Tecnicas y Procedimientos de Limpieza de Materiales de Laboratorio
Tecnicas y Procedimientos de Limpieza de Materiales de Laboratorio
Tecnicas y Procedimientos de Limpieza de Materiales de Laboratorio
Curso:
Operaciones Básicas
Tema:
Técnicas Y Procedimientos De Limpieza De Materiales De
Laboratorio
Ciclo:
I
Integrantes:
Para limpiar un objeto, en primer lugar se quitan los residuos (que se tiran en el
recipiente adecuado) con una espátula o varilla, y luego limpiar con el disolvente
apropiado. El agua con jabón es uno de los mejores métodos de limpieza.
Ocasionalmente, se utilizan ácidos, bases o disolventes orgánicos para eliminar todos
los residuos difíciles.
Por ultimo consiste en enjuagar todo el material con agua destilada. El material limpio
se seca en un soporte adecuado inclinado o vertical, colocando el material boca abajo,
o bien se utiliza una estufa para secar, debe estar el material sin tapones ni llaves.
Al finalizar el proceso se requiere la validación formal, con los datos que demuestren la
limpieza y esterilidad del material de laboratorio o del instrumental a utilizar. En
algunas ocasiones el material contaminado, que estuvo en contacto con residuos
orgánicos como sangre o inorgánicos como orina, debe llevar otro tratamiento como
sumergir o rociar los materiales con detergentes enzimáticos como prelavado; estos
agentes deben ser tenso activos o emulsificantes para que los contaminantes queden
suspendidos en el agua y la superficie quede limpia; incluso puede aplicarse una
diferente temperatura para cada material, por ejemplo el agua fría se utiliza para
limpiar residuos de proteína y glucosa, mientras que el agua caliente se utiliza para
eliminar los residuos de grasas y minerales.
Material contaminado
Usualmente los materiales llegan al laboratorio en recipientes con los datos añadidos
para saber qué contienen y qué tipo de tratamiento se debe seguir tanto para el
análisis de la muestra como para su posterior desecho para saber qué método se
aplicará para el prelavado, desinfección y esterilización.
Los residuos o muestras analizadas se pueden extraer o verter para poder lavar de
forma manual o mecánica el material de laboratorio que puede ser tubos, frascos, etc.,
y que pueden utilizarse para el lavado un detergente líquido o en polvo dependiendo
de la sustancia que se encuentra en el material.
Una vez que se hayan lavado, desinfectado y esterilizado los materiales del laboratorio
se deben resguardar de forma adecuada para evitar que la exposición al medio
ambiente o a otros factores, como el polvo, puedan ensuciar de nuevo el material; el
instrumental y materiales pueden perder su esterilidad si se produce cualquier tipo de
ruptura en ellos, si el material de empaque se humedece o se rompe (aunque sea muy
poco) o si el área de almacenamiento es atacada por un exceso de temperatura o de
humedad; para asegurarnos de que el material resguardado conserva su esterilidad es
indispensable mantenerla limpia, seca, libre de polvo, suciedad o insectos, así como
controlar la temperatura y la humedad, utilizando los utensilios adecuados para este
medio.
Los portaobjetos deben lavarse, colocarse en ácido acético glacial durante 10 minutos,
enjuagarse con agua destilada y secarse con toallas de papel o con un paño limpio.
Antes de usar, lavar con alcohol y secar con un paño. Luego del tratamiento con ácido
y del enjuague, se pueden colocar los portaobjetos en un recipiente ancho cubierto de
alcohol. Si es necesario, retire del recipiente y seque con un paño.
Limpieza de buretas PYREX
Retire el tapón o la punta de caucho y lave la bureta con detergente y agua. Enjuague
con agua del grifo hasta eliminar toda la suciedad. Luego, enjuague con agua
destilada y seque.
Limpie el tapón o la punta de caucho por
separado. Antes de colocar un tapón de vidrio
en la bureta, lubrique la junta con lubricante
para tapones. Solo utilice una pequeña
cantidad de lubricante. Las buretas deben
estar siempre tapadas si no están en uso.
