PROTOCOLODELABORATORIOBIOLOGIACELULAR
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Impresión:
ISBN 978-958-44-1645 - 2
Portada:
Elaborado por:
Leonardo Bonilla
Biológo Universidad del Tolima
Marco Fidel Avila Rodríguez
Licenciado Universidad del Tolima
Edición:
Los autores
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Queridos estudiantes,
El propósito de este cuaderno es que ustedes, que emprenden hoy el arduo
camino de la formación académica superior y científica, comiencen a crear los
valores y la formación para las carreras que han seleccionado. El trabajo de
laboratorio debe desarrollase de forma responsable, consiente y organizada,
trabajar por protocolos permite fácilmente tener reproducibilidad en los datos
obtenidos.
Los protocolos que aquí encontrarán los guiarán durante sus actividades
prácticas en las asignaturas de Biología celular y fundamental, el uso de este
documento, le servirá como material de estudio y trabajo sistemático durante
todo el semestre.
Utilícenlo y disfrútenlo,
Éxitos muchachos,
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RECOMENDACIONES GENERALES, TÉCNICAS Y MÉTODOS DE INVESTIGACIÓN UTILIZADOS EN
BIOLOGÍA CELULAR
IMPLEMENTOS NECESARIOS
Nota: los elementos solicitados son imprescindibles y su uso es personal. Deben traerse a
todas las sesiones de prácticas del curso y a las evaluaciones.
INFORMES DE LABORATORIO
Este folleto les servirá como guía de trabajo, en él, podrán plasmar sus observaciones y
conclusiones, por lo que tendrá un doble propósito: enseñar y evaluar, les permitirá a ustedes
autoevaluarse y al profesor evaluar el trabajo que ustedes han realizado.
Los dibujos deben ser hechos a lápiz según lo observado (no es indispensable el uso de colores,
es opcional). Las observaciones deben definir aspectos como: tipo de estructura observada (por
ejemplo, célula de elodea), aumentos, tipo de preparación, tipo de tinción. No debe llevar
descripción, ni explicación si su guía no se lo orienta.
INSTRUCCIONES GENERALES
Para el desarrollo de las prácticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales
que deben ser observadas con toda disciplina.
1. Estar a tiempo en el laboratorio.
2. Usar la bata blanca durante todo el laboratorio. No usar cachuchas en el laboratorio.
3. Mantener apagados los celulares durante el laboratorio.
4. El laboratorio de Biología es un lugar donde se aprende mediante la observación y la
experimentación, es un sitio de trabajo serio y peligroso, si no se conservan las mínimas
normas de seguridad.
5. Leer cuidadosamente las instrucciones de cada práctica. NUNCA LLEGAR SIN SABER
LO QUE VAA HACER.
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6. El material utilizado en las prácticas es de propiedad de la Universidad, por lo tanto
debe manejarse con cuidado y una vez usado debe devolverse en buen estado. En caso
de daños o pérdidas, el elemento debe reponerse con uno de las mismas características.
9. En el caso de los microscopios con fuente eléctrica, apagar el equipo tres minutos antes
de guardarlo.
10. Antes de realizar una práctica, lea detenidamente el protocolo para adquirir una idea
clara de su objetivo, fundamento y técnica. Los resultados deben ser siempre anotados
cuidadosamente apenas se conozcan.
13. Antes de utilizar un compuesto, fijarse en la etiqueta para asegurarse que es el que
se necesita y evitar riesgos en su manipulación.
14. Nunca devolver a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados
sin consultar con el profesor.
15. No tocar con las manos y menos con la boca los productos químicos. Todo el
material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben
manejarse con mucho cuidado evitando forzar los mecanismos.
16. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben mantenerse alejados
del fuego. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará al baño
María, nunca directamente a la llama.
17. Si se manejan mecheros a gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso
al apagar la llama.
18. Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos, álcalis, etc.) deberá hacerse con
cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se verterán
bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarán resbalar suavemente por su
pared.
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19. Cuando se quiera diluir un ácido, nunca se debe adicionar agua sobre ellos; siempre
al contrario: ácido sobre agua.
20. Cuando se vierta un producto líquido, el frasco que lo contiene se inclinará de forma
que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido se
deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco
posteriormente.
21. No pipetear con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio
que se disponga en el centro. Las pipetas se tomarán de forma que sea el dedo índice
el que tape su extremo superior para regular la caída de líquido.
22. Al enrasar un líquido, con una determinada división de escala graduada, debe
evitarse el error de paralaje, levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos
para que la línea visual al enrase sea horizontal.
23. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen líquidos, debe evitarse
la ebullición violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de
ensayo se acercará a la llama inclinado y procurando que ésta actúe sobre la mitad
superior del contenido y, cuando se observe que se inicia la ebullición rápida, se
retirará, acercándolo nuevamente a los pocos segundos y retirándolo otra vez
al producirse una nueva ebullición, realizando así un calentamiento intermitente.
En cualquier caso, se evitará dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra
persona.
25. Los cubreobjetos y portaobjetos deben tomarse por los bordes para evitar que se
engrasen. Siempre que manipule sangre, suero u otro material biológico, cualquiera
sea su procedencia, use guantes.
26. Los desechos infecciosos como agujas y hojas de bisturí, deben ser depositadas en
bolsas de color rojo “sin sacarlos de su guardián”. Los desechos no peligrosos
(Biodegradables y/o inertes) se depositan en bolsas de color verde.
27. Lavar las manos con agua y jabón una vez concluida las labores de laboratorio.
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INTRODUCCIÓN
Para desarrollar un trabajo en el laboratorio, primero hay que conocer bien los
implementos y materiales que vamos a utilizar, su correcto uso y función. Esto permite
realizar un trabajo de forma eficiente, ágil, y calificado.
OBJETIVOS
✓ Identificar los diferentes implementos del laboratorio de biología por su nombre y su
forma.
✓ Diferenciar el uso que se le da a cada uno de los implementos.
✓ Clasificar los implementos según el tipo de material.
✓ Hacer un buen uso del material de laboratorio.
PROCEDIMIENTO
Material de vidrio
Material de porcelana
Material metálico
Soporte universal, aros metálicos, malla asbesto, mecheros, pinzas metálicas para
crisoles y tubos de ensayo, espátulas metálicas.
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Los conocimientos sobre la célula progresan simultáneamente con los avances tecnológicos del
instrumental de laboratorio, (microscopios, balazas, cristalería) los descubrimientos de
tinciones que facilitan la visualización de tejidos, células y organelos y los avances teóricos que
brindan al investigador elementos de análisis para la interpretación de los procesos.
1. OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS
Técnicas de tinción: En general, el proceso seguido en todas las tinciones se caracteriza por
presentar las siguientes etapas:
2. Fijación: Tiene por objeto adherir la muestra al portaobjetos y desnaturalizar las proteínas
para facilitar la acción del colorante. Normalmente se realiza con calor, pasando la muestra
repetidamente a 10cm de la llama del mechero ó mediante soluciones de fijación como el
Carnoy.
3. Tinción: Se realiza añadiendo los colorantes sobre los microorganismos sometidos a los
procesos anteriores.
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La mayoría de los colorantes se comportan como bases o como ácidos, en los colorantes
básicos, los cromóforos o grupos químicos responsables del color, son catiónicos, estos se
combinan con los grupos ácidos (aniónicos) de las moléculas celulares.
Por esta razón, los ácidos nucleicos son basófilos, es decir presentan afinidad por
colorantes básicos cuyos radicales se unen a los radicales ácidos del ADN y del ARN. El azul
de Toluidina, el azul de metileno y la hematoxilina son ejemplos de colorantes básicos. En
los colorantes ácidos, los cromóforos son aniónicos (carga eléctrica negativa) y tienden a
unirse con los componentes celulares de carácter básico, que son eléctricamente positivos.
Así las estructuras celulares ricas en grupos básicos son acidófilas por su afinidad con los
colorantes ácidos. La eosina, el orange G y la fuscina, son ejemplos de colorantes ácidos.
Tinción Simple: Se utiliza un solo colorante que puede ser de cualquier tipo. Al igual que la
tinción negativa, nos permite observar la forma, el tamaño y el tipo de agrupación de las
células.
Tinción Diferencial: Intervienen dos o más colorantes y cada uno diferencia una estructura.
El colorante que se usa en segundo lugar es de color diferente al del primero,
denominándose colorante de contraste.
2. CORTES DE TEJIDOS
En general los fijadores deben garantizar que las estructuras y moléculas se mantengan en
la forma más intacta posible. Una vez fijado el tejido, se procede a realizar los cortes, para lo
cual se utilizan equipos con cuchillas especiales entre los que se encuentran los micrótomos
y vibrátomos que facilitan la obtención de cortes de dimensiones micrométricas. Mientras
más potente sea el microscopio, se requieren cortes más delgados. Los cortes se someten
al proceso tinción para tornar visibles los organelos que, generalmente, son incoloros.
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3. CITOQUÍMICA
Esta técnica se utiliza para localizar sustancias componentes de la célula, para lo cual, se
utilizan tinciones. Generalmente, la intensidad del color que muestran las estructuras es
proporcional a la concentración de la sustancia coloreada.
Una técnica citoquímica muy conocida para localizar el ADN es la reacción de Feulgen, que
consta en desnaturalizar el ADN es decir, separar las hebras para posteriormente ser tratadas
con el reactivo de Schiff, formando un complejo de color rojo, por lo tanto la intensidad del rojo es
proporcional a la cantidad de ADN presente. Gracias a la reacción, hoy se sabe que la cantidad
ADN es fija para cada especie y que el ADN se duplica antes que la célula entre en mitosis.
FISH es una tecnología que utiliza fragmentos marcados de ADN con fluorescencia (sondas)
para detectar o confirmar anomalías genéticas o cromosómicas, esto quiere decir que los
fragmentos marcados se unen al ADN de los cromosomas debido a la complementariedad
entre las secuencias de las bases nitrogenadas, posteriormente se utiliza un microscopio de
fluorescencia, que exhibe una luz especial que permite visualizar las áreas de los cromosomas
que fueron marcadas con la o las diferentes sondas.
