Modulo 1 Lab. - Quimico - 6o. - Semestre - A
Modulo 1 Lab. - Quimico - 6o. - Semestre - A
Modulo 1 Lab. - Quimico - 6o. - Semestre - A
MICROBIOLOGÍA GENERAL
EVALUACIÓN DIAGNÓSTICA
Define cada
área científica
Da ejemplos de
organismos
2.- Dibuja:
a) Procariota
b) Bacteriología
c) Micología
d) Virología
e) Levadura
f) Bacteria
g) Amiba
h) Parasitología
i) Tinción gram
j) Medio de cultivo
4.- Explica la importancia del microscopio compuesto y además menciona sus partes.
10.- Describe el protocolo para la toma de muestras de: sangre, esputo y orina.
OBJETIVO.
Que el alumno conozca, identifique y diferencie los tipos de microorganismos por
medio de la elaboración de mapas conceptuales y aportaciones de científicos
para que conozca la importancia de la microbiología general.
CONCEPTOS ANTECEDENTES.
Unicelular, pluricelular, protozoos, procarionte, eucarionte, taxonomía,
epidemiología, fermentación, pasteurización e inmunología.
INTRODUCCIÓN.
La Microbiología es una ciencia biológica extraordinariamente importante para la
humanidad, dado que los microorganismos están presentes en todos los hábitats y
ecosistemas de la Tierra y sus actividades presentan una gran incidencia en
numerosos ámbitos de interés: los microorganismos han sido los primeros en
aparecer en la evolución, y constituyen seguramente la mayor parte de la biomasa
de nuestro planeta. Las actividades microbianas sustentan los ciclos
biogeoquímicos de la Tierra: los ciclos del carbono, del nitrógeno, del azufre o del
fósforo dependen de modo fundamental de los microorganismos. Las actividades
metabólicas microbianas son excepcionalmente variadas, siendo algunas de ellas
exclusivas del mundo procariótico.
MARCO TEÓRICO.
DEFINICIÓN DE MICROBIOLOGÍA.
HISTORIA DE LA MICROBIOLOGÍA.
HISTORIA DE LA MICROBIOLOGÍA.
LOUIS PASTEUR
TIPOS DE MICROBIOLOGÍA.
Fisiología microbiana. Estudio a nivel bioquímico del funcionamiento de
las células microbianas. Incluye el estudio del crecimiento, el metabolismo y
la estructura microbiana.
DISCIPLINAS DE LA MICROBIOLOGÍA:
Por otra parte, las bacterias presentan un metabolismo tan diverso que les permite
llevar a cabo funciones tales como: La fijación de nitrógeno (conversión de
nitrógeno gaseoso a amonio), la fijación de una cantidad importante de CO2, la
metanogénesis (producción biológica de metano), así como la reducción de azufre
y fierro.
Pared celular:
Las bacterias grampositivas cuentan con tres capas externas: cápsula (en algunos
casos), pared celular gruesa y membrana citoplásmica. Las bacterias
gramnegativas presentan cápsula (algunas), una pared celular delgada,
membrana externa (que equivale al lipopolisacárido) y una membrana interna
(citoplasmática).
Las bacterias gramnegativas cuentan con dos membranas (una externa y una
interna) así como una capa delgada de peptidoglucano entre ambas, en el llamado
espacio periplásmico.
La membrana citoplásmica:
Lipopolisacárido (LPS):
Espacio periplásmico:
Cápsula y glicocálix:
Flagelos:
Son apéndices filamentosos y muy finos compuestos por la proteína flagelina
dispuesta en fibras helicoidales y con apariencia lisa, anclados a la pared celular.
Presentan un gancho, que une el filamento al cuerpo basal (parte motora). Su
función es el desplazamiento de la célula mediante movimientos variables de
rotación. Su distribución es variable, así como su número. Independientemente del
mecanismo de locomoción que desplieguen las bacterias, éste les permite
responder en sentido positivo o negativo a gradientes fisicoquímicos
(quimiotropismo, fototropismo). Son muy antigénicos.
Pili y Fimbrias:
Estructuras más delgadas y cortas que los flagelos. Actúan como órganos de
fijación entre células (bacteria - bacteria, bacteria - célula eucariota) También se
les relaciona con la formación de biopelículas y la conjugación (pilis sexuales).
Factores de relevancia en la colonización. Ejemplo: las fimbrias de Streptococcus
pyogenes contienen el principal factor de virulencia, la proteína M.
Espora:
Los hongos son muy diferentes de cualquier otro grupo de organismos, por ser
inmóviles y poseer una pared celular de quitina, se clasificaron durante mucho
tiempo junto con las plantas.
Pertenecen al reino fungí, los cuales son, hongos y levaduras, son unicelulares, la
mayoría de las especies están compuestas por masas de filamentos cenocíticos o
multicelulares.
Los quitridiomicetes son los únicos miembros del reino Fungi que en alguna
parte de su ciclo de vida producen células móviles. Son hongos terrestres o
acuáticos, la mayoría de los cuales son saprobios o parásitos de plantas, insectos
e inclusive de otros hongos.
Características generales:
o Presentan un filamento fúngico se llama hifa y todas las hifas de un solo
organismo se llaman colectivamente micelio.
o Las paredes de las hifas están compuestas fundamentalmente por quitina,
un polisacárido que nunca se encuentra en las plantas.
o Son heterótrofos y pueden tener como sustancias de reserva al glucógeno y
no al almidón.
o Se asemejan más a los animales que a las plantas.
o Las estructuras visibles de la mayoría de los hongos representan sólo una
pequeña porción del organismo; estas estructuras, en algunos grupos son
llamadas cuerpos fructíferos o fructificaciones y son hifas fuertemente
compactadas, especializadas en la producción de esporas.
o Un micelio se origina por la germinación de una sola espora.
o El crecimiento tiene la particularidad de que se produce solamente en los
extremos de las hifas. Si bien los hongos son inmóviles, las esporas pueden
ser llevadas a grandes distancias por el viento.
o El crecimiento del micelio reemplaza a la movilidad, poniendo al organismo
en contacto con nuevas fuentes de alimento y con diferentes cepas de
apareamiento.
