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Capítulo 2
Técnicas para el estudio
de la patología

CAPÍTULO 2
Para aprender la patología contemporánea de manera efi- iii) el estudio de la demografía y la epidemiología de las en-
ciente, resulta fundamental que el estudiante esté familiarizado fermedades y
con los diversos métodos de laboratorio, y con las técnicas y he- iv) la educación de los estudiantes y el personal de patología.
rramientas empleadas para el estudio de esta materia. Este ca- La reducción de la tasa de autopsia en todo el mundo durante
pítulo se dedicará a los aspectos básicos de los métodos dispo- los últimos años se debe a las siguientes razones:

Técnicas para el estudio de la patología

nibles en los laboratorios modernos de patología –desde la
microscopia básica–, hasta los métodos más recientes. 1. Diagnósticos más confiables gracias a los avances en las téc-
nicas de diagnóstico por la imagen, como la tomografía computa-
rizada (TC), la resonancia magnética (RM), la angiografía y otras.
LA PATOLOGÍA EN LA AUTOPSIA
2. Temor del médico frente a la responsabilidad legal por co-
El profesor William Boyd escribió con su estilo inimitable: meter un error.
“La patología se inició en la camilla de autopsias”. La impor- La estimulación de la realización de autopsias a cargo de
tancia de la autopsia para la patología se destaca en la inscrip- médicos y patólogos en hospitales de tercer nivel es fundamen-
ción en latín en una sala de autopsias, que significa: “Éste es el tal para mejorar la atención de los pacientes y para el avance de
sitio donde la muerte ayuda a la vida”. Como se afirmó en el ca- la ciencia médica.
pítulo anterior, el italiano G. B. Morgagni (1682-1771) y el fran-
cés T. H. A. Laennec (1781-1826) comenzaron a coleccionar in-
formes de casos hospitalarios y a relacionar las características
PATOLOGÍA QUIRÚRGICA
clínicas con las lesiones observadas en las autopsias, de manera
PERSPECTIVA HISTÓRICA
que establecieron la correlación clínico-patológica. Este método
aún se mantiene como la forma más importante de enseñanza El término “patología quirúrgica” se aplica en la actualidad
clínica en las instituciones médicas de todo el mundo. como sinónimo de histopatología, anatomía patológica, patolo-
El minucioso examen posmórtem le india al médico la pa- gía anatómica y patología celular. La patología quirúrgica es el
togenia de la enfermedad, le revela los efectos nocivos de la te- método clásico y comprobado para el diagnóstico tisular ba-
rapia administrada y establece las discrepancias entre los diag- sado en el examen macroscópico y microscópico de los tejidos.
nósticos previo y posterior a la muerte; aún no se ha hallado un Como se comentó, la patología quirúrgica inició el estudio
sustituto para este método. patológico de los tejidos obtenidos en las autopsias. Los prime-
Hay dos métodos tradicionales para realizar una autopsia, ros cirujanos sólo dependían de los hallazgos quirúrgicos o ma-
que se pueden emplear de forma indistinta: croscópicos y descartaban los tejidos resecados sin aprovechar
1. Extracción en bloque de los órganos abdominales y torá- la oportunidad de realizar un diagnóstico microscópico. No
cicos. obstante, con los avances tecnológicos realizados en la industria
2. Disección in situ de cada órgano por separado. de los colorantes en los primeros años del siglo XX, se desarro-
Cuando se cree que varios órganos podrían estar compro- lló la especialidad de la patología quirúrgica diagnóstica a tra-
metidos, se debe realizar una autopsia completa, pero si se sos- vés de la creación de la biopsia.
pecha una enfermedad de un órgano específico, una miniau- Al comienzo, esta tarea estaba a cargo de un miembro con
topsia o una autopsia limitada podrían ser suficientes. experiencia del equipo quirúrgico en los departamentos de ci-
El estudio realizado durante la autopsia proporciona cono- rugía, que recibía el nombre apropiado de “patólogo quirúr-
cimientos y habilidades tanto al médico como al patólogo. Los gico”. En la actualidad, el campo de la anatomía patológica qui-
objetivos principales de la autopsia son los siguientes. rúrgica se expandió tanto que se desarrollaron varias
subespecialidades, como nefropatología, neuropatología, he-
1. Evaluación de la calidad de la atención del paciente mediante:
matopatología, dermatopatología, citopatología ginecológica,
i) la confirmación de la causa de la muerte,
patología pediátrica y otras.
ii) el establecimiento del diagnóstico de certeza y
iii) el estudio de la respuesta terapéutica.
LA EXTENSIÓN Y LAS LIMITACIONES
2. Educación de todo el equipo comprometido en la atención del
DE LA PATOLOGÍA QUIRÚRGICA
paciente mediante:
i) el diagnóstico en la autopsia de trastornos que, a me- Los servicios de patología quirúrgica de cualquier hospital
nudo, pasan inadvertidos en el examen clínico, como por grande dependen, sobre todo, del material proporcionado por
ejemplo neumonía, embolia pulmonar, pancreatitis los cirujanos y los médicos familiarizados con la extensión y las
aguda, carcinoma de próstata; limitaciones de la especialidad. En consecuencia, resulta funda-
ii) el descubrimiento de nuevas enfermedades en la autop- mental que el médico se pueda comunicar con libertad con el pa-
sia, como por ejemplo síndrome de Reye, legionelosis tólogo, tanto de manera formal como informal, a través de for-
(enfermedad de los legionarios), síndrome de dificultad mularios de patología quirúrgica, de forma verbal y en diferentes
respiratoria aguda grave; foros como reuniones y conferencias interdepartamentales.

Patología + Resumen y preguntas de autoevaluación ©2012. Editorial Médica Panamericana

 10 LOS PROTOCOLOS DE LA PATOLOGÍA QUIRÚRGICA
FORMULARIOS. La primera tarea y la más importante del
médico que solicita un diagnóstico tisular consiste en enviar un
formulario completo con los datos de identificación del pa-
ciente, que deben coincidir con los del recipiente con la pieza.
SECCIÓN I

El formulario debe contener toda la información relevante so-

bre el caso y la enfermedad (anamnesis, hallazgos en el examen
físico y en la cirugía, resultados de otras pruebas bioquímicas,
hematológicas y radiológicas relevantes y diagnósticos clínicos
y diferenciales) y referencias a exámenes citológicos o biopsias
previas en los servicios de patología.
RECEPCIÓN DEL TEJIDO. El personal del laboratorio que re-
cibe la pieza de la biopsia siempre debe controlar la identifica-
Patología general y técnicas básicas

