NORMA TÉCNICA NTC

COLOMBIANA 4093

1997-04-16

MICROBIOLOGÍA.
PLAN NORMALIZADO PARA MÉTODOS DE
ENSAYO MICROBIOLÓGICOS

E: STANDARD LAYOUT FOR METHODS OF MICROBIOLOGICAL

EXAMINATION.

CORRESPONDENCIA: esta norma es equivalente, EQV a la

norma ISO 7667

DESCRIPTORES: análisis microbiológico; microbiología.

I.C.S.: 07.100.30

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435

Prohibida su reproducción
 PRÓLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional

de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector
gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los
mercados interno y externo.

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.

La NTC 4093 fue ratificada por el Consejo Directivo en 1997-04-16

Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través
de su participación en el Comité Técnico. 000031 Microbiología.

ACEGRASAS S.A. INGENIO RIOPAILA

ACUALAB LTDA. INSTITUTO COLOMBIANO
ALPINA S.A. AGROPECUARIO
ASINAL LTDA. INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
BAVARIA S.A. INVIMA
BIOCALIDAD LLOREDA GRASAS
CARULLA Y CÍA. S.A. MEALS DE COLOMBIA
CASA LUKER MERCK (L - PRO)
COLSUBSIDIO NESTLE DE COLOMBIA
COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES NULAB LTDA.
CREPES AND WAFLES POSTOBÓN S.A.
DISA - MAIZENA PROLECHE S.A.
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y SUIZO - NOEL - ZENÚ
ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ TRES M
FÁBRICA DE ESPECIAS Y PRODUCTOS TUTTI FRUTTI
EL REY UNIVERSIDAD DE LA SALLE
INDUSTRIAL DE GASEOSAS S.A. UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
INGENIO PROVIDENCIA UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

MICROBIOLOGÍA.
PLAN NORMALIZADO PARA MÉTODOS DE ENSAYO MICROBIOLÓGICOS

0. INTRODUCCIÓN

Está norma ha sido preparada teniendo en cuenta los métodos para ensayos microbiológicos
destinados a productos agrícolas alimenticios publicados en Normas Internacionales, y la
experiencia adquirida en la preparación de normas.

Al hacer uso del plan normalizado debe recordarse que éste es sólo una guía, razón por la cual
debe adaptarse a cualquier requerimiento especial.

La adopción de la redacción y del estilo del plan normalizado garantiza que:

- No importa el tema, éste se determina en la preparación de la norma.

- Los diversos ítems informativos que se vayan a incluir en la norma estén siempre
en el mismo orden.

- Alguna división pueda hallarse rápidamente, cualquiera que sea el origen o el

alcance de la norma.

(Esto es particularmente importante, si se realiza la traducción de una parte de un texto para ser
estudiada o cuando se comparan dos textos.)

En la redacción de los métodos de análisis microbiológico, los temas deben considerarse en el

orden mostrado por el plan de normalización, pero si cualquier división o subdivisión resulta
innecesaria para un caso particular debe omitirse y si se requieren otras deben adicionarse en el
lugar más apropiado.

1
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

1. ALCANCE Y CAMPO DE APLICACIÓN

Esta norma establece los planes de normalización para los métodos de análisis microbiológico.
Éstos se elaboran fundamentalmente para la redacción de los métodos de análisis
mircrobiológico destinados a productos alimenticios agrícolas, pero igualmente se aplican a otros
productos que requieran un análisis microbiológico.