El procedimiento para llevar a cabo esta técnica consta de varios pasos, primero, la muestra de
ADN (cromosomas en metafase o núcleos en interfase) se desnaturaliza, proceso que separa
las hebras complementarias de la estructura en doble hélice del ADN, posteriormente se
introduce la sonda de interés marcada con fluorescencia, que se hibridará (unirá) al ADN de la
muestra en el sitio específico, el proceso es denominado templado. La señal de la sonda se
observa mediante un microscopio de fluorescencia y la muestra de ADN se clasifica según la
presencia o ausencia de la señal.
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5. INMUNOCITOQUÍMICA
Mediante el uso de esta técnica se puede localizar proteínas específicas. La técnica se basa en
la reacción antígeno-anticuerpo. Si se toma, por ejemplo, una muestra de tejido de un órgano de
un ratón, se extrae y se purifica una proteína, que se denomine por ejemplo, proteína X,
podemos conocer luego, en que células o partes de la célula está localizada la proteína X, pues
ella se aisló de un órgano completo.
La proteína X purificada actúa como antígeno (es decir, como una partícula extraña) si se
inyecta a otro animal, por ejemplo a un conejo; entonces, el conejo formará anticuerpos contra la
proteína X y se combinarán inmediatamente con ésta proteína. De la sangre del conejo, es
posible extraer el anticuerpo específico de la proteína X. Si éste anticuerpo se marca, por
ejemplo, con una peroxidasa, donde se identifique la peroxidasa estará también el anticuerpo.
Si se coloca un corte del órgano del ratón que contiene la proteína X y se aplica sobre él una
solución de antígeno (proteina X) con su anticuerpo (gammaglobulina anti-X) marcado con
peroxidasa. Este conjunto puede ser identificado bajo el microscopio según la marca que se
coloque al anticuerpo; si es peroxidasa, se observarán puntos color café donde se encuentre el
complejo antígeno – anticuerpo. Del mismo modo la peroxidasa puede reemplazarse por un
colorante fluorescente y entonces se identificará por la emisión de luz. Esta técnica permite la
identificación específica de proteínas mediante el uso de diferentes metodologías de marcaje en
el anticuerpo para posterior detección.
6. AUTORRADIOGRAFÍA
7. CROMATROGRAFÍA Y ELECTROFORESIS
La cromatrografía y electroforesis son técnicas que permiten conocer los tipos de proteínas que
forman parte de una estructura o que son sintetizadas por un órgano o tejido.
La cromatrografía es una técnica de análisis químico utilizada para separar sustancias puras de
mezclas complejas. Estas técnicas depende dle principio de absorción selectiva.
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La cromatografía fue descubierta por el botánico ruso, de origen italiano, Mijaíl Tswett en 1906,
pero su uso no se generalizó hasta la década de 1930. Tswett separó los pigmentos de las
plantas (clorofila) vertiendo extracto de hojas verdes en éter de petróleo sobre una columna de
carbonato de calcio en polvo en el interior de una probeta. A medida que la disolución va
filtrándose por la columna, cada componente de la mezcla precipita a diferente velocidad,
quedando la columna marcada por bandas horizontales de colores, denominadas
cromatogramas. Cada banda corresponde a un pigmento diferente.
Actualmente la cromatografía presentas variables que permiten una mejor y mayor separación
de los compuestos y además tomando en cuenta las necesidades investigativas, entre dichas
variables se encuentran la cromatografía de columna, la cromatografía líquida de alta eficiencia
también llamada HPLC, la cromatografía gas líquido y la cromatografía de papel.
El polímero utilizado para el análisis electroforético de ácidos nucleicos de gran tamaño (100pb-
10kb) es la agarosa. La migración de los fragmentos de ácidos nucleicos (ADN o ARN) en un gel
de agarosa sometido a un campo eléctrico depende tanto del voltaje del campo, como del
tamaño de poro del gel de agarosa. La separación efectiva de los fragmentos de ADN o ARN
(resolución) depende tanto de la masa como de la carga de los distintos fragmentos, en realidad
de la relación carga/masa. Transcurrida la electroforesis, la localización relativa de los
fragmentos se determina mediante distintos métodos de detección. La tinción con bromuro de
etidio, una sonda fluorescente tras iluminación con luz UV, es un método generalizado de
detección de fragmentos de ADN, ya que la sonda se intercala entre la doble hélice de ADN y
emite luz.
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8. CULTIVOS CELULARES
Los estudios que emplean cultivos celulares abarcan gran número de disciplinas y
aproximaciones al estudio del fenómeno celular.
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Además, las denominadas técnicas de terapia génica se basan en la modificación de las
células de un organismo mediante la introducción de genes normales o modificados. En
cualquier caso supone la incorporación y expresión por parte de las células de un organismo de
nuevos genes. Las células vivas presentan una barrera a la libre difusión de moléculas que es la
membrana plasmática. Esta barrera evita la pérdida de componentes fundamentales de la
célula, impide la entrada de moléculas externas y por ello posibilita la existencia de gradientes
de concentración de productos a través de la membrana. Para poder superar esta barrera a la
difusión se han diseñado muchas estrategias experimentales, unas basada en la formación de
poros u orificios en la membrana, más o menos permanentes, y las otras en la vehiculización de
moléculas hacia el interior celular mediante el uso de las vías naturales de entrada de
macromoléculas, la endocitosis.
Se trata de técnicas que permiten mantener las células vivas, inmersas en una solución durante
un periodo de tiempo que no suele superar las pocas horas en condiciones tales que presentan
gran cantidad de orificios en la membrana. Cualquier molécula añadida a la solución que las
rodea penetra en la célula gracias al gradiente de concentración. Se obtienen mediante
tratamiento suave con detergentes que solubilizan parcialmente las membranas.
Es una técnica que se basa en la aplicación de un elevado voltaje a las células durante un
periodo de tiempo muy corto. Durante ese tiempo las células despolarizan sus membranas y se
forman pequeños orificios por los que penetran las moléculas (proteínas, ADN,...) que se
encuentran alrededor. Pasada la despolarización muchas células sufren daños irreparables y
mueren (en muchos casos más del 90%) pero algunas (5 al 10% habitualmente) se recuperan y
han incorporado las moléculas deseadas. La ventaja de esta técnica es que se aplica a millones
de células a la vez y habitualmente se obtienen eficiencias de entrada de las moléculas del
100% de las células que sobreviven (centenares de miles a millones). Es una técnica que
requiere su ajuste fino para cada tipo celular, a fin de determinar las condiciones óptimas de
duración y potencia del pulso. Se busca siempre el mejor equilibrio entre las condiciones que
aseguran la entrada en la célula y las que maximizan la viabilidad celular.
En la naturaleza existen sistemas de microinyección naturales, realizados por virus que inoculan
a las células su ácido nucleico. Sistemas virales empleados habitualmente en la manipulación
celular son los baculovirus y las células Sf9 (insecto) para la producción de proteínas, los
adenovirus, retrovirus, etc., sobre sistemas de células de mamífero.
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Las técnicas de transfección celular, que se han desarrollado fundamentalmente para permitir la
introducción de ácidos nucleicos en el interior de las células, han permitido en gran medida
ampliar los conocimientos acerca de la regulación génica y de la función de las proteínas en los
sistemas celulares. Actualmente se emplean en gran número de aproximaciones
experimentales, en la generación de animales transgénicos, en la selección de líneas celulares
modificadas, etc.
Tanto en el primero como en el segundo caso, puede ser importante seleccionar las células que
han adquirido el plásmido. Para facilitarlo se incluyen en éstos genes de resistencia a drogas
que permiten a las células que los han adquirido sobrevivir en medios selectivos. Uno de los
sistemas de selección más empleado es el de la resistencia a G418 (resistencia a neomicina)
que permite seleccionar clones celulares de expresión estable. Así diferenciaremos entre la
transfección temporal y la transfección estable o de larga duración.
Una vez introducida la molécula de ADN recombinante en el interior de las células producirá su
efecto permitiendo, por ejemplo:
Seleccionar células que hayan incorporado el ADN. Este sería el caso del aislamiento de
clones celulares que presentaran expresión de un determinado producto. Es posible por la
incorporación en el propio vector de marcadores de selección, típicamente la resistencia de
G418 (neomicina), a las pocas horas o días detectar la presencia de la proteína codificada por el
plásmido.
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Debido a su simplicidad comparativa, las células procariotas (bacterias y algas verde-azules)
son modelos ideales para estudio de biología molecular. La mayoría de los conceptos actuales
de biología molecular, derivan de los estudios realizados en E.coli,
incluyendo la comprensión sobre la replicación de ADN, código genético ,la trascripción y la
síntesis de proteínas.
Las levaduras se han convertido en modelo para el estudio de muchos aspectos de la célula
eucariota. Saccharomyces cereviae es la levadura más estudiada. Su genoma consiste en 12
millones de pares de bases, organizado en 16 cromosomas lineales y contiene alrededor de
6.000 genes; más práctico para el estudio que el resto de células eucariotas. Contiene, como
toda eucariota, membrana nuclear, citoesqueleto y organelo citoplasmático.
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MICROSCOPÍA:
MANEJO Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO
1662- Marcelo Malpighi visualizó al microscopio tejidos embrionarios animales y vegetales por
primera vez.
1632-1732- Anthony Van Leeuwenhoek fue el primero en describir organismos como las
bacterias (bacilos, cocos y espirilos), protozoarios, rotíferos e hidras. Describió por primera vez
el espermatozoide de humanos, perros, conejos, peces e insectos entre otros. Además observó
las células sanguíneas.
1635-1703- Robert Hooke popularizó el microscopio entres los biólogos contemporáneos e hizo
grandes contribuciones al estudio de la célula.
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Actualmente la microscopía se clasifica en dos grandes grupos: la microscopía óptica y la
microscopía electrónica. En el microscopio óptico el aumento del objeto se consigue usando un
sistema de lentes que manipula el paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El
microscopio electrónico utiliza un rayo de electrones controlado por un campo magnético.
