Espectrofotometría MB

ESPECTROFOTOMETRÍA
Blas Damián, Marcelo

Escuela Profesional de Ingeniería Agroindustrial, EPIA, Universidad Nacional del Santa, Nuevo Chimbote, Perú
El objetivo de esta práctica se basó en la determinación
I. INTRODUCCIÓN de la longitud de onda de máxima absorción,
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis determinación de los niveles de concentración adecuados
más usados, y se basa en la relación que existe entre la para el análisis
absorción de luz por parte de un compuesto y su
concentración, cuando se hace incidir luz monocromática cuantitativo por espectrofotometría y el coeficiente de
(de una sola longitud de onda) sobre un medio extinción molar.
homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida
por el medio y otra transmitida. [1] II. MATERIALES Y MÉTODOS
Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el Los materiales que se usaron en esta práctica fueron los
cual es una curva que muestra la cantidad de energía siguientes: vasos de precipitado, pipetas, ácido oxálico,
radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia en cada ácido ascórbico, Espectrofotómetro UV- Visible, fiolas,
longitud de onda del espectro electromagnético, es decir, papel filtro, papel tissue, 2,6 diclorofenolindofenol,
a una determinada longitud de onda de la energía celdas de cuarzo. Se dividió el trabajo en 3 subgrupos
radiante, cada sustancia absorbe una cantidad de para avanzar más rápido la práctica.
radiación que es distinta a la que absorbe otro compuesto Preparación de reactivos. Los reactivos que
[2] utilizamos en la práctica fueron hechos con anticipación
El instrumento utilizado en la espectrometría por el ingiero a cargo del laboratorio. Pero para preparar
ultravioleta-visible se llama espectrofotómetro UV-Vis. una solución de ácido oxálico al 0.4% lo que se hace es
Mide la intensidad de luz que pasa a través de una pesar 4 gramos de ácido oxálico la llevamos a una fiola
muestra (I), y la compara con la intensidad de luz antes de 1L y aforamos con agua destilada. Para preparar la
de pasar a través de la muestra (Io). La relación I / Io se solución madre se debe pesar 100mg de ácido ascórbico
llama transmitancia, y se expresa habitualmente como un y se lleva a una fiola de 100ml y se afora con una
porcentaje (%T) [3] solución de ácido oxálico al 0.4%. Para la preparación
Por otro lado [b] manifiesta que la espectrofotometría del colorante se tiene que pesar 12 mg de 2,6
UV-visible es una técnica analítica que permite diclorofenolindofenol llevar a una fiola y aforar con
determinar la concentración de un compuesto en 1000ml de agua destilada, la recomendación que se da
solución, se basa en que las moléculas absorben las es de forrar la botella de color oscuro y mantener en
radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad refrigeración. Para la preparación del estándar de trabajo
de luz absorbida depende de forma lineal de la se tomó 4 ml de la solución madre y se llevó a una fiola
concentración. de 10 0ml y se aforo con una solución de ácido oxálico
El espectrofotómetro, consta de un monocromador al 0.4%.
(prisma o red de difracción) que controla la longitud de Determinación de la longitud de onda de
onda de la radiación que se hace incidir sobre la muestra. máxima duración. Empezamos tomando 2 tubo de
La radiación no absorbida se detecta y mide prueba y los enumeramos en tuvo II y tubo IV para su
convenientemente. La absorbancia de la muestra se diferenciación, ajustamos a cero la absorbancia del
compara con la de una “referencia” que consta equipo usando el filtro y seleccionando. Al tuvo II le
estrictamente de disolvente. [4] añadimos 9 ml. de colorante y después observamos las
Ley de Lambert-Beer Esta ley expresa la relación entre absorbancias. Al tubo 4 se le añadió también 9 ml. de
absorbancia de luz monocromática (de longitud de onda colorante y después observamos las absorbancias.
fija) y concentración de un cromóforo en solución, viene
dada por la siguiente fórmula: Determinación del coeficiente de extinción.
Empezamos preparando una solución de ácido ascórbico
al 0.005M para lo cual hicimos uso de la fórmula
C1V1=C2V2 en donde calculamos la cantidad de
donde A es la absorbancia medida, Io es la intensidad de volumen que debíamos a sacar de la solución madre de
la luz incidente a una determinada longitud de onda, I es ácido ascórbico para poder preparar esta nueva solución
la intensidad de transmisión, L la longitud de ruta a al 0.005M. La cantidad requerida para esta nueva
través de la muestra, y c la concentración de las especies solución fue 8,806 ml la cual colocamos en una fiola de
absorbentes. Para cada especie y longitud de onda, ε es 100 ml. y aforamos con ácido oxálico. Luego