ción del paciente en el formulario y en el recipiente con la

muestra. Para el procesamiento habitual de los tejidos con la
técnica de inclusión en parafina, el tejido se debe introducir en
una solución fijadora (con mayor frecuencia solución fisiológica
y formol al 10% o formalina amortiguada al 10%) o se puede re-
cibir en fresco sin fijar. Para el corte por congelación, el tejido
siempre se transporta en fresco sin fijación. La fijación con mi-
croondas también se puede usar en el laboratorio para la fija- Figura 2.1 Procesador automático de tejido para el procesamiento
mediante la técnica de inclusión en parafina.
ción rápida y el procesamiento de piezas quirúrgicas. (Thermo Shandon, Reino Unido). Cortesía: Towa Optics (India) Pvt.
EXAMEN MACROSCÓPICO. El examen macroscópico de la Ltd., Nueva Delhi.
pieza recibida en el laboratorio es el paso siguiente más impor-
tante. El corte tisular macroscópico apropiado, la descripción Para evitar la contaminación del laboratorio con formalina
macroscópica y la selección de una muestra representativa de y alcoholes, también se dispone de procesadores tisulares por
tejido de una pieza más grande son partes esenciales del exa- vacío con sistema cerrado.
men anatomopatológico del tejido remitido. Un error en este La fijación del tejido se realiza en cera derretida, en bloques
paso no puede resolverse en un estadio posterior, ya que podría que se preparan con molde metálicos L (de Leuckhart). En la ac-
requerir la separación de fragmentos de tejido en fresco en caso tualidad, también hay moldes plásticos de diferentes colores
de que la pieza sea bastante grande y de que se pueda retrasar para constituir bloques con las diversas biopsias. Todo el pro-
el transporte; o, si la biopsia es pequeña y se pierde en el pro- ceso de fijar los tejidos y formar bloques se puede controlar a
cesamiento, será necesario realizar otra vez todo el procedi- través de la temperatura; además, hay centros dedicados a la fi-
miento quirúrgico para obtener la biopsia.
jación de los tejidos (Fig. 2.2). Luego, los bloques se cortan des-
Los laboratorios modernos para la evaluación macroscópica
pués de su sección con micrótomo, con mayor frecuencia con
disponen de un sistema de grabación de la descripción macros-
un micrótomo rotatorio, que emplea bisturí fijo u hojas de bis-
cópica a través de un dictáfono sin la necesidad de un asistente
turí desechables (Fig. 2.3).
que escriba el informe. Algunos laboratorios tienen un proto-
El crióstato o el corte por congelación eliminan todos los pa-
colo para la obtención de fotografías de la pieza macroscópica
sos de procesamiento tisular y de inclusión en parafina. En
y radiografías de la muestra antes y después del corte del tejido
cambio, el tejido se congela rápidamente con hielo a alrededor
para su documentación.
de –25 ºC –que actúa como medio de fijación–, y luego se sec-
Los tejidos calcificados y el hueso se deben someter a des-
ciona (Fig. 2.4). A continuación, los cortes quedan listos para su
calcificación para eliminar los minerales y ablandar el tejido
tinción. El corte por congelación es un procedimiento de diag-
mediante su tratamiento con agentes descalcificantes, como áci-
dos y quelantes (con mayor frecuencia, ácido nítrico acuoso).
Resulta fundamental que todo el personal de la sala de exa-
men macroscópico mantenga precauciones estrictas para la ma-
nipulación de los tejidos infectados con tuberculosis, hepatitis,
HIV y otros virus.
EL LABORATORIO DE HISTOPATOLOGÍA. Los bloques de
tejido con su número de la sala de macroscopia se someten a los
procedimientos del laboratorio. La mayoría de los departamen-
tos de histopatología usa procesadores tisulares automáticos
(Fig. 2.1) que cuentan con doce espacios separados para com-
pletar el ciclo durante la noche en aproximadamente dieciocho
horas. Se describen a continuación:
formalina al 10% para su fijación,
grados ascendentes de alcohol (10, 95% hasta 100%) para
su deshidratación durante cinco horas en 6 o 7 recipientes,
xileno, tolueno y cloroformo para su limpieza en tres horas
en dos recipientes e Figura 2.2 Centro de inclusión tisular para la técnica de parafina
(Histocentre).
impregnación en parafina durante seis horas en dos baños (Thermo Shandon, Reino Unido). Cortesía: Towa Optics (India) Pvt.
de cera con termostato. Ltd., Nueva Delhi.

Patología + Resumen y preguntas de autoevaluación ©2012. Editorial Médica Panamericana

 Los cortes incluidos en parafina se tiñen de forma sistemá- 11
tica con hematoxilina y eosina (H & E). El material sometido a
corte por congelación se puede teñir con H & E rápida o con
azul de toluidina de manera habitual. Se pueden emplear tin-

CAPÍTULO 2
ciones especiales con cualquiera de los dos métodos de acuerdo
con la necesidad. Los cortes se colocan en un portaobjetos y se
envían al laboratorio para su estudio microscópico.
EL INFORME ANATOMOPATOLÓGICO. La última tarea, y
la más importante del laboratorio de patología, es la elabora-
ción de un informe rápido, preciso, breve y con relevancia pro-
nóstica. El informe ideal debe contar con cinco elementos:
i) Datos del paciente (disponibles para el patólogo, como el
nombre del paciente).

Técnicas para el estudio de la patología

ii) Descripción macroscópica precisa.
iii) Hallazgos microscópicos.
iv) Diagnóstico morfológico, que debe incluir el órgano con fi-
nes de clasificación con los códigos de SNOMED (Scientific No-
menclature in Medicine, Nomenclatura científica en medicina).
v) Otros comentarios en algunos casos.

Figura 2.3 Micrótomo rotatorio para la sección de la pieza con la

EL CONTROL DE CALIDAD. El control de la calidad de la in-
técnica de inclusión en parafina. formación proporcionada por el laboratorio de histopatología
(Thermo Shandon, Reino Unido). Cortesía: Towa Optics (India) Pvt. es importante para detectar los resultados inadecuados, los pro-
Ltd., Nueva Delhi. cedimientos de actualización y los avances en los informes de-
finitivos. Es posible implementar un control de calidad interno
nóstico intraoperatorio rápido que se puede llevar a cabo en los mediante discusiones mutuas en los casos controvertidos y la
tejidos antes de avanzar a una cirugía radical mayor. Asimismo, autoevaluación de la calidad de los cortes en el ámbito del la-
también se usa para identificar algunos componentes que, en boratorio. En la actualidad, también se cuenta con programas
condiciones normales, se pierden durante el procesamiento en de control de calidad externo de todo el laboratorio de histopa-
alcohol o xileno, como por ejemplo los lípidos, las enzimas y tología.
otros. Este procedimiento se puede realizar en el quirófano
EL HISTOPATÓLOGO Y LOS ASPECTOS LEGALES. En este
cerca de la camilla.
momento, el problema de las demandas por negligencia y mala
práctica en histopatología se equipara con el que acecha a otras
disciplinas clínicas. En las biopsias y en los casos controverti-
dos, se pueden solicitar interconsultas internas y externas. Asi-
mismo, la tarea responsable nunca se debe delegar, salvo que el
superior sienta confianza de que su delegado tiene la suficiente
experiencia y capacidad.

TINCIONES ESPECIALES
(HISTOQUÍMICA)
Con la tinción de H & E, la hematoxilina tiñe los núcleos y la
eosina se usa como contratinción para el citoplasma y varios ma-
teriales extracelulares. La tinción con H & E se emplea de forma
habitual para diagnosticar mediante microscopia la gran mayo-
ría de las piezas quirúrgicas. Sin embargo, en algunas circuns-
tancias “especiales”, cuando el patólogo desea demostrar sus-
tancias o componentes específicos de las células para confirmar
constituyentes etiológicos, histogénicos o patogénicos, se pueden
emplear tinciones especiales –también denominadas “tinciones
histoquímicas”–. La tinción depende de las características físicas
o químicas, o de la solubilidad diferencial entre la tinción y los te-
jidos. Los principios de algunos de los procedimientos de tinción
se conocen de forma amplia, pero otros aún son desconocidos.
Algunas de las sustancias para las cuales hay tinciones es-
peciales que se emplean con frecuencia en el laboratorio de pa-
tología quirúrgica son el amiloide, los hidratos de carbono, los
Figura 2.4 Crióstato para la realización de cortes mediante la téc-
lípidos, las proteínas, los ácidos nucleicos, el tejido conectivo,
nica de congelación (Cryotones).
(Thermo Shandon, Reino Unido). Cortesía: Towa Optics (India) Pvt. los microorganismos, los tejidos nerviosos, los pigmentos y los
Ltd., Nueva Delhi. minerales; estas tinciones se enumeran en el Cuadro 2.1.