En 1982 por Binning y Röhrer presentaron a la comunidad científica un nuevo microscopio, “el
microscopio cuántico” por el que obtuvieron el premio Nobel de física en 1986. El microscopio
cuántico es un microscopio que forma parte de los instrumentos llamados nanoscopios porque
posibilitan “ver” objetos del tamaño en nanómetros y aún menores, se conoce como
"microscopio de barrido de efecto túnel" (STM).
El tipo de microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que utiliza la luz visible para crear
una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple es la lente convexa doble
con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo
general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se
consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por
encima de las 2.000 veces.
Las lentes de un microscopio óptico son el condensador, el objetivo y el ocular. La luz que entra
en el sistema debe enfocarse sobre la preparación y para esto se utiliza el condensador.
Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una
posición que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situadas cerca del objeto que se
observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se trasmite
al ocular, donde se realiza el aumento final.
Los microscopios que se usan normalmente en microbiología están equipados con tres
objetivos: bajo poder, alto poder y objetivo de inmersión. Estos objetivos están montados sobre
la pieza que se llama revolver que puede tratarse para alinear el objetivo deseado con el
condensador.
La imagen formada por el objetivo es finalmente aumentada por el ocular. El aumento total de
microscopio compuesto es el producto del aumento de su objetivo y de su ocular. El microscopio
compuesto es capaz de conseguir aumentos considerablemente mayores que el microscopio
construido por una sola lente. Este último, llamado microscopio simple, se usa principalmente
como lupas y cristales de aumento.
Además del aumento, una propiedad importante de un microscopio en su poder resolutivo; esto
es la capacidad de mostrar distintos y separados: muy cercanos. Cuanto mayor sea el poder
resolutivo, mayor será la definición de un objeto. Los microscopios de gran poder resolutivo son
especialmente buenos para ver pequeñas estructuras. El poder resolutivo de un microscopio
compuesto depende de longitud de onda utilizada y de una propiedad óptica de la lente conocida
como apertura numérica. Como los microscopios ópticos utilizan luz visible, la longitud de onda
está fijada y es por lo que la resolución de un objeto es nuevo función de la apertura numérica;
cuanto mayor sea la apertura, el objeto resuelto será más pequeño.
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OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS OPTICOS Figura 3. Microscopio estereoscopio.
El microscopio de luz ultravioleta
Utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen.
El campo de visión del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y sólo
recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello, las porciones claras del espécimen
aparecen como un fondo oscuro y los objetos minúsculos que se están analizando
aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de iluminación se utiliza
para analizar elementos biológicos transparentes y sin manchas, invisibles con
iluminación normal.
Ilumina el espécimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro.
Sin embargo, en el microscopio de fase el cono de luz es más estrecho y entra en el campo
de visión del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad
de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de
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iluminación provoca variaciones minúsculas en el índice de refracción de un espécimen
transparente, haciéndolo visible. Este tipo de microscopio es muy útil a la hora de examinar
tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biología y medicina.
Los microscopios electrónicos utilizan rayos de electrones en lugar de la luz, lo que les
permite tener un poder de resolución muy elevado. La longitud de onda de los rayos de
electrones es de 0,005-0,003 nm, muy corta comparada con la luz visible que es de 426-
750nm (es decir la gama de colores que vemos desde violeta hasta rojo). Es posible con el
microscopio electrónico resolver objetos separados por la distancia de 0,003 µm,
comparado con los 0,25 µm de un microscopio óptico, como consecuencia de esto los
aumentos pueden llegar a ser hasta de un millón de veces.
Atados a la naturaleza de este instrumento sólo pueden examinarse objetos muy delgados;
incluso una sola bacteria es demasiado gruesa para ser observada directamente.
Todos los microscopios electrónicos cuentan con varios elementos básicos. Disponen de un
cañón de electrones que emite los electrones que chocan contra el espécimen, creando una
imagen aumentada. Se utilizan lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan
el haz de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios
ópticos no funcionan con los electrones. El sistema de vacío es una parte relevante del
microscopio electrónico. Los electrones pueden ser desviados por las moléculas del aire, de
forma que tiene que hacerse un vacío casi total en el interior de un microscopio de estas
características. Por último, todos los microscopios electrónicos cuentan con un sistema que
registra o muestra la imagen que producen los electrones.
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microscopio electrónico que cuenta con un analizador de espectro de rayos X, puede
analizar los rayos X de alta energía que produce el objeto al ser bombardeado con
electrones. Dado que la identidad de los diferentes átomos y moléculas de un material se
puede conocer utilizando sus emisiones de rayos X, los analizadores de sonda de
electrones no sólo proporcionan una imagen ampliada de la muestra, como hace un
microscopio electrónico, sino que suministra también información sobre la composición
química del material, las siguientes imágenes ilustran la resolución que se puede alcanzar
con un microscopio STEM
E. coli Circulo
formado
por átomos
de Bromo
Hay diversos microscopios ópticos para funciones especiales. Uno de ellos es el microscopio
estereoscópico, que no es sino un par de microscopios de baja potencia colocados de forma que
convergen en el espécimen. Estos instrumentos producen una imagen tridimensional. En el
Estereomicroscopio la visión es por reflexión, lo que permite ver los objetos naturales, tiene
un inversor que permite ver la imagen “a derechas”; esto hace más fácil las manipulaciones que
se realizan con lupa.
La visión estereoscópica, o sensación de relieve, sólo se consigue cuando a cada ojo lleguen
imágenes distintas del objeto; por ello tiene la lupa binocular dos sistemas ópticos distintos.
Cada ojo, recibe una imagen por separado, captada por cada sistema óptico correspondiente
del aparato, y con la convergencia necesaria para producir una visión correcta. Es un aparato
que tiene una amplia capacidad de movimiento; esto le permite observar pequeños animales en
su medio ambiente. Se utiliza la lupa binocular o estereomicroscopio para observarlo todo, un
trozo de papel, un cabello abierto, un tejido, una raya de bolígrafo, otra de lápiz, papel
cuadriculado, etc. El esteromicroscopio debe utilizarse para la observación de los pequeños
detalles, en todas las direcciones, o estudios morfológicos, tanto animales como vegetales.
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Figura 4. Partes de un microscopio óptico
Sistema de aumento
o LENTE OCULAR: Está insertado en forma suelta en el extremo superior del tubo (situada
cerca del ojo del observador). Tiene una señal grabada (por ejemplo 10x) que indica el
aumento individual del ocular.
o LENTE OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Tiene gravadas varias cifras:
aumento (4; 8, 10, 40, 90, 100). El aumento del ocular multiplicado por el coeficiente de
aumento (del objetivo) proporciona el aumento total del microscopio (amplificación total).
Los microscopios compuestos, normalmente están equipados con tres objetivos: menor
aumento, mayor aumento y objetivo de inmersión. Estos objetivos están montados sobre
una pieza que se llama revolver que puede rotarse para alinear el objetivo deseado con el
condensador.
El objetivo y el ocular permiten finalmente obtener una imagen virtual invertida detallada y
amplificada del objeto.
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Sistema de iluminación
Figura 6. Foco
Sistema mecánico
o SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular o binocular
o REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico
que consigue el enfoque correcto.
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Figura 7. La platina, el revólver, oculares y tornillos macrométrico y micrométrico
Poder de aumento.
Poder de resolución.
Poder de definición.
Poder de penetración de foco o profundidad de campo.
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Poder de resolución: Se refiere a la capacidad de un sistema óptico de presentar dos puntos
próximos separados. Se especifica por la distancia mínima en que se logra resolver estos
puntos. Por ejemplo el hombre tiene un poder de resolución de 0.1 mm, a la distancia mínima de
visión clara 25 cm. Este poder depende a su vez de la longitud de onda () y de la apertura
numérica del objetivo (A.N). La apertura numérica también se halla gravada en la manga del
lente, junto a la indicación del poder de aumento: -0.30 en el objetivo 10x, -0.65 en 40x, -1.30 en
100x.
Para poder entender estos conceptos es importante conocer, que es la refracción de la luz. Los
rayos de luz atraviesan el aire en línea recta, pero al entrar en una sustancia como el agua o el
vidrio, chocan contra la superficie y se desvían o refractan.
Los rangos de luz visible van desde las longitudes rojas largas (= 760nm) hasta las
pequeñas ondas azul/violeta (=400 nm). Las ondas ultravioletas pueden ser tan cortas como
230nm
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El poder de resolución es :
2x N.A.
Por lo tanto si se tiene un objetivo de 100x, con A.N. de 1.30 y una longitud de onda promedio
de 520nm, el poder de resolución será:
Cuanto mayor sea el poder de resolución del objetivo, será más clara la imagen y aumentará
la capacidad de poner de manifiesto los detalles adyacentes muy cercanos, separándolos y
aclarándolos.
Gire el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de
40x.
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Coloque una gota mínima de aceite de inmersión sobre el punto de luz.
Termine de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión,
asegurándose de que éste no toca la preparación pero sí la gota de aceite.
Una vez que haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no puede volver a
colocar el objetivo de 40x sobre ese campo, pues correría el riesgo de mancharlo de aceite.
Por tanto, si desea enfocar otro campo, debe retirar el objetivo de inmersión girando el
revólver hacia el objetivo de menor aumento (10x), seleccionando otro campo y empezando a
enfocar desde este último.
Finalizada la observación de la preparación, y antes de retirarla de la platina, se colocará el
objetivo de menor aumento girando el revólver en sentido hacia él. Nunca retire la preparación
con el objetivo de inmersión en posición de observación.
Retire la preparación y limpie el objetivo de inmersión cuidadosamente empleando un papel
especial para óptica. Compruebe también que el objetivo de 40x está perfectamente limpio.
MATERIALES
Letras de papel de periódico. Escamas de mariposa. Hilos de colores. Cristales de sulfato de
cobre y azúcar. Microscopio, láminas y laminillas, pipetas y los materiales habituales que debe
traer el estudiante, orientados en la primera clase.
