Laboratorio Nº3 Mecanismos
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AÑO DE LA
DIVERSIFICACIÓN
PRODUCTIVA Y DEL
FORTALECIMIENTO DE LA
EDUCACIÓN
CICLO : IV
Es muy importante conocer los diferentes tipos de bacteria, para poder realizar como
médicos o como profesionales de la salud un diagnostico verídico de lo pueda tener un
paciente.
Para esto es necesario tener un conocimiento de las diferentes pruebas que se hace
para detectar estos agentes infecciosos que pueden estar deteriorando la salud de las
personas, por eso debemos conocer las diferentes formas de bacterias que puedan
haber ya sea cocos, bacilos, espirilos entre otras.
Hoy en día existen muchas formas para poder identificar qué tipo de bacteria es ,pero
algunas veces son muy costosas ,por ese motivo se optan por métodos más
económicos como la detección por medio de coloraciones.
MARCO TEORICO
Tinción
Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar
el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias
que usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en tejidos
biológicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios.
Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definición y examinar
grandes cortes de tejido como por ejemplo haciendo que resalte fibras musculares o
tejido conectivo, también poblaciones celulares y estas clasificando diferentes células
sanguíneas o incluso para resaltar organelas.
Fundamentos
La mayoría de las células bacterianas difieren en tamaño y por eso es que resultan
difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste
entre la célula y el medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el
contraste es la utilización de colorantes. Generalmente pueden emplearse para
distinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados
constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares,
centros de actividad respiratoria, etc.
Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas,
proceso llamado fijación. Para bacterias, la fijación por el calor es lo más corriente,
aunque también puede fijarse con sustancias químicas como formaldehido, ácidos y
alcoholes. Después de la fijación, si se añade el colorante, no se producen ulteriores
cambios estruturales en el protoplasma. La fijación se realiza habitualmente en células
que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando después éste con el agente
fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tinción. La fijación produce
habitualmente el encogimiento de las células; la tinción, por el contrario, hace que las
células aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de
las células que han sido fijadas o teñidas no pueden realizarse con mucha precisión.
La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad
específica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia
son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con
los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos
y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de metileno,
el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas cargadas
negativamente y se combinan con los constituyentes celulares cargados
positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la
fucsina ácida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles;
los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipídicos de la célula,
usándose a menudo para revelar la localización de las gotículas o depósítos de grasa.
Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudán.
Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con
otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia se
denomina mordiente; un mordiente habitual es el ácido tánìco. El mordiente se
combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar
el colorante.
Los métodos de tinción son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con
precaución, ya que pueden conducir a errores. Las moléculas de colorante forman en
ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares auténticas,
pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el mismo colorante.
Tales estructuras se denominan artefactos, y deben tomarse muchas precauciones
para tener la seguridad de que no nos estamos equivocando al creer que un artefacto
es una estructura realmente existente.
Método de tinción
Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material que se
va a teñir (si es líquido) o se hace rodar el hisopo con que se tomó la muestra. Una
vez que el hisopo ha tocado la superficie del portaobjetos, que no está estéril, ya no
puede ser empleado para inocular los medios de cultivo. Puede usarse una aguja
estéril para transferir una pequeña cantidad de un cultivo bacteriano a la superficie del
portaobjetos. Este material es suspendido en una gota de agua o solución salina
previamente colocada sobre el portaobjetos. Cuando se trata de colonias muy
pequeñas que pueden perderse en una gota de líquido se emplea una varilla delgada
de madera estéril con la cual se toca la colonia obteniéndose así una fracción
apreciable del desarrollo. El material se frota directamente sobre el portaobjetos,
donde puede visualizarse con facilidad. El material colocado en el portaobjetos se deja
secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona azul de la llama de un mechero
de Bunsen hasta que el vidrio esté tan caliente que moleste al tacto pero no queme.
Preparación de la tinción
Las etapas preparatorias involucradas en una tinción van a depender del tipo de
análisis planeado; bajo estas premisas se puede considerar que algunos o todos de
los siguientes pasos podrían requerirse.
Fijación: de por sí, esta etapa puede consistir en varios pasos. La fijación es una
modificación de las propiedades fisicoquímicas de las proteínas que forman una célula
o tejido y que tiene por finalidad preservar las formas de las células o tejidos tanto
como sea posible. A veces se puede utilizar una fijación por calor para matar, adherir y
alterar un espécimen de modo que acepte la tinción.
Tipos de tinciones
TINCIÓN INDIRECTA: Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso de
un mordiente. Un mordiente habitual es el ácido tánico.
AZUL DE METILENO: se utiliza para teñir células animales, para hacer más visibles
sus núcleos. Es también utilizado para teñir los extendidos de sangre para ser
utilizados en citología y como colorante vital en el recuento de reticulocitos.
AZUL NILO: es decir, azul Nilo, tiñe los núcleos de color azul. También puede ser
utilizado para teñir células vivas.
CARMÍN: es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como sal de
litio para teñir glicógeno, mientras que las sales de alumbre-carmín son colorantes que
se adhieren al núcleo. Las tinciones con carmín requieren del uso de un mordiente,
que usualmente es aluminio o alumbre.
CRISTAL VIOLETA: este al ser combinado con un mordiente adecuado, tiñe las
paredes celulares de color púrpura. El cristal violeta es un componente importante en
la coloración de Gram.
FUCSINA ÁCIDA: puede ser utilizada para colorear colágeno, músculo liso o
mitocondrias. Forma parte de la coloración tricrómica de Mallory donde se utiliza para
colorear núcleo y citoplasma. En la tinción de Van Gieson (picrofucsina), la fucsina es
la responsable de dar el color rojo a las fibras de colágeno. También es una coloración
tradicional para colorear mitocondrias (método de Altmann).
Pared celular
Safranina
Cristal violeta
Alcohol cetona
Lugol
Laminas portaobjetos
COLORACION GRAM
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
LAMINA Nº1
LAMINA Nº2
LAMINA Nº3
Se observa algunos cocos agrupados con coloración gram positiva
CONCLUSIONES
Podemos observar que la mayoría de las bacterias eran cocos y estaban agrupadas.
BIBLIOGRAFIA
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf