6 Clase 5
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CONTENIDO
1. OBJETIVO
2. INTRODUCCIÓN
3. CRITERIOS DE SELECCIÓN DE BIOMARCADORES
4. ABERRACIONES CROMOSÓMICAS Y SU CLASIFICACIÓN
4.1 Aberraciones cromosómicas inestables
4.1.1 Análisis cromosómico convencional (dicéntricos y anillos)
4.1.2 Micronúcleos
4.2 Aberraciones cromosómicas estables (translocaciones e
inversiones)
5. SOBREEXPOSICIONES INHOMOGÉNEAS
6. RESUMEN
7. BIBLIOGRAFÍA
ANEXO
1. OBJETIVO
2. INTRODUCCIÓN
También contribuye con las dosimetrías clínica, externa e interna. Las lecciones
aprendidas en los últimos accidentes radiológicos indican la necesidad de adoptar
un enfoque con retroalimentación entre estas dosimetrías y por lo tanto
interdisciplinario y multiparamétrico.
Los criterios para que un efecto radioinducido pueda ser usado con fines
dosimétricos son los siguientes:
a) Relación conocida dosis-efecto
b) Reproducibilidad de las observaciones
c) Persistencia del efecto
d) Especificidad a la radiación
e) Sensibilidad a diferentes calidades de radiación
El paso de una traza ionizante, a través del núcleo, induce rupturas cromosómicas
cuya anómala reunión, mediante las enzimas de reparación celular, da origen a
las llamadas aberraciones cromosómicas y sus derivados citoplasmáticos, los
micronúcleos. De acuerdo a su estabilidad a través de sucesivos ciclos de división
celular, las aberraciones cromosómicas pueden clasificarse en:
El método posee una alta sensibilidad (0,1 Gy para radiación de bajo LET y de
0,05 Gy para neutrones del espectro de fisión) y una bien conocida dosis
dependencia hasta alrededor de 5 Gy.
1,5
alto LET
1,25
y = c + D + D2
Dicéntricos/Célula
bajo LET
0,75
4.1.2 Micronúcleos
Origen de los MN: Estudios que incluyen medición del tamaño de MN,
medición del contenido de ADN, tinción inmunofluorescente con anticuerpos
antikinetocoro CREST y, más recientemente, hibridación in situ por
fluorescencia (FISH) con sondas de ADN que se unen específicamente a
regiones centroméricas de los cromosomas fueron utilizados para discriminar
entre MN provenientes de fragmentos acéntricos y cromosomas enteros. Se
observó que la mayor parte de los MN radioinducidos se origina primariamente
a partir de fragmentos acéntricos, lo que denota la acción fundamentalmente
clastogénica de las radiaciones ionizantes y que un menor número proviene de
cromosomas enteros retrasados durante la anafase debido a algún defecto en
el huso mitótico o las proteínas de cinetocoro. Los MN espontáneos están
constituidos principalmente por cromosomas enteros. De modo que la
sensibilidad del ensayo de MN, en el rango de las bajas dosis, puede ser
aumentada utilizando sondas pancentroméricas y efectuando el recuento de
sólo aquellos MN centrómero negativos.
Los linfocitos T maduros tienen una longitud de vida finita de alrededor de 1500
días y son eliminados lentamente de sangre periférica. Consecuentemente, la
frecuencia de dicéntricos decrece en el tiempo luego de una sobreexposición.
Durante exposiciones in vivo a la radiación ionizante, las aberraciones
M06 – Efectos Biológicos de las Radiaciones Ionizantes - 8
Centro Regional de Capacitación para América Latina y El Caribe - UCE - ARN
Las sondas de ADN pueden ser utilizadas para “pintar” un par cromosómico o un
cóctel, habitualmente constituido por tres pares cromosómicos, cubriendo
alrededor del 20% del contenido de ADN genómico total, con un solo color o
multicolor. Mediante la utilización de contracolorantes apropiados para los
cromosomas no pintados, sólo las translocaciones pueden ser fácilmente
detectadas por su patrón fluorescente bicolor o multicolor, por lo que sólo una
fracción de todas las translocaciones posibles puede ser detectada. La frecuencia
de translocaciones observadas (Fp) puede ser extrapolada al genoma completo
(FG) a partir de la siguiente ecuación: Fp = 2,05 fp (1 - fp) FG, donde fp representa la
fracción del genoma pintado. Esto requiere la suposición de que la probabilidad
de un cromosoma de ser involucrado en una translocación es proporcional a su
contenido de ADN.
5. SOBREEXPOSICIONES INHOMOGÉNEAS
6. RESUMEN
El método posee una alta sensibilidad (0,1 Gy para radiación de bajo LET y de
0,05 Gy para neutrones del espectro de fisión) y una bien conocida dosis
dependencia hasta alrededor de 5 Gy. Esta metodología permite estimar la dosis
equivalente aguda a todo el cuerpo, pero puede ser modificada para estimar la
dosis en las exposiciones prolongadas o inhomogéneas.
7. BIBLIOGRAFÍA
ANEXO
Tabla 1 - BIODOSÍMETROS
Muestra Rango de Período de
Biomarcador Órgano blanco
biológica Dosis ( Gy ) aplicabilidad
Hematológicos
Timidina sérica todo el cuerpo sangre > 1,0 días
linfocitos
Movilidad Electrof linfocitos sangre 2,0 - 4,0 días
Índice Mitótico linfocitos sangre > 1,0 días
Citológicos
Micronúcleos linfocitos sangre 0,25 - 5 meses/años
Aberraciones 0,05 Alta LET
linfocitos sangre meses/años
Cromosómicas 0,15 Baja LET
Espermatogénesis testículos esperma > 0,15 meses
Genómicos
Expresión mutacional linfocitos sangre > 0,1 semanas- años
Neurofisiológicos
Neurofisiológicos Neuronas cerebro cuerpo < 6,0 horas- semanas
Inmunológicos
Subpoblación de Sistema
sangre < 10 días- semanas
linfocitos sanguíneo
Marcadores de tejido linfático
sangre < 6,0 semanas
superficie de la cel. sangre
Estimulación de tejido linfático
sangre < 10 semanas
linfocitos sangre
tejido linfático
Función citotóxica sangre < 5,0 semanas
sangre
Indicadores bioquímicos
amilasa glándula salival orina suero > 0,5 días
Nucleót.y aminoac. días
tejido linfático orina 0,75 - 2,5
deoxicitidin taurina
Excreción de
+ + - sistema renal orina > 0,5 semanas
K ,Na , Cl
Creatina-creatinina todo el cuerpo orina > 0,6 días
Electrolitos sangre sangre > 0,75 días
Indicadores biofísicos
todo el cuerpo
Pelo pelo 1-4 meses
parcial
Uñas parcial uñas 1-4 años
todo el cuerpo
Dientes esmalte dental 0,5 - 5 años
cavidad oral
Hueso todo el cuerpo hueso 0,5 - 5 años
Cristales de azúcar - - < 0,05 semanas - meses
Alanina - - < 0,1 días - meses
Indicadores Hematológicos
Indicadores Citológicos
Técnicas citogenéticas
La mayor experiencia en dosimetría biológica se ha obtenido con las técnicas
citogenéticas que permiten la detección de aberraciones cromosómicas
microscópicamente visibles en linfocitos periféricos. Estas técnicas ya han sido
descriptas en profundidad.
Son varias las metodologías usadas: aberraciones cromosómicas en metafase,
determinación de micronúcleos, condensación prematura de cromosomas y
recientemente el uso de técnicas de biología molecular como la de hibridación in
situ por fluorescencia (FISH).
Espermatogénesis
Es muy sensible a la radiación, sobre todo para irradiaciones localizadas cuando
gónadas masculinas están dentro del campo de radiación. Cambios en el
recuento, la motilidad y la morfología de los espermatozoides, se observan a partir
de una dosis de 0,15 Gy.
Debido al tiempo de maduración de espermatocito a espermatozoide, la
disminución en el número de espermatozoides puede no ser observado hasta 45
días después de la exposición. Es el único indicador que permite conocer los
valores basales luego de la sobreexposición. La técnica es útil cuando una
exposición previa es sospechada.
Indicadores Bioquímicos
Considerables esfuerzos se han realizado durante los últimos treinta años, a fin
de identificar indicadores bioquímicos de daño radioinducido entre los metabolitos
y actividades enzimáticas que aparecen o cambian su concentración en orina o
sangre debido a procesos celulares degradativos.
Después de una exposición (0,5-2,5 Gy) hay una considerable ruptura enzimática
de ácidos nucleicos y proteínas, especialmente en tejido linfático. En
consecuencia aumenta la excreción urinaria de nucleósidos, aminoácidos y sus
metabolitos. Se ha observado un incremento en la excreción de deoxicitidina
después de radioterapia, y de ácido ß-amino isobutírico (BAIBA), después de una
irradiación accidental.
Indicadores Biofísicos
Indicadores Neurofisiológicos
Otros Indicadores
Activación neutrónica
Aplicable en los casos de irradiación neutrónica o de campos mixtos. En los casos
de exposición neutrónica o de campos mixtos, el componente neutrónico y su
distribución espacial, puede ser estimada determinando la presencia de Na-24 y
P-32 en el cuerpo.
Análisis de pelo
La muerte celular radioinducida en el folículo piloso, se manifiesta en una
disminución del grosor del pelo. Se puede medir el porcentaje de cabello
displástico, el número de aberraciones cromosómicas en epitelio de pelos
arrancados y el número de células apoptóticas (muerte celular) en folículo piloso.
El indicador más sensible, muerte celular en el folículo (0,05-1 Gy) sólo puede
aplicarse en un período corto después de la exposición. La disminución del grosor
del cabello es menos sensible (1-10 Gy) y necesita al menos 2-3 días para
expresarse, siendo el tiempo óptimo para su determinación entre 1 y 14 días post-
exposición.
Indicadores génicos
Se ha desarrollado un ensayo que mide la frecuencia de eritrocitos que han
perdido la expresión del gen de la glicoforina A, la proteína responsable de los
serotipos M y N sanguíneos.
La frecuencia de células mutantes en sobrevivientes de la bomba atómica,
correlacionó con la dosis estimada para grupos de población, pero no para
individuos. La misma respuesta se encontró en eritrocitos de poblaciones
afectadas por el accidente de Chernobyl. Se concluye que las células mutadas
persisten por períodos de años post-irradiación.
Ensayo de HPRT, una enzima involucrada en la síntesis de los ácidos nucleicos,
mostró un incremento significativo de mutantes con la dosis. Fue exitosamente
aplicado en el accidente de Goiania (Brasil). Se encontró un aumento de mutantes
varios años después en personas expuestas entre 1y 7Gy.
Indicadores inmunológicos
Los indicadores inmunológicos potencialmente útiles pueden ser agrupados en:
a) Cuantificación de subconjuntos linfocitarios
b) Ensayo de la capacidad funcional de diferentes subpoblaciones de células
blancas.
c) Producción de anticuerpos
En este momento los indicadores inmunológicos no son aplicables para
estimación de dosis. Sin embargo, parecen ser los más adecuados para guiar el
manejo clínico de personas con irradiación de todo el cuerpo. Pueden ser útiles
también para seguimiento a largo plazo de los pacientes, aunque es necesaria
mayor información sobre los factores inmunológicos involucrados en la respuesta
tardía a la radiación.