Patología + Resumen y preguntas de autoevaluación ©2012. Editorial Médica Panamericana

 12
‹
‹ CUADRO 2.1: Tinciones especiales (histoquímicas) usadas con mayor frecuencia en patología quirúrgica (en orden alfabético de los componentes)
Tinción Componente/tejido Colorantes Interpretación

A. AMILOIDE
SECCIÓN I

1. Rojo Congo con luz Amiloide Rojo Congo Birrefringencia verde: amiloide
polarizada
2. Azul de toluidina Amiloide Azul de toluidina Azul ortocromático: amiloide

B. HIDRATOS DE CARBONO

3. Ácido periódico de Schiff Hidratos de carbono (en Ácido periódico, reactivo de Schiff Glucógeno y otros hidratos de
(PAS) particular, glucógeno), todas las (fucsina básica) carbono: magenta
mucinas Núcleos: azul
Patología general y técnicas básicas

4. Mucicarmín/Carmín de Best Mucina ácida Carmín Mucina: rojo

Núcleos: azul

5. Azul alcián Mucina ácida Azul alcián (a pH 2,5) Mucina ácida: azul
Núcleos: rojo

6. Azul alcián-PAS combinados Mucina neutra Azul alcián Mucina ácida: azul
Mucina neutra: magenta
Núcleos: azul pálido

C. TEJIDOS CONECTIVOS

7. de Van Gieson Colágeno extracelular Ácido pícrico, fucsina ácida, Núcleos: azul/negro
celeste azul hemalum Colágeno: rojo
Otros tejidos: amarillo

8. Tricrómico de Masson Colágeno extracelular Fucsina ácida, ácido Núcleos: azul/negro

fosfomolibdénico, metil azul, Citoplasma: músculo,
celeste azul hemalum células rojas: rojo
Colágeno: azul

9. Ácido fosfotúngstico- Músculo y filamentos gliales Hematoxilina, ácido fosfotúngstico, Estrías musculares, fibras
hematoxilina (PTAH) permanganato, ácido oxálico neurogliales, fibrina: azul oscuro
Núcleos: azul
Citoplasma: rosa pálido

10. Elástico de Verhoeff Fibras elásticas Hematoxilina, cloruro férrico, Fibras elásticas: negro
yodo, yoduro de potasio Otros tejidos: contratinción

11. de Gordon y de Sweet Fibras reticulares Nitrato de plata Fibras reticulares: negro
Núcleos: negro o contratinción

D. LÍPIDOS

12. Aceite rojo O Lípidos (crióstato sin fijar) Aceite rojo O Aceites minerales: rojo
Lípidos no saturados, fosfolípidos: rosa

13. Sudán negro B Lípidos (crióstato sin fijar) Sudán negro B Lípidos no saturados: azul negro

14. Tetróxido de osmio Lípidos (crióstato sin fijar) Tetróxido de osmio Lípidos no saturados: marrón negro
Lípidos saturados: no teñidos

E. MICROORGANISMOS

15. de Gram Bacterias (cocos, bacilos) Cristal violeta, yodo Lugol, Grampositivas: queratina, fibrina: azul
rojo neutro Gramnegativas: rojo

16. de Ziehl-Neelsen Bacilos tuberculosos Carbol fucsina, azul de metileno Bacilos tuberculosos,
(diferencia en ácido-alcohol) eje piloso, actinomices: rojo
Fondo: azul pálido

17. Fite-Wade Bacilos de la lepra Carbol fucsina, azul de metileno Bacilos de la lepra: rojo
(decolorar en ácido sulfúrico Fondo: azul
al 10%)
18. Metenamina de plata Hongos Tetraborato de sodio, nitrato de Hongos, Pneumocystis: negro
de Grocott plata, metenamina Células rojas: amarillo
Fondo: verde pálido

19. Giemsa Parásitos Polvo de Giemsa Protozoos: azul oscuro

Núcleos: azul

20. Orceína de Shikata Antígenos de superficie de la Permanganato ácido, orceína, HBsAg positivo: marrón a negro
hepatitis B (HBsAg) tetrazina Fondo: amarillo

Continúa

Patología + Resumen y preguntas de autoevaluación ©2012. Editorial Médica Panamericana

 13
‹
‹ CUADRO 2.1: (Continuación ) Tinciones especiales (histoquímicas) usadas con mayor frecuencia en patología quirúrgica (en orden alfabético de
los componentes)

Tinción Componente/tejido Colorantes Interpretación

CAPÍTULO 2
F. TEJIDOS NERVIOSOS
21. Azul rápido de Luxol Mielina Azul rápido de Luxol, violeta de Mielina: azul/verde
cresilo Células: violeta/rosa
22. Plata de Bielschowsky Axones Nitrato de plata Axones y neurofibrillas: negro
G. PIGMENTOS Y MINERALES
23. Azul de Prusia de Perl Hemosiderina, hierro Ferrocianuro de potasio Hierro férrico: azul
Núcleos: rojo
24. Masson-Fontana Melanina, células argentafines Nitrato de plata Melanina, argentafín, cromafín,
lipofucsina: negro

Técnicas para el estudio de la patología

Núcleos: rojo
25. Rojo alizarin S Calcio Rojo alizarin S Depósitos de calcio: rojo naranja
26. von Kossa Hueso mineralizado Nitrato de plata, safranina O Hueso mineralizado: negro
Osteoide: rojo
27. Ácido rubeánico Cobre Ácido rubeánico Cobre: negro verdoso
Núcleos: rojo pálido
28. Extracción de pigmento Eliminación del pigmento Ácido pícrico alcohólico Pigmento formalina/pigmento de
formalina y del pigmento de la malaria: eliminados
malaria
29. de Grimelius Células argirófilas Nitrato de plata Gránulos argirófilos: marrón-negro
H. PROTEÍNAS Y ÁCIDOS NUCLEICOS
30. Reacción de Feulgen DNA Metabisulfito de potasio DNA: rojo púrpura
Citoplasma: verde
31. Metil verde pironina DNA, RNA
Verde de metilo, pironina Y DNA: verde-azul
RNA: rojo

MICROSCOPIA ÓPTICA. El tipo de microscopia usado con

HISTOQUÍMICA PARA LAS ENZIMAS mayor frecuencia en los laboratorios clínicos se denomina mi-
croscopio óptico. En general, hay dos tipos de microscopios óp-
Las técnicas histoquímicas para las enzimas requieren te-
ticos:
jido no fijado para poder cortarlo con el crióstato, y no se pue-
den aplicar en piezas fijadas en parafina o en formalina dado Microscopio simple. Es una lupa que tiene una potencia mag-
que las enzimas se dañan con rapidez. En la actualidad, la his- nificadora de entre 2× y 200×.
toquímica para las enzimas tiene una utilidad diagnóstica limi-
Microscopio compuesto. Posee una batería de lentes dispues-
tada y no es tan popular; en parte, debido al requerimiento de
tos en un instrumento complejo. Un tipo de lente permanece
tejidos frescos y a la técnica compleja y en parte, a causa de la
cerca del objeto (objetivo) y otro tipo se ubica cerca del ojo del
escasez relativa de especificidad de la reacción en muchos ca-
observador (ocular). El ocular y el objetivo tienen distintas
sos. Esto determinó que las técnicas histoquímicas se reempla-
magnificaciones. El microscopio compuesto puede ser monocu-
cen en la mayoría de los casos por procedimientos inmunohis-
lar, con un solo ocular, o binocular, con dos oculares (Fig. 2.5).
toquímicos y técnicas de patología molecular.
Los microscopios multicabezales se usan en el ámbito de la ense-
En este momento algunas de las aplicaciones más frecuen-
ñanza y con fines demostrativos.
tes de la histoquímica para las enzimas en patología diagnós-
tica son para la identificación de enzimas relacionadas con el VARIEDADES DE MICROSCOPIOS ÓPTICOS. Además de
músculo (ATPasas) en las miopatías; acetilcolinesterasa, para el los microscopios ópticos, a continuación se describen otras mo-
diagnóstico de la enfermedad de Hirschsprung; cloroacetato es- dificaciones especiales para el laboratorio clínico:
terasa, para detectar células mieloides y mastocitos; reacción
DOPA, para la actividad de la tirosinasa en los melanocitos; Iluminación de campo oscuro. Este método se usa para el exa-
deshidrogenasa endógena (que requiere nitroazul de tetrazolio men de microorganismos vivos no teñidos, como por ejemplo
o NBT), para establecer la viabilidad del músculo cardíaco, y las Treponema pallidum. Los microorganismos se iluminan con un
fosfatasas ácida y alcalina. haz de luz oblicuo que no atraviesa el microorganismo. El con-
densador se oscurece en el centro y la luz pasa a través de su
periferia para iluminar el microorganismo vivo sobre un por-
MICROSCOPIA BÁSICA taobjetos.
El microscopio es la herramienta básica para el patólogo, de Microscopia de luz polarizada. Este método se usa para mos-
la misma manera que el estetoscopio lo es para el médico clí- trar birrefringencia, p. ej., del amiloide, cuerpos extraños, pelos,
nico y el espéculo para el ginecólogo. Este instrumento permite etcétera. Se emite una luz polarizada plana. Tras atravesar un
agrandar las imágenes de objetos diminutos. disco, los haces de luz vibran en un solo plano en ángulo recto

