Informe 2 Tincion de Gram

UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

CARRERA DE INGENIERÍA AGRÍCOLA MENCIÓN AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
MATERIA
MICROBIOLOGIA II
DOCENTE
DRA. TAMARA BORODULINA
NOMBRE
MARGOTH JACKELINE PINDUISACA PINDUISACA
CURSO
TERCER SEMESTRE “A”
GUAYAQUIL-2018-2019
Contenido
I.-INTRODUCCIÒN.........................................................................................................................3
II.-OBJETIVOS................................................................................................................................3
III.-FUNDAMENTO TEORICO.........................................................................................................3
lV.-MATERIALES............................................................................................................................4
V.-PROCEDIMIENTO.....................................................................................................................4
Vl.- RESULTADOS..........................................................................................................................5
VIl.- RESULTADO DE APRENDIZAJE DEL ESTUDIANTE:..................................................................5
VIII.-CONCLUSIONES.....................................................................................................................5
IX.- BIBLIOGRAFÍA:........................................................................................................................6
X.- ANEXOS: (Fotos)......................................................................................................................6
TEMA: Tinción de Gram
I.-INTRODUCCIÒN
De gran importancia en Microbiología porque permite diferenciar dos grandes grupos
de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. El fundamento
radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias
Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las
bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa
lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se
efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorante sólo en las Gram (-), mientras
que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las
células Gram (-) se teñirán después con un colorante de contraste (safranina) para que
puedan observarse.
II.-OBJETIVOS
• Utilización de técnicas sencillas para la observación de microorganismos
• Conocer o manejo del microscopio óptico para la observación de bacterias
(importancia del objetivo de inmersión)
• Conocer y manejar las unidades de medida de las células y establecer
comparaciones entre tamaños de procariotas y de eucariotas
• Reconocer los distintos modelos de pared bacteriana
III.-FUNDAMENTO TEORICO
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio

bacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su
utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de
Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos,
positivos, negativos. Se basan justamente en la tinción de GRAM
Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la
desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias
pueden dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los
términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan
dos grupos morfológicos distintos de bacterias).
Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias
constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula bacteriana sirve para
dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de
la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el péptido glicano. La pared de la célula Gram-positiva
es gruesa y consiste en varias capas interconectadas depeptidoglicano así como algo de ácido teicoico.
Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula Gram-positiva es peptidoglicano. La pared
de la célula Gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente
de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipo
polisacáridos, y lipoproteínas. Sólo10% - 20% de la pared de la célula Gram-negativa es
peptidoglicano. Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con
algún detalle la tinción de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porqué
de su funcionamiento.
Las células Gram positivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más
peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata la pared celular y
cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y provocando que el de complejo cristal
violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después
de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas
permanecen azules.
Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tinción de Gram:
1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo
por sísolo tiene poca afinidad con las células.
2) La decoloración debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tinción las células Gram
positivas. EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo preciso del tiempo para
obtener resultados satisfactorios.
3) Cultivos más viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal violeta - yodo.
IV.-MATERIALES
 Laminas portaobjetos
 Cubreobjetos
 Asa de platino
 Microscopio Óptico
 Mechero de Bunsen
 Palillos
 Pipetas
REACTIVOS
 Un cultivo de 24 horas en agar
 Solución salina
 Solución de cristal violeta
 Solución de agua-acetona
 Solución de lugol
 Solución de Safranina
 Aceite de inmersión
V.-PROCEDIMIENTO
Preparación del frotis bacteriano
 Colocar una gota de solución salina o caldo de cultivo estéril sobre un
portaobjeto limpio.
 Con ayuda de un palillo de dientes estéril, tomar un pequeño inoculo del cultivo
en agar y re suspender en la gota de solución salina, extender el inoculo en un
área de 2cm y dejar secar.
 Fijar el frotis, pasando unas tres veces el portaobjeto sobre la flama.
Tinción del frotis
 Cubrir el frotis con el colorante de violeta de genciana, esperar 1 minuto. Lavar
con agua de llave dejando correr el agua.
 Cubrir el frotis con Yodo de Gram y esperar 1 minuto. Lavar con agua de llave
dejando correr el agua.
 Decolorar el frotis, lavando con etanol 95% hasta que ya no aparezca color.
 Cubrir con safranina el frotis y esperar 30segundos. Lavar con agua de la llave
dejando correr el agua.
 Dejar secar la placa al aire libre.
Observación en el microscopio.
 Colocar aceite de inmersión sobre el frotis y observar con objetivo de 100
usando el condensador de luz en alta intensidad.
Vl.- RESULTADOS
La diferencia química es los que permite distinguir las bacterias por Tinción, el
colorante reacciona con la célula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior.
Debido a eso la Tinción es importante para la microbiología ya que:
Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo

diferenciarlas.
Permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana.
VIl.- RESULTADO DE APRENDIZAJE DEL ESTUDIANTE:

La Tinción negativa es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se
dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por
tanto, es el perfil de las células. La Tinción negativa es un modo satisfactorio de
aumentar el contraste de las células en la microscopia óptica, pero su máxima utilidad
está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.
VIII.-CONCLUSIONES
La tinción de Gram es una herramienta muy útil en el laboratorio de microbiología así
como en los análisis clínicos y diagnostico medico siendo ineludible conocer su
fundamento y procedimiento, para poder tener una correcta interpretación de los
datos que nos otorga la diferenciación de Gram positiva y negativa concluyendo que
debido a la estructura de sus paredes celulares tendrán o no propiedades patológicas
diferentes
IX.- BIBLIOGRAFÍA:
https://es.scribd.com/doc/43696269/Tincion-de-gram-Introduccion-desarrollo-e-
interpretacion-de-resultados-Practica-2
http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.com/p/tincion-de-gram_20.html
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/pluginfile.php/233464/mod_resource
/content/0/2._PRACTICA_TINCIONES_ESPECIALES_EN_MICROBIOLOGIA.pdf
https://es.slideshare.net/Mardj/prctica-2-tincin-de-gram
X.- ANEXOS: (Fotos)
Preparación del frotis bacteriano
Anexo 1 Anexo 2 Anexo 3 Anexo 4 Anexo 5
Estos son los pasos que se utilizo para preparar el frotis bacteriano.
Tinción del frotis
Anexo 6 Anexo 7 Anexo 8 Anexo 9 Anexo 10

Como se puede observar estos son los pasos que
se debe realizar para la tinción del frotis.
Anexo 11 Anexo 12
Observación en el microscopio.
Colocar aceite de inmersión sobre el frotis y
observar con objetivo de 100 usando el
condensador de luz en alta intensidad
RESULTADOS
 Son bacilos gran negativas porque al
enfocar se observó bacterias de
color rosado.
Anexo 13 Anexo 14

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La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio

Debido a eso la Tinción es importante para la microbiología ya que:

Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo

Permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana.

VIl.- RESULTADO DE APRENDIZAJE DEL ESTUDIANTE:

Preparación del frotis bacteriano

Anexo 1 Anexo 2 Anexo 3 Anexo 4 Anexo 5

Tinción del frotis

Anexo 6 Anexo 7 Anexo 8 Anexo 9 Anexo 10

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