Informe de Electroforesis de Proteinas

SANCHEZ GOMEZ DN; VILLAMIZAR MOGOLLON YT; CASTRO LEON DH; MORA PINILLA KE
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS
RESUMEN
La electroforesis es una técnica que permite la separación de las proteínas de acuerdo a sus
características físicas. Dicha separación se realiza en condiciones desnaturalizantes, de modo que al
añadir compuestos que alteran las condiciones naturales de las proteínas se agrupan en solución
conocida como tampón de carga que es la encargada de que se realice la movilidad electroforética.
Para la caracterización de las proteínas presentes en cada muestra se realizan dos geles diferentes para
los cuales en cada uno se siembra el marcador de peso molecular el cual permite hacer la comparación
de las proteínas reportadas para las muestras; esto se realiza teniendo en cuenta los factores de
retención (Rf) de las proteína presentes en dicho marcador. Además, se tiene en cuenta el peso
molecular de cada proteína porque con este se conoce que existe la relación, entre menor peso
molecular hay mayor migración de la proteína.
En seguida se muestra, como se realiza dicha comparación de las proteínas de cada muestra.
PALABRAS CLAVE: Electroforesis, proteínas, factor de retención y peso molecular.
ABSTRACT
Electrophoresis is a technique that allows the separation of proteins according to their physical
characteristics. This separation is carried out under denaturing conditions, so that when compounds
are added that alter the natural conditions of the proteins, they are grouped in a solution known as a
charge buffer that is in charge of carrying out the electrophoretic mobility. For the characterization
of the proteins present in each sample two different gels are made for which in each one the molecular
weight marker is sowed which allows the comparison of the proteins reported for the samples; this is
done taking into account the retention factors (rf) of the protein present in said marker. In addition,
the molecular weight of each protein is taken into account because it is known that the relationship
exists, the lower the molecular weight the greater the migration of the protein.
It is then shown how this comparison of the proteins in each sample is made.
KEYWORDS: electrophoresis, proteins, retention factor and molecular weight.
INTRODUCCION campo eléctrico, emplearon como soporte para

la electroforesis un gel de poliacrilamida
La electroforesis es un método analítico –
(PAGE), posteriormente el método fue
semipreparativo, en el que se separan
perfeccionado. La popularidad de este creció
biomoléculas, en dependencia entre otros
rápidamente y se logró un aumento de la
factores de su carga y bajo la acción de un
resolución. El dodecil sulfato de sodio (SDS) diferencia de las proteínas, que pueden tener
se introduce en esta técnica generando que se una carga positiva o negativa, los ácidos
empleen agentes reductores y SDS en la nucleicos sólo poseen carga negativa, debido a
determinación del peso molecular de proteínas su esqueleto de fosfatos. En el caso de las
en lo que se denominó electroforesis en geles proteínas se realiza pretratamiento con
de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE). detergentes, como el dodecilsulfato de sodio
(Lopez y Sandoval) (SDS), que les confiere carga negativa; con
ello se homogenizan las proteínas de la
muestra y todas migrarán hacia el polo
positivo, y sólo se separarán por tamaño.
(Naragon, 2015)
Figura 1. Cubeta de electroforesis
La cámara de electroforesis es un dispositivo Figura 2. Cámara de electroforesis

que permite la generación de un campo
eléctrico alrededor de un gel donde se
depositan las muestras. Este campo se genera Harinas utilizadas
dentro de una solución amortiguadora en la
Frijol
que se encuentra sumergido el gel que contiene
las muestras; el alto contenido de electrolitos Dependiendo del tipo de frijol, el contenido de
permite la transmisión de la corriente eléctrica, proteí- nas varía del 14 al 33%, siendo rico en
manteniendo el pH estable al paso de la aminoácidos como la lisina (6.4 a 7.6 g/100 g
corriente. de proteína) y la fenilalanina más tirosina (5.3
a 8.2 g/100 g de proteína), pero con
La mayoría de las biomoléculas poseen una
deficiencias en los aminoácidos azufrados de
carga eléctrica cuya magnitud depende del pH
metionina y cisteína. Sin embargo, de acuerdo
del medio en el que se encuentran; como
a evaluaciones de tipo biológico, la calidad de
consecuencia, pueden desplazarse cuando se
la proteína del frijol cocido puede llegar a ser
ven sometidas a un campo eléctrico hacia el
de hasta el 70% comparada con una proteína
polo de carga opuesta al de la molécula. A
testigo de origen animal a la que se le asigna Haba