o Obtienen alimento absorbiendo sustancias orgánicas o inorgánicas
disueltas.
o Generalmente, el hongo secreta enzimas digestivas sobre la fuente
alimenticia y luego absorbe las moléculas resultantes más pequeñas,
producto de la degradación, que son liberadas al medio.
o El micelio puede aparecer como una masa sobre la superficie de la fuente
de alimento o puede estar oculto debajo de la superficie del sustrato
o Desde el punto de vista humano, algunos hongos son destructivos, atacan
nuestros cultivos, nuestros productos alimenticios, nuestras plantas y
animales domésticos, nuestras viviendas, nuestra vestimenta e inclusive a
nosotros mismos.
o Otros son esenciales para la producción de pan, queso, cerveza y vino,
entre otros productos. Además, los hongos son la fuente de una gran
variedad de antibióticos y otros medicamentos capaces de salvar vidas.
o La mayoría de los hongos se reproducen tanto asexual como sexualmente.
o La reproducción asexual ocurre por la fragmentación de las hifas (por la que
cada fragmento se transforma en un nuevo individuo) o bien por la
producción de conidios o esporas.
o En algunos hongos, las esporas (esporangiosporas) se producen en
esporangios que son llevados en hifas especializadas llamadas
esporangióforos.
o Las esporas de otros organismos, éstas son capaces de sobrevivir durante
períodos de sequía o temperaturas extremas.
o La reproducción sexual de muchos hongos implica la especialización de
partes de las hifas en la formación de gametangios.
o Los contenidos de un gametangio, como los de un esporangio, están
separados de la hifa que lo ha originado por una membrana celular y una
pared celular completa, conocida como septum.
o La reproducción sexual puede ocurrir en distintas formas: 1) por fusión de
los gametos liberados del gametangio, 2) por fusión de gametangios o 3)
por fusión de hifas no especializadas.
o En algunos casos, la fusión de hifas fúngicas no está seguida
inmediatamente de la fusión de núcleos.
o Así, hay especies de hongos que pueden existir con dos o más tipos de
núcleos genéticamente distintos que operan simultáneamente.
o Cuando esta combinación contiene dos núcleos de tipos de apareamiento
complementarios, se conoce como dicarion. Los dicariones se encuentran
únicamente entre los hongos y, en los basidiomicetes -grupo de hongos que
producen sus esporas sexuales en basidios-, se hallan presentes en la
mayor parte del ciclo de vida.
o La unión de los núcleos -cariogamia- es inmediatamente seguida de la
meiosis lo que da lugar a cuatro esporas de origen sexual y haploides.
III.- VIROLOGÍA: ESTUDIO DE LOS VIRUS.
- Ácido nucleico. ADN o ARN pero no ambos. Puede ser de cadena sencilla
(monocatenario) o doble (bicatenario). Pueden ser de polaridad (+) que
equivalen a una molécula de ARN mensajero o de polaridad (-). Puede ser
circular o lineal. Algunos virus ARN tienen genomas segmentados.
REPLICACIÓN VIRAL.
MECANISMOS DE DEFENSA.
Por un lado, estudia a los organismos vivos parásitos, y la relación de ellos con
sus hospedadores y el medio ambiente.
a) Microbiología
b) Procariota
c) Bacteria
d) Hongo
e) Levadura
f) Virus
g) Protozoario
h) Microorganismo
i) Bacteriología
j) Parasitología
k) Virología
l) Micología
OBSERVACIONES.
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CONCLUSIONES.
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EVALUACIÓN.
Evaluó: _____________________________________________
PRÁCTICA No. 2.
NORMAS DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA.
UNIDAD DE COMPETENCIA.
Conoce, aplica y valora las normas de seguridad e higiene para el laboratorio de
microbiología.
OBJETIVO.
Que el alumno conozca las normas de seguridad e higiene para el laboratorio de
microbiología por medio del conocimiento de las medidas de emergencia que se
deben de aplicar durante un accidente para que valore la importancia de la salud
CONCEPTOS ANTECEDENTES.
Higiene, seguridad, nocivo, agente infeccioso, huésped, bioseguridad, agentes
contaminantes, hipodérmico, inoculación, material biológico, mutagénicos,
carcinogénicos.
NTRODUCCIÓN.
Cuando se trabaja en un laboratorio de Microbiología aparte de tener en cuenta
las medidas de seguridad e higiene de un laboratorio de química o física, no hay
que olvidar que estamos trabajando con microorganismos que en muchas
ocasiones pueden ser patógenos para el hombre. La seguridad e higiene con que
se trabaja en estos laboratorios va a dar un buen resultado en el crecimiento de
los mismos, así como la confianza de no ser infectados al manipularlos.
MARCO TEÓRICO.
Seguridad.
De acuerdo con el artículo 473, de la Ley Federal del Trabajo, son los accidentes y
enfermedades a que están expuestos las y los trabajadores en el ejercicio o con
motivo de trabajo.
Higiene.
Higiene en el Trabajo.
Enfermedad de trabajo.
Son muchos y se incluyen en tres grupos: Los que corresponden a los agentes
contaminantes que resultan del proceso de trabajo; Los que se relacionan con las
condiciones en las que el trabajador realiza sus labores y los que se derivan del
ambiente en que se encuentra el trabajador.
PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD.
1. Bioseguridad.
Para que se produzca un accidente por un agente biológico deben estar presente
básicamente 4 elementos: un huésped susceptible, un agente infeccioso, una
concentración suficiente de éste y una ruta de transmisión adecuada; siendo este
último punto el que mejor se puede controlar en el laboratorio.
BOCA.
PIEL.
OJOS.
FOTOS O IMÁGENES.
Colocar en cada recuadro una imagen de un laboratorio de microbiología y análisis
clínicos, además, una imagen del uniforme del personal que trabaja en el mismo.
ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS:
1.- ¿Qué mediadas de seguridad se deben seguir en un laboratorio de
microbiología?
13.- ¿Cuáles son las medidas de emergencia que se deben de aplicar en los
siguientes casos?:
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14.- Lee el siguiente texto y con tus palabras da tu punto de vista sobre la
importancia de seguir las normas de un laboratorio de microbiología.
