UNIVERSIDAD DEL VALLE

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÌA
DOCENTE: Miryam Monsalve
Carolina López Castañeda

PRACTICA No 1

EL MICROSCOPIO USO Y FUNCIONES, TECNICAS PARA EL CORTE Y

TINCIÒN DE PLANTAS

1. INTRODUCCIÓN

Desde la prehistoria los seres humanos han estado interesandos en cómo se componen los
objetos y los seres vivos. En la antigüedad se conocía que las esferas de cristal llenas de agua
aumentaban el tamaño de las cosas. Pero solo hasta el siglo XVII se crean los primeros lentes
(su nombre se debe a que tienen forma de lenteja) que permiten observar el espacio gracias al
telescopio ideado por Galileo en 1609 y el microscopio inventado por Zacharias Janssen en
1590. (Lanfranconi 2001).

Este invento revolucionó el estudio de la biología en diferentes campos como la zoología y la

botánica. El ingles Nehemiah Grew pudo observar con mayor precisión los órganos de
reproducción de las plantas y descubrir los granos de polen. Posteriormente, el
perfeccionamiento del microscopio por Anton van Leeuwehoek permitió el desarrollo de la
biología celular y la microbiología. (Lanfranconi 2001). Actualmente, existen una gran
variedad y tipos de microscopios, así como técnicas de cortes y tinciones que permiten
distinguir los tejidos, las células, su organización espacial y relacionarla con sus funciones.

1.1PARTES DEL MICROSCOPIO Y SUS FUNCIONES

Figura 1: Partes del microscopio

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  SISTEMA ÓPTICO

Ocular: lente cambiable situada cerca del ojo del observador por donde se observa la muestra.
Amplía la imagen del objetivo.
Objetivo: juego de tres lentes situadas cerca de la preparación. Controla el aumento y calidad
de la imagen.
Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

 SISTEMA MECÁNICO

Soporte: mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
Platina: lugar donde se deposita la preparación, tiene dos piezas flexibles para sujetarla.
Cabezal: contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular. Revólver:
contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.
Tornillos de enfoque: macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue
el enfoque correcto.
Base: Estabilidad de microscopio

2. OBJETIVOS

 Identificar las partes que forman el microscopio y la función que desempeñan cada una
de ellas.
 Ejercitarse en el manejo del microscopio óptico
 Aprender y adquirir destreza en la preparación del material vegetal para su observación
histológica.
 Conocer las principales recomendaciones para la correcta realización de prácticas y
presentación de informes de laboratorio.

3. MATERIALES
 Microscopio
 Caja de Petry , agua, gotero
 Porta objeto o lamina portaobjeto (deben ser llevados por los estudiantes)
 Cubre objeto o laminilla (deben ser llevados por los estudiantes)
 Cuchillas de afeitar (deben ser llevados por los estudiantes)
 Agujas de disección
 Colorantes, Pincel pequeño
 Toallas de papel / servilletas
 Papel bond tamaño carta o papel reciclado, lápiz, borrador. (deben ser llevados por los
estudiantes)
 Trapo para limpiar el porta y cubre objetos (deben ser llevados por los estudiantes)

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4.0 PROCEDIMIENTO

4.1 TIPOS DE CORTE EN HISTOLOGÍA VEGETAL

De acuerdo con el interés específico de observación para hacer un corte a mano alzada o
mediante un micrótomo, debemos escoger entre los cortes superficial (a), transversal (b),
longitudinal tangencial (c) y longitudinal radial (d).

Figura 2: Tipos de cortes

4.2 PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR CORTES HISTOLOGICOS

1. Corte un trozo de corcho a lo largo y coloque el material vegetal (tallo u hoja) a

manera de emparedado. Para muestras gruesas haga una hendidura dentro del corcho.

2. Tome el soporte de corcho con la mano izquierda y la cuchilla con la mano derecha;
empareje la superficie de corte y haga cortes finos.

3. Deposite los cortes en la caja de Petri con agua, escoja con un pincel los más delgados
y colóquelos sobre un portaobjetos.

4. Adicione una gota de colorante, espere 1 minuto y coloque el cubreobjetos.

5. Retire el exceso de colorante con una toalla de papel o lave el corte con agua si es
necesario.

7. Observe al microscopio comenzando por el menor aumento (4X) o (10X) y

seleccione el mejor corte.

8. Agregue una gota de agua con un gotero por uno de los bordes del cubreobjetos en
caso de deshidratación para evitar que el corte se seque. Asegúrese de retirar del
microscopio el montaje para este procedimiento.

9. Realice observaciones y dibujos (Torres, A. M et al. 2007)

a b

Figura 3: Imágenes de a) como adicionar el colorante. b) Como colocar el cubreobjetos

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4.3. TIPOS DE PIGMENTOS:
Actualmente, existen muchos tipos de pigmentos y su uso permite identificar diferentes
estructuras en la tabla 1 se resumen, sus usos, coloraciones y solventes.

Colorante Solvente Uso Tinción obtenida

Azul de Alcian Alcohol Tejido vegetal Azul (Células vivas y pared celular
joven)
Eosina Agua o alcohol Citoplasma rosado
Paredes de celulosa rojo
Fluoroglucinol Alcohol Lignina rojo
Hemalum Agua Núcleo azul
Pardo Bismarck Alcohol Celulosa y núcleo pardo
Safranina Alcohol Lignina, cutina, suberina Rojo (Células muertas, pared
celular secundaria)
Sudan III Alcohol Lípidos, resinas, ceras rojo
Tionina Agua Celulosa morado
Lignina azul
Yodo Agua Almidón azul

Tabla 1: Colorantes usados en histología vegetal. Adaptado de Wallis (1955)

5. RESUMEN: MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO CON UNA

MUESTRA BOTÁNICA

1. Prepare el microscopio, primero el objetivo de menor aumento debe estar en la posición de

observación y baje la platina completamente.

