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    Este documento presenta un taller sobre ADN plasmídico. Explica que las conformaciones plasmídicas in vitro incluyen la superenrollada, lineal de longitud completa y circular relajada. Los plásmidos son buenos vectores de clonación debido a su origen de replicación y habilidad para portar genes de resistencia a antibióticos. La separación de plásmidos del ADN cromosómico ocurre durante la purificación. En la electroforesis se esperan ver dos o tres bandas correspondientes a las diferentes conformaciones plasmídicas. Los pl

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    Este documento presenta un taller sobre ADN plasmídico. Explica que las conformaciones plasmídicas in vitro incluyen la superenrollada, lineal de longitud completa y circular relajada. Los plásmidos son buenos vectores de clonación debido a su origen de replicación y habilidad para portar genes de resistencia a antibióticos. La separación de plásmidos del ADN cromosómico ocurre durante la purificación. En la electroforesis se esperan ver dos o tres bandas correspondientes a las diferentes conformaciones plasmídicas. Los pl

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    Este documento presenta un taller sobre ADN plasmídico. Explica que las conformaciones plasmídicas in vitro incluyen la superenrollada, lineal de longitud completa y circular relajada. Los plásmidos son buenos vectores de clonación debido a su origen de replicación y habilidad para portar genes de resistencia a antibióticos. La separación de plásmidos del ADN cromosómico ocurre durante la purificación. En la electroforesis se esperan ver dos o tres bandas correspondientes a las diferentes conformaciones plasmídicas. Los pl

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    Este documento presenta un taller sobre ADN plasmídico. Explica que las conformaciones plasmídicas in vitro incluyen la superenrollada, lineal de longitud completa y circular relajada. Los plásmidos son buenos vectores de clonación debido a su origen de replicación y habilidad para portar genes de resistencia a antibióticos. La separación de plásmidos del ADN cromosómico ocurre durante la purificación. En la electroforesis se esperan ver dos o tres bandas correspondientes a las diferentes conformaciones plasmídicas. Los pl

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    TALLER ADN PLASMÍDICO.

    Presentado por: ​Mariana Maldonado Figueroa- Hugo Santiago Sanabria Araque.


    Presentado a: ​Dayana Calderon Manrique.
    Biología Molecular- 2020-2

    1. ​¿Cuáles son las conformaciones plasmídicas que se encuentran ​in vitro​? ¿Por qué se
    encuentran cada una de estas conformaciones? (1,00)
    Respuesta:
    En ​in vitro ​encontramos las siguientes conformaciones plasmídicas: Superenrollada, lineal de
    longitud completa y circular relajada. Estas tres formas poseen la misma longitud y la misma
    masa molecular, sin embargo, poseen distinta conformación, volumen y tamaño
    tridimensional por ende no avanzan a la misma velocidad cuando se encuentran en gel.
    Durante la extracción y la preparación del DNA plasmídico se realizan algunos cortes, por
    ende se encuentran o se originan estas conformaciones, estos cortes se ejecutan durante la
    lisis de la pared celular, comúnmente se evidencian los plásmidos de forma superenrollada,
    no obstante durante la lisis se puede realizar un corte en una de las hebras generando que la
    molécula del DNA plasmídico se aliviane y se ubique de manera circular, para que la
    molécula se convierte en lineal de longitud completa se deben cortar las dos hebras de DNA
    plasmídico para así generar una separación del mismo DNA. (Herrero, M 2016)

    2. ​¿Por qué son los plásmidos unos buenos vectores de clonación? Diga alguna de las
    aplicaciones de utilizar plásmidos como vectores de clonación (1,00).
    Respuesta: ​Los vectores de clonación son plásmidos, que llevan insertados algunos
    fragmentos de DNA, para introducir o expresar un gen en el hospedero para que se insertado
    se debe cortar el vector con enzimas de restricción. En el momento de utilizar un plásmido de
    vector debe verificarse que el origen de replicación este netamente bueno, es decir sin error
    alguno, porque en la replicación dentro del huésped debe mantenerse equilibrado, por
    ejemplo, una plásmido puede tener genes que codifiquen para que exista una resistencia a
    algunos antibióticos en específico, esto quiere decir que una se ha insertado un gen se puede
    dar origen a colonias con el gen codificado para la resistencia. (Ibhian, 2018)