Limpieza del material de vidrio PYREX para cultivo celular
El material de vidrio para cultivo celular debe primero remojarse, luego lavarse y
enjuagarse repetidas veces con agua de grifo y con agua de alta calidad, es decir,
purificada mediante destilación, deionización u ósmosis inversa. Se debe prestar
especial atención a la fuente de agua utilizada durante el proceso de lavado. Por lo
general, los caños de cobre son una fuente de iones metálicos tóxicos para los
sistemas de cultivo celular. Para eliminar este problema, pueden reemplazarse por
caños de plástico o de acero inoxidable que resulten adecuados. Otra fuente de iones
metálicos tóxicos puede ser el sistema de calentamiento de agua caliente que se
utiliza en el lavado de las piezas de vidrio. Para resolver esto, se puede emplear un
sistema separado de agua caliente revestido en vidrio, ubicado cerca del área de
lavado de materiales de vidrio.
Una fuente de iones tóxicos de metal pesado que se ignora con frecuencia son los
frascos de almacenamiento de medios, previamente utilizados para contener
soluciones de tinción empleadas en microscopía electrónica, que poseen tetracloruro
de osmio, acetato de uranilo o nitrato de plomo. Estos iones de metal pueden unirse
fuertemente al vidrio y no se eliminan durante la limpieza a menos que se utilicen
agentes de limpieza con ácido concentrado. Al guardar medios en los frascos, los
iones de metal comenzarán a liberarse lentamente de la superficie de vidrio,
provocando toxicidad celular. Se recomienda el uso de frascos descartables para
guardar estas soluciones.
Por lo general, solo se recicla el material de vidrio de boro silicato (como PYREX). El
vidrio común o el vidrio Flint debe utilizarse solo una vez y luego se los debe descartar;
el uso repetido del vidrio común puede provocar la lixiviación de los materiales tóxicos
en las soluciones o cultivos. Es fundamental limpiar y enjuagar en profundidad el
material de vidrio. Si un servicio central de lavado de piezas de vidrio no logra brindar
la atención necesaria al material de vidrio para cultivo celular, entonces dicho material
deberá lavarse en los laboratorios individuales.
El uso de material plástico descartable puede eliminar o reducir este problema en gran
medida.
Limpieza de tubos para cultivo PYREX
Los tubos para cultivo previamente utilizados deben esterilizarse antes de la limpieza.
El mejor método para la esterilización es mediante autoclave durante 30 minutos a
121°C (presión de 15 lb.).
El medio que se enfría y solidifica debe retirarse mientras los tubos están en caliente.
Después de vaciar los tubos, lave con detergente y agua, enjuague profundamente
con agua corriente, enjuague con agua destilada, coloque en una cubeta y deje secar.
Si los tubos se llenarán con un medio que se esterilice por autoclave, no tape los tubos
hasta añadir el medio. Así, tanto el medio como los tubos se esterilizan en autoclave.
Asegúrese de que las tapas puedan colocarse en autoclave. Las tapas que poseen
revestimiento en papel no deben colocarse en autoclave.
Si los tubos se llenarán con un medio estéril, tape y esterilice los tubos en el autoclave
o con aire caliente antes de añadir el medio. Corning también ofrece una amplia gama
de tubos de vidrio y plástico descartables que eliminan la necesidad de limpieza.
Limpieza de pipetas
Coloque las pipetas con su extremo hacia abajo en un cilindro o frasco alto con agua
inmediatamente después de su uso. No las deje caer dentro del frasco, dado que se
pueden romper los extremos, quedando inutilizadas para mediciones precisas. Un
disco de algodón o lana de vidrio en el fondo del frasco ayuda a prevenir la rotura de
los extremos. Asegúrese de que el nivel de agua sea suficiente para sumergir la parte
más grande o la totalidad de cada pipeta. Cuando sea conveniente, las pipetas deben
escurrirse y colocarse en un cilindro o frasco con detergente o, si se encuentran
demasiado sucias, en un frasco con solución para limpieza a base de ácido crómico.