En general, las causas que provocan un determinado daño no obedecen a un solo factor sino a la
interacción de varios factores, para evitar los cuales existen una serie de medidas que previenen o
limitar los accidentes y otros riesgos relativos al trabajo de laboratorio. Los agentes físicos y
químicos se cuentan entre los que más frecuentemente someten al individuo a riesgos potenciales
y reales.
Las propiedades físico químicas y tóxicas de algunas sustancias las hacen poseer características
inflamables, explosivas, corrosivas, irritantes, narcóticas, venenosas, mutagénicas, carcinogénicas
o teratogénicas, lo que puede tener efecto deletéreo sobre el hombre.
También los agentes físicos mecánicos, térmicos, eléctricos, radiante y otros, pueden resultar en
un daño considerable o mortal para el mismo. Otro tipo de riesgo no menos importante está
constituido por los agentes biológicos, entre los cuales las causantes de patología infecciosa son
los más frecuentes y peligrosos.
Adicionalmente, existe un grupo de riesgo fundamental, constituido por factores humanos, los
cuales pueden incrementar considerablemente el riesgo de los otros factores y que pueden estar
relacionados con las aptitudes y habilidades para el trabajo, el estado físico y psicológico del
trabajador, su capacidad intelectual y entrenamiento laboral, así como con la organización general
del laboratorio.
Los trabajadores del laboratorio están sometidos, además, a gran número de riesgos cuando como
parte de su labor deben trabajar en colectas de muestras y otras actividades que se desarrollan
fuera del laboratorio, pero relacionadas con su ocupación.
En estos casos el hecho de que pueden ocurrir fenómenos imprevisibles hace aún más difícil la
evaluación de los riesgos posibles y el tomar medidas de seguridad para tales contingencias. El
daño, al igual que la enfermedad, requiere de un hospedero susceptible, un reservorio ambiental y
un agente productor de la enfermedad. La interrelación de estos 3 factores determinan la
ocurrencia o no de afecciones.
Algunos investigadores han elaborado aspecto teórico acerca de las formas de energía o riesgo y
su modo de acción directa o indirecta, los cuales orientan sobre la forma de intervenir
positivamente para evitar el daño individual o comunitario. En cualquier caso, el hecho más
importante es la preservación de la salud. El nivel de información, de sensibilidad y de acción que
se logre entre todos aquellos que de una forma u otra tienen que ver con el trabajo en los
laboratorios médicos, determinará el éxito en la implementación de las medidas de seguridad y su
eficiencia en la prevención y limitación de los efectos perjudiciales.
Como ejemplos de 2 tipos de riesgo extremos: físico y psicógeno, de posible ocurrencia entre el
personal de laboratorio, se presentan los resultados de 2 informes publicados por Harrington sobre
sus observaciones en gran Bretaña: Los accidentes de laboratorio que dan como resultado
laceraciones son frecuentes entre el personal de laboratorio; 1 de cada 4 trabajadores de
laboratorio sufrió heridas en 1 año de estudios prospectivos. Estudio de mortalidad entre patólogos
sugirieron que el suicidio por envenenamiento era una causa común de muerte, el acceso laboral a
compuestos químicos letales fue el factor que posiblemente explique la alta proporción de suicidios
por envenenamiento, comparada la población general.
Los ejemplos anteriores muestran que el personal de los laboratorios médicos está sujeto a gran
cantidad de riesgos de peligrosidad variable y de causas multivariadas, en las que intervienen
varios factores; la responsabilidad individual de trabajador y las responsabilidades colectivas y
administrativas, desempeñan funciones preponderantes o coadyuvantes en su ocurrencia.
En el presente trabajo, se insistirá fundamentalmente en el riesgo biológico ocupacional causado
por agentes patógenos infecciosos a los que resultan expuestos los trabajadores de los
laboratorios médicos, y en especial del laboratorio microbiológico, en su labor cotidiana. Las
medidas de seguridad recomendadas para los laboratorios que trabajan con gérmenes patógenos
tienen en consideración el riesgo biológico y los otros tipos de riesgo y por tanto están
encaminados a la seguridad general, aunque con énfasis particular en las medidas de seguridad
biológica.
OBSERVACIONES.
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CONCLUSIONES.
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EVALUCIÓN.
Evaluó: _____________________________________________
PRÁCTICA NO 3.
MATERIAL Y EQUIPO PARA UN LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA.
UNIDAD DE COMPETENCIA.
El alumno conoce, identifica y clasifica el material y equipo utilizado en un
laboratorio de microbiología.
OBJETIVO:
Que el alumno conozca el material y equipo utilizado en un laboratorio de
microbiología por medio de una investigación sobre el mismo, así como de
diferentes actividades realizadas en este tipo de laboratorio para que los pueda
utilizar correctamente en prácticas posteriores.
CONCEPTOS ANTECEDENTES:
Material de vidrio, material metálico, esterilización, centrifugación, termostato,
anaerobio, agentes patógenos, desionizadores, ósmosis, desnaturalizar,
antimicrobiano, pruebas de sensibilidad.
INTRODUCCIÓN:
Un laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado para manejar y estudiar
microorganismos. El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estándares
técnicos y de seguridad propios de un laboratorio de Microbiología Clínica. Es
importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos presentes
en la muestra por lo que es preciso extremar las precauciones para evitar
contaminaciones que den lugar a resultados erróneos.
La importancia de conocer el material empleado en este tipo de laboratorio nos
brinda una seguridad al momento de trabajar con microorganismos, así como el
conocimiento del equipo nos facilita la separación de muestras, la esterilización del
propio material, la incubación y la observación para su identificación.
MARCO TEÓRICO:
Los laboratorios deberán disponer de los aparatos e instrumental necesario para el
correcto desarrollo de su actividad. Debe existir un procedimiento de control de
calidad en el laboratorio de Microbiología Clínica que implique la monitorización de
los medios e instrumentos, con el fin de asegurar la adecuada realización de los
aislamientos, identificación y caracterización de los agentes patógenos y la
realización precisa de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos como
referencia terapéutica. El sistema de la calidad deberá contemplar la existencia de
registros de formación de personal.
EQUIPO DE LABORATORIO.
Estufa de incubación
Es una cámara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos.
Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura
óptima de crecimiento (generalmente 35-37º).
Congeladores
Se utilizan para la conservación de reactivos y microorganismos a temperaturas
inferiores a 0ºC, llegando a -80ºC (los más frecuentes son -20º, -40º y -80º).
Microscopio óptico.
Centrífuga
Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrífuga lo que permite la
separación de los distintos componentes de la muestra mediante la precipitación
en el fondo del tubo de las partículas en suspensión.
Contador de colonias.
Jarras de anaerobios.
Recipientes que se usan para conseguir una atmósfera libre de oxígeno para el
cultivo de microorganismos anaerobios.
Autoclave.
Horno de Pasteur.
Emplea altas temperaturas (160-180º C) durante un tiempo prolongado (1.5 a 3
horas). Debido a su poca capacidad de penetración se usa para esterilizar vidrio y
metales. Actúa principalmente desnaturalizando las proteínas y secundariamente
oxidando los compuestos celulares.
ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS.
I.- Completa las siguientes tablas de material utilizado en un laboratorio de
microbiología.
MATERIAL DE VIDRIO.
Matráz Erlenmeyer
Vaso de precipitado
Caja de Petri
Probeta
Pipeta graduada
Embudo de
filtración
Matráz Balón de
fondo plano
Tubo de ensayo
Agitador de vidrio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Frasco gotero
Frasco de vidrio
MATERIA METÁLICO.
Asa de platino
Baño maría
Tripié
Tela de alambre con
asbesto
Mechero de Bunsen
OTRO MATERIAL.
NOMBRE DEL IMAGEN O CARACTERÍSTICAS USOS
MATERIAL DIBUJO
Piseta
Manguera de látex
Termómetro
II.- .Investiga con ayuda de tú profesor, las siguientes actividades realizadas en un
laboratorio de análisis microbiológicos:
f) ¿Cómo llenarías un tubo de ensayo con agar, pero que quede en forma de
pico de flauta?
CONCLUSIONES.
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EVALUCIÓN.
Evaluó: _____________________________________________
PRÁCTICA No 4.
UNIDAD DE COMPETENCIA.
Conoce y prepara sustancias para aplicar técnicas de limpiar, desinfectar y
esterilizar superficies y material de laboratorio de microbiología.
OBJETIVO.
Limpiar, desinfectar y esterilizar superficies y materiales de microbiología.
CONCEPTOS ANTECEDENTES.
INTRODUCCIÓN.
Todo el material que se utilizara para pruebas en el laboratorio debe cumplir con
una serie de condiciones, entre ellas y de forma esencial, una total ausencia de
cualquier forma viviente.
La limpieza, desinfección y esterilización son técnicas de laboratorio de
microbiología, por el cual podemos garantizar que los materiales están libres de
microbios, que puedan afectar los resultados de la práctica en el laboratorio de
microbiología.
MARCO TEORICO.
La limpieza debe ser un paso previo a la desinfección, ya que con este proceso,
además de eliminar muchas sustancias que pueden servir como nutrientes para
los microorganismos, se eliminan sustancias que pueden impedir que las
soluciones desinfectantes actúen eficientemente.
En el laboratorio de microbiología estos procesos deben realizarse de rutina y
registrarse en una bitácora, ya que el trabajar con microorganismos exige que se
tomen medidas para evitar la contaminación del ambiente, del material de trabajo
y del personal.
La limpieza en microbiología:
Limpieza:
Agentes desinfectante:
Alcoholes.
Aldehídos.
Formaldehídos.
Glutaraldehídos.
Hipoclorito.
Compuestos yodados.
Yodoforos.
Fenoles.
Oxidantes.
Peróxido de hidrogeno.
Compuestos de amonio cuaternario.
ESTERILIZACIÓN EN MICROBIOLOGÍA:
Existe material desechable controlado que se utiliza cada vez más, ya que llega
estéril desde el proveedor y a menudo es más barato tirarlo, aunque sea metálico,
que limpiarlo y esterilizarlo. Además evita los riesgos derivados de un lavado poco
cuidadoso o de una esterilización incorrecta, aunque es costoso.
1. Aquellos que utilizarás para tomar muestra, siempre que haya de hacerse con
material estéril: frascos, asa, contenedores, espátulas, bisturíes y pinzas.
2. Objetos de vidrio o de acero inoxidable que usaras en los distintos análisis
microbiológicos: tubos de vidrio en los que se han realizado las diluciones, las
pipetas, matraces, cajas de petri, etc.
3. Los medios de cultivo, antes de inocular en ellos los gérmenes que van a
estudiarse.
Métodos de esterilización:
Técnicas de esterilización:
3.- Los filtros: son dispositivos formados por unas telas continuas con poros;
estos poros son más pequeños que los microorganismos (filtros Milipore). A través
del filtro se hacen pasar líquidos o gases de modo que los gérmenes queden
retenidos en él. Los filtros son útiles para esterilizar líquidos o gases que contienen
sustancias químicas o biológicas que se destruirán con el calentamiento.
Las partes del mechero: base, tubo alimentador, collarín, espera y tubo superior.
La flama correcta es la cónica de color azul que se obtiene con las ventanas del
collarín abiertas, esta zona está dividida en: zona de aire y gas inferior sin arder,
zona media o de reducción, que previene de la descomposición del combustible y
zona externa de oxidación en donde el calor es mayor.
Si prepara la disolución con agua caliente se formaran vapores tóxicos; por este
motivo los recipientes para el glutaraldehído deben tener tapadera y durante la
manipulación debes de usar guantes, mascarilla y protección ocular.
La calidad de la esterilización:
MATERIAL DE LABORATORIO.
Material suministrado por la institución.
Matraz Erlenmeyer de 500 ml.
Cajas Petri de vidrio y estériles.
Pipetas graduadas de 10 ml.
Pipetas graduadas de 1 ml.
Tubos de ensayo 16 x 150 mm (con rosca).
Pinzas de bisección.
Mechero bunsen.
Esterilizador autoclave.
Masking tape.
Cinta testigo.