    3. ¿En qué momento de la extracción se separan los plásmidos del ADN cromosomal
    bacteriano? (1,00)
    Respuesta: ​La separación de los plásmidos del DNA cromosomal se da en el momento que
    se presenta la purificación, el ADN purificado debe ser un círculo cerrado covalentemente y
    estar en forma de estructura superenrollada, esta estructura en la célula es causada por la
    acción de unos enzimas llamados girasas y esto tiene importantes consecuencias biológicas,
    para que este proceso se ejecute de forma correcta se debe verificar que el DNA plasmídico
    pueda ser utilizado en proceso de clonación y restricción. (Dominguez, M 2014)

    4. ​¿Cuántas bandas espera ver en la electroforesis? (1,00)


    Respuesta:
    Durante la realización de la electroforesis del DNA plasmídico los resultados pueden variar
    con respecto al tipo de muestra, ya que durante la corrida se pueden ver dos o tres bandas en
    el gel de agarosa, dichas bandas contendrán formas topológicamente diferentes del ADN pero
    todas corresponden a la misma molécula y tienen el mismo tamaño o número de pares de
    bases; de acuerdo a esto la forma de la molécula afecta directamente su velocidad de
    migración o avance por el gel. Las moléculas con formas CIRCULARES RELAJADAS se
    desplazan más lento que las moléculas de formas LINEALES DE LONGITUD COMPLETA
    quienes a su vez avanzan más lentamente que las SUPERENROLLADAS; por lo que le
    infiere que en la parte superior de la electroforesis se puede encontrar la molécula circular
    relajada, en el centro la lineal y finalmente en la parte inferior la molécula de forma
    superenrollada (Herráez, A. 2014).

    5.​ Los plásmidos que se obtienen, ¿servirían como vectores de clonación? (1,00)
    Respuesta:
    Los plásmidos sirven como vectores de clonación; pues para que sirva de vector, una
    molécula en general debe ser capaz de replicarse junto con el fragmento de ADN que
    transporta y también tiene que tener secuencias de reconocimiento que permitan la inserción
    del fragmento de ADN a clonar. Los plásmidos son moléculas de ADN circular, de doble
    cadena, extra cromosómicas, presentes en las bacterias, que poseen propiedades muy útiles
    como vectores de clonación como el hecho de que en él, la replicación se da automáticamente
    teniendo un origen de replicación y pudiendo producir hasta 500 copias de los fragmentos de
    ADN insertado por célula, además de presentar las otras características expuestas
    anteriormente (Gómez, M. Echenique, V. 2016).

    REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
    ❖ Herrero Gutiérrez, M. (2016). ​Modificación de vectores plasmídicos y su aplicación
    en polímeros ELR para aplicaciones biomédicas.
    ❖ Dominguez, M (2014) ​Métodos moleculares de la separación del ADN plasmídico​.
    https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologi
    a/seimc-procedimientomicrobiologia18.pdf
    ❖ Ibhian. (2018). Vectores de clonación de plásmidos. ​Tomado de:
    https://www.ibiantech.com/vectores-de-clonacion/
    ❖ Herráez, A. (2014). ​Plásmidos en electroforesis. Versión en español. Universidad de
    Alcalá, Alcalá de Henares, España. Disponible en:
    http://biomodel.uah.es/an/plasmido/inicio.htm
    ❖ Gómez, M. & Echenique, V. (2016). Herramientas básicas de ingeniería genética​.
    Capítulo 3. Extraído de PDF: ​http://cronos.unq.edu.ar/ibcm/clases/yapas/yapa1.pdf

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