Después de permanecer en remojo por varias horas, o durante toda la noche, escurra
la pipeta y enjuáguela con agua de grifo hasta remover toda la suciedad. Remoje las
pipetas en agua destilada durante al menos 1 hora. Retire del agua destilada,
enjuague, seque la parte exterior con un paño, quite el agua remanente y seque.
En los laboratorios que utilizan grandes cantidades de pipetas por día, es conveniente
utilizar una lavadora automática de pipetas. Algunos de estos dispositivos, fabricados
en metal, son bastante sofisticados y pueden conectarse mediante accesorios
directamente al suministro de agua fría y caliente. Los que están fabricados en
polietileno son más sencillos y se pueden conectar al suministro de agua mediante una
manguera de caucho. Se pueden utilizar cubetas y frascos de polietileno para mojar y
enjuagar las pipetas en solución de limpieza a base de ácido crómico. También
pueden emplearse secadores metálicos eléctricos para pipetas.
Después del secado, las pipetas deben colocarse en un cajón libre de polvo. Se
recomienda envolver las pipetas serológicas y bacteriológicas en papel o colocarlas en
cubetas para pipetas y esterilizarlas en el esterilizador de aire seco a 180°C durante 2
horas.
Las pipetas que se emplean para la transferencia de material infeccioso deben tener
un tapón de algodón en la parte superior antes de la esterilización. El tapón de
algodón evitará que el material a medir ingrese accidentalmente al dispositivo de
pipetas. Corning también ofrece una línea completa de pipetas estériles descartables
de plástico y de vidrio listas para usar sin necesidad de su limpieza y esterilización
posterior.
Limpieza de pipetas serológicas PYREX
Después de su uso, las pipetas serológicas se deben enjuagar minuciosamente con
agua fría de grifo, agua destilada, alcohol o acetona.
Luego, se deben secar por aspiración. (No sople aire dentro de las pipetas, dado que
esto condensará la humedad en el interior de las mismas).
Enjuague, secado y almacenamiento del material de vidrio
Es importante ser cuidadoso al enjuagar o lavar pipetas, cilindros o buretas, y evitar
que las tapas caigan en la pileta de lavado o golpeen contra el grifo. La mayoría de las
roturas se producen de este modo. Los tubos de ensayo, tubos de cultivo, matraces y
otros artículos de vidrio deben colgarse con broches de madera para su secado, o se
deben colocar hacia abajo en bateas para su secado al aire. Otra alternativa es
colocarlos en cubetas y secarlos en horno. La temperatura de secado no debe superar
los 140°C. (Nunca aplique el calor directamente sobre el material de vidrio vacío
empleado para mediciones volumétricas. Dicho artículo debe secarse a temperaturas
que no excedan los 80°C o 90°C). Antes de colocar los artículos de vidrio en la cubeta,
recubra la base de la misma con una toalla plegada limpia o un paño limpio. Esto evita
que la boca de los tubos se ensucie.
Deje secar las buretas, pipetas y cilindros en posición vertical sobre una toalla
plegada. Proteja el material de vidrio del polvo. Para hacerlo, se recomienda colocar
un tapón de algodón o corcho, o encintar con papel grueso la boca del recipiente, o
colocar el material de vidrio en un gabinete libre de polvo.
Para almacenar, coloque los artículos en estantes diseñados especialmente para los
mismos. Asegúrese de que no estén en contacto unos con otros para evitar daño
mecánico involuntario. No coloque los artículos de vidrio sobre el borde de los
estantes.
Autoclave
Es el método de referencia, utiliza calor húmedo en equipos que se denominan
autoclaves, formados por un recipiente o cámara de esterilización de paredes gruesas
y cierre hermético que permite usar vapor a presión y temperatura elevada. El
fundamento físico es el de una olla a presión. Se considera el método más efectivo
porque actúa coagulando las proteínas de los microorganismos, provocando su
eliminación. Los factores más importantes en este proceso son:
Las piezas deben estar limpias, el vapor no penetrará una costra de suciedad.
