HALANOCCA CALCINO, Gean Carlos Grupo: “D”------CUI:20173247

Análisis Instrumental en Ingeniería I

ESPECTROCOPIA DE ABSROCIÓN MOLECULAR

Practica N° 3: DETERMINACIÓN DE HIERRO EN LENTEJAS

I.- OBJETIVOS:
• Determinar experimentalmente la concentración de Hierro en lentejas
por medidas espectrofotométricas (%).
• Calcular la Absortividad Molar Específica del Fierro en el complejo
Fierro-Fenantrolina considerando los estándares preparados.
• Con la Absortividad Molar Específica determinar la Concentración de
Hierro en mol/Lt; gr/Lt y ppm.
• Realizar la curva de calibración e interpolar la absorbancia que
corresponda a la muestra para encontrar su concentración.
• Realizar el mismo cálculo por regresión lineal.

II.- FUNDAMENTO TEORICO:

Los alimentos están compuestos por nutrientes orgánicos (carbohidratos, lípidos,
proteínas y vitaminas) e inorgánicos (minerales), y cada uno tiene un papel
importante en la nutrición humana, ya que incide directamente en la salud y el
correcto funcionamiento del organismo humano, por esta razón, es importante
conocer la composición de los alimentos que consumimos, en forma cualitativa
y cuantitativa. A partir de este planteamiento surge la importancia de determinar
la composición nutricional de los alimentos considerando los macronutrientes y
los oligoelementos como es el caso del Hierro.
Hierro:
Si bien el hierro es uno de los elementos más abundantes en la corteza terrestre
no lo es en organismo humano, pero aun así es uno de los minerales con mayor
importancia en el cuerpo humano. Entre las funciones del hierro en el cuerpo se
encuentra la de transportar oxígeno, respiración celular, metabolismo energético,
destrucción del peróxido de hidrogeno y síntesis del ADN.
El requerimiento diario de hierro para mujeres entre los 19 y 50 años es de 18
mg/día y para hombres entre 19 a 30 años es de 8 mg/día. A este oligoelemento
se lo puede encontrar en carnes rojas, hígado, leguminosas, y cereales.
El Perú es solamente un menor productor de este fundamental insumo industrial,
pero posee un yacimiento importante de hierro en actual explotación que se
encuentra ubicado en Marcona (Ica).
Los minerales de hierro que constituyen la mena son la magnetite (Fe 304) y la
hematite (Fe2O3) que tienen propiedades magnéticas en mayor o menor grado,
propiedades que se utilizan pare elevar sus leyes por concentración magnética.
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El concentrado se aglomera en bolitas llamados pellets que constituyen el

insumo para la fabricación del acero.
El acero, que es una aleación de hierro y carbono, es una de las aleaciones de
mayor consumo en el mundo comparable al consumo de los alimentos. Sus
proporciones son alrededor de 99% de hierro y 1% de carbono.
El óxido férrico es utilizado para elaborar tintes rojos, especialmente la tonalidad
conocida como rojo veneciano, y también sirve para pulir y para magnetiza cintas
y discos.
El cloruro de hierro es un compuesto empleado como disolución alcohólica para
colorear telas, además, puede usarse para tratar aguas residuales, para fabricar
placas de circuitos impresos y como aditivo alimenticio.
En el campo de la medicina, el sulfato de hierro es usado en el tratamiento de la
anemia. Incluso, permite purificar el agua de partículas residuales.
Los catalizadores de hierro participan en el proceso Haber-Bosch y en el Fischer-
Tropsch, para producir amoníaco y combustible, respectivamente.
El hierro y el manganeso pueden darle al agua un sabor, olor y color indeseable.
El hierro causa manchas rojizos-cafés en la ropa, porcelana, platos, utensilios,
vasos, lavaplatos, accesorios de plomería y concreto. El manganeso causa
manchas cafés negras en los mismos materiales. Los detergentes no remueven
estas manchas. El cloro casero y los productos alcalinos (tales como el sodio y
el bicarbonato) pueden intensificar las manchas.
Los depósitos de hierro y manganeso se acumulan en los tubos de cañerías,
tanques de presión, calentadores de agua y equipo ablandador de agua.
Estos depósitos restringen el flujo del agua y reducen la presión del agua. Más
energía se requiere para bombear agua a través de tubos tapados y para calentar
agua si los rodos de los calentadores están cubiertos con depósitos minerales.
Esto aumenta los costos de la energía y el agua.
El agua contaminada con hierro y manganeso usualmente contiene bacterias de
hierro o manganeso. Estas bacterias se alimentan de los minerales que hay en
el agua. No causan problemas de salud, pero sí forman una baba rojiza-café
(hierro) o café negra (manganeso) en los tanques de los inodoros y pueden tapar
los sistemas de agua. (Cooperativa de Texas. Extensión).
Métodos de Determinación de Hierro:
Según la naturaleza del problema que requiere la determinación del Hierro este
puede ser determinado por métodos gravimétricos, volumétricos e
instrumentales.
Dentro de los métodos instrumentales se puede determinar Hierro por titulación
potenciométrica, espectrofotometría de absorción molecular en el visible,
espectrofotometría de absorción atómica, espectrofotometría de emisión atómica
y otros.
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En el presente laboratorio se determinará el hierro contenido en lentejas por