el 100%.(Sathe, Deshpande y Salunkhe, 1982)
Debido a la cantidad de proteínas de las habas,
Garbanzo se puede decir que habas es un alimento rico
en proteínas. están formadas por aminoácidos
En aislados proteicos a partir de semillas de
como ácido aspártico, ácido glutámico,
garbanzo molidas por extracción alcalina y
alanina, arginina, cistina, fenilalanina, glicina,
precipitación ácida de las proteínas en el punto
histidina, isoleucina, leucina, lisina,
isoeléctrico (pI 4.3). El porcentaje de proteína
metionina, prolina, serina, tirosina, treonina,
recuperada de la harina de garbanzo en la
triptofano y valina. Estos aminácidos se
preparación de los Aislados A y B fue de 65.9
combinan para formar las proteínas de las
y 62.1%, respectivamente. (Roy,Boye y
habas secas. (Amanzon)
Simpson, 2009)
Lenteja Y Arveja
Marcador de peso molecular y sus distintas
La lenteja (Lens culinaris) es una leguminosa proteínas
de alto valor nutritivo debido a su contenido de
proteínas (28%), En la composición química
de los guisantes y las lentejas. En general,
guisantes y lentejas contienen de 15 a 40% de Proteína Peso molecular
proteínas. Las proteínas de leguminosas como
lo son guisante y lenteja son principalmente Carbonic Anhydrase 29 kDa
proteínas de almacenamiento que comprenden
dos principios globulinas, leguminosas y Albumin Egg 45 kDa
vicilinas. (Perales,Rodriguez,Valero,
Ruiz,Avila y Varela)
Albumin Bovine 66 kDa
Girasol Phosphorylase B 97 kDa
Las proteínas de reserva de semillas

𝛽-Galactosidase 116 kDa
normalmente se clasifican en base a su
solubilidad, según lo propuso Osborne (1924),
en: albúminas (solubles en agua), globulinas Myosin 200 kDa
(insolubles en agua, pero solubles en
Proteínas que contiene el marcador de peso
soluciones salinas diluídas), prolaminas
molecular. (Merck, 2019)
(solubles en alcoholes) y glutelinas (solubles
en soluciones alcalinas). Siguiendo esta
clasificación, las proteínas mayoritarias en las Anhidrasa Carbonica: La anhidrasa carbónica
semillas de girasol son globulinas y (CA) es una enzima que mejora la hidrólisis
albúminas, representando el 40-90% y 10-30% del Dioxido de Carbono en el ambiente natural
del total de las proteínas. (Salvador,Mauri y y se origina entre otras formas de vida que los
Petruccelli, 2009) seres humanos. (Vadanyan y Hruby, 2016)
Phosphorylase B: Normalmente se presenta

como un homotetrámero, pero la forma
funcional se cree que es el homodímero, esto
es, formada por dos subunidades iguales, cada
una de 842 aminoácidos (Salamanca)
Figura 3. Estructura de Anhidrasa carbónica.
La Albúmina Bovina: Es la proteína más

abundante del plasma. Está constituida por
585 a.a. con 17 puentes disulfuro
entrecruzados en su molécula y tiene un peso
molecular de 66 KDa (Pabon,Camargo y
Ramirez, 2007)
Figura 6. Estructura proteica Fosforilasa B
Miosina: La miosina es una ATPasa, es decir,
el subconjunto de enzimas que son capaces de
producir la hidrólisis del adenosín trifosfato
(ATP) en adenosín difosfato (ADP) y un ion
de fósforo (ion fosfato) libre. Esta reacción es
exergónica ya que libera energía. (Yanexis,
2018)
Figura 4. Estructura proteica Albumina

bovina
Figura 7. Estructura proteica de la miosina.
Figura 5. Estructura proteica de albumina de

huevo.
𝜷-Galactosidasa: Es básicamente un tetramer

compuesto por cuatro cadenas polipeptídicas
idénticas, cada una de las cuales constituye
1023 aminoácidos.
(Coli, 2019)
Figura 8. Estructura de reacción, geles de