Etiquetas adhesivas.
Papel aluminio grueso.
Plumón indeleble o permanente.
Franela.
Papel Kraft.
Gasas.
DESARROLLO PRÁCTICO.
DESARROLLO 1. PROCEDIMIENTO DE LAVADO DEL MATERIAL.
Colocación del tapón de algodón al matraz y gorro de papel Kraf para matraz para ser
esterilizado por calor húmedo
NOTA: Cuando se esterilizan los matraces y/o tubos, estos deben contener líquido, para
evitar que se deterioren por resecamiento del vidrio al calentarse a temperaturas
elevadas.
Al utilizar cajas Petri en los cultivos microbianos, tienen que ser esterilizadas para
poder vaciar dichos medios de cultivo que servirán de nutrientes a los
microorganismos tratados. Estas cajas se pueden esterilizar por calor húmedo o
calor seco, siendo el más frecuente el calor seco, por ser más confiable su
efectividad.
Es necesario envolver las cajas Petri antes de esterilizarse para evitar que al
término de la esterilización estén expuestas al medio ambiente y se contaminen de
nuevo. Para esterilizarlas se puede usar un recipiente cilíndrico de metal (figura 7)
o envolviéndolas en papel dextrasa (figura 6).
1. Se corta papel dextrasa, del tamaño adecuado para el número de cajas que
se desee envolver y se colocan las cajas en el centro del papel.
2. Los bordes de los costados se unen en el centro cubriendo las cajas.
3. En la parte superior se unen los bordes de ambos lados y esta unión se
dobla a la mitad.
4. Se hace un segundo doblez, quedando recargado éste sobre las cajas.
5. Al papel se le presiona a los costados quedando al relieve el volumen de
las cajas envueltas en el papel.
6. Se doblan las puntas del papel de cada una de las esquinas al centro.
7. Se le dá vuelta al material, quedando el doblez hacia abajo.
8. Las puntas salientes del papel en los lados de las cajas se doblan hacia
arriba y al centro de las cajas y se les asegura con cinta adhesiva.
Una vez que un material está estéril puede mantener esta condición si está
protegido en la forma apropiada. Es decir, la duración de la esterilidad de un
material no está relacionada directamente con el tiempo, sino con factores que
comprometen su exposición al medio ambiente.
NOTA: por este método se puede esterilizar guantes, látex, batas, ropa
contaminada, gasas.
DESVENTAJAS
1. Este proceso no es recomendable para ciertos plásticos, gomas, ni material
metálico u oxidable, ni para ciertos medios de cultivo. Doméstica.
DIBUJOS O FOTOGRAFIAS
CUESTIONARIO
Contesta correctamente:
3.- ¿Por qué usar guantes de latex al preparar material para esterilizar?
Define:
a) Desinfección:
b) Desinfectante:
c) Detergente:
d) Esterilización:
e) Limpieza:
f) Lavado:
g) Suciedad libre:
h) Suciedad incrustada:
i) Agente desinfectante:
9.- ¿Cuáles son las temperaturas óptimas de esterilización por vía húmeda?
OBSERVACIONES.
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CONCLUSIONES.
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EVALUCIÓN.
Guía de observación para autoevaluar cualitativamente tú desempeño.
Evaluó: _____________________________________________
PRÁCTICA NO 5.
MEDIOS DE CULTIVO.
UNIDAD DE COMPETENCIA.
OBJETIVO.
CONCEPTOS ANTECEDENTES.
Para la realización de ésta práctica, es necesario que conozcas los siguientes
conceptos: cultivo, medio de cultivo, cultivo sólido, cultivo líquido, cultivo
semisólido, clasificación de cultivos, ´reparación de cultivo, sembrado en medio de
cultivos y esterilización de cultivos.
INTRODUCCION.
Todas las formas de vida, desde los microorganismos hasta los seres humanos,
toman del ambiente las sustancias que requieren para sintetizar su material
celular, generar energía y efectuar un funcionamiento adecuado. Estas sustancias
se denominan nutrientes.
Los microorganismos son diversos en cuanto a sus propiedades fisiológicas
específicas y por consiguiente, en cuanto a sus requerimientos de nutrientes
específicos.
MARCO TEÓRICO.
1. Valor de pH incorrecto:
- Medir el pH por encima de los 25oC.
- Sobrecalentamiento en la esterilización, vuelta a fundir o calentamiento
prolongado a 50oC.
- Solución incompleta del medio.
- Recipiente mal lavado o con residuos químicos.
- Mala conservación del medio deshidratado o vencido
2. Turbidez o precipitación:
- Mala calidad del agua
- Sobrecalentamiento. pH incorrecto.
- Solución incompleta.
3. Gel blando:
- Mala relación soluto-solvente
- Sobrecalentamiento
- Mala homogenización del medio
4. Crecimiento bacteriano pobre:
- Exceso de calentamiento.
- Sustancias inhibidoras en el agua o en el recipiente.
- Alteración en el pH.
Los medios del cultivo pueden variar en su composición, no solo en función del
grupo microbiano para el cual se utilizan, también por: complejidad química, su
estado físico y aplicación.
a. Líquidos conocidos como caldos, estos son útiles para hacer disoluciones,
para homogenizar mezcla de microorganismos y determinar su agrupación
natural de éstos.
Caldo Simple:
Microorganismo Crecimiento
P. Mirabilis Bueno
E. coli Bueno
S. aureus Bueno
S. epidermis Bueno
S. typhimurium Bueno
P. aeruginose Bueno
Microorganismo Crecimiento
P. Mirabilis Bueno -
excelente
E. coli Bueno -
excelente
S. aureus Bueno -
excelente
B. cereus Bueno -
excelente
E. faecalis Bueno -
excelente
P. aeruginose Bueno -
excelente
Agar sangre:
E. coli Abundante --
Agar EMB:
Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o
rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras.
Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y
puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en
Candida albicans.
Peptona 10.0
Lactosa 5.0
Suspender 36 g del polvo en un litro de agua
Sacarosa 5.0 destilada. Reposar 5 minutos; mezclar,
calentando a ebullición durante 1 o 2
Fosfato 2.0
minutos hasta su disolución. Esterilizar en
dipotásico
autoclave a no más de 121°C durante 15
Agar 13.5 minutos. Enfriar a 45°C y distribuir agitando
suavemente.