espectrofotometría de absorción molecular en el visible determinando la
absorbancia en el complejo Fierro – Fenantrolina.
El hierro (II) forma un complejo de color rojo con 1,10-fenantrolina según la
reacción:

Este complejo es un quelato conformado por tres moléculas de fenantrolina por

cada ion Fe2+. La solución coloreada obedece la ley de Beer.
Previo al acomplejamiento las soluciones de Fe deben ser tratadas con un
reductor para asegurar que todo el hierro se encuentre como ion Fe +2. Para ello
se emplea un exceso de hidroquinona o clorhidrato de hidroxilamina en solución:

2 Fe 3+ + 2 NH2OH + 2OH- 2 Fe 2+ + N2 + 4 H2O

Hidroxilamina

La formación del complejo hierro se observa en el intervalo de pH comprendido

entre 2 y 9, Se recomienda un pH próximo a 4 (pH 3.2 – 3.3) para evitar la
precipitación de diversas sales de hierro como puede ser el fosfato e inclusive
hidróxidos. Una vez formado el color del complejo es estable durante largos
periodos de tiempo. Se debe esperar 10 minutos para que se desarrolle la
máxima intensidad de color antes de realizar la medición de la absorbancia. La
lectura de la absorbancia se realiza a 510 nm.
Interferencias:
Los oxidantes fuertes, cianuros, nitritos y fosfatos (especialmente las
polifosfatos) cromo, zinc en concentraciones 10 veces superior a la del hierro
presente en la muestra, cobalto y cobre en concentraciones superior a
5mg/Lt y níquel en concentraciones mayor a 2 mg/Lt. El bismuto, el cadmio,
el mercurio, el anión molibdato y a plata precipitan la fenantrolina. La
ebullición inicial en medio ácido convierte las polifosfatos en ortofosfatos y
elimina cianuros y nitritos. La adición de fenantrolina en exceso elimina los
errores causados por las concentraciones altas de especies químicas
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fuertemente oxidantes y sustituye la que queda acomplejada por metales

interferentes. Si se tiene presente mucho color o materia orgánica, puede
ser necesario evaporar la muestra, calcinar suavemente el residuo y disolver
en ácido.

III.- MATERIALES Y MÉTODOS:

3.1.- Equipos y Materiales:
• Espectofotómetro Hach DR 2800
• Mufla
• Balanza Analítica
• Vasos de Precipitados
• Plancha de calentamiento
• Fiolas de 1000ml; 100ml y 50ml
• Piceta
• Pipetas 2ml; 5ml y 10ml
• Embudo
• Crisoles
• Papel Filtro
• Espátula
• Lunas de reloj

3.2. Reactivos:

• Agua Destilada
• Sulfato Ferroso y Amonio
• Ácido Clohídrico
• Acetato de Sodio
• Clorhidrato de Hidroxilamina
• Ortofenantrolina

3.3.- Método – Procedimiento Experimental:

I. Preparación de Soluciones.

1. Preparación de la solución Stock de 100ppm de Hierro a partir

de Sulfato Ferroso y Amonio (1000ml)

• En un vaso de precipitados de 50ml pesar 0,70164g de Sulfato

Ferroso y Amonio, disolverlos con agua destilada y trasvasar a un
matraz aforado de 1000ml, llevando a volumen con agua destilada.

