Clasificacion de Bacterias

LABORATORIO BIOLOGIA CELULAR
CLASIFICACION DE BACTERIAS
OBSERVACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS PROCARIOTAS

La célula es la unidad fundamental de la vida. Una célula aislada es una entidad separada
de otras por una membrana, la cual, forma un compartimento que es necesario para
mantener una proporción correcta de constituyentes internos de la célula y para
protegerlos de fuerzas externas. Muchas células contienen además una pared celular
exterior a la membrana (Brock, 2009).
Células Procariotas. Incluye toda la diversidad de bacterias existentes. Las bacterias
pertenecen al Dominio Bacteria; reino Bacteria. Se presenta diferenciación celular
incipiente en algunos grupos. Las bacterias carecen de organelos membranosos internos y
por lo tanto su membrana celular cumple funciones importantes de transporte,
metabolismo, crecimiento y comunicación.
Estos microorganismos contienen una membrana celular o citoplasmática única; Una

pared celular formada principalmente por peptidoglucano (PG), llamada pared bacteriana,
cuya química y organización está bien diferenciada en bacterias: Gram positivas y Gram
negativas, en éstas últimas a menudo se forma, una envoltura externa adicional que
recibe el nombre de cápsula bacteriana. Muchas bacterias son heterótrofas y metabolizan
materia orgánica ya elaborada por otros organismos, aunque también existen bacterias
autótrofas quimiosintéticas y fotosintéticas tales como las cianofíceas (algas verde-azules)
que contienen tilacoides ricos en clorofila, carotenoides y pigmentos azules y rojos.
Algunas bacterias crecen de vida libre, pueden habitar ambientes extremos (Extremófilas)
o permanecer dentro de animales de sangre caliente (Ej. enterobacterias); otras pueden
favorecer ciclos biogeoquímicos y la fertilidad de los suelos tales como las fijadoras de
Nitrógeno, Carbono y solubilizadoras de Fósforo. Las bacterias pueden aislarse y cultivarse
en laboratorio y es esta propiedad la que ha permitido importantes avances en Biología
celular y molecular, medicina, agricultura y medio ambiente.
Coloración Gram: Desarrollada en 1883 por CHRISTIAN GRAM en Dinamarca. Es uno de los
métodos más útiles empleados en microbiología ya que por medio de este es posible
dividir a las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram Negativas.
Fundamento de la coloración Gram:
Cristal Violeta: Colorante Primario
Solución de Yodo: Mordiente
Alcohol Acetona: Decolorante orgánico
Safranina: Colorante Secundario
Para explicar el mecanismo de la tinción de Gram se ha propuesto la siguiente hipótesis:
Hay un elevado contenido graso en las paredes de bacterias Gram negativas, cuyo
porcentaje asciende hasta un 20%. Se ha demostrado que, en el procedimiento de tinción,
el alcohol cetona, extrae la grasa aumentando la porosidad o permeabilidad de la pared
celular. El complejo cristal violeta yodo se extrae así por el alcohol acetona y el
microorganismo se decolora; al tratarlo con safranina vuelven a tomar el colorante. La
pared de bacterias Gram positivas, por su composición química, se deshidrata por el
alcohol, el tamaño de los poros disminuye, se reduce su permeabilidad y el complejo
cristal violeta - yodo no se extrae; La respuesta a la coloración de Gram es variable en
cultivos viejos de bacterias Gram positivas (azules), entretanto, las bacterias Gram
negativas (rosadas) no son variables.
De acuerdo con su morfología microscópica, se pueden diferenciar formas cocoides
(cocos), bacilares (bacilos), bacilares curvos (vibrios y demás bacilos curvos), espirilares
(espirilos), figura 16 (a). Así mismo, las bacterias pueden encontrarse de forma individual
o agrupados diplococos o diplobacilos, Estreptococos o bacilos (un plano de división),
tétradas, sarcinas, Estafilococos (dos o más planos de división).
Injuria bacteriana: Este fenómeno consiste en daños subletales a nivel de rRNA que
cambia la fisiología bacteriana causando la pérdida de la integridad de la membrana
celular y por consiguiente el desperdicio de una gran variedad de constituyentes
intracelulares. Este daño puede ser causado por radiaciones, deshidratación, congelación
o temperaturas cercanas al punto de ebullición. A nivel molecular la injuria bacteriana
consiste en fenómenos a nivel intracelular: la inducción de la síntesis de proteínas de
choque.
La injuria bacteriana conlleva a la degradación completa de la partícula ribosomal 30s y
una ligera alteración de la partícula 50s. Estas dos partículas conforman el ribosoma el
cual es responsable de la síntesis de proteínas en la célula. Durante un procedimiento de
choque térmico a microorganismos como Staphylococcus aureus y Salmonella
typhimurium se ha encontrado que el RNA 23s, asociado con la partícula ribosomal 50s,
permanece intacto mientras el 16s, asociado con la partícula ribosomal 30s es degradado
por completo (Witter, 1981). El medio de recuperación juega un papel fundamental ya
que las células injuriadas pueden repararse y crecer en un medio nutritivo, pero son
incapaces de desarrollarse en un medio selectivo debido al incremento en la sensibilidad a
reactivos químicos usados para aumentar la selectividad en los medios de cultivo.
Objetivos
Identificar características generales de la morfología y agrupación bacteriana. Con base en
el proceso de tinción Gram comprobar las principales diferencias en la pared celular
bacteriana. Reconocer y diferenciar procesos conducentes a injuria bacteriana.
Protocolo general de tinción de Gram