Patología + Resumen y preguntas de autoevaluación ©2012. Editorial Médica Panamericana

 14 Filtros. Hay varios filtros que se usan entre la fuente de luz y el
objetivo: en primer lugar, el filtro que absorbe el calor; en segundo
lugar, el filtro que detiene la luz roja y en tercer lugar, el filtro ex-
citador que sólo permite el pasaje de la luz de la longitud de
onda deseada. Al atravesar la pieza, se reúne tanto la luz exci-
SECCIÓN I

tadora como la que emite fluorescencia. La luz excitadora se eli-

mina debido al pasaje por otro filtro llamado filtro barrera, ubi-
cado entre el objetivo y el observador, que protege el ojo del
observador para que sólo la luz fluorescente lo alcance.
Condensador. El condensador de campo oscuro se usa en el mi-
croscopio de fluorescencia para que la luz directa no caiga en el
objeto y, en cambio, se cree un fondo de contraste oscuro para
la fluorescencia.
Patología general y técnicas básicas

TÉCNICAS. Hay dos tipos de técnicas de fluorescencia, ambas

realizadas en crióstatos sobre tejido no fijado, que se denomi-
nan directa e indirecta.
En la técnica directa –presentada por Coons (1941), quien re-
alizó el estudio original sobre inmunofluorescencia–, se dirige
un anticuerpo conjugado con un fluorocromo contra un antí-
geno, y luego, el tejido se examina bajo microscopia óptica.
En la técnica indirecta, también denominada “técnica sánd-
wich”, se genera una interacción entre un antígeno tisular y un
anticuerpo específico, seguida por el lavado y luego por el agre-
Figura 2.5 Microscopio óptico binocular (Modelo E 400, Nikon, Ja- gado de un fluorocromo para completar la reacción. La técnica
pón). Cortesía: Towa Optics (India) Pvt. Ltd., Nueva Delhi. de inmunofluorescencia indirecta se aplica para detectar auto-
anticuerpos en el suero del paciente.
APLICACIONES. Los métodos de inmunofluorescencia se
entre sí. Se colocan dos discos o prismas en la trayectoria de la
aplican para realizar las siguientes tareas:
luz: uno debajo del objeto denominado polarizador y otro en el
tubo denominado analizador. El disco inferior se rota para que 1. para la detección de autoanticuerpos en el suero, como los an-
la luz quede polarizada en un plano. ticuerpos contra el músculo liso (SMA, por su sigla en inglés),
anticuerpos antinucleares (ANA, por su sigla en inglés), anti-
cuerpos antimitocondriales (AMA, por su sigla en inglés), an-
INMUNOFLUORESCENCIA ticuerpo microsómico tiroideo, etcétera;

La técnica de inmunofluorescencia se emplea para localizar 2. en las enfermedades renales, para detectar depósitos de inmu-
moléculas antigénicas sobre las células en el examen microscó- noglobulinas, complemento y fibrina en varios tipos de enfer-
pico. Este método se lleva a cabo mediante anticuerpos especí- medades glomerulares mediante el corte por congelación, como
ficos que actúan contra la molécula antigénica para formar el se describirá en el Capítulo 22;
complejo antígeno-anticuerpo en el sitio antigénico específico, 3. en enfermedades de la piel, para detectar depósitos de inmu-
que se visualiza gracias al empleo de un fluorocromo, el cual noglobulina mediante el corte por congelación; en particular, en
tiene la propiedad de absorber la radiación en forma de luz ul- la unión dermoepidérmica y en la porción superior de la der-
travioleta, de manera que quede dentro del espectro de la luz mis, por ejemplo en la dermatosis ampollar (Capítulo 26);
visible en el examen microscópico. 4. para el estudio de los marcadores de superficie de la célula mo-
El método de inmunofluorescencia posee los siguientes nonuclear con anticuerpos monoclonales;
componentes esenciales:
5. y para el diagnóstico específico de enfermedades infecciosas,
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA. Se basa en el princi- p. ej., en la hepatitis viral.
pio de que la radiación que emite la luz ultravioleta de menor
longitud de onda –360 nm– o la luz azul –longitud de onda 400
nm– causa fluorescencia en ciertas sustancias y luego vuelve a MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
emitir la luz con mayor longitud de onda. La microscopia electrónica, desarrollada en la década de
Algunas sustancias tienen fluorescencia natural, que se de- 1930 en Alemania, experimentó modificaciones debido al agre-
nomina fluorescencia primaria o autofluorescencia; aunque se re- gado de nuevos conocimientos para la comprensión de la es-
quiere luz ultravioleta para observarlas mejor, como por ejem- tructura y la función de las células normales y enfermas en el
plo la vitamina A, la porfirina y la clorofila. nivel de los orgánulos celulares. Sin embargo, en etapas más re-
La fluorescencia secundaria se emplea con mayor frecuencia cientes, la difusión de la inmunohistoquímica diagnóstica en la
y es la producción de fluorescencia a través del agregado de co- patología quirúrgica limitó la aplicación de la microscopia elec-
lorantes o compuestos químicos denominados “fluorocromos”. trónica a las siguientes áreas de la patología diagnóstica:
Fuente de luz. El vapor de mercurio y las lámparas de gas xe- 1. en las enfermedades renales, junto con la microscopia óp-
nón se usan como fuente de luz para la microscopia de fluores- tica y la inmunofluorescencia (Capítulo 22);
cencia. 2. en la ultraestructura de los tumores de histogénesis incierta;

Patología + Resumen y preguntas de autoevaluación ©2012. Editorial Médica Panamericana

3. para el estudio subcelular de los macrófagos en enfermeda- emplear de forma habitual bloques de tejido procesados inclui- 15
des por depósito de sustancias; dos en parafina para realizar la inmunohistoquímica, lo que in-
4. y con fines de experimentación. fluye de forma significativa sobre el desarrollo de la patología
quirúrgica diagnóstica. En el pasado, la patología quirúrgica
TIPOS DE MICROSCOPIA ELECTRÓNICA

CAPÍTULO 2
diagnóstica se solía considerar una ciencia subjetiva con varia-
Hay dos tipos principales de microscopia electrónica: ciones entre los observadores –en particular, en lesiones fronte-
1. Microscopia electrónica de transmisión. Es la herramienta rizas y en lesiones de origen indeterminado– pero, el uso de la
de elección para el estudio de la ultraestructura de la célula y inmunohistoquímica agregó objetividad, especificidad y reproduci-
sus orgánulos. Este estudio consiste en el pasaje de un haz de bilidad al diagnóstico patológico quirúrgico.
electrones a través de una sección ultradelgada de tejido. La
Generalidades de la inmunohistoquímica
magnificación obtenida oscila entre 2.000 y 10.000 veces.
2. Microscopia electrónica de barrido. Evalúa la estructura La inmunohistoquímica surgió de los métodos de inmuno-
de la superficie celular y produce una imagen tridimensional. fluorescencia, en los cuales los anticuerpos marcados con com-