2. Preparación de los estándares:

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a) Realizar los cálculos para preparar 100ml de soluciones estándar

de las siguientes concentraciones: 2; 4; 6 y 8ppm de Fe a partir de
la Solución Stock de 100ppm.

❖ Para 2ppm

𝑣1 ∗ 𝑐1 = 𝑣2 ∗ 𝑐2
𝑣1 ∗ 100𝑝𝑝𝑚 = 100𝑚𝑙 ∗ 2𝑝𝑝𝑚
𝒗𝟏 = 𝟐𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝒔𝒐𝒍. 𝒔𝒕𝒐𝒄𝒌

❖ Para 4ppm

𝑣1 ∗ 𝑐1 = 𝑣2 ∗ 𝑐2
𝑣1 ∗ 100𝑝𝑝𝑚 = 100𝑚𝑙 ∗ 4𝑝𝑝𝑚
𝒗𝟏 = 𝟒𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝒔𝒐𝒍. 𝒔𝒕𝒐𝒄𝒌

❖ Para 6ppm

𝑣1 ∗ 𝑐1 = 𝑣2 ∗ 𝑐2
𝑣1 ∗ 100𝑝𝑝𝑚 = 100𝑚𝑙 ∗ 6𝑝𝑝𝑚
𝒗𝟏 = 𝟔𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝒔𝒐𝒍. 𝒔𝒕𝒐𝒄𝒌

❖ Para 8 ppm
𝑣1 ∗ 𝑐1 = 𝑣2 ∗ 𝑐2
𝑣1 ∗ 100𝑝𝑝𝑚 = 100𝑚𝑙 ∗ 8𝑝𝑝𝑚
𝒗𝟏 = 𝟖𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝒔𝒐𝒍. 𝒔𝒕𝒐𝒄𝒌

Una vez hechos los cálculos colocar en las fiolas de 100ml los
volúmenes para preparar los estándares, enrazar con agua
destilada y rotular.

b) Preparar la solución de Acetato de sodio al 5 %

c) Preparar la solución de clorhidrato de hidroxilamina al 2 %
d) Preparar la solución de ortofenantrolina: 0,25 g en 10 ml de alcohol
y luego añadir 90 ml de agua destilada

3. Tratamiento de los estándares para la lectura de la

Absorbancia y/o Transmitancia en la determinación de Hierro
por la Ley de Lambert y Beer y por curva de calibración
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De cada estándar extraer 10ml, verterlo a un vaso de precipitados

de 50ml y a cada uno de ellos agregar:
• 0,5ml de Acetato de Sodio
• 1,0ml de Clorhidrato de Hidroxilamina
• 1,0ml de Ortofenantrolina
Nota: Verificar el pH que debe estar aproximadamente en 3,5; en
caso de ser menor ajustar con Acetato de Sodio.

4. Preparación del Blanco de titulación (Blanco Reactivo):

En un vaso de precipitados o matráz de 50ml agregar 10ml de agua
destilada, 0,5ml de Acetato de Sodio, 1,0ml de Hidroxilamina y 1,0ml
de Ortofenantrolina.

II. Tratamiento de la muestra (Lentejas).

a. Tarar un crisol y pesar de 3 a 5gr de muestra (lentejas) previamente

trituradas.
b. Calcinar la muestra a 550°C hasta cenizas gris claro.
c. Retirar la muestra, enfriar y agregarle de 5 a 10ml de HCl 1:1
calentando suavemente para ayudar a la disgregación.
d. Pasar la muestra a un vaso de precipitados, lavando con agua
destilada (aproximadamente 25ml) lo que quede en el crisol, luego
llevar a ebullición el contenido del vaso hasta reducir a la mitad del
volumen.
e. Filtrar en una fiola de 50ml y enrasar con agua destilada, tapar,
homogenizar y rotular.