1. Cubra la superficie del portaobjetos con la solución de cristal violeta durante un
minuto.
2. Realice un lavado con agua corriente para eliminar exceso de colorante; evite que el
chorro de agua caiga directamente sobre la muestra.
3. Cubra el preparado con lugol durante un minuto.
4. Realice un lavado similar al del numeral 2.
5. Con mucho cuidado lave la superficie con unas gotas de decolorante alcohol hasta
eliminar. el excedente de cristal violeta (10 segundos).
6. Repita lavado con agua corriente.
7. Cubra la superficie de la muestra con safranina durante 30 segundos.
8. Lave con agua corriente y deje secar al aire libre.
9. Examine el preparado al microscopio con objetivo de 100X haciendo uso del aceite de
inmersión.
10. Dibuje los resultados observados (de todos los montajes en 100 X).
Fijación y coloración bacteriana a partir de cultivo sólido (caja de Petri)
1. Sobre un portaobjetos limpio y desengrasado se coloca con el asa una muestra pequeña de
material de estudio (caja de petri 1) (Figura 18).
2. Se agrega una gota de agua con la cual se diluye la muestra.
3. Se extiende en forma circular para formar una película muy fina de 10 a 20 mm de diámetro.
Entre más fina sea la película el resultado es mejor.
4. Una vez hecho el frotis pase tres o cuatro veces el portaobjetos por la llama de un mechero
para fijar la preparación. Tenga cuidado de no quemar la muestra.
5. Posteriormente realice el procedimiento de tinción de Gram que aparece en el Protocolo

general de tinción de Gram.
6. Realice el mismo procedimiento con la muestra de la caja 2
Reconocimiento de injuria bacteriana.

CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las bacterias que mejor hacen simbiosis en el ser humano, como las
que forman la flora bacteriana o las encontramos en nuestras manos y nuestra
piel?
2. ¿Cuál es el tratamiento más eficaz para eliminar helicobacter pylori cuando nos
hemos contaminado?
3. ¿Cuáles son las bacterias que más inducen a cáncer en el ser humano?
4. ¿Cuáles son las bacterias que más producen alteraciones respiratorias en el ser
humano?

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Estos microorganismos contienen una membrana celular o citoplasmática única; Una

Protocolo general de tinción de Gram

2. Se agrega una gota de agua con la cual se diluye la muestra.

5. Posteriormente realice el procedimiento de tinción de Gram que aparece en el Protocolo

6. Realice el mismo procedimiento con la muestra de la caja 2

Reconocimiento de injuria bacteriana.

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