poliacrilamida.
MATERIALES Y MÉTODOS
Preparación de los geles de acrilamida

El inicio de la práctica consta de la preparación
de la mezcla de los geles de electroforesis,
iniciando con la parte de preparación del gel
de separación, para esto se prepara una
Figura 8. Estructura proteica β- concentración de 10% acrilamida en un vaso
galactosidasa
de precipitado y con ayuda de la micropipeta
Los geles de poliacrilamida se forman por la agregamos los reactivos en los volúmenes
polimerización vinílica del monómero respectivos, 1,90 mL de agua destilada, 1,70
acrilamida CH2=CH-CO-NH2 y del mL de acrilamida / bis acrilamida al 30%, 1,30
monómero entrecruzador N, N'-metilen-bis- mL de Buffer Tris 1.5 M pH 8.8 M, 50,0 μL de
acrilamida CH2 = CH- CO - NH - CH2 - NH - SDS al 10%, 50,0 μL de Persulfato de Amonio
CO - CH = CH2. La polimerización se inicia al 10%, 2,00 μL de TEMED, la solución debe
con la formación de radicales libres del estar bien mezclada para luego verterlas entre
monómero, que se producen por radicales los vidrios, por último se añade 50,0 μL de
libres de oxígeno, por causa de la acción de
isopropanol al 10% realizando un barrido por
iones persulfato. Las aminas terciarias como el
todo el gel con el fin de retirar todas las
N, N, N, N´-tetrametilen-diamina (TEMED)
burbujas, dejar polimerizar por 30 min
se emplean como catalizadores de esta
reacción, porque causan la formación de Luego de realizado la preparación del gel de
radicales libres del persulfato. separación se procede con el gel de
concentración, para el cual se utilizó un gel de
(Obtención y caracterización de geles para su poliacrilamida al 5% agregando con la
utilización como andamios en ingeniería de micropipeta los reactivos en los volúmenes
tejidos.) respectivos, 2,10 mL de agua destilada, 0.5 mL
de acrilamida / bis acrilamida al 30%, 0,380
mL de Buffer Tris 0.5 M pH 6,8 M, 30,0 μL de
SDS al 10%, 30,0 μL de Persulfato de Amonio
al 10%, 3,00 μL de TEMED, una vez realizado
se agrega sobre el gel de separación para llenar
el pozo entre ambos vidrios, posteriormente se
debe colocar el peine que formara los pozos las muestras fueron puestas en hielo, hecho
donde se ubicaran las muestras. esto las muestras ya están listas para la
electroforesis
Reactivo o Solución Volumen Electroforesis
Agua destilada 1,9 mL Teniendo las muestras listas para la
Acrilamida / bis. 1,7 mL electroforesis, estas fueron llevadas a la
Acrilamida al 30% cámara de electroforesis ubicando cada una de
Buffer Tris 1,5M pH 1,3 mL las muestras en los pozos respectivos, también
8,8M se utilizó una muestra de solución patrón de
SDS al 10% 50 μL peso molecular, luego se colocó la tapa de la
Persulfato de amonio 50 μL cámara de electroforesis y se conectó a la
al 10% fuente de poder a 110 V y se dejó por 24 horas,
TEMED 2 μL esto con el fin de dejar caer hasta el fondo el
Tabla 1. Volúmenes de las soluciones y azul de bromofenol, finalmente se tomó el gel
reactivos para preparar 5 mL de mezcla de gel y se llevó a un recipiente con una solución de
de poliacrilamida para la preparación del gel tinción de azul de Coomassie, al estar
de separación. desteñido se procedió a tomar el registro
fotográfico en el cual se evidencia las bandas
Reactivo o Solución Volumen de proteínas para su respectivo análisis.
Agua destilada 2,1 mL
Acrilamida / bis. 0,5 mL Columna Muestra
Acrilamida al 30% utilizada
Buffer Tris 0,5M pH 0,38 mL 1 Frijol
6,8M 2 Lenteja
SDS al 10% 30 μL 3 Haba
Persulfato de amonio 30 μL 4 Garbanzo
al 10% 5 Marcador
TEMED 3 μL peso
Tabla 2. Volúmenes de las soluciones y molecular
reactivos para preparar 3 mL de mezcla de gel 6 Haba
de poliacrilamida para la preparación del gel
7 Girasol
de concentración.
8 Frijol
Tabla 3. Orden para la siembra del primer
Preparación de las muestras gel.
Previamente se realizaron los cálculos
correspondientes para cada una de las
muestras de harina, para la y se agregaron las
cantidades calculadas a los 7 tubos Eppendorf
a cada una de las muestras se les agrego la
solución buffer carga 4X correspondiente en
cada una de las muestras y se llevaron los
tubos Eppendorf a baño maría a 92°C durante
aproximadamente 3 minutos, pasado el tiempo
Columna Muestra 8 Haba

utilizada 9 Arveja
1 Arveja 10 Garbanzo
2 Arveja Tabla 4. Orden para la siembra del segundo
3 Lenteja gel.
4 Haba
5 Girasol
6 Marcador
peso
molecular
7 Frijol
RESULTADOS
ser multiplicado por cuatro para ser el
Cálculos respectivos para hallar los micro- resultado final a emplear
litros de muestra de harina de frijol y la
4
cantidad de buffer a emplear para la muestra 4,51𝜇𝐿 ⋅ = 6,01𝜇𝐿
que se dispondrá en los geles de acrilamida: 3
6,01𝜇𝐿
= 1,50𝜇𝐿 ≈ 2,00𝜇𝐿 ⋅ 4 = 8,00𝜇𝐿
4
Inicialmente se hace uso de la concentración
hallada en el laboratorio previamente y se
realiza la conversión a unidades de micro- Finalmente se obtiene 5,00µL de muestra de
gramo sobre micro-litro harina de frijol y 8,00 µL de buffer carga para
la muestra que se utilizó en los geles de
𝑚𝑔 1000𝜇𝑔 1,00𝑚𝐿 𝜇𝑔
13,3 ⋅( )⋅( ) = 13,3 acrilamida.
𝑚𝐿 1,00𝑚𝑔 1000𝜇𝐿 𝜇𝐿
Cálculos respectivos para hallar los micro-
litros de muestra de harina de haba y la
Posteriormente se divide la cantidad que cantidad de buffer a emplear para la muestra
especifica el procedimiento de migro-gramos que se dispondrá en los geles de acrilamida:
a sembrar en los geles por el resultado previo
de la concentración en micro-gramo sobre
micro-litro para hallar de esa manera la De igual forma se hace uso de la concentración
cantidad de muestra de harina de frijol hallada en el laboratorio previamente y se
realiza la conversión a unidades de micro-
60,0𝜇𝑔
gramo sobre micro-litro
𝜇𝑔 = 4,51𝜇𝐿 ≈ 5,00𝜇𝐿 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
13,3
𝜇𝐿 𝑚𝑔 1000𝜇𝑔 1,00𝑚𝐿 𝜇𝑔
10,1 ⋅( )⋅( ) = 10,1
𝑚𝐿 1,00𝑚𝑔 1000𝜇𝐿 𝜇𝐿
Al resultado obtenido debe realizarse el