De la muestra preparada extraer 10ml y verterla a un vaso de precipitados

de 50ml y agregarle 0,5ml de Acetato de Sodio; 1,0ml de Clorhidrato de
Hidroxilamina y 1,0ml de Ortofenantrolina. Verificar que el pH este
aproximadamente en 3,5.
Dejar en reposo por 10 minutos y efectuar las lecturas de Absorbancia a
510nm utilizando como blanco el blanco reactivo preparado.

IV.- PRESENTACION Y ANALISIS DE RESULTADOS:

Estándar de Fe Concentración Concentración Absorbancia 𝑨

de Fe (ppm) de Fe (mol/Lt) A 510nm €=
𝒃.𝒄
-5
1 2,0 3.5817x10 0.547 6012.6289
2 4,0 7.1633x10-5 1.195 6567.8171
3 6,0 1.0745x10-4 1.798 6587.9387
4 8,0 1.4327x10-4 2.420 6650.0726
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Determinar la Concentración de la muestra con la ecuación de Lamber y Beer:

𝑨
𝑪=
€𝒃

❖ Tenemos como absorbancia de la muestra 1.243

❖ Nuestra absortividad molar específica se considera el promedio de las

absortividades, antes sometidas a una evaluación para poder descartar
aquel o aquellos que sean sospechosos, encontrando que todos los
datos cumplen con el rango aceptado, esto es 6454.61 ± 637.37, por lo
tanto, consideramos 6454.61.43 para la absortividad

❖ La celda utilizada para la experimentación es de 1 pulgada equivalente

a 0.0254 metros

1.243
𝐶=
6454.6143 𝑥 2.54

10−5 𝑚𝑜𝑙
𝐶 = 7.5817 𝑥
𝐿

𝑪 = 𝟒. 𝟐𝟑𝟑𝟔 𝒑𝒑𝒎

Determinar el Porcentaje de Fe que hay en 50ml con la muestra:

𝑷𝒆𝒔𝒐 𝒅𝒆 𝑭𝒆 (𝒈)
% 𝑭𝒆 = ∗ 𝟏𝟎𝟎%
𝑷𝒆𝒔𝒐 𝒅𝒆 𝑴𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂

❖ Con la concentración calculada Podemos convertirla a y poder saber

el peso de hierro esto será: 2.1168 * 10-4 g

❖ El peso de la muestra es de 3.12325 g

𝟐. 𝟏𝟏𝟔𝟖𝒙𝟏𝟎−𝟒
%𝑭𝒆 = 𝒙 𝟏𝟎𝟎
𝟑. 𝟏𝟐𝟑𝟐𝟓

%𝑭𝒆 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟔𝟕𝟕𝟖
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❖ Esto puede expresarse tambien como:

𝟔. 𝟕𝟕𝟖 𝒎𝒈 𝑭𝒆
%𝑭𝒆 =
𝟏𝟎𝟎 𝒈𝒓 𝒍𝒆𝒏𝒕𝒆𝒋𝒂

Determinación de la Concentración de Hierro por Curva de Calibración

y Regresión Lineal

Graficar:

• Graficar la Curva de Calibración (A vs ppm) e Interpolar la Absorbancia

que corresponde a la muestra para determinar la concentración.

A vs C
3

2.5 y = 0.3111x - 0.0655

Absorbancia (510nm)

R² = 0.9998
2

1.5

0.5

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Concentracion (ppm)

• Encontrar la expresión de la curva de calibración.

De acuerdo a la grafica interpretamos:
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 = 𝟎. 𝟑𝟏𝟏𝟏(𝑪𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏) − 𝟎. 𝟎𝟔𝟓𝟓

• Expresar los resultados en mg de Fe/100gr de lentejas

• Recordemos para la experimentación la absorbancia de la muestra

fue de 1.243

• Con ese dato podremos hallar la concentración

𝐴 = 0.3111𝐶 − 0.0655

1.243 = 0.3111𝐶 − 0.0655

𝑪 = 𝟒. 𝟐𝟎𝟔𝟎
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• Esa concentración es para un litro, pero nosotros consideramos los

50 ml con los que se esta trabajando, por lo tanto:

4.20625 𝑚𝑔 𝐹𝑒 → 1000 𝑚𝐿
𝑥 𝑔 𝑀𝑛 → 50 𝑚𝐿

𝑪 = 𝟐. 𝟏𝟎𝟑𝟏𝟐𝟓 ∗ 𝟏𝟎−𝟒 𝒈 𝑭𝒆

• El porcentaje de hierro será, por lo tanto:

2.103 𝑥 10−4
%𝐹𝑒 = 𝑥 100
3.12325

𝟔. 𝟕𝟑𝟑𝟒 𝒎𝒈 𝑭𝒆
%𝑭𝒆 =
𝟏𝟎𝟎 𝒈 𝒍𝒆𝒏𝒕𝒆𝒋𝒂

V.- ANALISIS DE RESULTADOS:

• De acuerdo a nuestros resultados una vez más verificamos que la
concentración y la absorbancia tienen una relación directamente
proporcional.

• Haciendo un ploteo para la concentración y la absorbancia en este

experimento podemos calcular una ecuación general la cual
dependerá únicamente de la concentración.

𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 = 𝟎. 𝟑𝟏𝟏𝟏(𝑪𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏) − 𝟎. 𝟎𝟔𝟓𝟓

• Según nutricionistas la cantidad de hierro que debe ser consumida

es:
o por una mujer y entre los 19 y 50 años es de 18 mg/día.

o por un hombre entre 19 a 30 años es de 8 mg/día

Si consideramos una dieta basada solo en el consume de lentejas

y en la concentración de hierro en las lentejas utilizadas en la
experimentacion, las mujeres deberán consumir 300gr de lentejas
mientras que los hombres 150gr de lentejas por día.

VI.- OBSERVACIONES:
• Normalmente consideramos al blanco como la muestra de agua
destilada para este caso se uso la mezcla de los reactivos sin el
analito.
• La coloración va aumentando conforme aumenta la concentración
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VII.- CONCLUSIONES:
• Se logro determinar la concentración de hierro en lentejas mediante el
método espectrofotométrico
• Se logro calcular la absortividad molar especifica haciendo además de
un análisis de rechazo de datos
• Se logro determinar la concentración de hierro mediante la curva de
calibración.

VIII.- RECOMENDACIONES:
• Prestar mucha atención a la hora del manejo de los instrumentos de
medición, especialmente con los del espectrofotómetro ya que un mal
manejo puede inducir a una mala toma de datos y con ellos generar un
porcentaje de error alto

• Al momento de haber ya obtenido los datos observar y analizar a aquellos

que sean “sospechoso” es decir que se alejan demasiado de la media
calculada.

CUESTIONARIO:

1. ¿Cómo se forma el complejo de Fe- Fenantrolina?

La fenantrolina se puede preparar mediante dos reacciones de

Skraup sucesivas de glicerol con ''o''-fenilendiamina, catalizadas por ácido
sulfúrico, y un agente oxidante, tradicionalmente ácido arsénico acuoso
o nitrobenceno.

La deshidratación del glicerol da acroleína que se condensa con

la amina seguida de una ciclación.

El hierro (II) forma un complejo de color rojo con 1,10-fenantrolina según la

reacción:

Este complejo es un quelato conformado por tres moléculas de fenantrolina

por cada ion Fe2+. La solución coloreada obedece la ley de Beer.
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2. ¿Cuáles son los factores de los que depende la absorción de radiación

en la espectroscopía de absorción molecular en el visible?

• Longitud de onda (λ): es la distancia que existe entre dos máximos o

dos mínimos de la onda, se mide en unidades de longitud (cm, µm,
nm, etc)

• Número de onda: corresponde a la recíproca (o la inversa) de la

longitud de onda

• Frecuencia de la onda: representa cuantas veces pasa la onda

completa por un punto fijo en la unidad de tiempo, se mide en Hercios
(1 Hz= 1Hertz) que significa la inversa del segundo siendo 1 Hz = 1/s

• Amplitud de la onda: se mide desde la línea de avance hasta el máximo

de la onda

3. Si la sensibilidad instrumental del espectrofotómetro es de 0,01 cuál es

el rango de absorbancia que podría leer. Si una muestra está reportando
una Absorbancia muy cerca, igual o mayor al rango superior de lectura,
¿Que haría usted?

