bio-transformado que sus
componentes liberan del suelo hacia la planta. En B. megaterium, también se ha encontrado que produce otras enzimas como
fosfatasas ácidas y alcalinas, fitasas (que hidrolizan el fitato, una de las formas orgánicas de fósforo más comunes en los tejidos
vegetales) y estearasas vinculadas con la degradación de los fosfolípidos.
Bacillus mycoides

Bacillus mycoides es una bacteria gram-positiva formadora de esporas del género Bacillus . Las células de Bacillus mycoides
generalmente tienen más de 3 micrómetros, forman cadenas de células, pueden formar ácido a partir de glucosa y esta forma no es
móvil. También puede hidrolizar almidón. B. mycoides es un organismo común del suelo y como la mayoría de especies del Género,
es considerada un microorganismo saprófito.

Actualmente, cepas de Bacillus mycoides se encuentran en biopesticidas comerciales y se usan para inhibir el crecimiento de
bacterias y hongos fitopatógenos.

Bacillus mycoides es considerada una bacteria amonificadora, ya que puede convertir la peptona (proteína, una fuente de
nitrógeno orgánico) en amoniaco. En presencia del agua, el amoníaco se convierte en amonio. Este producto es esencial para las
bacterias nitrificantes, como Nitrosococcus , que utiliza el amoníaco en condiciones aeróbicas para producir nitrito, un importante
compuesto que participa en el ciclo del nitrógeno en el suelo.
Bacillus licheniformis
Es una bacteria de tipo Gram positiva, tiene un gran parecido genómico con Bacillus subtilis. Habita normalmente en agua y en
suelo, lugar donde produce esporas como mecanismo de conservación y proliferación. Es un bacilo de tipo anaerobio facultativo, lo
cual favorece su crecimiento en presencia o ausencia de oxígeno. Representa una bacteria de importancia industrial debido al uso
comercial y agrícola de algunos de sus productos extracelulares utilizados para la producción de enzimas, antibióticos y productos
químicos.

Entre las enzimas que secreta este microorganismo se encuentran serín proteasas alcalinas, también llamadas subtilisinas, las
cuales tienen usos como aditivos para detergentes domésticos. Además se obtienen productos de fermentación a partir de diferentes
cepas de Bacillus licheniformis como las amilasas, en particular la α-amilasa que muestra una actividad estable en niveles altos de
temperatura y pH; y el antibiótico bacitracina.

Esta puede crecer también anaeróbicamente a expensas de substratos orgánicos no fermentables cuando se le suministra nitratos, ya que es un
vigoroso desnitrificante; es la única especie del género que tiene esta capacidad. Es utilizada también como un agente de biocontrol – biofertilizante.
Bacillus licheniformis puede ser aislado de casi todas partes debido a sus endosporas altamente resistentes que se difunden con el polvo fácilmente.
Bacillus amyloliquefaciens

Bacillus amyloliquefaciens es una bacteria de Gram positiva, está relacionada estrechamente con bacterias de suelo de la
especie Bacillus subtilis. Las dos especies comparten muchos genes homólogos y aparecen tan similares que no es posible separar
visualmente las dos especies.
B. amyloliquefaciens presenta bacilos con flagelos perítricos permitiendo la motilidad. Las células a menudo aparecen como
largas cadenas a diferencia de muchas otras especies de Bacillus que se forman como células individuales. La temperatura óptima
para el crecimiento celular es de entre 30 y 40 grados Celsius. Al igual que en otras especies de Bacillus, B. amyloliquefaciens forma
esporas que permiten la supervivencia durante un largo período de tiempo. Sus Endosporas aparecen en el centro de las células que
no tienen una apariencia inflamada. Produce gran cantidad de enzimas amilasas y proteasas, lo que le confiere una gran capacidad
degradadora. Solubilizadora de fosfatos y con propiedades de control biológico, se han comparado sus propiedades con Bacillus
subtilis.
Por otro lado, algunos autores han resaltado la capacidad de B. amyloliquefaciens cuando se encuentra en la rizósfera, para
poder detectar y detener el daño o necrosis inicial en la planta ocasionado por organismos fitopatógenos.
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