Espectrofotometria UV.

1
Alumno: Jiménez Sandin Jhostin Gamaliel

Grupo: 1552
Materia: AFMP II
TAREA #3
Curva estándar
Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en
función de la concentración de un analito. La calibración incluye la selección de un
modelo para estimar los parámetros que permitan determinar la linealidad de esa curva
y, en consecuencia, la capacidad de un método analítico para obtener resultados que
sean directamente proporcionales a la concentración de un compuesto en una muestra,
dentro de un determinado intervalo de trabajo. En el procedimiento se compara una
propiedad del analito con la de estándares de concentración conocida del mismo analito
(o de algún otro con propiedades muy similares a éste). Para realizar la comparación se
requiere utilizar métodos y equipos apropiados para la resolución del problema de
acuerdo al analito que se desee determinar.
La etapa de calibración analítica se realiza mediante un modelo de línea recta que
consiste en encontrar la recta de calibrado que mejor ajuste a una serie de “n” puntos
experimentales, donde cada punto se encuentra definido por una variable “x” (variable
independiente, generalmente concentración del analito de interés) y una variable “y”
(variable dependiente, generalmente respuesta instrumental). La recta de calibrado se
encuentra definida por una ordenada al origen (b) y una pendiente (m), mediante la
ecuación y = mx + b. A partir de la curva de calibración (conjunto de concentraciones
que describen el intervalo en el cual se deberá cuantificar el compuesto por analizar) y
a fin de asegurar que la recta encontrada con los puntos experimentales se ajuste
correctamente al modelo matemático de la ecuación se calculan los valores de la
ordenada al origen, la pendiente y el coeficiente de determinación (𝑟 2 ).
Comparación con un estándar
Se determina la absorbancia de una disolución de concentración conocida de la
sustancia por analizar.
𝐴𝐶 = 𝜀𝑏𝐶𝑐
La absorbancia de la muestra se determina bajo las mismas condiciones.
𝐴𝑥 = 𝜀𝑏𝐶𝑥
Se tiene un sistema de dos ecuaciones simultáneas con dos incógnitas, cuya resolución
permite obtener la concentración de la muestra problema.
𝐴𝑥 𝐶𝑐
𝐶𝑥 =
𝐴𝑐
Esta técnica solo se aplica a sistemas que obedecen la ley de Beer

2
Adición de un estándar
El método consiste en añadir sobre una serie de alícuotas, cantidades conocidas del
componente a determinar, y medir la magnitud de la propiedad analítica de interés tras
las diferentes adiciones. Se toman volúmenes iguales de disolución problema, y se
añaden cantidades conocidas y diferentes de analito a todas las muestras, excepto a
una, diluyendo, finalmente, todas al mismo volumen.
Seguidamente se obtienen las señales instrumentales para todas esas disoluciones. La
señal medida se representa en el eje y, mientras que en el eje x, la escala se expresa
en términos de las cantidades de analito añadidas, ya sea como masa o como
concentración.
La recta de regresión calculada se extrapola al punto del eje x donde y=0. La
concentración de la muestra se puede deducir por extrapolación. El método se utiliza
mucho en absorción atómica, así como en emisión y en algunas técnicas electro
analíticas. Resulta especialmente útil para los casos en los que la composición variable
de las muestras desconocidas hace difícil la preparación de patrones con la misma
matriz de las muestras. De alguna forma, todas las medidas se realizan sobre la propia
muestra.
Curva de adición estándar
En ocasiones la matriz de la muestra es compleja y/o desconocida. Por ejemplo una
muestra de sangre contiene muchos constituyentes que no pueden ser incorporados a
los estándares en las disoluciones de los utilizados para la curva de calibración; en este
caso lo que se recomienda es añadir a la muestra pequeños volúmenes de una
disolución de un estándar concentrado; de esta manera la matriz que contiene el
estándar no difiere mucho de la propia muestra. Consideremos, por ejemplo, que una
muestra de un analito X en concentración inicial desconocida Cx da una señal Mx
proporcional a dicha concentración; cuando a esta muestra se le añade un pequeño
volumen de un estándar Ces del mismo analito, se obtendrá una señal Mx+es . Como
la señal es proporcional a la concentración del analito y como la matriz es la misma, es
posible escribir:
y, por tanto: en una curva de calibración
Es evidente que, cuando el estándar se añade en disolución, tanto la concentración Cx

del analito como la concentración Cx+es del estándar se verán afectadas por el efecto
de la dilución y que este efecto deberá ser corregido. Cuando se preparan estándares
que contienen la muestra y se representa la concentración de los estándares (corregida
por el efecto de la dilución) vs la señal obtenida al medirlos, se obtiene una curva de
calibración en la cual el intercepto de x corresponde a la concentración desconocida.
3
Estándar interno
En el método del estándar interno, una cantidad conocida de una especie de
referencia es añadida a todas las muestras, estándares y determinaciones del blanco.
Entonces, la señal de respuesta es no solo la del analito, sino una proporción de la señal
del analito con respecto a la señal de la especie química de referencia. Se prepara una
curva de calibración donde el eje y es la proporción de las respuestas y el eje x es la
concentración del analito en el estándar, como es lo usual. La figura 1.0 ilustra el uso
del método estándar interno para respuestas en forma de pico. El método del estándar
interno puede compensar ciertos tipos de errores si estos influyen en la misma magnitud
proporcional al analito y a la especie química de referencia. Por ejemplo, si la
temperatura influye tanto al analito como a la especie química de referencia en la misma
magnitud, el obtener la proporción de ambos se compensará por las variaciones en la
temperatura. Para que se pueda llevar a cabo la compensación, la especie química de
referencia seleccionada debe tener las mismas propiedades físicas y químicas del
analito. El uso de un estándar interno en espectrometría de flama es presentado en el
ejemplo 1.0.
Figura 1.0 “Uso del método estándar interno para respuestas en forma de pico”
Figura 1.0.Ilustración del método del

estándar interno. Una cantidad fija de la
especie utilizada como estándar interno
se agrega a todas las muestras,
estándares y determinaciones del
blanco. La curva de calibración grafica
la proporción de la señal del analito
contra la concentración del analito.
Ejemplo 1.0
Las intensidades de las líneas de emisión de flama pueden ser afectadas por una gran
variedad de factores instrumentales, incluyendo la temperatura de la flama, la velocidad
de flujo de la disolución y la eficiencia del nebulizador. Podemos compensar las
variaciones en esos factores utilizando el método del estándar interno. Para ello
añadimos la misma cantidad de estándar interno a las mezclas que contienen
cantidades conocidas del analito y a las muestras con concentración desconocida del
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analito. Después obtenemos la proporción de la intensidad de la línea del analito con

respecto a la intensidad del estándar interno. El estándar interno debe estar ausente en
las muestras que se desean analizar.
Referencias
 Dosal MA, Villanueva A. Introducción a la metrología química: Curvas de

calibración en los métodos analíticos. [Internet]. México: 2008[Citado 3
de febrero 2019]. Disponible en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CURVASDECALIBRACION_
23498.pdf
 D.A. Skoog, D.M. West y F.J. Fundamentos de Química Analítica.
Holler4ª Ed. Reverté, 1997
 Sánchez MA. Métodos de calibrado. [Internet]. Venezuela [Citado 3 de
febrero 2019]. Disponible en:
http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/angelisa/Downloads/tecnicascalibr
acio_vr1.pdf

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Esta técnica solo se aplica a sistemas que obedecen la ley de Beer

y, por tanto: en una curva de calibración

Es evidente que, cuando el estándar se añade en disolución, tanto la concentración Cx

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