producto con 4/3 para hallar el resultado A continuación se divide la cantidad que
aproximado de buffer carga a emplear, ya que especifica el procedimiento de migro-gramos
se utiliza buffer carga x4 este resultado debe a sembrar en los geles por el resultado previo
de la concentración en micro-gramo sobre
micro-litro para hallar de esa manera la 7,92𝜇𝐿

= 1,98𝜇𝐿 ≈ 2,00𝜇𝐿 ⋅ 4 = 8,00𝜇𝐿
cantidad de muestra de harina de haba 4
60,0𝜇𝑔 Los resultados entonces demuestran que se
𝜇𝑔 = 5,94𝜇𝐿 ≈ 6,00𝜇𝐿 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 obtiene 6,00µL de muestra de harina de frijol
10,1
𝜇𝐿 y 8,00 µL de buffer carga para la muestra que
Con este resultado hallado se procede a se empleó en los geles de acrilamida
realizar el producto con 4/3 para encontrar el
resultado aproximado de buffer carga a
emplear, ya que se utiliza buffer carga x4 este
resultado debe ser multiplicado por cuatro para
ser el resultado final a emplear.
4
5,94𝜇𝐿 ⋅ = 7,92𝜇𝐿
3
Figura 9. Geles de poliacrilamida proporcionado por un grupo simultáneo del curso.

Muestra Frijol Lenteja Haba Garbanzo MPM Girasol

N° de Columna 1 2 3 4 5 6
𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 (𝒄𝒎) 8,80 8,80 8,70 8,70 8,70 8,80
𝑅1 (𝑐𝑚) 2,50 2,70 2,70 2,60 2,00 2,60
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,280 0,310 0,310 0,300 0,230 0,300
𝑅2 (𝑐𝑚) 3,20 2,90 3,10 3,60 2,30 4,40
𝑹𝒇 = 𝑹𝟐 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,360 0,330 0,360 0,410 0,264 0,500
𝑅3 (𝑐𝑚) 4,75 5,00 3,60 4,50 2,50 4,70
𝑹𝒇 = 𝑹𝟑 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,540 0,570 0,410 0,520 0,290 0,530
𝑅4 (𝑐𝑚) 7,30 5,20 4,50 5,00 4,50 5,20
𝑹𝒇 = 𝑹𝟒 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,820 0,590 0,520 0,570 0,520 0,590
𝑅5 (𝑐𝑚) 8,00 6,80 4,70 5,70 6,10 6,80
𝑹𝒇 = 𝑹𝟓 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,910 0,770 0,540 0,650 0,700 0,770
𝑅6 (𝑐𝑚) - 7,30 5,00 6,90 7,60 7,10
𝑹𝒇 = 𝑹𝟔 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - 0,820 0,570 0,790 0,870 0,810
𝑅7 (𝑐𝑚) - 8,10 5,70 7,10 - 8,20
𝑹𝒇 = 𝑹𝟕 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - 0,920 0,650 0,820 - 0,930
𝑅8 (𝑐𝑚) - - 6,80 7,90 - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟖 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - - 0,780 0,910 - -
𝑅9 (𝑐𝑚) - - 7,10 8,20 - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟗 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - - 0,820 0,940 - -
𝑅10 (𝑐𝑚) - - 7,90 - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏𝟎 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - - 0,910 - - -
𝑅11 (𝑐𝑚) - - 8,20 - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏𝟏 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - - 0,940 - - -
Tabla 5. Valores de Rf respectivos al gel número 1, en donde 𝑅𝑛 (𝑅1 , 𝑅2 , 𝑅3 , … 𝑅11 ) corresponde a

las distintas bandas distinguidas en el respectivo gel.
Muestra Arveja Lenteja Haba Girasol MPM Frijol Garbanzo