una constante conocida como absortividad molar o realizamos la lectura de la absorbancia a la longitud de
coeficiente de extinción. [5] onda de máxima absorbancia obtenida en el
procedimiento inicial. Luego con los datos obtenidos de
absorbancia, espesor de las cubetas de prueba,
concentración calculamos el coeficiente de extinción
molar.
III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La tabla n°1 nos muestra los datos obtenido con Tabla n°2: Absorbancia, transmitancia de la solución de
respecto a la medición de la absorbancia, transmitancia estándar de trabajo con colorante a diferentes
de la solución de ácido oxálico al 0.4% con 2,6 longitudes de onda.
diclorofenolindofenol al 0.0012% a diferentes
longitudes de onda. Observando la figura 1 la cual nos L.O (nm) Abs. T%
muestra la variación de la absorbancia cuando la
200 0 100
longitud de onda aumenta de 200 a 720 nm. Podemos
apreciar que la mayor absorbancia le corresponde a una 354 4.0187 0.01
longitud de onda de 354 nm. Y la mínima absorbancia 400 0.2249 59.58
le corresponde a una longitud de onda de 280 nm. 500 0.0934 80.64
600 0.1569 69.67
Tabla n°1: Absorbancia, transmitancia de la solución de
720 0.0418 90.83
ácido oxálico con colorante a diferentes longitudes
de onda.
Absorbancia vs Longitud de onda
L.O (nm) Absorbancia T% 4.5
200 0 100 4
280 -1.016 1037.5 3.5
354 2.3113 0.49 3
Absorbancia
2.5
500 0.1249 75.01
2
600 0.2258 59.46
1.5
720 0.0423 90.72 1
0.5
Absorbancia vs Longitud de onda 0
3
200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600 640 680 720
2.5
Longitud de onda
2
1.5
Absorbancia
1
0.5 Fig. 2 Variación de la absorbancia de la solución de
0 estándar de trabajo y colorante con el aumento de la
-0.5 longitud de onda.
-1
-1.5
La tabla n°3 nos muestra los datos obtenidos con
200240280320360400440480520560600640680720760
respecto a la absorbancia de una solución de ácido
Longitud de onda (nm)
ascórbico al 0.005M, asimismo indica que la lectura de la
absorbancia se realizó a una longitud de onda de 354 nm.
Los datos obtenidos en la tabla n°3 se utilizaron para la
Fig. 1 Variación de la absorbancia de la solución ácido determinación de la absortividad molar, para lo cual
oxálico al 0.4% y colorante con el aumento de la utilizamos la ley de Lambert- Beer en donde ya obtenido
longitud de onda. la absorbancia, concentración, y el espesor de la cubeta
de L.O (nm) C(M) d (cm) Absorbancia
La tabla n° 2 nos muestra los datos obtenido con las 354 0.005 1 0.3801
respecto a la medición de la absorbancia, transmitancia muestras; como resultado se tuvo una absortividad molar
de la solución del estándar de trabajo (4 ml de la de 76.02.
solución madre aforado con una solución de ácido
oxálico al 0.4% en una fiola de 100 ml.) con 2,6 Tabla n°3: Absorbancia de una solución de ácido
diclorofenolindofenol al 0.0012% a diferentes ascórbico al 0.005M
longitudes de onda.
REFERENCIAS
[1]USACH (2010) Fundamentos de la espectrofotometría,
introducción teórica. Guía química. Santiago de
Ley de Lambert – Beer
ε: Absortividad molar o coeficiente de extinción Chile, Chile.
A: Absorbancia [4] Brunatti y De Nápoli (2009) Espectrofotometría UV-
d: Espesor de la cubeta (ruta de las muestras) Visible. Cumplimiento de la Ley de Lambert-
C: Concentración molar Beer
ε = A/d*C [3] Sánchez (1999) La espectrofotometría UV-VIS
aplicada al estudio del color. Ciencias Químicas.
ε= 76.02
Universidad de Sevilla, España.
[5] Nieves et al. (2015) Espectrofotometría: Espectros de
IV. CONCLUSION absorción y cuantificación colorimétrica de
La técnica de absorción atómica se basa en la biomoléculas. Universidad de córdoba.
descomposición de las muestras en átomos, esta técnica
permite cuantificar metales presentes en diferentes [2]Caballero (2014) Introducción a la espectrofotometría.
matrices. Bioquímica. Universidad del Valle. Cali,
Se puede utilizar el equipo de absorción atómica para
determinar metales presentes en una muestra Colombia.
metalúrgica. Algunas aplicaciones incluyen: el análisis
de agua de mar, aguas residuales, agua potable,
determinación de metales en sangre, especiación de
metales en solución, análisis de metales en solventes
orgánicos, determinación de metales en muestras
geológicas, composición de aceros, etc.
RECOMENDACIONES
.
 Para obtener datos más precisos, es muy
importante la adecuada limpieza del
instrumento, debido a que el no hacerlo
conlleva a obtener datos erróneos
.
 Es importante tener en cuenta que cuando se
utilizan líquidos volátiles, se debe ser muy
rápido al momento de hacer las mediciones, pues
si se tarda mucho en hacer la lectura, el líquido
se evapora y por tanto no se puede medir su
índice de refracción.

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