PLAN DE NORMALIZACIÓN

Número de la división
Título

0 Introducción
1 Alcance y campo de aplicación
2 Referencias
3 Definiciones
4 Principio y reacciones
5 Diluyente, medio de cultivo, reactivos y otros productos
6 Aparatos y material de vidrio
7 Muestreo
8 Preparación de la muestra
9 Procedimiento

Nota. En esta división, las subdivisiones relevantes se dan en el siguiente orden:

- Porción de ensayo, suspensión inicial y diluciones

- Método del medio líquido
- Inoculación e incubación
- Interpretación
- Confirmación
- Método del medio sólido
- Inoculación e incubación
- Interpretación
- Confirmación

10. Expresión de resultados

Método de medio líquido

Método de medio sólido

11. Precisión

12. Reporte de resultados

Anexos

0.1 Titulo

El título de la norma debe plantear brevemente y sin ambigüedad:

2
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

a) En el caso de una norma específica1 , el tipo de producto para el cual el método

es aplicable;

b) Las categorías de microorganismos de interés detectados y todo lo relacionado

con el método, si es por detección o recuento;

c) Si se considera útil, la temperatura (s) de incubación y, en el caso de recuento, la

técnica empleada.

0.2 INTRODUCCIÓN

La introducción (numeral 0), si la hay, debe dar información acerca del método, sugiriendo la
razón de la elaboración de la norma y los antecedentes de tal información.

0.3 ADVERTENCIAS SOBRE SEGURIDAD

Si hay algún peligro, por ejemplo de toxicidad o contaminación, o si se requieren precauciones

especiales, éstas deben plantearse al comienzo de la introducción en forma de Advertencia;
tales avisos deben imprimirse con caracteres resaltados en las normas .

Nota. Esto puede ser necesario en ciertos casos para atraer la atención hacia la necesidad de cumplir con las
regulaciones nacionales pertinentes.

Las advertencias deben incluirse en lugares adecuados dentro del texto, donde sean necesarias
para recalcar un peligro particular.

Si es necesario, la información adicional sobre medidas de seguridad que se deban tomar

pueden presentarse en un anexo.

1. ALCANCE Y CAMPO DE APLICACIÓN

Este numeral plantea concisamente la finalidad de la norma y específica los productos en los
cuales se aplica.

Debe contener, en particular, información adicional, pero útil, que no está contenida en el título
(por ejemplo, no sólo “Clostridium perfringens”, sino además “ formas vegetativas y esporas”).

Se da toda la información requerida para capacitar al usuario con el fin de determinar

rápidamente, sin restricción o bajo ciertas condiciones, si el método es aplicable al producto que
se analiza.

Se indica, en particular, el tipo de productos para los cuales es aplicable el método y los límites
entre los cuales puede ser aplicado sin alteración. Estos límites deben tener en cuenta la
presencia de otros microorganismos en el producto, y además, cualquier propiedad restrictiva
del producto o del medio.

1
Para la definición de éste término, véase la ISO 6887, Microbiología - Guía general para la reparación de
diluciones para análisis microbiológico.

3
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

Nota. Algunas veces es necesario especificar los diversos métodos de detección o enumeración en una norma, por
ejemplo, para enumeración, el método del NMP para bajo contenido de microorganismos o por técnica de recuento de
colonias para alto contenido de microorganismos. En estos casos, debe hacerse una clara distinción entre el campo
de aplicación de cada uno de los métodos especificados. En otros casos, en donde los métodos se especifican en las
diferentes normas , puede ser útil hacer referencia a ellos en una nota.

2. REFERENCIAS

Este numeral contiene una lista1 completa de todos los documentos necesarios para el uso de la
norma.

EJEMPLO.

Para la guía general de la preparación de diluciones.

ISO 6887, Microbiología. Guía general para la preparación de diluciones para análisis
microbiológico.

Nota 1. Esta lista no tiene el propósito de servir como documento, sino únicamente como material de referencia
durante la preparación de la norma; tales documentos pueden citarse en el numeral o subnumeral concerniente, o se
puede dar una lista de estos documentos en una bibliografía (véase el numeral 14).

3. DEFINICIONES

Las definiciones son los términos básicos usados en la norma, que deben darse en este numeral,
si se requieren para facilitar el entendimiento del texto.

Los microorganismos concernientes deben definirse de acuerdo con los métodos usados y los
procedimientos confirmatorios descritos.

4. PRINCIPIOS Y REACCIONES

Esta cláusula indica los planteamientos básicos del método y, además, las ideas básicas, las
propiedades usadas y donde sea necesario, las razones tras la escogencia de ciertos
procedimientos.