PROCEDIMIENTO
Realice un montaje húmedo o seco según la indicación del profesor de una letra pequeña, un
hilo y otros materiales que están a disposición para la observación.
En el caso de montajes húmedos coloque una gota de agua sobre la lámina. Dentro de la gota de
agua ponga la letra impresa.
Acerque una laminilla en posición oblicua, y apoye una arista sobre la lámina al lado de la gota
de agua, y deje caer suavemente.
Nota: La lámina antes de ser usadas debe estar completamente limpias y secas.
Realice las observaciones siguiendo las recomendaciones dadas en el apartado 3.
Realice las observaciones a 10x y 40x y dibújelas.
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MEDICIONES CON EL MICROSCOPIO
INTRODUCCIÓN
Indirecto
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OBJETIVOS
MATERIALES
Grano de polen, cristales de permanganato de potasio, papel mantequilla
milimetrado, computador, programa Fiji, cámara de Neubauer, microscopio e
implementos habituales.
PROCEDIMIENTO
- Medición Indirecta
o Determinación del diámetro del campo óptico (Φ) a menor aumento.
o Tome una muestra del papel milimetrado, luego agréguele una gota de
agua y enfoque en menor aumento un cuadrado, dejando el margen
hacia algún extremo del campo visual, como indica la figura.
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Tabla Nº1 Diámetro aproximado y calculado de los objetivos de 4X, 10X, 40X y 100X
Objetivo de ocular Diámetro aprox. Diámetro calculado
10x
40x
100x
Entonces podemos observar que a medida que la imagen se aumenta tantas veces,
el campo óptico se reduce proporcionalmente con el aumento empleado,
teóricamente se podría calcular de la siguiente manera:
Realice los dibujos de sus observaciones y complete la tabla con sus resultados:
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- Programa Fiji
o Tome la cámara de Neubauer y ubicándola en el microscopio tome una
foto en cada aumento.
Figura 12. Recuadros que se despliegan (a) al entrar a “Set scale” y (b) al obtener
los resultados
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29 30
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Ahora establezca el tamaño del objeto u organismo:
35
29
DETERMINACIÓN DE BIOMOLÉCULAS: GLÚCIDOS Y LÍPIDOS
Fuente. J. Gualtero
Todos los seres vivos están constituidos cualitativa y cuantitativamente por los mismos
elementos químicos. De todos los elementos que se hallan en la corteza terrestre, sólo unos 25
son componentes de los seres vivos. Esto confirma la idea, que la vida se ha desarrollado sobre
unos elementos concretos que poseen unas propiedades físico-químicas idóneas, acordes con
los procesos químicos que se desarrollan en los seres vivos.
45
Los lípidos son macromoléculas esenciales para las células porque hacen parte fundamental de
su estructura. Químicamente son ésteres formados por la reacción entre un alcohol con varios
ácidos grasos, estableciéndose entre ellos un enlace éster. Los lípidos se clasifican en dos
grandes grupos de acuerdo a la complejidad de sus moléculas, lípidos simples y lípidos
compuestos.
Los lípidos son moléculas que contienen una gran cantidad de energía potencial almacenada, 9
Kcal/mole, mientras que los carbohidratos y las proteínas contienen 4 Kcal/mole. Esta energía
potencial se encuentra almacenada en los ácidos grasos que están esterificados con el alcohol,
los cuales pueden ser saturados (sin doble enlaces) o insaturado (con doble enlaces); los
primeros abundan en las grasas y los segundos en los aceites.
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OBJETIVOS
✓ Comprender el papel fisiológico que tienen las biomoléculas en todos los organismos.
RECONOCIMIENTO DE GLÚCIDOS
MATERIALES
Tubos de ensayo, gradilla, pinzas, mechero, pipetas, solución de Lugol, solución de Fehling
A y B, solución alcalina (sosa, potasa, bicarbonato, etc.), HCl diluido, soluciones al 5% de
glucosa, maltosa, lactosa, fructosa, sacarosa y almidón.
1. ESTUDIO DE AZÚCARES
REDUCTORES Fundamento
Los monosacáridos y la mayoría de los disacáridos poseen poder reductor, que deben al
grupo carbonilo que tienen en su molécula. Este carácter reductor puede ponerse de
manifiesto por medio de una reacción redox llevada a cabo entre ellos y el sulfato de cobre
(II). Las soluciones de esta sal tienen color azul. Tras la reacción con el glúcido reductor se
forma óxido de cobre (I) de color rojo. De este modo, el cambio de color indica que se ha
producido la citada reacción y que, por lo tanto, el glúcido presente es reductor.
Técnica
1. Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solución de glucosa, maltosa, lactosa fructosa o
sacarosa (según indique el profesor).
2. Añadir 1ml de solución de Fehling A (contiene CuSO4) y 1ml de Fehling B (lleva NaOH
para alcalinizar el medio y permitir la reacción)
3. Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan.
4. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo y será negativa si queda
azul o cambia a un tono azul-verdoso.
5. Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prácticas con las distintas
muestras de glúcidos.
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2. HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA
Fundamento
La sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres, por lo que carece de
poder reductor y la reacción con el reactivo de Fehling es negativa, tal y como ha quedado
demostrado en el experimento 1. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se
hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se descompone en los monosacáridos que
la forman, glucosa y fructosa, que sí son reductores. La prueba de que se ha verificado la
hidrólisis se realiza con el reactivo de Fehling, y si el resultado es positivo, aparecerá un
precipitado rojo. Si el resultado es negativo, la hidrólisis no se ha realizado correctamente y si en
el resultado final aparece una coloración verde en el tubo de ensayo se debe a una hidrólisis
parcial de la sacarosa.
Técnica
Fundamento
Técnica
48
49
Fundamento Teórico
Generalmente se estima el límite de glucosa pura entre 100 y 200 gramos pero, recientemente
se ha comprobado que en muchos individuos, cantidades mayores, hasta la máxima que el
estómago puede tolerar (400-500g) no provoca glucosuria.
La glucosa que sigue a la ingestión de 100g o menos, es anormal e indica un umbral renal bajo,
disminución de la capacidad del hígado para almacenar glucosa como glicógeno o trastorno del
metabolismo glucídico.
Por ultimo debemos señalar que como resultado de la actividad física puede aparecer glucosa
en la orina, considerándose un proceso eminentemente funcional. En el caso de cargos físicos
intensos y de corta duración, en las cuales la movilización del glucógeno hepático se intensifica
y se incrementa el nivel de glucosa sanguínea, se puede observar manifestaciones de glucosa.
La glucosa se puede regular casi totalmente, restringiendo con cuidado la dieta.
Principios:
Todos los azucares (glucosa, levulosa, galactosa, etc) reducen con rapidez, por medio de calor
al sulfato de cobre en solución alcalina (reactivo Benedict) haciéndolo pasar a oxido cuproso
insoluble, de color amarillo a rojo.
Materiales
Técnica
50
3. Someta el tubo al calor y déjelo hervir durante 2 o 3 minutos. No debe derramarse.
Déjelo enfriar espontáneamente.
La lectura de esta práctica se realiza observando el color que toma la muestra y que puede
dar uno de los siguientes resultados.
RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS
MATERIALES
SAPONIFICACIÓN
Fundamento
Las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o potásico descomponiéndose
en los dos elementos que las integran: glicerina y ácidos grasos.
Éstos se combinan con los iones sodio o potasio del hidróxido para dar jabones, que son en
consecuencia las sales sódicas o potásicas de los ácidos grasos. En los seres vivos, la
hidrólisis de los triglicéridos se realiza mediante la acción de enzimas específicas (lipasas)
que dan lugar a la formación de ácidos grasos y glicerina.
51
Técnica
. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.
. Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño María de 20 a 30 minutos.
. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene
la solución de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semisólida que
es el jabón formado y una superior lipídica de aceite inalterado.
2. TINCIÓN
Fundamento
Los lípidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudán III.
Técnica
3. SOLUBILIDAD
Fundamento
Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en
pequeñísimas gotas formando una emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, pues
desaparece en reposo por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su
menor densidad, se sitúa sobre el agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter, cloroformo,
acetona, benceno, etc.
Técnica
52
RESULTADOS
(Apoyarse con un diseño de lo observado)
1. SAPONIFICACIÓN
2. TINCIÓN
3. SOLUBILIDAD
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DETERMINACIÓN DE BIOMOLÉCULAS: PROTEÍNAS Y ADN
Las proteínas son moléculas compuestas de una o más cadenas de aminoácidos. Las proteínas
desempeñan muchas funciones. Las enzimas son proteínas importantes que dirigen casi todas
las reacciones químicas que se llevan a cabo dentro de las células, dado que cada enzimas
ayuda sólo en una o unas cuantas reacciones específicas, casi todas las células contienen
cientos de enzimas distintas.
Hay otros tipos de proteínas que se utilizan para fines estructurales como la elastina, que
confiere la elasticidad la piel; la queratina, que es la principal proteínas del pelo, de los cuernos
de los animales y de las uñas. Hay también proteínas que se usan para almacenar energía y
materiales (álbumina), para transporte (hemoglobina) y para movimiento celular (proteínas
contráctiles de los músculos), hormonas (insulina, hormona del crecimiento), anticuerpos (que
ayudan a combatir las enfermedades e infecciones) y muchos venenos (como el de la serpiente
cascabel) también son proteínas.
56
Las proteínas son polímeros de aminoácidos. Todos los aminoácidos tienen la misma estructura
fundamental que consiste en un carbono central unido a cuatro grupos funcionales distintos: un
grupo amino (-NH3), que contiene nitrógeno; un grupo carboxilo; un hidrógeno; y un grupo
variable (representado por la letra R). El grupo R difiere entre los aminoácidos y confiere a cada
uno sus propiedades distintas.