Vía seca
La esterilización por vía seca o calor seco es una variante del autoclave en la que no
se usa vapor, al ser menos agresivo (en ausencia de agua el calor se transfiere peor al
material) se utiliza a más alta temperatura y durante más tiempo. El calor seco
desnaturaliza las proteínas, funde los lípidos de las membranas y provoca desecación
de los microorganismos.
Este método es menos corrosivo para los instrumentos metálicos y permite esterilizar
sustancias en polvo o viscosas no volátiles y también las que puedan formar
emulsiones con el agua.
Los objetos que pueden esterilizarse con calor seco son los metálicos, el vidrio o
plásticos como PTFE/PFA (teflón) que pueden soportar la elevada temperatura del
método.
Métodos químicos
Puede conseguirse desinfectar y/o esterilizar material de laboratorio usando diversos
productos químicos tanto en fase gaseosa como en fase líquida por su capacidad para
eliminar microorganismos. Los métodos químicos permiten la esterilización de
materiales e instrumentos a baja temperatura siempre que se disponga del
equipamiento e instalaciones adecuadas para controlar su peligrosidad.
El óxido de etileno:
Radiaciones ionizantes
Las radiaciones ionizantes pueden usarse para esterilizar por su capacidad para
destruir microorganismos. La radiación gamma se caracteriza por su alta energía y
poder de penetración que permite su uso con los materiales y productos envasados,
característica muy importante para los materiales destinados a cultivos y
preparaciones biológicas como las Placas de Petri estériles.
Este método es muy efectivo puesto que puede ajustarse a cada necesidad
controlando la dosis de irradiación, que para una fuente determinada es el tiempo de
exposición. No produce daños al material pero requiere una instalación compleja con
blindaje biológico.
Como apenas produce calor y no genera residuos se puede usar con muchos de los
materiales de laboratorio e instrumental clínico de metal, vidrio y plástico.
Si la limpieza no fuera completa con el detergente, se puede utilizar una disolución de
ácido comercial o potasa alcohólica. En los casos rebeldes puede recurrirse a la
mezcla sulfocrómica (disolución de bicromato potásico y ácido sulfúrico). En el caso de
las buretas, es suficiente, casi siempre, limpiar la bureta con agua del grifo y después
con agua destilada. Si es necesario se puede dejar en remojo con disolución caliente
de detergente durante un rato y después proceder como se ha descrito arriba.
El material de porcelana, aunque resiste bien los cambios bruscos de temperaturas
conviene evitarlos pues pueden llegar a romperse. Para lavarlos puede seguirse el
mismo método que para el vidrio.
Cuando una bureta u otro material no está seco y se desea utilizar, se procede a
curarlo, enjuagándolo tres veces con pequeñas porciones del mismo líquido o solución
que se desea medir.
Manejo de polvos:
Manejo de líquidos:
Siempre que sea posible, vierta los líquidos desde un recipiente con pico. Utilice un
embudo o una varilla de vidrio (Figura 1) para facilitar la operación de verter. En la
mesa de trabajo solamente deberán dejarse tapones de cabeza plana. Sostenga los
tapones de otros tipos entre los dedos índice y medio, y la botella, con todos los dedos
de la misma mano.
Al aproximar la mano al tapón, ¿se deberá hacer con la palma hacia abajo o arriba?
¿Cómo debe mantenerse la botella para que cualquier líquido que escurra fuera de la
misma no toque los dedos?
El ácido sulfúrico concentrado debe verterse en agua fría (nunca el agua en el ácido),
en forma lenta y con agitación. Utilice un recipiente que soporte cambios bruscos de
temperatura (por ejemplo un vaso de precipitados o matraz), evitando el uso de
botellas o de probetas graduadas. En caso de haber tomado una gran cantidad,
deseche el exceso; nunca devuelva nada a la botella de reactivo.