Si es necesario, pueden describirse las reacciones químicas básicas o las reacciones

bioquímicas.

Nota. Este numeral no constituye un resumen de la norma y no son necesarias referencias cruzadas.

5. DILUYENTES, MEDIO DE CULTIVO, REACTIVOS Y OTROS PRODUCTOS

5.1 TÍTULO

El título de este numeral menciona las diferentes categorías de los productos usados.

Ejemplo: Para Salmonella : medio de cultivo, reactivos.

4
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

5.2 NUMERACIÓN

Cada uno de los diluyentes, medio de cultivo, reactivos y otros productos deben designarse
mediante un número correspondiente al subnumeral en el cual éstos se describan; por repetición
el número de la subdivisión se indica entre paréntesis, en el numeral “ Procedimiento”, seguido
de la mención del diluyente, medio de cultivo, reactivos, u otros productos. Así, se alude
anteriormente al subnumeral concerniente; se debe evitar la repetición de todas las
características del producto en cuestión con el fin de simplificar el trabajo.

Si un medio o reactivo se usa más de una vez en el procedimiento, la composición total debe
darse en el subnumeral correspondiente a la parte del procedimiento en el cual éste se usa por
primera vez. En el subsiguiente numeral en donde se use, es suficiente hacer una referencia a la
descripción.

5.3 LISTADO

5.3.1 En general, el numeral debe comenzar con un subnumeral “ Material Básico”, enumerado 5.1,
y expresado como sigue :

“Para mejorar la reproducibilidad de los resultados, se recomienda que, para la preparación del
diluyente y del medio de cultivo, se usen los componentes básicos deshidratados o deshidratados
completamente. De manera similar, también pueden usarse los reactivos preparados
comercialmente. Las instrucciones del fabricante deben seguirse rigurosamente.

Los productos químicos usados para la preparación del medio de cultivo y de los reactivos deben
ser de reconocida calidad analítica.

El agua usada debe ser destilada o desionizada, libre de sustancias que puedan inhibir el
crecimiento de microorganismos bajo las condiciones del prueba.

La medida de pH se efectúa usando un medidor de pH; las medidas se reportan a la temperatura

de 25 °C.

Si el medio de cultivo preparado no se utiliza inmediatamente, a menos que se de otro

planteamiento, debe almacenarse en la oscuridad a aproximadamente a 4 °C, por un período no
mayor de 1 mes, en condiciones en las cuales no se produzca ningún cambio en su
composición”.

5.3.2 A continuación de la introducción de la norma siguen los subnumerales (5.2, 5.3, etc.)
que describen el diluyente, medio de cultivo, los reactivos y otros productos usados durante el
ensayo, junto con sus concentraciones y, si es necesario, su grado de pureza, de acuerdo con el
uso específico, para el cual ellos son referidos en el numeral 9 “Procedimiento”.

Esto significa, por ejemplo, que si se usa un diluyente, éste debe mencionarse primero. Si una
etapa del procedimiento (por ejemplo, una reacción de identificación ) requiere el uso de más de
un medio, o de un medio y reactivos, éstos deben aparecer bajo el mismo encabezado
subdividido en dos o más secciones ( en este caso, no se debe hacer una división general en la
norma para una subnumeral “ Medio ” y otro “Reactivos”).

5.4 COMPOSICIÓN

Los constituyentes del medio de cultivo se enlistan con sus propias composiciones en forma
tabular, preferiblemente en el siguiente orden:

5
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

De origen: proteínas, carbohidratos, sales, sustancias selectivas,

Otros constituyentes, agar (u otro agente de fijación), agua.

Los nombres químicos aprobados por la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada deben
usarse con cualquier nombre común entre paréntesis.

Si el medio de cultivo abarca un medio básico estéril o esterilizado, en el cual los constituyentes
son adicionados separadamente, esto se describe en el siguiente orden:

a) Medio básico (con una lista de constituyentes básicos únicamente)

b) Soluciones que se adicionan

c) Medio completo

Las concentraciones del medio completo (o medio básico) deben expresarse en gramos por litro,
y las de las soluciones que se adicionan (b), preferiblemente se expresan en gramos por 100 ml.
Se pueden preparar diferentes volúmenes dependiendo del análisis que se lleve a cabo, con tal
que las concentraciones estén especificadas.