Eosina 0.4
NOTAS:
Las placas ya preparadas son de color purpura, la esterilización del medio de
cultivo reduce el azul de metileno a color naranja, el color se restaura por
agitación.
Una vez preparado el medio, este se debe esterilizar lo antes posible para evitar el
crecimiento de microorganismo.
Tapar el matraz con tapón de algodón graso y cubrir con papel de aluminio para
llevar a esterilizar en el autoclave (121 °C, 15 – 20 min). Una vez estéril repartir el
medio en placas de Petri estériles y dejar en reposo para su solidificación
Medios líquidos:
Una vez disuelto los componentes del medio en el matraz, repartir en su caso en
tubos a razón de 2 a 4 ml por tubo, cubrir con tapón y llevar a esterilizar en el
autoclave. Alternativamente, se puede esterilizar el medio en el matraz y
posteriormente repartirlo con la ayuda de pipetas estériles en tubos de plásticos
estériles.
Medios semisólidos:
Se pararan con concentraciones inferiores de agente solidificante (agar – agar). El
medio se reparte en tubos. En caso de desear proporcionar condiciones
anaeróbicas, existen diversas metodologías para ellos. Los medios semisólidos se
utilizan para el crecimiento bacteriano a lo largo del tubo. Los niveles de difusión
de oxígeno en las distintas capas condicionará el crecimiento de distintos tipos de
microorganismos (aerobios, anaerobios).
DESARROLLO 1.
MATERIAL:
20 gr de grenetina por mezcla (300g).
Orina
Sangre
Glucosa
Jitomate
Papa
Caldo
Sacarosa
Harina
Sal plátano
Vitaminas
Carne
Miel
Matraz Erlen-Meyer dependiendo de la cantidad de cultivos.
Frascos o cajas de Petri dependiendo de la cantidad de medios de cultivo
Olla expres
Cinta testigo
Tapones de algodón
Papel aluminio
Mechero
Licuadora
MÉTODO.
Ya frio sin que se solidifique la mezcla, preparar los medios de cultivo, cerca de un
mechero encendido, llenar cajas de petri (o vasos de plástico o frascos de vidrio
estériles) a volumen constante, se tiene listo el medio de cultivo para sembrar.
Nota: la siembra se realizará en la siguiente práctica experimental.
METODO.
1. Cada equipo de alumnos preparará el volumen de medio de cultivo indicado
por el profesor.
2. Considerar los procedimientos de disolución al adicionar el agua destilada.
3. Pesar cada uno de los componentes del medio, limpiar la espátula para evitar
contaminación.
4. Seguir las indicaciones descritas por el fabricante.
5. Distribuir el medio de cultivo en caso de ser tubos antes de esterilizar.
6. El material a esterilizar (tubos o matraces) deberá de ser cubierto con
torundas de algodón.
7. Meter el material a la autoclave siguiendo las indicaciones pertinentes.
8. Para el vaciamiento de los medios de cultivo en las cajas, éstas deben de
estar previamente identificadas y en condiciones de esterilidad.
9. Realizar las pruebas de control de Calidad pertinentes.
DESARROLLO 2.
EJERCICIO 2. Realizar un análisis grupal de los diferentes componentes de los
medios trabajados, resaltando las propiedades de cada una de las sustancias.
DIBUJOS O FOTOGRAFIAS.
CUESTIONARIO.
Agar chocolate
Agar Mac
Conkey
Agar Manitol
Agar nutritivo
Agar Meller
Hinton
Agar manitol
Agar eosina
Agar citrato de
Cimos
Agar hierro
Kliger
Caldo nutritivo
Caldo urea
Caldo rojo de
fenol
Caldo dextrosa
OBSERVACIONES.
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CONCLUSIONES GENERALES.
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EBALUCIÓN.
Evaluó: _____________________________________________
PRÁCTICA No 6.
UNIDAD DE COMPETENCIA.
Conoce las técnicas de siembra en microbiología y describe la morfología colonial
de bacterias y hongos.
OBJETIVO.
Describe y aplica las técnicas de siembra en placa sólida y liquida, así como
describe la morfología colonial de manera general.
CONCEPTOS ANTECEDENTES.
INTRODUCCIÓN.
Una de las técnicas más usadas consiste en transferir una muestra microbiológica
de un ambiente determinado a un medio de cultivo, al efectuar este procedimiento
es necesario considerar que en el aire que nos circunda y en la superficie del área
de trabajo, existen otros muchos microorganismos, debido a esto es necesario
tomar precauciones para impedir que éstos penetren y contaminen los cultivos en
estudio, para favorecer el desarrollo de un microorganismo en particular, es
necesario considerar no sólo el aspecto nutricional, sino también las condiciones
ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio del cultivo se debe de
ajustar el pH, concentración de sales y durante la incubación, condiciones tales
como: la temperatura, la aireación y la luminosidad.
MARCO TEORICO.
SIEMBRA EN MICROBIOLOGÍA:
Siembra.
Tipos de siembra
Por inclusión.
Métodos:
Directo
Estrías
Inclusión o bañado
Indirecto- enriquecimiento previo.
COLONIAS BACTERIANAS:
Las colonias bacterianas tienen una medida, forma, textura y en algunos casos
color característicos, que aunque puede variar de acuerdo al medio en que se
encuentren, es constante bajo condiciones controladas y depende de la especie
bacteriana que la forme.
Ejemplo / Imagen
Colonia puntiforme Colonia circular
MATERIAL.
Cultivo de Sabouraud.
DESARROLLO 1: SEMBRADO.
METODO.
1. Con la mano derecha (si usted es diestro) esterilizar el asa a la flama y enfriarla.
2. Con la mano izquierda tomar el tubo que contiene el cultivo, colocarlo en
posición inclinada y con la boca cerca de la flama del mechero, sujetar el tapó
de algodón entre el meñique y la palma de la mano derecha (que sostiene el
asa ya estéril) y girar el tapón hasta que salga del tubo, mantener el tapón en la
mano (nunca deje éste sobre la mesa porque contaminaría el cultivo); flamear la
boca del tubo 1 o 2 veces manteniendo en la posición inclinada y con la boca
cerca de la flama.