Técnicas para el estudio de la patología

Por ejemplo, para observar los podocitos en el glomérulo renal. puestos fluorescentes podían localizar un antígeno específico
en el corte con crióstato.
Aspectos técnicos La necesidad de microscopia de fluorescencia se evitó gra-
A continuación se mencionan algunas de las consideraciones cias al desarrollo subsiguiente de la técnica de marcado enzimático
técnicas principales relacionadas con la microscopia electrónica: con peroxidasa de rábano con algún sistema colorigénico, en lugar
de un fluorocromo; de manera que el corte por congelación con
1. Fijación. Siempre que se planee evaluar un tejido con micros-
un anticuerpo marcado se puede observar con microscopia óp-
copia electrónica, se debe fijar una lámina delgada y pequeña de
tica. Los cromógenos empleados con mayor frecuencia en la reac-
tejido de no más de 1 mm de espesor en glutaraldehído amorti-
ción inmunohistoquímica son el tetracloruro de diaminobenci-
guado al 2% o al 4% o en una mezcla de formalina y glutaralde-
dina (DAB, por su sigla en inglés) y el aminoetil carbazol (AEC,
hído. Después de la fijación, el tejido se fija en una solución amor-
por su sigla en inglés), ambos para producir un producto final
tiguada de tetróxido de osmio para aumentar el contraste.
estable de color marrón oscuro.
2. Inclusión. El tejido se incluye en resina, en una grilla. Luego, se desarrolló la técnica de inmunoperoxidasa, que em-
3. Cortes semidelgados. En primer lugar, se realizan cortes se- plea el método del anticuerpo marcado en cortes de parafina fijados
midelgados de un espesor de 1 µm y se tiñen con azul de me- con formalina y que, en la actualidad, se emplea con frecuencia.
tileno o azul de toluidina. A veces, también se pueden cortar En la actualidad, los dos procedimientos empleados con
bloques de parafina para su estudio con microscopia electró- mayor frecuencia en la inmunohistoquímica son los siguientes.
nica; pero, en general, no son bastante satisfactorios debido a la i) Método de peroxidasa-antiperoxidasa (PAP, por su sigla en in-
existencia de numerosos artefactos. Los cortes semidelgados glés), que consiste en la generación del reactivo PAP en inmu-
guían el diagnóstico diferencial y la selección del área que se nocomplejos estables para su reacción con el anticuerpo prima-
debe analizar en los cortes ultradelgados. rio mediante un anticuerpo intermedio.
4. Cortes ultradelgados. Para el examen ultraestructural, los ii) Técnica inmunoenzimática con el conjugado avidina-biotina
cortes ultradelgados se realizan con un bisturí de diamante. (ABC, por su sigla en inglés), que consiste en el empleo de un
Con el fin de aumentar la densidad electrónica, los cortes del- anticuerpo secundario biotinilado para combinar el anticuerpo
gados se pueden teñir a través de la inmersión de la grilla en primario con un complejo grande preformado de avidina, bio-
una solución de citrato de plomo y de acetato de urinilo. tina y peroxidasa.
La selección del anticuerpo o los anticuerpos para la reali-
INMUNOHISTOQUÍMICA zación de tinciones inmunohistoquímicas se realiza tras el diag-
nóstico diferencial en cortes con H & E. En general, se prefiere
La inmunohistoquímica es la aplicación de técnicas inmu- un panel de anticuerpos sobre una sola prueba para evitar errores.
nológicas a la patología celular. La técnica se emplea para de-
Los anticuerpos utilizados en inmunohistoquímica se pro-
tectar el estado y la localización de un antígeno específico en las
ducen con técnicas monoclonales (hibridoma) y policlonales. La
células (membrana, citoplasma o núcleo) mediante el empleo
primera se emplea, sobre todo, para producir anticuerpos con
de anticuerpos específicos, que luego se observan con un cro-
afinidad elevada por un antígeno. En la actualidad, se dispone
mógeno de color marrón. De esta manera, se contribuye a la de-
de un gran número de anticuerpos contra los antígenos celula-
terminación del linaje celular específico o se puede confirmar
res para su empleo en la inmunohistoquímica, y el listado
una infección. La inmunohistoquímica revolucionó la patología
tiende a aumentar de forma continua.
diagnóstica –conocida como la “revolución marrón” – y, en mu-
chos laboratorios sofisticados, esta técnica reemplazó a la histo- Las tinciones inmunohistoquímicas siempre se deben aso-
química como procedimiento auxiliar. Además de los princi- ciar con los controles positivos apropiados; es decir, es un tejido
pios subyacentes a la inmunohistoquímica y a la histoquímica, que expresa un antígeno específico y que actúa como control, el
estas dos técnicas se diferencian en el resultado final: la histo- cual puede ser un control interno o de otro tejido. La técnica del
química produce diversos colores para los distintos componen- bloque tisular “en salchicha”, que se considera muy económica,
tes teñidos de acuerdo con la sustancia teñida, mientras que la combina la tinción de múltiples tejidos en un solo portaobjetos
inmunohistoquímica produce solamente en el sitio apropiado con un único procedimiento de control.
de la célula su característico color marrón como resultado final. Para la interpretación de los resultados de las tinciones in-
En la última década, se realizaron avances significativos en munohistoquímicas, es importante recordar que diferentes antíge-
las técnicas inmunohistoquímicas. En la actualidad, es posible nos se localizan en distintos sitios de la célula (membrana, citoplasma,

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 16 núcleo) y, en consecuencia, la tinción positiva se observa y se in- comportamiento biológico del tumor. A modo de ejemplo, se
terpreta en esos sitios, como por ejemplo, tinción membranosa pueden mencionar los protooncogenes, como la expresión ex-
para el antígeno común leucocitario, tinción nuclear para los re- cesiva de HER-2/neu (carcinoma de mama), genes supresores
ceptores de estrógeno y progesterona (RE-RP), tinción citoplas- tumorales o antioncogenes (p. ej., gen Rb, p53), receptores de
mática para la actina del músculo liso, entre otras. factores de crecimiento (p. ej., receptor de factor de crecimiento
SECCIÓN I

Las tinciones inmunohistoquímicas no se pueden aplicar para epidérmico o EGFR) y marcadores de la proliferación de las cé-
distinguir las lesiones neoplásicas de las no neoplásicas o los tu- lulas tumorales (p. ej., ki67, antígeno de proliferación nuclear
mores benignos de los malignos. Estas distinciones se deben llevar celular PCNA). El análisis de los tumores mediante estos méto-
a cabo mediante métodos tradicionales de patología quirúrgica. dos representa un avance significativo en el manejo con res-
pecto a los métodos convencionales para definir el pronóstico
Aplicaciones principales de la inmunohistoquímica basados en la estadificación clínica y el grado histológico.
En la actualidad, las tinciones inmunohistoquímicas se em- 3. Predicción de la respuesta al tratamiento. La inmunohisto-
plean para los siguientes objetivos, que se enumeran en el or- química se emplea de forma amplia para predecir la respuesta
terapéutica en dos tumores importantes: carcinoma de mama y
Patología general y técnicas básicas

den de utilidad diagnóstica:

1. Tumores de histogénesis incierta. La inmunohistoquímica de próstata. El crecimiento de ambos tumores está regulado por
generó una revolución en el diagnóstico de los tumores de origen hormonas: estrógenos y andrógenos, respectivamente. Los re-
incierto, tanto primarios como metastásicos de un tumor primario ceptores específicos para estas hormonas que regulan el creci-
desconocido. Se elige un conjunto de anticuerpos para resolver es- miento se localizan sobre las células tumorales respectivas. Los
tos problemas con el diagnóstico; la selección de los anticuerpos tumores con alta positividad del receptor responden de manera
se basa en la historia clínica, las características morfológicas y los favorable a la eliminación de la fuente endógena de estas hor-
monas –ooforectomía en el cáncer de mama positivo para es-
resultados de otras investigaciones importantes. Son de gran uti-
trógeno y orquiectomía en el carcinoma de próstata positivo
lidad los colorantes de inmunohistoquímica para teñir los fila-
para los andrógenos–. También se administra tratamiento hor-
mentos intermedios expresados por las células tumorales (quera-
monal para reducir sus niveles: estrogenoterapia, para el cáncer
tina, vimentina, desmina, neurofilamentos y proteínas ácidas
de próstata, y androgenoterapia, para el cáncer de mama. Los
fibrilares gliales), además de los enumerados en el Cuadro 2.2.
resultados de los receptores de estrógenos y de progesterona en
2. Marcadores de pronóstico para el cáncer. La segunda apli- el cáncer de mama presentan una correlación pronóstica signi-
cación de la inmunohistoquímica en importancia es la predic- ficativa, aunque la utilidad pronóstica de los niveles de recep-
ción del pronóstico de los tumores a través de la identificación tores de andrógenos en el cáncer de próstata es limitada.
de las micrometástasis, las metástasis ocultas y con ciertas ca-
4. Infecciones. Las tinciones inmunohistoquímicas se aplican
racterísticas adquiridas, de productos elaborados o genes ex-
en la actualidad para confirmar agentes infecciosos en los teji-
presados en exceso por las células malignas para establecer el
dos mediante el uso de anticuerpos específicos contra el DNA o
el RNA microbiano, como la detección de virus –HBV, CMV,
‹
‹ CUADRO 2.2: Tinciones inmunohistoquímicas usadas con mayor HPV, herpesvirus–, bacterias –p. ej., Helicobacter pylori– y pará-
frecuencia para los tumores de origen incierto. sitos –Pneumocystis carinii–, etcétera.
Tumor Inmunotinción