En la descripción del medio completo (c), deben darse las cantidades (volúmenes) del medio
básico y de las soluciones que se adicionan para obtener el medio completo a la concentración
requerida.

Inmediatamente después de la lista de los constituyentes del medio (o medio básico de una
solución), siguen los detalles con respecto a la preparación (véase la nota); por ejemplo

- el pH después de la esterilización.

- las condiciones de esterilización

- en donde se necesite usar recipientes para almacenamiento (tubos en U, cajas

de Petri).

- las precauciones tomadas para la conservación (duración, temperatura, ausencia

de luz, etc.)

Si se requiere algún constituyente para satisfacer una especificación (por ejemplo, verde brillante
a la concentración mínima para el control de la dispersión por “ Proteus”), debe darse una
descripción del procedimiento correspondiente.

Los métodos para el almacenamiento de cepas de referencia y para su cultivo (por ejemplo en el
caso de un método para marcar fagos) también deben describirse en este numeral junto con la
composición del medio de cultivo correspondiente.

Nota. Las normas dan una guía general recomendando que sean usados preferiblemente los constituyentes básicos
deshidratados o el medio completamente deshidratado.

6
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

Sin embargo, la preparación de los diluyentes y del medio deben darse cuando no esté
comercialmente disponible el medio completo.

Además, cuando se requiere un amplio número de medios y reactivos, es posible, dar sólo una
lista de productos en este numeral para reducir la redacción, y se coloca su descripción y
preparación en un anexo.

6. APARATOS Y MATERIALES DE LABORATORIO

Está cláusula se introduce con la siguiente frase:

“Equipo microbiológico usual de laboratorio y ”

El numeral contiene una lista de los materiales de vidrio para laboratorio y los aparatos
especiales utilizados, con excepción del equipo usual de laboratorio. Sin embargo, puede
hacerse una mención al final, en estos términos o por significado de la expresión “Aparatos de
uso corriente en el laboratorio”.

Si es necesario, se hace referencia a aparatos que hacen parte de la norma preparada por
ISO/TC 48, Materiales de laboratorio y aparatos relacionados. Si los aparatos o materiales de
laboratorio deben someterse a algún tratamiento preliminar, especial o inusual, esta operación
también se menciona en el numeral mencionado.

EJEMPLO.

Esterilización de los materiales de vidrio para laboratorio (operación no especificada en

los análisis químicos)

Las características (por ejemplo dimensiones, resolución de la medida) de los aparatos, las
cuales no son de uso normal se dan en este numeral, especialmente aquéllas con efecto
significativo sobre el desempeño o exactitud del método.

Cada detalle del aparato y material de laboratorio debe describirse separadamente en un

subnumeral. El número del subnumeral se escribe entre paréntesis en el numeral de
“Procedimiento”. Así se menciona el subnumeral correspondiente, evitando la repetición de todas
las características de los aparatos o materiales de laboratorio necesarios reduciendo la
extensión de la redacción.

Se recomiendan los diagramas que muestran los tipos especiales de aparatos y montajes
especificados. Estos diagramas deben elaborarse de conformidad con las Normas
Internacionales preparadas por el ISO/TC 10, Dibujo Técnico, hasta donde sean aplicables.

7. MUESTREO

El muestreo es, en principio, independiente del mismo ensayo y en general, es suficiente hacer
referencia a una norma que ofrezca una guía general sobre muestreo, a una norma específica
sobre muestreo , o al numeral correspondiente en la norma de producto. Si no se dispone de los
anteriores documentos, en este numeral se puede especificar un plan y un procedimiento de
muestreo, tomando en cuenta las recomendaciones dadas en este campo por el ISO/TC 69,
Aplicación de métodos estadísticos, sobre la terminología y la aplicación de estadísticas y la
información dada en la norma ISO 7002.