Los aminoácidos difieren en sus propiedades químicas y físicas, como tamaño, solubilidad en
agua, carga eléctrica, debido a sus diferentes grupos R. Por ello, la sucesión exacta de
aminoácidos dicta la función de cada proteína, si es soluble o no en agua, si es una enzima, una
hormona o una proteína estructural. La sucesión alterada de aminoácidos dan al traste con la
función. En algunos casos basta un error en un aminoácido para que la proteína no funcione
correctamente.
Los ácidos nucleicos son largas cadenas de subunidades similares, pero no idénticas, llamadas
nucleótidos. Todos los nucleótidos tiene una escritura de tres partes: un azúcar de cinco
carbonos (ribosa o desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada que difiere entre los
nucleótidos.
Hay dos tipos de nucleótidos, los que contienen el azúcar ribosa y los que contienen el azúcar
desoxirribosa. Estos últimos llevan unidos cuatro grupos de bases nitrogenadas: adenina,
guanina, citosina y uracilo, en vez de timina. Los nucleótidos se pueden enlazar en largas
cadenas para formar ácidos nucleicos como el ARN y el ADN.
Cada molécula de ADN está constituida por dos cadenas o bandas formadas por un elevado
número de compuestos químicos llamados nucleótidos.
Estas cadenas forman una especie de escalera retorcida que se llama doble hélice. Cada
nucleótido está formado por tres unidades: una molécula de azúcar llamada desoxirribosa, un
grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestos nitrogenados ya mencionados adenina
(abreviada como A), guanina (G), timina (T) y citosina (C). La molécula de desoxirribosa ocupa el
centro del nucleótido y está flanqueada por un grupo fosfato a un lado y una base al otro. El
grupo fosfato está a su vez unido a la desoxirribosa del nucleótido adyacente de la cadena.
Estas subunidades enlazadas desoxirribosa-fosfato forman los lados de la escalera; las bases
están enfrentadas por parejas, mirando hacia el interior, y forman los travesaños.
57
Los nucleótidos de cada una de las dos cadenas que forman el ADN establecen una asociación
específica con los correspondientes de la otra cadena. Debido a la afinidad química entre las
bases, los nucleótidos que contienen adenina se acoplan siempre con los que contienen timina,
y los que contienen citosina con los que contienen guanina. Las bases complementarias se
unen entre sí por enlaces químicos débiles llamados enlaces de hidrógeno.
Objetivos:
Estudio de Proteínas
Materiales
Fundamento
Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el agua soluciones
coloidales que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas
superiores a 70ºC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización
por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan por destrucción de
sus estructuras secundaria y terciaria.
Técnica
1. Colocar en tres tubos de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo (puede
diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla espesa) o 2-3ml de leche.
2. Calentar uno de los tubos al baño María, añadir a otro 2-3ml de HCl concentrado y al
tercero 2 o 3ml de alcohol etílico.
3. Observar los resultados.
58
2. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)
Fundamento
Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su
identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las
proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH
que se destruye al liberarse los aminoácidos.El reactivo del Biuret lleva Sulfato de cobre (II) y
sosa, y el Cu, en un medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos
formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la
concentración de proteínas.
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Extracción de ADN de Kiwi
Materiales:
Procedimiento
Se debe preparar una solución que contenga kiwi, agua destilada, sal y champo. La sal permite
que el ADN precipite en una solución fría de alcohol. El detergente disuelve los lípidos y
proteínas de la membrana celular, y además rompe enlaces que mantienen la membrana
integra, provocando su ruptura. El detergente forma un complejo con los lípidos y las proteínas
haciendo que precipiten en la solución.
1. En un vaso o beaker plástico de 5 oz, prepare una solución que consiste en una cucharadita
de champo y dos cucharaditas de sal. Añada agua destilada para obtener un volumen final de
30ml o aproximadamente 1/3 del volumen del vaso. Revuelva la sal y champo suavemente para
evitar que forme espuma.
2. Use el cuchillo plástico, pele y corte ½ del kiwi en pequeños pedazos y añádalos a la solución
preparada en el paso 1. Aplaste el kiwi contra las paredes del recipiente con la cuchara usando
su parte posterior por espacio de 10 minutos (el detergente disuelve los lípidos de la membrana,
lo que hace que se libere el ADN dentro de la solución. El detergente causa la precipitación de
los lípidos y las proteínas y deja sólo el ADN en la solución. La sal se une al ADN)
3. Mientras un miembro del grupo aplasta y revuelve el kiwi en la solución, otro miembro
preparará un cono de papel de filtro en otro vaso plástico de 5 oz. Coloque el cono de filtro sin
que este toque el fondo del vaso.
4. Filtre la solución. Esta se filtrará lentamente, destilando gotas durante unos minutos hasta
obtener aproximadamente unos 5 ml de solución filtrada (tape la boca del vaso durante este
proceso).
5. Prepare un tubo con alcohol frío. Para obtener mejores resultados, el alcohol debe estar lo
más frío posible.
6. Llene una pipeta plástica con la solución de kiwi y vacíela en la solución de alcohol frío (el ADN
no es soluble en alcohol. Cuando el alcohol es unido con esta mezcla, los componentes de la
mezcla excepto el ADN se mantendrán en la solución, mientras el ADN precipitará en la capa de
alcohol.
Deje que la solución de asiente por 2 ó 3 minutos sin agitar o revolver. Usted podrá observar el
ADN blanco precipitar en la capa de alcohol. Cuando se obtienen buenos resultados, será
posible sacar el ADN con la punta de una pipeta de Pasteur. El ADN tiene el aspecto de un moco
pegajoso blanco.
60
61
CÉLULA PROCARIOTA
Las bacterias son organismos unicelulares que se reproducen por fisión binaria. Las
bacterias se encuentran prácticamente en todos los ambientes de la tierra, desde las
profundas fosas oceánicas o el interior de rocas sólidas hasta las camisas refrigerantes de
los reactores nucleares, ni que decir del resto de los hábitats. La mayoría de ellas son
capaces de una existencia independiente pero existen especies como Chlamydia y
Rickettsia que son organismos intracelulares obligados.
El reino taxonómico Morena comprende entre otros, a las eubacterias (las bacterias
“verdaderas” y las cianobacterias, o bacterias fontosintetizadoras). Entre las
características generales de este grupo podemos notar que:
1. No poseen organelas rodeadas por membranas ( como las formas superiores de vida) y
se conocen como procariotas.
3. El cromosoma bacteriano está constituido por ADN circular que se ubica en la región
denomida nucleoide.
64
4. Distribuidos en el citoplasma bacteriano se encuentran pequeños lazos de ADN conocidos
como plásmidos.
PARED CELULAR
Las bacterias presentan pared celular que se encuentra revistiendo a la célula. No posee
celulosa como en el caso de las plantas, sin embargo su pared está formada por ácidos como el
murámico, diaminopimélico y por peptidoglicanos que constituyen una pared resistente que le
permite a las bacterias vivir en cualquier medio..
Según su forma:
ESTAFILOCOCOS EN “V”
TÉTRADAS EN EMPALIZADA
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Debido a la constitución química diferencial de su pared celular se clasifican en:
Gram positivas: se tiñen de color violeta, con reactivo de violeta de genciana, como
estafilococos, micrococos, neumococos, enterococos, bacilos de la difteria y bacilos del ántrax.
Gram negativas; se tiñen de color rojo o rosado con el reactivo fucsina, como gonococos,
meningococos, bacilos coliformes, shigela, salmonelas o vibriones del cólera.
Muchos otros aspectos pueden tenerse en cuenta para la clasificación de las bacterias por
ejemplo:
La presencia o no de flagelos, de pelos, de cápsula, de esporas, por las características de las
colonias y el requerimiento de determinados nutrientes en el cultivo, por el tipo de nutrición, por
la presencia y el tipo de hemólisis, por las características de la colonia y por las relaciones con
los demás seres vivos.
Las Cianobacterias: pertenecen al grupo de las cyanophytas, son conocidas como algas verde
azules a las cuales pertenecen el género nostoc, anabaena, oscilatoria, policitis.
Son muy importantes en los ecosistemas acuáticos porque proporcionan oxígeno y alimento a
otros organismos. Constituyen la base de las cadenas alimenticias acuáticas. Por su gran
capacidad fotosintética se denominan productores primarios de materia orgánica.
66
OBJETIVOS
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
Las técnicas de tinción diferencial permiten observar diferencias entre células bacterianas
mediante la aplicación de uno o más reactivos. Una de las técnicas de tinción diferencial para
bacterias es la tinción Gram.
1. TINCIÓN SIMPLE
Con la ayuda del profesor o auxiliar de laboratorio monte la lámina en el microscopio hasta el
objetivo de inmersión.
Aumento:
Clasificacion:
67
1. TINCIÓN GRAM
El procedimiento que se debe seguir para esta técnica y los resultados de cada paso se
encuentran resumidos en la tabla a continuación.
Observaciones
Observar con los diferentes objetivos, hasta 90x o-100x utilizando aceite de inmersión.
68
Dibuje las bacterias Gram – y Gram+ observadas con el objetivo 90x o 100x.
Clasifique a que tipo de bacterias corresponden cada una de ellas según forma, agrupación y
coloración Gram.
Aumento:
Clasificacion:
3. TINCIÓN NEGATIVA
Aumento:
Clasificacion:
Realice otro frotis con las bacterias, a continuación esparza una capa de tinta china negra
uniformemente en el preparado, permita que la tinta se seque completamente y observe con el
objetivo de inmersión.
Con un gotero coloque una gota de macerado en la lámina y cúbralo con la laminilla.
Observe la preparación en mayor aumento y dibuje.
Describa las características observadas: forma, movimiento, color.
69
Aumento:
Clasificacion:
Aumento:
Clasificacion:
Aumento:
Clasificacion:
70
7.- OBSERVACIÓN DE LACTOBACILOS
Aumento:
Clasificacion:
71
Figura 14. Cianobacterias.
En el siguiente esquema se ilustran algunas de las cianobacterias más comunes que podría
hallar en su preparado.