N° de Columna 1 3 4 5 6 7 10
𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 (𝒄𝒎) 8,80 8,70 8,70 8,70 8,70 8,70 8,50
𝑅1 (𝑐𝑚) 2,60 2,60 2,60 4,40 1,90 2,50 2,50
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,300 0,300 0,300 0,510 0,218 0,290 0,290
𝑅2 (𝑐𝑚) 2,80 2,90 3,50 4,70 2,40 3,20 g3,30
𝑹𝒇 = 𝑹𝟐 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,320 0,330 0,400 0,540 0,280 0,370 0,390
𝑅3 (𝑐𝑚) 3,50 3,60 4,50 5,20 2,60 5,30 4,70
𝑹𝒇 = 𝑹𝟑 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,400 0,410 0,520 0,600 0,298 0,610 0,550
𝑅4 (𝑐𝑚) 5,20 4,50 5,00 6,80 4,40 7,40 6,50
𝑹𝒇 = 𝑹𝟒 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,590 0,520 0,570 0,780 0,500 0,850 0,760
𝑅5 (𝑐𝑚) 6,20 4,90 5,60 - 6,10 8,00 6,80
𝑹𝒇 = 𝑹𝟓 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,700 0,560 0,640 - 0,700 0,920 0,800

𝑅6 (𝑐𝑚) 6,90 5,20 6,80 - 7,70 - 7,60
𝑹𝒇 = 𝑹𝟔 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,780 0,600 0,780 - 0,890 - 0,890
𝑅7 (𝑐𝑚) 7,10 6,80 7,10 - - - 8,00
𝑹𝒇 = 𝑹𝟕 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,810 0,780 0,820 - - - 0,940
𝑅8 (𝑐𝑚) 7,50 7,20 7,90 - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟖 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,850 0,830 0,910 - - -
𝑅9 (𝑐𝑚) 8,10 7,60 8,20 - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟗 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,920 0,870 0,940 - - -
𝑅10 (𝑐𝑚) - 8,00 - - - -
𝑹𝒇 = 𝑹𝟏𝟎 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 - 0,920 - - - -
Tabla 6. Valores de Rf respectivos al gel número 2, en donde 𝑅𝑛 (𝑅1 , 𝑅2 , 𝑅3 , … 𝑅10 ) corresponde a

las distintas bandas distinguidas en el respectivo gel.
Marcador de peso molecular
Tabla 8. Proteínas reportadas para haba y

lenteja según literatura. (Amanzon)
Garbanzo
Tabla 7. Proteínas y pesos moleculares

reportados en el marcador de peso molecular
(Merck, 2019)
Haba y lenteja
Se hace una clasificación general para haba y Tabla 9. Proteínas reportadas para el
lenteja debido a que ambas se clasifican como garbanzo (Aguilar y Velez, 2013)
leguminosas y las proteínas descritas a
continuación son propias de ellas.
Girasol la carga positiva afirmando la teoría que al