1. Tumores epiteliales i) Panqueratina (fracciones: queratinas de

CITOGENÉTICA
(carcinomas) alto y bajo peso molecular, HMW-K,
LMW-K) En el Capítulo 10 se describirán los aspectos aplicados de la
ii) Antígeno de la membrana epitelial (EMA) citogenética. En este capítulo el comentario se centrará en bre-
iii) Antígeno carcinoembrionario (CEA)
iv) Enolasa neuronoespecífica (NSE)
ves consideraciones técnicas.
Las células somáticas humanas son diploides y contienen 46
2. Tumores i) Vimentina (mesénquima en general)
mesenquimáticos ii) Desmina (miogénico en generales) cromosomas: 22 pares de autosomas y un par de cromosomas se-
(sarcomas) iii) Actina muscular específica (miogénico xuales (XX en las mujeres y XY en los varones). Los gametos (es-
en generales) permatozoides y óvulos) contienen 23 cromosomas y se denomi-
iv) Mioglobina (miogénicos esqueléticos)
v) α1-anti-quimiotripsina (para el nan células haploides. Todos los óvulos contienen 23 cromosomas
histiocitoma fibroso maligno) (el sexual es X), mientras que los espermatozoides contienen 23
vi) Factor VIII (para los tumores vasculares) cromosomas (el sexual puede ser X o Y). En consecuencia, el sexo
vii) CD34 (marcador endotelial
de la descendencia depende de la contribución cromosómica pa-
3. Grupos especiales terna, lo que implica que el óvulo fertilizado por un espermato-
a) Melanoma i) HMB-45 (más específico)
zoide con un cromosoma X da como resultado un cigoto feme-
ii) Vimentina
iii) S-100 nino, mientras que el óvulo fertilizado por un espermatozoide
con un cromosoma Y produce un cigoto masculino.
b) Linfoma i) Antígeno común leucocitario (LCA/CD45)
ii) Pan-B (inmunoglobulinas, CD20)
iii) Pan-T (CD3)
Cariotipo
iv) CD15, CD30 (marcador de las células El cariotipo se define como la secuencia de cromosomas ali-
RS para la enfermedad de Hodgkin)
neados de acuerdo con su tamaño, la localización del centró-
c) Tumores i)
Neurofilamentos (NF) mero y el patrón de bandas. En el Capítulo 3, se describirá la es-
neurales y ii)
NSE
neuroendocrinos iii)
GFAP (para los tumores gliales) tructura de los cromosomas.
iv)Cromogranina (para los La determinación del cariotipo de un individuo es una he-
neuroendocrinos) rramienta importante para el análisis citogenético. A continua-
v) Sinaptofisina
ción, se mencionan las características principales del cariotipo:

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1. Selección de la célula. Las células capaces de crecer y divi- 17
dirse son las seleccionadas para el análisis citogenético, como
PATOLOGÍA DIAGNÓSTICA MOLECULAR
las células del líquido amniótico, las de una biopsia de vellosi- Durante el último cuarto del siglo XX, se realizaron grandes
dades coriónicas, los linfocitos de la sangre periférica, las célu- avances en el campo de la biología molecular. Como conse-

CAPÍTULO 2
las de la médula ósea, de ganglios linfáticos, tumores sólidos, cuencia, las técnicas moleculares, que en el pasado sólo se em-
etcétera. pleaban con fines experimentales, ahora están disponibles para
2. Cultivo celular. La muestra obtenida de esta manera se cul- el diagnóstico. Estas técnicas sirven para detectar anomalías en
tiva en un medio mitógeno. Un mitógeno es una sustancia que el DNA o el RNA celular.
induce la mitosis en las células, como PPD, fitohemaglutinina Por lo general, todas las técnicas moleculares basadas en el
(PHA, por su sigla en inglés), el mitógeno de la hierba carmín DNA o el RNA emplean la hibridación basada en la tecnología re-
(PWM), éster forbol, etc. Luego, las células que se dividen, se combinante. Una región específica de DNA o RNA se detecta me-
detienen en metafase por el agregado de colchicina o colce- diante su marcado con una sonda (la sonda es una cadena de nu-
mida: ambos son inhibidores de la formación de los microtúbu- cleótidos formada por un número conocido de pares de bases). Las

Técnicas para el estudio de la patología

los. A continuación, las células se destruyen por el agregado de sondas poseen distintos tamaños y orígenes, y son las siguientes.
una solución hipotónica. 1. Las sondas genómicas provienen de una región del DNA de
Luego, las células en metafase se fijan en una mezcla de me- las células.
tanol y ácido acético glacial. 2. La sonda de cDNA se forma a partir de RNA mediante trans-
cripción inversa.
3. Tinción/bandeo. Cuando se tiñen, los cromosomas forman
3. La sonda de oligonucleótidos es una sonda sintética contraria
bandas oscuras y claras alternadas. Para lograr este efecto, el
al DNA genómico y a la sonda de cDNA, ambas derivadas
preparado fijado en metafase se tiñe con una de las siguientes
de material celular.
técnicas de bandeo:
4. Las ribosondas se preparan mediante un sistema de trans-
a) Bandeo con Giemsa o bandeo G, es empleado con mayor fre-
cripción in vitro.
cuencia.
b) Bandeo con quinacrina o bandeo Q, empleado para mostrar las MÉTODOS MOLECULARES
bandas a lo largo de los cromosomas.
A continuación, se presenta una descripción breve de las
c) Bandeo constitutivo o bandeo C, se usa para mostrar la hete-
técnicas moleculares disponibles como herramienta de diag-
rocromatina constitutiva.
nóstico en la patología quirúrgica:
d) Bandeo por tinción de Giemsa inversa (o bandeo R), produce un
1. HIBRIDACIÓN IN SITU. La hibridación in situ es una téc-
patrón opuesto al obtenido con el bandeo G.
nica de hibridación molecular que permite la localización de una
4. Análisis microscópico. Luego, los cromosomas se fotogra- secuencia de ácido nucleico en forma directa en la célula intacta (o
fían a través del examen microscópico del preparado. En la fo- sea, in situ) sin la extracción del DNA, a diferencia de otras técni-
tografía, los cromosomas se cortan y se organizan de acuerdo cas basadas en hibridación, que se describirán más adelante. Esta
con su tamaño, su localización centromérica y sus patrones de técnica consiste en la hibridación específica de una sola cadena de
bandeo. Los pares de cromosomas se identifican de acuerdo una sonda marcada de ácido nucleico con una sola cadena de un
con la longitud del brazo de los cromosomas. El centrómero di- DNA o un RNA complementario de un tejido que se desea detec-
vide los cromosomas en un brazo superior corto denominado tar. El producto final de la hibridación se identifica con una sonda
brazo p (la p, por petit, ‘pequeño’) y un brazo inferior largo de- radiactiva (32P, 125I) o no radiactiva (biotina, digoxigenina).
nominado brazo q (la letra q es la que sigue a la p). Aplicaciones. La hibridación in situ se usa en las siguientes
En la actualidad, se puede llevar a cabo el análisis citogené- aplicaciones:
tico molecular y la caracterización de los cromosomas a través i) en infecciones virales (p. ej., HPV, EBV, HIV, CMV. HCV, etc.),
de la técnica revolucionaria de hibridación in situ con fluores-
ii) en tumores humanos para la detección de la expresión de ge-
cencia multicolor (FISH, por su sigla en inglés) (véase más ade-
nes y oncogenes.
lante en la sección de Patología molecular).
iii) en trastornos cromosómicos, en particular, mediante el uso de
hibridación in situ por fluorescencia (FISH).
Aplicaciones
2. HIBRIDACIÓN CON FILTRO. Este método consiste en la
El campo de la citogenética posee amplias aplicaciones en extracción del DNA o del RNA evaluado del tejido, que puede
patología diagnóstica (Capítulo 10). En resumen, el cariotipo se ser fresco, congelado no fijado, o fijado en formalina e incluido
emplea para los siguientes fines: en parafina. El DNA o el RNA extraído se inmoviliza en un fil-
i) Anomalías cromosómicas numéricas, p. ej., síndrome de Down tro de nitrocelulosa o nailon. A continuación, se hibrida el DNA
(trisomía del autosoma 21), síndrome de Klinefelter (trisomía 46), buscado con la sonda marcada. El análisis del DNA con hibri-
síndrome de Turner (monosomía 45, XO), abortos espontáneos. dación por filtro se realiza a través de los siguientes métodos:
ii) Anomalías cromosómicas estructurales, como traslocaciones i) Ensayos de transferencia por manchas (dot) y por ranuras (slot),
(p. ej., cromosoma Philadelphia t(9;22), síndrome de cri-du- en los cuales la muestra de DNA se une de forma directa con el
chat, 5p, abortos espontáneos recurrentes), deleciones, insercio- filtro sin reducción del tamaño del ácido nucleico.
nes, isocromosoma y formación de cromosoma anular. ii) Southern blot (electroinmunotransferencia o inmunotransferen-
iii) El cáncer se caracteriza por múltiples anomalías cromosó- cia); es similar a la anterior, pero difiere en el fraccionamiento
micas complejas, como deleciones, amplificaciones, inversio- previo del DNA mediante electroforesis en gel (se denomina
nes, traslocaciones, en especial en leucemias y linfomas, tumo- Southern blot, debido al científico E. M. Southern, que describió
res de células germinales y algunos sarcomas. esta técnica por primera vez).