72
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE HONGOS, LEVADURAS Y PROTISTOS
Fuente: L. Bonilla
Los Hongos, son un grupo diverso de organismos unicelulares o pluricelulares que se alimentan
mediante la absorción directa de nutrientes. Los alimentos se disuelven mediante enzimas que
secretan los hongos; después se absorben a través de la fina pared de la célula y se distribuyen
por difusión simple en el protoplasma.
Junto con las bacterias, los hongos son los causantes de la putrefacción y descomposición de
toda la materia orgánica. Hay hongos en cualquier parte en que existan otras formas de vida.
Algunos son parásitos de organismos vivos y producen graves enfermedades en plantas y
animales. La disciplina científica que estudia los hongos se llama micología.
Los hongos figuraban en las antiguas clasificaciones como una división del reino Plantas
(Plantae). Se pensaba que eran plantas carentes de tallos y de hojas que, en el transcurso de su
transformación en organismos capaces de absorber su alimento, habían perdido la clorofila, y
con ello, su capacidad para realizar la fotosíntesis. Sin embargo, en la actualidad los científicos
los consideran un grupo completamente separado, que evolucionó a partir de flagelados sin
pigmentos, por lo que se sitúan en el reino Hongos (Fungi).
75
La mayoría de los hongos están constituidos por finas fibras que contienen protoplasma,
llamadas hifas. Éstas a menudo están divididas por tabiques llamados septos. En cada hifa hay
uno o dos núcleos y el protoplasma se mueve a través de un diminuto poro que ostenta el centro
de cada septo. Las hifas crecen por alargamiento de las puntas y también por ramificación. La
proliferación de hifas, resultante de este crecimiento, se llama micelio. La mayoría de los hongos
se reproducen por esporas, diminutas partículas de protoplasma rodeado de pared celular.
Los principales métodos aplicados para la observación microscópica de los cultivos son: la
observación en fresco, con una solución adecuada, y las preparaciones en cinta adhesiva
Las levaduras hacen referencia a cualquiera de los diversos hongos microscópicos unicelulares
que son importantes por su capacidad para realizar la fermentación de hidratos de carbono,
produciendo distintas sustancias. Las levaduras son abundantes en la naturaleza, y se
encuentran en el suelo, sobre las plantas, se reproducen por gemación. La mayoría de las
levaduras que se cultivan pertenecen al género Saccharomyces, como la levadura de la
cerveza, que son cepas de la especie Saccharomyces cerevisiae.
Los protistos son organismos eucariotas unicelulares, como la mayoría de las algas y los
protozoos, y sus descendientes más inmediatos, como son las algas pluricelulares, que se
incluyen en este grupo por su estructura simple y las claras relaciones con las formas
unicelulares. El reino Protista fue propuesto por primera vez por el biólogo alemán Ernst
Heinrich Haeckel, debido a la dificultad que entrañaba la separación de los organismos
unicelulares animales de los vegetales. Los protistas están representados por muchas líneas
evolutivas cuyos límites son difíciles de definir.
La mayoría de estos organismos son unicelulares y microscópicos, aunque también los hay que
forman colonias, como los foraminíferos. Esta organización, ya más compleja, está más cerca
de los organismos pluricelulares superiores e indica que éstos evolucionaron a partir de
ancestros protistas.
Los protistas pueden considerarse un reino intermedio, y agrupan desde los organismos
unicelulares eucariotas y las colonias simples, hasta algunas algas superiores y grupos de
transición (de clasificación dudosa).
Estos últimos son pluricelulares, pero carecen de la organización compleja en tejidos, típica de
las plantas, animales y hongos superiores. Aun así, dentro de los grupos de transición hay
formas que comparten ciertas características de las plantas, como las algas pardas, verdes y
rojas; otras que están más cerca de los animales, tales como los mesozoos, placozoos y
esponjas, y las que son semejantes a los hongos, como los mohos plasmodiales del fango y los
quitridiales.
76
OBJETIVOS
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
OBSERVACIÓN DE MOHOS
2. Tomar el material a observar en una mínima cantidad con agujas finas o lancetas
procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno de los
portaobjetos. Con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso de conidios
que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa,
los conidióforos.
3. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que será ya el
definitivo. Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior
por los conidióforos), se aplastarán éstos ligeramente sobre la gota o se seccionarán con
un bisturí.
4. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede
amontonado. Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar
que se formen burbujas entre los dos vidrios.
77
1. Dibujar la observación a 10x y 40x.
Aumento:
Clasificación:
Aumento:
Clasificación:
Aumento:
Clasificación:
78
REPRODUCCIÓN ASEXUAL POR GEMACIÓN EN LEVADURAS
TÉCNICA
1. Disolver con ayuda de una aguja un poco de levadura sobre un porta que contenga 2 o 3
gotas de agua ligeramente azucarada.
79
OBSERVACIÓN DE PROTISTOS
Monte gotas de los cultivos de protistos y fitoplancton marino e identifique en menor aumento,
mediante guías adicionales determine diferentes tipos de protistos, como Paramecium y
Euglena.
Se sugieren las siguientes figuras para ayudar a identificar los organismos tanto en la parte
relacionada con los hongos como en la parte relacionada con los protistos.
Aumento:
Observación:
Aumento:
Observación:
80
Figura 17. Hongos
81
80
Figura 18. Protozoos.
82
Fuente: Needham y Needham, 1991
83
Figura 19. Diatomeas
84
Figura 20. Algas verdes.
85
Figura 15. Imágenes de hongos
3. Penicilium 4. Penicilium
86
CELULAS EUCARIOTAS: RECONOCIMIENTO DE CELULAS VEGETALES
Fuente: A. Bonilla.
La célula eucariota está limitada por un plasmalema. Entre el plasmalema y la envoltura nuclear
está el citoplasma, que cuenta con un sistema de endomembranas. A través del citoplasma se
extiende un sistema de canales llamado Retículo endoplasmático o RE. Hay regiones del RE en
la que encontramos ribosomas (retículo endoplasmático rugoso) que es donde se sintetizan las
proteínas. Cuando no hay ribosomas adheridos al RE, se le denomina RE liso. El aparato de
Golgi es como una continuación del RE. Este compartimiento membranoso actúa como una
estación de procesamiento y empaque de proteínas, que irán a diferentes destinos celulares o
se exportarán de las células y el procesamiento de los lípidos.
88
Los lisosomas son los procesadores de desecho de la célula intracelulares. Presentan enzimas
digestivas que reciclan el material de desecho después del procesamiento. Con la excepción de
algunos protozoos anaeróbicos, todas las demás células eucariotas poseen mitocondrias,
notables organelos citoplasmáticos de doble membrana. Dentro de las mitocondrias ocurre la
producción de trifosfato de adenosina (ATP), la molécula portadora de energía más importante
de las células. Las mitocondrias poseen su propio ADN, y su propia maquinaria de síntesis de
proteínas.
Ciertas características se encuentran solamente en algunos grupos eucariotes, Todas las algas
eucariotas, los protistas verdes y vegetales que forman tejidos, poseen una o más clases de
plastidios. El más conocido cloroplasto de las células verdes fotosintéticas, que convierten la
energía luminosa en energía química utilizable. La fotosíntesis ocurre dentro de los cloroplastos.
Otra característica común de las algas, hongos y vegetales terrestres y diferencia con las células
animales es la presencia de la pared celular muy visible, que rodea el protoplasto en células viva
o que queda como una armazón estructural después que ha muerto la célula. La vacuola como
organelo especializado de las células consiste en un saco que funciona como almacén de clases
de moléculas en soluciones o suspensiones diluidas es otra de las distinciones de estas células.
La existencia de una gran vacuola en la célula es indicador de que la célula ya alcanzó su
madurez y en estos casos pueden llegar a ocupar casi todo su volumen.
OBJETIVOS
MATERIALES
Cebolla cabezona, hojas de panameña, hojas de elodea, tallo de pasto y verbena, hojas de lirio,
loto, y caucho de la India, safranina, cuchillas de afeitar nuevas.
PROCEDIMIENTO
1.- Corte de bulbo de cebolla (Allium cepa): De un bulbo de cebolla cabezona desprenda una
porción de catáfilo (epidermis), agregue una gota de solución de lugol. Observe a menor
(10x) y mayor (40x) aumento. Dibuje el tejido epidérmico de la cebolla a mayor aumento.
Identifique las estructuras observadas en una de las células. Nombre el colorante utilizado.
Describa la forma de la célula observada.
90
Aumento:
Clasificación:
Aumento:
Clasificación:
91
Aumento:
Aumento:
Clasificación:
92
5.- Observación de vacuolas en Ginger o pétalos
Seleccione una hoja de Ginger o un pétalo, realice un corte fino del haz del tejido seleccionado y
coloque sobre una lámina, agregándole una gota de agua y cubriéndola con una laminilla.
Observe a menor (10x) y mayor (40x) aumento. Dibuje lo observado a mayor aumento.
Identifique estructuras u otros elementos observados. Describa la forma y demás
características
Aumento:
Clasificación:
Aumento:
93
Figura 21. Complejo estomático. Figura 22. Células de elodea.
Figura 23. Corte transversal tallo de monocotiledóneas y dicotiledóneas (ver sección color)
94
CÉLULA ANIMAL Y HEMOCLASIFICACIÓN
Fuente: www.cscattle.com/t.quarter_horses.html
La célula animal comparte muchas características con las células vegetales, en cuanto a su
metabolismo y organización, sin embargo, la división de la línea filogenética, hace millones de
años, estableció características y funciones especiales que se observarán en el siguiente
protocolo.
En comparación con las células vegetales, las células animales carecen de una pared celular y
sistemas de autosuficiencia energética, sin embargo se encuentran en formas tan diversas que
esta hace convergencia con la función a realizar, como en el caso de los glóbulos rojos, las
neuronas o las células contráctiles musculares.
97
Los grupos sanguíneos (A, B, AB, O) fueron descubiertos por Landsteiner en el año 1900; no
obstante, para esa época no se conocía aún el por qué tales diferencias. Gracias al avance
tecnológico se pudo determinar que lo que hacia particular a cada grupo sanguíneo era la
distinta organización molecular de uno de los componentes de la membrana plasmática de los
eritrocitos, los carbohidratos. Para comprender adecuadamente la manera como de determinan
los distintos grupos sanguíneos es necesario recordar la estructura de la membrana plasmática
de las células.