Se debería empezar de nuevo, y así poder encontrar el error, mayormente

este se encontrará a la hora del análisis de la muestra inicial (blanco)

Tener cuidado con el manejo de las celdas ya que un mal manejo puede
ocasionar interferencias a la hora de la toma de datos

4. ¿Por qué en la determinación de hierro según el método seguido el pH

de ser próximo a 3?, además de lo indicado en fundamentos teóricos.

La formación del complejo hierro se observa en el intervalo de pH

comprendido entre 2 y 9, Se recomienda un pH próximo a 4 (pH 3.2 – 3.3)
para evitar la precipitación de diversas sales de hierro como puede ser el
fosfato e inclusive hidróxidos. Una vez formado el color del complejo es
estable durante largos periodos de tiempo. Se debe esperar 10 minutos para
que se desarrolle la máxima intensidad de color antes de realizar la medición
de la absorbancia. La lectura de la absorbancia se realiza a 510 nm.

5. Presente un método instrumental estandarizado para la determinación

de hierro en minerales, alimentos y aguas.
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• Determinación de hierro en minerales

Los métodos analíticos utilizados frecuentemente para la

cuantificación de hierro son el espectrofotométrico de absorción,
utilizando el complejo Fe(II)- o-fenantrolina o Fe(III)-tiocianato y la
espectrofotometría de absorción de llama u horno de grafito. El método
de absorción atómica tiene la ventaja de la alta selectividad y
sensibilidad.

• Determinación de hierro en alimentos

Las determinaciones de Fe realizadas en base a materia fresca por

espectrofotometría de absorción atómica, previa digestión acida. Un
gramo de muestra se digirió con ácido sulfúrico y ácido nítrico y se
calentará en un digestor (Quimis Q 327N, Diadema, SP; Brasil), hasta
que su contenido se tornó de color negro.

Posteriormente será digerida con ácido perclórico. Finalmente, los

digeridos fueron traspasados a matraces volumétricos y leídos en un
espectrofotómetro de absorción atómica (Perkin Elmer, Model 2800,
The Perkin-Elmer Corporation, Norwalk, CT, USA). Como control y
aseguramiento de la calidad de la técnica se prepararon soluciones
estándares de 1 ug/ml de Fe a partir de una solución patrón de 100
ug/ml de Fe para construir una curva de calibración del equipo.
Además se utilizaron controles biológicos de uso interno del
Laboratorio de Micronutrientes del INTA. El coeficiente de variación
para los controles biológicos (hígado deshidratado de bovino, National
Institute of Standards and Technology, Gaithersburg, MD, EEUU)

• Determinación de hierro en aguas

El análisis gravimétrico depende de medir un peso, para determinar la

cantidad de analito en la muestra, la pureza química y la
homogeneidad del material que se pesa es la limitante de la presión
de los análisis gravimétricos. Los cuales, gracias a los avances
tecnológicos, están en el orden de 1 parte por 10.000 o de 1 parte por
100.000. Existen al menos dos formas de utilizar la masa como señal
analítica, una de ellas, y la más lógica, es medir la masa del analito
directamente en una balanza (ej: sólidos suspendidos), y a veces es
más fácil eliminar el analito y usar el cambio de masa como señal
analítica (ej: humedad). Los métodos gravimétricos se pueden
clasificar en: - gravimetría de precipitación - electrogravimetría -
gravimetría de volatilización o termogravimetría - gravimetría de
partículas
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6. Se tiene un patrón primario de hierro de 25 ppb del cual se extraen 20

ml y se lo diluye a 100 ml, cuál es la nueva concentración de hierro en
µg/Lt?

𝑉1 × 𝐶1 = 𝑉2 × 𝐶2

20𝑚𝑙 × 25𝑝𝑝𝑏 = 100𝑚𝑙 × 𝐶2

5𝑝𝑝𝑏 = 𝐶2

𝟓𝒑𝒑𝒃 = 𝟓𝝁𝒈/𝒍𝒕