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 18 iii) Northern blot; es similar a la anterior, pero con fracciona- corriente, filtros monocromáticos, lentes, espejos y un ordena-
miento del RNA. (En este caso se la ha llamado Northern como dor para el análisis de los datos. El citómetro de flujo actúa
opuesta a la anterior, no corresponde a un apellido) como clasificador de células, ya que distribuye en forma física
iv) Western blot (electroinmunotransferencia de proteínas); es aná- las células presentes en la suspensión líquida, que fluyen en
loga a los dos métodos anteriores, pero para el fraccionamiento una sola hilera. La citometría de flujo requiere suspensiones
SECCIÓN I

de proteínas; en este método, se usan anticuerpos como sondas. unicelulares; y sus aplicaciones se limitan a la evaluación de lí-
Aplicaciones. Debido al nivel elevado de especificidad y sensi- quidos, como por ejemplo leucocitos, eritrocitos y sus precur-
bilidad de las técnicas de hibridación molecular, estos métodos sores, líquidos corporales y, en ocasiones, tejidos sólidos homo-
se aplican de forma amplia en la patología diagnóstica. geneizados para crear suspensiones celulares.
i) En las neoplasias, tanto en las hematológicas como en las no Aplicaciones. El análisis por citometría de flujo se emplea en
hematológicas. la práctica clínica para los siguientes casos.
ii) En las enfermedades infecciosas, para el diagnóstico del agente 1. Inmunofenotipo, a través del análisis antigénico detallado de
causal, en estudios epidemiológicos y para la identificación de varias neoplasias hematopoyéticas, como por ejemplo leuce-
Patología general y técnicas básicas

nuevos agentes infecciosos. mias agudas y crónicas, linfomas (Hodgkin y no Hodgkin) y

iii) En las enfermedades genéticas hereditarias, para detectar a por- neoplasias de células plasmáticas.
tadores de mutaciones, para el diagnóstico prenatal y para el 2. Medición de los antígenos asociados con la proliferación, como
diagnóstico directo de las enfermedades genéticas. por ejemplo Ki67, PCNA.
iii) En la determinación de la identidad, para el trasplante de teji- 3. Medición del contenido de ácido nucleico, por ejemplo a través
dos, en patología forense y para la evaluación del parentesco. de la medición del contenido de RNA en los reticulocitos, la
3. REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA. La re- cuantificación del contenido de DNA y el recuento de la ploidía
acción en cadena de la polimerasa (PCR, por su sigla en inglés) del DNA en varios tipos de cánceres.
es una técnica revolucionaria para la evaluación genética mole- 4. Diagnóstico y pronóstico de la inmunodeficiencia, como por
cular con aplicaciones amplias en el diagnóstico y la investiga- ejemplo en el síndrome de inmunodeficiencia humana o sida, a
ción. La técnica se fundamenta en el principio de que una ca- través del recuento de CD4 y de los linfocitos T. Los pacientes
dena de DNA posee una capacidad ilimitada para duplicarse a con recuentos de CD4 y linfocitos T menores de 500/mL re-
sí misma y así formar millones de copias. En la PCR, una sola quieren tratamiento antiviral.
cadena de DNA genera otra por la acción de la DNA polimerasa 5. Para diagnosticar la causa del rechazo del aloinjerto en un tras-
con un fragmento corto de DNA complementario y con el uso plante renal, en caso de nefropatía terminal a través del recuento
de un cebador, que actúa como molde para iniciar la reacción. de CD3 y linfocitos T. Los pacientes con recuentos de CD3 y lin-
Un ciclo de la PCR consta de tres pasos: focitos T menores de 100 a 200/mL tienen menor riesgo de expe-
i) Desnaturalización del DNA con calor (a 94 ºC durante 60 a 90 rimentar un rechazo del injerto.
segundos). 6. Diagnóstico de autoanticuerpos en la púrpura trombocitopénica
ii) Hibridación de los cebadores con sus secuencias comple- idiopática y en la neutropenia autoinmunitaria.
mentarias (a 55 ºC durante entre 30 y 120 segundos).
iii) Extensión de los cebadores hibridados con DNA polimerasa MÉTODOS PARA EL ANÁLISIS DE LA PROLIFERACIÓN
(a 72 ºC durante entre 60 y 180 segundos). CELULAR
Los ciclos se pueden realizar en un ciclador térmico auto-
Además de la citometría de flujo, el grado de proliferación
mático, el cual produce una gran acumulación de la secuencia
de las células en los tumores se puede determinar a través de
evaluada, dado que cada nuevo producto generado actúa como
varios otros métodos, que se mencionan a continuación:
molde para el siguiente ciclo.
Aplicaciones. El análisis por PCR posee las mismas aplicacio- 1. Recuento mitótico. Es el método más antiguo, pero aún se
nes que las técnicas de hibridación con filtro, pero con muchos utiliza para el diagnóstico anatomopatológico sistemático. Se
beneficios sobre ellas porque es más rápido, se pueden auto- cuenta el número de células en mitosis por campo de gran au-
matizar con cicladores térmicos y requiere mucho menos DNA mento, como por ejemplo para clasificar varios tipos de tumo-
inicial. Sin embargo, la PCR se puede contaminar; en conse- res del músculo liso.
cuencia, se requiere precaución extrema durante la implemen- 2. Autorradiografía. Este método consiste en el marcado in
tación de esta técnica. vitro con timidina de las células en vías de proliferación para
después procesarlas para su inclusión en parafina. Las células
marcadas con timidina (que corresponden a la fase S) se cuen-
OTRAS HERRAMIENTAS MODERNAS tan cada 2.000 núcleos de células tumorales y se expresan me-
PARA LA PATOLOGÍA DIAGNÓSTICA diante el índice de marcación con timidina. El método se em-
plea como marcador pronóstico en el carcinoma de mama.
LA CITOMETRÍA DE FLUJO 3. Análisis microespectrofotométrico. El fragmento se tiñe
La citometría de flujo es una herramienta moderna que se con la reacción de Feulgen para revelar el contenido de DNA en
usa para el estudio de las propiedades de las células suspendi- la célula y medir este contenido con un microespectrofotóme-
das en una corriente en movimiento. Por ende, la citometría de tro. El método es tedioso y su aplicación es limitada.
flujo supera el problema de la subjetividad asociada con el exa- 4. Inmunohistoquímica. El antígeno nuclear específico para
men microscópico de las células y tejidos en la histopatología y el crecimiento y la división celular se tiñe con inmunohistoquí-
en la citopatología. mica y luego se cuentan las células positivas con el microscopio
El citómetro de flujo posee una fuente con luz láser para emi- o con un analizador de imágenes. Los marcadores de la prolife-
tir fluorescencia, un sistema de transporte celular en una sola ración, evaluados con este método, son Ki-67, PCNA y ciclinas.