usar SDS el cual homogenizan las proteínas las
cuales quedan cargados negativamente
haciendo que se desplacen hacia el polo
positivo. Las proteínas son cargadas por el
dodecil sulfato de sodio el cual es un
detergente aniónico que se une a las proteínas,
Tabla 10. Proteínas reportadas para el para desnaturalizar las proteínas y como
girasol según literatura. componente del gel para mantenerlas
(Ziliz,Barac,Pesic,Crevar,Stanojevic y desplegadas durante la electroforesis. Por lo
Nisavic, 2010) tanto, la movilidad electroforética de cada una
de las proteínas dependió de su masa
Frijol molecular. La separación en la electroforesis
basa su fundamento en la diferenciación de las
moléculas esto con ayuda del campo eléctrico,
dependiendo del método de electroforesis
utilizado la separación se puede diferenciar
debido a la carga eléctrica de las moléculas, su
forma o peso molecular, en este caso la
Tabla 11. Proteínas reportadas para el frijol
electroforesis determinó la separación de las
según la literatura (Elizabeth, 2001).
moléculas en base a su carga eléctrica y del
Arveja peso molecular al ser comparado con el
marcador de peso molecular que contiene
ciertas proteínas, este mostraba la migración
de las proteínas en la electroforesis y en base a
esto se de determinar en las muestras de
harina, el ADN de las proteínas existentes en
cada una de las muestras y poder relacionarlas.
Tabla 12. Proteínas reportadas para la arveja
según la literatura (Cevedo,Galussi y Lui,
2003). Las proteínas se obtenían por el relevador de
DISCUSION azul de Coomassie el cual revelaba las
proteínas debido a que es un compuesto
Mediante el proceso de electroforesis el cual coloreado que se une a todo tipo de proteínas.
es un proceso de separación de moléculas por (Es poco soluble en agua, por lo que
tamaño y carga realizado en esta práctica se habitualmente se disuelve en una mezcla de
reconoce que las proteínas están cargadas agua, ácido acético y metanol o isopropanol.)
negativa y positivamente de igual manera es Para lograr esto se une el azul de Coomassie a
posible que su carga neta sea cero, al analizar las proteínas al realizar la electroforesis, el gel
que existe la migración de las proteínas se se "tiñe" sumergiéndose durante unos minutos
logra evidenciar que la carga neta no es de cero en la disolución de Coomassie para que éste
ya que las proteínas se encuentran migrando en penetre y se fije a las proteínas. Dado que todo
la electroforesis, recordando así que (Las el gel se impregna del colorante, es importante
partículas cargadas migran hacia la carga que tener en cuenta que sería preciso después
las atrae) Al conectar la fuente de corriente se realizar una distinción, lavando varias veces
reconoce que las proteínas están cargadas con disolvente libre del colorante. La
y que la migración de las proteínas fue hacia utilización del buffer de carga nos permitió
evidenciar que el buffer da peso a la muestra proteínas con un peso molecular similar a la
para que el ADN se precipite en el fondo de proteína anteriormente mencionada, como
los pozos de siembra, el buffer de carga sucede en el caso de la siembra del frijol, la
permite la conducción de la corriente y el cual según la tabla 5 muestra un valor de Rf de
control del pH, el reactivo TEMED permitió la 0,280 y si se observa en contraste la tabla 11
aceleración de la reacción de polimerización efectivamente se puede observar que la
de la poliacrilamida. A partir del marcador de globulina es la proteína con una valor de peso
peso molecular podemos evidenciar las molecular de 190 kDa el cual es un valor
proteínas contenidas en la muestra y sus significativamente cercano al de la miosina.
respectivos pesos moleculares como lo son la Por otro lado al observar esta misma tabla se
Anhidrasa Carbónica, Bovina 29 kDa, observar que en la columna del marcador de
Albúmina, Huevo 45 kDa, Albúmina bovina peso molecular el Rf de 0,290 corresponderá a
66 kDa, Fosforilasa B 97 kDa, β- la Fosforilasa, esta tiene un peso molecular de
Galactosidasa, E. coli 116 kDa, Miosina, 205 97,4 kDa y al comparar este resultado del Rf
kDa, en base al marcador molecular poder con las muestras se observa que varias de estas
determinar las proteínas presentes en cada una poseen un valor de Rf similar, como lo son la
de las harinas que fueron utilizadas para la muestra de girasol (Rf = 0,300), garbanzo (Rf
electroforesis y así mismo poder comprarlas = 0,300), Haba (Rf = 0,310), Lenteja (Rf =
con el marcador molecular. La cantidad de 0,310). Al comparar los valores teóricos de
proteínas evidenciadas en el proceso cada muestra efectivamente se determina que
electroforético depende de la muestra y de las la muestra de Haba y Lenteja tienen en su
proteínas presentes en las muestras, no harina la proteína de Fosforilasa, como se
necesariamente cada una de las muestras observa la tabla 8.
presenta las mismas proteínas, hay una
Según el Rf de 0,520, como se observa en la
relación existente debido a que las harinas
tabla 5, se reconoce que la proteína
utilizadas como muestra pertenecen a la
correspondiente a este resultado es la
familia de las leguminosas y por esta razón
Albúmina Bovina la cual es propia de tener un
varias de las proteínas que contienen estos son
peso molecular de 66 kDa según la literatura y
las mismas sin embargo no todas tienen en su
valor reportado en la tabla 7. Al detallar la
composición las mismas proteínas así como
tabla 5 entonces se distingue que existen
también las mismas cantidades.
muestras con un valor de Rf similar como lo
Los resultados obtenidos respecto a los son Garbanzo (Rf = 0,520), Haba (Rf= 0,520),
cálculos de Rf nos permiten brindar un análisis Girasol (Rf =0,500) y Frijol (Rf = 0,540).
personalizado para cada proteína de los Analizando esto en contraste a la teoría se
distintos geles de poliacrilamida teniendo puede decir que estos valor de Rf representan
como referencia en cada uno el marcador de el grupo de proteínas de albúminas ya que por
peso molecular (MPM), de esta manera se tener el mismo peso molecular enseñan su
puede observar en la tabla 5 que en la columna arrastre al mismo nivel y por eso se debe la
del marcador de peso molecular (MPM) el similitud en los Rf tanto de marcador de peso
primer Rf (0,230) que se encuentra molecular como las muestras.
corresponde a la primer banda determinada en
A consecuencia de lo anterior se permite
el gel, lo que quiere decir que pertenece a la
brindar el análisis respectivo a la Albúmina de
miosina la cual posee un peso molecular de
huevo, proteína de peso molecular de 45 kDa,
205 kDa, de esa manera se afirma que los
al observar en la tabla 5 ésta corresponde al
valores de los Rf correspondientes a las
valor de Rf = 0,700 y permite identificar que
muestras y que tienen un valor aproximado a
esta proteína posiblemente se encuentra en las
ese Rf de la miosina demuestran que existen
muestras de Girasol (Rf=0,770), Garbanzo (Rf con las muestras sembradas en este gel y por
= 0,650), Haba ( Rf=0,650) y Lenteja ( Rf = consiguiente obtener los resultados de un
0,770); en contraste a la teoría se puede cálculo de Rf para cada siembra de las
afirmar que estas comparten el hecho de muestras utilizadas, como se observa en la
poseer prolaminas y gluteninas por la similitud figura 9. De esa manera fue posible al igual
del peso molecular como se puede apreciar en que en la tabla 5 calcular los Rf de este gel