3. Introducir el asa y tomar una asada del cultivo de Escherichia coli, cerca del
mechero.
4. Flamear el algodón y la boca del tubo y taparlo.
5. Colocar el tubo en la gradilla y tomar el tubo que va a ser sembrado.
6. Destapar, flamear y mantener el tubo en la forma indicada.
7. Introducir el asa y depositar el inóculo dentro del medio líquido.
8. Sacar el asa, flamear el algodón y la boca del tubo y taparlo.
9. Flamear el asa al rojo incandescente para destruir los microorganismos de tal
forma que no produzca aerosoles.
DIBUJOS O FOTOGRAFIAS
CUESTIONARIO.
2.- ¿Por qué es importante sembrar cerca del mechero o lámpara de alcohol?
5.- ¿Qué importancia tiene no traer aretes, ni hablar cuando se esta sembrando?
9.- ¿Cómo se siembra en tubos de ensayo que tienen agar en forma de pico de
flauta?
10.- ¿Cómo se siembra en tubos de ensayo que tienen un medio nutritivo liquido?
11.- Dibuja las diferentes formas que podrían presentar las colonias:
OBSERVACIONES.
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CONCLUSIONES GENERALES.
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EVALUACIÓN.
Guía de observación para autoevaluar cualitativamente tú desempeño.
Evaluó: _____________________________________________
PRÁCTICA NO 7.
MUESTRAS EN MICROBIOLOGÍA.
UNIDAD DE COMPETENCIA.
Recolecta muestras de orina, sangre, esputo, heces y escamas para análisis
básico en microbiología medica; así como obtiene muestras de superficies, agua
y leche para siembras de microbiología en alimentos.
OBJETIVO.
Para la realización de ésta práctica, es necesario que conozcas los siguientes
conceptos: recolectar y trasportar muestras para el análisis de microbiología, para
hacer un análisis básico en microbiología.
CONCEPTOS ANTECEDENTES.
Muestra de microbiología, muestra para análisis clínico y ambiental, bioseguridad
y control de calidad.
INTRODUCCIÓN.
La toma de muestra es un procedimiento especializado que consiste en la
obtención de uno o varios especímenes biológicos, con el fin de determinar y
aislar los agentes etiológicos.
ARCO TEÓRICO.
PARA EL CASO DE LAS MUESTRAS BIOLÓGICAS DE UN PACIENTE:
Las muestras para cultivo de bacterias se deben obtener con prontitud, después
del inicio de la enfermedad activa y preferiblemente antes del inicio de antibióticos.
• Mascarilla.
• Guantes.
• Bata.
• No re-enfundar agujas.
• Disponer y utilizar adecuadamente el contenedor para corto punzante.
Una vez conocida la solicitud del tipo de examen, se debe preparar el equipo
necesario para la obtención, la conservación y el transporte correctos de la
muestra.
Lavarse las manos, usar guantes estériles, aplicar jabón antiséptico en una gasa
estéril y con movimientos circulares desde el centro a la periferia, hacer fricción
mecánica del sitio que se va a puncionar o penetrar. Repetir el mismo proceso con
una gasa impregnada en solución antiséptica. Finalizar con una aplicación de
alcohol al 70% o alcohol yodado. Dejar secar espontáneamente el antiséptico
sobre la piel durante 2 minutos.
IDENTIFICACIÓN DE MUESTRAS:
Toda muestra debe ser etiquetada con los siguientes datos básicos:
Para estudio debe ser corto (preferiblemente antes de 2 horas) y de acuerdo con
la viabilidad del organismo sospechado y el recipiente donde se colectó.
Las muestras para cultivo de bacterias no deben ser almacenadas por más
de 24 horas, independientemente del medio y la temperatura de
almacenamiento.
CLASIFICACION DE MUESTRAS.
I. MUESTRAS CLÍNICAS.
Técnica de recolección:
Equipo:
Transporte:
Se recomienda en los primeros 15 minutos de la recolección, no exceder de dos
horas y a temperatura ambiente.
Cuidados y recomendaciones:
• Utilizar campo estéril para evitar tener contacto con áreas circundantes que
ofrezca el riesgo de contaminación.
Técnica de recolección:
Equipo:
• Guantes estériles.
• Equipo de asepsia (antiséptico, gasas y guantes estériles).
• Frascos para hemocultivos. Frascos para hemocultivos con rótulo específico para
hongos.
• Jeringas estériles.
Transporte:
Cuidados y recomendaciones:
Técnica de recolección:
• Prepare la piel del área circundante del sitio de inserción del catéter.
Equipo:
• Guantes estériles.
• Tubo estéril con tapa rosca.
• Lámina de vidrio.
• Escobillones estériles.
Transporte:
Técnica de recolección:
• Tomar dos escobillones, hacer con uno extendido en lámina de vidrio; colocar el
otro en el medio de transporte.
Equipo:
• Guantes no estériles.
• Escobillones estériles.
Transporte:
Se recomienda en los primeros 15 minutos de la recolección, no exceder de dos
horas y a temperatura ambiente.
Técnica de recolección:
Equipo:
Transporte:
Equipo:
Transporte:
Equipo:
• Jeringa de 10 cc.
• Guantes no estériles.
• Recipiente de boca ancha estéril de tapa rosca con fosfato trisódico al 10%, con
capacidad para 50 ml.
• Sonda nasogástrica.
• Agua destilada.
Transporte:
• Si emplea medio de transporte coloque uno en dicho medio y con el otro haga un
extendido en lámina de vidrio.
Equipo:
• Guantes estériles.
• Gasa estéril.
• Escobillones estériles.
• Lámina de vidrio.
Transporte:
Técnica de recolección:
Equipo:
• Guantes estériles.
• Gasa estéril.
• Escobillones estériles.
Transporte:
Técnica de recolección:
Equipo:
Transporte:
Técnica de recolección:
Equipo:
• Guantes.
Transporte:
• Guantes no estériles.
• Escobillones.