Pues bien, recuérdese que las membranas celulares están conformadas por una doble capa
lipídica en la que se encuentran inmersas diferentes tipos de proteínas, algunas dispuestas
periféricamente y otras integradas a la bicapa, esto de acuerdo al modelo en mosaico fluido.
En el glucocálix de los glóbulos rojos abundan una glucoproteína denominada glucoforína (hay
aproximadamente un millón por eritrocito), que consta de una parte proteica siempre constante
en todas las glucoforínas, y otra parte oligosacárida en la que se encuentran residuos de
glucosa, galactosa, fructosa, N-acetilgalactosamina, manosa, ácido siálico, etc., todos ellos
unidos mediante enlaces glucosídicos. Al complejo constituido por la parte proteica y la parte
oligosacárida se le conoce con el nombre de sustancia H.
Factor Rh
Fue descubierto por Landsteiner y Weiner en el año 1940 y consiste en la presencia de otro
antígeno diferentes localizados también en la membrana plasmática de los eritrocitos. Aquellas
células que los presentan son Rh positivos (Rh+), las que no los tienen son Rh negativo (Rh-).
Estos antígenos se manifiestan de manera independiente a los sistemas ABO, es por eso que se
habla de grupos sanguíneo A y Rh positivo, o grupo A y Rh negativo; lo mismo acontece con los
demás grupos sanguíneo.
Es bueno aclarar que todos los sistemas de grupo sanguíneo, incluidos el factor Rh, están
determinados genéticamente.
98
OBJETIVOS:
MATERIALES
Alcohol antiséptico70% montaje con tejido sanguíneo, lancetas, papel absorbente o filtro,
aguja de disección, hisopos, porta y cubre objetos, herramientas habituales, placas fijas de
tejido humano
1.- Monte una gota de sangre en un extremo del portaobjeto, inmediatamente haga un
extendido según indicaciones del docente. Deje secar. Fije la placa inundando el extendido con
metanol, deje secar por unos minutos. Tiña durante 3 minutos el extendido con Giemsa. Lave y
seque la placa. Observe con el objetivo de 100x (inmersión). Dibuje le tejido sanguíneo a mayor
aumento. Identifique los glóbulos rojos y blancos. Dibuje lo observado.
99 98
Aumento:
Clasificación
100
HEMOCLASIFICACIÓN
MATERIALES
Solución anti-A, solución anti-B, solución anti-D (anti Rh), material punzante estéril, algodón,
agua oxigenada, una gota de sangre
TÉCNICA
Colocar en un portaobjeto una gota de suero anti-A, una de anti-B, una mezcla de anti-A y anti-
B, y una gota de anti-D, cada una en su casilla correspondiente, como se indica en la figura.
Pinchar la yema del dedo, previa desinfección con alcohol o agua oxigenada.
Depositar una gotita de sangre en cada casilla y mezclar con los sueros.
Anti D
Anti B
Anti A
101
El punto central de esta práctica se encuentra en los glóbulos rojos. Los glóbulos rojos o
hematíes son células sanguíneas, por lo tanto todos los tenemos. Sin embargo, en la
membrana de los glóbulos rojos pueden existir unas proteínas especiales: son las
glucoproteínas A y B. Así, un glóbulo rojo puede tener proteína A, proteína B, tener ambas o no
tener ninguna. De manera que un individuo tendrá grupo sanguíneo A si sus glóbulos rojos
tienen la glucoproteína A en su membrana, siguiendo el mismo criterio para el resto de los
grupos (si no existe proteína, entonces será de grupo sanguíneo O). Estas proteínas
corresponderían a lo que denominan antígenos.
Ahora bien, en el plasma sanguíneo tenemos anticuerpos. Evidentemente, un individuo del
grupo A no podrá tener anticuerpos anti-A, pues esto no sería viable (la sangre coagularía).
Así:
✓ los individuos A tendrán anticuerpos anti-B
✓ los individuos B tendrán anticuerpos anti-A
✓ los individuos AB no tendrán anticuerpos de este tipo
✓ los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos.
Grupo A B AB O
sanguíneos
o
Glóbulos rojos
De la misma manera, el factor Rh es otra proteína que existe en los glóbulos rojos de algunas
personas. Su nombre viene del mono en el que fue descubierta, el Macacco rhesus. El factor Rh
positivo es un factor hereditario dominante
Este asunto tiene especial importancia en donaciones de sangre. Como hemos visto, un
individuo A tiene en su plasma anticuerpos anti-B, así que no podrá recibir sangre de un individuo
B, pues estos anticuerpos provocarían la coagulación de la sangre del donante en los vasos
sanguíneos de la persona receptora.
102
TRANSPORTE A TRAVÉS DE LA MEMBRANA
Fuente: /www.uc.cl/sw_educ/biologia/bio100/html/portadaMIval2.5.html
Toda célula posee un sistema complejo de membranas, cuya función general es el intercambio
de materiales entre la célula y el medio acuoso externo o fluido extracelular (FEC), y entre los
organelos y el citoplasma de la célula. Las membranas sirven igualmente para compartimentar
enzimas y metabolismo celulares.
105
Las membranas biológicas pueden ser diferentes en cuanto a estructuras y función, sin
embargo tienen en común ciertas propiedades, por ejemplo su estructura laminar de naturaleza
fluida, su composición lipo-proteíca, con partes hidrofílicas e hidrofóbicas.
Los primeros forman bicapas.
La bicapa lipídica obstaculiza el fluido de moléculas polares. Entre los lípidos se encuentran los
fosfolípidos, glucolípidos y el colesterol. Las proteínas sirven de compuerta, receptores,
transductores de energía y enzimas. Estas responden a la mayoría de los procesos dinámicos
que se llevan a cabo en las membranas, y así las membranas biológicas que ejercen funciones
diferentes poseen proteínas diferentes.
En este proceso se crea una difusión de agua en una dirección tal que las concentraciones se
igualen a ambas partes de la membrana, o sea desde la región de mayor concentración de agua
o mayor potencial de agua hacia la región de menor concentración de agua o menor potencial de
agua. La difusión de agua desde el solvente puro hacia la solución o desde la solución más
diluida hacia la solución químicamente más concentrada, da como resultado un incremento en
el volumen y la fuerza de empuje de las moléculas de agua creando una presión denominada
presión osmótica.
106
OBJETIVOS
MATERIALES
Tubos de ensayo, solución de KMnO4 (0.1%, 1.0% y 10%); papel milimetrado, estufa,
osmómetro, solución de NaCl (0.85%), agua destilada, solución de NaCl (5%), hoja de Elodea,
sangre, y material habitual.
Tome tres tubos de ensayo limpios y que sean de igual tamaño y vierta en ellos la misma
cantidad del agua del grifo, de tal manera que se ocupe aproximadamente ¾ partes del volumen
total. Márquenlos del 1 al 3 y depositen en cada uno de ellos una gota de permanganato de
potasio de distinta concentración con intervalos de un minuto y en el centro de la superficie de
agua, así: en el tubo 1, permanganato de potasio 0.1%; en el tubo 2, permanganato de potasio al
1.0% y en el tubo 3, permanganato de potasio al 10%. Anote en cada caso el tiempo transcurrido
desde el momento en que deposita el colorante hasta que su distribución en el agua sea
uniforme. Consigne sus datos.
Tubo
Tubo
Tubo
Nota: Al final de la sesión de experimentos in vitro se dejará espacio para los gráficos y
respuestas
107
II.- EFECTO DE LA TEMPERATURA EN EL TIEMPO DE DIFUSIÓN
Pipeta Graduada
Soporte
Pipeta Graduada
Membrana
semipermeable
108
Debe anotar la altura de la solución en la pipeta al comienzo del experimento e ir registrando
cada 5 minutos, el volumen de la solución en la pipeta. Realice los registros de esta manera
durante 20 a 30 minutos en los tres sistemas, auxiliándose de la siguiente tabla.
No.registro Volumen
(30 min) Volumen total Velocidad de osmosis
(segmento)
1 O-I O-II O-III O-I O-II O-III O-I O-II O-III
(Inicio)
2
3
4
5
6
✓ Haga una gráfica en un papel milimetrado con la evolución de los tres osmómetros y
determine los parámetros que debe tener en cuenta para colocar en el eje de las
ordenadas y en el eje de las abscisas de su gráfica.
✓ Calcule la velocidad final de ósmosis en cada osmómetro.
IV- DIALISIS.
Prepare el montaje que se ilustra a continuación
Papel celofán
Soluciones
Soporte Universal
Agregar en una bolsa de papel celofán que contiene agua, las siguientes sustancias: azúcar,
almidón, sales en proporciones iguales y se sumerge la bolsa en agua destilada (este montaje
se debe hacer con 24 horas de antelación al experimento).
Se realiza la prueba para identificación de azúcares, almidones y sales, tomando tres muestras
del agua destilada de la cubeta en tubos de ensayos.
109
✓ Prueba para azúcares
✓ Prueba para almidón
✓ Prueba para sales
A. Coloque en el portaobjeto una hoja de Elodea, cúbralo con una laminilla y observe.
Seguidamente coloque al lado izquierdo de un portaobjetos una gota de solución
hipotónica y sobre esta una hoja de Elodea, luego cubra el montaje con una laminilla (en
caso necesario complete el volumen del líquido agregando solución en el límite entre la
laminilla y el portaobjetos, la cual se difundirá por capilaridad. Repita el mismo
procedimiento utilizando solución salina isotónica e hipertónica.
✓ Haga el dibujo de lo observado en las diferentes situaciones a 40x.
✓ Defina el fenómeno que ocurre en la célula (para ello por lo menos el 50% de las células de
la preparación deben estar manifestando la misma situación).