7
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

Si es necesario, este numeral debe además, dar instrucciones útiles en cuanto a la masa o
volumen de la muestra de laboratorio, o el número de unidades que se muestrean, las
características del recipiente utilizado para el almacenamiento y las condiciones de
almacenamiento y transporte que se deben aplicar.

8. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE ENSAYO

8.1 En el caso de una norma específica para un producto o grupo de productos, este
numeral brinda toda la información necesaria para la preparación de la muestra de ensayo, de la
cual se toma la porción de ensayo (por ejemplo, carne desmenuzada y mezclada en un picador ).

La información dada, en todos los casos, especifica las operaciones que se van a realizar.

El numeral también debe dar toda la información concerniente a las características de la muestra
preparada y, si es necesario, de los recipientes utilizados para el almacenamiento de ésta;
también se deben especificar las condiciones de almacenamiento.

Si para un grupo de productos hay un documento particularmente relacionado con la preparación

de la muestra de ensayo, éste puede mencionarse ( por ejemplo: “Carnes y productos cárnicos -
Preparación de una muestra de laboratorio para el análisis microbiológico“).

8.2 En caso de que una norma proporcione guías generales, este numeral se incluye con el
siguiente texto:

“Referirse a la norma específica. Si no hay una norma específica, se recomienda que las partes
concernientes lleguen a un acuerdo sobre esta materia”.

9. PROCEDIMIENTO

Este numeral puede dividirse en muchos subnumerales, tantos como operaciones separadas o
series de operaciones se realicen.

Cada una de estas operaciones se describe exactamente en el orden cronológico de ejecución,

usando el modo imperativo.

Se recomienda que los subnumerales que contengan varias operaciones sean subdivididos.
Dicha subdivisión corresponde a la operación dada e incluye todas las operaciones esenciales
preliminares.

Si el método que se describe ya aparece en otra norma, se usa la frase: “uso del método
descrito en la norma...”, si es necesario, se adiciona alguna instrucción relacionada con alguna
modificación que se requiera.

Si es necesario se inspeccionan los aparatos (por ejemplo, se revisa la temperatura al baño de

María, la anaerobiosis en un recipiente) o se realizan controles u otras revisiones sobre el
procedimiento para usar cepas seleccionadas de microorganismos o cualquier otro sistema
bioquímico. Todos los detalles necesarios para realizar esta inspección se dan en este numeral.

Si se requieren modificaciones (por ejemplo, la neutralización de una muestra ácida o la

reactivación de microorganismos dañados) en los procedimientos especificados en este numeral,
se deben dar en un anexo con una referencia cruzada incluida dentro del procedimiento.

8
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

9.1 PORCIÓN DE ENSAYO, SUSPENSIÓN INICIAL Y DILUCIONES

9.1.1 En el caso de una norma específica para un producto o grupo de productos, en este
subnumeral se debe hacer referencia a la norma ISO 6887, complementando la información dada
en esta norma. El subnumeral puede rectificarse para adaptarlo a los productos concernientes.

Como una guía, esta información se puede referir a los siguientes puntos:

- El método para tomar de la muestra la porción de ensayo (véase la cláusula 8), o,

si ésta es idéntica, a la muestra de laboratorio (véase la cláusula 7)

- Los procedimientos para el pesaje o la medición de la porción de ensayo, la

exactitud con la cual se realiza, y cualquier otra información útil.

- El método (s) para la preparación de la suspensión inicial y dilución, la cantidad

de diluyente usado para la suspensión inicial, frecuencia y rotación a la cual el
mezclador se opera, la inoculación y el mezclado en los tubos con el diluyente,
cualquier calentamiento de la suspensión inicial y dilución;

- La duración de las operaciones.

- La repetición de las operaciones para la preparación de la suspensión inicial y

dilución.

Nota. Si se requiere una técnica especial, ésta se puede describir en un anexo.