Transporte:
Técnica de recolección:
• En lesiones secas raspar los bordes de la lesión y de varios sitios con el bisturí
estéril; deposítelos directamente en la caja de petri.
• Si son pelos, tome con pinzas estériles por lo menos 15 de ellos; deposítelos en
caja de petri.
Equipo:
• Guantes estériles, mascarilla.
• Gasas estériles.
• Alcohol al 70%.
• Escobillones de dacrón.
• Bisturí estéril.
• Pinzas estériles.
• Tubo estéril.
• Cajas de petri.
Transporte:
1. SUPERFICIES.
Técnica recolección:
• La cuantitativa: se toma con un escobillón estéril con ayuda de una plantilla de,
por ejemplo: 5, 10, 20 cm2 para luego realizar siembra en placa profunda que
permite realizar un recuento y reportarlo por UFC/ml. La forma cuantitativa se
realiza por métodos de contacto y existen las siguientes opciones: 1) por medio de
la ayuda de una plantilla (5,10,20 cm2 ) adquirida comercialmente o fabricada por
el usuario en un material que se pueda esterilizar, y depositar el escobillón en un
tubo que contenga 10 ml de de caldo de cultivo o agua peptonada; esto con el fi n
de poder realizar diluciones y sembrar en profundidad; 2) el método rodac; y 3) el
método de petrifi lm (30,31,32).
Equipo:
• Escobillones estériles.
• Guantes.
• Tapabocas.
Según técnica a utilizar: cajas para el método rodac, láminas de petrifi lm, plantilla
estéril, medios de cultivo específicos para microorganismos mesófilos, coliformes,
hongos y levaduras.
Transporte:
2. LÍQUIDOS:
Técnica de recolección:
1. En caso de ser procesadas por el laboratorio clínico de la institución, se
recomienda tomar una alicuota del jabón, solución o desinfectante,
preferiblemente del frasco del tiempo del evento. Se puede realizar utilizando: a) la
técnica de dilución en tubo; b) la técnica de la placa en agar; c) técnica del
coeficiente fenólico (utilizada específicamente para comparar el poder
desinfectante de un agente químico frente al fenol).
3. AIRE:
A) POR SEDIMENTACIÓN
Técnica de recolección:
• Dejar un número de cajas, de medio de cultivo (agar nutritivo, agar BHI o agar
sangre) abiertas, de acuerdo con el tamaño del espacio a estudiar por un período
entre 15 a 30 minutos; cerrar luego las cajas y enviarlas a incubar (35,36).
EQUIPO
Transporte:
B. MUESTREADOR DE AIRE:
Técnica de recolección
El aire muestreado se hace incidir sobre un medio de cultivo determinado, según
se pretenda valorar bacterias u hongos (30, 31, 32, 33, 34, 35, 36).
Equipo:
Transporte:
Técnica de recolección:
Equipo:
• Para leches: caldo verde brillante, Buffer fosfato sódico o agua peptonada 1%.
Transporte:
Técnica de recolección
Equipo:
• Escobillones estériles.
• Guantes.
• Tapabocas.
Transporte:
Se recomienda en los primeros 15 minutos de la recolección a temperatura
ambiente.
MATERIAL DE LABORATORIO.
Muestra de orina.
Muestra de sangre.
Muestra de heces.
Muestra de esputo.
Muestra de agua de garrafón.
Muestra de leche.
Muestra de
Microscopio.
6 laminillas.
6 cubreobjetos.
1 palillo.
6 hisopos.
1 mechero.
Material para desafectar mesas.
3 medios de cultivo sólidos.
Metanol.
Giemsa.
Solución salina.
Lugol.
Estufa bacteriológica (aunque se puede dejar las siembras a temperatura
ambiente).
DESARROLLO PRÁCTICO.
ÁREA MÉDICA:
Muestra de orina:
Muestra de sangre:
Muestra de esputo:
1. En un frasco estéril colocar 5ml de esputo, etiquetar los datos de identificación
del paciente.
2. Con un hisopo tomar una gota y extenderla en un porta objetos en forma de
frotis.
3. Dejar secar el frotis.
4. Poner metanol para fijar la muestra de sangre.
5. Se tiñe con Giemsa, por 30 segundos.
6. Se lava a chorro de agua con cuidado.
7. Se deja secar y colocar un cubreobjetos.
8. Observar al microscopio.
9. Limpiar y esterilizar el área de trabajo.
10. Describir lo observado.
ÁREA DE ALIMENTOS.
1. Con un hisopo estéril que está dentro de un tubo de ensayo, tomar una gota
de agua, meter el hispo para no contaminarlo con las corrientes de aire.
2. Sembrar en medio de cultivo nutritivo, en condiciones estériles, por estrías.
3. Etiquetar con la fecha y tipo de muestra.
4. Esperar el crecimiento de microbios.
5. Reportar si hay crecimiento después de tres a siete días.
1. Con un hisopo estéril que está dentro de un tubo de ensayo, tomar una gota
de leche, meter el hispo para no contaminarlo con las corrientes de aire.
2. Sembrar en medio de cultivo nutritivo, en condiciones estériles, por estrías.
3. Etiquetar con la fecha y tipo de muestra.
4. Esperar el crecimiento de microbios.
5. Reportar si hay crecimiento después de tres a siete días.
DIBUJOS O FOTOGRAFIAS.
CUESTIONARIO.
2.- En forma de lista, explica la forma de bioseguridad para trasportar una muestra
de tipo clínico y una de tipo ambiental.
3.- Investiga ¿qué datos debe llevar una muestra?, en una etiqueta, para su
análisis microbiológico.
4.- Explica el tiempo y temperatura de trasporte para las muestras:
Un cultivo de anaerobios.
5.- ¿Por qué un tubo que contiene una muestra liquida no se debe poner un tapón
de algodón?
7.- Mediante dibujos explica paso a paso para preparar un frotis de sangre en un
portaobjetos.
OBSERVACIONES.
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CONCLUSIONES.
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EVALUCIÓN.
Evaluó: _____________________________________________
EVALUACIÓN FINAL:
I. Portada
II. Índice
III. Introducción
V. Conclusión
VI. Bibliografía