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Practica 7 PCR

La proteína C reactiva (PCR) es un marcador de inflamación cuya concentración aumenta durante procesos inflamatorios. La prueba de aglutinación en látex es un método cualitativo y semicuantitativo para medir los niveles de PCR en suero. Consiste en agregar látex recubierto con anticuerpos anti-PCR a muestras de suero, observando la aglutinación que indica presencia de PCR. Niveles elevados de PCR se asocian con enfermedades inflamatorias como infecciones y enfermedades

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Giulianna Flores
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Practica 7 PCR

La proteína C reactiva (PCR) es un marcador de inflamación cuya concentración aumenta durante procesos inflamatorios. La prueba de aglutinación en látex es un método cualitativo y semicuantitativo para medir los niveles de PCR en suero. Consiste en agregar látex recubierto con anticuerpos anti-PCR a muestras de suero, observando la aglutinación que indica presencia de PCR. Niveles elevados de PCR se asocian con enfermedades inflamatorias como infecciones y enfermedades

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UNIVERSIDAD PRIVADA DE TACNA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MÉDICA


INMUNOLOGIA Y VACUNAS - AÑO ACADÉMICO 2018
VI CICLO

Práctica Nro. 7

PROTEINA C REACTIVA (PCR)

OBJETIVOS

 Realizar y conocer el fundamento del método cualitativo y cuantitativo de la aglutinación en


látex para la determinación de PCR.
 Conocer la utilidad diagnóstica de la prueba de PCR.

INTRODUCCION

La inflamación juega un rol importante en el desarrollo de diversas enfermedades y la elevación de las


proteínas de fase aguda reconocidas como marcadores de inflamación, tienen mucho valor en el
pronóstico de estas enfermedades.
Una de estas moléculas sintetizadas por el hígado en una respuesta inflamatoria de fase aguda es la
Proteína C Reactiva.

La Proteína C Reactiva es miembro de la clase de reactivos de fase aguda y su nivel aumenta


dramáticamente durante los procesos inflamatorios que ocurren en el cuerpo. Este incremento se debe
a un aumento en la concentración plasmática de IL-6, que es producida por macrófagos, células
endoteliales, linfocitos T y también adipocitos.

El rol fisiológico de esta proteína es unirse a la fosfocolina expresada en la superficie de las células
moribundas o muertas, y a algunos tipos de bacterias, con el fin de activar el sistema del
complemento. Es sintetizada por el hígado en respuesta a factores liberadores y por los adipocitos

Colabora con el complemento ligándose a células extrañas y dañadas, y con la fagocitosis realizada por
macrófagos, quienes expresan un receptor para PCR. También se cree que desempeña un papel
importante en la inmunidad innata, como un sistema de defensa temprano contra infecciones.

La PCR aumenta hasta 50.000 veces en estados inflamatorios agudos. Se eleva sobre su nivel normal
dentro de las 6 horas siguientes y alcanza el pico máximo en 48 horas. Su vida media es constante, y
por ello la principal forma de medir sus niveles, es mediante la determinación de la tasa de producción
(y por lo tanto la gravedad de la causa precipitante).

Uso diagnóstico

La PCR se usa como marcador de inflamación. Aparte de un fallo hepático, se conocen pocos factores
que intervengan con la producción de PCR. La medición de los valores de la PCR puede servir para
determinar el progreso de una enfermedad o la efectividad del tratamiento. Para su análisis se
requiere de suero o plasma heparinizado.

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Existen varios métodos analíticos para determinar la PCR:

 Elisa
 Inmunoturbidímetría
 Inmunodifusión rápida
 Aglutinación visual

La PCR como es un marcador general para la inflamación y la infección, puede ser usada para
determinar también el riesgo de estar padeciendo un IMA.

Debido a que una PCR elevada puede ser causada por muchas causas, no es una prueba específica.