9.1.2 En caso de que alguna norma dé una guía general, este subnumeral incluye el siguiente
texto:

“Referir a la norma ISO 6887 y a la norma específica. Si no hay una norma específica, se
recomienda que las partes concernientes lleguen a un acuerdo sobre este asunto.”

9.2 MÉTODO DE MEDIO LÍQUIDO

Este subnumeral describe el método que se usa cuando se demuestra la presencia o ausencia
de un microorganismo dado, en un medio líquido inoculado (enriquecimiento).

La detección se puede realizar usando una única solución (detección de la presencia o ausencia)
o una serie de diluciones (cálculo del NMP ).

Los subnumerales se dividen como se describe a continuación.

9.2.1 Inoculación e Incubación

El subnumeral proporciona detalles concernientes a la inoculación de pre-enriquecimieto del

medio y/o el enriquecimiento del medio, con la suspensión inicial y/o dilución, junto con la
temperatura, duración y otras condiciones de incubación ( por ejemplo, anaerobiosis). El número
de inoculaciones por dilución debe especificarse y también el número de diluciones deseadas.

Si los tubos inoculados deben calentarse deben describirse los detalles de esta operación.

9
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

9.2.2 Interpretación

Este subnumeral da información relacionada con la interpretación de las reacciones observadas

en el medio líquido.

Además, se debe dar información sobre etapas posteriores que deban hacerse si las reacciones
observadas no dan pruebas concluyentes, como la presencia de microorganismos que se deben
detectar.

Se deben describir las etapas iniciales para confirmación, por ejemplo la inoculación en un medio
selectivo líquido o un medio selectivo sólido.

9.2.3 Confirmación

Este subnumeral debe describir las etapas posteriores, con el propósito de confirmar la
presencia de los microorganismos que se van a detectar, en los frascos, botellas, o tubos de
medio enriquecido. Estas etapas incluyen la selección y purificación de colonias, la inoculación de
estas colonias sobre otra, selectiva o no selectiva, el medio, el ensayo serológico, el marcado de
fagos, etc.

Deben darse los detalles de todas las reacciones bioquímicas y serológicas requeridas parta la
identificación de los cultivos.

Nota. Si es posible, el orden del medio y de la reacción debe ser el mismo que en el numeral 5 “ Diluyentes, medio de
cultivo”, reactivos y otros productos”.

Si es necesario, se presenta una tabla resumiendo las reacciones del microorganismo (s) al
ensayo realizado:

EJEMPLO.

Fermentación de glucosa +
Fermentación de lactosa -
Descarboxilación de lisina +

9.3 MÉTODO EN MEDIO SÓLIDO

Este subnumeral describe el método de enumeración de la colonia por recuento en un medio

sólido.

Este se subdivide como se describe a continuación.

9.3.1 Inoculación e incubación

Este subnumeral describe la inoculación usando la suspensión inicial y las diluciones, de un

sólido, un medio selectivo o no selectivo, en el cual ya está presente o el cual se adiciona
después a las cajas de Petri, a las botellas o a los tubos. Deben determinarse la temperatura, el
tiempo y las condiciones de incubación.

Información complementaria relativa a la preparación de las cajas de agar, incluyendo el pre-

secado, antes de la inoculación, el mezclado con el inóculo, o la disposición del agar después la
inoculación.
10
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

9.3.2 Interpretación

Este numeral debe dar información sobre la naturaleza de la colonia que se cuenta, el mismo
conteo, y las mediciones que se toman cuando en el recuento surgen dificultades (por ejemplo,
en el caso de un crecimiento excesivo). Además, se debe especificar el límite superior e inferior
del número de colonias que se pueden contar.

Si alguna de las colonias enumerada va a ser confirmada, se deben proporcionar instrucciones

para la selección y purificación de las colonias. En este numeral también deben darse las etapas
iniciales de confirmación.

9.3.3 Confirmación

Este numeral describe las etapas siguientes para confirmar que una parte representativa de las
colonias enumeradas muestra las propiedades de los microorganismos que se van a detectar.

Se deben enlistar todas las reacciones bioquímicas y el examen microscópico necesario para la
identificación del cultivo sospechado.