Patología + Resumen y preguntas de autoevaluación ©2012. Editorial Médica Panamericana

5. Región organizadora del nucleolo (NOR, por su sigla en 2. un sistema computarizado (CPU, monitor, teclado, mouse, 19
inglés). El nucleolo contiene componentes ribosómicos que se etc.) conectado con el microscopio.
forman en regiones de los cromosomas con DNA denominadas 3. un equipo de captura de imágenes que convierte las imáge-
“NOR”. Estas áreas revelan afinidad por el metal plata. Esta nes de vídeo del monitor en imágenes digitales y las almacena
propiedad se usa para la tinción del fragmento con plata (téc-

CAPÍTULO 2
en la CPU.
nica AgNOR). Las NOR se presentan como manchas intranu- 4. soporte informático para el análisis de las imágenes insta-
cleares de color negro, mientras que el fondo se tiñe de amari- lado en el ordenador de acuerdo con las necesidades del usua-
llo-amarronado. rio para realizar las mediciones y los cálculos.
ORDENADORES EN EL LABORATORIO DE PATOLOGÍA APLICACIONES. El analizador de imágenes se puede usar con
diversos objetivos, que se mencionan a continuación.
Un laboratorio de patología debe comunicar gran cantidad de
información a los médicos. El patólogo también debe poder acce- 1. Estudio morfométrico de las células tumorales a través de la me-
der a los datos del paciente antes de informar los resultados de las dición de las características estructurales, celulares y nucleares.
muestras recibidas. En consecuencia, resulta fundamental que el 2. Medición cuantitativa de la ploidía del DNA nuclear.

Técnicas para el estudio de la patología

laboratorio de patología moderno posea un sistema informático 3. Valuación cuantitativa de la tinción inmunohistoquímica.
que esté conectado con el sistema informático hospitalario.
Asimismo, el personal del laboratorio y los médicos deben LAS MICROMATRICES DEL DNA
conocer los sistemas utilizados. La micromatriz del DNA es la aplicación más nueva de la
El empleo de ordenadores en el laboratorio posee dos obje- tecnología con chips de siliconas para el análisis simultáneo de
tivos principales: grandes volúmenes de datos de genes humanos, como por
para registrar los resultados de los pacientes y ejemplo para la detección y la cuantificación de mutaciones
para informar los resultados de las pruebas en formato nu- puntuales y pleomorfismos de un nucleótido único. El método
mérico, narrativo y gráfico. elimina el uso de sondas de DNA. En su lugar, se usa el mar-
Aplicaciones. La aplicación de ordenadores en el laboratorio de cado fluorescente de un fragmento de DNA (cDNA o comple-
patología posee varias ventajas que se describen a continuación. mentario), para la hibridación de la muestra en estudio. Se uti-
1. El personal del laboratorio y del hospital tienen acceso a la lizan escáneres láser de alta resolución para la detección de las
información del paciente, lo que ayuda a mejorar su atención. señales fluorescentes emitidas, mientras que el nivel de expre-
sión de genes y el genotipo de las muestras biológicas se deter-
2. El tiempo entre la obtención de la muestra y el informe de los re-
minan a través de la aplicación de la bioinformática.
sultados se abrevia.
3. Mejora la productividad del personal del laboratorio en todos APLICACIONES. Las micromatrices de DNA se usan para obte-
los niveles, y este personal se puede utilizar en otras tareas. ner perfiles moleculares de los tumores que ayudan a arribar a
4. Codificación y clasificación de los resultados y los datos de las diagnósticos histogenéticos específicos y a establecer el pronóstico.
distintas pruebas.
MICRODISECCIÓN CON LÁSER
5. Con fines de experimentación y de acreditación, para obtener
becas para la investigación, se requieren datos computarizados La microdisección con láser es otra técnica nueva en la pa-
de los resultados. tología quirúrgica diagnóstica que permite definir el perfil mo-
6. Almacenamiento y recuperación de los datos del laboratorio para lecular del material tisular. Consiste en la disección de una sola
ahorrar el tiempo y el espacio ocupado por los archivos. célula o parte de una célula –p. ej., cromosomas– a través de tec-
nología láser y soporte informático apropiado para el procedi-
SISTEMA DE RECONOCIMIENTO DE VOZ. En la actuali- miento. Luego, el material aislado se puede usar para realizar
dad, hay sistemas computarizados que pueden reconocer la voz las pruebas moleculares disponibles.
y transformar en texto las descripciones macroscópicas y
microscópicas verbales de los informes a través de un dictáfono, LA TELEPATOLOGÍA Y LA MICROSCOPIA VIRTUAL
sin que intervenga un secretario. La telepatología se define como la práctica de la patología
diagnóstica a cargo de un patólogo presente en otro sitio a tra-
ANALIZADOR DE LA IMAGEN Y DE LA MORFOMETRÍA vés de imágenes de las muestras tisulares transmitidas me-
diante una red de telecomunicaciones. Los componentes princi-
La patología es una disciplina muy visual; por lo tanto, el aná-
pales de un sistema de telepatología son los siguientes:
lisis de las imágenes microscópicas representa el elemento princi-
pal para su estudio. Existe la necesidad y el deseo de impartir ma- microscopia óptica convencional;
yor objetividad a los informes de histopatología, ya que éstos método para la captura de la imagen; en general, una cá-
solían ser bastante subjetivos. En la actualidad, mediante los avan- mara montada sobre el microscopio óptico;
ces en las técnicas de computación, se lograron mediciones objeti- conexión de telecomunicaciones entre el lado emisor y el
vas de las características microscópicas cuantitativas para permi- receptor;
tir la reproducibilidad de las observaciones histopatológicas.
y una base operativa en el extremo receptor con un moni-
El analizador de imágenes es un sistema que se utiliza para
tor de alta calidad.
definir las características estructurales, celulares y nucleares de
las células. En forma sucinta, el analizador de imágenes con- De acuerdo con la necesidad y el presupuesto, el sistema de
siste en las siguientes partes: telepatología puede ser de dos tipos:
1. microscopio óptico convencional con una cámara de vídeo Estático (almacenamiento y transmisión, telepatología pasiva):
montada sobre él. consiste en la captura de imágenes específicas, su almacena-

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 20 miento y su transmisión a través de un correo electrónico, un embargo, la calidad de la imagen y la velocidad de Internet
protocolo de transferencia de archivos, un sitio web o CD- pueden ser obstáculos importantes.
ROM. El método es bastante económico y se usa con mayor fre- La era de la patología digital en el siglo XXI alcanzó su cenit con
cuencia, pero tiene la desventaja de que el emisor es el que se- la disponibilidad de la tecnología para preparar piezas de patología
lecciona las imágenes transmitidas. virtuales con equipos de alta velocidad y con el almacenamiento
SECCIÓN I

Dinámico (telepatología interactiva con robot): consiste en imá- de datos en ordenadores con gran capacidad de memoria. Estas
genes transmitidas en tiempo real desde un microscopio dis- piezas almacenadas en la memoria del ordenador se pueden exa-
tante. El movimiento robótico del microscopio se controla a dis- minar e informar sin la necesidad de usar un microscopio. No
tancia, se adjuntan las imágenes y los campos elegidos obstante, la pregunta principal es si los patólogos actuales, acos-
procedentes de un servidor a distancia o local. En consecuencia, tumbrados a la microscopia convencional, lograrán la misma per-
este método casi duplica la perfección del examen de los porta- cepción en el monitor. En la actualidad, esta tecnología es útil para
objetos bajo el microscopio; se denomina microscopia virtual. Sin la enseñanza, las reuniones clínicas y el control de calidad.
Patología general y técnicas básicas

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