Existen en la actualidad numerosas investigaciones que avalan a la PCR como marcador de riesgo
cardiovascular. A pesar de ello, aún no se ha podido hacer uso clínico de este marcador, como tampoco
ha sido posible definir valores de referencia ni punto de corte. Esto se debe a que la determinación de
la concentración de PCR está sujeta a una serie de factores que no permiten realizar un buen estudio
epidemiológico de su comportamiento.

Fundamento de la prueba de Aglutinación en Látex

Es una prueba rápida de aglutinación, utilizando partículas de látex, para la detección y la


semicuantificación de anticuerpos o antígenos presentes en el suero humano.
PCR:
La determinación se efectúa ensayando una suspensión de partículas de látex recubiertos con
anticuerpos IgG anti Proteína C Reactiva humana frente a los sueros problema. Si la PCR está presente
las partículas de látex se agruparán (aglutinación).
La presencia o ausencia de aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia de la PCR en las
muestras ensayadas. La aglutinación de las partículas de látex es proporcional a la concentración de
PCR y puede ser cuantificada por turbidimetría.

Muestra
Suero claro, reciente.
Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8ºC durante una semana antes del ensayo, o por un
período mayor a –20ºC. Rechazar las muestras contaminadas, hemolizadas o lipémicas.

Prueba cualitativa

 Llevar los reactivos y muestras a temperatura ambiente.

 Resuspender el Reactivo con suavidad. Aspirar y vaciar varias veces el cuentagotas para
asegurar su homogeneidad antes del ensayo.

 Colocar 1 gota (50 μL) de suero en uno de los círculos de la tarjeta visualizadora. En círculos
adicionales, depositar 1 gota de control positivo y 1 gota de control negativo.

 Añadir una gota de látex, próxima a la muestra a analizar.

 Mezclar con ayuda de un palillo desechable, extendiéndola de forma que cubra por completo
la superficie interior de cada círculo de la tarjeta. Emplear palillos distintos para cada mezcla.
2
 Mover la tarjeta con agitador rotatorio durante 2 minutos.

 Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparición de cualquier signo de
aglutinación. Resultados falsos positivos pueden aparecer si el test se lee después de 2
minutos.

Lectura
Reacción negativa: Suspensión uniforme sin cambio visible alguno, tal como se presenta en el
control negativo.
Reacción positiva: Aglutinación débil o intensa, fácilmente visible macroscópicamente. La presencia
de aglutinación indica una concentración de PCR igual o mayor de 6 mg/dl.

Sensibilidad de la prueba es: 6 mg/dl.

Prueba semi-cuantitativa

Para cada muestra a analizar pipetear 50 μL de ClNa 9 g/L en cada uno de los 6 círculos de una
tarjeta visualizadora.
Pipetear sobre el diluyente del primer círculo 50 μL de muestra, y empleando la misma punta,
mezclar mediante aspiraciones y expulsiones repetidas, transfiriendo 50 μL de la mezcla resultante
sobre el diluyente del segundo círculo.
Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el sexto círculo, desechando los 50 μL
provenientes del mismo.
Las diluciones finales obtenidas serán: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64.
Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en la prueba cualitativa

Lectura

El título de la muestra corresponde a la máxima dilución que presenta aglutinación. La dilución


siguiente debe ser negativa.

La concentración aproximada de PCR en una muestra es calculada de la siguiente forma:

Título: Inversa de la máxima dilución a la que se produce la aglutinación visible (1+ a 4+)
6 X Titulo PCR = mg/dl

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

INFORME

1. Reporte e interprete sus resultados obtenidos por el método cualitativo y semicuantitativo.


2. ¿En qué consiste el método de inmunoturbidimetría para la determinación de PCR?

3. Describa dos enfermedades que cursen con elevación de PCR. Explique el mecanismo
inflamatorio.

4. Realizar una red semántica del tema: Procesos inflamatorios en enfermedades autoinmunes.
Del artículo: SOBRE LA INFLAMACIÓN.

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