la tabla 9, 10 y 11. ,como se observa en la tabla 6, mostrando así
Finalmente respecto al análisis del gel 1 y que que el menor valor de Rf corresponde a la
corresponde a la tabla 5 se determinó que el Rf proteína con mayor peso molecular la cual es
de 0,870 pertenece a la proteína con menor la Miosina (205 kDa) y su contraparte la
peso molecular del marcador de peso Anhidrasa Carbónica (29 kDa) presenta el
molecular, la cual es la Anhidrasa carbónica mayor valor de Rf, esto anterior se debe a la
(29 kDa); si este valor de Rf es comparado con simple reacción que existe con los geles de
las muestras se puede observar que comparten poliacrilamida y las proteínas donde las
valores similares de Rf con las muestras de proteínas con menor peso molecular son
Girasol ( Rf = 0,810), Garbanzo ( Rf = 0,910), aquellas que muestran mayor capacidad de
Haba ( Rf = 0,910), Lenteja ( Rf = 0,820) y
arrastre en los pozos de siembra.
Frijol ( Rf = 0,910); a pesar de que comparten
un valor parecido de Rf las únicas muestras Teniendo en cuenta lo mencionado
que comparten con mayor similitud el peso anteriormente se determina que la Beta-
molecular de la proteína correspondiente es el Galactosidasa cuenta con un Rf de 0,280; este
Haba y la Lenteja que tienen en su gama de valor es similar al de las muestras de Frijol (Rf
proteínas la Anhidrasa carbónica la cual es la = 0,290) y Garbanzo (Rf = 0,290). La Beta-
misma que se tomó de referencia para el Galactosidasa tiene un peso molecular de 116
comparativo. Por otro lado se puede decir que kDa y la globulina que está presente en estas
existen como se observa en la tabla 5 múltiples dos muestras posee un peso molecular similar
bandas en las distintas muestras que tienen a la proteína del marcador de peso molecular
valores de Rf lejanos a los tomados como previamente mencionado como se observa en
punto de referencia, es decir a los del pozo del las tablas 9 y 11. Por otro lado al observar el
marcador de peso molecular, explícitamente Rf de 0,298 se logra determinar que
no quiere decir que existan otras proteínas, corresponde exactamente a la proteína de la
esto puede ser explicado debido a errores Fosforilasa, la cual posee un peso molecular de
personales por la técnica de pipeteo ya que el 97,4 kDa; distintas muestras comparten un Rf
grupo de laboratorio no cuenta aún con la similar al de esta proteína, como lo es la
suficiente experiencia para un mejor resultado, muestra de Arveja, Lenteja y Haba ya que
por otro lado y como más importante es que la poseen un Rf de 0,300 igualmente. De esa
cantidad de volumen agregado en cada manera efectivamente se puede decir que se
siembra quizá no cumplió con los estándares trata en Haba y Lenteja de la misma proteína
necesarios para observar así un mejor como se observa en la tabla 8; por otro lado la
resultado de arrastre en el producto final muestra de Arveja posee un Rf similar pero no
(geles). comparte un peso molecular similar en sus
proteínas en comparación a la Fosforilasa.
De igual forma el análisis para el gel 2 presenta
resultados similares, de primera mano se El siguiente Rf mostrado en la tabla 6 de la
encuentran las seis proteínas propias del columna del marcador de peso molecular
marcador de peso molecular (MPM) con arduo corresponde a la albúmina Bovina, la cual
trabajo y esto permite una comparación eficaz tiene un Rf de 0,500 y es similar a otros Rf de
distinta muestra pero en el mismo gel. La tabla gran número de bandas que no se identificaron
6 enseña que los valores de Rf de las muestras ya que no estaban dentro de un rango
similares a la Albúmina Bovina son Girasol significativo de Rf, como la gran mayoría,
(Rf = 0,510), Haba (Rf = 0,520), Lenteja (Rf = debido a posibles errores en la técnica de
0,520) y Garbanzo (Rf = 0,550). Esto quiere pipeteo como también en la cantidad del
decir que existen proteínas del mismo peso volumen agregado en los pozos de siembra de
molecular a la de referencia ( Albúmina los geles.
Bovina), como lo es para las muestras de Haba CONCLUSIONES:
y Lenteja que posee Albúmina Bovina como
A nivel general y respecto al análisis de los
proteína, además la muestra de Garbanzo y
cálculos Rf de los distintos geles se encuentran
Girasol también cuentan con grupos de
buenos resultados ya que se logró caracterizar
Albúminas de igual peso molecular. También
un gran número de proteínas provenientes de
se tiene presente la proteína Albúmina de las muestras comparadas con el punto de
huevo pero la similitud es más notoria en los referencia el cual fue el marcador de peso
pesos moleculares de Haba, Lenteja, molecular y con ayuda de la teoría fue posible
Garbanzo, Girasol, Frijol y Arveja respecto a entender la complejidad que conlleva un
la proteína; y no existe la misma relación con análisis detallado en los geles de
los Rf debido a que la proteína probablemente poliacrilamida debido a que este no funciona
no es Albúmina de huevo. únicamente con los pesos moleculares de cada
proteína, también se deben tener en cuenta
Finalmente en el pozo de marcador de peso cálculos de Rf y buenas técnicas para la
molecular (MPM) se distinguió con ayuda de formación de estos geles. Por otro lado y a
los cálculos de Rf la proteína de la Anhidrasa partir de los resultados obtenidos, se puede
carbónica (29 kDa) ya que poseía un valor de decir que las proteínas se pueden separar
Rf de 0,890 como se observa en la tabla 6. En debido al gel de poliacrilamida, el cual actúa
simultáneo se encontraron resultados de Rf como un poro, permitiendo así, la separación
similares con las muestras utilizadas en el gel de las moléculas y llevándolas a un estado de
2, como lo son Garbanzo (Rf = 0,890), Frijol estructura primaria, pues las desnaturaliza por
(Rf = 0,920), Haba (Rf = 0,910), Lenteja (Rf = una reacción en la cual la poliacrilamida
0,920) y Arveja (Rf = 0,920). Lo anterior reacciona con el persulfato de amonio y este,
permite decir que para el Garbanzo hace reaccionar el TEMED, polimeriza la
efectivamente se encuentra presente las acrilamida, y a su vez reacciona con el SDS,
gluteninas con un valor de 55 kDa, ya que es finalmente, se logró comparar los tamaños de
un valor similar a la Anhidrasa carbónica, las moléculas, pues se utilizó un marcador
también se determina que el Frijol cuenta con molecular que lo permitió. Además mediante
la proteína de la prolamina la cual tiene un la utilización de la cámara electroforética se
peso molecular de 38 kDa y es un valor evidencio que esta permite la migración de las
cercano a la proteína de referencia, lo mismo proteínas ya que las proteínas están cargadas
sucede para la muestra de Haba y Lenteja que negativamente debido al SDS. La carga
poseen precisamente Anhidrasa Carbónica en negativa de las proteínas y el campo eléctrico
su harina y en contraste la Arveja la cual a generado por la fuente de corriente permite
pesar de tener un Rf similar a las muestras que las proteínas migren hacia el lado que las
anteriores no posee una proteína con un peso atrae en este caso el lado positivo y se dé el
molecular similar a la Anhidrasa carbónica. desplazamiento de ADN de las proteínas
Como se mencionó anteriormente para el gel 1 presentes en las muestras.
se observa que en éste gel también existen un
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SANCHEZ GOMEZ DN; VILLAMIZAR MOGOLLON YT; CASTRO LEON DH; MORA PINILLA KE