2. Instale la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.

3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (el menor aumento) o colocar el de l0

aumentos (10x) si la preparación es de bacterias o según lo planteado en las guías.

4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo

macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre
el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente
con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se
perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir
la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación
y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se
descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una
preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión (100X).

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6. Empleo del objetivo de inmersión (100X):

Bajar totalmente la platina.

a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona
que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de
40X.
c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
d. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toque la gota
de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
f. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el objetivo de 40x por lo que el
riesgo de accidente es muy grande.
g. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a
usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar
otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
h. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo
de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de
la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
i. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

6. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, retire la preparación de la platina, limpie la platina, gire el

revólver y deje el objetivo de menor aumento alineado con el ocular, acerque al máximo
el objetivo a la platina, baje el sistema de iluminación, dejándolo en menor intensidad
de luz, limpie los objetivos con papel especial (de arroz), apáguelo, desconecte,
envuelva el enchufe y entregar al monitor.
2. Hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación,
asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresalgan del borde de la misma
y dejarlo cubierto con su funda.

3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de óptica.

5
 4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.

5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para óptica. Se pasa el papel por la lente en un solo
sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay
que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol o en su defecto avisar al
monitor del laboratorio. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican
estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,

platina, revólver y condensador).
7.
8. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a
través del ocular.
9. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún
líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un papel de óptica.
10. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la práctica.

7. ACTIVIDADES

7.1. Para esta actividad tendrá 3 tipos de tejidos:

a) Catafilo de cebolla cabezona (Allium cepa)

b) Corcho
c) Planta traída por el estudiante

Para cada uno de los materiales deberá realice un corte superficial, transversal y longitudinal
Observarlas al natural y con los tintes Azul de Alcian y Safranina. Para las muestras de Cebolla
y la planta antes de adicionar el colorante adicione lugol y observe. Las observaciones deberá
hacerlas en 10x o 40x. Por lo tanto, tendrá que realizar varios cortes. Dibuje lo observado en
cada una de las actividades y luego complete la tabla.

a) Cortes de Catafilo de cebolla

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 Natural Con lugol y Azul de Alcian Safranina
Aumento: Aumento: Aumento:
Tipo de corte Tipo de corte: Tipo de corte

Natural Con lugol y Azul de Alcian Safranina

Aumento: Aumento: Aumento:
Tipo de corte Tipo de corte: Tipo de corte

Natural Con lugol y Azul de Alcian Safranina

Aumento: Aumento: Aumento:
Tipo de corte Tipo de corte: Tipo de corte

b) Cortes de Corcho

7
Natural Con lugol y Azul de Alcian Safranina
Aumento: Aumento: Aumento:
Tipo de corte Tipo de corte: Tipo de corte

Natural Con lugol y Azul de Alcian Safranina

Aumento: Aumento: Aumento:
Tipo de corte Tipo de corte: Tipo de corte

Natural Con lugol y Azul de Alcian Safranina

Aumento: Aumento: Aumento:
Tipo de corte Tipo de corte: Tipo de corte

8
 c) Cortes de planta traída por el estudiante

Natural Con lugol y Azul de Alcian Safranina

Aumento: Aumento: Aumento:
Tipo de corte Tipo de corte: Tipo de corte

Natural Con lugol y Azul de Alcian Safranina

Aumento: Aumento: Aumento:
Tipo de corte Tipo de corte: Tipo de corte

Natural Con lugol y Azul de Alcian Safranina

Aumento: Aumento: Aumento:
Tipo de corte Tipo de corte: Tipo de corte

9
 7.2 En el siguiente cuadro resuma las observaciones vistas en cada uno de los cortes

Tipo de corte Allium cepa Corcho Muestra problema Colorante

7.3. Conteste las siguientes preguntas:

10
 a) Dentro de sus investigaciones requiere conocer la forma, tamaño de las células vivas
de un material vegetal. ¿Cuál sería los colorantes y corte más recomendable? ¿Porqué?

b) Si se requiere saber cuál son la composición de los tejidos de una hoja, ¿Cuál sería los
colorantes y corte más recomendable? ¿Porqué?

c) En un experimento de crecimiento se necesita saber en varios momentos en el tiempo

como es la configuración de los tejidos. Diseñe un protocolo para poder diferenciar el
tejido vivo y el tejido muerto

7.4. Complete las partes del microscopio y escriba su función:

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8. BIBLIOGRAFIA

Lanfranconi M. 2001. Inducción a la Biologia. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.

Universidad Nacional de la Plata.

Sandoval Estela et Al. 2005. Técnicas aplicadas al estudio de la anatomía vegetal. Cuadernos
del Instituto de Biología. #38. Universidad Nacional Autónoma de México.
Too: books.google.com.co/books’id=5aDo1s

http://gicuv.univalle.edu.co/documentos/documentos_laboratorios/lab_SI_hacen_ensayos/gui
as/GUIA_DE_MANEJO_PARA_MICROSCOPIOS.pdf

Video: https://www.youtube.com/watch?v0IqIUnEuyX1E

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