110
Aumento:
B.- Coloque sobre un portaobjetos una gota de sangre y haga un extendido de ella, cúbrala
con una laminilla, móntela al microscopio y obsérvela empleando el objetivo de 40x. Haga un
dibujo de los glóbulos rojos. Seguidamente adicione una gota de solución hipotónica en el
límite entre la laminilla y el portaobjetos, la cual se difundirá por capilaridad. Observé lo que
ocurre con los glóbulos rojos haga el dibujo. Desarrolle el mismo procedimiento, pero esta
vez adicione en un extendido solución isotónica y en otro solución salina hipertónica.
✓ Observe, dibuje y compare que sucede con los glóbulos rojos.
✓ Defina el fenómeno que ocurre en los eritrocitos (para ello por lo menos el
50% de las células de la preparación deben estar manifestando la misma
situación).
111
LABORATORIO 11
MITOSIS Y MEIOSIS
MITOSIS:
Una vez duplicado el material nuclear y citoplasmático, la célula se encuentra ahora capacitada
para repartir su contenido en dos células hijas. Dicha repartición se da en forma secuencial,
comenzando primero a dividirse el núcleo, luego el citoplasma y por último ocurre una
separación territorial.
La división del material nuclear se denomina cariocinesis y se realiza de tal manera que
cada núcleo de las células queda con la misma cantidad de material genético que la célula
madre que le dio origen.
La división del contenido citoplasmático se da en forma equitativa, con el fin de que cada
célula quede con un volumen más o menos igual de citoplasma y una dotación básica de
orgánulos celulares; a este fenómeno se le denomina citocinesis. La separación
territorial de las dos células hijas que se están originando se da por estrangulación de la
membrana citoplasmática a nivel de la línea ecuatorial de la célula madre, en células
animales; en las plantas superiores este fenómeno es diferente ya que ellas se encuentran
rodeadas de una pared celular rígida. En vez de ser estranguladas y divididas en dos por
el anillo contráctil, estas células se dividen mediante la formación de una nueva pared
celular y una membrana plasmática dentro de la célula; a este fenómeno en ambos
casos que permite independizar las dos células hijas le denomina citodiéresis.
Todos los fenómenos antes mencionados ocurren de una manera gradual y continua, que
para los efectos didácticos se han agrupado en cuatro etapas que en su orden son:
profase, metafase, anafase, telofase.
MEIOSIS
Los únicos órganos que utilizan la meiosis como mecanismo de reproducción celular son
las gónadas, siendo estas el lugar donde se forman las células germinales o gametos
(espermatozoides y óvulos). Pero antes de que se inicie la meiosis cada célula
progenitora, espermatogonio u ovogonio, debe pasar por un período de interfase, durante
el cual se prepara para la división duplicando su material genético y aumentando su
volumen citoplasmático, tal como acontece en la mitosis.
MEIOSIS I
Durante la Meiosis I, los cromosomas homólogos primero se emparejan unos con otros y
luego segregan a células hijas diferentes. Las cromátidas hermanas permanecen unidas,
por lo que tras la meiosis I se obtiene células hijas que contienen un único miembro de
cada par cromosómico (constituido por dos cromátidas hermanas).
MEIOSIS II
Después de terminada la telofase I cada célula hija entra en un período de aparente reposo,
mal llamado interfase II, en el cual la célula se prepara de nuevo para una nueva división,
pero sin que ocurra duplicación del material genético.
OBJETIVOS
MATERIALES:
PROCEDIMIENTO
(Mitosis)
Fuente: https://inakiresa.wordpress.com/category/practicas/page/5/
I. En la figura 32 identifique las fases de la mitosis y complete el siguiente cuadro. En la
columna correspondiente a fase escriba la fase señalada en la figura y en las
observaciones describa los cambios morfológicos que se observan.
FASE OBSERVACIONES
1.
2.
3.
4.
II. En la siguiente lámina (figura 33) cuente al menos 100 células en total, identificando
separadamente cada una de las fases, esta información se empleará para determinar
el índice mitótico y el índice de fase utilizando la siguiente formula:
Fuente: http://barresfotonatura.com/otros/biologia/foto/mitosis-2
Los resultados consígnelos en la siguiente tabla.
Número Índice
Fases de células (mitótico/fase)
Interfase
Profase
Metafase
Anafase
Telofase
Total
PROCEDIMIENTO (Meiosis)
Para la observación de las células que dirigen este proceso de división meiótico se procederá a
realizar la aspiración de ovocitos de ovarios de res, cerdo o ratón (o rata) mediante el uso de
jeringas con agujas de calibre grueso para evitar dañar las células. Posteriormente se
procederá a realizar la observación y selección de los ovocitos, determinando la etapa del ciclo
en la que se encuentran. (Ver esquemas página).
Aumento:
Observaciones:
Aumento:
Observaciones:
En el siguiente link
http://www.phschool.com/science/biology_place/labbench/lab3/concepts2.html, encontrará
un ejercicio sobre crossing over en el hongo del género Sordaria, primero revise los
conceptos básicos, luego lea el diseño del experimento y con base en lo leído conteste las
preguntas que se encuentran en el apartado de análisis de resultados.
GALERIA DE IMÁGENES
Figura 35. Mitosis Tinción con acetorceína
Fuente:
www.joseacortes.com/galeriaimag/citologia/index.htm
Fuente: www.joseacortes.com/galeriaimag/citologia/index.htm
124
SUSTANCIAS PRODUCIDAS POR EL PROTOPLASTO
Fuente: L. Bonilla.
El protoplasto se definió como la materia viva es su forma más simple del griego proto =
primero, por lo tanto se puede definir como protoplasto la parte de la célula que está delimitada
e incluida dentro de la pared celular y que contiene todos los elementos celulares necesarios
para el mantenimiento de la célula.
130
Entre los componentes protoplasmáticos encontramos: el citoplasma, núcleo, plastidios,
mitocondrias entre otros.
Al clasificar las partes del protoplasto, se consideran a los componentes protoplasmáticos como
vivos, mientras que a los no protoplasmáticos, se le considera como no vivos, aunque
establecer una clara distinción es bastante difícil, pues existe una interrelación estrecha entre
uno y otros componentes.
AMILOPLASTOS (almidón)
Incoloros- LEUCOPLASTOS OLEPLASTOS (aceite)
PROTEINOPLASTOS
(proteína)
PROPLASTOS
PLASTIDIOS
CLOROPLASTOS (verde)
Pigmentados- CAROTENOIDES (naranja)
CROMOPLASTOS XANTOFILAS (amarillo)
LICOPINA (rojo)
131
Componentes no protoplasmáticos: Vacuola y sustancias ergásticas
Las sustancias que se secretan son depositadas en la vacuola de la célula o en otros sitios
celulares como secreciones sin un valor obvio para la planta. No obstante existen también
células u órganos vegetales con función glandular, que son capaces de segregar sustancias al
exterior.
132
Cristales de sales insolubles, de carbonato y oxalato de
calcio
SECRECIONES (cristales solitarios monocíclicos, Kystis (bolsas), cistolitos
(piedras),
Drusas (hexagonales), rafideos, arena cristalina
LATEX
OBJETIVOS
Observar los diferentes plastidios que se encuentran en las células vegetales y sus
pigmentos respectivos.
Identificar las características esenciales entre las vacuolas de las células vegetales y de
otros microorganismos.
MATERIALES
Pétalos de flores, (clavel, ginger, etc.), hoja de caucho de camellones, pecíolo de begonia, tallo
de besito antioqueño, zanahoria, tomate, granos de maíz o arroz, papa, semillas de higuerilla o
maní, fríjol, cuchillas nuevas, portaobjetos y cubreobjetos, gotero, microscopios.
133
PROCEDIMIENTO
Aumento:
Aumento:
134
Observación de cristales de oxalato de calcio:
Drusas
Haga un fino corte del pecíolo de la begonia y realice un montaje húmedo. Observe en menor (8x
ó 10x) y en mayor (40x) aumento.
La forma de los cristales depende del sistema de cristalización, pudiendo ser tetragonal (drusas)
Aumento:
Rafideos
Haga un corte transversal del tallo de panameña. Realice un montaje húmedo. Observe en
menor (8x ó 10x) y en mayor (40x) aumento.
Haga un corte transversal del besito antioqueño. Realice un montaje húmedo. Observe en
menor (8x ó 10x) y en mayor (40x) aumento.
Las sales de cristalizan en sistemas monocíclicos tomando el aspecto de agujas.
Aumento:
135
Látex
Realice un corte del pecíolo de la hoja de caucho o de cualquier otra planta que tenga color.
Monte en una placa un gota de látex, observe en menor (8x ó 10x) y en mayor (40x) aumento.
Aumento:
Aumento:
136
Biocompuestos de Reserva
Amiloplastos
Realice un raspado con la cuchilla en los granos de maíz o arroz, y de igual manera en la papa
con el fin de poder identificar diferentes tipos de amiloplastos, monte en una lámina, tiña con
lugol (La tinción de estas estructuras se hará con lugol diluido considerablemente).
Aumento:
Oleoplastos
Para la observación de estas estructuras proceda a raspar el interior de las semillas de higuerilla
(también puede utilizarse maní) con la cuchilla, monte en un portaobjetos y tiña con sudam III
Aumento:
137
Proteoplastos
Aumento:
138
AMILOPLASTOS CISTOLITOS ESTOMAS
ANTOCIANOS
TRICOMAS RAFIDEOS
DRUSAS LICOPENOS
139 138
141 138
BIBLIOGRAFÍA
AUDESIRK, AUDESIRK and BYERS. Biología 1. Prentice Hall, 6th ed. México,
2003.
Célula vegetal: una guía práctica, Eds. Roberto Dávila y Bibiana Dávila. Dávila &
Dávila. Bogotá, 2003.
http://farmaciaulat.blogspot.com/p/mitosis-en-meristemas-vegetal.html
http://www.juntadeandalucia.es/averroes/~29701428/ccnn/banco4/Laboratorio_mitosis.
pdf
NEEDHAM, J.G. Guía para el estudio de los seres vivos de las aguas dulce.
Barcelona Reverté, 1991, p. 131.
www.iespana.es
www.josecortes.com/prácticas.