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Figura 8. Estructura de reacción, geles de

Preparación de los geles de acrilamida

Columna Muestra 8 Haba

Al resultado obtenido debe realizarse el

micro-litro para hallar de esa manera la 7,92𝜇𝐿

Figura 9. Geles de poliacrilamida proporcionado por un grupo simultáneo del curso.

Muestra Frijol Lenteja Haba Garbanzo MPM Girasol

Tabla 5. Valores de Rf respectivos al gel número 1, en donde 𝑅𝑛 (𝑅1 , 𝑅2 , 𝑅3 , … 𝑅11 ) corresponde a

Muestra Arveja Lenteja Haba Girasol MPM Frijol Garbanzo

𝑹𝒇 = 𝑹𝟓 /𝑹𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 0,700 0,560 0,640 - 0,700 0,920 0,800

Tabla 6. Valores de Rf respectivos al gel número 2, en donde 𝑅𝑛 (𝑅1 , 𝑅2 , 𝑅3 , … 𝑅10 ) corresponde a

Marcador de peso molecular

Tabla 8. Proteínas reportadas para haba y

Tabla 7. Proteínas y pesos moleculares

Girasol la carga positiva afirmando la teoría que al

REFERENCIAS: Salvador,Mauri y Petruccelli, P. (2009).

Salamanca, U. (s.f.). Campus.usal. Recuperado el

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