Nota. Si es posible, el orden del medio y de las reacciones es el mismo que en el numeral 5 “ Diluyentes, medio de
cultivo, reactivos y otros productos”

10. EXPRESIÓN DE RESULTADOS

10.1 MÉTODO EN MEDIO LÍQUIDO

Si una dilución sencilla o la suspensión inicial se usa para la inoculación, este subnumeral debe
describir en forma concisa el método para reportar la presencia o ausencia de microorganismos,
teniendo en cuenta la cantidad de producto analizado y el número de cultivos confirmados.

Si se usa más de una dilución, el cálculo del número más probable (NMP) o de los
microorganismos que se van a detectar, se describe sobre la base del número de tubos
confirmados, usando la tabla del número más probable (NMP) con límites estadísticos, la cual se
da en un anexo.

Es deseable adicionar alguna información con miras a escoger uno o más medios de cultivo
para especificar el marcado serológico o el marcado de fagos que se ha realizado, etc.

También se indica cómo obtener el promedio si el ensayo se repite.

10.2 MÉTODO DE MEDIO SÓLIDO

Este subnumeral indica cómo calcular el número de microorganismos presentes en el producto a

partir del número de colonias, si se usa un medio no-selectivo o el porcentaje de colonias
confirmadas en el caso de un medio selectivo.

Además, debe indicarse cómo obtener el promedio si el ensayo se repite.

11
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

11. REPETICIÓN

Este numeral da valores para la repetibilidad y reproducibilidad del método si tales datos están
disponibles. Si no, se puede incluir cualquier otra información relevante a la precisión o exactitud
del método.

12. REPORTE DEL ENSAYO

En este numeral el analista debe dar toda la información requerida para la identificación de la
muestra, la referencia del método usado, los resultados obtenidos y la forma en la cual éstos
deben expresarse para reportar cualquier detalle anotado durante el transcurso del ensayo y
todas las operaciones opcionales que puedan tener alguna influencia en los resultados.

Se sugiere la siguiente norma de redacción:

“El reporte del ensayo debe mostrar el método usado y los resultados obtenidos, indicando
claramente el método de expresión seleccionado. Además, debe mencionar cualquier detalle
operativo no especificado en la norma, o contemplado como opcional, junto con detalles de
cualquier incidente que tenga influencia probable en los resultados.

El reporte debe incluir toda la información necesaria para la completa identificación de la muestra.

13. ANEXOS

13.1 El anexo puede ser:

a) Una parte integral de la norma, por ejemplo, cálculos de las tablas de NMP, la
preparación y/o especificación de reactivos, los cuales están después del texto
principal por razones prácticas, o

b) Parte de la información complementaria, por ejemplo, un diagrama del

procedimiento o información explicativa incluyendo las medidas de seguridad que
se deban tomar en cuenta, o

c) Modificaciones para casos especiales.

Si el anexo pertenece a la categoría a), b) o c) debe redactarse y claramente sin ambigüedades.

Si es necesario, en la introducción debe darse una explicación completa.

13.2 Si hay más de un anexo, éstos deben designarse con una letra mayúscula del alfabeto,
comenzando por la “A”. No se deben utilizar las letras “Y”, “O” Y “X”. La palabra “Anexo”, seguida
por la letra designada en el orden correspondiente, debe situarse sobre el título. Los números
dados a las divisiones y subdivisiones de un anexo deben representarse mediante las letras
asignadas a ese anexo.

Un anexo sencillo se designa con letras, sin embargo, los números dados a las divisiones y
subdivisiones de un anexo sencillo deben ir precedidos por la letra A para distinguirlos en las
referencias de los números usados en otra parte de la norma.

13.3 Cada anexo contendrá un título

12
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4093

14. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Si se desea dar referencias bibliográficas, éstas deben constituir un elemento final titulado“
Bibliografía”.

15. DOCUMENTO DE REFERENCIA

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Microbiology. Standard Layout

for Methods of Microbiological Examination. Geneva, 1983. 7 p. (ISO 7667).

13